CN101406144A - 一种碱处理龙血树活叶片诱导血竭产生的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种碱处理龙血树活叶片诱导血竭产生的方法。本发明所述的方法由以下步骤组成：一、将碱性物质配入液体或固体粉末；二、将配制后的碱性物质施于龙血树叶片上或产生叶片的分生组织处；三、碱性物质处理龙血树叶片一段时间后，用水洗或用其它方法去掉碱性物质；四、碱处理龙血树活叶片一段时间以后，血竭才可以形成；五、收获产生血竭的含脂叶片，干燥后用乙醇或甲醇提取，提取物经干燥后即得血竭。本发明要解决的技术问题是利用龙血树叶更新速度快的特性，将碱性物质作为诱导龙血树叶片损伤和血竭形成的诱导剂，解决龙血树资源的可持续利用的问题。

Description

一种碱处理龙血树活叶片诱导血竭产生的方法

所属技术领域：本发明属于生物制药领域

技术背景

血竭(Dragon’s blood或Resina Draconis)是传统名贵中药，有活血化瘀、镇痛止血、消炎抗菌等功效，在我国有悠久的用药历史，但历来依靠进口。在自然状态下，龙血树树干木质部在受到损伤或微生物侵染后，植物会产生防御反应而形成防御性物质来抵抗微生物侵染，这种物质提取后就是药用的血竭。1972年我国医药工作者在云南、广西等地发现了能产生血竭的剑叶龙血树[Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen]。1999年国家药品监督管理局颁布的国家标准中(WS3-082(Z-016)-99(Z))，血竭以一类新药材收载。随着需求的增长，野生龙血树资源遭到了严重破坏。龙血树生长极为缓慢，几十年树龄的树干才有可能用于血竭生产，而且血竭产量很低。依靠人工繁殖龙血树，在树干上诱导血竭形成来解决血竭的药源问题困难很大。

在龙血树资源研究方面，李宗恒等人申请了专利《剑叶龙血树种苗培育方法(CN101116397A)》、《剑叶龙血树栽培方法(CN101116398A)》，刀祥生等人申请了《一种剑叶龙血树的扦插繁殖方法(200510010881.6)》的专利。龙血树树干木质部形成伤口后，龙血树会产生防御反应而形成血竭，刘宝等人据此原理申请了《一种快速获得龙血竭原料的方法(CN101138305A)》的专利；在龙血树的伤口上施用植物激素，可以增加血竭的产量，杨本鹏等人据此原理申请了《一种人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法(CN101032207A)》的专利。在伤口上接种微生物，也可以刺激龙血树产生较多的血竭，王兴红等人发表了相关的研究论文(王兴红，江东福，马萍等，真菌与龙血树血竭形成关系的初步研究，中国青年科学技术论文精选，中国科学技术出版社，1994，11，500-503；江东福，马萍，王兴红等，龙血树真菌群及其对血竭形成的影响，1995，云南植物研究，17(1)：79-82。)；宋启示等据此原理申请了《一种田间人工诱导生产龙血竭的方法(CN1817105A)》、《一种龙血竭人工诱导剂及其制备方法(CN1821387A)》、《一种龙血竭的人工培育方法(CN1821388A)》的专利；杨本鹏等人还提出了利用组织培养方法生产血竭的专利申请《运用龙血树组织培养生产血竭的方法(CN1316876C)》。

这些方法虽然在一定程度上有望缓解龙血树的资源问题和血竭形成问题，除组织培养外，这些专利方法都必须利用活体龙血树的树干木质部，而树干的生长又是极其缓慢的，而且对树干的利用也只能是一次性的；组织培养也存在培养时间长、成本高等问题，无法较快地满足现实生产的紧迫需要。

自然状态下龙血树的树叶生长较快，而且每年都会衰老枯死一批，还可以通过快速培养龙血树苗迅速得到大量的龙血树叶片，所以利用龙血树活叶片诱导生产血竭，可以重复利用珍贵的龙血树。目前，尚未发现有诱导龙血树活叶片生产血竭的专利申请或方法报道。人工诱导龙血树叶片生产血竭有望解决血竭生产原料严重短缺的局面，满足人民群众的用药需求，又有助于保护自然资源。

发明内容

本发明使用碱处理龙血树叶片，龙血树叶片受到刺激后会产生防御反应，形成的反应产物就是血竭。

本发明所述的碱处理龙血树活叶片形成血竭的方法由以下步骤组成：

一、配制一定浓度的碱性液体，或者碱性固体粉末。

二、将配制后的碱性物质用以下三种方法中的一种或几种处理生长健壮的龙血树叶片。

2.1将碱性液体或碱性粉末施于幼嫩的龙血树叶片上。

2.2将碱性液体或碱性粉末施于龙血树叶片的基部或顶端的树芯部位。

2.3采用刀片、钉子、或针状物人为损伤叶片，在损伤处施用碱性液体或碱性粉末。

三、碱处理龙血树叶片一段时间以后，用洁净的水淋洗叶片去掉碱性物质，以免叶片损伤过度并保持叶面清洁。

四、碱处理后的龙血树按正常栽培条件管理，1-3周内即可在叶片受损处产生红色的血竭。

五、将产生血竭的叶片收获后，采下叶片上的红色部位，干燥后用甲醇或乙醇浸泡含脂叶片，然后蒸发掉溶剂，提取物经干燥后即可得到红色血竭。

本发明所述的龙血树，包括整个龙血树属(Dracaena)可以产生血竭的所有植物，如剑叶龙血树[Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen]，索科特拉龙血树[Dracaena cinnabari Balf.f.]，龙血树[Dracaena draco L.]，阿拉伯龙血树[Dracaena schizantha]，小花龙血树或海南龙血树[Dracaenacambodiana Pierre ex Gagnep]，岩棕[Dracaena loureiri]等植物。

本发明所述的叶片，是指生长在活体龙血树上有生命力的叶片，只有叶片在生活状态时，才会形成血竭，即血竭的形成是一个活细胞对损伤的反应，该反应的启动需要有一个时间过程，从几个小时至几天时间不等。已死亡的叶片或即将死亡的叶片是不会形成血竭的。正常野生的龙血树叶片很少会自动产生血竭。

本发明所述的碱，可以是纯化的氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)、碳酸钙(CaCO₃)、生石灰(CaO)、石灰水(Ca(OH)₂)等碱性化合物，也可以是含有一种或几种碱性物质的混合物。这些碱性物质可以混于液态溶剂中制成碱性液体使用；也可以将这些碱性物质混入其它非碱性或碱性的固态载体中，制成碱性固体粉末。

本发明所述的树芯或叶片的基部，是龙血树叶片分生组织存在的部位，它具有形成和延长叶片的功能。损伤这些分生组织后，利用分生组织延长叶片的自然特性，可以保持较长时间的诱导效果，叶片上能形成血竭的面积也较大。

本发明所述的人为损伤，是因为一般情况下特别是老的龙血树叶片对碱性物质的腐蚀有较强的抵抗力，使用人为损伤的办法，可以增加碱处理的效果，也可以利用此方法控制血竭在叶片上形成的位置和密度。

本发明所述的碱处理时间和碱液浓度，可根据叶片的生长时间、季节、树叶的老嫩程度、树的活力状态和碱性物质的性质不同而适当作一些调整。一般情况下，处理嫩叶时碱浓度可低一些，处理较老的叶片时，碱液浓度可高一些；生长旺盛的树叶，碱处理时间可长一些，生长状态较差的树叶，碱处理时间可以短一些。碱性物质的使用浓度范围在0.5％-100％之间，依据碱性物质的碱性强弱可以有浓度上的变化，如氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)的碱性较强，使用比例可以在0.5％-10％之间，而生石灰(CaO)和其溶于水后形成的石灰水[Ca(OH)₂]碱性弱，生石灰(CaO)作为固体粉末使用时可以用纯的生石灰，石灰水可以使用其饱和溶液。碱性强时，碱处理时间可短一些；反之亦然。以氢氧化钠(NaOH)为例，由于其碱性较强，浓度为1％-5％(W/V)的氢氧化钠水溶液处理时间为12-72小时即可。若用碳酸钙(CaCO₃)处理，由于其碱性较弱，100％含量的碳酸钙处理时间可能需要长达1-2个月。评价碱处理效果的唯一标准是：不可让叶片大面积死亡，只能让叶片呈点状损伤。

本发明所述的碱性液体，其溶剂可以是水，也可以是甲醇、乙醇或其它有机溶剂；也可以是液体溶剂中含有固体成分的浆状物，甚至可以在液体中加入一定含量的粘结剂，增强碱性物质在叶片中的附着性能。碱性固体粉末，可以是碱性物质本身，如生石灰粉，或者是将碱性物质混在赋形剂中，如将氢氧化钠(NaOH)按一定比例配入硅藻土中等。

本发明所述的用清洁的水淋洗叶片，是指一般的生活用水即可，通过淋洗，可以控制叶片碱处理的程度，并保持叶面清洁，也有利于提高所提取的血竭质量。特别是在碱处理叶片过度时，适时淋洗是矫正的措施之一。在生产时需要注意的是：在人工淋洗碱处理叶片之前，要防止雨水淋湿叶片而降低碱处理的效果。

本发明要解决的技术问题是利用碱的腐蚀性使龙血树叶片受伤后，碱性物质又进一步刺激龙血树叶片产生防御反应形成血竭，并利用龙血树叶的生长快速且可反复生长的特性，解决血竭资源短缺的问题。

该技术由以下的特征组成：将碱性物质配制成碱性液体或碱性固体粉末；喷涂碱性物质于龙血树活叶片上；碱处理一段时间后用水淋洗去掉碱性物质，以免叶片损伤过度并保持叶面洁净；叶片损伤后，必须满足龙血树的正常生长条件；伤口形成1-2周后即开始出现血竭。继续培养1-2月后，即可收获含有红色血竭的叶片，干燥后用乙醇或甲醇提取含脂叶片，提取物经干燥后即可作为药用。

有益效果是：利用龙血树叶片的快速生长特性，通过碱处理叶片快速形成血竭，持续利用珍贵的龙血树资源，解决龙血树生长速度过慢、血竭资源紧张的问题。

为了更好的理解本发明，下面用实验数据进行说明：

配制2％的氢氧化钠水溶液，将碱液喷或涂于人工损伤后的叶片上，增加碱处理的效果，3天后淋洗叶片，继续培养叶片2个月，红色血竭出现在伤口部位，割取产脂叶片，去掉叶片的绿色部分，含脂叶片干燥后，用甲醇提取，经旋转蒸发干燥后即得红色血竭。具体实施例：

1、配制2％氢氧化钠甲醇溶液，将氢氧化钠甲醇溶液喷于叶片的基部24小时后，用10倍碱液量的清水淋洗碱处理部位，待2-3个月后，叶片伸长生长并形成血竭后，继续培养龙血树2-3个月，割取含脂叶片，去掉叶片未产生血竭的绿色部分，保留红色含脂部分，干燥后用95％的乙醇提取，提取物经干燥后即得血竭。

2、配制6％氢氧化钾水溶液，将氢氧化钾溶液呈雾状直接喷于幼嫩的龙血树叶片上，48小时后，用20倍量的清水淋洗碱处理过的叶片，龙血树按正常生长条件管理，3个月后，收获产脂叶片，去掉叶片绿色部位，保留红色含脂部位，含脂叶片干燥后用乙醇提取，蒸发掉乙醇，提取物经干燥即得红色血竭。

3、将碳酸钙粉碎成过200目筛的粉末，加入碳酸钙5倍重量的水和0.5％的胶水，搅拌均匀。用刀片划伤较老的叶片，将碳酸钙浆状物涂抹于伤口处，继续培养叶片6个月，伤口处出现红色血竭，再继续培养一段时间后，去掉叶面上碳酸钙块状物，收获叶片，含脂叶片干燥后用甲醇提取，再蒸发掉甲醇溶剂，即得红色血竭，粉碎后即可药用。

4、将生石灰粉碎成150目左右的粉末，直接喷撒于龙血树嫩叶上，每100平方厘米叶面约撒20克，15-30天后，叶面出现点状损伤，用清水淋洗叶面，保持龙血树的正常生长状态，3个月后收获含脂叶片，叶片干燥后提取血竭即可。

Claims (4)

1、一种碱处理龙血树活叶片诱导血竭产生的方法，其特征在于该方法由将碱性物质施于龙血树活叶片上，损伤并诱导龙血树叶片产生血竭，收获含有血竭的叶片，含脂叶片干燥后，用乙醇或甲醇提取血竭、血竭提取物干燥等步骤组成。

2、根据权利要求1所述的碱，是指pH大于7的所有碱性物质，可以是液体状态，也可以是固体粉末状，所谓的液体状态，可以是溶解状态，也可以是不溶解的浆状物，溶剂可以是水，也可以是甲醇、乙醇等有机溶剂。

3、根据权利要求1或2所述的诱导龙血树叶产生血竭的方法，其特征在于诱导的部位是龙血树的活叶片，而不是树干木质部，也不是已经死亡的叶片。

4、根据权利要求1或2或3所述的诱导龙血树叶产生血竭的方法，其特征在于所述的碱处理龙血树叶片时，碱性物质的浓度根据碱性的强弱、叶片的老嫩、树体的活力状态等条件的不同，诱导所需的时间会有相应的变化，碱处理程度的标准是：即要让叶片呈现较多而小的斑点，而又不能让叶片死亡。