CN101308145A - 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法 - Google Patents
一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101308145A CN101308145A CNA2008101235210A CN200810123521A CN101308145A CN 101308145 A CN101308145 A CN 101308145A CN A2008101235210 A CNA2008101235210 A CN A2008101235210A CN 200810123521 A CN200810123521 A CN 200810123521A CN 101308145 A CN101308145 A CN 101308145A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dexamethasone
- antibody
- antigen
- sample
- tested
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 title claims abstract description 58
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 title claims abstract description 53
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 7
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 3
- PYFRDWWOBIZEKQ-UHFFFAOYSA-N [Dy].[Cr] Chemical compound [Dy].[Cr] PYFRDWWOBIZEKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 3
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 claims description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 abstract 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 abstract 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229910004613 CdTe Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000004140 ketosis Effects 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法，属于免疫检测方法技术领域。本发明用于标记抗体的量子点为QD545，将包被原直接包被在酶标板的微孔中，加入地塞米松标准溶液或待测样品形成抗原－抗体发光免疫复合体，用荧光酶标仪激发并检测所形成的抗原－抗体发光免疫复合物的荧光强度，通过与标准溶液对比求出待测样品中地塞米松的浓度。本发明不需加显色物质就能检测待测样品中地塞米松的含量，即通过抗原－抗体免疫复合物的荧光强度，间接检测待测样品中地塞米松的浓度值，无论操作还是反应均只需一步就可完成；本方法用于标记抗体的量子点与传统荧光相比，发射的荧光强度更强，且荧光稳定时间长。
Description
技术领域
一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法，属于免疫检测方法技术领域。
背景技术
地赛米松(Dexamethasone)属人工合成类糖皮质激素，化学名称为16α-甲基-11β，17α，21-三羟基-9α-氟孕甾-1，4-二烯-3，20二酮。具有抗过敏、抗炎和影响糖代谢的作用，常被用于治疗家畜的炎症反应、免疫性疾病、牛的酮病和羊妊娠毒血症等。地赛米松还常被用作生长促进剂，增加家畜的饲料摄入量从而使其达到增重的目的。然而，经毒理学试验证明，该药物具有致突变性、蓄积毒性，ADI值为0.000015mg/kgbw/day。若随意在饲料中添加该药物，蓄积的药物通过食物链进入人体，将造成巨大的危害。为此许多国家将此类药物列入禁用药物名单。当今国际上常用的地塞米松残留的检测方法有：薄层色谱(TLC)、液相色谱(LC)、气相色谱(GC)、气-质联用法(GC-MS)、液-质联用法(LC-MS)等，但这些仪器分析方法不仅需要昂贵的仪器设备，对检材的要求也比较高，需要经过复杂的样品前处理才能进行。国外早已经开展了对糖皮质激素分析方法的研究，常用的方法为酶联免疫分析法(ELISA)或称为免疫酶定量分析法(IEMA)。这类方法是将包被原包被酶标板，加入药物及抗药物抗体，再加入酶标二抗，即检测抗体，最后加入底物显色，一定时间后，用酶标仪检测某一特定波长的吸光度值，根据已知标准品含量计算样品中待测药物的浓度，此操作繁琐，费时。
发明内容
本发明的目的是提供量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法，该方法具有高灵敏度、高特异性、高准确度、操作简单的量子点标记的荧光免疫检测法，用于地塞米松残留的快速检测。
本发明的技术方案：一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法，将包被原直接包被在酶标板的微孔中，加入地塞米松标准溶液或待测样品形成抗原-抗体发光免疫复合体，用荧光酶标仪激发并检测所形成的抗原-抗体发光免疫复合物的荧光强度，与标准溶液对比求出待测样品中地塞米松的浓度；
(一)用变性牛血清蛋白dBSA包裹发绿光的QD545标记抗地塞米松多克隆抗体
(1)BSA变性：
将16.5mgBSA溶于10mL双蒸水中，搅拌下加入0.42mg NaBH4，室温下反应1h，60-80℃下加热20min分解过量的NaBH4，BSA变性，二硫键打开成-SH，控制最终的dBSA水溶液的浓度为5×10-5M；
(2)变性BSA包裹量子点dBSA-QDs：
将dBSA和量子点镝化铬Cd Te按摩尔比1∶1～1∶6混合，60-80℃水浴加热15min，室温下保持两天，使包裹完全；
(3)变性BSA包裹量子点偶联抗体
将0.056M的5μL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺EDC与0.1M的5μL硫代N-羟基琥珀酰亚胺sulfo-NHS混合10s后，加入至25μL dBSA-QDs 2×10-5M中，变性BSA包裹的量子点活化15min，加入9.6μL地塞米松抗体Ab5×10-5M，反应物摩尔比控制为：dBSA-QDs∶Ab∶EDC∶sulfo-NHS＝1∶1∶560∶1000，室温下反应4h，得到量子点标记的地塞米松抗体，反应液中抗体的浓度为1.15mg/mL，用0.1％明胶的含吐温的pH 7.4，0.01M磷酸盐缓冲液作抗体稀释液稀释1000倍待用；
(二)抗原的包被
用地塞米松与卵血清白蛋白偶连体作为包被原，用pH 9.6，0.05M碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，用包被缓冲液将地塞米松包被原稀释至1-20μg/mL作为包被液，在酶标板的每孔中加100μL包被液，4℃冰箱过夜，用含NaCl 8.5g/L、pH 7.2-7.4、10mmol/L磷酸盐缓冲液洗三次，按200μL/孔加0.1％明胶进行封闭；
(三)抗原-抗体二元发光免疫复合体的形成
在封闭后的酶标板孔中加入地塞米松标准溶液或待测样品50μL，稀释的量子点标记的地塞米松抗体50μL，37℃孵育1h，抗原与地塞米松药物竞争抗体，部分抗体与抗原形成抗原-抗体二元免疫复合物，用含NaCl 8.5g/L、pH 7.2-7.4、10mmol/L磷酸盐缓冲液洗三次，去掉非特异性吸附；
(四)定量荧光检测
用荧光酶标仪激发并检测所形成的抗原-抗体发光免疫复合物的荧光强度，激发波长：430nm；发射波长：545nm，通过与标准溶液对比求出待测样品中地塞米松的浓度。
所说的抗体是指用变性BSA包裹量子点标记的抗地塞米松的多克隆抗体；量子点是指能够发射荧光的纳米粒子，其核心部分为CdTe。
所说的包被是利用常规的方法将地塞米松的包被原(地塞米松-OVA偶联物)直接固定在酶标板微孔中。
所说的抗原-抗体复合体的形成是：加入地塞米松抗体后，抗原与药物竞争抗体，通过抗原与抗体的特异性结合形成抗原-抗体二元免疫复合物。
所说的荧光强度的检测是用荧光酶标仪激发并检测所形成的抗原-检测抗体二层夹心发光免疫复合物的荧光强度，通常样品中药物浓度越大，被抗体捕获的药物量越多，与包被原结合的抗体越少，则测得的荧光强度值越小。
上述的待测药物为地塞米松(DEX)，相应的抗体应为特异性抗地塞米松的多克隆抗体。
本发明的有益效果：
(1)本法操作简单，不需加显色物质就能检测待测样品中地塞米松的含量，即通过抗原-抗体免疫复合物的荧光强度，间接检测待测样品中地塞米松的浓度值，无论操作还是反应均只需一步就可完成。
(2)本法用于标记抗体的量子点与传统荧光相比，发射的荧光强度更强，且荧光稳定时间长。
附图说明
图1用量子点标记的间接竞争荧光免疫法检测地塞米松的标准曲线。
具体实施方式
实施例1
(一)用变性牛血清蛋白(dBSA)包裹发绿光的QD545标记抗地塞米松多克隆抗体
(1)BSA变性：
将16.5mg BSA溶于10mL双蒸水中，搅拌下加入0.42mg NaBH4，室温下反应1h，60-80℃下加热20min，分解过量的NaBH4，BSA变性，二硫键打开成-SH，最终的dBSA水溶液的浓度为5×10-5M。
(2)变性BSA包裹量子点(dBSA-QDs)：
将dBSA和量子点镝化铬(CdTe)按一定的摩尔比(1∶1，1∶2，1∶4，1∶6)混合，60-80℃水浴加热15min，室温下保持两天，使包裹完全。
(3)变性BSA包裹量子点偶联抗体：
将5μL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺EDC(0.056M)与5μL硫代N-羟基琥珀酰亚胺sulfo-NHS(0.1M)混合10s后，加入至25μL dBSA-QDs(2×10-5M)中，变性BSA包裹的量子点活化15min，加入9.6μL地塞米松抗体(Ab，5×10-5M)。反应物摩尔比为：dBSA-QDs∶Ab∶EDC∶sulfo-NHS＝1∶1∶560∶1000。室温下反应4h，得到量子点标记的地塞米松抗体。反应液中抗体的浓度为1.15mg/mL，用抗体稀释液(0.1％明胶的含吐温的磷酸盐缓冲液pH 7.4，0.01M)稀释1000倍待用。
(二)抗原的包被
用地塞米松与卵血清白蛋白偶连体作为包被原，用碳酸盐缓冲液(pH9.6，0.05M)作为包被缓冲液，用包被缓冲液将地塞米松包被原稀释至1-20μg/mL作为包被液，在酶标板的每孔中加100μL包被液，4℃冰箱过夜，用磷酸盐缓冲液(PBS，10mmol/L，pH 7.2-7.4，含NaCl 8.5g/L)洗三次，按200μL/孔加0.1％明胶进行封闭。
(三)抗原-抗体二元发光免疫复合体的形成
在封闭后的酶标板孔中加入地塞米松标准溶液或待测样品50μL，稀释的量子点标记的地塞米松抗体50μL，37℃孵育1h，抗原与地塞米松药物竞争抗体，部分抗体与抗原形成抗原-抗体二元免疫复合物，用磷酸盐缓冲液(PBS，10mmol/L，pH 7.2-7.4，含NaCl 8.5g/L)洗三次，去掉非特异性吸附。
(四)定量荧光检测
量子点标记的间接竞争荧光免疫检测法的测定原理是通过检测结合到酶标板微孔上的抗原-抗体二元免疫复合物的荧光强度来实现对地塞米松的检测。可与标准曲线对比求出样品中地塞米松的浓度。结合到酶标板微孔上的量子点标记的检测抗体数量不同，产生的荧光强度不同，通常样品中药物浓度越大，被抗体捕获的药物量越多，与包被原结合的抗体越少，则测得的荧光强度值越小。标准曲线的绘制，将已知地塞米松含量的标准溶液配置成由低到高8种不同浓度(0.1ng/mL，0.5ng/mL，1ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，25ng/mL，50ng/mL，100ng/mL)，用与待测样本相同的方法，重复(二)(三)步骤的操作，测定某种浓度的标准溶液对应的荧光强度，以地塞米松浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线，见图1。
实施例2添加回收实验
(1)样品的提取净化：在2g鸡肉靡样本中加入10mL乙腈/水(7∶3)的混合溶液，涡旋混合1min，超声波超声30min，2000×g离心10min，吸取2.5mL上层液于干净的玻璃管中，加入4mL正己烷和1mL二氯甲烷脱脂，涡旋混合1min使三相分离，吸取1mL中间相(对应于0.2g样品)于干净的试管中；50℃，缓慢的N2流吹干，用0.2mL标准品稀释液(含10％甲醇的含吐温-20的磷酸盐缓冲液PBST)溶解残留物，作为试样供分析。
(2)在2g空白的鸡肉样本中添加地塞米松标准品液，使其浓度为1ng/g、5ng/g、10ng/g、20ng/g，各浓度分别制备样品五份，按上述的前处理方法进行提取后分析。结果见表1。可以看出，鸡肉样品中的回收率在69.2％～79.6％之间。该分析方法重复性良好，相对标准偏差低于6.07％。
表1添加回收率的测定
Claims (1)
1.一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法，其特征在于：将包被原直接包被在酶标板的微孔中，加入地塞米松标准溶液或待测样品形成抗原-抗体发光免疫复合体，用荧光酶标仪激发并检测所形成的抗原-抗体发光免疫复合物的荧光强度，通过与标准溶液对比求出待测样品中地塞米松的浓度；
(一)用变性牛血清蛋白dBSA包裹发绿光的QD545标记抗地塞米松多克隆抗体
(1)BSA变性：将16.5mgBSA溶于10mL双蒸水中，搅拌下加入0.42mgNaBH4，室温下反应1h，60-80℃下加热20min分解过量的NaBH4，BSA变性，二硫键打开成-SH，控制最终的dBSA水溶液的浓度为5×10-5M；
(2)变性BSA包裹量子点dBSA-QDs：
将dBSA和量子点镝化铬Cd Te按摩尔比1∶1～1∶6混合，60-80℃水浴加热15min，室温下保持两天，使包裹完全；
(3)变性BSA包裹量子点偶联抗体：
将0.056M的5μL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺EDC与0.1M的5μL硫代N-羟基琥珀酰亚胺sulfo-NHS混合10s后，加入至25μL dBSA-QDs 2×10-5M中，变性BSA包裹的量子点活化15min，加入9.6μL地塞米松抗体Ab5×10-5M，反应物摩尔比控制为：dBSA-QDs∶Ab∶EDC∶sulfo-NHS＝1∶1∶560∶1000，室温下反应4h，得到量子点标记的地塞米松抗体，反应液中抗体的浓度为1.15mg/mL，用0.1％明胶的含吐温的pH 7.4，0.01M磷酸盐缓冲液作抗体稀释液稀释1000倍待用；
(二)抗原的包被
用地塞米松与卵血清白蛋白偶连体作为包被原，用pH 9.6，0.05M碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，用包被缓冲液将地塞米松包被原稀释至1-20μg/mL作为包被液，在酶标板的每孔中加100μL包被液，4℃冰箱过夜，用含NaCl 8.5g/L、pH 7.2-7.4、10mmol/L磷酸盐缓冲液洗三次，按200μL/孔加0.1％明胶进行封闭；
(三)抗原-抗体二元发光免疫复合体的形成
在封闭后的酶标板孔中加入地塞米松标准溶液或待测样品50μL，稀释的量子点标记的地塞米松抗体50μL，37℃孵育1h，抗原与地塞米松药物竞争抗体，部分抗体与抗原形成抗原-抗体二元免疫复合物，用含NaCl 8.5g/L、pH 7.2-7.4、10mmol/L磷酸盐缓冲液洗三次，去掉非特异性吸附；
(四)定量荧光检测
用荧光酶标仪激发并检测所形成的抗原-抗体发光免疫复合物的荧光强度，激发波长：430nm；发射波长：545nm，通过与标准溶液对比求出待测样品中地塞米松的浓度。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810123521A CN101308145B (zh) | 2008-06-17 | 2008-06-17 | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200810123521A CN101308145B (zh) | 2008-06-17 | 2008-06-17 | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101308145A true CN101308145A (zh) | 2008-11-19 |
| CN101308145B CN101308145B (zh) | 2012-09-05 |
Family
ID=40124707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200810123521A Expired - Fee Related CN101308145B (zh) | 2008-06-17 | 2008-06-17 | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101308145B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102253214A (zh) * | 2011-07-06 | 2011-11-23 | 清华大学深圳研究生院 | 一种基于量子点的免疫荧光检测环丙沙星的方法及专用试剂盒 |
| CN102667487A (zh) * | 2009-12-10 | 2012-09-12 | 希森美康株式会社 | 碱性肽的检测方法及碱性肽检测用试剂 |
| CN106769960A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-05-31 | 百奥森（江苏）食品安全科技有限公司 | 一种地塞米松含量的检测方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1811449A (zh) * | 2006-02-23 | 2006-08-02 | 上海交通大学 | 量子点标记快速免疫层析试纸条的检测方法 |
-
2008
- 2008-06-17 CN CN200810123521A patent/CN101308145B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102667487A (zh) * | 2009-12-10 | 2012-09-12 | 希森美康株式会社 | 碱性肽的检测方法及碱性肽检测用试剂 |
| CN102667487B (zh) * | 2009-12-10 | 2014-10-29 | 希森美康株式会社 | 碱性肽的检测方法及碱性肽检测用试剂 |
| CN102253214A (zh) * | 2011-07-06 | 2011-11-23 | 清华大学深圳研究生院 | 一种基于量子点的免疫荧光检测环丙沙星的方法及专用试剂盒 |
| CN102253214B (zh) * | 2011-07-06 | 2013-10-30 | 清华大学深圳研究生院 | 一种基于量子点的免疫荧光检测环丙沙星的方法及专用试剂盒 |
| CN106769960A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-05-31 | 百奥森（江苏）食品安全科技有限公司 | 一种地塞米松含量的检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101308145B (zh) | 2012-09-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ahmed et al. | Current advances in immunoassays for the detection of antibiotics residues: A review | |
| CN101308146B (zh) | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测倍他米松的方法 | |
| Hou et al. | Development of an immunomagnetic bead-based time-resolved fluorescence immunoassay for rapid determination of levels of carcinoembryonic antigen in human serum | |
| Huang et al. | Active droplet-array microfluidics-based chemiluminescence immunoassay for point-of-care detection of procalcitonin | |
| Bock | The new era of automated immunoassay | |
| JP5553615B2 (ja) | プロゾーン現象の低減を示すイムノアッセイ | |
| JP2018054637A (ja) | 免疫学的検定試験のためのシステム | |
| US10786229B2 (en) | Diagnostic devices and methods for mitigating hook effect and use thereof | |
| Fu et al. | A full-automated magnetic particle-based chemiluminescence immunoassay for rapid detection of cortisol in milk | |
| Darwish et al. | Novel automated flow-based immunosensor for real-time measurement of the breast cancer biomarker CA15-3 in serum | |
| JP2021533384A (ja) | バイオマーカーを検出する方法 | |
| Stevens et al. | Conjugating immunoassays to mass spectrometry: Solutions to contemporary challenges in clinical diagnostics | |
| US9575077B2 (en) | TSH antibodies for point-of-care immunoassay formats | |
| CN112074739B (zh) | 用于自动化系统的免疫测定 | |
| Wu et al. | Sensitive time-resolved fluoroimmunoassay for simultaneous detection of serum thyroid-stimulating hormone and total thyroxin with Eu and Sm as labels | |
| CN108333344A (zh) | 高灵敏度的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN101308148A (zh) | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测糖皮质激素多残留的方法 | |
| Hou et al. | Magnetic particle-based time-resolved fluoroimmunoassay for the simultaneous determination of α-fetoprotein and the free β-subunit of human chorionic gonadotropin | |
| CN105988008A (zh) | 测定装置、试剂盒及方法 | |
| Wang et al. | Ultrasensitive detection of seventeen chemicals simultaneously using paper-based sensors | |
| CN101308145B (zh) | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测地塞米松的方法 | |
| JP6386591B2 (ja) | 新規な試料内検出対象物の検出方法及びこれを利用した検出キット | |
| JP7141405B2 (ja) | 検体検出イムノアッセイ | |
| CN101308147B (zh) | 一种量子点标记的间接竞争荧光免疫检测双氟米松的方法 | |
| JP2010181155A (ja) | 物質固定基板の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120905 Termination date: 20130617 |