CN101332187A - 氨苯砜脂质体及其制备 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种氨苯砜脂质体，由氨苯砜、磷脂和亲脂性添加剂组成，其重量份数为：氨苯砜1、磷脂0.5～100、亲脂性添加剂0.3～3。本发明的氨苯砜脂质体，较目前常用剂型能明显减少药物的刺激性和毒性，提高药物的生物利用度，改善患者用药的顺应性，具有极大的临床推广应用价值。

Description

氨苯砜脂质体及其制备

技术领域

本发明属于医药技术与药剂学领域，尤其涉及一种氨苯砜脂质体及其制备方法。

背景技术

氨苯砜(4，4’-二氨基二苯砜，DDS)为砜类抑菌剂，对麻风杆菌有较强的抑菌作用，大剂量时显示杀菌作用。其作用机制与磺胺类药物相似，作用于细菌的二氢叶酸合成酶，干扰叶酸的合成。两者的抗菌谱相似，均可为氨基苯甲酸所拮抗。本品亦可作为二氢叶酸还原酶抑制剂。此外，本品尚具免疫抑制作用，可能与抑制疱疹样皮炎的作用有关。如长期单用，麻风杆菌易对本品产生耐药。

目前应用的DDS是剂量为50mg、100mg不等的口服片剂，70％～80％经胃肠道吸收后与胆汁结合进人肝循环，2～6小时后在血液中达高峰，终产物经尿液排出体外。因此测定尿中DDS及其代谢产物的浓度可估计病人服药的依从性：DDS作为抗菌药应用于其它皮肤病的作用机理尚不清楚，由经验知其对以免疫复合物沉积和多形核白细胞提润为主要组织学特征的一组疾病疗效较好，这可能与DDS稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的活性有关。

氨苯砜与其他抑制麻风药联合用于由麻风分枝杆菌引起的各种类型麻风和疱疹样皮炎的治疗，也用于脓疱性皮肤病、类天疱疮、坏死性脓皮病、复发性多软骨炎、环形肉芽肿、系统性红斑狼疮的某些皮肤病变、放线菌性足分支菌病、聚会性痤疮、银屑病、带状疱疹的治疗。可与甲氧苄啶联合治疗肺泡三者联合用于预防间日疟。

近年对氨苯砜的研究主要集中在除治疗麻风病以外的新适应症：聚会性痤疮、银屑病、带状疱疹，等，且疗效显著，目前，国外已有氨苯砜凝胶进入三期临床试验，并申请了凝胶、乳膏、洗剂专利，但尚未见新药问世。

氨苯砜片存在着一些不良反应：1.治疗初期，部分患者可产生轻度不适，如恶心、上腹不适、纳差、头痛、头晕、失眠、无力等，但不久均可自行消失。2.贫血，可由于溶血、缺铁或营养不良所致，一般见于治疗初期，且能自行纠正。亦可有粒细胞缺乏、白细胞减少等血液系统反应。3.药疹，严重者表现为剥脱性皮炎，如有发热、淋巴结肿大、肝、肾功能损害和单核细胞增多，称为“氨苯砜综合征”。4.急性中毒，一次服用大剂量本品可使血红蛋白转为高铁血红蛋白，造成组织缺氧、紫绀、中毒性肝炎、肾炎和神经精神等损害，如未及时治疗可致死亡。

脂质体制备工艺简单，将药物包封于脂质体中，能降低药物的毒性，增强药理活性及生物利用度，而且能够降低药物的消除速率，延长药物作用时间，增强药物在体内外的稳定性。同时，作为膜材的磷脂，本身无毒，对心脑血管疾病具有积极的预防作用。然而，在检索的有关氨苯砜制剂中，还为见有氨苯砜脂质体及其制备与应用的报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种氨苯砜脂质体及其制备方法。

本发明所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，由氨苯砜、磷脂和亲脂性添加剂组成，其重量份数为：

氨苯砜    1

磷脂            0.5～100

亲脂性添加剂    0.3～3。

上述的氨苯砜脂质体，其组分的重量份数优选：

氨苯砜          1

磷脂            0.5～20

亲脂性添加剂    0.5～1.5。

上述的氨苯砜脂质体，其组分的重量份数最优选：

氨苯砜          1

磷脂            1～10

亲脂性添加剂    0.7～1.2。

上述氨苯砜脂质体组分中，所述的磷脂是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰胆碱，或其任意重量比的混合物。

进一步的，所述的磷脂优选是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰甘油，或其任意重量比的混合物；最优选是大豆卵磷脂。

上述氨苯砜脂质体组分中，所述的亲脂性添加剂是硬脂胺、磷脂酸、维生素E、甘露醇、胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯或/和羊毛酯提取物。

进一步的，所述的亲脂性添加剂优选胆固醇、维生素E或/和甘露醇。

本发明所述氨苯砜脂质体的制备方法，该方法选自薄膜法、逆相蒸发法、复乳法、注入法、熔融法、冷冻干燥法、表面活性剂法或钙诱导融合法。

上述氨苯砜脂质体的制备方法中，进一步优选的方法为薄膜法，该方法的具体步骤为：将处方量的氨苯砜、磷脂和亲脂性添加剂置于瓶中，用其2～5倍体积量的有机溶剂溶解，于30-70℃温度下减压蒸发除去有机溶剂，在瓶壁上形成薄膜，加与有机溶剂等体积量的pH4-8的磷酸盐缓冲液，以振摇、搅拌、超声或涡旋混合中的一种或几种方式使之充分水合，混合时间为10-120分钟，混合均匀即形成氨苯砜脂质体。

其中，所述有机溶剂是甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或其任意体积比的混合物。

本发明方法制备的氨苯砜脂质体可以将氨苯砜包封于磷脂双分子层形成的薄膜中间，稳定性好，不易结晶，且易于溶解，更适于临床使用。本发明的氨苯砜脂质体可进一步制成片剂、粉末剂、颗粒剂、冲剂、胶囊剂、丸剂、洗剂、乳剂、软膏剂、凝胶剂、气雾剂、注射剂、粉针剂。

口服、外用或注射本发明所述的氨苯砜脂质体，较目前常用剂型能明显减少药物的刺激性和毒性，提高药物的生物利用度，改善患者用药的顺应性。

本发明的氨苯砜脂质体制剂，一般用于由麻风分枝杆菌引起的各种类型麻风和疱疹样皮炎的治疗，也用于脓疱性皮肤病、类天疱疮、坏死性脓皮病、复发性多软骨炎、环形肉芽肿、系统性红斑狼疮的某些皮肤病变、放线菌性足分支菌病、聚会性痤疮、银屑病、带状疱疹的治疗。本发明的氨苯砜脂质体制剂的使用剂量，以药典规定的剂量为使用量。

附图说明

图1氨苯砜脂质体的释放曲线。

其中：◆氨苯砜混悬液；▲氨苯砜脂质体。

图2氨苯砜凝胶累积渗透量Q-t曲线图。

其中：

5％氨苯砜凝胶；5％氨苯砜脂质体凝胶。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围，不局限于此。

实施例1逆相蒸发法制备氨苯砜脂质体

取大豆卵磷脂0.7g、胆固醇0.1g、氨苯砜0.1g及维生素E 0.02g，置500ml茄形瓶中，加入25ml CH₂Cl₂溶解后，加入pH6.8磷酸盐缓冲液10ml，振摇并超声使之分散成W/O型乳剂，置旋转蒸发仪上50℃减压蒸发除去CH₂Cl₂，到达胶态后，再加磷酸盐缓冲液15ml，旋转蒸发使器壁上的凝胶脱落，继续减压蒸发得到氨苯砜脂质体。包封率为46.59％。

实施例2薄膜法制备氨苯砜脂质体

取大豆卵磷脂1.4g，胆固醇0.28g，氨苯砜0.35g，维生素E 0.05g，置500ml茄形瓶中，加入20ml CH₂Cl₂溶解，置旋转蒸发仪上40℃减压干燥成膜。加pH7磷酸盐缓冲液20ml，涡旋混合30分钟使之混合均匀，即得脂质体。包封率72.34％。

实施例3复乳法制备氨苯砜脂质体

取大豆卵磷脂0.7g、胆固醇0.14g、氨苯砜0.18g及维生素E 0.03g，置500ml茄形瓶中，加入30ml氯仿溶解后，加入磷酸盐缓冲液10ml，振摇并超声使之分散成W/O型乳剂，再加磷酸盐缓冲液50ml，振摇并超声使之分散成W/O/W型乳剂，置旋转蒸发仪上40℃减压蒸去CH₂Cl₂，得氨苯砜脂质体。包封率32.41％。

实施例4注入法制备氨苯砜脂质体

取大豆卵磷脂0.7g，胆固醇0.2g，氨苯砜0.2g，维生素E 0.04g，用30ml乙醚溶解。取磷酸盐缓冲液保温在60℃电磁恒温水浴中，用微量注射器将乙醚溶液缓缓注入缓冲液中，并同氮气去除残余乙醚蒸气，得到氨苯砜脂质体。包封率为45.23％。

实施例5氨苯砜脂质体片剂

将氨苯砜脂质体经冷冻干燥，粉碎，过筛，加常规辅料压片，得到氨苯砜脂质体片剂。

实施例6氨苯砜脂质体颗粒剂

将氨苯砜脂质体经冷冻干燥，加入常规赋形剂，加常规黏合剂制软材，制粒，干燥，分装，得到氨苯砜脂质体颗粒剂。

实施例7氨苯砜脂质体硬胶囊

将氨苯砜脂质体经冷冻干燥，粉碎，过筛，加常规辅料混合均匀，分装到胶囊壳内，得到氨苯砜脂质体硬胶囊。

实施例8氨苯砜脂质体气雾剂

将氨苯砜脂质体混悬液与抛射剂一起装入气雾剂装置中，得到氨苯砜脂质体气雾剂。氨苯砜脂质体混悬液在抛射剂作用下呈气雾状喷出。

实施例9氨苯砜脂质体注射剂

将氨苯砜脂质体加生理盐水稀释，加注射剂常用附加剂，微孔滤膜滤过，灌装，灭菌，得氨苯砜脂质体注射剂。

实施例10脂质体的体外释放

制备0.7％氨苯砜脂质体及0.7％氨苯砜混悬液。精密量取0.7％氨苯砜脂质体及0.7％氨苯砜混悬液各3份，每份1.0ml，分别置于面积同样大小的高密度透析袋中，固定于溶出仪的搅拌浆上，pH6.5磷酸盐缓冲液200ml为释放介质，37℃，100r/m条件下进行释放试验。

取体外释放试验所得的样品溶液，以甲醇为空白，在295nm处测定吸光度。计算各样品体外释放度。结果见下表1及图1：

表1 0.7％混悬液及脂质体体外释放度(n＝3)

释放曲线见图1。

从上表1和图1中可以看出，混悬液在1/2h时释放即超过40％，而脂质体只有22％左右的释放，脂质体明显具有缓释作用。

实施例11脂质体凝胶的透皮吸收

制备5％DDS凝胶、5％DDS脂质体凝胶，以进行脂质体凝胶的透皮吸收试验。

离体大鼠皮肤的制取：取体重为200±20g得SD雌性大鼠，自然饲养1天，于次日试验前断颈处死，立即剥离背部皮肤，分离皮下脂肪组织和粘连物，小心刮去背部毛，用纯化水和生理盐水冲洗干净，浸泡于生理盐水中，置冰箱中4℃保存备用。

透皮试验：采用改进的Franz扩散池在37±0.3℃进行透皮试验。将大鼠皮肤固定于供给室和接受室之间，皮肤表皮皮层面向供给室，真皮层面向接受室，扩散池的有效渗透面积为2.8cm²，接受液为含0.09％苯扎溴铵防腐剂的生理盐水，接受室体积为6.5ml。

取5％DDS凝胶、5％DDS脂质体凝胶各3份，每份各0.5g，分别均匀涂布于供给室中的皮肤表面，安好装置，加入接受液，使皮肤与接受液接触，接受池置于37±0.3℃恒温水浴中，开启电磁搅拌以300r/min的速度搅拌。于0.5、1、2、4、6、8、12、24h时分别取出全部接受液，并立即加入新的接受液。将取出的各接受液分别精密加入甲醇5ml，以甲醇为空白，在295nm处测定吸光度。计算各样品的累积渗透量。结果见下列表2及图2：

表2平均累积渗透量(Q＝Cn·V/A)

累积渗透曲线见图2：

从上表2及图2中可以看出，由DDS脂质体制备的5％DDS脂质体凝胶透皮扩散较5％DDS凝胶好，具有明显的促透优势，可能是由于脂质体具有类细胞结构，可以和皮肤表面融合，有利于药物透过。

实施例12氨苯砜脂质体凝胶的皮肤刺激性试验

给药途径：涂抹家兔皮肤。

方法：单次给药与多次给药。

单次给药：取6只家兔，按照体重随机分为2组，每组3只，其中一组为完整皮肤，另一组为破损皮肤。实验前24小时于家兔背部脊柱两侧脱毛，面积每侧约50cm²。破损皮肤组用8号灭菌针头将家兔背部两侧脱毛部位已消毒的皮肤各划“#”字形创面，横竖长度各约2cm(每侧2个“#”字形创面)，深度以渗血为宜，致皮肤破损过程中应使脊柱两侧皮肤破损程度一致。两组家兔背部左侧均涂抹氨苯砜脂质体凝胶1.0g，背部右侧均涂抹赋形剂1.0g，用油纸和纱布包扎，胶布固定24小时后用温水洗净，观察去除受试物后1、24、48、72小时受试部位皮肤反应情况。

多次给药：取6只家兔，分组、备皮标准及受试物用量同单次给药，每日涂抹给药1次，用油纸和纱布包扎，胶布固定6小时，连续7天，每日观察受试部位皮肤反应情况。

评价标准见下表3及表4：

表3皮肤刺激反应评分标准

表4皮肤刺激反应强度评价标准

结果：氨苯砜脂质体凝胶一次涂抹给药对家兔完整皮肤和破损皮肤刺激作用见表5，多次给药对家兔完整皮肤和破损皮肤刺激作用见表6。

表5氨苯砜脂质体凝胶一次涂抹给药对家兔皮肤刺激作用结果(n＝3)

表6氨苯砜脂质体凝胶多次涂抹给药对家兔皮肤刺激作用结果(n＝3)

由表5可见，家兔受试部位在去除药物后1、24、48、72小时，对完整皮肤和破损皮肤均无刺激作用。

由表6可见，家兔连续涂抹氨苯砜脂质体凝胶7天，对完整皮肤和破损皮肤均无刺激作用。

结论：以上试验说明，对家兔皮肤单次和多次局部涂抹给药，氨苯砜脂质体凝胶对完整皮肤和破损皮肤均无刺激作用。

实施例13氨苯砜脂质体凝胶的皮肤过敏性试验

给药途径：涂抹皮肤

方法：致敏接触与激发接触

分组给药：将动物随机分为三组，10只/组，分别为阳性对照物(2，4-二硝基氯代苯)组、氨苯砜脂质体凝胶组及赋形剂对照组。在给药前24小时将豚鼠背部左侧或右侧与脱毛，左、右两侧脱毛面积分别约为3×3cm²。

致敏接触：取氨苯砜脂质体凝胶(0.2g/侧)，涂抹于该组豚鼠左侧背部脱毛区皮肤，赋形剂(0.2g/侧)组及阳性对照物(1.0％2，4-二硝基氯代苯0.1ml/侧)组方法同上，并以油纸和纱布包扎，胶布固定6小时，于第7天和第14天以同样方法重复一次。

激发接触：于末次致敏接触后14天，氨苯砜脂质体凝胶组和赋形剂组各以0.2g涂抹于该组豚鼠右侧背部脱毛区皮肤，阳性对照组以1.0％2，4-二硝基氯代苯0.1ml/侧涂抹，覆盖固定6小时后去除覆盖物，即刻观察，然后于24、48和72小时分别观察皮肤过敏反应情况。

评价标准：见表7和表8。

表7皮肤过敏反应评分标准

反应平均值＝(红斑形成总分+水肿形成总分)/每组动物数

表8皮肤致敏率分类

致敏率(％)＝出现皮肤过敏的动物数/每组动物数

结果：各组分别经致敏接触与激发接触试验后，在限定的时间内观察结果，见表9。

表9氨苯砜脂质体凝胶皮肤过敏试验结果

由表9可见，氨苯砜脂质体凝胶组和赋形剂组豚鼠受试区皮肤自激发接触6小时后即刻观察至72小时均未出现红斑或水肿，致敏率均为0。阳性对照组豚鼠受试区皮肤自激发接触6小时后即刻观察，有中度或轻度红斑出现并持续至72小时，未见明显水肿出现，致敏率为100％。

结论：氨苯砜脂质体凝胶豚鼠皮肤过敏性试验结果为阴性。

实施例14氨苯砜脂质体凝胶临床应用

氨苯砜脂质体凝胶治疗儿童掌跖脓疱病

儿童掌跖脓疱病32例，男18例，女14例。年龄6～14岁。病程0.5～2年。跖部双侧患病5例。32例病人皮疹主要见于掌跖部，多对称分布。25例患者手掌皮疹见于大小鱼际处，7例皮疹累及远端。皮疹多为红斑、水疱、脓疱，表面有大量鳞屑剥脱。掌跖皮肤粗糙增厚。氨苯砜脂质体凝胶外用擦患处，每天2～3次，2周后皮损消退，全部临床治愈。未发现副作用，随访半年无复发。

氨苯砜脂质体凝胶治疗痤疮

寻常型痤疮患者100例，男55例，女45例。年龄15-20岁。病程1～3年。以病变面部炎症为主，少数罹患胸背部。氨苯砜脂质体凝胶外用擦患处，每天2～3次，12周后，治愈76.3％。未发现副作用，随访半年33.1％复发。

Claims (10)

1.一种氨苯砜脂质体，其特征在于，由氨苯砜、磷脂和亲脂性添加剂组成，其重量份数为：

氨苯砜          1

磷脂            0.5～100

亲脂性添加剂    0.3～3。

2.如权利要求1所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，所述组分的重量份数为：

氨苯砜          1

磷脂            0.5～20

亲脂性添加剂    0.5～1.5。

3.如权利要求2所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，所述组分的重量份数为：

氨苯砜          1

磷脂            1～10

亲脂性添加剂    0.7～1.2。

4.如权利要求1～3之一所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，所述的磷脂是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、双肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰胆碱，或其任意重量比的混合物。

5.如权利要求4所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，所述的磷脂是大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰甘油，或其任意重量比的混合物。

6.如权利要求1～3之一所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，所述的亲脂性添加剂是硬脂胺、磷脂酸、维生素E、甘露醇、胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯或/和羊毛酯提取物。

7.如权利要求6所述的氨苯砜脂质体，其特征在于，所述的亲脂性添加剂是胆固醇、维生素E或/和甘露醇。

8.权利要求1～3之一所述氨苯砜脂质体的制备方法，该方法选自薄膜法、逆相蒸发法、复乳法、注入法、熔融法、冷冻干燥法、表面活性剂法或钙诱导融合法。

9.如权利要求8所述氨苯砜脂质体的制备方法，其特征在于，所述方法为薄膜法，该方法的具体步骤为：将处方量的氨苯砜、磷脂和亲脂性添加剂置于瓶中，用其2～5倍体积量的有机溶剂溶解，于30-70℃温度下减压蒸发除去有机溶剂，在瓶壁上形成薄膜，加与有机溶剂等体积量的pH4-8的磷酸盐缓冲液，以振摇、搅拌、超声或涡旋混合中的一种或几种方式使之充分水合，混合时间为10-120分钟，混合均匀即形成氨苯砜脂质体。

10.如权利要求8所述氨苯砜脂质体的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂是甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或其任意体积比的混合物。

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