CN101445533A - 一种核酸提取试剂和其制备方法以及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是提供一种稳定且能快速结合核酸的核酸提取试剂，所述的核酸提取试剂包含天然白云岩颗粒。并提供了这种核酸提取试剂的制备方法以及其在提取，纯化核酸中的用途。

Description

一种核酸提取试剂和其制备方法以及其用途

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别涉及从生物材料中分离，制备或纯化核酸。

背景技术

由核酸分析得到的基因信息广泛应用于医疗，临床检查，制药产业和食品产业等各种领域，而进行核酸分析时从生物材料中分离，制备和纯化核酸是必不可少的步骤。已知的分离核酸的方法，如核酸与羟基磷灰石结合制备标层析纯化核酸(参见分子克隆实验指南第2版970页，J sambrook，E F Fritsch，T Maniatis著，金冬雁，黎孟枫译)，在应用中主要的问题是需要浓缩从柱上洗脱下来的处于高离子强度磷酸盐缓冲液中的核酸样品，而在进行乙醇沉淀以前必须先去除磷酸根离子，常会造成核酸样品的大量丢失，且不适合单人份核酸样品的纯化；又如美国戴维斯等编著的分子生物学实验技术中73—75页，介绍了玻璃粉结合核酸技术，但玻璃粉不能直接使用，需要经过浓硝酸活化，在通风厨中加热至接近沸腾，制备时必须非常小心，避免碰到皮肤和衣服。

另外，在蛋白质技术领域，蛋白质提纯的第一步就是去除核酸，除核酸的传统方法是用阳离子(Mn2+、链霉素和精蛋白等)沉淀核酸，但是此法在有些情况下不适用，例如所需要的蛋白质会在沉淀核酸的条件下失活，或提取液中核酸含量太高，或所要提纯的酶用于蛋白质体外合成实验，在这些情况下就必须用相分配法除核酸，右旋糖苷T500或聚乙二醇6000能在很宽的浓度范围内形成双相分离系统。核酸酶处理可用于从细胞提取液中除去DNA，大分子RNA和大部分tRNA，但寡核苷酸不易除去，因此尽量不用核酸酶处理，除非大量制备时，非用核酸酶低溶液粘度不可。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定且能快速结合核酸的核酸提取试剂，所述的核酸提取试剂包含天然白云岩颗粒。天然白云岩的主要组分为碳酸钙和碳酸镁的复盐，该钙镁复合物性质稳定，在低温和高温下不改变化学性质、外观白色，经加工制成粉剂可有效地结合核酸。天然白云岩颗粒制备非常容易，其原材料来源于天然矿床，制备工艺如下：

1.开采矿石

2.人工破碎

3.机械粉碎

4.目筛筛选：按100—500目收集颗粒

5.干燥：100—200℃烤干备用

基于木发明提出的天然白云岩颗粒对高温的稳定性特点，将该颗粒分别与PH6.0-11的水溶液经高压灭菌配制成悬液可获得不同作用的核酸提取试剂。PH10以上的水溶剂和天然白云岩颗粒配成悬液、具有双功能作用，在高温时裂解病毒和细菌，同时可将裂解后裸露的DNA快速的结合到天然白云岩颗粒上，离心去掉大量的蛋白成份，保留沉淀物，从而达到浓缩DNA和纯化DNA的作用。PH 6-8的水溶剂配制成悬液在常温条件下、无裂解病毒或细菌的功能、仅有快速结合核酸达到浓缩核酸和纯化核酸的作用。

还可以将含这种天然白云岩颗粒的核酸提取试剂用于从蛋白质制品中去除核酸杂质。具体可以采用柱层析法或悬浮吸收法。

本发明提出的核酸提取试剂中包含的天然白云岩颗粒对核酸的结合效果为100mg可结合50μg商品鱼精DNA和酵母RNA。

也可以根据具体需要，将该天然白云岩颗粒溶于TE缓冲液等其他液体，以更好地结合核酸。

附图说明

图1为实施例1的实验结果，即核酸提取试剂用于聚合酶链反应中提取纯化DNA效果：M为Marker(100bp)，泳道1为核酸提取试剂提取纯化乙型肝炎病毒感染原血清(HBV DNA拷贝数1.019E+06)的核酸，泳道2—6为核酸提取试剂提取纯化乙型肝炎病毒感染10^-1—10^-5的稀释血清的核酸，7、8分别为小牛血清和水，作为阴性对照。HBV DNA目的片段大小为HBV C区190bp。

图2为实施例12的实验结果，即包含500目白云岩的核酸提取试剂200mg常温对cF DNA的吸收效果：其中泳道6为10μg cF DNA，不加核酸提取试剂的对照，泳道11为160μg cF DNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道12为320μg cF DNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道13为480μg cFDNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道14为950μg cF DNA，加入上述核酸提取试剂200mg，泳道15为950μg cF DNA，不加核酸提取试剂的对照。泳道11无带产生，即在常温下200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂可吸收160μgcFDNA。泳道12，表明常温下200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂对320μg cF DNA吸收不完全。

图3为实施例12的实验结果，即包含500目白云岩的核酸提取试剂200mg55℃时对cF DNA的吸收效果：其中泳道6为10μg cF DNA，不加核酸提取试剂的对照，泳道16为200μg cF DNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道17为250μg cF DNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道18为300μg cFDNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg。泳道16和17无带产生，表明55℃下，200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂可完全吸收200μg和250μg cFDNA，泳道18表明55℃下，200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂对300μgcF DNA吸收不完全。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施方式，但并不构成对本发明的保护范围的限制。

实施例1 核酸提取试剂用于聚合酶链反应中纯化DNA

取被检样品10μl，加入核酸提取试剂50μl，充分混匀，95℃裂解10分钟，再次混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去液体，留沉淀物，这时样品中的大量蛋白组份被吸掉，核酸可快速地被吸附到天然白云岩颗粒上，从而达到去除聚合酶反应样品中的蛋白质，纯化核酸的目的。直接将聚合酶反应液，加入含有天然白云岩颗粒的管内，进行聚合酶反应。

例如：将该方法用于纯化乙型肝炎病毒核酸时，可用以下扩增条件，94℃预变性60秒，94℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃45秒，最后，72℃300秒，扩增35个循环。电泳结果见说明书附图1：

实施例2 核酸提取试剂在用于浓缩DNA含量较低样品中的应用

(1)碱性核酸提取试剂浓缩DNA：取被检样品100μl，加入碱性核酸提取试剂200μl，混匀，95℃加热10分钟，再充分混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含大量蛋白质的液体，使100μl样品中的核酸吸附到天然白云岩颗粒上，达到浓缩的目的。

(2)中性核酸提取试剂浓缩DNA：取含核酸样品100μl，加入中性核酸提取试剂200μl，混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含蛋白质的液体，留沉淀物，即为天然白云岩颗粒与核酸形成的复合物，含核酸样品。

实施例3 核酸提取试剂用于从蛋白质制品中去除核酸杂质

柱层析法：取300目天然白云岩颗粒，按以下方法制成层析柱：

(1)首先在12ml无菌一次性注射器出口，加入两层尼龙稠园形膜片，防止300目白云岩颗粒漏出来；

(2)装柱，用TE(10毫克分子三羟甲基氨基甲烷(Tris)，1毫克分子EDTA，pH7.5)悬浮约13克300目白云岩颗粒，用吸管移至注射器内；

(3)平衡层析柱：用TE缓冲液洗柱三次。

(4)上样；将合有核酸物质的蛋白质溶液约10ml加入层析柱上，收集蛋白质制品。悬浮吸收法：

(1)洗涤，取500目天然白云岩颗粒约10克，放入50ml离心管内，用TE缓冲液洗三次；

(2)吸收，在含白云岩颗粒的50ml离心管内，加入含有核酸物质的蛋白质溶液10-20ml，充分混匀，5000转/分钟离心5分钟，核酸被吸收到白云岩颗粒上，收集有用的蛋白质制品。

实施例4 核酸提取试剂用于从含有大量蛋质的DNA样品中纯化DNA

取血清50μl，加入碱性核酸提取试剂100μl，混匀后，95℃裂解10分钟，使病毒破裂暴露出病毒的核酸物质。由于核酸提取试剂中含有天然白云岩颗粒，它可快速地吸收血清中的核酸，经10000转/离心10分钟，含有DNA的白云岩颗粒，沉积于管的底部，血清蛋白等成份，在液相，吸去液相，可将大量的蛋白质除掉，获得能用于基因组检测的核酸。

实施例5 电泳方法检测含300目天然白云岩颗粒的中性核酸提取试剂对商品鲑鱼精DNA(HSDNA)的吸收效果

含100mg天然白云岩颗粒的中性核酸提取试剂离心后，弃上清，将沉淀即天然白云岩颗粒溶于0.4ml蒸馏水混匀，移入0.5ml离心管，3000转/分钟离心5分钟，吸去上清液体，再在0.5ml离心管内加入HSDNA(1μg/μl)40微升，充分混匀20-30秒钟，室温放置10分钟，再3000转/分钟离心5分钟，取10μl电泳检测吸收效果。

试验对照：商品鱼精DNA(HSDNA)1μg/μl，取10μl与吸收样品一同电泳检测。

电泳胶：为1.5％琼脂糖胶

检测结果：1、2为HSDNA与300目吸收试验。3、4对照

 

	1	2	3	4
					定性	—	—	+	+

试验1、2显示PH中性时，100mg300目可吸收40μg cF DNA

实施例6 鉴定含500目白云岩颗粒的核酸提取试剂对酵母RNA的结合效果酵母RNA(tRNA)的配制：取酵母RNA5mg加TE缓冲液5ml，为1μg/μl。取500目天然白云岩颗粒200mg，加TE缓冲液500μl混匀，3000转/分钟离心5分钟，吸去上清液后，再加入酵母RNA和缓冲液混匀后，3000转离心5分钟，取上清5μl电泳。

 

实验方法	1	2	3	4	5
						500目	200mg	200mg	200mg	200mg	对照
酵母RNA	40μg	80μg	160μg	320μg	32μg
						TE缓冲液	460μl 1	420μl	340μl	180μl	180μl
电泳结果	—	—	—	+	+

结论：500目200mg可吸收至少160μg酵母RNA。

1核酸提取试剂用于聚合酶链反应中纯化DNA：取被检样品10μl，加入核酸提取试剂50μl，充分混匀，95℃裂解10分钟，再次混匀，10000转/分钟，离灿10分钟，吸去液体，留沉淀物，这时样品中的大量蛋白组份被吸掉，核酸可快速地被吸附到白云岩粉剂上。达到去除聚合酶反应样品中的蛋白质，纯化核酸核酸的目的。可直接将聚合酶反应液，加入含有白云岩粉剂的管内，进行聚合酶反应。

2核酸提取试剂在用于浓缩DNA含量较低样品中的应用：

(1)硷性核酸提取试剂浓缩DNA：取被检样品100μl，加入硷性核酸提取试剂200μl，混匀，95℃加热10分钟，再充分混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含大量蛋白质的液体，使100μl样品中的核酸吸附到白云岩上，达到浓缩的目的。

(2)中性核酸提取试剂浓缩DNA：取含核酸样品100μl，加入中性核酸提取试剂200μl，混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含蛋白质的液体，留沉淀物(白云岩粉剂与核酸形成复合物质)含核酸样品。

3核酸提取试剂用于从蛋白质制品中去除核酸杂质：

柱层析法；取300目白云岩粉剂，按以下方法制成层析柱，

(1)首先在12ml无菌一次性注射器出口，加入两层尼龙稠园形膜片，防止300目白云岩颗粒漏出来。

(2)装柱，用TE(10毫克分子三羟甲基氨基甲烷《Tris》，1毫克分子EDTA，pH7、5)悬浮约13克的300目颗粒，用吸管移至注射器内。

(3)平衡层析柱：用TE缓冲液洗柱三次。

(4)上样；将合有核酸物质的蛋白质溶液约10ml加入层析柱上，收集蛋白乕制品。

悬浮吸收法；

(1)洗涤，取500目白云岩粉剂约10克，放入50ml离心管内，用TE缓冲液洗三次。

(2)吸收，在含自云岩粉剂的50ml离心管内，加入含有核酸物质的蛋白质溶液10-20ml，充分混匀，5000转/分钟离心5分钟，核酸被吸收到白云岩粉剂上，收集有用的蛋白质制品。

4核酸提取试剂用于从含有大量蛋质的DNA样品中纯化DNA：血凊中含有大量的蛋白质组份，而血清中的病毒核酸数量极少，如果不除去蛋白质，成份，则不易硷出血清中极微量的病毒DNA。方法如下：取血清50μl，加入硷性核酸提取试剂100μl，混匀后，95℃裂解10分钟，使病毒破裂暴露出病毒的核酸物质。由于核酸提取试剂中含有白云岩粉剂，它可快速地吸收血清中的核酸物乕，经10000转/离心10分钟，含有DNA的白云岩粉，沉积于管的底部，血清蛋伍等成份，在液相，吸去液相，可将大量的蛋白质除掉，获得能用于基因组检测的核酸。

实施例7：含200目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂柱层析吸收DNA实施例：

取核酸提取试剂(粉剂)13克，加入容量12ml的灭菌注射器内，注射器出口，先加两层园形稠布，以防200目颗粒漏掉。加入1倍TE缓冲液10ml，分次加入，待

E缓冲液流至不滴液体时，在柱子上面加入已知DNA样品3ml，收集流出液体3ml，在未饱和状态下，DNA将全部袖吸吸在柱子上。还到去除核酸的目的。

实施例8：含300目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂柱层析吸收DNA实施例：

取核酸提取试剂(粉剂)13克，加入容量12ml的灭菌注射器内，注射器出口，先加两层园形稠布，以防300目颗粒漏掉。加入TE缓冲液10ml，分次加入，待

E缓冲液流至不滴液体时，在柱子上面加入已知DNA样品3ml，收集流出液体3ml，在未饱和状态下，DNA将全部袖吸吸在柱子上。还到去除核酸的目的(300目的流出速度稍慢)。

实施例9：电泳方法检测含300目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂对HSDNA吸收效果

取0.5ml离心管1支加入核酸提取试剂(粉剂)100mg，蒸馏水0.4ml混匀，3000转离心5分钟，吸去上清液体，再在0.5ml离心管内加入商品鱼精DNA(HSDNA粉剂，配制成液体)1μg/1μl，40μl，充分混匀20-30秒钟，室温放置10分钟，再3000转离心5分钟，取10μl电泳检测吸收效果。

试验对照：商品鱼精DNA(HSDNA)1μg/μl，取10ul与吸收样品一同电泳检测。

电泳胶：为1.5％琼脂糖胶

检测结果：1、2为HSDNA与300目吸收试验。3、4对照

 

	1	2	3	4
					定性	—	—	+	+

结论：上述结果证实，PH9时300目100mg仍可吸收40μg HSDNA样品。

实施例10：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂用于从蛋白质核酸混合物除去核酸的微量离心柱层析

1.取2ml注射器1支，在出口(装针头处)放入两片尼龙绸布(要大小适当)备用。

2.取核酸提取试剂(粉剂)2克加入10ml TE缓冲液内(50ml离心管)制成悬液，用吸管将悬液加入2ml注射器内，使压积体积至1ml.

3.3000转离心5分钟(离心时，在2ml注射器下口接1.5ml或2ml离心管)，去掉液体。

4.重复离心三次，每次加1ml TE缓冲液，收集物体积为1ml时视为离心柱层析制备妥当备用。

5.上样一般不超过1ml，待样品进入层析柱后，可停留2-5分钟。

6.离心收集样品，仍3000转离心5分钟，收集物为去除核酸的蛋白质溶液。

实施例11：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂用于从蛋白质样品中除去DNA RNA的实施例

试验中应根据蛋白质混合物的体积多少，加入不同剂量的500目粉剂。以下以小剂量为例：

取1ml蛋白质-核酸混合溶液放在1.5ml离心管内，在该溶液中加500目粉剂(灭菌)100mg，颠倒混匀20-30秒钟，10000转离心5分钟，上清液为去掉核酸的液体，如果发现未除干净，可重复一次。

10ml样品，可在50ml离心管内进行，大量样品，可在能自动转动的容器内进行，吸收时间需延长。

“注”500目粉剂不适合柱层析，主要是其流速太慢，小量样品可采用离心柱层析法。

实施例12：鉴定含300目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂对核酸(小牛胸腺DNA，cF DNA)结合效果的实施

电泳方法检测对500目吸收cF DNA的效果。

试验材料：

1.cF DNA样品的制备：取小牛胸腺DNA(cF DNA)5mg加TE缓冲液5ml，为1μg/μl cF DNA.

2.含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂的制备：取500目粉剂200mg加400μl TE缓冲液混匀，3000转离心5分钟，吸去上清液，再加入200μl TE缓冲液及不同浓度的cF DNA，最终用TE补至500μl，3000转5分钟，取上清4μl电泳检测。

实验方法：

 

						对照									对照
																实验	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15
cFDNA(μg)	2	4	6	8	10	10	20	40	60	80	160	320	480	950	950μg
																电泳结果	—	—	—	—	—	+	—	—	—	—	—	+	+	+	+

试验结果：表明2μg-160μg试验均吸收完全，320μg有部分未吸收完全。

结论：500目200mg可吸收至少160μg DNA比300目吸收量高1倍。电泳图见说明书附图2及附图3。

实施例13：鉴定含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂对酵母RNA的结合效果

实验材料：

1.酵母RNA(tRNA)的配制：取酵母RNA5mg加TE缓冲液5ml，为1μg/ul。

2.含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂的制备：取500目粉剂200mg，加TE缓冲液500μl混匀，3000转离心5分钟，吸去上清液后，再加入酵母RNA和缓冲液混匀后，3000转离心5分钟，取上清5ul电泳。

 

实验方法	1	2	3	4	5
						500目	200mg	200mg	200mg	200mg	对照
酵母RNA	40μg	80μg	160μg	320μg	320μg
						TE缓冲液	460μl	420μl	340μl	180μl	180μl
电泳结果	—	—	—	+	+

结论：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂200mg可吸收至少160μg酵母RNA。

实施例14：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂在室温和55℃条件下30分钟对小牛胸腺DNA(cF DNA)的吸收效果。

实验材料：

1.cF DNA的配制同实验例(6)

2.含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂的制备同实验例(6)

实验方法：取4ul进行琼脂糖电泳，结果如下

 

	1	2	3	4	5	6
							1μg/μlcF DNA(μg)	200	250	300	200	250	300
TE缓冲液(μl)	300	250	200	300	250	200
							温度	室温	室温	室温	55℃	55℃	55℃
定性	—	±	+	—	—	+

结论：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂200mg，室温30分钟可吸收200μg cF DNA，55℃30分钟可吸收250μg cF DNA。

实施例15：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂在72℃对cF DNA的吸收效果

实验材料：

1.cF DNA

2.含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂

实验结果

 

	1	2	3	对照
					1ug/ul cF DNA	200μg	250μg	300μg	10μg/500μl
TE缓冲液	300μl	250μl	200μl
					72℃	60分钟	60分钟	60分钟
定性	—	—	—	+

结论：72℃60分钟，含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂200mg，可吸收300ug cF DNA。

实施例16：含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂200mg95℃ 30分钟对cFDNA的吸收效果

实验材料：

1.cF DNA

2.含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂

实验方法：取4μl电泳。取500目200mg加入cF DNA 480μg/500/μl，95℃ 30’对照cF DNA 10μg/500μl。

结果证实：95℃30分钟200mg的500目吸附剂可吸收480μg cF DNA。

实施例17：紫外分光测定A值检测含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂100mg对cFDNA在不同温度时的吸收效果

实验材料：

1.cF DNA

2.含500目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂

实验方法：按100mg加入cF DNA250μg，TE缓冲液250μl，放置10分钟。

 

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
											温度		15	25	35	45	55	65	75	85	95
CFDNA含量μg/ml	162.5	111.3	111.6	111.7	127.0	122.4	103.6	77.9	42.2	32.0
											A值	3.250	2.277	2.353	2.353	2.540	2.488	2.072	1.558	0.844	0.639

实验结果

“注”每反应cF DNA总量为250μg，试验10相当于100mg500目粉剂，吸收218mg cF DNA。与实验10，200mg吸收480mg cF DNA相近。

实施例18：紫外分光测定A值检测含300目天然白云岩颗粒的核酸提取试剂吸收cF DNA效果

实验材料：

1、小牛胸腺DNA(cF DNA)定量浓度165μg/ml，

2、含300目天然白云岩颗粒的核酸提取剂粉剂按以下方法制成层析柱

(1)首先在12ml无菌灭水一次性注射器，出口加入两层尼龙绸布圆形膜片，防止300目颗粒漏出来

(2)装柱：用TE悬浮13克的300目颗粒，用吸管全部移至注射器内。

(3)平衡柱在300目柱上加入TE缓冲液，反复三次。

(4)上样：在300目柱内不再流出液体时，加入样品(cF DNA)3ml 4ml5ml 6ml 7ml 8ml 9ml使柱达到饱和。

(5)鉴测A值分别收集从柱流出的样品，测定A值观察，300目颗粒的吸收效果。

 

上样量	3ml	4ml	5ml	6ml	7ml	8ml	9ml	对照
									A260nM	0.011	0.037	0.024	-0.003	0.020	0.010	3.176	3.317
cF DNAμg/ml	0.5375	1.8732	1.2022	-0.1531	0.9978	0.4889	158.8167	165.8718

实验结果

 

上样量	3ml	4ml	5ml	6ml	7ml	8ml	9ml	上样前
									260nm	0.011	0.037	0.024	-0.003	0.020	0.012	3.176	3.317
280nm	0.015	0.042	0.030	0.002	0.031	0.170	2.074	3.113
									320nm	0.011	0.010	0.005	0.300	0.003	0.008	0.047	0.121
DNA含量(μg/ml)	0.538	1.873	1.202	-0.153	0.998	0.489	158.817	165.872

实施例19：PH中性核酸提取

PH中性核酸提取试剂的配制：

取灭菌注射用水500ml加白云岩500目1克，用NaOH调pH7.0，灭菌水pH为中性，不用调pH，除非自配灭菌水需要调pH值。

PH中性核酸提取试剂的用途：本试剂主要用于核酸含量很低的样品，有浓缩的作用。

实施例20：PH碱性核酸提取

PH碱性核酸提取试剂的配制：取灭菌注射用水500ml加40％氢氧化钠(约2.5ml)调pH达到11，NP-40 0.5ml，加白云岩500目粉剂1克，2％碱性粉红70μl。

Claims (26)

1.一种核酸提取试剂，其特征在于包含天然白云岩颗粒。

2.如权利要求1所述的核酸提取试剂，其特征在于所述的天然白云岩颗粒大小为200目。

3.如权利要求1所述的核酸提取试剂，其特征在于所述的天然白云岩颗粒大小为300目。

4.如权利要求1所述的核酸提取试剂，其特征在于所述的天然白云岩颗粒大小为500目。

5.如权利要求1—4任一项所述的核酸提取试剂，其PH为碱性。

6.如权利要求1—4任一项所述的核酸提取试剂，其PH为中性。

7.一种制备权利要求5中所述核酸提取试剂的方法，包括以下步骤：

(1)制备天然白云岩颗粒：

a 开采白云岩矿石

b 人工破碎矿石

c 机械粉碎矿石

d 目筛筛选

e 漂洗

f 干燥

(2)取灭菌注射用水500ml加40％氢氧化钠调节PH值至11，加去污剂NP-400.5ml，加入1克天然白云岩颗粒，再加入2％碱性酚红70μl。

8.一种制备权利要求6中所述核酸提取试剂的方法，包括以下步骤：

(1)制备天然白云岩颗粒：

a 开采白云岩矿石

b 人工破碎矿石

c 机械粉碎矿石

d 目筛筛选：按200，300，500目分别收集颗粒

e 漂洗

f 干燥

(2)取灭菌注射用水500ml，加入1克200目或300目或500目的天然白云岩颗粒。

9.权利要求5所述的核酸提取试剂在提取病毒DNA或细菌DNA中的用途。

10.权利要求5所述的核酸提取试剂在聚合酶链反应中纯化DNA的用途。

11.权利要求5所述的核酸提取试剂在浓缩DNA含量较低的样品中DNA的用途。

12.权利要求6所述的核酸提取试剂浓缩DNA含量较低的样品中DNA的用途。

13.权利要求1—4任一项所述的核酸提取试剂从蛋白质制品中去除核酸杂质的用途。

14.权利要求5所述的核酸提取试剂从含有大量蛋白杂质的DNA样品中纯化DNA的用途。

15.使用权利要求5所述的核酸提取试剂提取血清样品中病毒DNA的方法，所述方法包括取待检血清10μl，加入50μl核酸提取试剂，95℃处理10分钟，10000转/分钟离心5分钟，吸去上清液，沉淀物为提取的病毒DNA。

16.使用权利要求5所述的核酸提取试剂提取血清样品中细菌DNA的方法，所述方法包括取待检血清10μl，加入50μl核酸提取试剂，95℃处理20分钟，10000转/分钟离心5分钟，吸去上清液，沉淀物为提取的细菌DNA。

17.使用权利要求5所述的核酸提取试剂在聚合酶链反应中纯化DNA的方法，所述方法包括取被检样品10μl，加入核酸提取试剂50μl，充分混匀，95度裂解10分钟，再次混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去液体，留沉淀物，所述沉淀物可以作为扩增模板直接参加聚合酶链反应。

18.使用权利要求5所述的核酸提取试剂浓缩DNA含量较低的样品中DNA的方法，所述方法包括取含核酸样品100μl，加入碱性核酸提取试剂200μl，混匀，95度加热10分钟，再充分混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含大量蛋白质的液体，使100μl样品中的核酸吸附到白云岩颗粒上，达到浓缩的目的。

19.使用权利要求6所述的核酸提取试剂浓缩DNA含量较低的样品中DNA的方法，所述方法包括取含核酸样品100μl，加入中性核酸提取试剂200μl，混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含蛋白质的液体，留沉淀物，使样品中的核酸吸附到白云岩颗粒上，达到浓缩的目的。

20.使用权利要求1—4任一项所述的核酸提取试剂从蛋白质制品中去除核酸杂质的方法，所述方法为柱层析法或悬浮吸收法。

21.使用权利要求5所述的核酸提取试剂从含有大量蛋白杂质的DNA样品中纯化DNA的方法，所述方法包括取样品50μl，加入碱性核酸提取试剂100μl，混匀后，95度裂解10分钟，经10000转/离心10分钟，，吸去含大量蛋白质的液体，留沉淀物，即为吸附到白云岩颗粒上的DNA。

22.权利要求1中所述的天然白云岩颗粒在提取病毒DNA或细菌DNA中的用途。

23.权利要求1中所述的天然白云岩颗粒在聚合酶链反应中纯化DNA的用途。

24.权利要求1中所述的天然白云岩颗粒在浓缩DNA含量较低的样品中DNA的用途。

25.权利要求1中所述的天然白云岩颗粒从蛋白质制品中去除核酸杂质的用途。

26.权利要求1中所述的天然白云岩颗粒从含有大量蛋白杂质的DNA样品中纯化DNA的用途。

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