CN101431893B - 治疗具有细胞增殖和血管生成特征的疾病的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明描述的是使用一个或多个苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物来预防和/或治疗包含异常的血管生成的疾病的组合物和方法。

Description

治疗具有细胞增殖和血管生成特征的疾病的组合物和方法

技术领域

本发明涉及预防和/或治疗与细胞增殖和/或血管生成相关的疾病的组合物和方法。本发明部分针对一系列已证明对包含异常细胞增殖、异常血管生成或结合有这两者的疾病有治疗作用的化学成分。 

背景技术

构成心血管系统的血管可以被大致分成动脉、静脉和毛细血管。动脉以相对高的压力将心脏的血液运走；静脉以相对低的压力将血液运回心脏，而毛细血管则为动脉和静脉之间的血液供应提供连结。在胚胎发育阶段，首先通过血管发生(vasculogenesis)，利用多能内皮细胞前体形成血管。随后，通过动脉生成(arteriogenesis)，形成具有内皮细胞、平滑肌细胞和周细胞(中膜)的更复杂结构的较大血管。尽管认为动脉生成不会在成人期中发生，但是成人期中血管可以通过血管发生以及被特别称作血管生成(angiogenesis)的过程形成。正常条件下，在比如创伤修复、缺血恢复以及女性生殖周期(产生形成黄体的子宫内膜以及在妊娠时形成胎盘)的情形中会出现血管生成的新生血管。通过血管生成形成的相对简单的血管——毛细血管缺乏发育膜(developed tunica)，因为他们主要由内皮细胞组成，较少程度的为血管周细胞和基底膜。癌症是一种疾病状态，其表现为改变的组织细胞不受控制地增殖的特点。大小不到几毫米的肿瘤利用附近的正常血管来提供营养物质和氧。而大于临界尺寸的癌细胞利用血管生成来制造额外的血管支持。通常，通过机体自然生成的血管生成抑制因子来中和血管生成因子将血管生成保持在控制中。然而，癌细胞通过生成多于血管生成抑制因子的血管生成生长因子改变了这种平衡，从而有利于血管生长。癌症启动的血管生成与正常血管生长时观察到的血管生成 并没有什么不同。血管生成因子从肿瘤细胞传递到正常的内皮，与内皮细胞结合，激活内皮细胞并诱发内皮信号事件，致使内皮细胞增殖。随着毛细血管循环的形成，朝肿瘤深入的内皮管开始形成。然后，毛细血管经历一个成熟过程以稳固循环结构。 

现在已经有多种靶向治疗肿瘤细胞增殖的化学治疗方法，包括使用烷化剂、抗有丝分裂剂、抗代谢物剂以及抗生素。这些药物优选作用于快速增殖的肿瘤细胞。用抗雌激素剂或抗雄激素剂的激素治疗是攻击癌细胞的另一种方法，其通过抑制所需激素的增殖作用起作用。尽管抗癌剂开始具有明确的分类，但是通过多种作用方式发挥作用的药剂也并不少见。例如，已经表明抗雌激素药物三苯氧胺通过雌激素非依赖性机制对癌细胞和内皮细胞(抗血管生成)都具有抗增殖活性。作用于微管的抗有丝分裂剂紫杉醇也经证明具有抗血管生成特性，其可能是通过经Bcl-2磷酸化来诱导内皮细胞的凋亡。 

癌症仅仅是与由疾病引起的新生血管相关的一种疾病。自然界中存在很多种疾病，包括异常的血管生成。这些疾病利用相同的涉及正常的毛细血管生长的过程，却以异常的方式来制造缺乏高度的稳定性和功能的毛细血管。人们期望能抑制血管生成的药剂可以对各种由疾病引起的新生血管病发挥作用。血管生成被认为可能是许多疾病的发病机理中关键的组成部分。如果能通过治疗干预血管生成放慢或消除，那么抗血管生成剂将有望消除或减轻多种新生血管相关的疾病。抗血管生成治疗通过不向肿瘤供应血液，在抑制肿瘤生长方面可能会很有效。然而，抗血管生成治疗若结合其他的直接作用于肿瘤细胞的治疗，可能会被证实是更加有效的。在这点上，能证明同时具有抗血管生成活性以及肿瘤导向性的化学药剂将具有优势。 

因此，仍需要开发能证明对人类内皮细胞具有抗增殖活性的药剂来治疗包括但不仅限于癌症的各种疾病，除了对癌细胞有直接的抑制作用以用于肿瘤的治疗外，又或者对作为血管生成启动子的其它细胞具有抗增殖活性以用于癌症以外的疾病。并且至少在有些时候，通过制造含修饰的类似物以具有持续不变的半衰期的能力，该修饰的类似物抑制代谢以及由此引 起的活性清除或消失，并几乎没有或者没有毒性。本发明试图来满足上述这些以及其它的需要。 

发明内容

本发明涉及用于治疗与细胞增殖和/或血管生成相关的疾病的组合物和方法。本发明部分针对一系列化学成分，其已证明对包含异常细胞增殖、异常血管生成或这两者结合的疾病有治疗作用。本发明的一个实施例涉及用于预防和/或治疗异常细胞增殖的组合物。一方面，本发明涉及一系列苯并[c]苯并吡喃-6-酮(benzo[c]chromen-6-one)衍生物，其已证明能增强对人内皮细胞的抗增殖活性以治疗包括但不仅限于癌症的多种疾病。这些化合物具有双重活性，既具有抗血管生成活性，又具有肿瘤细胞抗增殖活性。 

在本发明的另一方面中，本发明涉及一系列苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物，证明其能增强对人内皮细胞的抗增殖活性以治疗包括但不仅限于癌症的多种疾病，而针对肿瘤细胞具有最小的或没有抗增殖活性。换句话说，这些化合物主要表现为抗血管生成活性。 

本发明的另一个实施例涉及一系列苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物，证明其能增强对人内皮细胞的抗增殖活性以治疗包括但不仅限于癌症的多种疾病。一方面，增强的抗人内皮细胞增殖活性是通过直接地抗肿瘤细胞增殖抑制活性来实现的以用于癌症的治疗。另一方面，增强的抗内皮细胞增殖活性是因对病理相关细胞、特别是对癌症以外的如皮肤疾病的角质细胞的疾病的抗增殖抑制作用而广受赞誉。在另一实施例中，本发明涉及给予需要接受治疗的主体有效治疗量的一个或多个本文所述的组合物的方法。一方面，对象主体已经被诊断为或倾向诊断为具有一种或多种与异常细胞增殖和/或血管生成相关的疾病，包括如癌症。 

从下面对实施例的具体说明中可以使本发明的其他特点和优点变得显而易见。

附图说明

图1A是表示Palomid529对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激的内皮细胞增殖的抑制的柱状图； 

图1B是表示Palomid529对血管内皮生长因子(VEGF)刺激的内皮细胞增殖的抑制的柱状图； 

图2是表示本发明化合物的凋亡诱导能力数据的柱状图； 

图3是表示对角质细胞的凋亡诱导活性数据的柱状图； 

图4是表示抑制角质细胞生长的曲线图； 

图5是表示化合物不同浓度下的凋亡诱导活性的柱状图；以及 

图6是表示本发明化合物代谢稳定性的柱状图。 

具体实施方式

本发明涉及预防和/或治疗与有害的细胞增殖和/或血管生成相关的疾病的组合物和方法。本发明部分针对一系列化学成分，其证明对包含异常细胞增殖、异常血管生成或结合这两者的疾病有治疗效果。特别的方面是，本发明涉及苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物，证明其对具有异常增殖、异常血管生成或结合这两者特点的疾病有一定作用。 

术语“衍生物”是本领域的技术人员能够理解的。例如，衍生物可以理解为由另一个结构相似的化合物经一步或多步反应合成的化合物，如(以下的)表I所表示的苯并[c]苯并吡喃-6-酮。 

目前，研究治疗疾病的药物基于多种靶向策略。一个策略是使用天然的血管生成抑制剂，比如血小板反应素(thrombospondin)、血管生成抑素(angiostatin)以及内皮抑素(endostatin)。另一个策略是使用阻断受体的药剂，该受体要刺激血管生成，比如VEGF受体的拮抗剂。第三个策略是使新血管侵入周围组织的酶抑制剂，例如基质金属蛋白酶抑制剂(matrix metalloproteinases)。抑制血管生成的另一个策略是通过使用整 合素拮抗剂，比如αvβ1抗体，或者通过抑制影响毛细管形成的内皮细胞黏附的小分子药物。 

血管生成由于它的选择作用成为癌症治疗的理想治疗靶标。生长的肿瘤中的血管处于有益于细胞活化和快速增殖的微环境中，其中，在多数正常组织中的血管是静止的。这种诱发细胞活化和快速增殖的微环境被认为是生理学上的差异，该差异使抗血管生成剂选择性地作用于肿瘤中的血管。 

本发明涉及包含一个或多个组合物的治疗组方，其用于治疗有害的细胞增殖和/或血管生成和/或角质细胞增殖。本发明还涉及包含一个或多个组合物的治疗组方，其用于治疗癌症以及其它具有比如内皮细胞或其它导致下列这些疾病的细胞的有害的、过量的异常刺激或增殖的特点的疾病，所述的这些疾病包括但不仅限于角膜、视网膜或前房新生血管的眼睛疾病、癌症(包括但不仅限于纤维肉瘤(fibrosarcoma)、粘液肉瘤(myxosarcoma)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、软骨肉瘤(chondrosarcoma)、成骨肉瘤(osteogenic sarcoma)、脊索瘤(chordoma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、内皮细胞肉瘤(endotheliosarcoma)、淋巴管肉瘤(lymphangiosarcoma)、淋巴管内皮细胞肉瘤(lymphangioendotheliosarcoma)、滑膜瘤(synovioma)、间皮瘤(mesothelioma)、尤文氏瘤(Ewing′s tumor)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、结肠癌(coloncarcinoma)、胰腺癌(pancreatic cancer)、乳腺癌(breast cancer)、卵巢癌(ovarian cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、鳞状细胞癌(squamouscell carcinoma)、基底细胞癌(basal cell carcinoma)、腺癌(adenocarcinoma)、汗腺癌(sweat gland carcinoma)、皮脂腺癌(sebaceousgland carcinoma)、乳头状癌(papillary carcinoma)、乳头状腺癌(papillaryadenocarcinomas)、囊腺癌(cystadenocarcinoma)、血管瘤(hemangioma)、髓样癌(medullary carcinoma)、支气管癌(bronchogenic carcinoma)、肾细胞癌(renal cell carcinoma)、肝癌(hepatoma)、胆管癌(bile ductcarcinoma)、绒毛膜癌(choriocarcinomas)、精原细胞瘤(seminoma)、 胚胎癌(embryonal carcinoma)、肾母细胞瘤(Wilms′tumor)、宫颈癌(cervical cancer)、睾丸肿瘤(testicular tumor)、肺癌(lung carcinoma)、小细胞肺癌(small cell lung carcinoma)、膀胱癌(bladder carcinoma)、上皮癌(epithelial carcinoma)、神经胶质瘤(glioma)、星细胞瘤(astrocytoma)、髓母细胞瘤(medulloblastoma)、颅咽管瘤(craniopharyngioma)、室鼓膜瘤(ependymoma)、松果体瘤(pinealoma)、血管母细胞瘤(hemangioblastoma)、听神经瘤(acoustic neuroma)、少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、脑膜瘤(meningioma)、黑色素瘤(melanoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、听神经瘤(acousticneuroma)、纤维神经瘤(neurofibromas)、沙眼(trachoma)以及化脓性肉芽肿(pyogenicgranulomas)、急性淋巴细胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)以及急性髓细胞性白血病(acute myelocytic leukemia)、慢性白血病(chronicleukemia)、真性红细胞增多症(polycythemia vera)、淋巴瘤(lymphoma)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、原发性巨球蛋白血症(Waldenstrom′smacroglobulinemia)以及重链病(heavy chain disease))、遗传性出血性毛细管扩张症(hereditary hemorrhagic telangiectasia)、实体或血源性肿瘤(solid or blood born tumors)、获得性免疫缺陷综合征(acquired immunedeficiency syndrome，AIDS)、更年期症状(post-menopausal symptoms)、骨质疏松症(osteoporosis)、心血管疾病(cardiovascular disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)，为了降低中风的发病率，作为对之前的雌激素治疗的选择性替代治疗，血管畸形、异常的伤口愈合、炎症以及免疫紊乱、痛风及其它眼睛疾病(包括视网膜/脉络膜、角膜、肿瘤性或前房新生血管，包括但不仅限于黄斑变性、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜移植排斥反应、多灶性脉络膜炎、白斯特氏病(Best′s disease)、斯特格病变(Stargardt′s disease)、cbIC型钴胺素缺乏症(cblC type ofcobalamin deficiency)、高粘滞血症、Sorsby眼底营养不良(Sorsby′s fundusdystrophy)、弹力纤维性假黄瘤(pseudoxanthoma elasticum)、虹膜红变、奥韦综合症(Osler Weber syndrome)(奥斯勒-韦伯-朗迪病，Osler- Weber-Rendu disease)、角膜结膜炎、维生素A缺乏症、水泡状病(phylectenulosis)、隐形眼镜配戴的感染(包括但不仅限于细菌性、病毒性、寄生性或真菌性)、异位性和上缘皮炎(atopic and superior limbicdermatitis)、慢性葡萄膜炎、慢性玻璃体炎、伊尔斯病(Eales′disease)、放射状角膜切开术、包括无论是否为糖尿病相关的所有形式的增殖性玻璃体视网膜病变的维管或纤维组织的无典型性增殖、慢性视网膜脱离、创伤(包括但不仅限于磨损、如角膜移植排斥反应的术后并发症、碱烧伤、酸烧伤或烃类烧伤、布鲁赫氏膜(Bruch′s membrane)的机械或热损伤、)、翼状胬肉(pterygium)、肿瘤(neoplasia)(包括但不仅限于眼癌和黑色素瘤))、关节炎(风湿性和骨性关节炎)以及皮肤病(银屑病、异位皮炎、光损伤)。其它的与血管生成相关的疾病包括干燥综合症(Sjogren′ssyndrome)、系统性红斑狼疮(systemic lupus)、多动脉炎、类天疱疮、镰刀型红细胞贫血病(sickle cell anemia)、佩吉特病(Paget′s disease)、静脉或动脉闭塞、颈动脉阻塞性疾病(carotid obstructive disease)、莱姆病(Lyme disease)、白塞病(Behcet′s disease)、巴尔通氏体病(bartonelosis)、动脉硬化、通过囊胚诱发闭经以阻断排卵或防止着床、外科术后粘连以及慢性炎症(包括但不仅限于溃疡性结肠炎和克罗恩式病(Crohn′sdisease))。 

根据本发明，提供了包含式I的药物组合物： 

其中， 

R1＝H或烷基；

R2＝H、OH、O-烷基、氨基、O-杂环、O-芳基、O-取代烷基(其中的取代基例如是卤、芳基或杂环)、O-乙酰基、O-PO3、O-SO3或OSO2NH2； 

R3＝H、OH、O-烷基、O-CH2芳基、O-CH2杂环、O-烷基芳基、O-酰基或硝基； 

R4＝H、烷基、CH2芳基、取代烷基、OH、O-烷基、O-芳基、O-CH2芳基、O-CH2杂环、O-酰基、O-PO3、O-SO3或OSO2NH2； 

R5＝H、氧、芳基、羟基、烷基或O-烷基； 

R6＝H； 

R7＝H、酰基、取代烷基(其中的取代基例如是羟基或磺胺基)、烷基、O-烷基或O-取代烷基(其中的取代基是O-PO3或OSO3)； 

R8＝H；以及 

X＝O、N或S 

根据本发明，提供了包含式II的药物组合物： 

其中， 

R1＝H或烷基； 

R2＝H、O-烷基、OH、氨基、O-杂环、O-芳基、O-取代烷基(其中的取代基例如是卤、芳基或杂环)、O-乙酰基、O-PO3、O-SO3或OSO2NH2； 

R3＝H、O-烷基、O-取代烷基(其中的取代基是芳基或杂环)、OH、O-酰基或硝基；

R4＝H、烷基、CH2芳基、取代烷基、OH、O-烷基、O-芳基、OCH2芳基、OCH2杂环、O-酰基、OPO3、OSO3或OSO2NH2； 

R5＝H、芳基、杂环或取代烷基；以及 

R6＝H、烷基或芳基。 

根据本发明，提供了包含式III的药物组合物： 

其中， 

R1＝烷基或H； 

R2＝烷基或H； 

R3＝乙酰基；以及 

R4＝H或烷基。 

根据本发明，提供了包含式IV的药物组合物： 

其中， 

R1＝H或F； 

R2＝H或硝基；

R3＝H； 

R4＝H；以及 

R5＝烷基、取代烷基或芳基。 

根据本发明，提供了包含有效治疗量的一个或多个具有如下表I所示的结构的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的药物组合物。 

表I：苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的结构式 

表I的每个苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物通过“SG”后面跟有数字的名称来区别。在本文它们被交替称为“Palomid”后面跟有同样数字的名称，即，本申请中术语“SG”和“Palmid”可交替使用。 

表I的化合物具有抗-血管生成和/或抗角质细胞活性。本领域的技术人员将领会到本发明包括其它的具有抗血管生成和/或抗肿瘤活性的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物。可以通过使用下述的方法以及其他文献的方法为每个衍生物确定这些特征。苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物影响细胞生长的过程仍在被全面地研究，然而，苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物可以诱发细胞周期发展过程中相关的各种蛋白水平和活性的改变。这些包括DNA复制和修复的辅助因子(cofactors)，比如，增殖的细胞核抗原和细胞分裂周期激酶(cell division cycle kinases)(以及调节子)。苯并[c]苯并吡喃-6-酮还可以上调死亡受体5(Death Receptor5)和硫胱氨酸蛋白酶8(caspase8)、抑制低氧诱导因子-1α(HIF-1α，血管生成基因的全局转录调节子(globaltranscriptional regulator of angiogenesis genes))、或者抑制Akt/mT或信号转导通路(细胞生长和增殖的一个关键的调节子通路，它的异常与包括但不仅限于癌症的人类疾病有关)。

现有技术中，与这些细胞增殖的抑制和作用机理有关的实验是公知的。例如，通过检测苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物体外抑制微管蛋白聚合和微管组装的能力，可以评估对微管蛋白聚合活性起作用而介导的抗有丝分裂活性。其它的这种实验包括通过代谢法或结合到标记的(放射化学，例如，3氢-胸腺嘧啶脱氧核苷或者荧光标记的)DNA或免疫反应的(BrdU)核苷对组织培养基中的细胞计数或者对细胞数进行估计。此外，通过如荧光素酶报告基团(luciferase reporter groups)或Akt/mT测量HIF-α的活性，或者通过例如激活如Akt的磷酸化中的中间体使其信号化。另外，抗血管生成活性还可以通过在大鼠主动脉环(rat aortic rings)的体外模型中的内皮细胞迁移、内皮细胞小管样结构的形成或者血管派生来评估。 

本发明还涉及包含一个或多个本文所述的组合物或其前药的植入体或其它的装置，其中，组合物或前药被制成以生物可降解的或生物不可降解的剂型来持续的释放。生物不可降解的剂型通过物理过程或者机械过程以控制方式来释放药物，该剂型本身是不降解的。生物可降解的剂型是指通过体内的自然过程被逐渐地水解或溶解，使掺杂的药物或者前药逐渐地释放。生物可降解的和生物不可降解的剂型以及药物结合成用于控释的这些剂型的过程对于本领域的技术人员来说是公知的。这些植入体或者装置可以被植入到需要输送地方的附近，例如，在异常皮肤的地方或者异常血管的附近。 

本发明还涉及包被的血管支架从而防止再狭窄，即动脉在已经实施了比如血管成形术或者支架手术的治疗的同一个地方的再次变窄或堵塞。根据本发明，支架或者其它的外科植入装置包被有一个或多个本文描述的组合物。这种装置的包被对于本领域的技术人员来说是公知的。 

本发明还涉及共价结合的前药及其用途。更具体地说，本发明涉及苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的共价结合物以及利用这种共价结合预防或治疗与非典型的细胞增殖和/或非典型的血管生成相关的情形。这样的疾病包括但不仅限于癌细胞、内皮细胞或其它病理上相关的细胞的过多的、异常的激活或增殖。

本发明还提供了与生物活性修饰剂共价结合的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的共价前药，例如，缩氨酸、其抗体或片段或体内可水解的酯，如甲酯、磷酸或硫酸基、以及氨基化合物或氨基甲酸盐类。修饰可以包括用磷酸基修改羟基。由于使衍生物发生了明显的变化而丧失了生物活性，该衍生物将不具有活性，。然而，这种修饰却得到了更好的溶解性，水溶性更好，其有利于通过血液输送或便于口服从而使其到达发挥活性的地方。一旦其进入到需要发挥活性的微环境中，修饰基团会通过自然过程裂解掉，即，需要发挥活性处的内源酶。可选择地，也可以仅使衍生物保持在一个较好的系统浓度的状态，其然后再在体循环中降解，并因此增强其活性。将苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物结合到随疾病而定的有活性的前药中，以使在治疗一个或多个上文提到的疾病情形中效力和选择性有了显著地改善。 

除了本发明的化合物外，本发明的药物组合物还可以包含一个或多个有效药物或与一个或多个有效药物联合给药(同时或依次)以治疗上文提到的一种或多种病情。这样的药剂包括但不仅限于本领域的技术人员所公知的具有溶瘤或抗癌活性的药物制剂。其它的药剂包括那些抑制溶瘤剂或抗癌剂副作用的药剂，比如那些直接用于抵消恶心和呕吐的药剂。 

此外，苯并[c]苯并吡喃-6-酮的衍生物或其前药可以合并成生物能降解的或不能降解的剂型用于持续释放。比如，将该制剂植入在肿瘤处所需输送的位置附近或异常血管的附近。可选择地，药物制剂可以被包在具有提供特异性的化学基团的载体内。比如，该基团可以是抗体或者某些其它的这种指引和促进活性药剂输送到所需部位(或细胞/肿瘤)的分子。 

本发明还涉及苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药用于制备用来预防或治疗与具有非典型的细胞增殖和/或非典型的血管生成和/或炎症特征的任何疾病相关的情形的用途。 

本发明还涉及供给包含根据本发明的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药的药物组合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。该药物 组合物还可以用于预防或治疗与具有非典型的细胞增殖和/或非典型的血管生成和/或炎症特征的任何疾病相关的情形。 

本发明还涉及预防或治疗与具有非典型的细胞增殖和/或非典型的血管生成和/或炎症特征的任何疾病相关的情形的方法所述方法包括给予需要接受治疗的主体这种预防或治疗有效量的上文所述的根据本发明的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药。(应该理解预防或治疗所述的情形包括所述情形的改善。) 

“有效量”是指能部分或完全减轻与特定疾病或综合病症相关的症状的有效治疗量。比较熟练的操作者根据治疗情况、给药途径以及其它相关的因素可以很容易地计算出该量——对于本领域的技术人员来说是公知的。这样的技术人员很容易就能确定出合适的剂量、给药方式和给药次数。 

苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药的药学上可接受的盐可以以任何常规的方式制备。体内可水解的酯比如甲酯、磷酸盐或硫酸盐组以及氨基化合物或氨基甲酸盐可以以任何常规的方式制备。 

可以使用公知的技术将苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物或其前药提供为生理上可接受的剂型并且这些剂型可以通过标准途径给药。上述组合物可以通过但不仅限于局部、口服、直肠或肠胃外如静脉内、皮下或肌肉途径的这些方式给药，此外，上述组合物可以合成持续释药的制剂，将该制剂植入需要输送的地方附近，例如，在皮肤疾病或老化皮肤处，或在异常血管的附近。组合物的剂量依治疗的情形、使用的具体衍生物以及其他临床因素比如体重和主体的情形以及化合物的给药途径而定——所有的这些是本领域技术人员可以领会的。例如，本领域的技术人员能够参照标准实验，比如Remington(雷明顿)的《Pharmaceuticals Sciences》(《药剂学》)第17版(这里以参考引用的方式将其全部教导合并于此)，来确定制作何种剂型以及如何给药。 

上述剂型包括但不仅限于那些适合于口服、直肠、鼻腔、吸入、局部(包括但不仅限于皮肤、经皮、口腔和舌下)、阴道或胃肠道外(包括但不仅限于皮下、肌肉、静脉、皮内、眼内(包括但不仅限于玻璃体内、结 膜下、筋膜(Tenon)囊下、经巩膜)、气管内和硬膜外)以及吸入给药。上述剂型可以以单位剂量形式方便地表示，并且可以通过常规的制药技术来制备。这样的技术包括将活性成分和药物载体或赋形剂组合在一起的步骤。通过将液体载体或极细的固体载体或者两者一起与活性成分均匀、密切地组合在一起制备上述剂型，如果需要，然后再将产物成型。 

本发明适合口服给药的剂型可以表现为不连续的单位比如各含有预先确定量的活性成分的胶囊剂、扁囊剂或片剂；比如粉末或颗粒；比如水液或非水液中的溶液或混悬液；或比如水包油型乳剂或油包水型乳剂等。 

片剂可以通过优选与一种或多种助剂压缩或模塑制成。压制片可以通过用适合的机器将自由流动形式的活性成份比如粉末或颗粒，优选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合压缩制备而成。模制片可以通过用适合的机器将被惰性液体稀释剂弄湿得粉末状化合物的混合物模塑制成。片剂还可以选择包衣或刻痕，并且可以制成对其中的活性成份提供缓释或可控释的制剂。 

适合于经口给药的制剂包括含有以调味基质、通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶调味的锭剂；含有在惰性基质比如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯树胶中的活性成份的锭剂；以及含有以适合的液体载体给药的成分的含漱液。 

适合于皮肤局部给药的制剂可以是包含以制药上的、药妆品的或化妆品的可接受载体给药的成分的软膏剂、乳膏剂、凝胶剂和糊剂。可行的给药系统是含给药成分的经皮贴剂。 

直肠给药的制剂可以是具有适当基质的栓剂，该基质包含例如可可脂或水杨酸。 

适合于鼻腔给药的制剂，其中，载体是固体，其包括具有例如范围在20至500微米的粒子大小的粗粉，其以鼻腔吸入的方式给药，例如通过从靠近鼻子的装有粉末的容器经鼻腔通道快速吸入。合适的制剂包括其载体是用于给药的液体，例如包括活性成份的水或油溶液的鼻喷雾剂或鼻滴剂。

适合于阴道给药的制剂可以是包含除了活性成份之外的比如本技术领域中公知的适当的载体成份的阴道栓剂、棉塞(tampons)、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。 

适合于吸入的制剂可以是包含除了活性成份之外的比如本领域技术领域中公知的载体成份的薄雾剂(mists)、粉尘剂(dusts)、粉末剂(powders)或喷雾剂。 

适合于肠胃外给药的制剂包括水和非水无菌注射液，该注射液可以包含抗氧化剂、缓冲液、抗菌剂和使该制剂与目标受体的血液等张的溶质；以及水和非水无菌混悬液，其可以包括助悬剂和增稠剂。该制剂可以盛装在例如密封的安瓿和小瓶的单剂量或多剂量容器中，以及可以是冻干储存的、仅需使用前立刻加入无菌液体如注射用水的冻干状态。临时的注射液和混悬液可以由无菌的上述各种粉末、颗粒和药片制备。 

可接受的单位剂量的制剂是那些包含如上所述的日剂量或单位、日亚剂量或其适当部分的给药成分的制剂。除了上面提到的成分外，本发明的制剂还可以包括可考虑到的制剂类型的本技术领域的其它常规试剂，例如，适合于口服给药的制剂可以包括调味剂。本发明包括约100％至90％纯异构体的组合物。另一方面，本发明涉及约90％至80％纯异构体的组合物。另一方面，本发明涉及约80％至70％纯异构体的组合物。另一方面，本发明涉及70％至60％纯异构体的组合物。更进一步的方面，本发明涉及60％至50％纯异构体的组合物。然而，标为α或β的立体化学异构体可以是两者任意比例的混合物，其中，本领域的技术人员在化学上可以实现。此外，本发明所包括的是经典的和非经典的生物电子等排原子和取代基置换，并且是本领域技术人员所公知的。这种生物电子等排的置换包括例如用＝O取代＝S或＝NH。 

根据本发明所用的已知化合物以及根据本发明的新化合物的前体可以购自供应商，比如西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)。根据本发明的其它化合物可以根据本领域的技术人员所熟知的已知方法合成。苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物SG00292和SG00392的合成路线总结于下文的方案1 中。该合成路线呈现了一种制备该系列衍生物的可能方法，其它的合成路线(包括改变合成步骤的次序或试剂)对于本领域的技术人员来说也是可能的。在特定的实例中，为了获得所需产物，保护基的种类或反应的次序可以改变。这些一般合成方案的变化对于本领域的技术人员来说是熟知的。 

实施例

根据本发明，苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物可以使用下列反应方案—方案1和合成方法方案2来制备。本发明还包括以方案1为起始步骤制备的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物。这些类似物的合成示于方案3所表示的合成方法中，并表示了表I所示的苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物的示例。

方案1 

方案2 

合成5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基苯甲醛(2) 

将2-溴-5-羟基-4-甲氧基苯甲醛(25g，0.108mol)和碳酸钾(K₂CO₃)(30g，0.216mol)加入乙腈(250ml)中，并充入氩气。加入溴化苄(20g，0.12mol)，并在氩气环境中50℃下加热该混合物20小时。冷却之后，将该混合物倒进水(200ml)中，并用二氯甲烷(300ml)萃取。用水(3×100mL)洗涤二氯甲烷溶液，干燥并浓缩。用异丙醇：水(3:1)溶液重结晶，得28.8g(83％)的浅棕色固体2。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH3.96(3H，单峰，OCH₃)，5.16(2H，单峰，CH₂Ph)，7.07-7.48(7H，多重峰，ArH+CH₂Ph)，10.16(1H，单峰，CHO)。 

5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基苯酚(3) 

将5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基-苯甲醛2(5g，16.0mmol)加入二氯甲烷(40mL)中，充入氩气，于冰浴中冷却。在二氯甲烷(50mL)中逐滴加入间氯过氧苯甲酸(mCPBA)溶液(5.2g)。一旦完成加入步骤，就将反应混合物在氩环境下回流14小时。冷却后，将混合物用碳酸氢钠(3×50mL)的盐水洗涤，干燥并浓缩。残留物用乙酸乙酯/正己烷重结晶，得4.1g(85％)的大的棕褐色针晶3。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH3.88(3H，单峰，OCH₃)，5.10(2H，单峰，CH₂Ph)，6.74(1H，单峰，ArH)，7.08(1H，单峰，ArH)，7.34-7.40(5H，多重峰，CH₂Ph)，8.25(1H，单峰，OH)。 

1-苄氧基-4-溴-2，5-对苯二甲醚(4) 

将5-苄氧基-2-溴-4-甲氧基-苯酚3(2.76g，89.0mmol)和氢化钠(0.89g，13.0mmol，60％分散于油中)加入到烧瓶中，充入氩气。加入干燥的四氢呋喃(THF)(50mL)，在冰浴中搅拌混悬液20分钟。加入碘化甲烷(CH₃I)(1.7mL，27.0mmol，滤过碱性氧化铝)，在氩环境中室温下搅拌混合液18小时。于冰浴中将反应混合物冷却之后，缓慢地加入水。用乙酸乙酯萃取混合液，干燥、浓缩，得到真空条件下凝固的黄色油状物。将该油状物通过使用硅胶的硅胶柱层析纯化(10％的乙酸乙酯/正己烷洗脱)，得2.5g(88％)的白色固体4。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH3.75(3H，单峰， OCH₃)，3.84(3H，单峰，OCH₃)，5.15(2H，单峰，CH₂Ph)，6.57(1H，单峰，ArH)，7.07(1H，单峰，ArH)，7.32-7.42(5H，多重峰，CH2Ph)。 

4-苄氧基-2，5-二甲氧基苯硼酸(5b) 

将1-苄氧基-4-溴-2，5-对苯二甲醚4(7.48g，23.0mmol)置于干燥的烧瓶中，充入氩气。加入干燥的THF(75mL)，在干冰/丙酮浴中，将溶液冷却至-78℃。加入正丁基锂(nBuLi)(11mL，2.5M的正己烷溶液)，-78℃下搅拌混合物20分钟。加入硼酸三异丙酯(Triisopropyl borate)(10.7mL、0.463mol)，-78℃下搅拌反应2小时，然后放置至室温，此时开始生成白色沉淀。继续搅拌20小时后，用饱和的氯化铵(NH₄Cl)(25mL)终止反应。将有机层分离之后，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。合并有机层，干燥、浓缩。残留物用正己烷磨洗，过滤得4.1g(62％)的淡米白色乳脂状固体5b。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：dH3.70(3H，单峰，OCH₃)，3.79(3H，单峰，OCH₃)，5.16(2H，单峰，CH₂Ph)，6.77(1H，单峰，ArH)，7.18(1H，单峰，ArH)，7.33-7.52(5H，多重峰，CH₂Ph)。 

5-乙酰基-2-三氟甲烷磺酰氧苯甲酸甲酯(6) 

氩环境中，0℃下，将5-乙酰水杨酸甲酯(25.0g，0.129mol)溶于二氯甲烷(CH₂Cl₂)(250mL)和嘧啶(60mL)中。然后加入三氟甲磺酸酐(37.9g，0.133mol)，放置20分钟以上。再搅拌反应混合物30分钟，然后用水(500mL)终止反应。分离有机层，用5％的盐酸(80mL)洗涤三次。除去溶液，所得固体真空下干燥得40.3g(96％)的产物6。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH2.56(3H，单峰，COCH₃)，3.89(3H，单峰，OCH₃)，7.32(1H，双峰，ArH)，8.12(1H，双峰，ArH)，8.52(1H，单峰，ArH)。 

4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸甲酯(7b) 

将4-苄氧基-2，5-二甲氧基苯硼酸5b(4.15g，14.4mmol)、5-乙酰基-2-三氟甲烷磺酰氧-苯甲酸甲酯6(4.69g，14.4mmol)和碳酸钾(3.98g，28.8mmol)加入到烧瓶中，并充入氩气。加入无水乙醇(83mL)和二甲醚(DME)(94mL)，再加入三苯基磷酸钯(Pd(PPh₃)4)(0.87g，0.785mmol)，回流反应混合物4小时。冷却后，加入水(100mL)、乙酸乙酯(100mL)和盐 水(50mL)。用盐水(2×50mL)洗涤有机层，再用乙酸乙酯萃取混合溶液部分。干燥混合有机液部分，浓缩，乙酸乙酯/正己烷中重结晶得6.5g(99％)的黄色固体7b。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)，dH2.65(3H，单峰，COCH₃)，3.58(3H，单峰，OCH₃)，3.68(3H，单峰，OCH₃)，3.88(3H，单峰，OCH₃)，5.21(21H，单峰，CH₂Ph)，6.55(1H，单峰，ArH)，6.86(1H，单峰，ArH)，7.30-7.48(6H，多重峰，ArH+CH₂Ph)，8.10(1H，双峰，ArH)，8.37(1H，单峰，ArH)。 

4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸(8b) 

将4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸甲酯7b(4.06g，9.7mmol)和氢氧化钠(0.773g，19.4mmol)加入甲醇(60mL)和水(60mL)中。氩环境中回流反应7小时，然后冷却到室温。置冰浴中，加入1M盐酸，得黄色沉淀，过滤，沉淀用水洗涤，在四氢呋喃/正己烷中重结晶，得2.7g(69％)的黄色晶体8b。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH2.68(3H，单峰，COCH₃)，3.62(3H，单峰，OCH₃)，5.16(2H，单峰，CH₂Ph)，6.77(1H，单峰，ArH)，7.18(1H，单峰，ArH)，7.33-7.52(5H，多重峰，CH₂Ph)，3.90(3H，单峰，OCH₃)，5.22(2H，单峰，CH₂Ph)，6.58(1H，单峰，ArH)，6.90(1H，单峰，ArH)，7.34-7.50(6H，多重峰，ArH+Ch₂Ph)，8.17(1H，双峰，ArH)，8.50(1H，单峰，ArH)。 

8-乙酰基-3-苄氧基-2-甲氧基苯并[c]苯并吡喃-6-酮(9b) 

将4-乙酰基-4′-苄氧基-2′-甲氧基联苯-2-羧酸8b(1.0g，2.5mmol)悬浮于1，2-二氯乙烷(30mL)中。加入氯化亚砜(SOCl₂)(200mL，2.7mmol)，氩环境中将反应混合物回流2小时。冷却到室温(有沉淀形成)，加入三氯化铝(0.262g，0.002mol)，混合物变成红色，室温下搅拌反应17小时，然后用水(30mL)终止反应，用二氯甲烷(100mL)稀释。盐水(2×50mL)洗涤有机层，然后干燥、浓缩。用热的二氯甲烷溶解残留物，然后冷却。加入正己烷帮助产物沉淀。二次结晶得到0.3g(32％)的黄色固体9b。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：dH2.73(3H，单峰，COCH₃)，4.05(3H，单峰，OCH₃)，5.28(2H，单峰，CH₂Ph)，6.94(1H，单峰，ArH)，7.35-7.50(6H，单峰，ArH+ CH₂Ph)，8.07(1H，双峰，ArH)，8.42(1H，双峰，ArH)，8.92(1H，单峰，ArH)。 

8-乙酰基-3-羟基-2-甲氧基苯并[c]苯并吡喃-6-酮(10) 

在备有顶置式搅拌器和加热器的3公升三颈瓶中，将甲酸钠(2.18g，32mmol)和甲酸(4.2mL，106.8mmole)加入到9b(10.0g，26.71mmol)在干燥四氢呋喃和无水乙醇(1.5L)1：1混合溶液的混悬液中，在该混合溶液中加入100mg、10％的钯碳催化剂，氩环境中回流反应混合物7小时。此时，所有的起始物9b都溶解在溶液中。趁热过滤溶液，滤掉催化剂，通过旋转蒸发除掉溶剂。(如果使溶液逐渐冷却，产物将沉淀出来，可以通过用6升甲醇回流萃取固体，从催化剂中将其分离出)。所得固体(7.8g)用如下所述的硅胶柱层析进行纯化。 

在典型的方式中，将3.12g的粗品10与20g的硅胶混合，将混合物悬浮在200mL的甲醇中，通过旋转蒸发除掉溶剂。将样品置于硅胶柱(6cm×36cm，400g的硅胶)的顶部，并用1％的丙酮/二氯甲烷、10％的丙酮/二氯甲烷和100％的丙酮梯度洗脱。合并所有纯的部分，蒸发得2.4g(80％的产率)的所需中间体10。¹H(300MHz)(DMSO-d6)：d2.07(3H，单峰)，2.66(3H，单峰)，3.92(3H，单峰)，6.81(1H，单峰)，7.78(1H，单峰)，8.33(1H，双峰，J＝8.7Hz)，8.46(1H，双峰，J＝8.7Hz)和8.66(1H，双峰，J＝1.8Hz)。 

方案3 

SG00393将SG00392(1.0g，2.67mmol)和硼氢化钠(0.1g，2.67mmol)加入到THF(20mL)和无水乙醇(10mL)2：1的混合液中，搅拌1.5小时。将反应混合物置冰浴中冷却，加入0.5N HCl，直到颜色从黄色变得澄清。加入水(20mL)，用CH₂Cl₂萃取混合液，干燥，浓缩，通过硅胶快速柱层析纯化残留物，用二氯甲烷：丙酮(8/1)洗脱得0.71g的SG00393。 

SG00394将SG0093(0.1g，0.27mmol)加入到无水的二氯甲烷(6mL)中，冷却到-78℃，得非均匀的混合物。逐滴加入二异丁基氢化铝(DIBAL)(1M的正己烷溶液，0.66mL，0.66mmol)2小时以上。再额外加入 DIBAL(0.2mL)，总共2.5小时后通过加入甲醇(0.8mL)来终止反应。将反应混合物放置至室温，加入二氯甲烷(100mL)、冰和少量的丙酮，将混合物搅拌15分钟。将二氯甲烷层用饱和的碳酸氢钠盐水洗涤，干燥，浓缩。残留物重新溶解在丙酮(40mL)中，并预吸附到硅胶(1g)上。将丙酮蒸干后，残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用二氯甲烷：丙酮(6/1)洗脱，得69mg的SG0094。 

SG00395将粗的SG00394(1.18g，3.12mmol)、三乙胺(1.73mL，12.5mmol)、乙酸酐(1.18mL，12.5mmol)和无水二氯甲烷(50mL)在室温、氮气下搅拌。加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)的结晶后，将反应混合物搅拌15分钟，然后用二氯甲烷萃取。二氯甲烷层用饱和的碳酸氢钠盐水洗涤，干燥，浓缩，并通过硅胶快速柱层析纯化，用二氯甲烷：丙酮(10/1)洗脱，得0.89g的SG00395。 

SG00396将SG00395(0.83g，0.197mmol)加入到无水二氯甲烷(25mL)中，并于氮气下置甲醇/干冰浴中冷却。加入三乙基硅烷(Et₃SiH)(0.631mL，3.95mmol)，接着逐滴加入三氟化硼乙醚(BF₃Et₂O)(0.375mL，2.96mmol)，剧烈搅拌0.5小时。从冷却浴中移出反应混合物，45分钟后用饱和的碳酸氢钠(3mL)终止反应。用二氯甲烷萃取反应混合物，用饱和的碳酸氢钠盐溶液洗涤，干燥，浓缩，并通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得0.71g的SG00396。 

SG00397将SG00396(0.135g，0.334mmol)、甲酸(0.525mL，1.34mmol)、甲酸钠(27mg，0.4mmol)、10％的钯/碳(0.3mol％)、无水四氢呋喃(4mL)和无水乙醇(4mL)氮气下加热回流1.5小时。冷却反应物，将约一半的反应混合物蒸发。将硅胶残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得50mg的SG00397。 

SG00398在制备SG00397中剩余的一半反应混合物中另外加入10％的钯/碳，将反应物回流0.5小时。过滤掉钯/碳，用甲醇洗涤，并将硅胶加到滤液中。浓缩后，将硅胶残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得32mg的SG00398。

SG00399氮气下，将SG00395(0.44g，1.09mmol)和Amberlyst-15树脂(12-15珠)在甲醇(10mL)中搅拌2小时。滤掉Amberlyst，用甲醇洗涤并将滤液浓缩，残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，得0.4g的SG00399。 

SG00400将SG00397(95mg，0.304mmol)加入到甲醇(2mL)中。向混合液中加入碳酸钾(0.126g，0.912mmol)和水(0.1mL)，氮气下反应物搅拌3小时。加入1％的盐酸(0.1mL)和甲醇(10mL)以终止反应。加入硅胶，蒸发掉溶剂，残留物通过硅胶快速柱层析纯化，用乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱，得72mg的SG00400。 

SG00477将SG00292(0.18g，0.63mmol)加入到无水二氯甲烷(7mL)中，氮气下搅拌。加入三乙胺(Et₃N)(0.35mL，2.53mmol)、乙酸酐(0.24mL，2.53mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的一种晶体。搅拌35分钟后，加入二氯甲烷，混合物用饱和的碳酸氢钠盐溶液洗涤，干燥，浓缩，预吸附于硅胶上。上硅胶快速柱层析，用乙酸乙酯：正己烷(2/1)洗脱得80mg的SG00477。 

SG00490将SG00396(122mg，0.3mmol)、碳酸钾(125mg，0.9mmol)和水(0.13mL)加入到甲醇(3.3mL)中，氮气下搅拌1.5小时，然后用1％的硫酸终止反应。用二氯甲烷萃取反应物，并分成两等份。一份浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱得48mg的SG00490。剩下的一份转变成SG00491。 

SG00491将剩下的一份粗的SG00490用戴斯-马丁(Dess-Martin)试剂(37.3mg，0.9mmol)氧化超过1小时。反应物用二氯甲烷萃取，用饱和的碳酸氢钠盐溶液洗涤，干燥，浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱得40mg的SG00491。 

SG00492按照对SG00392的方法，以SG00491为起始物来制备。得产物44mg。 

SG00493将SG492(116mg，0.41mmol)、碳酸钾(112mg，0.82mmol)和碘化甲烷(1mL)加入到丙酮(10mL)中，回流2天。在反应混合物中加入 硅胶，浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，二氯甲烷：丙酮(9/1)洗脱，得100mg的SG00493。 

SG00494按照对SG00493的方法，用1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐来制备。得产物52mg。 

SG00495按照对SG00493的方法，用溴乙烷来制备。得产物20mg。 

SG00496在冰浴中，将SG00393(116mg，0.308mmol)加入到无水四氢呋喃(10mL)中。加入氢化钠(60％分散在油中，22mg，0.92mmol)，将反应物搅拌20分钟。逐滴加入碘化甲烷，将反应物搅拌0.5小时。撤走冰浴，将反应物搅拌过夜。另外加入碘化甲烷，将反应混合物回流5小时。用水终止反应，将过量的碘化甲烷蒸馏掉。加入二氯甲烷和水，分层后，将二氯甲烷层干燥，浓缩，用硅胶快速柱层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱，得SG00496。 

SG00510按照对SG00393的方法用SG00493来制备。得产物48mg。 

SG00511按照对SG00493的方法，用2-(溴甲基)氢溴酸盐来制备。得产物170mg。 

SG00512按照对SG00493的方法，用溴乙烷来制备。得产物63mg。 

SG00513按照对SG00493的方法，用异丙基溴来制备。得产物220mg。 

SG00514按照对SG00493的方法，用7-羟基香豆素和苄基溴来制备。得产物1.3g。 

SG00519按照对SG00493的方法，用东莨菪内酯和苄基溴来制备。得产物17mg。 

SG00520按照对SG00393的方法用SG00494来制备。得产物75mg。 

SG00521按照对SG00393的方法，用SG00512来制备。得产物118mg。 

SG00526将SG00511(50mg，0.133mmol)和硼氢化钠(5.0mg，0.133mmol)加入到乙醇和四氢呋喃1：1的混合液(共10mL)中，搅拌48 小时，然后回流2小时。冷却后，用1N盐酸将反应混合物调节酸性到pH2，然后用饱和的碳酸氢钠溶液调节到pH8，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用水、盐水洗涤混合的有机层，干燥，浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，用正己烷：氯仿(1/1)、氯仿、3％的甲醇/氯仿梯度洗脱，得40mg的SG00526。 

SG00527将SG292(100mg，0.35mmol)加入到氢化钠(15.4mg，0.4mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(10mL)混合液中，将反应混合物回流2小时。冷却至室温后，加入溶于DMF的4-甲氧基苄溴(4-methoxybenzyl bromide)(0.57mL，0.42mmol)，将反应混合物加热至70℃9小时。加入水(10mL)，反应混合物用氯仿(3×20mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩。残留物用正己烷：氯仿(1/2)、氯仿依次洗脱纯化，得85mg的SG00527。 

SG00528按照对SG00526的方法，用SG00530来制备。得产物20mg。 

SG00529按照对SG00526的方法，用SG00527来制备。得产物40mg。 

SG00530按照对SG00527的方法，用3-甲氧基苄溴来制备。得产物110mg。 

SG00531按照对SG00393的方法，用SG00495来制备。得产物36mg。 

SG00532按照对SG00393的方法，用SG00513来制备。得产物71mg。 

SG00533按照对SG00393的方法用SG00273来制备。得产物8mg。 

SG00541按照对SG00527的方法，用2-甲氧基苄氯来制备。得产物80mg。 

SG00542按照对SG00527的方法，用2-(氯甲基)乙酸苯酯来制备。得产物80mg。

SG00543在SG00392(0.19g，0.51mmol)的无水二氯甲烷(8mL)溶液中逐滴加入CH₃MgI(0.2mL，1.6mM)，于室温、氮气下搅拌。25分钟后，再另外加入CH₃MgI(0.2mL，1.6mM)。1小时后再另外加入CH₃MgI(0.2mL，1.6mM)。分出二氯甲烷，用微酸性的水洗涤，加入硅胶，将二氯甲烷蒸发以预吸附粗的反应物。用硅胶快速柱层析纯化二甲基醇化物(dimethylalcohol)，乙酸乙酯：正己烷(2/1)洗脱，并用于下一步。按照对SG00292的方法，对二甲基醇化物(58mg，0.15mmol)脱苄基得SG00543。得产物32mg。 

SG00544按照对SG00526的方法，用2-氯甲基乙酸苯酯来制备。得产物15mg。 

SG00545按照对SG00526的方法用SG00541来制备。得产物40mg。 

SG00546按照对SG00527的方法，用3，5-二甲氧基苄氯来制备。得产物80mg。 

SG00547按照对SG00526的方法，以SG00546为起始物来制备。得产物30mg。 

SG00548将制备SG00543时生成的二甲基醇化物(56mg，0.14mmol)加入到含催化剂量的Amberlyst-15和硫酸镁的无水二氯甲烷(3mL)中，搅拌6小时，然后放置冷柜中过夜。过滤后，用硅胶快速柱层析纯化粗的脱水产物，乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱，并用于下一步。将纯化的脱水产物溶解于无水乙醇(3mL)中，加入10％的钯-碳(30mg)无水乙醇混悬液(1.5mL)，连接至充有氢气的气囊。搅拌7小时后，将催化剂过滤掉，将粗的反应物预吸附到硅胶上，并用硅胶快速柱层析纯化乙酸乙酯：正己烷(1/2)洗脱得SG00548。 

SG00549在氢化钠(0.02g，0.55mmol)的无水DMF混悬液(5mL)中加入SG00391(0.1g，0.37mmol)。将最终的黄色不透明混合液回流1小时。加入苄基溴(0.05mL，0.41mmol)，混合液变成橙色/黄色的澄清溶液。将反应混合物冷却，加入水(15mL)中，用乙酸乙酯(3×12mL)萃取，有机层用盐水 洗涤，干燥，浓缩，快速硅胶层析纯化，15％的乙酸乙酯正己烷溶液洗脱得定量产率的SG00549。 

SG00550按照对SG00549的方法，用4-甲氧基苄基溴来制备。得产物100mg。 

SG00551按照对SG00549的方法，用2-甲氧基苄基溴来制备。得产物62mg。 

SG00552按照对SG00549的方法，用3-甲氧基苄基溴来制备。得产物70mg。 

SG00553按照对SG00526的方法，以SG00555为起始物来制备。得产物20mg。 

SG00554按照对SG00526的方法，以SG00556为起始物来制备。得产物24mg。 

SG00555按照对SG00527的方法，用3-氯甲基嘧啶盐酸盐来制备。得产物53mg。 

SG00556按照对SG00527的方法，用4-氯甲基嘧啶盐酸盐来制备。得产物45mg。 

SG00557按照对SG00527的方法，用4-(氯甲基)乙酸苯酯来制备。得产物5mg。 

SG00558按照对SG00527的方法，用4-(氯甲基)苯基来制备。得产物45mg。 

SG00559按照对SG00527的方法，用4-甲基苄基溴来制备。得产物58mg。 

SG00560按照对SG00549的方法，用4-溴苄基溴来制备。得产物60mg。 

SG00561按照对SG00549的方法，用3-溴苄基溴来制备。得产物100mg。

SG00562按照对SG00549的方法，用3-氯苄基溴来制备。得产物80mg。 

SG00568按照对SG00527的方法，用2-溴乙基苯来制备。得产物18mg。 

SG00569按照对SG00543的方法用PhMgBr来制备。得产物19mg。 

SG00570按照在合成SG00548中脱水产物的制备方法，使用在制备SG00549中产生的二醇副产物来制备。得产物21mg。 

SG00571按照对SG00549的方法，用4-氯苄基溴来制备。得产物90mg。 

SG00572按照对SG00549的方法，用4-氟苄基溴来制备。得产物110mg。 

SG00573按照对SG00549的方法，用4-(溴甲基)苯甲酸甲酯来制备。得产物40mg。 

SG00574按照对SG00549的方法，用4-溴甲基二苯甲酮来制备。得产物30mg。 

SG00575按照对SG00526的方法，以SG00559为起始物来制备。得产物25mg。 

SG00576按照对SG00527的方法，用3-甲基苄基溴来制备。得产物30mg。 

SG00577按照对SG00527的方法用3，4，5-三甲氧基苄基溴来制备。得产物45mg。 

SG00592按照对SG00527的方法，用4-甲氧基苄基氯和3-(4-溴苯基)-7-羟基香豆素来制备。得产物62mg。 

SG00593按照对SG00592的方法，用3，5-二甲氧基苄基溴来制备。得产物74mg。 

SG00594按照对SG00527的方法，用4-三氟甲基苄基氯来制备。得产物22mg。

SG00595按照对SG00527的方法，用4-氟苄基氯来制备。得产物43mg。 

SG00596按照对SG00549的方法，用3，5-二甲氧基苄基溴来制备。得产物30mg。 

SG00597按照对SG00527的方法，用乙基溴乙酸乙酯来制备。得产物15mg。 

SG00598按照对SG00527的方法，用SG00293(SG00292的酮还原成醇)来制备。得产物16mg。 

SG00599从制备SG00569的反应中也能分离出SG00599。得产物3.3mg。 

SG00609按照对SG00526的方法，以SG00577为起始物来制备。得产物32mg。 

SG00612将SG00292(0.1g，0.35mmol)搅拌加入到无水二氯甲烷(10mL)中，加入嘧啶(0.05mL)和苯甲酰氯(0.1mL)，反应物搅拌1小时。将反应物倒进5％的盐酸中，用二氯甲烷萃取，用饱和的碳酸氢钠洗涤，干燥，浓缩，用快速硅胶层析纯化，乙酸乙酯：正己烷(1/1)洗脱，得25mg的SG00612。 

SG00613按照对SG00612的方法，用4-甲氧基苄基氯来制备。得产物2.3mg。 

SG00614将SG00547(50mg，0.114mmol)溶解于无水二乙醚和二氯甲烷1：1的混合液(6mL)中。加入三溴化磷(124mg，0.46mmol)，室温下将反应物搅拌一个周末。加入饱和的碳酸氢钠，用二氯甲烷萃取反应物，盐水洗涤，干燥，浓缩，快速硅胶层析纯化，用正己烷、氯仿、含1％甲醇的氯仿依次洗脱，得20mg的SG00614。 

SG00615按照对SG00543的方法，以SG00546和EtMgBr为起始物来制备。得产物55mg。

SG00616按照对SG00543的方法以SG00546和CH₃MgI为起始物来制备。得产物74mg。 

SG00617按照对SG00527的方法，用SG00293(SG00292的酮还原成醇)和4-溴甲基二苯甲酮来制备。得产物13mg。 

SG00618将4-苄氧基苯甲酸(1g，4.4mmol)加入到无水二氯甲烷(11mL)中。加入催化剂量的DMF(5滴)以及乙二酰氯的氯仿溶液(2M，5.75mL)，将反应搅拌2小时。将溶剂蒸干，直接使用粗的4-苄氧基苯甲酰氯。根据对SG00612的方法，用4-苄基苯甲酰氯来制备SG00618。得产物49mg。 

SG00619按照对SG00527的方法，但是使用SG00293(SG00292的甲基酮还原成醇)和4-甲酸苄基溴(由二异丁基氢化铝(DIBAL)还原成4-氰苄基溴制得)来制备。得产物45mg。 

SG00620按照对SG00527的方法，用4-硝基苄基溴来制备。得产物20mg。 

实验数据 

下面的例子涉及对表1所示的化合物的代表性说明。前述的化合物被发现具有抗增殖、抗血管生成的特性和/或下面所述的其它的有意义的活性。 

实施例一：体外测定抗肿瘤(抗癌细胞增殖)、抗血管生成活性(抗内皮细胞增殖)，作为对结合雌激素受体α和β人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的增殖抑制。对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖抑制已被表明是抗血管生成活性的一种检测方法。HUVECs和所需的中间补体购自Cascade Biologies(俄勒冈州波特兰)，培养物的生长和维持按照制造商所描述的来做。增殖实验通过将HUVECs以1,000细胞/孔的密度接种于96孔板的完全培养基中来完成。24小时的平板期后，在用含10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)或定量范围的b-FGF或血管内皮生长因子(VEGF)的SG(“信号基因(Signal Gene)”，现在是“Palomid”)血管生成抑制剂的完全培养基处理前，将细胞在0.5％的血清中进行饥饿 培养24小时。48小时后，采用供应商(普洛麦格公司(Promega Corp.)，威斯康星州麦迪逊)所描述的量热法来测定细胞数。结果以不用血管生成抑制剂的最高b-FGF或VEGF表达的百分数来表示。通过令96孔板中的HUVECs生长到静息期并用血管生成抑制剂处理48小时来测定非增殖内皮细胞。最初，以5000细胞/孔接种，第二天将其合并。将板再培养24小时以确保用血管生成抑制剂处理之前生长停滞。如上所述检测细胞数。 

癌细胞株。对肿瘤细胞生长抑制的检测是抗癌活性的一种方法。使用两种人类癌细胞株来评价SG血管生成抑制剂对这些细胞增殖的影响。细胞株是MCF-7乳癌细胞和结肠癌细胞株HCT-116。所有的细胞株从美国模式培养物保藏所(American Type Tissue Culture)(美国弗吉尼亚州马纳萨斯)获得并按供应商所述的在其各自的基质中培养。完成增殖实验基本上如同对增殖内皮细胞的描述。 

雌激素受体(estrogen receptors，ER)结合实验。通过雌激素受体结合和转换信号的衍生物被认为不具有积极的活性、比如这种能增强癌生长以及诱发血管生成的活性。而很少或不结合雌激素受体(“ER”)的衍生物可能有所需的活性。可选择地，结合于雌激素受体但不转换信号的衍生物也可能被认为具有积极的活性。人类互补脱氧核糖核酸(cDNAs)编码的ERa和ERb用作体外表达受体蛋白的模板。该蛋白用普洛麦格(Promega)(体外转录翻译试剂盒(TNT kit))提供的兔网织红细胞裂解液生成，其在单一反应中偶联转录和翻译。每个反应中使用的模板数量主要由经验确定，并且以平行反应来监视表达，其中，[35S]蛋氨酸结合到受体，接着凝胶电泳并曝光到底片。结合反应在终体积为100mL的TEG缓冲液(10mMtris、pH7.5、1.5mM EDTA、10％丙三醇)中完成。在每次结合实验中使用5mL含0.5nM的[3H]雌二醇(E2)的体外转录-翻译受体。所有的化合物均从10-11M到10-6M进行例行检测，并用乙醇稀释。将反应物4℃下培养过夜，并通过加入200mL葡聚糖包被的活性炭来定量被结合的E2。4℃下旋转15分钟后，将管离心10分钟，在150mL上清液中加入5mL闪烁液(scintillation cocktail)，通过液体闪烁计数(liquid scintillationcounting)测定计数率(cpms)。每次试验中包括使用5mL非程序化的兔网织红细胞裂解液的空白对照。所有的值减去空白对照值，尤其是空白对照最高计数10-15％的值。通过仅用乙醇媒介来竞争被结合的E2来测定最大结合。该值被设定为100％(最大E2结合)。基于最大的E2结合来计算抑制的百分比值。将数据绘图并使用Prism软件计算Ki值。将试验至少重复操作三次。 

结果示于表II和图1。衍生物的活性通过对血管生成细胞因子刺激的内皮细胞的增殖抑制来显示其抗血管生成活性。大多数衍生物缺乏结合至雌激素受体α和β的能力，因此不认为是通过这些受体、血管生成的可能刺激物来发信号。 

衍生物的活性分成两组，具有双重抗肿瘤和抗血管生成活性的衍生物和主要具有抗血管生成活性的衍生物。见下表II。 

表II 

na：无活性；HUVECp：增殖的人脐静脉内皮细胞；HUVECq：静止的人脐静脉内皮细胞；hERa：人雌激素受体α；hERb，人雌激素受体β 

实施例2：衍生物的凋亡活性 

凋亡实验。进行凋亡实验以测定衍生物是否通过诱导程序性的细胞死亡来抑制细胞增殖。对于内皮细胞，显示出了典型的凋亡活性，其它的增殖细胞比如角质细胞也具有该活性。内皮细胞的凋亡是表示抗血管生成活性的另一种方法。通过定量积聚在细胞中的细胞质组蛋白相关的DNA片段的数量来监测细胞死亡。细胞凋亡检测试剂盒(Apoptosis assay kit)由含ELISA检测和单克隆抗组蛋白抗体的罗氏(cat#1544675)提供。简言之，HUVECs或角质细胞用胰蛋白酶消化，稀释，并以50000细胞/管的浓度等分到微量离心管中。37℃下用化合物处理6小时，接着进行细胞裂解，并使用厂商提供的检测试剂盒来分析。以405nm下的吸光度来量热定量凋亡。对照组包含阴性载体(ct1)对照(1％的乙醇)和4mg/mL喜树碱(CAM)乙醇溶液的阳性对照。见图2。角质细胞实验中，加入100μM的Palomid529、Paloma药物中可用的最主要的临床候选药物。结果示于图1(Palomid529是“SG00529”，见表I)。 

实施例3：体外测定的如抑制角质细胞增殖和诱导凋亡的抗角质细胞活性 

皮肤疾病至少部分是由角质细胞的异常存在和增殖引起的。抑制所述疾病中所述的角质细胞增殖和/或诱导角质细胞凋亡的能力的方法被认为会有助于异常皮肤的病理改善。下面表示支持本推测的例证性数据。 

角质细胞增殖。用下面的方案测定苯并[c]苯并吡喃-6-酮衍生物、Palomid529。低代次的人角质细胞(NHEK，新生库的，p3-5，Cambrex，CC2507)以完全培养基(KBM，Cambrex)中每孔1000细胞数接种于黑色的96孔板，培养过夜。然后弃去细胞培养基，换成含Palomid529或载体(1％DMSO)的新鲜生长培养基。在9个浓度(以100μM为起始浓度1：2稀释)下检测Palomid529。重复6次检测各实验组和对照组。持续培养3天，然后通过用荧光标记法(阿尔玛蓝(Alamar Blue)，Invitrogen公司，以1：20在生长培养基中稀释，培养5小时后读数，530ex/580em)测定代谢活跃的细胞来分析细胞增殖。见图4。

角质细胞凋亡。用下面的方案检测Palomid529。低代次的人角质细胞(NHEK，新生库的，p3-5，Cambrex，CC2507)以完全培养基(KBM，Cambrex)中每孔3000细胞数接种于黑色的96孔板，培养过夜(与细胞存活率检测一样的板，邻近的孔)。然后除去细胞培养基换成含Palomid529或载体(1％DMSO)的新鲜生长培养基。在7个浓度(100、30、10、1、0.3、0.1和0.03μM)下检测Palomid529。重复3次检测各实验组和对照组。培养过夜后，除去培养基，用罗氏细胞死亡ELISA(酶联免疫吸附实验)检测试剂盒(Cell Death ELISA plus kit)提供的裂解剂裂解细胞。然后将裂解的细胞转移到干净的离心管(eppendorf tubes)，于200×g离心，弃去细胞核和细胞碎片。 

然后将含细胞质部分(包括细胞质的核小体)的上清液转移到链霉亲和素包被的板中，用(生物素标记的)抗组蛋白和(过氧化物酶(POD)标记的)抗DNA抗体培养2小时。然后小心地洗孔。然后将2，2’-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)加入到孔中，完成颜色的变化后(约30分钟)，通过加入ABTS终止液终止反应。然后以490nm的波长为参照背景通过读取405nm下的光密度(OD)值测定凋亡。 

实施例4：使用人原代肝细胞的代谢稳定性实验 

细胞水平的实验用来测定细胞中化合物的稳定性或半衰期。这些特殊的肝细胞包含所有的能对药物起作用的I期和II期酶。在这些细胞中不产生代谢变化或几乎不产生代谢变化的化合物被认为是代谢稳定的，预期其在体内比那些通过肝细胞代谢的化合物具有较长的半衰期。结果示于图6。衍生物用人类原代肝细胞培养120或240分钟。左边表示剩余化合物的百分数(％)。能够被I期和/或II期酶代谢的对照组衍生物表示为衍生物292。

Claims (4)

1.包含选自由以下结构组成的群组的化合物的组合物：

。

2.包含选自权利要求1所述化合物的、预防或治疗人脐静脉内皮细胞增殖、乳癌细胞增殖、结肠癌细胞增殖和/或角质细胞增殖的组合物

其中，化合物SG00529、SG00547、SG00575、SG00545、SG00528、SG00550和SG00393预防或治疗人脐静脉内皮细胞增殖、乳癌细胞增殖和结肠癌细胞增殖；化合物SG00573预防或治疗人脐静脉内皮细胞增殖和结肠癌细胞增殖；化合物SG00551、SG00546、SG00559和SG00568预防或治疗人脐静脉内皮细胞增殖和乳癌细胞增殖；化合物SG00560预防或治疗人脐静脉内皮细胞增殖；以及化合物SG00529预防或治疗角质细胞增殖。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，化合物SG00529显示出凋亡活性。

4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于，所述的组合物制成以生物可降解的或生物不可降解的剂型来持续的释放。

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