CN101422133B - 一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于油菜育种技术领域，具体涉及一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法。其特征是，本发明针对因为现有甘蓝型油菜自交不亲和杂种选育方法的缺点而使甘蓝型油菜自交不亲和杂种还不能在生产上大面积推广的问题，提出一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法，包括甘蓝型油菜自交不亲和系的选育和繁殖，甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的选育和繁殖，甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育及其种子的生产方法。本发明为甘蓝型油菜自交不亲和杂种的选育提出了一种有效的方法，有利于甘蓝型油菜自交不亲和杂种的大面积推广，促进甘蓝型油菜杂种优势的利用。

Description

一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法

技术领域

本发明属于甘蓝型油菜育种技术领域，具体涉及一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法。

背景技术

国内外大量研究表明甘蓝型油菜品种间杂种具有很强的杂种优势。目前，利用甘蓝型油菜杂种优势的途径包括细胞质雄性不育(CMS)、细胞核雄性不育(GMS)、自交不亲和(SI)和化学杀雄等。甘蓝型油菜细胞核雄性不育(GMS)具有不育性稳定的优点，但其育性存在分离，在制种时，需要在甘蓝型油菜初花期拨掉不育系中50％的可育株，不仅会降低制种产量，增加制种成本，而且往往由于可育株难以彻底拔除，影响制种纯度，增加生产风险。化学杀雄途径存在污染环境和生产出的杂交种纯度不高等缺点。当前国际上公认的最有实用价值的甘蓝型油菜细胞质雄性不育系是Pol cms，但其育性易受环境条件的影响，保持系和恢复系的选育程序复杂，周期长，且存在细胞质负效应的潜在危险。与甘蓝型油菜杂种优势利用的其他途径相比，甘蓝型油菜自交不亲和杂种具有选育周期短、易于筛选到恢复系、无不良细胞质效应、制种产量高等优点。前人提出了自交不亲和单交杂种(自交不亲和系A×自交不亲和系B)、自交不亲和三系杂种((自交不亲和系×保持系)×恢复系)、自交不亲和三交杂种((自交不亲和系A×自交不亲和系B)×恢复系)和自交不亲和双交杂种((自交不亲和系A×自交不亲和系B)×(自交不亲和系C×自交不亲和系D))等利用甘蓝型油菜自交不亲和系配置杂交种的可能方法(傅廷栋主编，杂交油菜的育种与利用，P142-145，2000年8月，湖北科学技术出版社)。尽管这些方法已经被提出来很多年，因为甘蓝型油菜自交不亲和杂种选育方法的原因，目前育种家还没有选育出能在生产上大面积推广的甘蓝型油菜自交不亲和杂种。针对现有甘蓝型油菜自交不亲和杂种选育方法的缺点，本发明提出一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法，该方法有望选育出能在生产上大面积推广的甘蓝型油菜自交不亲和杂种，促进甘蓝型油菜杂种优势的利用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提出一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法，本发明包括甘蓝型油菜自交不亲和系的选育和繁殖，甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的选育和繁殖，甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育及其种子的生产方法，以加快甘蓝型油菜自交不亲和两系在育种中的应用。

本发明通过以下技术方案实现：

一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法，其步骤如下：

(1)甘蓝型油菜自交不亲和系的选育：以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300(见文献：马朝芝等，甘蓝型油菜双低自交不亲和系的选育，华中农业大学学报，1998，17(3)：211-213)为母本，与自交亲和的甘蓝型油菜品系华双3号(或称为华(油)双3号，二者为同一个品种，华中农业大学选育的油菜品种，该品种于1998年3月26日通过湖北省农作物品种审定委员会审定，审定证书编号：鄂种审证字第156号，为公开推广应用的品种)杂交，得到F₁种子；利用亲和指数法检测F₁植株的自交亲和性，对F₁不亲和的植株进行剥蕾自交，得到F₂；检测F₂植株的亲和性，选择不亲和植株进行人工剥蕾自交，得到F₃的种子；播种F₃的种子，选择F₃家系，对中选株系所有单株套袋自交，每个株系选择3-5个单株人工剥蕾自交，得到F₄的种子；播种单株亲和指数均小于1的F₃家系上收获的种子，选择F₄家系，对中选株系所有单株套袋自交，每个株系选择3-5个单株人工剥蕾自交，选亲和指数均小于1的F₄家系为所需要的甘蓝型油菜自交不亲和系；对自交不亲和性不稳定的F₃家系，重复上述选育步骤，直至选育出自交不亲和性稳定的甘蓝型油菜自交不亲和系；申请人通过上述步骤得到了甘蓝型油菜自交不亲和系07-P63-6育34；

(2)甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的选育：以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本，与自交亲和的油菜品系浙油18(购自浙江省农业科学院)、沪油17(购自上海市农业科学院)和恢5900(见文献：马朝芝等，RAPDs和RFLPs分析甘蓝型杂交油菜亲本的遗传多样性，作物学报，2003，29(5)：701-707)杂交，得到F1种子；种植该F1，考察其自交亲和性；同时种植所述自交亲和的油菜品系，考察其产量及产量相关性状，选择田间表现较好，与所述的甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300配制的F₁组合的亲和指数高于10的育种材料作为目标恢复系，即恢浙油18、恢沪油17和恢5900；

(3)甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育：以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300及其改良的自交不亲和系07-P63-6育34为母本，以自交不亲和恢复系恢浙油18、恢沪油17和灰5900为父本，配制两系杂交种；按随机区组排列设计将F₁组合和对照品种同时种植在田间，考察植株的农艺性状、产量、抗病性、生育期和品质性状，选择得到强优势的杂交组合，备用；

(4)甘蓝型油菜自交不亲和系的繁殖：采用早播、稀植和高肥措施培育甘蓝型油菜自交不亲和系壮苗，在隔离条件下于甘蓝型油菜的花期喷施3％NaCl溶液，配置蜜蜂辅助传粉，考察每一植株的亲和指数，收获亲和指数小于1的植株上的种子作为甘蓝型油菜自交不亲和系原原种，将其保存于-20C冰箱中备用；在下一个播种季节取少量原原种，在隔离条件下于甘蓝型油菜的开花期喷施3％NaCl溶液，配置蜜蜂辅助授粉繁殖自交不亲和系，得到甘蓝型油菜自交不亲和系原种；

(5)甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的繁殖方法：采用甘蓝型油菜细胞质雄性不育或细胞核雄性不育或化学杀雄途径的方法繁殖甘蓝型油菜自交不亲和恢复系(参见：傅廷栋主编，杂交油菜的育种与利用，湖北科学技术出版社，1995，145-150)；

(6)甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的种子生产方法：以步骤(1)得到的甘蓝型油菜自交不亲和系为母本，以步骤(2)得到的甘蓝型油菜自交不亲和恢复系为父本，使母本与父本按2∶1或3∶1或4∶1的行比种植在人工隔离条件下或天然隔离区中，于甘蓝型油菜的开花期，配置蜜蜂辅助授粉，在甘蓝型油菜终花期的末期，去除父本行的植株，于甘蓝型油菜的成熟期，收获所述母本行植株的种子，得到甘蓝型油菜自交不亲和性两系杂交种种子。

本发明的优点在于：

1.选育甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种，克服了甘蓝型油菜自交不亲和杂种不能在生产上大面积推广的技术难题。

2.与甘蓝型油菜三系杂交种选育方法比较，甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种只需要母本和父本两个亲本，并不涉及保持系和临保系，具有简化育种程序，缩短育种周期，提高育种效率的优点。

3.与甘蓝型油菜三系杂交种选育方法比较，母本(甘蓝型油菜自交不亲和系)的繁殖方法简单。

4.甘蓝型油菜自交不亲和恢复系(父本)的选育方法简单，因为绝大多数甘蓝型油菜常规品种(系)都能恢复甘蓝型油菜自交不亲和系的不亲和特性，因而容易筛选到优良的杂交组合。

5.甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种制种产量高，种子生产成本低。更详细的技术方案参见《具体实施方式》。

附图说明

图1：是本发明的技术路线图。

图2：是本发明实施例中甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300套袋自交及其杂种F1的结籽情况，图中a-d表示甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300套袋自交表现为几乎不结籽；e表示甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本，常规甘蓝型油菜品系浙油18为父本配置的F₁代杂种套袋自交表现为结籽正常。

图3：是甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300在隔离棚条件下的繁殖效果。

图4：是隔离棚条件下甘蓝型油菜自交不亲和两系杂种种子生产情况(甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本，浙油18为父本，母本与父本的行比为2∶1)。

图5：是天然隔离区条件下甘蓝型油菜自交不亲和两系杂种种子生产情况(甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本、中双10号(中国农业科学院油料作物研究所选育的优质甘蓝型油菜品种，已在生产上大面积推广)为父本，母本与父本的行比为2∶1)，图中显示的时期为甘蓝型油菜的苗期。

图6：是天然隔离区条件下甘蓝型油菜自交不亲和两系杂种种子生产情况(甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本、甘蓝型油菜品种中双10号为父本，其中母本与父本的行比为2∶1)，图中显示的时期为甘蓝型油菜角果成熟期。

具体实施方式

实施例1

1、甘蓝型油菜自交不亲和系的选育，步骤如下：

(1)以甘蓝型油菜自交不亲和系品系S-1300为母本，与自交亲和的甘蓝型油菜品系华双3号杂交，得到杂种一代(F₁)种子。

(2)播种步骤(1)的F₁种子，在甘蓝型油菜花期，对杂种F₁植株的主花序套袋自交，判断其亲和性，若F₁表现自交亲和，则对其套袋自交，若F₁表现自交不亲和，则对其剥蕾自交，得到F₂的种子；

(3)种植步骤(2)的F₂种子；甘蓝型油菜花期，对每个F₂植株进行套袋自交；选择自交不亲和的植株，进行人工剥蕾自交；分单株收获F₂植株剥蕾自交种子。

(4)播种步骤(3)的亲和指数小于1的F₂植株剥蕾自交种子，得到F₃家系；根据苗期长势、生育期等育种目标筛选F₃家系，并对筛选到的F₃家系所有单株进行套袋自交、选择自交不亲和的优良单株进行人工剥蕾自交，成熟期保留亲和指数均小于1的F₃家系上收获的剥蕾自交种子作为F₄家系的种子；

(5)播种F₄家系的种子，根据苗期长势、生育期等育种目标筛选F₄家系，并对筛选到的F₄家系所有单株套袋自交，选择自交不亲和的优良单株进行人工剥蕾自交；所有单株亲和指数均小于1的F₄家系即为新的甘蓝型油菜自交不亲和系；

(6)若没有所有单株亲和指数均小于1的F₄家系，则重复步骤(4)，直到选育出不亲和性稳定的新甘蓝型油菜自交不亲和系。通过上述步骤申请人已经获得甘蓝型油菜自交不亲和系07-P63-6育34。

2、甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的选育

(1)以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300作母本，与自交亲和的甘蓝型油菜品种浙油18、沪油17和恢5900杂交，得到杂种一代(F₁)种子；

(2)播种步骤1)的F₁种子，在甘蓝型油菜的开花期对所有F₁植株套袋自交，于成熟期鉴定F₁植株的亲和指数；

(3)在步骤(2)进行地同时种植自交亲和的甘蓝型油菜品系，考察其产量及其相关性状。

(4)综合步骤(2)和步骤(3)的结果，选择田间表现较好、与甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300配置的F₁组合亲和指数高于10的材料即为甘蓝型油菜自交不亲和恢复系。通过上述步骤申请人已经获得甘蓝型油菜自交不亲和恢复系恢浙油18、恢沪油17和恢5900。

3、甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育，步骤如下：

(1)以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300和07-P63-6育34为母本，分别与蓝型油菜自交不亲和恢复系恢浙油18、恢沪油17和恢5900杂交，得到F₁杂交组合。

(2)按随机区组试验设计将F₁组合和对照品种种植在试验田，2-3次重复、小区面积3-5行，行长1.9m，行宽25cm，株距17cm；在甘蓝型油菜的成熟期，每小区随机取10-15个单株、并收获小区剩余的植株，根据育种目标考察各组合株高、分枝部位、单株产量等农艺性状、抗病性、生育期和小区产量，分析收获种子的含油量、芥酸含量等品质性状；

(3)符合育种目标的F₁组合，即为强优势组合，供下一步的试验。通过上述步骤，本发明的优势杂交组合的小区产量比对照品种中油杂2号(中国农业科学院油料作物研究所选育并通过审定，全国大面积推广的优质油菜品种)增产8-12％。

4、甘蓝型油菜自交不亲和系的繁殖，采用如下步骤：

(1)在中国长江中下游的冬油菜地区于每年的8月下旬至9月上旬隔离条件下播种甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300，设株、行距分别为2米和1米，培育尽可能多分枝的大株型甘蓝型油菜自交不亲和系，于该自交不亲和系的蕾薹期用60目的尼龙纱帐套住每一个甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300单株，在尼龙纱帐内配置蜜蜂辅助授粉；对该自交不亲和系的主花序套袋，使其自交，鉴定该自交不亲和系植株的亲和性；

(2)在甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300的开花期，对隔离条件下的甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300植株每天上午喷施3％NaCl溶液1次，累计喷20-30次；

(3)在甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300的成熟期分单株收获所述自交不亲和系的种子，按亲和指数＝籽粒数/花朵数的公式计算亲和指数，淘汰亲和指数大于2的植株，分析每一单株种子的芥酸和硫苷含量，选芥酸含量小于1％、硫苷含量小于30umol/g植株的种子作为原原种，保存在-20℃冰箱中备用，得到甘蓝型油菜自交不亲和系原原种；

(4)在下一个繁殖季节继续在隔离条件下播种步骤(3)的原原种，并在所述的自交不亲和系的开花期每天上午喷施3％的NaCl溶液1次，共喷20-30次，配置蜜蜂辅助授粉，收获得到作为生产上应用的甘蓝型油菜自交不亲和系原种。

5、甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的繁殖：

采用甘蓝型油菜细胞质雄性不育、细胞核雄性不育、化学杀雄等杂种优势利用途径恢复系的繁殖方法来繁殖甘蓝型油菜自交不亲和恢复系(参见：傅廷栋主编，杂交油菜的育种与利用，湖北科学技术出版社，1995，145-150)。

6、甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的种子生产方法：

(1)以甘蓝型油菜自交不亲和系为母本、甘蓝型油菜自交不亲和恢复系为父本，母本与父本按2∶1或3∶1或4∶1的行比种植在人工隔离棚或天然隔离区，田间管理同当地大田生产；

(2)甘蓝型油菜花期，在人工隔离棚或天然隔离区配置蜜蜂辅助授粉；

(3)甘蓝型油菜终花后，去除父本行植株；

(4)甘蓝型油菜成熟期，收获母本行植株种子，得到甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种种子。

实施例2(试验比较)

具体步骤如下：

1、利用亲和指数法判断甘蓝型油菜的亲和性：

对所调查的甘蓝型油菜植株在初花期进行主枝套袋，当主枝上有3-5朵花开放时，把主枝上所开花打掉，并把花序中心顶上的小蕾打掉一些，然后把主枝和两个侧枝用硫酸纸袋套上，用曲别针别紧。每隔一天把纸袋向上抽提，并且抽提的过程中用手轻拍纸袋使花粉散落有利于花朵受粉，起到辅助授粉的作用。抽提纸袋时若有侧芽上的花或花蕾露出袋外要及时把它打掉，以免所收的种子不纯。等纸袋内基本所有花授粉结束后，取下纸袋，打掉花蕾和未授粉的花朵，初步根据角果发育情况调查亲和性。收获后脱粒、考种，按照公式亲和指数(Self-compatibility Index，SCI)＝籽粒数/花朵数来计算植株的亲和指数。

2、甘蓝型油菜自交不亲和系07-P63-6育34的选育

(1)1998年春天，在武汉华中农业大学油菜试验田，用自交不亲和系S-1300作母本，与中国半冬性油菜品系华双3号杂交，得到杂种一代(F1)种子。

(2)1999年秋天，播种F1种子(2行、10株/行)；2000年春天，油菜花期对F1植株进行套袋自交以判断F1的亲和性，并剥蕾自交；5月初收获F1植株，F1植株自交几乎不结籽。

(3)2000年秋天，在武汉华中农业大学油菜试验田种植F1植株的自交种子得F2植株(田间编号01-9-701，2行区，每行10株，共20株F2植株)；2001年春天于甘蓝型油菜开花期，选择8-10个单株进行自交和剥蕾自交；5月初油菜角果成熟时，分单株收获F2自交种子，考察其亲和指数，保留亲和指数小于1植株的自交种子。

(4)采用步骤3(3)～(6)的选育方法，于2006年得到不亲和性稳定、品质为双低的甘蓝型油菜自交不亲和系。

2006年秋天，在武汉华中农业大学试验田育床播种亲和指数较低、硫苷和芥酸含量低、剥蕾自交种子多的1个单株上收获的种子，试验号为育34；11月上旬移栽到隔离棚P63-6，田间号分别为07-P63-6育34，移栽5行约50株；2007年春天，用尼龙网纱将隔离棚罩住以隔离外来的花粉；所有单株均正常生长，自交结籽很少，亲和指数低于1，芥酸含量＜1％、硫苷含量＜30umol/g，符合双低标准。

3、甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的选育

(1)以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本，2005年春天于武汉华中农业大学试验田，2005年夏天于甘肃省和政县华中农业大学西北油菜试验基地分别与自交亲和的甘蓝型油菜材料浙油18、沪油17和恢5900杂交，得到3份F1种子；2005年秋天种植F₁组合在武汉华中农业大学油菜试验田(3行区，10株/行)，2006年春天调查各个组合的自交结籽情况，发现这3个F₁组合的亲和指数大于10，表明其父本都能恢复甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300的自交不亲和性。

(2)2005年秋天将这3份自交亲和的甘蓝型油菜材料按随机区组设计(2次重复，3行/小区，10株/行)种植在华中农业大学油菜试验田，田间管理同大田生产。

(3)观察到这3份甘蓝型油菜材料田间表现较好，且它们与甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300所配组合的亲和指数大于10，可作为甘蓝型油菜自交不亲和恢复系，即恢浙油18、恢沪油17和恢5900，供进一步进行组合比较试验。

4、甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育

(1)2007年春，分别以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300、07-P63-6育34为母本，与3个甘蓝型油菜自交不亲和恢复系(浙油18、沪油17、恢5900)杂交，得到F₁杂交组合。

(2)2007年秋天，将上述的F₁杂交组合和1个对照品种(中油杂2号)按随机区组试验设计(2次重复，3行/小区，10株/行)种植在华中农业大学油菜试验田，田间管理同大田生产。

(3)2008年5月，每小区随机取样10株，考察株高、分枝部位、单株产量等农艺性状，同时收获剩余植株以考察小区产量，最后进行品质分析。通过上述步骤，本发明的优势杂交组合的小区产量比对照品种中油杂2号(中国农业科学院油料作物研究所选育并通过审定，全国大面积推广的优质油菜品种)增产8-12％，说明甘蓝型油菜自交不亲和杂种具有很强的杂种优势。

5、甘蓝型油菜自交不亲和系的繁殖

(1)在中国长江中下游的冬油菜地区于每年的8月下旬至9月上旬隔离条件下播种甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300，设株、行距分别为2米和1米，培育尽可能多分枝的大株型甘蓝型油菜自交不亲和系，于该自交不亲和系的蕾薹期用60目的尼龙纱帐套住每一个甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300单株，在尼龙纱帐内配置蜜蜂辅助授粉；对该自交不亲和系的主花序套袋，使其自交，鉴定该自交不亲和系植株的亲和性；

(2)在甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300的开花期，对隔离条件下的甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300植株每天上午喷施3％NaCl溶液1次，累计喷20-30次；

(3)在甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300的成熟期分单株收获所述自交不亲和系的种子，按亲和指数＝籽粒数/花朵数的公式计算亲和指数，淘汰亲和指数大于2的植株，分析每一单株种子的芥酸和硫苷含量，选芥酸含量小于1％、硫苷含量小于30umol/g植株的种子作为原原种，保存在-20℃冰箱中备用，得到甘蓝型油菜自交不亲和系原原种；

(4)在下一个繁殖季节继续在隔离条件下播种步骤(3)的原原种，并在所述的自交不亲和系的开花期每天上午喷施3％的NaCl溶液1次，共喷20-30次，配置蜜蜂辅助授粉，收获得到作为生产上应用的甘蓝型油菜自交不亲和系原种。

6、甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的繁殖方法

与甘蓝型油菜细胞质雄性不育、甘蓝型油菜细胞核雄性不育和甘蓝型油菜化学杀雄等杂种优势利用途径的恢复系繁殖方法相同。2006年9月25日，将甘蓝型油菜自交不亲和恢复系浙油18播种于苗床，11月5日移栽至P63-8；2007年在甘蓝型油菜的初花期，摘除已开放花朵，用60目的尼龙网纱帐将隔离棚罩住以阻止外来的花粉进入，并配置蜜蜂辅助授粉；成熟时，混合收获隔离棚甘蓝型油菜自交不亲和恢复系浙油18的种子。

7、甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的种子生产方法

(1)2003年秋天，分别将甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300(母本)和甘蓝型油菜自交不亲和恢复系恢浙油18(父本)播种于苗床；2003年11月将母本(S-1300)和父本(浙油18)以2∶1的行比移栽至隔离棚P63-2，田间管理同大田生产。2004年在甘蓝型油菜的开花期，在隔离棚P63-2配置蜜蜂辅助授粉，终花期后，拔除父本行植株、保留母本行植株；在甘蓝型油菜的成熟期，收获母本行植株，得到甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种种子。

(2)2007年秋天，将甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300(母本)、甘蓝型油菜自交不亲和恢复系恢中双10号(父本)，以2∶1的行比种植在一天然隔离区，田间管理同大田生产。2008年在甘蓝型油菜的终花期后，拔除父本行植株、保留母本行植株；在甘蓝型油菜的成熟期，收获母本行植株，得到甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种种子。

Claims (1)

1.一种甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育方法，其步骤如下：

(1)甘蓝型油菜自交不亲和系的选育：

1)以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本，与自交亲和的甘蓝型油菜品系华双3号杂交，得到F₁种子；

2)利用亲和指数法检测F₁植株的自交亲和性，对F₁不亲和的植株进行剥蕾自交，得到F₂，检测F₂植株的亲和性，选择不亲和植株进行人工剥蕾自交，播种亲和指数小于1的F₂植株剥蕾自交种子，得到F₃家系；

3)根据苗期长势、生育期育种目标筛选F₃家系，并对筛选得到的F₃家系所有单株进行套袋自交，选择自交不亲和的3-5个单株人工剥蕾自交，于成熟期保留亲和指数均小于1的F₃家系上收获的剥蕾自交种子作为F₄家系的种子；

4)播种F₄家系的种子，根据苗期长势、生育期育种目标筛选F₄家系，并对筛选到的F₄家系所有单株套袋自交，选择自交不亲和的3-5个单株人工剥蕾自交，所有单株亲和指数均小于1的F₄家系为所需要的甘蓝型油菜自交不亲和系；

5)对自交不亲和性不稳定的F₃家系，重复上述选育步骤，直至选育出自交不亲和性稳定的甘蓝型油菜自交不亲和系；通过上述步骤得到的甘蓝型油菜自交不亲和系命名为07-P63-6育34；

(2)甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的选育：以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300为母本，与自交亲和的油菜品系浙油18、沪油17和恢5900杂交，得到F1种子；种植该F1，考察其自交亲和性；同时种植所述自交亲和的油菜品系，考察其产量及产量相关性状，选择田间表现较好，与所述的甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300配制的F₁组合的亲和指数高于10的育种材料作为目标恢复系，即恢浙油18、恢沪油17和恢5900；

(3)甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的选育：以甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300及其改良的自交不亲和系07-P63-6育34为母本，以自交不亲和恢复系恢浙油18、恢沪油17和恢5900为父本，配制两系杂交种；按随机区组排列设计将F₁组合和对照品种同时种植在田间，考察植株的农艺性状、产量、抗病性、生育期和品质性状，选择得到强优势的杂交组合，备用；

(4)甘蓝型油菜自交不亲和系的繁殖：采用早播、稀植和高肥措施培育甘蓝型油菜自交不亲和系壮苗，在隔离条件下于甘蓝型油菜的花期喷施3％NaCl溶液，配置蜜蜂辅助传粉，考察每一植株的亲和指数，淘汰亲和指数大于2的植株，选芥酸含量小于1％、硫苷含量小于30umol/g植株的种子作为甘蓝型油菜自交不亲和系原原种，将其保存在-20℃冰箱中备用；在下一个播种季节播种少量原原种，在隔离条件下于甘蓝型油菜的开花期喷施3％NaCl溶液，配置蜜蜂辅助授粉繁殖自交不亲和系，得到甘蓝型油菜自交不亲和系原种；

(5)甘蓝型油菜自交不亲和恢复系的繁殖方法：采用甘蓝型油菜细胞质雄性不育或细胞核雄性不育或化学杀雄的杂种优势利用途径的方法繁殖甘蓝型油菜自交不亲和恢复系；

(6)甘蓝型油菜自交不亲和两系杂交种的种子生产方法：以步骤(1)得到的甘蓝型油菜自交不亲和系为母本，以步骤(2)得到的甘蓝型油菜自交不亲和恢复系为父本，使母本与父本按2∶1或3∶1或4∶1的行比种植在人工隔离条件下或天然隔离区中，于甘蓝型油菜的开花期，配置蜜蜂辅助授粉，在甘蓝型油菜终花期的末期，去除父本行的植株，于甘蓝型油菜的成熟期，收获所述母本行植株的种子，得到甘蓝型油菜自交不亲和性两系杂交种种子。

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