JP2023506304A - 経口呼吸器ワクチン - Google Patents
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Abstract
本発明は、新たな経口生イヌパラインフルエンザウィルスワクチン及び関連する多価ワクチンに関するものである。ワクチン単独で又は多価ワクチン中１以上の防御免疫原と組み合わせて当該ワクチンを用いる方法も提供される。
Description
関連出願の相互参照
本願は、２０１９年１２月１８日出願の暫定出願米国６２／９４９，９２８号の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）下の優先権を主張するものであり、当該出願の内容は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
本願は、２０１９年１２月１８日出願の暫定出願米国６２／９４９，９２８号の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）下の優先権を主張するものであり、当該出願の内容は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、新たな経口生イヌパラインフルエンザウィルスワクチン及び関連する多価ワクチンに関する。ワクチンの製造方法、及び、単独若しくは多価ワクチンでの１以上の他の防御抗原と組み合わせたワクチンの使用方法、も提供される。
イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウィルスは、上気道疾患や感染性気管支炎（ケンネル咳とも呼ばれる）の罹患に寄与する呼吸器疾患を引き起こす伝染力の強いウィルスである。呼吸器徴候はイヌインフルエンザと似ている可能性があるが、それらは無関係のウィルスであり、防御のために異なるワクチンを必要とする。ＣＰＩウィルスは、感染後最長で２週間、感染動物の気道から排泄され、通常、空気感染により伝染する。ＣＰＩウィルスは、多数のイヌが一緒に飼育されているイヌ舎や防御施設などで急速に広がる。臨床徴候には、乾性または湿性の咳、微熱、鼻汁、元気のなさ及び食欲不振を含む。
現在、イヌパラインフルエンザウィルス、イヌジステンパーウィルス、イヌアデノウィルス及びイヌパルボウィルスによって引き起こされる疾患の予防を目的として、健常なイヌにワクチン接種するための改変生ウィルスワクチンであるＮｏｂｉｖａｃ（登録商標）イヌ１－ＤＡＰＰｖを含む、改変生ＣＰＩウィルスを含む皮下又は筋肉投与することができる市販のイヌ用ワクチンがいくつかある。さらに、イヌパラインフルエンザウィルス、イヌアデノウィルス２型、及び気管支敗血症菌（ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）（Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ））を含む気管気管支炎の原因で示唆されている病原体に対する三重の防御を提供するＮｏｂｉｖａｃ（登録商標）Ｉｎｔｒａ－Ｔｒａｃ３のような市販の経鼻ワクチンがある。
しかし、経口ワクチン接種には、使い勝手の良さやワクチン接種時及び接種後の動物の不快感の少なさなどの利点があるにもかかわらず、現在まで、ＣＰＩウィルスを含む市販の経口ワクチンはなかった。したがって、上気道疾患及び／又は感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する、イヌパラインフルエンザウィルス用の経口ワクチンが長年にわたって必要とされている。
本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本出願の「先行技術」として利用可能であることを認めるものとして解釈されるべきではない。
本発明は、ワクチン接種を受ける動物対象者において防御免疫を誘発するのに役立つ（及び／又はそれに対する有効な防御を提供する）免疫学的に有効量の改変生イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウィルスを含むイヌのような動物対象者への経口投与用のワクチン組成物を提供する。ある種の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．７ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．９ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．１ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、８．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、８．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、８．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。さらに他の実施形態において、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、８．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である。
前記経口ワクチンの関連する実施形態において、前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである。前記経口ワクチンの他の実施形態において、前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである。さらに他の実施形態において、前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである。さらに他の実施形態において、前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである。さらに他の実施形態において、前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである。さらに他の実施形態において、前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～８．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである。
改変生ＣＰＩウィルスを含むワクチンの特定の実施形態において、ＣＰＩウィルスは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有する改変生ＣＰＩウィルスの固有／識別特性を共有する。より特定の実施形態では、ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有する。
本発明はさらに、改変生イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウィルスを含み、さらに無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む、ワクチン接種を受ける動物対象者における防御免疫の誘発を助ける（及び／又は誘発する）（及び／又は有効な防御を提供する）、動物対象者への経口投与用ワクチンを提供する。特定の実施形態において、前記量の改変生ＣＰＩウィルスのうちの一つを含むことに加えて、当該ワクチンは、さらに、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬ～１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬに等しい力価の無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む。他の実施形態において、当該ワクチンは、１×１０８ｃｆｕ／ｍＬ～１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬに等しい力価の無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンは、５×１０８ｃｆｕ／ｍＬ～１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬに等しい力価の無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンは、１×１０９ｃｆｕ／ｍＬ～５×１０１１ｃｆｕ／ｍＬの力価の無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む。
本発明の経口ワクチンは、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むか又はそれを含まず、１以上の別の免疫原とともに、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むことができる。ある種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌインフルエンザウィルスを含む。他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌパルボウィルスを含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌジステンパーウィルスを含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌアデノウィルス２型を含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生呼吸器イヌコロナウィルスを含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌ肺炎ウィルスを含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、イヌインフルエンザウィルス、イヌパルボウィルス、イヌジステンパーウィルス、イヌアデノウィルス（１型又は２型）、呼吸器イヌコロナウィルス、イヌ肺炎ウィルス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）及び／又はマイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）からの１以上のタンパク質免疫原をコードするウィルスベクターを含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）を含む。さらに他の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）を含む。さらに、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）とともに改変生イヌパラインフルエンザウィルス又は改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むワクチンは、これらの他の免疫原の２以上をさらに含む。本発明のワクチンは、アジュバント化してもアジュバント化しなくても良い。
本発明はさらに、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むワクチンをイヌに経口投与することを含む、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からイヌを防御すること（及び／又はイヌに有効な防御を提供すること）を支援する方法を提供する。この方法のある種の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法の他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．７ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩの力価は、７．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩの力価は、８．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、８．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩの力価は、８．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、８．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である。
この方法の関連する実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。この方法の他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。この方法のさらなる他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である。改変生ＣＰＩウィルスを含むワクチンを経口投与する方法の特定の実施形態において、ＣＰＩウィルスは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有する改変生ＣＰＩウィルスの固有／識別特性を共有する。本発明の方法のより特定の実施形態では、改変生ＣＰＩウィルスは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有する。
本発明の１態様において、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からイヌを防御すること（及び／又はイヌに有効な防御を提供すること）を支援する前記方法は、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）をさらに含む改変生ＣＰＩウィルスを含むワクチン（すなわち、改変生ＣＰＩウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の両方を含むワクチン）を、動物対象者、例えばイヌに経口投与することを含む。
この方法のある種の実施形態において、前記量の改変生ＣＰＩウィルスの一つを含むこと以外に、当該ワクチンは、１×１０７ｃｆｕ／用量以上の力価の無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）も含む。この方法の特定の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０７ｃｆｕ／用量以上である。この方法のより特定の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０８ｃｆｕ／用量以上である。この方法のさらにより特定の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量以上である。特定の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０９ｃｆｕ／用量以上である。この方法の関連する実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量～１×１０１２ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０９ｃｆｕ／用量～１×１０１２ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０９ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０９ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。
当該方法のより特定の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である。当該方法のさらにより特定の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である。当該方法のさらにより特定の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量以上である。
当該方法のある種の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である。当該方法の他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０９ｃｆｕ／用量以上である。さらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である。さらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、１×１０９ｃｆｕ／用量以上である。
この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０９ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。
この方法の他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。さらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０９ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。この方法のさらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０９ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。さらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。さらに他の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスの力価は、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量であり、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は、５×１０９ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である。
改変生ＣＰＩウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むワクチンの経口投与方法の特定の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）ウィルスは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２を有する無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の固有／識別特性を共有する。当該方法のより特定の実施形態において、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２を有する。さらにより特定の実施形態において、前記改変生ＣＰＩウィルスは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有し、前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２を有する。
他の実施形態において、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び１以上の追加の免疫原を含むワクチンを経口投与することを含む。当該方法のある種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌインフルエンザウィルスを含む。当該方法の他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌパルボウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌジステンパーウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌアデノウィルス２型を含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生呼吸器イヌコロナウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌ肺炎ウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、イヌインフルエンザウィルス、イヌパルボウィルス、イヌジステンパーウィルス、イヌアデノウィルス（１型又は２型）、呼吸器イヌコロナウィルス、イヌ肺炎ウィルス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ） 及び／又はマイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）からの１以上のタンパク質免疫原をコードする１以上のウィルスベクターを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）を含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）を含む。さらに、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御における支援方法（及び／又はイヌに対する有効な防御を提供する方法）は、これら免疫原の２以上と組み合わせて改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むワクチンを経口投与することを含むことができる。
関連する実施形態において、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、改変生イヌパラインフルエンザウィルス、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、及び１以上の追加の弱毒生免疫原を含むワクチンをイヌに経口投与することを含む。当該方法のある種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌインフルエンザウィルスを含む。当該方法の他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌパルボウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌジステンパーウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌアデノウィルス２型を含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生呼吸器イヌコロナウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生イヌ肺炎ウィルスを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、前記経口ワクチンはさらに、イヌインフルエンザウィルス、イヌパルボウィルス、イヌジステンパーウィルス、イヌアデノウィルス（１型又は２型）、呼吸器イヌコロナウィルス、イヌ肺炎ウィルス、ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）及び／又はマイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）からの１以上のタンパク質免疫原をコードするウィルスベクターを含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンは、さらに弱毒生ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）を含む。当該方法のさらに他の種の実施形態において、当該ワクチンはさらに、弱毒生マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）を含む。さらに、前記の上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、これら免疫原の２以上と組み合わせて、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むワクチンを経口投与することを含むことができる。
特定の実施形態において、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、改変生イヌパラインフルエンザウィルス、弱毒生イヌパルボウィルス、弱毒生イヌジステンパーウィルス、弱毒生イヌアデノウィルス２型、及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むワクチンを経口投与することを含む。
ある種の実施形態において、本発明の上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、イヌに対して単一用量ワクチンを経口投与することを含むことができる。従って、特定の実施形態において、当該方法は、イヌに対して、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含む単一用量ワクチンを経口投与することを含む。関連する実施形態において、当該方法は、イヌに対して、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の両方を含む単一用量ワクチンを経口投与することを含む。
別の実施形態において、本発明の上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、イヌに対して２以上の用量のワクチンを経口投与することを含むことができる。従って、特定の実施形態において、当該方法は、イヌに対して、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含む２以上の用量のワクチンを経口投与することを含む。関連する実施形態において、当該方法は、イヌに対して、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の両方を含む２以上の用量のワクチンを経口投与することを含む。
特定の実施形態において、上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）は、イヌに対してアジュバント化されていないワクチンを経口投与することを含む。これらの方法の特定の実施形態は、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むワクチンであって、アジュバント化されていないワクチンであるワクチンを、イヌに経口投与することを含む。これらの方法のより特定の実施形態は、改変生イヌパラインフルエンザウィルス、及び、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むワクチンであって、アジュバント化されていないワクチンであるワクチンを、イヌに経口投与することを含む。この種類の特定の実施形態において、当該ワクチンは単一用量ワクチンとして投与される。
上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）の別の実施形態は、アジュバント化されたワクチンをイヌに経口投与することを含む。これらの方法の特定の実施形態は、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むワクチンであって、そのワクチンがアジュバントを含むワクチンをイヌに対して経口投与することを含む。これらの方法の関連する実施形態は、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の両方を含むワクチンであって、アジュバントを含むワクチンをイヌに経口投与することを含む。この種類の特定の実施形態において、当該ワクチンは、単一用量ワクチンとして投与される。
上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する方法（及び／又はイヌに有効な防御を提供する方法）のある種の実施形態において、本発明のワクチンは、０．２ｍＬ～５ｍＬの用量で経口投与される。関連する実施形態において、本発明のワクチンは、０．２ｍＬ～４ｍＬの用量で経口投与される。他の特定の実施形態において、本発明のワクチンは、０．３～１．５ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．２ｍＬ～３．０ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．２ｍＬ～２．５ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．２ｍＬ～２．０ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．５～２．５ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．７５ｍＬ～２．０ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．５ｍＬ～２．０ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．５ｍＬ～１．５ｍＬの用量で経口投与される。さらに他の実施形態において、本発明のワクチンは、０．７５ｍＬ～１．５ｍＬの用量で経口投与される。特定の実施形態において、本発明のワクチンは、１．０ｍＬの用量で経口投与される。
本発明のこれら及び他の態様については、以下の実施例を含む以下の詳細な説明を参照することにより、理解が深まるであろう。
従って、本発明は、経口ワクチンとして有用な多価ワクチンを含む、改変生イヌパラインフルエンザウィルスワクチンを提供する。本発明はまた、イヌパラインフルエンザウィルスに対してイヌを経口免疫化する方法であって、改変生イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウィルスを含むワクチンをイヌに経口投与することを含む方法も提供する。本発明は、さらに、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含む単一用量ワクチンを提供する。そのようなワクチンは、ブースターワクチンを必要とせずに、上気道疾患及び感染性気管気管支炎に対して少なくとも６ヶ月間、ワクチン接種されたイヌの防御を支援する（及び／又はイヌに有効な防御を提供する）ものである。ある種の実施形態において、前記単一用量ワクチンは、イヌに対して１ｍＬ用量で投与される。
本発明はさらに、イヌインフルエンザウィルス（例えば、Ｈ３Ｎ２及び／又はＨ３Ｎ８）、イヌパルボウィルス、イヌジステンパーウィルス、イヌアデノウィルス、イヌ呼吸器コロナウィルス、イヌ肺炎ウィルス、マイコプラズマ属種（例えば、マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ））、及びストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）に対する免疫をさらに誘発する１以上の他のイヌ病原体及び／又は免疫原と組み合わせて、改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含むワクチンを提供する。
より具体的には、本発明はまた、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）とともに改変生イヌパラインフルエンザウィルスを含む多価経口ワクチンを含む。本発明はさらに、イヌパラインフルエンザウィルス及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に対してイヌを免疫化する方法であって、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むワクチンをイヌに経口投与することを含む方法を提供する。本発明の特定の実施形態において、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む単一用量ワクチン（又は多価ワクチン）を１用量のみ投与されたイヌは、ブースターワクチンの必要なく、野生型ＣＰＩウィルス及び野生型無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）によって引き起こされる上気道疾患及び感染性気管気管支炎に対して、少なくとも６ヶ月間防御される。より特定の実施形態において、前記単一用量ワクチンは、イヌに対して１ｍＬ用量で投与される。
特定の実施形態において、当該ワクチンは、ＣＰＩウィルス血清中和抗体及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）凝集及び／又はワクチン接種されたイヌで誘発されるＩｇＡ抗体の量によって決定される、免疫学的に有効量の改変生ＣＰＩウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む。関連する態様において、本発明は、毒性ＣＰＩウィルス及び毒性Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に対して有効である特定の最小量の各抗原を含むワクチンを提供する。さらに別の態様において、本発明のワクチンは、安全かつ有効であり、イヌにおけるＣＰＩウィルス及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）感染による上気道疾患及び感染性気管気管支炎からのイヌの防御を支援する（及び／又はイヌに対して有効な防御を提供する）。
本発明はまた、イヌインフルエンザウィルス（例えば、Ｈ３Ｎ２及びＨ３Ｎ８）、イヌパルボウィルス、イヌアデノウィルス、イヌジステンパーウィルス、イヌアデノウィルス、イヌ呼吸器コロナウィルス、イヌ肺炎ウィルス、マイコプラズマ属種（例えば、マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ））及びストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）に対する免疫をさらに誘発する１以上の他のイヌ病原体及び／又は免疫原とさらに組み合わせて、弱毒生ＣＰＩウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含む多価ワクチンを提供する。
本明細書中で使用される「およそ」という用語は、「約」という用語と互換的に使用され、数値が指定の値の２５％以内であることを意味し、すなわち、「およそ」４．０ｍＬを含む１用量のワクチンは、３．０～５．０ｍＬを含むことができる。
本明細書で使用される場合、「イヌ」（ｃａｎｉｎｅ）という用語は「犬」（ｄｏｇ）という用語と互換的に用いられ、別断の断りがない限り、全ての飼い犬、すなわちＣａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ又はＣａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓを含む。
本明細書で使用される場合、「ネコ」という用語は、ネコ科のあらゆる構成員を指す。飼い猫、純血種及び／又は雑種のペット猫、及び野生若しくは野良猫は、全てネコである。
本明細書で使用される場合、「ワクチン」は、動物、例えば、イヌに適用するのに好適であり、１以上の抗原、すなわち、１以上の免疫原を、代表的には滅菌水を含む液体などの薬学的に許容される担体と組み合わせて含み、動物に投与すると、野生型微生物（例えば、ウィルス又は細菌）による感染から生じる疾患からの防御を少なくとも支援する（及び／又は有効な防御を提供する）上で十分強力な、すなわち、疾患の予防を支援し、有効な防御を提供し、疾患を予防若しくは改善する上で十分強力な免疫応答を誘発する。好ましい実施形態では、当該ワクチンは、野生型微生物（例えば、ウィルス又は細菌）による感染から生じる疾患からの有効な防御を提供する上で十分強いものである。ここで、「ワクチン」という用語の使用は、一価ワクチン及び多価ワクチンの両方を包含する。動物対象者に経口投与するためのワクチンもまた、「経口ワクチン」と称され得る。
本明細書で使用される場合、「多価ワクチン」は、２以上の異なる抗原を含むワクチンである。この種類の特定の実施形態では、多価ワクチンは、２以上の異なる病原体に対して被接種者の免疫系を刺激する。
本明細書で使用される場合、「防御する（ｐｒｏｔｅｃｔ）」、「防御する（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ）、「有効な防御を提供する（ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）」、「有効な防御を提供する（ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）」、「防御を支援する（ａｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）」、「防御を支援する（ａｉｄｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）」及び「防御免疫の誘発を支援する（ａｉｄｓ ｉｎ ｅｌｉｃｉｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）」という用語は、感染のいずれかの徴候からの完全な防御を必要としない。例えば、「防御の支援」は、チャレンジ後、基礎となる感染の症状が少なくとも軽減される、及び／又は、症状を引き起こす基礎となる細胞性、生理学的又は生化学的な原因又は機序の１以上が軽減及び／又は除去されるような、防御が十分であることを意味することができる。この文脈で使用される「軽減」は、単に感染の生理学的状態ではなく、感染の分子状態を含む感染状態との関連を意味すると理解される。
本明細書で使用される場合、「有効な防御を提供している」及び「有効な防御を提供する」という用語は、互換的に使用される。本発明のワクチンによって構成される改変生イヌパラインフルエンザウィルスに関して、イヌに対して上気道疾患及び感染性気管気管支炎からの「有効な防御を提供している」は、生きた野生型ＣＰＩウィルスによるチャレンジに続く、ワクチン接種したイヌとプラシーボワクチン接種した対照イヌとの間のＣＰＩウィルス排出期間及び／又は疾患の臨床兆候における統計的に有意な減少を見出すことによって決定される。本発明のワクチンによって構成される無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に関して、イヌに上気道疾患及び感染性気管気管支炎からの「有効な防御を提供すること」は、野生型生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）によるチャレンジに続く、ワクチン接種されたイヌとプラシーボワクチン接種対象イヌとの間の罹患したイヌの数における統計的に有意な減少を見出すことによって決定される。罹患したイヌは、チャレンジ後の観察期間中に２日以上連続して自発咳嗽又は吐き気を伴う自発咳嗽を有すると定義される。
本明細書で使用する場合、「ウィルス排出期間」は、鼻腔スワブからのウィルス滴定によって測定される、ウィルスがイヌの鼻腔から排出された最初の発生から最後の発生までの日数である。本発明の特定の実施形態では、ウィルス排出の持続時間を、ＣＰＩウィルスについて測定する。
本明細書で使用される場合、「細菌の排出期間」は、鼻腔スワブからの細菌滴定によって測定される、細菌がイヌの鼻腔から排出された最初の発生から最後の発生までの日数である。本発明の特定の実施形態では、細菌排出の持続時間を、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）について測定する。
本明細書で使用される場合、「抗体陽転する」イヌは、特定の抗原（例えば、ＣＰＩウィルス又はＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ））に対するイヌの抗体力価が、その特定の抗原に対する基底線値より少なくとも２倍大きいことを意味する。
本明細書で使用される場合、「弱毒生ウィルス」及び「改変生ウィルス」という用語は互換的に使用され、免疫原性であるが病原性はない弱毒生ウィルス免疫原である。
本明細書で使用される場合、「弱毒細菌」、「細菌の無毒性生培養物」、及び「無毒性生細菌」という用語は互換的に使用され、免疫原性であるが病原性ではない弱毒生細菌免疫原（例えば、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ））である。
本明細書で使用される場合、動物対象者に投与されるワクチンの「用量」が、例えば、４μｇ／用量又は２～６μｇ／用量のような重量基準、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量又は７．３～８．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量のような力価基準での抗原の特定の量又は量の範囲を含むと定義される場合、全用量の投与は、単回投与で行うことができるか、或いは、３時間以下の間隔で複数回投与で実施することができる。特定の実施形態において、ワクチン用量は、１回の投与で、全て一度に動物対象者に経口投与される。
本明細書で使用される場合、「単一用量ワクチン」は、病原体からの少なくとも一つの免疫原を含むワクチン（又は多価ワクチン）であり、そのワクチン（又は多価ワクチン）は、単回投与で、或いは、短期間をかけてすなわち３時間以下の間隔で、複数回投与で動物に投与され、やはり第２の用量のワクチン（例えば、ブースターワクチン）を投与する必要なく、少なくとも６ヶ月間にわたり病原体からのその動物の防御の支援を行う（及び／又はその動物に有効な防御を提供する）。この種類の特定の実施形態では、単一用量ワクチンは、動物対象者、例えばイヌにワクチンの単一の小分け量として、全て単回投与で経口投与される。特定の実施形態では、単一用量ワクチンは、動物対象者に１ｍＬ用量で経口投与される。したがって、本発明のワクチンは、免疫の持続期間が少なくとも６ヶ月である単一用量ワクチンとして、動物対象者、例えばイヌに経口投与され得ることが意図される。ある種の実施形態において、免疫の持続期間は少なくとも９ヶ月である。他の実施形態において、免疫の持続期間は少なくとも１２ヶ月である。さらに他の実施形態において、免疫の持続期間は少なくとも１８ヶ月である。
別の態様において、ワクチン（又は多価ワクチン）の２回目の用量は、最初の経口投与の後６～１８ヶ月の期間にわたって、１回目の投与後１週間、複数週間、又は数ヶ月間投与される。ブースターワクチンは、注射（例えば、筋肉、皮下）、経鼻、又は経口で投与することができる。したがって、一部の実施形態において、ワクチンは、少なくとも２用量経口投与される。一部のそのような実施形態において、例えば、そのワクチンは２回投与され、２回目の用量（例えば、ブースターワクチン）は、初回ワクチンの少なくとも約２週間後に投与される。一部の実施形態において、前記ワクチンは２回投与され、２回目の用量は、１回目から最長８週間後に投与される。他の実施形態において、第２の用量は、第１の用量の約２週間～約４ヶ月後、第１の用量の約２週間～約８週間後、又は第１の用量の約３週間～約４週間後に投与される。一部の実施形態において、第２の用量は、第１の用量の約４週間後に投与される。第１及びその後の投与量は、例えば、量及び／又は形態において変化してもよい。しかしながら、多くの場合、投与量は、量及び形態に関して同じである。投与が単一用量ワクチンとして行われるか又は複数回投与［すなわち、ブースターワクチン（類）］で行われるかにかかわらず、ワクチンのその後の投与は、年１回又は隔年の投与法のような、６～１８か月の免疫持続期間（又はさらに長い）後に所定の動物対象者に提供する必要がある可能性があることは理解されるべきである。
本発明の経口ワクチンの単一用量が、少なくとも６ヶ月間、病原体からの動物の防御を支援する（及び／又は動物に有効な防御を提供する）のに十分である場合、その用量における抗原の量は、一般に、６ヶ月以上の持続期間にわたり治療上有効量のワクチンを含む。他方、その初回用量を補うためにブースターワクチン用量が必要な場合、初回ワクチンとブースターワクチンの合わせた量が治療上有効量を構成し得る。
「アジュバント」及び「免疫刺激剤」という用語は本明細書において互換的に用いられ、免疫系の刺激を引き起こす１以上の物質と定義される。
本明細書で使用される場合、「非アジュバント化ワクチン」は、アジュバントを含まないワクチン又は多価ワクチンである。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、修飾される名詞が医薬製品での使用に適切であることを意味するのに形容詞的に使用される。例えば、医薬ワクチン中の賦形剤を説明するためにそれを使用する場合、それは、賦形剤が組成物の他の成分と適合し、意図された被投与動物、例えばイヌに不利に有害性ではないことを特徴付けるものである。
特定の実施形態において、本発明のワクチンはまた、薬学的に許容される免疫刺激剤及び／又はアジュバント及び／又は生体接着性ポリマーとともに投与することができる。この文脈において、アジュバントは、１以上のワクチン抗原／単離物に対する免疫応答を増強するために使用される。したがって、「アジュバント」は、特定の抗原に対する免疫応答を非特異的に増大させる薬剤であり、したがって、任意のワクチンにおいて必要な抗原の量、及び／又は目的の抗原に対する十分な免疫応答を生成するために必要な注射の回数を減少させる。動物のワクチン接種に適したアジュバントとしては、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム及びミョウバンなどの鉱物ゲル；プルロニックポリオールなどの界面活性剤、及びオイルエマルションを含み、これらに限定されるものではない。下記で例示する一つのアジュバントであるＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）は、乳化成分を含む末端滅菌されたカルボマー系（ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標)９３４Ｐ）アジュバント懸濁液であり、ＭＶＰ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ［所在地：４８０５ ″Ｇ″ Ｓｔｒｅｅｔ Ｏｍａｈａ， ＮＥ］から得られる動物由来成分を含まないものである。ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標)９３４Ｐは、アリルスクロース又はアリルペンタエリスリトールと架橋されたアクリル酸ホモポリマーである。
生体接着性ポリマーであるＰＶＰ－Ｋ６０は、吸湿性のある非晶質のポリビニルピロリドン直鎖ノニオン系ポリマーであり、水や有機溶媒に可溶で、ｐＨ安定性がある（Ｋ６０はそれの分子量を指す。）。
アジュバント及びイムノアッセイの各種態様に関する情報は、例えば、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎによるシリーズ、Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， １９８７， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， ＮｅｗＹｏｒｋに開示されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。薬学的に許容される免疫刺激剤には、細菌及び／又は真菌の細胞壁成分（例えば、リポ多糖、リポタンパク質、糖タンパク質、ムラミルペプチド）、粘膜付着性ポリマー、植物由来の各種複合糖質（例えば、グリカン類、アセマンナン）、動物由来の各種タンパク質及びペプチド（例えば、ホルモン、サイトカイン、共刺激因子）、及びウィルス及び／又は他の資源由来の新規な核酸（例えば、二本鎖ＲＮＡ、ＣｐＧ）を含む。
本発明のワクチンで使用するための弱毒生ＣＰＩウィルスは、従来の手段によって調製することができる。従来の手段には、例えば、イン・ビトロ継代による病原性株の改変、低温適応、遺伝子操作による生物の病原性の改変、非病原性の野生型株の選択、及び当業者によく知られた他の方法を含む。次に、そのような弱毒ＣＰＩウィルスを、以下の実施例に詳述するように、経口投与に適切であるかどうかを決定するために試験することができる。
改変生ＣＰＩウィルス株は、細胞培養による野生型ウィルスの連続継代によって誘導することができる。別の実施形態において、改変生ＣＰＩウィルス株は、実験動物及び／又は非宿主動物を介した野生型ウィルスの連続継代によって誘導される。このような継代中の遺伝子変異の蓄積により、典型的には、元の宿主に対する生物の病原性の漸進的な喪失が生じる。一部の実施形態において、弱毒生ウィルス株は、低温適応によって調製される。寒冷適応したウィルスは、上気道で見られる温度でのみ複製するという利点を有する。寒冷適応ウマインフルエンザウィルスの生成方法が、米国特許第６，１７７，０８２号［参照によりその全体が本明細書に組み込まれる］に記載されている。所望の得られる低温適応ウィルスは、次の表現型：低温適応、温度感受性、優性干渉、及び／又は弱毒化のうちの１以上を付与する。さらに、改変生イヌパラインフルエンザウィルス及び無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の両方が、以前に開示されており、市販のイヌワクチンに含まれている。
生物寄託
以下の生物材料の培養物が、ブダペスト条約の要件を満たす条件下に、以下の国際寄託機関：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ） １０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ， Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖａ． ２０１１０－２２０９， Ｕ．Ｓ．Ａ．に寄託されている。寄託物を一般に利用可能にするために寄託者が課しているすべての制限は、特許が付与された時点で除去され、それは変更不可である。
以下の生物材料の培養物が、ブダペスト条約の要件を満たす条件下に、以下の国際寄託機関：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ） １０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ， Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖａ． ２０１１０－２２０９， Ｕ．Ｓ．Ａ．に寄託されている。寄託物を一般に利用可能にするために寄託者が課しているすべての制限は、特許が付与された時点で除去され、それは変更不可である。
以下の実施例は、本発明のさらなる理解を提供するのに役立つが、いかなる形でも本発明の有効な範囲を制限することを意味しない。
実施例１
生体接着性ポリマー又は生体接着性アジュバントとともに又はそれを伴わずに投与される経口イヌパラインフルエンザウィルス及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）ワクチンの効力
材料及び方法
ワクチン：
実験ワクチンは、安定剤溶液［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ， Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ， ＭＡから得たカゼインの酵素加水分解物）、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］と混合し、次に凍結乾燥した、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２及び改変生ＣＰＩウィルス、株Ｃｏｒｎｅｌｌ、抗原ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を含んでいた。処置群Ａ、Ｃ及びＤのイヌに投与されたワクチンは、アジュバントとして１０～１５％ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）を含んでいた。処置群Ｃのイヌに投与されたワクチンは、生体接着性ポリマーであるＰＶＰ－Ｋ６０も含んでいた。
生体接着性ポリマー又は生体接着性アジュバントとともに又はそれを伴わずに投与される経口イヌパラインフルエンザウィルス及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）ワクチンの効力
材料及び方法
ワクチン：
実験ワクチンは、安定剤溶液［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ， Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ， ＭＡから得たカゼインの酵素加水分解物）、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］と混合し、次に凍結乾燥した、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２及び改変生ＣＰＩウィルス、株Ｃｏｒｎｅｌｌ、抗原ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を含んでいた。処置群Ａ、Ｃ及びＤのイヌに投与されたワクチンは、アジュバントとして１０～１５％ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）を含んでいた。処置群Ｃのイヌに投与されたワクチンは、生体接着性ポリマーであるＰＶＰ－Ｋ６０も含んでいた。
ワクチンのＣＰＩウィルスの力価は、７．５～８．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬで変動し、一方、ワクチンのＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価は９．２×１０９～１．４×１０１０ｃｆｕ／ｍＬで変動した。ワクチンはすべてバイアル中で凍結乾燥し、接種当日に各バイアル中の凍結乾燥ワクチンを滅菌水１ｍＬで再水和し、同様の調製品をプールした。ＣＰＩウィルスの力価は、ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ単位で提供されており、それはスペアマン－ケルバー法によって計算されるサンプル中のウィルスの濃度を推算するのに一般に用いられる単位である。
動物：
１０週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）７頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
１０週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）７頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
ワクチン接種及び血清の採取：
試験第０日に、処置群Ｄのイヌに、ＣＰＩウィルス、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）（Ｂｂ）、及び１５％ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）からなる１ｍＬ用量のワクチンを経口経路により接種した。注射器にスプレー装置を取り付けて、喉の奥にワクチンを送達した。試験第１４日に、すべてのイヌに、それぞれのプールされたワクチンを経口経路で接種した［下記の表１を参照］。試験第２７日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。
試験第０日に、処置群Ｄのイヌに、ＣＰＩウィルス、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）（Ｂｂ）、及び１５％ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）からなる１ｍＬ用量のワクチンを経口経路により接種した。注射器にスプレー装置を取り付けて、喉の奥にワクチンを送達した。試験第１４日に、すべてのイヌに、それぞれのプールされたワクチンを経口経路で接種した［下記の表１を参照］。試験第２７日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。
ＣＰＩウィルス中和抗体の検出：
標準的な血清中和（ＳＮ）アッセイを用いて、ＣＰＩウィルス中和抗体を検出した。血清希釈液をＣＰＩウィルスワクチン株とともにインキュベートし、イヌ腎臓細胞に接種した。５～７日後、単層を固定し、フルオレセイン結合ＣＰＩウィルス抗血清で染色し、そして、ＳＮ抗体力価を、ウィルス感染５０％阻害を引き起こす血清希釈度の逆数として計算した。
標準的な血清中和（ＳＮ）アッセイを用いて、ＣＰＩウィルス中和抗体を検出した。血清希釈液をＣＰＩウィルスワクチン株とともにインキュベートし、イヌ腎臓細胞に接種した。５～７日後、単層を固定し、フルオレセイン結合ＣＰＩウィルス抗血清で染色し、そして、ＳＮ抗体力価を、ウィルス感染５０％阻害を引き起こす血清希釈度の逆数として計算した。
表１
試験設計
試験設計
チャレンジ：
試験第２８日に、イヌに毒性ＣＰＩウィルスを投与した。
試験第２８日に、イヌに毒性ＣＰＩウィルスを投与した。
チャレンジ後観察及びサンプル：
チャレンジ後１１日間にわたり臨床観察を記録し、チャレンジ後１１日間にわたり毎日鼻腔ぬぐい液を採取した。
チャレンジ後１１日間にわたり臨床観察を記録し、チャレンジ後１１日間にわたり毎日鼻腔ぬぐい液を採取した。
結果
血清学：
ワクチン接種前、すべてのイヌが、ＣＰＩウィルス血清中和力価２未満を有しており、それはワクチン接種時にイヌがウィルス感染したことがないことを示していた。プラシーボ接種対照イヌは、ワクチン接種直前まで血清陰性（ＳＮ＜２）のままであった。各処置群のほぼ全てのイヌが、ワクチン接種後に抗体陽転した（力価＞４）［下記表２参照］。
血清学：
ワクチン接種前、すべてのイヌが、ＣＰＩウィルス血清中和力価２未満を有しており、それはワクチン接種時にイヌがウィルス感染したことがないことを示していた。プラシーボ接種対照イヌは、ワクチン接種直前まで血清陰性（ＳＮ＜２）のままであった。各処置群のほぼ全てのイヌが、ワクチン接種後に抗体陽転した（力価＞４）［下記表２参照］。
表２
ＣＰＩウィルスに対する血清抗体力価
ＣＰＩウィルスに対する血清抗体力価
ＣＰＩウィルス排出：
ＣＰＩウィルスの排出期間が、ワクチンの効力を評価するための主要な変数であった。各動物について、初回から最終回までのウィルス排出期間を日数で算出し、各投与群における平均排出期間を求めた。プラシーボワクチン接種対照群の平均ウィルス排出期間は７日であった。対照的に、処置群Ａ及びＣの平均排出期間は０日であったが、処置群Ｂ及びＤの平均排出期間は１日であった［下記表３参照］。
ＣＰＩウィルスの排出期間が、ワクチンの効力を評価するための主要な変数であった。各動物について、初回から最終回までのウィルス排出期間を日数で算出し、各投与群における平均排出期間を求めた。プラシーボワクチン接種対照群の平均ウィルス排出期間は７日であった。対照的に、処置群Ａ及びＣの平均排出期間は０日であったが、処置群Ｂ及びＤの平均排出期間は１日であった［下記表３参照］。
表３
排出期間
排出期間
これらの結果は、ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）及びＰＶＰ－Ｋ６０が、ワクチンイヌにおけるＣＰＩウィルスの排出期間にほとんど影響を及ぼさなかったことを示している。
実施例２
アジュバントを含む及び含まない多価経口ＣＰＩウィルス及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）ワクチンのＣＰＩウィルスの用量応答
材料及び方法
ワクチン：
実験ワクチンは、安定剤［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］と混合し、次に凍結乾燥した、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２、及び、改変生ＣＰＩウィルス、株Ｃｏｒｎｅｌｌ、抗原ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を含んでいた。処置群Ｃ及びＤのイヌに投与されたワクチンは、アジュバントとして１５％ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）を含んでいた。ワクチン接種当日、凍結乾燥ワクチンの各バイアルを無菌水１ｍＬで再水和し、同様の調製品をプールした。処置群Ａ～Ｄで使用したワクチン中のＣＰＩウィルスの力価は、表５に示したように、それぞれ８．６、７．３、７．６、及び６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬであった。
アジュバントを含む及び含まない多価経口ＣＰＩウィルス及びＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）ワクチンのＣＰＩウィルスの用量応答
材料及び方法
ワクチン：
実験ワクチンは、安定剤［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］と混合し、次に凍結乾燥した、無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２、及び、改変生ＣＰＩウィルス、株Ｃｏｒｎｅｌｌ、抗原ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を含んでいた。処置群Ｃ及びＤのイヌに投与されたワクチンは、アジュバントとして１５％ＣＡＲＢＩＧＥＮ（商標名）を含んでいた。ワクチン接種当日、凍結乾燥ワクチンの各バイアルを無菌水１ｍＬで再水和し、同様の調製品をプールした。処置群Ａ～Ｄで使用したワクチン中のＣＰＩウィルスの力価は、表５に示したように、それぞれ８．６、７．３、７．６、及び６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬであった。
動物：
１７週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）１５頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
１７週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）１５頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
ワクチン接種及び血清の採取：
試験第０日に、イヌを、それらの個々のプールしたワクチン１ｍＬ用量で経口経路によってワクチン接種した［下記の表４参照］。注射器にスプレー装置を取り付けて、喉の奥にワクチンを送達した。試験第２７日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。
試験第０日に、イヌを、それらの個々のプールしたワクチン１ｍＬ用量で経口経路によってワクチン接種した［下記の表４参照］。注射器にスプレー装置を取り付けて、喉の奥にワクチンを送達した。試験第２７日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。
ＣＰＩウィルス中和抗体の検出：
標準的なＳＮアッセイを用いて、ＣＰＩウィルス中和抗体を検出した。血清希釈液をＣＰＩウィルスワクチン株とともにインキュベートし、イヌ腎臓細胞に接種した。５～７日後、単層を固定し、フルオレセイン結合ＣＰＩウィルス抗血清で染色し、ＳＮ抗体力価を、ウィルス感染５０％阻害を引き起こす血清希釈度の逆数として計算した。
標準的なＳＮアッセイを用いて、ＣＰＩウィルス中和抗体を検出した。血清希釈液をＣＰＩウィルスワクチン株とともにインキュベートし、イヌ腎臓細胞に接種した。５～７日後、単層を固定し、フルオレセイン結合ＣＰＩウィルス抗血清で染色し、ＳＮ抗体力価を、ウィルス感染５０％阻害を引き起こす血清希釈度の逆数として計算した。
チャレンジ：
試験第２８日に、イヌに毒性ＣＰＩウィルスを投与した。
試験第２８日に、イヌに毒性ＣＰＩウィルスを投与した。
チャレンジ後観察及びサンプル：
１４連続日にわたり臨床観察を記録し、チャレンジ後１０連続日にわたり鼻腔ぬぐい液を採取した。
１４連続日にわたり臨床観察を記録し、チャレンジ後１０連続日にわたり鼻腔ぬぐい液を採取した。
表４
試験設計
試験設計
結果
血清学：
ワクチン接種前、すべてのイヌが、ＣＰＩウィルス血清中和力価２未満を有しており、それはワクチン接種時にイヌがウィルス感染したことがないことを示していた。プラシーボ接種対照イヌは、ワクチン接種直前まで血清陰性（ＳＮ＜２）のままであった。各処置群のほぼ全てのイヌが、ワクチン接種後に抗体陽転した（力価＞４）［下記表５参照］。
血清学：
ワクチン接種前、すべてのイヌが、ＣＰＩウィルス血清中和力価２未満を有しており、それはワクチン接種時にイヌがウィルス感染したことがないことを示していた。プラシーボ接種対照イヌは、ワクチン接種直前まで血清陰性（ＳＮ＜２）のままであった。各処置群のほぼ全てのイヌが、ワクチン接種後に抗体陽転した（力価＞４）［下記表５参照］。
表５
ＣＰＩウィルスに対する血清抗体力価
ＣＰＩウィルスに対する血清抗体力価
ＣＰＩウィルス排出：
ＣＰＩウィルスの排出期間が、ワクチンの効力を評価するための主要な変数であった。各動物について、初回から最終回までのウィルス排出期間を日数で算出し、各投与群における平均排出期間を求めた。全てのプラシーボワクチン接種対照イヌ（処置群Ｅ）がウィルスを排出し、排出の平均期間は６日間であった。対照的に、処置群Ａ～Ｄの平均排出期間は、それぞれ１、０、１及び５であった［下記表６参照］。
ＣＰＩウィルスの排出期間が、ワクチンの効力を評価するための主要な変数であった。各動物について、初回から最終回までのウィルス排出期間を日数で算出し、各投与群における平均排出期間を求めた。全てのプラシーボワクチン接種対照イヌ（処置群Ｅ）がウィルスを排出し、排出の平均期間は６日間であった。対照的に、処置群Ａ～Ｄの平均排出期間は、それぞれ１、０、１及び５であった［下記表６参照］。
表６
排出期間
排出期間
これらの結果は、ウィルス排出期間の関数として評価して、１ｍＬ用量中、≧６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬの改変生ＣＰＩウィルスが、経口改変生ＣＰＩウィルスワクチンが有効となる上で必要であることを示唆している。
実施例３
経口イヌパラインフルエンザ及びボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）混合ワクチンのＣＰＩ画分の効力を実証するためのイヌにおける免疫原性試験
材料及び方法
ワクチン：
試験ワクチンは、改変生ＣＰＩウィルス株Ｃｏｒｎｅｌｌ、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３及び無毒性型Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２）からなるものであり、それに安定剤［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］を混合し、凍結乾燥したものであった。プラシーボワクチンは、ＣＰＩ抗原を除き、試験ワクチンの全成分からなるものであった。ワクチン接種当日に、凍結乾燥したワクチンの各バイアルを滅菌水１ｍＬで再水和し、同様の調製品をプールした。
経口イヌパラインフルエンザ及びボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）混合ワクチンのＣＰＩ画分の効力を実証するためのイヌにおける免疫原性試験
材料及び方法
ワクチン：
試験ワクチンは、改変生ＣＰＩウィルス株Ｃｏｒｎｅｌｌ、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３及び無毒性型Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２）からなるものであり、それに安定剤［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］を混合し、凍結乾燥したものであった。プラシーボワクチンは、ＣＰＩ抗原を除き、試験ワクチンの全成分からなるものであった。ワクチン接種当日に、凍結乾燥したワクチンの各バイアルを滅菌水１ｍＬで再水和し、同様の調製品をプールした。
動物：
７週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）２０頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育し、７週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）１９頭を、同様に別の部屋で飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
７週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）２０頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育し、７週齢ビーグル（Ｍａｒｓｈａｌｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）１９頭を、同様に別の部屋で飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
ワクチン接種及び血清の採取：
試験第０日に、イヌを、それらの個々のプールしたワクチン１ｍＬ用量で経口経路によってワクチン接種した［下記の表７参照］。注射器にスプレー装置を取り付けて、口腔（中咽頭）の奥にワクチンを送達した。試験第２１日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。
試験第０日に、イヌを、それらの個々のプールしたワクチン１ｍＬ用量で経口経路によってワクチン接種した［下記の表７参照］。注射器にスプレー装置を取り付けて、口腔（中咽頭）の奥にワクチンを送達した。試験第２１日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。
ＣＰＩウィルス中和抗体の検出：
標準的なＳＮアッセイを用いて、ＣＰＩウィルス中和抗体を検出した。血清希釈液をＣＰＩウィルスワクチン株とともにインキュベートし、イヌ腎臓細胞に接種した。５～７日後、単層を固定し、フルオレセイン結合ＣＰＩウィルス抗血清で染色し、ＳＮ抗体力価を、ウィルス感染５０％阻害を引き起こす血清希釈度の逆数として計算した。
標準的なＳＮアッセイを用いて、ＣＰＩウィルス中和抗体を検出した。血清希釈液をＣＰＩウィルスワクチン株とともにインキュベートし、イヌ腎臓細胞に接種した。５～７日後、単層を固定し、フルオレセイン結合ＣＰＩウィルス抗血清で染色し、ＳＮ抗体力価を、ウィルス感染５０％阻害を引き起こす血清希釈度の逆数として計算した。
チャレンジ：
試験第２１日に、イヌに毒性ＣＰＩウィルスを投与した。
試験第２１日に、イヌに毒性ＣＰＩウィルスを投与した。
チャレンジ後観察及びサンプル：
１４連続日にわたり臨床観察を記録し、チャレンジ後１０連続日にわたり鼻腔ぬぐい液を採取した。
１４連続日にわたり臨床観察を記録し、チャレンジ後１０連続日にわたり鼻腔ぬぐい液を採取した。
表７
試験設計
試験設計
結果
血清学：
ワクチン接種前、すべてのイヌが、ＣＰＩウィルス血清中和力価２未満を有しており、それはワクチン接種時にイヌがウィルス感染したことがないことを示していた。プラシーボワクチンの接種ではＣＰＩに特異的な抗体が誘導されなかったが、試験ワクチンの接種では、ワクチン接種された動物２０頭中１５頭（７５％）で４以上のＣＰＩ血清中和力価を誘発し、力価は、接種後３週間で６～８６１（ＧＭＴ＝３１）の範囲であった［下記表８参照］。
血清学：
ワクチン接種前、すべてのイヌが、ＣＰＩウィルス血清中和力価２未満を有しており、それはワクチン接種時にイヌがウィルス感染したことがないことを示していた。プラシーボワクチンの接種ではＣＰＩに特異的な抗体が誘導されなかったが、試験ワクチンの接種では、ワクチン接種された動物２０頭中１５頭（７５％）で４以上のＣＰＩ血清中和力価を誘発し、力価は、接種後３週間で６～８６１（ＧＭＴ＝３１）の範囲であった［下記表８参照］。
表８
ＣＰＩ血清抗体力価
ＣＰＩ血清抗体力価
ＣＰＩウィルス排出：
ＣＰＩウィルスの排出期間が、ワクチンの効力を評価するための主要な変数であった。
ＣＰＩウィルスの排出期間が、ワクチンの効力を評価するための主要な変数であった。
各動物について、初回から最終回までのウィルス排出期間を日数で算出し、各投与群における平均排出期間を求めた。プラシーボワクチン接種対照イヌ（処置群Ｂ）のうちの１頭以外の全てのイヌがＣＰＩウィルスを排出し（すなわち９５％）、他方、ワクチン被接種動物のうちの１１頭のみがウィルスを排出した（すなわち５５％）。ＣＰＩウィルス排出期間の中央値はプラシーボワクチン接種対照イヌで６日であり、それに対して、ワクチン接種イヌでは、排出期間中央値は１．５日しかなかった［下記の表９を参照］。
表９
排出期間
排出期間
これらの結果は、ウィルス排出期間の関数として評価して、１ｍＬ用量中７．１ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬのＣＰＩウィルスが、経口改変生ＣＰＩウィルスワクチンが有効となる上で十分であることを示している。
実施例４
経口イヌパラインフルエンザ及びボルデテラ・ブロンキセプチカ混合ワクチンのボルデテラ・ブロンキセプチカ画分の有効性を示すための免疫原性試験
材料及び方法
ワクチン：
試験ワクチンは、改変生ＣＰＩウィルス株Ｃｏｒｎｅｌｌ、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３及び無毒性型Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２）からなるものであり、それに安定剤［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］を混合し、凍結乾燥したものであった。プラシーボワクチンは、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原を除き、試験ワクチンの全成分からなるものであった。ワクチン接種当日に、凍結乾燥したワクチンの各バイアルを滅菌水で再水和し、同様の調製品をプールした。
経口イヌパラインフルエンザ及びボルデテラ・ブロンキセプチカ混合ワクチンのボルデテラ・ブロンキセプチカ画分の有効性を示すための免疫原性試験
材料及び方法
ワクチン：
試験ワクチンは、改変生ＣＰＩウィルス株Ｃｏｒｎｅｌｌ、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３及び無毒性型Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２）からなるものであり、それに安定剤［加水分解ゼラチン、Ｎ－ＺアミンＡＳ、ソルビトール－ｄ、第二リン酸ナトリウム］を混合し、凍結乾燥したものであった。プラシーボワクチンは、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原を除き、試験ワクチンの全成分からなるものであった。ワクチン接種当日に、凍結乾燥したワクチンの各バイアルを滅菌水で再水和し、同様の調製品をプールした。
動物：
７週齢ビーグル２１頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育し、７週齢ビーグル２１頭を同様に別の部屋で飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
７週齢ビーグル２１頭を、木屑で覆われたコンクリート床上のＢＳＬ－２設備内で一緒に飼育し、７週齢ビーグル２１頭を同様に別の部屋で飼育した。食餌及び水は自由に摂取できるようにした。
ワクチン接種：
試験第０日に、イヌを、それらの個々のプールしたワクチン１ｍＬ用量で経口経路によってワクチン接種した［下記の表１０参照］。注射器にスプレー装置を取り付けて、口腔（中咽頭）の奥にワクチンを送達した。
試験第０日に、イヌを、それらの個々のプールしたワクチン１ｍＬ用量で経口経路によってワクチン接種した［下記の表１０参照］。注射器にスプレー装置を取り付けて、口腔（中咽頭）の奥にワクチンを送達した。
サンプル採取：
試験第３４日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の存在を調べるため、試験３４日目に鼻腔スワブも採取した。採取後、スワブはホイールパックバッグに入れ、直ちに検査した。
試験第３４日に、頸静脈の静脈穿刺により全血を採取した。血清を遠心分離によって分離し、試験まで－１０℃以下の温度で保存した。Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の存在を調べるため、試験３４日目に鼻腔スワブも採取した。採取後、スワブはホイールパックバッグに入れ、直ちに検査した。
Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）凝集抗体の検出：
標準的な微量凝集試験を用いて、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗体を検出した。すなわち、試験血清、既知の陽性血清、及び既知の陰性血清の２倍連続希釈を、希釈剤として０．１％ゼラチンを含む通常の生理食塩水を用い、Ｕ底マイクロタイタープレートで行った。Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原（１００μＬ）を各ウェルに加え、マイクロタイタープレートミキサーで１５～３０秒間混合した。プレートを３６±２℃で１～３時間インキュベートし、その後２～７℃で３６～７２時間インキュベートした。プレートを凝集について肉眼で読み、力価を、完全な凝集を示す最高希釈度の逆数として表した。
標準的な微量凝集試験を用いて、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗体を検出した。すなわち、試験血清、既知の陽性血清、及び既知の陰性血清の２倍連続希釈を、希釈剤として０．１％ゼラチンを含む通常の生理食塩水を用い、Ｕ底マイクロタイタープレートで行った。Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）抗原（１００μＬ）を各ウェルに加え、マイクロタイタープレートミキサーで１５～３０秒間混合した。プレートを３６±２℃で１～３時間インキュベートし、その後２～７℃で３６～７２時間インキュベートした。プレートを凝集について肉眼で読み、力価を、完全な凝集を示す最高希釈度の逆数として表した。
チャレンジ：
試験第３５日に、イヌに毒性Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を接種した。
試験第３５日に、イヌに毒性Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を接種した。
チャレンジ後観察及びサンプル：
鼻汁、呼吸困難、抑うつ、及び咳を含む（これらに限定されるものではない）臨床徴候について、チャレンジ後２８日間にわたり、１日２回、少なくとも３０分間イヌを観察した。鼻腔スワブを、試験第４２日、４５日、４９日、５２日、５８日、６３日に採取して、投与した微生物の排出を測定した。
鼻汁、呼吸困難、抑うつ、及び咳を含む（これらに限定されるものではない）臨床徴候について、チャレンジ後２８日間にわたり、１日２回、少なくとも３０分間イヌを観察した。鼻腔スワブを、試験第４２日、４５日、４９日、５２日、５８日、６３日に採取して、投与した微生物の排出を測定した。
表１０
試験設計
試験設計
結果
血清学：
ワクチン接種前は、全てのイヌが、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に対して低い抗体力価（≦４）を有しており、それは、そのイヌがワクチン接種時にそのウィルスに感染したことがなかったことを示している。試験ワクチンの接種により、イヌ２１頭中２０頭でＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）凝集力価が誘発され、試験第３４日で１６～１２８の範囲；ＧＭＴ＝＜３９であった。対照的に、プラシーボワクチン接種対照イヌにおける抗体力価は、＜２～８の範囲で低いままであり、ＧＭＴ＝＜１であった［下記表１１参照］。
血清学：
ワクチン接種前は、全てのイヌが、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に対して低い抗体力価（≦４）を有しており、それは、そのイヌがワクチン接種時にそのウィルスに感染したことがなかったことを示している。試験ワクチンの接種により、イヌ２１頭中２０頭でＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）凝集力価が誘発され、試験第３４日で１６～１２８の範囲；ＧＭＴ＝＜３９であった。対照的に、プラシーボワクチン接種対照イヌにおける抗体力価は、＜２～８の範囲で低いままであり、ＧＭＴ＝＜１であった［下記表１１参照］。
表１１
Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）血清抗体力価
Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）血清抗体力価
チャレンジ後の臨床徴候：
チャレンジ後、すべてのプラシーボワクチン接種対照イヌが、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）感染に関連する臨床徴候、特に自発的咳を発症した。罹患イヌは、投与後の観察期間中に２以上連続日での自発咳嗽又は嘔吐を伴う自発咳嗽を有していたと定義した。プラシーボワクチン接種対照イヌ２０頭すべてが罹患したのに対し、ワクチン接種対照イヌは２１頭中９頭（４３％）だけが罹患した；ｐ値＜０．０００１［下記表１２参照］。さらに、投与後の観察期間中、２連続日で１回以上咳をしたワクチン接種者はいなかったが、プラシーボワクチン接種対照イヌ２０頭中１８頭（９０％）が、２日連続で２～１３回咳をした。
チャレンジ後、すべてのプラシーボワクチン接種対照イヌが、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）感染に関連する臨床徴候、特に自発的咳を発症した。罹患イヌは、投与後の観察期間中に２以上連続日での自発咳嗽又は嘔吐を伴う自発咳嗽を有していたと定義した。プラシーボワクチン接種対照イヌ２０頭すべてが罹患したのに対し、ワクチン接種対照イヌは２１頭中９頭（４３％）だけが罹患した；ｐ値＜０．０００１［下記表１２参照］。さらに、投与後の観察期間中、２連続日で１回以上咳をしたワクチン接種者はいなかったが、プラシーボワクチン接種対照イヌ２０頭中１８頭（９０％）が、２日連続で２～１３回咳をした。
表１２
罹患したイヌのまとめ
罹患したイヌのまとめ
また、２８日間の投与後観察期間中にイヌが自発的に咳をした日数も分析した。処置群Ｂのイヌが自発的に咳をした日数の平均は１６．６日であったのに対し、処置群Ａのイヌでは、わずか３．５日であった；ｐ値＜０．０００１［下記の表１３参照］。
表１３
咳のまとめ
咳のまとめ
Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）排出：
鼻腔スワブを、投与後に、週２回、４週間にわたり採取して、投与された微生物の排出を測定した。試験第４２日では、プラシーボワクチン接種対照群とワクチン群の間で細菌排出に差はなかった。しかし、試験第４５日までに、プラシーボワクチン接種対照群は３８，１４１ｃｆｕ／ｍＬのＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を排出したが、ワクチン接種群では１，５２３ｃｆｕ／ｍＬしか排出しなかった。プラシーボワクチン接種対照群での細菌排出は、接種後１６日（試験第５２日）で７５，２９３ｃｆｕ／ｍＬのピークに達した。対照的に、ワクチン接種群での細菌排出は、接種後６日（第４２日）でピークとなったが、４，１７３ｃｆｕ／ｍＬでしかなかった。細菌カウントは、試験終了までワクチン接種群において減少し続けた。試験第６３日までに、ワクチン接種群における細菌排出はわずか６ｃｆｕ／ｍＬであった一方、プラシーボ接種対照群内では、細菌排出量は３５，４００ｃｆｕ／ｍＬと高いままであった。
鼻腔スワブを、投与後に、週２回、４週間にわたり採取して、投与された微生物の排出を測定した。試験第４２日では、プラシーボワクチン接種対照群とワクチン群の間で細菌排出に差はなかった。しかし、試験第４５日までに、プラシーボワクチン接種対照群は３８，１４１ｃｆｕ／ｍＬのＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を排出したが、ワクチン接種群では１，５２３ｃｆｕ／ｍＬしか排出しなかった。プラシーボワクチン接種対照群での細菌排出は、接種後１６日（試験第５２日）で７５，２９３ｃｆｕ／ｍＬのピークに達した。対照的に、ワクチン接種群での細菌排出は、接種後６日（第４２日）でピークとなったが、４，１７３ｃｆｕ／ｍＬでしかなかった。細菌カウントは、試験終了までワクチン接種群において減少し続けた。試験第６３日までに、ワクチン接種群における細菌排出はわずか６ｃｆｕ／ｍＬであった一方、プラシーボ接種対照群内では、細菌排出量は３５，４００ｃｆｕ／ｍＬと高いままであった。
これらのデータは、Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）がワクチン接種群の鼻粘膜内にコロニー形成する能力における大幅な低下を示している。プラシーボワクチン接種対照群及びワクチン接種群の全体的な平均細菌排出は、それぞれ３７，０３５ｃｆｕ／ｍＬ及び８４９ｃｆｕ／ｍＬであり［以下の表１４参照］、各採取日に排出されたＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の量は、ワクチン接種群の方がプラシーボワクチン接種対照群よりも統計的に低かった（ｐ値≦０．０００１）。
表１４
投与後鼻腔スワブから単離されたブロンキセプチカ菌（ｃｆｕ／ｍＬ）
投与後鼻腔スワブから単離されたブロンキセプチカ菌（ｃｆｕ／ｍＬ）
これらの結果は、投与後観察期間中２連続日以上自発咳嗽又は吐き気を伴う自発咳嗽をしたイヌの数によって評価して、１ｍＬ用量中の３．９×１０８ｃｆｕ／ｍＬのＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）無毒性株Ｂ－Ｃ２、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２が、その経口ワクチンを有効とする上で十分であることを示している。
本発明は、本明細書に記載された特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の各種改変が、前述の説明から当業者には明らかになるであろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲に含まれるものである。
Claims (37)
- イヌに対して上気道疾患及び感染性気管気管支炎からの有効な防御を提供する方法であって、前記イヌに、改変生イヌパラインフルエンザ（ＣＰＩ）ウィルスを含むワクチンを経口投与することを含む方法。
- 前記ワクチンが、さらに無毒性生気管支敗血症菌（ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）（Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ））を含む、請求項１に記載の方法。
- 投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価が、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量より大きい、請求項１又は２に記載の方法。
- 投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価が、６．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である、請求項３に記載の方法。
- 投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価が、６．７ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量以上である、請求項４に記載の方法。
- 投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価が、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である、請求項４に記載の方法。
- 投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価が、７．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である、請求項６に記載の方法。
- 投与される前記改変生ＣＰＩウィルスの力価が、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量～８．６ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／用量である、請求項７に記載の方法。
- 投与される前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価が、１×１０７ｃｆｕ／用量以上である、請求項２～８のいずれか１項に記載の方法。
- 投与される前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価が、１×１０８ｃｆｕ／用量～１×１０１２ｃｆｕ／用量である、請求項９に記載の方法。
- 投与される前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価が、５×１０８ｃｆｕ／用量～５×１０１１ｃｆｕ／用量である、請求項１０に記載の方法。
- 前記改変生ＣＰＩウィルスが、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２を有する、請求項２～１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ワクチンが単一用量ワクチンである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記方法が、さらにブースターワクチンを投与することを含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ワクチンが、アジュバント化されていないワクチンである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ワクチンが、さらにアジュバントを含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
- 当該ワクチンが、さらに弱毒生イヌインフルエンザウィルス、弱毒生イヌパルボウィルス、弱毒生イヌジステンパーウィルス、弱毒生イヌアデノウィルス２型、弱毒生呼吸器イヌコロナウィルス、弱毒生イヌ肺炎ウィルス、弱毒生マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）、弱毒生ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）及びこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される弱毒生免疫原を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
- 当該ワクチンが、さらに弱毒生イヌパルボウィルス、弱毒生イヌジステンパーウィルス、及び弱毒生イヌアデノウィルス２型を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ワクチンが、０．２ｍＬ～５ｍＬの用量で経口投与される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記用量が、０．５ｍＬ～２．０ｍＬである、請求項２０に記載の方法。
- 前記用量が、０．７５ｍＬ～１．５ｍＬである、請求項２０に記載の方法。
- イヌに対して経口投与によって上気道疾患及び感染性気管気管支炎からの有効な防御を提供するためのワクチンであって、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上の力価の前記改変生ＣＰＩウィルスを含む、ワクチン。
- 無毒性生気管支敗血症菌（ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）（Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ））をさらに含む、請求項２３に記載のワクチン。
- 前記ワクチン中の前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価が、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬ～１×１０１２ｃｆｕ／ｍＬである、請求項２４に記載のワクチン。
- 前記ワクチン中の前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）の力価が、５×１０８ｃｆｕ／ｍＬ～５×１０１１ｃｆｕ／ｍＬである、請求項２５に記載のワクチン。
- ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価が、６．８ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である、請求項２３～２６のいずれか１項に記載のワクチン。
- ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価が、７．３ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ以上である、請求項２３～２７のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記ワクチン中の改変生ＣＰＩウィルスの力価が、６．０ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬ～９．５ ｌｏｇ１０ＨＡＩＤ５０／ｍＬである、請求項２３～２６のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記改変生ＣＰＩウィルスが、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７３を有する、請求項２３～２９のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記無毒性生Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６２７２を有する、請求項２４～３０のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記ワクチンが単一用量ワクチン用のものである、請求項２３～３１のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記ワクチンが特異的にブースターワクチン用のものである、請求項２３～３１のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記ワクチンがアジュバント化されていないワクチンである、請求項２３～３３のいずれか１項に記載のワクチン。
- 前記ワクチンが、さらにアジュバントを含む、請求項２３～３３のいずれか１項に記載のワクチン。
- 当該ワクチンが、さらに弱毒生イヌインフルエンザウィルス、弱毒生イヌパルボウィルス、弱毒生イヌジステンパーウィルス、弱毒生イヌアデノウィルス２型、弱毒生呼吸器イヌコロナウィルス、弱毒生イヌ肺炎ウィルス、弱毒生マイコプラズマ・シノス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ）、弱毒生ストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）及びこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される弱毒生免疫原を含む、請求項２３～３５のいずれか１項に記載のワクチン。
- 当該ワクチンが、さらに弱毒生イヌパルボウィルス、弱毒生イヌジステンパーウィルス、及び弱毒生イヌアデノウィルス２型を含む、請求項２３～３５のいずれか１項に記載のワクチン。
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