CN101474172B

CN101474172B - 乙氧基取代水飞蓟宾抑制单纯疱疹病毒的制药用途

Info

Publication number: CN101474172B
Application number: CN2009100958128A
Authority: CN
Inventors: 黄可新; 苏杭; 龚景旭; 王彦广; 潘映秋; 谢金菡; 钟韵伟; 赵昱; 瞿佳; 李校堃
Original assignee: Wenzhou Medical College
Current assignee: Wenzhou Medical College
Priority date: 2009-02-02
Filing date: 2009-02-02
Publication date: 2011-05-04
Anticipated expiration: 2029-02-02
Also published as: CN101474172A

Abstract

本发明涉及乙氧基取代水飞蓟宾抑制单纯疱疹病毒的制药用途。具体而言，本发明涉及一个B环上乙氧基取代水飞蓟宾衍生物，即化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]或其可药用盐在制备治疗由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡药物的用途。该化合物由化学方法合成制备而得，经药理实验证明，该化合物对单纯疱疹病毒HSV-1有强效抑制作用，其IC₅₀值为41.07微克/毫升。

Description

乙氧基取代水飞蓟宾抑制单纯疱疹病毒的制药用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，本发明涉及一个B环上乙氧基取代水飞蓟宾衍生物即化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]或其可药用盐在制备治疗由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡药物的用途。

背景技术

单纯疱疹病毒(HSV)在全球广泛流行，在发达国家如美国其感染率为：20～40％(儿童期)、50～70％(成年期)。人类是单纯疱疹病毒的唯一宿主，该病毒直径约为120～150微米，含有DNA的核位于中间，向外依次由包膜、体被、衣壳三种同心结构组成，衣壳表面为162个壳微粒组成的3∶3∶2轴对称的20面体，在低温下可生存数月，湿热50℃及干燥90℃30分钟灭活。单纯疱疹病毒可分为I型和II型二种，I型疱疹病毒(HSV-1)主要感染腰以上部位的皮肤粘膜和器官，HSV-1主要通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播，99％的口唇粘膜、鼻前庭、眼结膜、咽喉部的炎症及疱疹，口和口周围发生的疱疹由I型疱疹病毒感染引起。

单纯疱疹病毒感染及其导致的口腔溃疡等症状易反复发作，目前尚无特效治疗方法，临床上主要的治疗措施包括局部治疗和全身治疗，西医治疗以局部用碘甘油及维生素B1、B2和维生素C口服，一般疗效不甚明显。严重、顽固的口腔溃疡则需内服激素类药品、抗菌素类药品等，使用此类药物又存在较大的毒副作用和易使病人产生耐药性和菌群失调等不足之处。如目前临床常用的单纯疱疹病毒感染治疗药物无环鸟苷即阿昔络韦，主要适用于病毒复制的原发性感染和复发性感染，对潜伏感染难以发挥作用。

中药对抗单纯疱疹病毒感染所用之外用药包括锡类散、冰硼散等外用制剂，但治疗效果不十分理想；内服药包括牛黄解毒丸、牛黄上清丸等，又对本病症无显著的针对性。近期出现的不少新的口腔含片类药物制剂如西瓜霜含片、华素片和溶菌酶含片等分别在口感、杀菌、抗炎方面有所进步，但是有些又不适于哺乳期妇女、甲状腺功能亢进患者和碘过敏者。

因此，应用现代病毒药理学技术，开发出新的治疗单纯疱疹病毒感染和口腔溃疡天然药物是十分必要的。设计出能避开核苷类抗病毒药物的副作用，且具有创新性的先导化合物骨架，进而开发出抗单纯疱疹病毒感染新药或与已上市抗HSV-1感染药物联用是本发明的目的。

随着世界范围内对传统植物药或动物药等天然医药资源研究开发的重视，学者们对天然产物这一毒副作用小的资源越发青睐，并从中筛选出多种抗单纯疱疹病毒感染的活性化合物。如已见报道的原花色素类化合物proanthocyanidindimer对单纯疱疹病毒HSV-1的半数抑制浓度IC₅₀为250微克/毫升(A.M.Baldeet al，Phytotherapy Research，4(5)，182)；生物碱类也发现了对HSV-1具强效抑制作用的化合物，如N-甲基-crotsparine对HSV-1的半数抑制浓度IC₅₀为8.3微克/毫升(A.Nawani et al，Biol. Pharm.Bull.1999，22(3)，268-274)，但是该类化合物毒性较大；近期，我国学者冯孝章等发现栀子苷具有抗单纯疱疹病毒感染的活性，其对HSV-1的半数抑制浓度IC₅₀为1120微克/毫升(崔晓兰，刘发，冯孝章，ZL 200410034038.7)；云南学者还发现鼠尾草多糖及其酯类对单纯疱疹病毒有着较强的抑制活性，其对HSV-1的半数抑制浓度IC₅₀为85.6微克/毫升，治疗指数110(赵声兰，陈朝根，李立，CN 200710065989.4)。以上均说明天然产物及其衍生物作为抗单纯疱疹病毒HSV-1活性成分的可能性。

水飞蓟宾是黄酮木脂素化合物，存在于菊科植物水飞蓟的种子中。水飞蓟已在临床上广泛应用，在中国商品名为利肝隆。三十多年的临床实验证明该药具有确切的疗效和低毒性(参阅K.Flora等人，Am.J.Gastroenterol，1998，93，139-143；R.Saller等人，Drugs，2001，61(14)，2035-2063)。水飞蓟宾具有抗自由基活性，增强肝细胞膜对于多种损害因素的抵抗力，促进肝细胞的修复和再生(Maitrejean等，Bioorganic Medinical ChemitryLetters，2000，10，157-160；Guz等，Journal of Medinical Chemitry，2001，44，261-268)。近来，以水飞蓟宾为代表的黄酮木脂素类化合物引起了越来越多的关注，本发明人业已报道经设计改造后制备出的一系列水飞蓟宾类衍生物也具有强效的抗氧化活性(杨雷香，赵昱等，“Synthesis and Antioxidant Properties Evaluation of Novel SilybinAnalogue”，Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry，2006，21(4)，399-404.)。水飞蓟宾类化合物具有以上所述之确切的多种疗效，然而其于抗病毒方面尤其是抑制单纯疱疹病毒的新用途尚未得到有效开发，故此我们制备了B环和E环不同取代的水飞蓟宾类衍生物，并测试了其抑制I型单纯疱疹病毒HSV-1的药理活性，以期获取抑制HSV-1病毒自主知识产权的新药。试验结果显示：B环乙氧基取代水飞蓟宾衍生物即化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对HSV-1病毒具有较强的抑制活性，且治疗指数较高，可以预期作为抗HSV-1病毒药物中活性成分的应用，从而完成本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供水飞蓟宾衍生物即化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]或其可药用盐在制备治疗由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡药物的用途。

本发明的再一个目的是提供了一种用于防治由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡的药物或药物组合物，其含有治疗有效量的作为活性成分的(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]或其可药用盐和可药用辅料。根据本发明，该药物或药物组合物中可加入各种药用赋形剂，添加剂及载体。

本发明的又一个目的是提供了一种通过化学合成方法制备抗病毒化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]的方法。该方法的合成工艺路线特征是：以化合物2，4，6-三甲氧甲氧基苯乙酮(化合物1)和3-乙氧基-4，5-甲氧甲氧基苯甲醛(化合物2)为起始原料，在有机溶剂和碱水溶液中缩合得到查耳酮(化合物3)，在碱性过氧化氢的作用下环氧化得到环氧查耳酮(化合物4)，化合物4在酸性有机溶剂中环合得到二氢黄酮醇(化合物5)；在催化剂存在下，化合物5与松柏醇进行自由基偶联反应生成化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]，具体流程如下所示：

其中，OMOM是指甲氧甲氧基(OCH₂OCH₃)；OEt是指乙氧基(OCH₂CH₃)。

本发明的有益之处在于：全合成得到本发明涉及的B环上乙氧基取代水飞蓟宾衍生物，即(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]，保障了化合物的来源，且合成路径简便、收率高、低污染，利于工业化生产。经药理实验证明，2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对单纯疱疹病毒HSV-1有意想不到的强效抑制作用，其IC₅₀值为41.07微克/毫升。说明该化合物有望发展为治疗由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡药物。

具体实施方式

本发明中制备得到的水飞蓟宾衍生物即(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]或其可药用盐用制药领域中的常规方法，结合中、西药制药中常规的可药用辅料，可以制成各种制剂类型的药物组合物，如注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂，或控释或缓释剂型或纳米制剂。这些药物组合物可以用于防治由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡。

本发明中的化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]或其可药用盐还可以与现已上市的治疗单纯疱疹病毒感染、口腔溃疡的常用药物联合或交叉使用，制备得到具有治疗单纯疱疹病毒感染、口腔溃疡的组合物或复方制剂。可组合的药剂例子包括阿昔络韦ACV及其衍生物VCV、FCV、泛昔络韦PCV、阿糖腺苷(ara-T)、溴乙烯去氧鸟苷(BVDU)、膦甲酸(PFA)、更昔络韦(GCV)等。此外，其还可以与神经痛镇痛药物以及解热镇痛药物合并用药以缓解相关症状。

下面通过实施例进一步说明本发明。实施例给出了(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]的制备和纯化方法及其相关结构鉴定的数据。其中，OMOM是指甲氧甲氧基(OCH₂OCH₃)；OEt是指乙氧基(OCH₂CH₃)；Me是指甲基(CH₃)。必须说明，实施例中所述的制备方法以及分离纯化方法是用于对本发明的说明而不是对本发明的限制。

为了更好地理解本发明的实质，本发明还通过实施例的方式说明(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对单纯疱疹病毒抑制作用的药理实验结果。实验结果说明(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]在抗单纯疱疹病毒、抑制口腔溃疡的药物开发领域中的用途。本发明人还测试了其对Vero细胞的半数细胞毒活性数据TD₅₀，用以说明该化合物的毒性，从而评价其治疗指数(TI)。同样必须说明，本发明的这些药理相关实施例仍是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

实施例1：化合物3[1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)丙烯酮]的制备

3克3-乙氧基-4，5-二甲氧甲氧基苯甲醛和3.5克2，4，6-三甲氧甲氧基苯乙酮溶解于40毫升乙醇中，加入溶解有10克氢氧化钾的20毫升水溶液，于室温搅拌15小时。减压蒸去乙醇，加入30毫升水，醋酸乙酯提取(3×20毫升)。合并有机相后，依次用饱和亚硫酸氢钠(40毫升)和饱和食盐水(40毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经柱层析得化合物3[1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)丙烯酮]黄色油状物4.4克，收率70％。R_f(石油醚/醋酸乙酯＝2/1)：0.40；UV(甲醇)λ_max＝210，325nm；核磁共振氢谱¹H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ：1.39(三重峰，J＝7.2Hz，3H，CH₃)，3.34(单峰，6H，OCH₃×2)，3.43(单峰，3H，OCH₃)，3.46(单峰，3H，OCH₃)，3.56(单峰，3H，OCH₃)，4.02(四重峰，J＝7.2Hz，2H，CH₂)，5.06(单峰，4H，OCH₂O×2)，5.11(单峰，4H，OCH₂O×2)，5.14(单峰，2H，OCH₂O)，6.51(单峰，2H，H-3′，5′)，6.74(双峰，J＝1.6Hz，1H，H-2)，6.80(双峰，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.91(双峰，J＝1.6Hz，1H，H-6)，7.17(双峰，J＝16.0Hz，1H，H-β)；电喷雾质谱ESI-MS：553(M+1)⁺。

实施例2：化合物4[1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)环氧丙酮]的制备

取实施例1中得到的化合物1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)丙烯酮3克溶解于50毫升甲醇中，于搅拌状态下加入2N氢氧化钠4毫升，30％过氧化氢4毫升，于室温搅拌10小时，减压蒸去溶剂，加入50毫升水，醋酸乙酯提取(3×30毫升)。合并有机相后用饱和食盐水(40毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得黄色油状物2.6克，收率85％。

1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)环氧丙酮：R_f(石油醚/醋酸乙酯＝2/1)：0.40；UV(甲醇)λ_max＝206，281nm；核磁共振氢谱¹H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ：1.39(三重峰，J＝7.2Hz，3H，CH₃)，3.34(单峰，6H，OCH₃×2)，3.43(单峰，3H，OCH₃)，3.46(单峰，3H，OCH₃)，3.56(单峰，3H，OCH₃)，3.91(双峰，J＝1.6Hz，1H，H-β)，3.94(双峰，J＝1.6Hz，1H，H-α)，4.03(四重峰，J＝7.2Hz，2H，CH₂)，5.06(单峰，4H，OCH₂O×2)，5.11(单峰，4H，OCH₂O×2)，5.14(单峰，2H，OCH₂O)，6.51(单峰，2H，H-3′，5′)，6.74(双峰，J＝1.6Hz，1H，H-2)，6.91(双峰，J＝1.6Hz，1H，H-6)；电喷雾质谱ESI-MS：569(M+1)⁺。

实施例3：化合物5[(±)5′-乙氧基-3，5，7，3′，4′-五羟基二氢黄酮]的制备：

2.8克化合物4[1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)环氧丙酮]溶解于35毫升甲醇和15毫升四氢呋喃中，向其中滴加5毫升浓盐酸，于50-55℃搅拌30分钟，减压蒸去溶剂，醋酸乙酯提取(3×30毫升)，合并有机相后用饱和食盐水(40毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经柱层析得黄色粉末0.75克，收率45％。

R_f(氯仿/甲醇＝10/1)：0.15；核磁共振氢谱¹H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ：1.33(三重峰，J＝7.2Hz，3H，CH₃)，4.08(四重峰，J＝7.2Hz，2H，CH₂)，4.62(双双峰，J＝12.0，4.0Hz，1H，H-3)，4.68(双峰，J＝4.0Hz，1H，3-OH)，4.97(双峰，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.93(双峰，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.97(双峰，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.71(双峰，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.73(双峰，J＝2.0Hz，1H，H-6′)，11.71(单峰，1H，5-OH)；电喷雾质谱ESI-MS：349(M+1)⁺。

实施例4：化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]的制备

在干燥氮气保护的反应瓶中加入0.6克实施例3中得到的(±)5′-乙氧基-3，5，7，3′，4′-五羟基二氢黄酮和松柏醇0.75克，用无水丙酮40毫升和无水苯120毫升溶解，于55-60℃搅拌20分钟，再加入1.5克碳酸银，继续搅拌12小时，过滤，母液浓缩，经柱层析得浅黄色粉末0.32克，收率27％。

(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]：R_f(氯仿/甲醇/醋酸乙酯/丙酮/甲酸＝11/0.5/1/1/0.1)：0.25；核磁共振氢谱¹H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ：1.35(三重峰，J＝7.2Hz，3H，CH₃)，3.51(多重峰，1H，H-23a)，3.81(单峰，3H，OCH₃)，3.87(四重峰，J＝7.2Hz，2H，CH₂)，4.07(多重峰，1H，H-23b)，4.17(多重峰，1H，H-10)，4.68(双峰，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(双峰，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(双峰，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.92(双峰，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.96(双峰，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.76-6.85(多重峰，5H，Ar-H)，11.67(单峰，1H，5-OH)；电喷雾质谱ESI-MS：527(M+1)⁺。

实施例5：采用MTT法测定(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对Vero细胞的细胞毒性，以及用微量细胞病变抑制法(CPE)研究其对HSV-1病毒的抑制作用试验

5.1.细胞培养和病毒传代：

将Vero细胞培养于含10％灭活小牛血清，100U/毫升青霉素和100微克/毫升的RPMI1640培养基中，置37℃，5％二氧化碳，100％相对湿度的培养箱中培养。将HSV-1加入长有的Vero的细胞瓶中，置37℃，5％二氧化碳，100％相对湿度的培养箱中培养，收集培养上清，置低温下保存。

5.2.实验方法：

5.2.1采用MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐]法测定(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对Vero细胞生长的抑制作用：(1)测试药物：实施例4制备得到的(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]；阿昔洛韦(ACV)为阳性对照药物。

(2)取对数生长期的Vero细胞，用培养基将细胞稀释成1×10⁵个/毫升，接种于96孔细胞培养板，每孔100微升，在37℃，5％二氧化碳，100％相对湿度的培养箱中培养24小时后加入用培养基稀释的(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]，浓度分别为400微克/毫升，200微克/毫升，40微克/毫升和8微克/毫升，置于培养箱中培养，培养72小时后，每孔加入MTT试剂10微升，继续培养4小时，弃去培养基，每孔加入二甲亚砜200微升，用振荡器振荡20分钟，在570nm波长下用酶标仪测定OD值。以只加培养基的培养孔为对照孔。

抑制率(％)＝(对照孔OD值-实验组OD值)/对照孔OD值×100％。

实验重复三次。根据不同浓度下对细胞生长的抑制率，计算对细胞生长的半数中毒浓度(TD₅₀)。

5.2.2用微量细胞病变抑制法测定样品对病毒生长抑制作用：

取对数生长期的Vero细胞，用培养基将细胞稀释成1×10⁵个/毫升，接种于96孔细胞培养板，37℃，5％二氧化碳，100％相对湿度培养24小时，加入100TCID₅₀的病毒100微升，倾出病毒，分别加入不同浓度的(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]，同时设正常细胞对照和病毒感染对照，37℃，5％二氧化碳，100％相对湿度培养48小时后在倒置显微镜下观察细胞病变。以五级标准作为判断细胞病变的标准：-：细胞无变化，分值为8分；+：25％以下细胞出现病变，分值为6分；++：25％～50％细胞出现病变，分值为4分；+++：50％～75％细胞出现病变，分值为2分；++++：75％以上细胞出现病变，分值为0分。计算半数抑制浓度(IC₅₀)。同时用阿昔洛韦作为阳性对照药，并计算样品治疗指数：TI＝半数中毒浓度(TD₅₀)/半数抑制浓度(IC₅₀)。

5.3.实验结果：结果如表一显示，(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]能显著抑制HSV-1病毒的复制，其对HSV-1病毒的半数抑制浓度和治疗指数如表所示。

表一.(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对HSV-1的抑制作用

样品	TD₅₀(微克/毫升)	IC₅₀(微克/毫升)	TI
				(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]	＞400	41.07	＞9.7
阳性对照药(阿昔洛韦)	＞400	0.14	＞2857

注：TD₅₀：样品对细胞生长的半数抑制浓度(微克/毫升)；IC₅₀：样品对病毒复制的半数抑制浓度(微克/毫升)；TI：治疗指数，TI＝TD₅₀/IC₅₀。

5.4.结论：上述试验结果说明，(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]对I型单纯疱疹病毒HSV-1有着强效的抑制作用，其抑制强度虽然低于阳性对照药(阿昔洛韦)及文献报道中的N-甲基-crotsparine(IC₅₀为8.3微克/毫升)，但是其抑制强度大大强于文献报道中的原花色素类化合物proanthocyanidindimer(IC₅₀为250微克/毫升)、栀子苷(IC₅₀为1120微克/毫升)、鼠尾草多糖及其酯类(IC₅₀为85.6微克/毫升)等，从而可以期望作为治疗口腔病毒性疱疹和口腔溃疡的药物中活性成分的应用。

在上述说明书阐述本发明时，同时提供了实施例和药理实施例的目的是举例说明本发明的实际操作过程和本发明的意义。在进入本发明权利要求和其等同物范围内时，本发明的实际应用包括所有一般变化、配合，或改进。

Claims

1.化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮或其可药用盐用于制备治疗由单纯疱疹病毒HSV-1引发的病毒感染和/或口腔溃疡药物的用途。

2.根据权利要求1的药物用途，其特征为化合物(±)2-[2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六环-6-]-2，3-二氢-3，5，7-三羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮中的苯并呋喃环即C环上2、3位取代基互为反式；苯并二氧六环即D环上10、11位取代基互为反式构型，也即10、11位同时是R或同时是S构型。