CN101420975B - 抗支原体和prrsv的疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及致免疫剂量的猪肺炎支原体的免疫原性物质和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒在制备疫苗中的应用,和包含这种疫苗的疫苗试剂盒。
Description
本发明涉及致免疫剂量的猪肺炎支原体的免疫原性物质和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒在制备疫苗中的应用,和包含这种疫苗的疫苗试剂盒。
通过细菌性病原体猪肺炎支原体导致的猪支原体肺炎是一种普遍的猪慢性呼吸性疾病。小猪特别容易受到这种非致命性疾病的攻击。地方性动物肺炎是一种慢性疾病,会导致饲料转化降低和生长障碍。该疾病的传染性很强,通常通过直接接触呼吸道分泌物,例如咳嗽/打喷嚏后的受感染的微滴形式来传播。
该疾病最有危害的后果是它会造成呼吸系统各种类型的继发性感染。
据估计,例如在美国,99%的猪饲养场都受到感染。据估计,每年的损失为1亿到3亿美元。
另一种常见的猪的呼吸性疾病是常称作猪生殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性流产与呼吸综合征(PEARS)的疾病。现在,该疾病在世界上广泛地称作PRRS。其病理学并不限于呼吸性疾病,而且也会流产。该疾病常见或偶见的其他症状是:食欲不振、食欲缺乏、四肢,特别是耳朵的淡蓝色脱色。
现在已知该疾病的致病因子是小的包膜RNA病毒。在饲养的雌性动物中,PRRS导致妊娠母猪发热、抑郁和食欲降低。随后发生生殖方面的问题,在妊娠后期主要影响雌性动物。
在小猪中,PRRS主要影响呼吸系统。观测到异常的快速呼吸或“粗重的呼吸”。通常会加剧其他细菌和病毒病原体的问题的严重程度,同时发生死亡损失和治疗费用的增加。随后功能退化,猪还要数周才能结束该疾病。
除了常见的由猪肺炎支原体和PRRS病毒导致的疾病外,现在猪的经济上显著的呼吸性障碍越来越常见。该障碍的特征是生长缓慢、饲养效率降低、嗜睡、食欲缺乏、发烧、咳嗽和呼吸困难。现在,一般称其为猪呼吸道疾病综合症(PRDC)。从患PRDC的猪中分离出的两种最常见的病原体是猪肺炎支原体和PRRS病毒。显然,该疾病是由这两种病原体的某种联合作用引起的。
猪饲养业从目前使用的有效的抗猪肺炎支原体感染和PRRS病毒感染的疫苗中获益。而且由于尤其是小猪容易受到抗猪肺炎支原体感染和PRRS病毒感染的攻击,因此在这两种疾病的早期同时及时地接种是最有效的。
但是,这些年来越来越明显的是,这并不是一种选择。现在的既定事实是如果猪感染或接种了PRRS病毒的话,那么猪肺炎支原体疫苗的功效将会显著降低。如果在接种期间发生PRRS病毒的感染或接种或者甚至在用猪肺炎支原体接种后1-2周仍然可以看到这种效果。甚至PRRS病毒的无毒疫苗菌株都显示这种效果(Pig International30:9-12(2000),Thacker,E.L.等人.,J.Clin.Microbiol.37:620-627(1999),Thacker,E.L.等人,Vaccine18:1244-1252(2000))。
此外,已经表明,PRRS-感染会诱导猪肺炎支原体感染的病状非常迅速的发作。
此外,猪肺炎支原体感染一般会增加病毒感染例如PRRS(Thacker,EX.等人.,Vaccine18:1244-1252(2000))和猪流行性感冒(Thacker,EX.等人.,J.Cl.Microbiol.39:2525-2530(2001))的持续时间及其严重程度。这是在猪一出生后但无论如何要在猪肺炎支原体发作前接种抗病毒感染例如PRRS和猪流行性感冒的另一个原因。
因此,基于上述理由,有力的选择是首先用PRRS-病毒疫苗接种,而不是使用PRRS-病毒和猪肺炎支原体接种。但是,结果是,人们必须等到活的弱PRRS疫苗菌株从体内消失。这意味着,在可以安全施用首次(致敏)猪肺炎支原体疫苗前,人们必须等待至少2到3周乃至优选更长时间,在用猪肺炎支原体疫苗给予第二次接种(加强免疫接种)前,要等待甚至4周乃至优选更长时间。另一个结果是,在PRRS-接种后至少4周时间里,将仍然无法保护小猪免于猪肺炎支原体的感染。
但是,现在仍然没有方法来防止出现这些不希望有的结果。
本发明的一个目的是提供上述问题的解决方法。
现在,令人惊奇地发现,如果首先用猪肺炎支原体给小猪首次接种,接着用猪肺炎支原体和活的减毒PRRS病毒进行第二次接种,它们会迅速产生对PRRS病毒感染和猪肺炎支原体感染的良好保护作用,甚至更出人意料的是,没有明显的不良反应。
在出生后非常短的时间内,这种新的途径具有超过现有的优选方法的巨大优点,小猪可以受到抗猪肺炎支原体感染和PRRS感染的完全保护。
显然,如果以联合的方式给已经首次接触猪肺炎支原体疫苗的小猪施用致免疫剂量的猪肺炎支原体的免疫原性物质和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒,就能避开已知的问题。
猪肺炎支原体的免疫原性物质可以是例如,菌苗,或者它可以是免疫原性亚单位。同样,它可以是能够表达编码猪肺炎支原体的免疫原性亚单位的遗传物质的活的重组载体病毒或非-猪肺炎支原体细菌载体。
本领域已知,致免疫剂量是指遗传物质(可能与佐剂联合)足以在靶动物中引起免疫应答的量。
因此,本发明的第一个实施方案涉及致免疫剂量的猪肺炎支原体的免疫原性物质和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒在制备用于给已接触猪肺炎支原体的猪联合施用猪肺炎支原体疫苗和PRRSV疫苗的疫苗中的应用。
从经济的观点出发,猪肺炎支原体菌苗是有效的,易于生产,安全并且廉价。因此,大多数商业上使用的猪肺炎支原体疫苗都是基于菌苗的。
因此,该实施方案的优选的形式是致免疫剂量的猪肺炎支原体菌苗和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒在制备用于给已接触猪肺炎支原体的猪联合施用猪肺炎支原体疫苗和PRRSV疫苗的疫苗中的应用。
在本领域中,词语“菌苗”是指灭活的细菌。所述灭活可以是通过例如化学处理诸如福尔马林处理、热处理、在弗氏细胞压碎器中处理和辐射来完成的。
活的减毒PRRS病毒是对于靶动物非致病性的或者与野生型病毒相比毒力显著降低的PRRS病毒。
尽管优选,但是用于联合施用的疫苗中的猪肺炎支原体的免疫原性物质和活的减毒PRRS病毒并不是必须要以混合形式即混合在一起施用。其理由是,根据例如组分的配制、猪的圈养和农场管理,每种活性组分的给药途径可以不同。猪肺炎支原体的免疫原性物质(也称作猪肺炎支原体组分)可以是例如口服、鼻内或通过注射给予的。活的减毒PRRS病毒(也称作PRRSV组分),可以例如出于功效的原因而真皮内施用,而非必须要肌内施用。因此,根据例如农场的情况和疫苗制造商的说明,疫苗的猪肺炎支原体和PRRSV组分的给药途径是不同的。应当清楚的是,在这些情况下,施用猪肺炎支原体和PRRSV组分必须及时地在稍微不同的时刻施用。但是,如果用于联合施用的疫苗中的猪肺炎支原体和PRRSV组分是在相对较短的时间间隔例如小于24小时,优选小于8小时内施用的,那么也可以实现本发明的优点。出于实用的原因,实际上间隔优选甚至更小;其中优选小于4小时,小于2小时,小于1小时,小于30分钟,小于15分钟,小于10分钟,小于5分钟或小于2分钟。
因此,联合施用应当被认为是在其中优选小于24小时,小于8小时,小于4小时,小于2小时,小于1小时,小于30分钟,小于15分钟,小于10分钟,小于5分钟或小于2分钟的相对较小的时间间隔内施用猪肺炎支原体和PRRSV组分。
本发明的一个优选的实施方案涉及致免疫剂量的猪肺炎支原体的免疫原性物质和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒在制备用于给已接触猪肺炎支原体的猪联合施用猪肺炎支原体疫苗和PRRSV疫苗的疫苗中的应用,其中用于联合施用的疫苗包含混合形式的PRRSV组分和猪肺炎支原体组分。
在欧洲和北美PRRS病毒菌株之间已经发现了抗原和基因型组成方面的显著差异。欧洲PRRS病毒菌株的特征和它们与北美菌株之间有何差异是本领域公知的。欧洲和北美PRRS菌株之间的差异已经在Meng,X.-J.等人,Arch.Virol.140:745-755(1995),Suarez,P.等人,Virus Research42:159-165(1996)和Allende,R.等人,J.Gen Virol.80:307-315(1999)中进行了描述。过去几年,人们清楚地认识到欧洲和北美PRRS病毒菌株之间的交叉保护是不够的或者甚至并不存在。
因此,本发明的该实施方案的另一个优选形式涉及致免疫剂量的猪肺炎支原体的免疫原性物质和致免疫剂量的活的减毒PRRS病毒在制备用于给已接触猪肺炎支原体的猪联合施用猪肺炎支原体疫苗和PRRSV疫苗的疫苗中的应用,其中活的减毒PRRS病毒是欧洲菌株。这对于控制和降低猪呼吸疾病综合症的欧洲病例的数量是特别有利的。
在该实施方案的另一个优选的形式中,在制备用于联合施用猪肺炎支原体疫苗和PRRSV疫苗的疫苗时还加入一种或多种源自猪的其他病原性生物或病毒的抗原或编码所述抗原的遗传信息。
这些生物和病毒优选地选自伪狂犬病病毒、猪流感病毒、猪细小病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、大肠杆菌、猪红斑丹毒丝菌(Erysipelo rhusiopathiae)、细胞内劳森菌、支气管败血性博得特菌、猪霍乱沙门菌、副猪嗜血杆菌、出血败血性巴斯德菌、猪链球菌、猪痢疾短螺旋体和胸膜肺炎放线杆菌。
不言而喻地,原则上该组的细菌或病毒也可以加入到用于致敏的猪肺炎支原体疫苗中,条件是它们不会不利地干扰根据本发明的该应用的有益效果。
本发明的另一个实施方案涉及一种疫苗试剂盒,包含某种形式的用于联合施用的疫苗,其中猪肺炎支原体组分存在于一个容器中,优选在混悬液中,而PRRSV组分存在于第二容器中,优选为冷冻干燥形式。该试剂盒的优点如下:猪肺炎支原体组分可以通过注射器的针头从第一容器中吸出,然后加入到第二容器中以溶解冷冻干燥的PRRSV组分。然后将该混合物准备好用于联合施用。
可替代地,该疫苗试剂盒包含联合施用的疫苗,其中PRRSV组分和猪肺炎支原体组分在一个容器中。这种容器可以是例如疫苗小瓶。如果所述组分在同一容器中,则它们并不需要已经混合好。例如,在施用前可以通过屏障例如膜隔开它们。在施用时,用于施用的注射器的针头可以将膜穿孔,然后各组合将混合在一起。随后它们可以作为混合物用于填充注射器并作为混合物施用。该组合物也可以以同一个瓶中的分开的冷冻干燥饼或冷冻干燥体存在。然后在施用前加入稀释剂诱导各组分的混合。
因此,该实施方案的另一种形式涉及一种疫苗试剂盒,包含根据本发明用于联合施用猪肺炎支原体的免疫原性物质和活的减毒PRRS病毒的疫苗,其中猪肺炎支原体组分和PRRSV组分存在于一个容器中。
已接触猪肺炎支原体的猪是在联合施用猪肺炎支原体和PRRSV疫苗前已经用猪肺炎支原体疫苗接种的猪。猪的致敏接种的结果是,建立了抗猪肺炎支原体的初次免疫应答。这种免疫应答的发生需要一段时间。但是,对于用于联合施用猪肺炎支原体和PRRS病毒的疫苗发挥它的功效来说,需要存在适当的抗猪肺炎支原体的活化反应。因此,优选地,用于联合施用猪肺炎支原体和PRRS病毒的疫苗是在猪致敏7或更多天后施用的。
联合施用猪肺炎支原体和PRRS疫苗优选是在致敏后35天内,更优选在致敏后14-35天内进行的:只要不施用用于联合施用猪肺炎支原体(加强免疫致敏接种)和PRRS疫苗的疫苗,猪就不会得到抗猪肺炎支原体感染和PRRS病毒感染的完全保护。因此优选地,在猪肺炎支原体致敏后7到35天,更优选14到35天,甚至更优选在猪肺炎支原体致敏后21到28天完成用于联合施用的疫苗的施用。
不言而喻地,对于待接种的猪的致敏,大多数猪肺炎支原体疫苗都是适合的。
在例如PCT申请WO91/18627、美国专利US5,338,543和欧洲专利EP550.477中已经披露了支原体疫苗。
这类疫苗,主要是菌苗也容易从各个制造商处购得。商业上可得到的猪肺炎支原体疫苗的例子是M Hyo、M(Intervet.Int.B.V.)、BPM、BPM)(Intervet Int.B.V.)、(Pfizer)、(Pfizer)、M.hyo(Fort Dodge)、(Merial)和(Schering-Plough)。
对于在制造用于根据本发明联合施用的疫苗中使用的猪肺炎支原体组分,情况也是一样。可以容易地使用在例如PCT申请WO91/18627、美国专利US5,338,543和欧洲专利EP550.477中披露的支原体疫苗。原则上,商业上可得到的支原体疫苗例如上述的那些也是适合的。
至于在制造用于根据本发明联合施用的疫苗中使用的PRRSV组分,可以容易地使用如欧洲专利EP676.467、EP835.930、美国专利US5,510,258和US5,587,164中披露的活的弱PRRS疫苗。原则上,也可以有效地使用商业上可得到的PRRS疫苗,例如购自InterVet Int.B.V的那些,例如PRRS。因此,技术人员不会在选择构成制备根据本发明联合施用的疫苗必需的基本组分猪肺炎支原体组分和活的弱PRRS组分时遇到任何问题,也不会在选择用于致敏的猪肺炎支原体疫苗时遇到任何问题。
技术人员知道如何施用疫苗。在所使用的是商业疫苗的组分时,猪肺炎支原体疫苗和活的弱PRRS疫苗的剂量和给药途径显然要遵循制造商给出的说明;当不是商业疫苗时,则可以根据例如在上述任何专利中所披露的方法。
仅仅是举例:如果技术人员选择M Hyo作为猪肺炎支原体疫苗并选择PRRS作为PRRS疫苗时,优选在5-9天大时给予2ml的剂量进行致敏,优选在23-30天大时完成根据本发明的用于联合施用猪肺炎支原体疫苗和活的弱PRRS疫苗的疫苗的施用。
因此,本发明的另一个实施方案涉及一种给猪接种以抗PRRS病毒和猪肺炎支原体感染的方法,其中该方法包括用猪肺炎支原体疫苗首次(致敏)接种,然后用猪肺炎支原体的免疫原性物质和活的减毒PRRS病毒联合接种的步骤。因此联合接种的功能是猪肺炎支原体的免疫原性物质进行第二次(加强免疫)接种。
通过(但不限于)下文给出的实施例来说明用于给已接触猪肺炎支原体疫苗的猪联合施用猪肺炎支原体疫苗和PRRSV的疫苗的有益效果。
实施例
实施例1
以2ml的肌内剂量给予猪肺炎支原体疫苗,在稀释剂(DiluvacForte,Intervet Int.B.V.,Wim de Korverstraat35,Boxmeer,theNetherlands)(第5组)中或在猪肺炎支原体疫苗(第1和4组)中溶解后,也以2ml的肌内剂量给予冻干的PRRS疫苗菌株。在实验期间,很多小猪由于与接种或攻击感染无关的原因而死亡。
进行猪肺炎支原体的攻击,包括在连续两天给小猪的气管内植入108.5CCU的低传代猪肺炎支原体分离物的培养物。攻击3周后,给猪验尸,根据Goodwin&Whittlestone(British Vet.Journ.129:456-464(1973))给愈合的肺损害评分。与对照组相比,第1和2组的猪肺炎支原体特异性肺损害的降低是统计学显著的。第1和2组的差异是统计学不显著的(p=0.83,Mann-Whitney U-检验)。
组 | n | 在1周大时第一次接种 | 在4周大时第二次接种 | 猪肺炎支原体损害得分* |
1 | 12 | M.hyo | M.hyo+PRRS | 3.7a |
2 | 11 | M.hyo | M.hyo | 5.9a |
3 | 11 | - | - | 13.4a |
*:最大损害得分是55;上标不同的组具有显著性差异(p<0.05,Mann-Whitney U-检验)
进行PRRSV攻击,包括在每个鼻孔中鼻内吸入野生型PRRSV菌株的105TCID50的1ml PBS。在攻击后第3,5,7,10,14和21天,从所有的小猪中取血样,用于病毒对于猪肺泡巨噬细胞(PAM)的滴定。简言之,一式四份地,将血浆样品的10倍系列稀释液接种到96孔板中单层的PAM中,然后在37℃下培养7天。每天监测细胞的CPE,根据Reed和Muench的方法,将病毒滴度表示为TCID50/ml。在所有的取样日,已接种的第4和5组中攻击病毒的滴度显著降低。第4和5组中的保护水平是相同的。
实施例2
在商业购买的小猪中测试同时使用猪肺炎支原体菌苗(PorcilisM Hyo)和修饰的活PRRS疫苗(PRRS)抗猪肺炎支原体的功效:
以2ml的肌内剂量给予猪肺炎支原体疫苗,在稀释剂(第2组)中或在猪肺炎支原体疫苗(第1组)中溶解后,也以2ml的肌内剂量给予冻干的PRRS疫苗菌株。在实验期间,第2组的一只小猪由于一般健康差而在接种前死亡,第2,3和4组的几只小猪由于严重的胸膜炎而不得不从损害评分中排除。
进行猪肺炎支原体的攻击,包括在连续两天给小猪的气管内植入108.5CCU的低传代猪肺炎支原体分离物的培养物。攻击3周后,给猪验尸,根据Goodwin&Whittlestone(British Vet.Journ.129:456-464(1973))给愈合的肺损害评分。第1和3组的猪肺炎支原体特异性肺损害的降低是统计学显著的。第1和3组的差异是统计学不显著的(p=0.13,Mann-Whitney U-检验)。
组 | n | 在1周大时第一次接种 | 在4周大时第二次接种 | 猪肺炎支原体损害得分* |
1 | 12 | M.hyo | M.hyo+PRRS | 1.3a |
2 | 9 | - | PRRS | 11.7b |
3 | 11 | M.hyo | M.hyo | 2.4a |
4 | 9 | - | - | 6.6b |
*:最大损害得分是55;上标不同的组具有显著性差异(p<0.05,Mann-Whitney U-检验)
Claims (3)
1.致免疫剂量的猪肺炎支原体菌苗和致免疫剂量的活的减毒PRR8病毒在制备用于给已接触猪肺炎支原体菌苗的猪联合施用猪肺炎支原体菌苗和PRRSV疫苗的疫苗中的应用。
2.根据权利要求1的应用,特征在于活的减毒PRRS病毒是欧洲株。
3.根据权利要求1或2的应用,特征在于该用于联合施用的疫苗包含混合形式的活的减毒PRRS病毒和猪肺炎支原体菌苗。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120627 Termination date: 20210406 |