CN101485292A

CN101485292A - 长绿期金银木快速繁殖方法

Info

Publication number: CN101485292A
Application number: CNA2009101188233A
Authority: CN
Inventors: 石进朝; 陈兰芬; 解有利
Original assignee: Beijing Vocational College of Agriculture
Current assignee: Beijing Vocational College of Agriculture
Priority date: 2009-01-20
Filing date: 2009-03-02
Publication date: 2009-07-22

Abstract

本发明提供一种长绿期金银木快速繁殖方法，包括外植体的采集、继代培养、生根培养、炼苗培养、大田移栽。该方法具有成苗量多，繁殖系数高等特点，对长绿期金银木进行了组织培养快速繁殖的研究，找到了长绿期金银木快速繁殖的技术参数。为快速推广生产利用这一乡土耐寒树种奠定了基础。

Description

长绿期金银木快速繁殖方法

技术领域

本发明属于植物快速繁殖技术领域，具体是指一种长绿期金银木快速繁殖方法。

背景技术

金银木(Lonicera maackii)为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera L.)一落叶灌木树种，具有喜光、抗旱、适应性强、管理粗放的特点，在中国北方园林造景中广泛应用，是中国北方城乡绿化中广泛应用的一种观赏花灌木，具有抗逆性强、管理粗放等特点，春季观花，秋季观果，花果入药，具有较高的观赏与药用价值。正常落叶时间在每年的11月中旬，主要通过播种方法繁殖。长绿期金银木及其无性系后代的落叶时间在每年的12月中下旬左右，比普通金银木绿期长20～30天左右。长绿期金银木是金银木一优良自然变种，只有通过组织培养等无性繁殖才能保持“长绿”优良性状。

长绿期金银木的也可通过扦插、嫁接等方法繁殖，由于母本少，成苗量少，扦插、嫁接繁殖方法系数低特点，限制了这一优良类型的生产推广。为快速推广生产利用这一乡土耐寒树种，需要研究长绿期金银木快速繁殖的技术参数。

发明内容

本发明提供一种长绿期金银木快速繁殖方法，所述的长绿期是指落叶时间的12月下旬左右的金银木，其绿期长，耐寒性能好。所述的繁殖方法选取材料为1～4年生长绿期金银木(Lonicera maackii‘Canglvqi’)植株。试验选取长绿期金银木茎段作为外植体材料。具体方法为：

步骤一、外植体的采集。

日光温室采集一年生带芽茎段，自来水冲洗干净后，采用70％酒精、0.1％HgCl₂、3％～5％次氯酸钠、吐温20、无菌蒸馏水等进行消毒。

步骤二、继代培养。

在继代培养基MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml·L^-1培养30天。

步骤三、生根培养。

继代培养30天后，在生根培养基MS+IBA1.0上培养20天，暗培养时间4天。当长绿期金银木继代苗长到3～4cm时，切取带芽茎段转入生根培养基中，10天左右开始长出根芽，15天左右根长达到1cm左右。经过3～4周生根培养，试管苗已具备了发达、健壮的根，苗生长健壮时，即可进行炼苗移栽。

步骤四、炼苗培养。

在生根培养20天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，预炼苗2～3天后进行炼苗移栽。炼苗移栽前在培养瓶中倒入少许清水，将生根培养基浸软，以减少试管苗根系损伤。然后用镊子轻轻取出带根小苗，用清水洗净根部附着的生根培养基，将根系小心展开，栽入装有蛭石的育苗盘中，炼苗培养在组培室瓶苗架进行，时间25～30天。

试管苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度要控制在90％左右，光照强度5000～10000Lx，才能保证较高的炼苗移栽成活率。

步骤五、大田移栽。

炼苗培养25～30天后，将育苗盘中小苗及时转移到日光温室中培养30～40天，当苗木高度为25～30cm时，即可移植到露地栽培。当年秋末长绿期金银木高度可达到100～150cm。

附图说明

图1是本发明的快速繁殖方法的流程图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的快速繁殖方法进行详细说明。

本发明的快速繁殖方法包括如下步骤：

步骤一、外植体的采集。

日光温室采集一年生带芽茎段，自来水冲洗干净后，采用70％酒精、0.1％HgCl₂(也叫升汞)、3％～5％次氯酸钠、吐温20、无菌蒸馏水等进行消毒。

所述的带芽茎段就是所述外植体，该外植体的筛选及消毒处理过程如下：

(a)休眠期1年生长绿期金银木外植体选择

在早春3月休眠期芽萌发前，从露地选取芽体饱满的当年生长绿期金银木带芽茎段、半木质化带芽茎段、叶片、叶柄作为外植体材料。自来水冲洗干净后，采用70％酒精、0.1％HgCl₂、3％～5％次氯酸钠、吐温20、无菌蒸馏水等进行消毒。试验共设置13个处理(见表1)，每个处理试验30个带芽茎段(即外植体)。培养温度(25±1)℃，光照度1200lx，光照时间12h·d^-1。

表1 长绿期金银木外植体病菌污染试验表

表1显示：对长绿期金银木休眠期1年生枝进行的13个处理消毒试验，外植体污染率为100％。重复试验二次，污染率仍为100％。

在生长期的6月份，在露地采集长绿期金银木带芽茎段、半木质化带芽茎段、成熟叶片、叶柄作外植体材料，设置13个处理(同表1)，进行消毒试验，10d后外植体污染率为100％。重复试验二次，污染率仍为100％。

通过以上两试验可以看出，无论是生长期还是休眠期，从露地生长的长绿期金银木带芽茎段、半木质化带芽茎段、成熟叶片、叶柄不适宜作为外植体的材料。

(b)日光温室内长绿期金银木生长季半木质化带芽茎段病菌污染试验

在早春4月份分别从温室内选取长绿期金银木半木质化带芽茎段、成熟叶片、叶柄作外植体材料，用0.1％HgCl₂以1～8min不同消毒时间进行消毒，试验分别设置8个处理(见表2)。

表2 不同消毒时间对半木质化带芽茎段污染率的影响

表2显示：综合污染率及杀死率两项判定指标，在对长绿期金银木新梢带芽茎段进行消毒试验时，前三个处理的污染率高达100％，后三个处理的杀死率大于50％，因此适宜的消毒处理为中间的两个，即处理5及处理4，而处理5的污染率和杀死率更小一些，因此更好。在日光温室内采集的长绿期金银木带芽茎段、成熟叶片、叶柄作病菌污染后，全部污染。可见，长绿期金银木组培时，适宜的外植体材料为日光温室内生长的半木质化带芽茎段。

综上，长绿期金银木组织培养时，适宜的外植体材料为日光温室内生长的半木质化带芽茎段，诱导出不定芽的发生。消毒时，以0.1％HgCl₂消毒5min为最好，污染率为25％，杀死率也为25％。带芽茎段、成熟叶片、叶柄不适宜作为外植体的材料。

步骤二、继代培养。

在继代培养基MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml·L^-1培养30天。

首先是进行继代培养基的筛选，具体如下：

(a)不同浓度生长调节剂对长绿期金银木生长的影响

在继代30d时，在增殖培养基中添加不同浓度植物生长调节剂，依据增殖苗生长高度及生长势两项指标筛选长绿期金银木适宜的增殖培养基。结果见表3。

表3 不同浓度生长调节物质对试管苗增殖生长的影响

表3显示：处理1虽然苗木高生长量最大，但长势弱；处理7、12苗木高生长量最小，生长势缓慢。高浓度的生长素促进了苗木的高生长，但苗木变的细弱。从增殖苗生长高度及生长势综合分析，适宜的增殖培养基为处理5。依照苗木生长量最大和生长势最优的结合，培养基为MS+BA0.3+NAA0.1时，苗木高度较高，为4cm，而且苗木的生长势显示，苗健壮，叶色浓绿。依据此，选用MS+BA0.3+NAA0.1的培养基。

(b)不同浓度椰汁对长绿期金银木生长的影响

通过在增殖培养中添加不同浓度椰汁，观测对长绿期金银木生长的影响。依30d苗木平均生长高度及生长势两项指标，选择适宜的椰汁浓度，结果见表4。

表4 不同浓度椰汁对试管苗增殖的影响

表4可以看出：椰汁对苗木生长高度有明显促进作用。适宜的继代培养基为：MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml L^-1。

在表3的基础上，再添加不同浓度的椰汁促进苗木生长，得到表4中2号培养基为最适继代培养基。

步骤三、生根培养。

继代培养30天后，在生根培养基MS+IBA1.0上培养20天，暗培养时间4d。

当长绿期金银木继代苗长到3～4cm时，切取茎尖转入生根培养基中，10天左右开始长出根芽，15天左右根长达到1cm左右。经过3～4周培养，试管苗已具备了发达、健壮的根，苗茎基部半木质化时，即可进行炼苗移栽。

所述的生根培养所需的生根培养基通过如下方式进行筛选。

(a)不同类型及浓度生长素对长绿期金银木生根的影响

在MS生根培养基中加入不同浓度的IBA(吲哚丁酸)及NAA(奈乙酸)，生根培养20d后，调查5种生根培养基试管苗的最初生根时间、平均生根数量、生根长度、根生长势，依此判断适宜的IBA及NAA添加浓度。结果见表5。

表5 不同浓度生长素对试管苗生根的影响

表5显示：第二种生根培养基下生长的苗根健壮，短粗，根长1.5cm，并且生根时间适宜，平均根数较多，因此适宜生根培养的的生根培养基为：MS+IBA1.0。

(b)不同时间暗培养对试管苗生根的影响。

在已选取的生根培养基MS+IBA1.0的基础上，在试管苗接种初期进行暗培养，分5个不同的处理时间进行暗培养，结果见表6。

表6 不同时间暗培养对试管苗生根的影响

表6显示：一定时间的暗培养对生根培养基中的试管苗生根有促进作用。根据表5中选择的生根培养基，开始出根时间是10天，经过一定时间的暗培养后，处理3、4的生根时间比没处理前提前了2天，处理2、5提前了1天，处理1无变化。因此，根据平均根树和根长，选择试管苗接种初期暗培养时间以第3个处理的4d为好。

步骤四、炼苗培养。

在生根培养20天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，炼苗2～3天后进行炼苗移栽。炼苗移栽前在培养瓶中倒入少许清水，将生根培养基浸软，以减少试管苗根系损伤。然后用镊子轻轻取出带根小苗，用清水洗净根部附着的培养基，将根系小心展开，栽入装有蛭石的育苗盘中。

试管苗炼苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度要控制在90％左右，光照强度5000～10000Lx，才能保证较高的炼苗移栽成活率。

步骤五、大田移栽。

炼苗培养25～30天后，将小苗及时转移到日光温室中培养30～40天，当苗木高度为25～30cm时，即可移植到露地栽培，即大田移栽。当年秋末长绿期金银木高度可达到100～150cm。

实施例

某园艺单位想要通过快速繁殖技术繁育长绿期金银木，应用本发明提供的繁殖方法进行快速繁殖的技术路线如下：

步骤一、外植体的采集。

日光温室采集一年生长绿期金银木带芽茎段，自来水冲洗干净后，采用70％酒精、0.1％HgCl、3％～5％次氯酸钠、吐温20、无菌蒸馏水等进行消毒。

步骤二、继代培养。

在继代培养基MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml·L^-1培养30天。

步骤三、生根培养。

继代培养30天后，在生根培养基MS+IBA1.0上培养20天，暗培养时间4天。当长绿期金银木继代苗长到3～4cm时，切取茎尖转入生根培养基中，10天左右开始长出根芽，15天左右根长达到1cm左右。经过3～4周培养，试管苗已具备了发达、健壮的根，苗茎基部半木质化时，即可进行移栽。

步骤四、炼苗培养。

在生根培养20天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，炼苗2～3天后进行移栽。移栽前在培养瓶中倒入少许清水，将培养基浸软，以减少试管苗根系损伤。然后用镊子轻轻取出带根小苗，用清水洗净根部附着的培养基，将根系小心展开，栽入装有蛭石的育苗盘中。

试管苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度控制在90％左右，光照强度5000～10000Lx，保证较高的移栽成活率。

步骤五、大田移栽。

炼苗培养25～30天后，将小苗及时转移到日光温室中培养30～40天，当苗木高度为25～30cm时，移植到露地栽培。当年秋末长绿期金银木高度可达到100～150cm。

Claims

1、长绿期金银木快速繁殖方法，其特征在于：

步骤一、外植体的采集；

在日光温室采集一年生长绿期金银木带芽茎段，自来水冲洗干净后，采用70％酒精、0.1％HgCl₂、3％～5％次氯酸钠、吐温20、无菌蒸馏水等进行消毒；

步骤二、继代培养；

在继代培养基MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml·L^-1培养30天；

步骤三、生根培养；

继代培养30天后，在生根培养基MS+IBA1.0上培养20天，其中暗培养时间4天；

步骤四、炼苗培养；

在生根培养20天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，预炼苗2～3天后进行移栽；移栽前在培养瓶中倒入清水，将培养基浸软，以减少试管苗根系损伤；然后用镊子取出带根小苗，用清水洗净根部附着的培养基，将根系展开，栽入装有蛭石的育苗盘中；试管苗移栽初期炼苗室空气湿度控制在90％以上，光照强度5000～10000Lx；

步骤五、大田移栽；

炼苗培养25～30天后，将小苗转移到日光温室中培养30～40天，当苗木生长高度为25～30cm时，移植到露地栽培。

2、根据权利要求1所述的长绿期金银木快速繁殖方法，其特征在于：步骤三中的生根培养经过如下过程实现：当长绿期金银木继代苗生长高度达到3～4cm时，切取带芽茎段转入生根培养基中，10天后开始长出根尖，15天根长到1cm；经过3～4周培养，当试管苗已具备了发达、健壮的根，苗生长健壮时，即进行炼苗移栽。