CN101348509A - 2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类2－芳基－6－芳基’－葡萄糖苷化合物及其制备方法与应用，具有如下的结构式：可用于制备Bcl－2家族蛋白的小分子抑制剂和抗肿瘤药物。该类化合物的制备方法包括以下步骤：1)使2－碘代葡萄糖－1，6－内醚发生环氧化反应；2)环氧化反应生成的化合物在碱性条件下与酚类发生开环反应；3)开环反应产物经苄基保护，进一步发生1，6－内醚的开环反应；4)开环反应产物经保护基保护，再在碱性条件下与酚或醇发生取代反应；5)取代产物经Pd/C还原脱除苄基保护基，得到2－芳基－6－芳基’－葡萄糖苷化合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种葡萄糖苷类化合物及其制备方法与应用，特别是2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物及其制备方法与应用。该类化合物能够抑制Bcl-2家族蛋白成员Bcl-xL与天然底物多肽(Bid BH3多肽)的结合，可作为Bcl-2家族蛋白的小分子抑制剂用于抑制其抗凋亡活性，并有望开发成为一类新型的抗肿瘤药物。
背景技术
葡萄糖苷是普遍存在于植物当中的一类化合物，具有重要的生物学意义和药用价值，包括：作为热休克蛋白诱导剂用于治疗中枢神经系统疾病、肾虚和囊性纤维瘤等(Murofushi，K.；Kobayashi，S.；Yamatsu，I.JP2000026495A，2000)；黑色素生成抑制剂(Nakayama，H.；Okada，S.；Kometani，T.；Nishimura，T.WO0160324A，2001)；抗肿瘤(Fukuda，T.；Yoshida，T.；Ito，H.；Nishino，H.；Tokuda，H.JP2003113088A，2003)；抗乙型肝炎(高增平，陆蕴如，雷海民.CN1552708A，2004)；抗过敏(Shimoda，H.；Murai，H.；Morikawa，T.；Yoshikawa，M.JP2006213694A，2006)；酪氨酸酶抑制剂、皮肤增白剂、抗炎、抗氧化、抗衰老(Masuda，T.JP2006176420A，2006；Nojima，J.；Murakami，T.；Kiso，A.JP2007223919A，2008)。
然而，目前报道的具有生物活性的葡萄糖苷类化合物多是糖环1位的取代基发生变化，其他位置特别是2位和6位取代的葡萄糖苷鲜有报道。如式X所示的2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物更是一类全新的葡萄糖苷化合物，其糖环的2位上连接有较大的基团而且是酚羟基，此种连接方式使得这类化合物的制备较为困难。
细胞凋亡(某些情况下又可称为细胞程序性死亡)是一种去除衰老细胞或异常细胞的正常死亡机制，该机制的紊乱与多种疾病的发生有直接的关系。自上世纪90年代以来，人们逐渐发现肿瘤的发生是细胞的增殖与凋亡失衡所致(Okada，H.；Mak，T.W.Nat.Rev.Cancer 2004，4，592-603)。研究表明在多种肿瘤细胞中凋亡机制被抑制，肿瘤细胞因而得以过度增生；另外，凋亡机制被抑制也使得肿瘤细胞对化疗药物的抵抗性增强(Igney，F.H.；Krammer，P.H.Nat.Rev.Cancer 2002，2，277-288)。因此，设法恢复肿瘤细胞中的凋亡机制成为当今抗肿瘤药物设计的一条新思路，在国际上得到了广泛重视(Reed，J.C.Nat.Rev.Drug Discov.2002，1，111-121；Andersen，M.H.；Becker，J.C.；Straten，P.Nat.Rev.Drug Discov.2005，4，399-409.)。
在与细胞凋亡有关的药物靶点中，Bcl-2(B-cell lymphoma 2)相关蛋白是较早得到研究的一类。该类蛋白可分为三个家族：Bcl-2家族，Bax家族和BH3-only家族。其中，Bcl-2家族成员(Bcl-2，Bcl-xL，Mcl-1，Bcl-w等)起着抗细胞凋亡的作用，后两个家族的成员起促细胞凋亡的作用。目前人们认为Bcl-2相关蛋白主要是在细胞凋亡的线粒体途径中发挥作用。其中经活化的Bax家族蛋白(Bax、Bak等)可以结合在线粒体膜上使得细胞色素C从线粒体中释放出来从而最终导致凋亡的发生；而Bcl-2、Bcl-xL等抗凋亡蛋白则能够与Bax和Bak相结合，使其不能发挥作用；另外，一些BH3-only家族成员(Bim，Bad，Bid，Bik等)又能够与Bcl-2和Bcl-xL相结合，抑制其抗凋亡作用。因此，Bcl-2相关蛋白之间的平衡与否对细胞凋亡起着至关重要的调控作用。研究表明，多种类型的肿瘤细胞至少过量表达其中一种Bcl-2家族蛋白，但是在正常细胞中这些蛋白的表达水平则相对较低。使用有机小分子拮抗这些蛋白的功能有望恢复肿瘤细胞中的凋亡机制，从而达到消除肿瘤的目的(Huang，Z.Curr.Opin.Drug Discov.Devel.2000，3，565-574；Cory，S.；Adams，J.M.Nat.Rev.Cancer 2002，2，647-656)。
有机小分子对Bcl-2家族蛋白的抑制活性通常用荧光偏振(FluorescencePolarization，简称FP)方法检测(Zhang，H.；Nimmer，P.；Rosenberg，S.H.；Ng，S.C.；Joseph，M.Anal.Biochem.2002，307，70-75)。该方法是基于分子在均相溶液中的自由旋转，当一个荧光标记的分子被一个平面的极化光所激发时，其发射光可发射到一个固定的平面，而该发射光的极化水平与分子的旋转速度成反比。荧光标记的小分子在均相体系里处于高速旋转状态，发射光表现为除极化，得到一个较低的极化值，而非荧光标记的大分子旋转速度远远低于荧光标记的小分子，当小分子和大分子发生特异性结合后，复合物的旋转速度与大分子的旋转速度相比变化不明显，而远远低于荧光标记小分子的旋转速度，极化值显著升高。当该方法用于检测小分子抑制Bcl-2家族蛋白与天然底物多肽的结合时，在荧光标记多肽与蛋白共存的体系中加入待测化合物，如果化合物也能够与蛋白特异性结合，则会与荧光标记多肽发生竞争从而抑制其与蛋白的结合，进而导致荧光极化值降低。因此通过检测荧光极化值的变化情况就可以测得化合物的活性。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种新的2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物及其制备方法。
本发明所提供的2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物具有如下的结构式：
式X，
式中R1可以为4-环己氧基苯基，二苯并二氧化噻吩-3-基；R2可以为苯基，环己基，联苯-4-基，5，6，7，8-四氢萘-1-基，5，6，7，8-四氢萘-2-基；R3可以为α-甲氧基，β-甲氧基，β-乙酰氨基。
式X-01 式X-02 式X-03
式X-04 式X-05 式X-06
式X-07 式X-08 式X-09
式X-10 式X-11 式X-12
式X-13 式X-14 式X-15
本发明所提供的制备2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物的方法是以2-碘代葡萄糖-1，6-内醚为原料，包括以下典型的X-01-X-14的逆向合成路线和式X-15的逆向合成路线，分别如下反应式1和2所示：
反应式1
反应式2
本方面的方法可以进一步描述如下：
1)使2-碘代葡萄糖-1，6-内醚发生环氧化反应，并用保护基P1原位保护4位羟基；
反应式3
2)环氧化反应生成的化合物与4-环己氧基苯酚(4-cyclohexyloxylphenol)或二氧化硫芴-3-酚发生环氧开环反应；
反应式4
反应式5
3)环氧开环反应产物经保护基P2保护，进一步发生1，6-内醚的开环反应；
反应式6
反应式7
反应式8
反应式9
4)1，6-内醚开环反应产物经保护基P3保护，再与酚类或醇类发生取代反应；
反应式10
反应式11
反应式12
5)取代反应产物脱除保护基P1和P2，得到2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物。
反应式13
反应式14
反应式15
反应式16
上述合成路线的原料中，2-碘代葡萄糖-1，6-内醚经如下步骤制备：从D-葡萄糖出发，先乙酰化，再做成溴苷，然后经醋酸-锌粉还原得到全乙酰化的糖烯，再脱掉乙酰基，最后按照文献(Tailer，D.；Jacquinet，J.-C.；Noirot，A.-M.；Beau，J.-M.J.Chem.Soc.Perkin Tran.1 1992，3163-3164.)所提供的方法，在三丁基锡醚和碘的作用下生成目标化合物。4-环己氧基苯酚是按照文献(Morishima，Y.；Fujita，J.；Ikeda，T.；Kamachi，M.Chem.Lett.1994，3，557-560.)所提供的方法，由对苯二酚和溴代环己烷在金属钠和乙醇的条件下发生亲核取代反应生成。二氧化硫芴-3-酚的制备包括如下步骤：首先按照文献(Allinger，J.；Allinger，N.L.Tetrahedron1958，2，64-74.)所提供的方法，环己酮溴代得β-溴代环己酮，再按照文献(Tedjamulia，M.L.；Tominaga，Y.；Castle，R.N.；Lee，M.L.J. Heterocycl.Chem.1983，20，1485-1495.)所提供的方法，与间甲氧基苯硫酚发生亲核取代生成硫醚，然后在多聚磷酸(PPA)的作用下缩合，再按照文献(Sangaiah，R.；Gold，A.J.Org.Chem.1987，52，3205-3211.)所提供的方法，和DDQ在甲苯中回流脱氢得3-甲氧基硫芴，接着按照文献(Schneider，J.F.；Nieger，M.；
K.；
K.H.Synthesis 2005，1109-1124.)所提供的方法，用间氯过氧苯甲酸氧化成砜，最后用三溴化硼脱除甲基保护基制得目标化合物。
所述的2-碘代葡萄糖-1，6-内醚发生环氧化反应，并用保护基P1原位保护4位羟基反应中，碱(Base)可以是氢化钠，氢氧化钾，氢氧化钠，氢氧化钡；金属离子为锂，钠，钾，铯，钙或镁的碳酸盐；金属离子为钾，钠或铵的醋酸盐；三乙胺。4位羟基使用的保护基可以是乙酰基(Ac)、叔丁氧羰基(Boc)、苯甲酰基(Bz)、三氟甲磺酰基(Tf)、对甲苯磺酰基(Ts)或苄基(Bn)；相应的典型的保护基试剂是醋酐(Ac2O)或醋酸(HOAc)、二碳酸二叔丁酯((Boc)2)、苯甲酰氯(BzCl)、三氟甲磺酸酐(Tf2O)或三氟甲磺酰氯(TfCl)、对甲苯磺酰氯(TsCl)、苄基溴(BnBr)或苄基氯(BnCl)。反应溶剂可以是二氯甲烷(DCM)、乙二醇二甲醚(DME)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基亚砜(DMSO)、1，4-二氧六环(dioxane)、吡啶(Pyr)、四氢呋喃(THF)或乙腈(CH3CN)；反应温度是从-78℃到室温的温度；反应时间从1小时到48小时。
典型的环氧化反应条件如反应式3所示：将1当量的2-碘代葡萄糖1，6-内醚溶于合适溶剂中，冷至-78℃，加入1～10当量的碱和1～10当量的保护基试剂，如BnBr，自然恢复至室温，在该反应条件下，2-碘代葡萄糖1，6-内醚被顺利地转化为相应的式II-01化合物。
所述环氧化反应生成的化合物与酚类发生环氧开环反应中，酚类是含氧、硫或同时含氧和硫杂原子取代的碳数为6～16的酚，或这些酚的金属盐，金属离子为锂，钠，钾，铯，钙或镁。溶剂是丙酮、乙醚、乙二醇二甲醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、1，4-二氧六环、吡啶、四氢呋喃或乙腈；反应温度是从-78℃到溶剂回流的温度；反应时间从1小时到48小时。。
典型的开环反应条件如反应式4所示：将1当量的环氧化反应产物式II-01化合物，1～10当量的酚类，如对环己基氧苯酚的钾盐在-78℃于合适溶剂中混合，将混合物在溶剂回流温度下搅拌1～48小时，在该反应条件下，式II-01化合物被顺利地转化为相应的式III-01化合物。
所述环氧开环反应产物经保护基P2保护反应中，保护基P2和前述保护基P1范围和条件相同。
典型的环氧开环反应产物经保护基P2保护的反应条件如反应式6所示：1当量的环氧开环反应产物式III-01化合物，冷至-78℃，加入1～10当量的碱和1～10当量的保护基试剂，如BnBr，将混合物在溶剂回流温度下搅拌1～48小时，在该反应条件下，式III-01化合物被顺利地转化为相应的式IV-01化合物。
所述1，6-内醚的开环反应中，所用的亲核试剂可以是酚、硫酚、叠氮、卤素、烷基、烷氧基的金属盐类化合物或三甲基硅烷类化合物。所用的催化剂可以是三氟化硼乙醚溶液、二碘化锌或三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTf)。溶剂可以是丙酮、乙醚、乙二醇二甲醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、1，4-二氧六环、吡啶、四氢呋喃或乙腈；反应温度是从-78℃到溶剂回流的温度；反应时间从1小时到48小时。
典型的1，6-内醚的开环反应如反应式8、9所示：将1当量的式IV化合物，1～10当量的亲核试剂(Nu)，0.01～10当量的催化剂(cat.)在-78℃于合适溶剂中混合，混合物在室温下搅拌1～48小时，在该反应条件下，式IV-01-IV-03化合物都被顺利地转化为相应的式V-01-V-03化合物。
所述1，6-内醚开环反应产物经保护基P3保护反应中，保护基P3和前述保护基P1范围和条件相同。
典型的1，6-内醚开环反应产物经保护基P3保护的反应条件如反应式10所示：1当量的1，6-内醚开环反应产物式V-01化合物，冷至-78℃，加入1～10当量的碱和1～10当量的保护基试剂，如TsCl，将混合物在溶剂回流温度下搅拌1～48小时，在该反应条件下，式V-01化合物被顺利地转化为相应的式VI-01化合物。
所述1，6-内醚开环反应产物经保护基P3保护，再与酚类或醇类发生取代反应中，酚类是萘酚、四氢萘酚、苯酚、或是有卤素、烷基、烷氧基或芳基取代的碳数为6～16的苯酚，或这些酚的金属盐，金属离子为锂、钠、钾、铯、钙或镁；所述的醇类是碳数为4～8的脂肪醇或环己醇，或这些醇的金属盐，金属离子为锂、钠、钾、铯、钙或镁。反应的溶剂是丙酮、乙醚、乙二醇二甲醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、1，4-二氧六环、吡啶、四氢呋喃或乙腈；反应温度是从-78℃到溶剂回流的温度；反应时间从1小时到48小时。
典型的与酚或醇发生的取代反应如反应式11～12所示：1当量的式VI化合物，1～10当量的酚类或醇类在-78℃于合适溶剂中混合，混合物在室温下搅拌1～48小时，TLC显示反应完全后柱层析得产物直接用于下一步反应。
所述取代反应产物脱除保护基P1和P2，得到2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物的反应中，对于苄基保护基使用Pd/C还原脱除的反应所用的溶剂为乙酸乙酯(EA)和甲醇的混合溶剂，其中甲醇为总体积的1～80％。
典型的用Pd/C还原脱除苄基保护基的反应如反应式13所示：上述化合物溶于乙酸乙酯和甲醇，加入0.01～0.11当量的Pd/C，常压氢化1～48小时，TLC显示反应完全后柱层析即可以得到化合物式X-01～07。
使用叠氮化物对1，6-内醚进行开环反应之后，其相应的取代反应产物在脱除P1和P2保护基之前，需要先把叠氮还原成胺，并将胺基保护。把叠氮还原成胺所用的还原剂是1～10当量的三苯基磷(Ph3P)，溶剂是四氢呋喃和水的混合溶剂，水点总体积的1～80％。用于胺基的保护基可以是甲基、乙酰基、苯甲酰基、苄基；相应的保护基试剂是碘甲烷或硫酸二甲酯，醋酐或醋酸，苯甲酰氯，苄基溴或苄基氯。
典型的叠氮还原成胺，再将胺基保护的反应如反应式15所示：式VIII-01化合物溶于四氢呋喃和水的混合溶剂中，加入1～10当量的三苯基膦，室温搅拌30min，加入过量硅胶，油浴45℃搅拌1～48小时，TLC显示反应完全后，过滤浓缩，直接下一步。
上述产物溶于合适溶剂中，加入0.01～1当量的DMAP，冰浴下加入醋酐，撤去冰浴，室温搅拌1～48小时，反应完毕后柱层析得化合物式IX-01。
本发明的第二个目的是提供一类能够抑制Bcl-xL与天然底物多肽结合的小分子抑制剂。
实验表明，2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物具有一定的抑制Bcl-xL与天然底物多肽(Bid BH3多肽)结合的活性，FP方法检测此类化合物抑制Bcl-xL与N端用5-FAM标记的Bid BH3多肽(序列为：5-FAM-QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR)结合的活性如下：
1)6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-01)在10μM下的抑制率为46.3％；
2)6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-02)在10μM下的抑制率为37.3％；
3)6-O-(5，6，7，8-四氢萘基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-03)在10μM下的抑制率为36.4％；
4)6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-04)在10μM下的抑制率为31.3％；
5)6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-05)在10μM下的抑制率为26.8％；
6)6-O-环己基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-06)在10μM下的抑制率为26.4％；
7)6-O-(联苯-4-基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-07)在10μM下的抑制率为21.9％；
8)6-O-苯基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-08)在10μM下的抑制率为20.9％；
9)6-O-(5，6，7，8-四氢萘基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-09)在10μM下的抑制率为20.6％；
10)6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-10)在10μM下的抑制率为18.7％；
11)6-O-苯基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-11)在10μM下的抑制率为18.4％；
12)6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-12)在10μM下的抑制率为15.9％；
13)6-O-(联苯-4-基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-13)在10μM下的抑制率为9.4％；
14)6-O-环己基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-14)在10μM下的抑制率为9.4％；
15)6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖乙酰胺(式X-15)在10μM下的抑制率为4.4％。
本发明的第三个目的是提供一类能够对肿瘤细胞产生有效抑制作用的抗肿瘤药物，其活性成分是2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物。
实验表明，2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞显示出强烈的抑制活性，其中X-01，X-07，X-14对MDA-MB-231的CC50值(50％Cytotoxic Concentration，半数细胞毒浓度)为23.71μM，23.31μM，7.79μM；X-01，X-05，X-07对MCF-7的CC50值分别为20.20μM，16.88μM，16.93μM。
本发明的有益效果在于提供了一类结构全新的2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物，并且创造性地揭示了该类化合物简单有效的合成方法及其应用领域，具有重要的理论及现实意义，该类化合物在医学领域将得到广泛应用，并将带来巨大的经济效益。
附图说明
图1、2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物X-01对MDA-MB-231细胞系细胞毒性测活曲线(CC50＝23.71μM)；
图2、2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物X-07对MDA-MB-231细胞系细胞毒性测活曲线(CC50＝23.31μM)；
图3、2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物X-14对MDA-MB-231细胞系细胞毒性测活曲线(CC50＝7.79μM)；
图4、2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物X-01对MCF-7细胞系细胞毒性测活曲线(CC50＝20.20μM)；
图5、2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物X-05对MCF-7细胞系细胞毒性测活曲线(CC50＝16.88μM)；
图6、2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物X-07对MCF-7细胞系细胞毒性测活曲线(CC50＝16.93μM)。
具体实施方式
实施例1：6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-02)和6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-04)的制备
一、1，6-脱水-2，3-环氧-4-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖(式II-01)的合成
将1.36g(5.0mmol)2-碘代葡萄糖1，6-内醚溶于DMF(10mL)，冷至-20℃，加入400mg NaH(10mmol)和1.5mL BnBr(12.5mol)，自然恢复至室温，TLC显示反应完全后，倒入20mL水中，加乙酸乙酯萃取，干燥减压旋干，柱层析(EA/PE＝1∶4)得化合物式II-01(938mg，产率80％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.34-7.28(m，5H)，5.72(d，J＝3.3Hz，1H)，4.64(s，2H)，4.50(d，J＝6.6Hz，1H)，3.71-3.66(m，3H)，3.46(m，1H)，3.19(m，1H).
二、1，6-脱水-4-O-苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖(式III-01)的合成
1，6-脱水-2，3-环氧-4-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖(式II-01)1.16g(5.0mmol)和对环己基氧苯酚的钾盐3.4g(15.0mmol)溶于DME(25mL)，回流反应5h，TLC显示反应完全后，倒入80mL水中，加乙酸乙酯萃取，干燥减压旋干，柱层析(EA/PE＝1∶4)得化合物式III-01(1.54g，产率73％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.34-7.26(m，5H)，6.91-6.83(m，4H)，5.55(s，1H)，4.70-4.63(m，3H)，4.15-4.05(m，1H)，4.04-3.97(m，2H)，3.89(d，J＝7.2Hz，1H)，3.75-3.71(m，1H)，3.39(s，1H)，1.99-1.95(m，2H)，1.81-1.78(m，2H)，1.57-1.26(m，6H).13C NMR(CDCl3)：δ152.6，151.2，137.7，128.5，127.9，127.8，117.6，116.8，100.7，79.7，78.7，76.4，75.5，71.9，69.7，66.6，31.9，31.9，25.6，23.8，23.8.ESI-MS(m/z)：449.4(M+Na+)；HRMS(ESI)m/z 449.1950(M+Na+)，计算值(Calcd for)C25H30O6Na+449.1935.
三、1，6-脱水-3，4-O-二苄基-2-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖(式IV-01)的合成
1，6-脱水-4-O-苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖(式III-01)895mg(2.1mmol)溶于THF(15mL)，冷至0℃，加入130mg NaH(3.2mmol)，30min后加入BnBr(0.4mL，3.2mol)和四丁基碘化氨(cat)，自然恢复至室温，TLC显示反应完全后，加EA至100mL，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶4)得黄色糖浆化合物式IV-01(1.15g，产率100％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.32-7.20(m，10H)，6.79-6.77(m，4H)，5.57(s，1H)，4.67-4.48(m，5H)，4.15-4.05(m，1H)，4.04(s，1H)，3.97(d，J＝7.2Hz，1H)，3.76-3.68(m，2H)，3.39(s，1H)，1.98-1.95(m，2H)，1.81-1.79(m，2H)，1.59-1.31(m，6H).ESI-MS(m/z)：539.4(M+Na+).
四、3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-01)的合成
1，6-脱水-3，4-O-二苄基-2-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖(式IV-01)220mg(0.43mmol)溶于乙腈(10mL)，冰浴下加入TMSOMe(0.3mL，1.3mmol)，TMSOTf(78μl，0.43mmol)，室温下反应4h，TLC显示反应完全后，然后加入100mL的EA，用饱和NaHCO3水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥之。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶5)得无色糖浆式V-01(140mg，α/β＝3∶1，产率60％)，回收原料(40mg，18％)。因是混和物无法表征。
五、6-O-对甲苯磺酰基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VI-01)的合成
3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-01)140mg(0.26mmol)溶于DCM(10mL)中，加入DMAP(cat)和TEA(0.2mL，1.4mmol)，冰浴下加入TsCl(72mg，0.38mmol)，室温下反应2h，TLC显示反应完全后，加DCM至100mL，然后用饱和NaHCO3水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥之。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶5)得化合物式VI-01(160mg，产率88％)。因是混和物无法表征。
六、6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-02)和6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-04)的合成
6-O-对甲苯磺酰基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VI-01)160mg(0.23mmol)和苯酚的钾盐100mg(0.78mmol)溶于DMF(5mL)，90℃反应8h，TLC显示反应完全后，减压旋掉大部分DMF，倒入水20mL中，加EA(100mL)萃取，干燥减压旋干，柱层析(EA/PE＝1∶10)得产物直接下一步反应。
上述化合物溶于EA(4mL)和MeOH(4mL)，加入Pd/C(cat)，常压氢化24h，TLC显示反应完全后，硅藻土助滤，旋干，柱层析(EA/PE＝1∶2)，得化合物式X-02(19mg，产率19％)和化合物式X-04(67mg，产率66％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：
化合物式X-02：[α]D20＝-13.9(c1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.30-7.25(m，2H)，7.00-6.93(m，5H)，6.78(d，J＝9.0Hz，2H)，4.42(d，J＝7.8Hz，1H)，4.31(dd，J＝1.8，9.9Hz，1H)，4.20(dd，J＝4.8，10.5Hz，1H)，4.13-4.07(m，1H)，3.91(t，J＝8.7Hz，1H)，3.78-3.68(m，3H)，3.48(s，3H)，3.03(br，1H)，2.97(br，1H)，2.00-1.93(m，2H)，1.82-1.68(m，2H)，1.60-1.26(m，6H).13C NMR(CDCl3)：δ158.7，153.5，152.9，129.5，129.5，121.2，118.3，117.3，114.9，103.4，81.8，76.6，76.4，73.9，70.8，67.7，57.2，31.9，31.9，25.7，23.8，23.8.ESI-MS(m/z)：467.2(M+Na+)；HRMS(ESI)m/z 467.2041(M+Na+)，计算值(Calcd for)C25H32O7Na+467.2040.
化合物式X-04：[α]D20＝+51.2(c1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.30-7.25(m，2H)，7.00-6.93(m，5H)，6.78(d，J＝9.0Hz，2H)，4.84(d，J＝3.3Hz，1H)，4.25-4.07(m，4H)，4.04(dd，J＝4.8，10.5Hz，1H)，4.13-4.07(m，1H)，3.79(t，J＝8.7Hz，1H)，3.60-3.58(m，2H)，3.37(s，3H)，2.04-1.93(m，2H)，1.81-1.77(m，2H)，1.58-1.26(m，6H).13C NMR(CDCl3)：δ158.7，153.1，151.6，129.4，121.0，118.3，117.4，114.8，97.2，79.6，76.3，72.7，70.3，69.7，67.1，55.3，31.9，31.9，25.6，23.8，23.8.ESI-MS(m/z)：467.3(M+Na+).
实施例2：6-O-苯基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-08)的合成
一、1，6-脱水-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖(式IV-02，163)的合成
1，6-脱水-2，3-环氧-4-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖(化合物式II-01)800mg(3.42mmol)和二氧化硫芴-3-酚2.26g(9.7mmol)溶于DMF(15mL)冷至0℃，加入NaH(230mg，5.8mmol)，120℃反应4天，TLC显示反应完全后，旋掉DMF，加EA至200mL，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶1)得黄色固体式III-02(1.36g，产率85％)。化合物未经表征直接下一步反应。
化合物式III-02(398mg，0.85mmol)溶于DMF(15mL)，冷至0℃，加入NaH(60mg，1.2mmol)，30min后加入BnBr(0.2mL，1.2mmol)和四丁基碘化氨(cat)，自然恢复至室温，TLC显示反应完全后，旋掉DMF，加EA至100mL，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶2)得黄色糖浆式IV-02(462mg，产率97％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.81(d，J＝7.5Hz，1H)，7.70(d，J＝7.5Hz，1H)，7.60(dd，J＝6.0，7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，7.60(t，J＝7.5Hz，1H)，7.35-7.28(m，11H)，6.92(dd，J＝2.7，8.7Hz，1H)，5.55(s，1H)，4.75-4.58(m，5H)，4.45-4.40(br，1H)，3.88(d，J＝7.2Hz，1H)，3.73(dd，J＝6.0，7.2Hz，1H)，3.44-3.40(m，2H).13C NMR(CDCl3)：δ159.5，139.4，137.9，137.2，133.9，131.6，129.3，128.6，128.5，128.2，128.1，124.7，122.8，122.2，121.2，120.1，109.9，100.5，77.9，76.9，76.6，74.3，72.5，71.9，65.9.ESI-MS(m/z)：579.4(M+Na+)；HRMS(ESI)m/z 579.1464(M+Na+)，Calcd for C32H28O7SNa+579.1448.
三、3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-02β)和3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-02α)的合成
制备方法同化合物式V-01，得化合物式V-02α(产率34％)，式V-02β(产率26％)，回收原料(8％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：
化合物式V-02α：[α]D20＝+5.73(c1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.81(d，J＝7.7Hz，1H)，7.70(d，J＝7.7Hz，1H)，7.63-7.56(m，3H)，7.45(t，J＝7.5Hz，1H)，7.35-7.16(m，11H)，4.84(t，J＝9.0Hz，1H)，4.71-4.55(m，5H)，3.81(m，4H)，3.60(dd，J＝3.5，9.5Hz，1H)，3.39(s，3H).13C NMR(CDCl3)：δ161.5，139.1，137.9，137.5，137.3，133.8，131.9，129.1，128.5，128.4，128.3，128.1，124.4，122.5，122.1，121.4，120.9，110.7，98.1，81.9，78.5，76.6，75.1，73.3，70.6，61.6，55.3.ESI-MS(m/z)：611.3(M+Na+).
化合物式V-02β：[α]D20＝-7.92(c 1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.81(d，J＝7.4Hz，1H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.63-7.56(m，3H)，7.45(t，J＝7.5Hz，1H)，7.27-7.11(m，11H)，4.80(d，J＝11.2Hz，1H)，4.68-4.56(m，3H)，4.49(t，J＝9.0Hz，1H)，4.42(d，J＝7.8Hz，1H)，3.95-3.91(m，1H)，3.77(t，J＝9.5Hz，1H)，3.60(s，3H)，3.49(t，J＝8.5Hz，1H)，3.42(dt，J＝3.0，9.6Hz，1H).13C NMR(CDCl3)：δ161.4，139.1，137.9，137.6，137.2，133.8，131.8，129.0，128.5，128.4，128.3，128.0，127.8 124.4，122.4，122.1，121.7，120.8，110.3，104.6，84.3，80.5，76.7，75.1，74.8，74.7，61.7，57.4.ESI-MS(m/z)：611.3(M+Na+)；HRMS(ESI)m/z 611.1719(M+Na+)，Calcd for C33H32O8SNa+ 611.1710.
四、6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-01α)的合成
3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-02α)160mg(0.3mmol)溶于DCM(10mL)中，加入DMAP(cat)和TEA(0.3mL，1.5mmol)，冰浴下加入TsCl(170mg，0.9mmol)，室温下反应2h，TLC显示反应完全后，加DCM至100mL，然后用饱和NaHCO3水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥之。过滤旋干，直接下一步。
上述化合物和苯酚的钾盐(40mg，0.3mmol)溶于DMF(5mL)，90℃反应8h，TLC显示反应完全后，减压旋掉大部分DMF，倒入水20mL中，加乙酸乙酯100mL萃取，干燥减压旋干，柱层析(EA/PE＝1∶3)，得化合物式VII-01α(2steps，产率91％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：[α]D20＝+36.57(c 1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.80(d，J＝7.7Hz，1H)，7.70(d，J＝7.7Hz，1H)，7.68-7.58(m，3H)，7.45(t，J＝7.5Hz，1H)，7.35-7.16(m，11H)，7.03-6.92(m，5H)，4.86(t，J＝8.7Hz，1H)，4.74(d，J＝3.3Hz，1H)，4.68-4.57(m，3H)，4.45(d，J＝11.1Hz，1H)，4.17(s，2H)，3.97(s，2H)，3.72(dd，J＝3.6，9.9Hz，1H)，3.41(s，3H).13C NMR(CDCl3)：δ161.5，158.4，139.0，137.9，137.5，137.1，133.8，131.8，129.5，128.9，128.5，128.4，128.3，128.1，127.9，124.4，122.5，122.1，121.2，120.8，114.6，110.6，98.1，82.0，78.3，76.8，75.2，73.3，69.1，66.2，55.3.
五、6-O-苯基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-08)的合成
6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-01α)溶于EA(4mL)和MeOH(4mL)，加入Pd/C(cat)，常压氢化24h，TLC显示反应完全后，硅藻土助滤，旋干，柱层析(EA/PE＝1∶3)，得化合物式X-08(15mg，产率37％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.68(d，J＝7.8Hz，1H)，7.60-7.50(m，4H)，7.35(t，J＝7.5Hz，1H)，7.28-7.18(m，3H)，6.93-6.77(m，3H)，4.80(d，J＝3.9Hz，1H)，4.44(t，J＝8.7Hz，1H)，4.20-4.18(m，2H)，4.08-3.73(m，3H)，3.42(s，3H)，1.98-1.89(m，2H)，1.74-1.71(m，2H)，1.35-1.22(m，8H).ESI-MS(m/z)：507.0(M+Na+).
实施例3：6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖乙酰胺(式X-15)的合成
一、3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖叠氮(式V-03)的合成
1，6-脱水-3，4-O-二苄基-2-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖(式IV-01)1.15g(2.1mmol)溶于乙腈(20mL)，冰浴下加入TMSN3(0.6mL，4.2mmol)，TMSOTf(0.38mL，2.1mmol)，室温下反应3h，TLC显示反应完全后，然后加入100mL的EA，用饱和NaHCO3水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥之。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶5)得糖浆式V-03(1.1g，α/β＝1∶1.2，产率92％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.32-7.24(m，10H)，6.98(d，J＝9.0Hz，2H)，6.84(d，J＝9.0Hz，2H)，5.46(d，J＝3.6Hz，1H)，4.93-4.89(m，2H)，4.78(d，J＝10.5Hz，1H)，4.67(d，J＝11.1Hz，1H)，4.27(dd，J＝3.6，9.3Hz，1H)，4.15-4.01(m，2H)，3.89-3.72(m，3H)，3.63(t，J＝9.6Hz，1H)，1.99-1.96(m，2H)，1.83-1.77(m，2H)，1.52-1.31(m，6H).
二、6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖叠氮(式VIII-01)的合成
3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖叠氮(式V-03)158mg(0.28mmol)溶于DCM(5mL)中，加入DMAP(cat)和TEA(0.2mL，1.4mmol)，冰浴下加入TsCl(80mg，0.42mmol)，室温下反应2h，TLC显示反应完全后，加DCM至100mL，然后用饱和NaHCO3水溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥之。过滤旋干，柱层析(EA/PE＝1∶5)分离纯化。
将所得产物和苯酚的钾盐(184mg，1.4mmol)溶于DMF(5mL)，90℃反应5h，TLC显示反应完全后，倒入水20mL中，加EA萃取，干燥减压旋干，柱层析(EA/PE＝1∶10)得无色糖浆式VIII-01(130mg，2steps，产率63％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.32-7.15(m，15H)，6.98(d，J＝9.0Hz，2H)，6.88(d，J＝9.0Hz，2H)，5.52(d，J＝4.2Hz，1H)，4.94(d，J＝10.5Hz，1H)，4.88(d，J＝10.8Hz，1H)，4.78(d，J＝10.5Hz，1H)，4.54(d，J＝10.8Hz，1H)，4.38(dd，J＝3.9，9.0Hz，1H)，4.18-4.36(m，5H)，3.87(t，J＝9.0Hz，1H)，2.00-1.94(m，2H)，1.82-1.80(m，2H)，1.58-1.24(m，6H).13C NMR(CDCl3)：δ158.5，153.2，151.6，138.2，137.9，129.5，128.4，128.3，128.2，128.0，127.9，127.8，121.2，117.8，117.6，114.7，87.5，81.0，80.0，76.4，75.8，75.4，71.9，66.2，31.9，31.9，31.8，25.7，23.8，23.8.
三、6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖乙酰胺(式IX-01)的合成
6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖叠氮(式VIII-01)86mg(0.13mmol)溶于THF(12mL)和H2O(3mL)中，加入三苯基膦(52mg，0.2mmol)，室温搅拌30min，加入硅胶(0.3g)，油浴45℃反应12h，TLC显示反应完全后，过滤，浓缩(用甲苯带几次除水)，直接下一步。
上述产物溶于吡啶(3mL)中，加入催化量的DMAP，冰浴下加入Ac2O(0.1mL)，撤去冰浴，室温反应12h，反应完毕后，旋干吡啶，用乙酸乙酯稀释至100mL，水洗，用饱和NaHCO3溶液洗涤，干燥浓缩，柱层析(EA/PE＝1∶3)。得化合物式IX-01(32mg，2steps，产率33％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.28-7.15(m，12H)，6.97-6.80(m，7H)，6.34(d，J＝6.6Hz，1H)，5.81(t，J＝5.4Hz，1H)，4.94-4.78(m，3H)，4.54(d，J＝10.8Hz，1H)，4.45(dd，J＝5.4，8.1Hz，1H)，4.20-4.11(m，3H)，3.96-3.86(m，3H)，2.08(s，3H)，1.98-1.94(m，2H)，1.81-1.79(m，2H)，1.58-1.26(m，6H).
四、6-O-苯基-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖乙酰胺(式X-15)的合成
6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖乙酰胺(式IX-01)溶于DCM(2mL)和MeOH(2mL)，加入Pd/C(cat)，常压氢化12h，TLC显示反应完全后，硅藻土助滤，旋干，柱层析(EA/PE＝1∶1)，得白色固体式X-15(21mg，产率91％)。
经检测，结构正确，检测结果如下：1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.19-7.14(m，2H)，6.87-6.82(m，5H)，6.70(d，J＝9.0Hz，2H)，5.76(d，J＝9.0Hz，2H)，5.23(dd，J＝6.9，9.6Hz，1H)，4.11-3.99(m，4H)，3.79-3.67(m，5H)，2.08(s，3H)，1.86-1.83(m，2H)，1.72-1.64(m，5H)，1.50-1.16(m，6H).13C NMR(CDCl3)：δ170.4，158.6，153.1，153.0，129.4，121.1，119.1，117.4，114.8，82.2，78.7，76.4，76.3，75.8，69.9，66.8，31.8，31.8，25.6，23.7，23.7，23.2.
实施例4：式X-01，X-03，X-05，X-06和X-07的合成
在与实施例1中合成X-02和X-04类似的条件下，从6-O-对甲苯磺酰基-3，4-O-二苄基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VI-01)出发得到以下化合物：6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-01)，6-O-(5，6，7，8-四氢萘基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-03)，6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-05)，6-O-环己基-2-O-(4-环己氧基苯基)-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-06)和6-O-(联苯-4-基)-2-O-(4-环己氧基苯基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-07)。
实施例5：式X-09，X-12和X-14的合成
一、式VII-02α，VII-03α和VII-05α的合成
在与实施例2中合成VII-01α类似的条件下，从3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-02α)出发得到以下化合物：6-O-萘基-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-02α)，6-O-(萘-2-基)-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-03α)，6-O-环己基-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-05α)。
二、式X-09，X-12和X-14的合成
在与实施例2中合成式X-08类似的条件下，从相应的式VII-02α，VII-03α和VII-05α出发得到以下化合物：6-O-(5，6，7，8-四氢萘基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-09)，6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-12)，6-O-环己基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-α-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-14)。
实施例6：式X-10，X-11和X-13的合成
一、式VII-01β，VII-03β和VII-04β的合成
在与实施例2中合成VII-01α类似的条件下，从3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式V-02β)出发得到以下化合物：6-O-苯基-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-01β)，6-O-(萘-2-基)-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-03β)，6-O-(联苯-4-基)-3，4-O-二苄基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式VII-04β)。
二、式X-10，X-11和X-13的合成
在与实施例2中合成式X-08类似的条件下，从相应的式VII-01β，VII-03β和VII-04β出发得到以下化合物：6-O-苯基-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-11)，6-O-(5，6，7，8-四氢-[2]-萘基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-10)，6-O-(联苯-4-基)-2-O-(5，5-二氧-5H-5λ6-硫芴-3-基)-β-D-吡喃葡萄糖甲苷(式X-13)。
实施例7：2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物对Bcl-xL抑制作用的荧光偏振检测
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的Bcl-xL(GST-Bcl-xL)蛋白在大肠杆菌BL21中表达，经谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析的方法分离纯化；荧光标记多肽为N端用5-FAM标记的Bid BH3多肽(序列为：5-FAM-QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR)。
在测试缓冲液(1×磷酸盐缓冲溶液，含0.02％(w/v)NaN3)中加入GST-Bcl-xL的1×PBS溶液，分别加入DMSO(2μL)和待测化合物的DMSO溶液(终浓度为10μM)，混匀后室温避光孵育30min；再加入荧光标记多肽的1×PBS溶液(终浓度为10nM)，使各溶液的总体积均为200μL，混匀后室温避光孵育20min；将上述溶液及校正溶液1(1nM fluorescein)和校正溶液2(10mM NaOH)各取60μL转移至黑色384孔板中(平行三组)，立即在酶标仪上进行荧光偏振的检测，以485nM为激发波长，535nM为发射波长，将校正溶液的荧光偏振值定为20mP，测得各化合物的荧光偏振值(mP)。
结果见表1：
表1：化合物X-01-X-15的荧光偏振检测结果
| 化合物 | GST-Bcl-xL的浓度 | GST-Bcl-xL与多肽的解离常数Kd | 对照mP±SD | 荧光标记多肽mP±SD | 化合物mP±SD | 抑制率％ |
| X-01 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 178.75±3.69 | 46.3 |
| X-02 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 187.34±12.06 | 37.3 |
| X-03 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 188.17±4.11 | 36.4 |
| X-04 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 193.03±1.95 | 31.3 |
| X-05 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 197.38±12.28 | 26.8 |
| X-0 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.4 | 127.48±14.1 | 197.7±11.31 | 26. |
| 6 | 3 | 8 | 4 | |||
| X-07 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 202.05±3.04 | 21.9 |
| X-08 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 202.98±5.58 | 20.9 |
| X-09 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 203.27±6.09 | 20.6 |
| X-10 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 205.09±5.14 | 18.7 |
| X-11 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 205.33±13.48 | 18.4 |
| X-12 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 207.76±5.43 | 15.9 |
| X-13 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 213.95±2.12 | 9.4 |
| X-14 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 213.97±9.04 | 9.4 |
| X-15 | 87.5nM | 75nM | 222.91±7.43 | 127.48±14.18 | 218.68±8.30 | 4.4 |
实施例8：2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系的细胞毒性检测
一、化合物X-02，X-05，X-06，X-07，X-08，X-10，X-12，X-13，X-14在20μM下对MDA-MB-231细胞抑制率测定
4×104/ml MDA-MB-231细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，与不同的待测化合物溶液混合(终浓度20μM)，37℃，5％CO2培养2天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算细胞抑制率。
表2：化合物X-02，X-05，X-06，X-07，X-08，X-10，X-12，X-13，X-14在20μM下对MDA-MB-231细胞抑制率测定
二、化合物X-01对MDA-MB-231的细胞毒性检测
4×104/ml MDA-MB-231细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，加入混合了不同浓度化合物的DMEM培养液，37℃，5％CO2培养2天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算CC50值(50％Cytotoxic Concentration)为23.71μM。
表3：化合物X-01对MDA-MB-231细胞毒性
三、化合物X-07对MDA-MB-231的细胞毒性检测
4×104/ml MDA-MB-231细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，加入混合了不同浓度化合物的DMEM培养液，37℃，5％CO2培养2天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算CC50值(50％Cytotoxic Concentration)为23.31μM。
表4：化合物X-07对MDA-MB-231细胞毒性
四、化合物X-14对MDA-MB-231的细胞毒性检测
4×104/ml MDA-MB-231细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，加入混合了不同浓度化合物的DMEM培养液，37℃，5％CO2培养2天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算CC50值(50％Cytotoxic Concentration)为7.79μM。
表5：化合物X-14对MDA-MB-231细胞毒性
实施例9：2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物对人乳腺癌MCF-7细胞系的细胞毒性检测
一、化合物X-01，X-03，X-05-X-15在20μM下对MCF-7细胞抑制率测定6×104/ml MCF-7细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，与不同的待测化合物溶液混合(终浓度20μM)，37℃，5％CO2培养4天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算细胞抑制率。
表6：化合物X-01，X-03，X-05-X-15在20μM下对MCF-7细胞抑制率测定
二、化合物X-01对MCF-7的细胞毒性检测
6×104/ml MCF-7细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，加入混合了不同浓度化合物的DMEM培养液，37℃，5％CO2培养4天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算CC50值(50％Cytotoxic Concentration)为20.20μM。
表7：化合物X-01对MCF-7细胞毒性
三、化合物X-05对MCF-7的细胞毒性检测
6×104/ml MCF-7细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，加入混合了不同浓度化合物的DMEM培养液，37℃，5％CO2培养4天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算CC50值(50％Cytotoxic Concentration)为16.88μM。
表8：化合物X-05对MCF-7细胞毒性
四、化合物X-07对MCF-7的细胞毒性检测
6×104/ml MCF-7细胞悬液100μL每孔，孵育一天后，加入混合了不同浓度化合物的DMEM培养液，37℃，5％CO2培养4天，采用MTT比色法检测细胞毒性。570nm TECAN GENios Pro多功能酶标仪测定OD值，计算CC50值(50％Cytotoxic Concentration)为16.93μM。
表9：化合物X-07对MCF-7细胞毒性
Claims (7)
1、一种芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物，具有如下的结构式：
式中R1为4-环己氧基苯基或二苯并二氧化噻吩-3-基；R2为苯基、环己基、联苯-4-基、5，6，7，8-四氢萘-1-基或6，7，8-四氢萘-2-基；R3为α-甲氧基、β-甲氧基或β-乙酰氨基。
2、一种制备如权利要求1所述的2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷化合物的方法，其特征是包括以下步骤：
1)在有机溶剂中和碱性条件下，用保护基原位保护4位羟基，2-碘代葡萄糖-1，6-内醚、碱和保护基发生环氧化反应1～48小时，反应温度是从-78℃到室温；所述的2-碘代葡萄糖-1，6-内醚、碱和保护基摩尔比为1∶1～10∶1～10；
2)环氧化反应生成的化合物与酚类发生环氧开环反应；反应温度是从-78℃到溶剂回流的温度；反应时间从1小时到48小时；采用1当量的环氧化反应产物，1～10当量的酚类化合物；所述酚类是含氧、硫或同时含氧和硫杂原子取代的碳数为6～16的酚，或这些酚的金属盐，金属离子为锂，钠，钾，铯，钙或镁；
3)步骤2)的1，6-内醚的环氧开环反应产物经保护基保护，在有机溶剂中和催化剂存在下，和亲核试剂在从-78℃到溶剂回流的温度进一步发生1，6-内醚的开环反应1小时到48小时；步骤2)的1，6-内醚的开环反应产物、亲核试剂和催化剂的摩尔比为1∶1～10∶0.01～10；所述的亲核试剂是酚、硫酚、叠氮、卤素、烷基、烷氧基的金属盐类化合物或三甲基硅烷类化合物；所述的催化剂是三氟化硼乙醚溶液、二碘化锌或三氟甲磺酸三甲基硅酯；
4)在有机溶剂中和-78℃到溶剂回流的温度下，步骤3)的1，6-内醚开环反应产物经保护基保护，再与酚类或醇类发生取代反应1小时到48小时；所述的步骤3)的1，6-内醚开环反应产物和酚类或醇类的摩尔比为1∶1～10；所述酚类是萘酚、四氢萘酚、苯酚或是有卤素、烷基、烷氧基或芳基取代的碳数为6～16的苯酚，或这些酚的金属盐，所述的金属离子为锂、钠、钾、铯、钙或镁；所述的醇类是碳数为4～8的脂肪醇或环己醇、或这些醇的金属盐，金属离子为锂、钠、钾、铯、钙或镁；
5)取代反应产物脱除保护基，得到2-芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物；除保护基的条件是：对苄基保护基使用Pd/C还原脱除，所用的溶剂为乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂，其中甲醇为总体积的1～80％，使用的Pd/C为0.01～0.1当量；其他类型保护基用经典方法脱除。使用叠氮化物对1，6-内醚进行开环反应之后，在脱除保护基之前，需在溶剂中用还原剂先将叠氮还原成胺，并将胺基保护；所用的还原剂是1～10当量的三苯基磷，溶剂是四氢呋喃和水的混合溶剂，水占总体积的1～80％；用于胺基的保护基是甲基、乙酰基、苯甲酰基或苄基。
步骤1)、3)和4)所述的保护基是乙酰基、叔丁氧羰基、苯甲酰基、三氟甲磺酰基、对甲苯磺酰基或苄基；相应的典型的保护基试剂是醋酐或醋酸、二碳酸二叔丁酯、苯甲酰氯、三氟甲磺酸酐或三氟甲磺酰氯、对甲苯磺酰氯、苄基溴或苄基氯。
3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)的碱是氢化钠(NaH)、氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化钡；金属离子为锂、钠、钾、铯、钙或镁的碳酸盐；金属离子为钾、钠或铵的醋酸盐或三乙胺。
4、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)所述的有机溶剂是二氯甲烷、乙二醇二甲醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、1，4-二氧六环、吡啶、四氢呋喃或乙腈。
5、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤2)和步骤4)中所述的有机溶剂是丙酮、乙醚、乙二醇二甲醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、1，4-二氧六环、吡啶、四氢呋喃或乙腈。
6、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤5)用于胺基的保护基可以是甲基，乙酰基，苯甲酰基，苄基；相应的保护基试剂是碘甲烷或硫酸二甲酯，醋酐或醋酸，苯甲酰氯，苄基溴或苄基氯。
7、一类如权利要求1所述的芳基-6-芳基’-葡萄糖苷类化合物的用于制备Bcl-2家族蛋白的小分子抑制剂或抗肿瘤药物。
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