CN101296705A - 固体疫苗制剂 - Google Patents

固体疫苗制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN101296705A
CN101296705A CNA2006800403788A CN200680040378A CN101296705A CN 101296705 A CN101296705 A CN 101296705A CN A2006800403788 A CNA2006800403788 A CN A2006800403788A CN 200680040378 A CN200680040378 A CN 200680040378A CN 101296705 A CN101296705 A CN 101296705A
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
trehalose
arbitrary
mannitol
sucrose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2006800403788A
Other languages
English (en)
Inventor
C·赫耶尔
L·L·玛尔柯达尔
H-H·意普森
S·桑德卡尔
A·R·伦德迦德
U·塞帕拉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ALK Abello AS
Original Assignee
ALK Abello AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ALK Abello AS filed Critical ALK Abello AS
Publication of CN101296705A publication Critical patent/CN101296705A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/1623—Sugars or sugar alcohols, e.g. lactose; Derivatives thereof; Homeopathic globules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays

Abstract

本发明涉及一种固体疫苗制剂，它适于粘膜给药，并且含有作为活性物质的至少一种抗原，其中该制剂含有一种悬浮液的冻干物，此悬浮液含有含氧金属盐，抗原和一种或多种的赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。

Description

固体疫苗制剂
技术领域
本发明涉及一种固体疫苗制剂，它适于粘膜给药，并且含有作为活性物质的至少一种抗原，其中该制剂含有一种悬浮液的冻干物，此悬浮液含有含氧金属盐，抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。本发明还涉及上述冻干物制备粘膜给药的固体疫苗制剂的应用和这些制剂用于疫苗接种或治疗变态反应或者减轻受试者变态反应的症状的应用。
本发明的背景技术
海藻糖是一种非还原的二糖，它由两个葡萄糖单体组成。它存在于许多生物中，包括细菌、真菌和脊椎动物，以及一些植物。已知海藻糖可稳定蛋白质。
US-A-4578270公开了制备冻干疫苗的方法，其中吸收在不溶性载体上的抗原和保护剂的混合物接受冷冻干燥，这些载体诸如为氢氧化铝和磷酸铝凝胶。此保护剂例如可为蛋白质、多肽、多糖和其他合成保护剂胶体。特别是，应用分子量为40000的葡聚糖以及葡聚糖和多糖的组合。保护剂的用量为该抗原溶液的0.5至10％。在应用时，用缓冲剂对该冻干疫苗进行重新构成。
US-A-5902565公开了制备干燥的微球颗粒形式的疫苗制剂，随后可将该制剂加入液体制剂或加入固体丸剂或植入物中的方法。完全保留了铝凝胶的凝胶形成性能。US-A-5902565的一个方面涉及生产即刻释放疫苗的方法，该方法包括形成一种吸附于铝盐佐剂的免疫原含水悬浮体，以及将该悬浮体喷雾干燥。可选择的是，该悬浮体含有一种蛋白质稳定剂，诸如糖和糖衍生物，例如海藻糖、葡聚糖和葡糖胺。
EP-B1-0130619公开了制备冻干灭活纯化乙肝病毒表面抗原的疫苗制剂的方法，该方法包括将铝凝胶和稳定剂加入抗原，并将此混合物冷冻干燥。此稳定剂可为氨基酸，胶体物质和多糖，诸如单糖、二糖(例如乳糖、麦芽糖和蔗糖)和糖醇。
Gribbon等(Dev Biol Stand.Basel，Karger，1996，vol 87，pp193-199)公开了将海藻糖用作稳定剂对疫苗进行稳定的研究。将明矾用作佐剂的白喉和破伤风抗原疫苗的市售制剂与海藻糖混合，使该混合物接受冷冻干燥，获得一种干燥粉末。将此粉末贮存在45℃达35周，然后测定重建的破伤风类毒素的活性。35周后，其恢复的活性为相应新鲜湿对照品的94％。另外，将海藻糖的稳定和保护作用与葡萄糖和蔗糖进行比较，发现海藻糖更为有效。
Maa等(Journal of Pharmaceutical Sciences，Vol.92，No.2，February 2003)提供了一项关于明矾作为佐剂的疫苗干燥粉末制剂的稳定性研究，该制剂中含有乙肝表面抗原或白喉和破伤风类毒素。对各种干燥技术进行了试验，发现在防止明矾凝胶凝结和保持免疫原性方面，喷雾冷冻干燥优于冷冻干燥、喷雾干燥和风干。另外还对各种稳定剂防止明矾凝胶凝结的作用进行了试验，发现其作用较小。
Maa等(Pharmaceutical Research，Vol.20，No.7，July 2003)公开了生产明矾吸附乙肝表面抗原疫苗粉末的喷雾冷冻干燥方法，其中将海藻糖、甘露醇和葡聚糖的组合用作稳定剂，此三者的比例优选为3/3/4。该文献公开了表皮粉末免疫接种(EPI)，没有建议粘膜给药。
WO 02/101412公开了一种粉末的制备方法，其中将含水溶液或悬浮液进行喷雾冷冻干燥。此含水溶液的固体含量至少为20％(重量)，而且该溶液含有一种或多种赋形剂，这些赋形剂选自1)铝盐或钙盐佐剂，2)非晶形赋形剂，例如海藻糖，3)结晶赋形剂，例如甘露醇，4)聚合物，例如葡聚糖。提到了大量特异的明矾为佐剂的抗原组合物，包括(a)海藻糖、甘露醇和葡聚糖的组合，以及(b)海藻糖、甘氨酸和葡聚糖的组合。描述到该粉末可用于通过无针注射装置的给药。
WO 01/93829涉及一种凝胶形成的自由流动粉末，它适于用作疫苗，可通过喷雾干燥或喷雾冷冻干燥含水悬浮液而制备该疫苗，此含水悬浮液含有吸附于铝盐或钙盐佐剂、糖类、氨基酸或其盐的抗原，以及胶体物质。据说应用一种无针注射器，该粉末可用于疫苗的经皮传送。
WO 95/33488公开了减少或防止物质脱水和再水合中发生聚集的方法，此物质诸如氢氧化铝和磷酸铝。该文件提供了海藻糖对磷酸铝聚集影响的实验性研究，其中将含有15％海藻糖和不含15％海藻糖的磷酸铝悬浮液接受i.a.冷冻干燥。发现该浓度的海藻糖防止了再水合时的聚集。
疫苗制剂
应用延长时效期给予的多次皮下免疫进行常规特异变应性接种。此过程分为两个阶段，剂量增长期和维持期。在剂量增长期中应用增加剂量，通常周期为16周，起始采用微小剂量。当达到推荐的维持剂量时，则在维持期中采用此剂量，通常每6周进行一次注射。由于存在过敏性副反应的风险(尽管大体上非常罕见但对生命构成威胁)，所以每次注射后，患者必须接受医学观察30分钟。另外，诊所应当配备必要设备以便急救。毫无疑问，基于不同给药途径的疫苗将会消除或减小现有皮下给药疫苗所固有的变态反应副反应的风险，而且将会便于更广泛的使用，甚至可以在家进行自行接种。
皮下给药的常规变应性疫苗中，变应原通常存在于氢氧化铝凝胶充当佐剂的悬浮液中。尚未完全清楚氢氧化铝充当佐剂的功能背后的机制，但是相信氢氧化铝的佐剂作用是由于其贮存作用，以此利于变应原在机体中延长释放。
基于氢氧化铝的疫苗制剂的缺点是在贮存和运输期间它们需要冷藏。另外，冷冻和冷冻干燥减小了疫苗制剂的效力和物理性质，诸如沉降速度和流动性。
WO 04/047794公开了一种快速溶解、非压制固体变应原疫苗剂型，它适于一种变应原的口腔粘膜给药，含有作为活性剂的变应原和一种基质，此基质由诸如明胶或淀粉的基质形成剂组成。
WO 00/45847提出一种经过粘膜传送免疫原物质的疫苗，它含有至少一种免疫原物质和一种粘膜传送系统，该系统含有含氧金属盐。在此申请的实施例中，通过口腔管饲法(直接达到胃部)应用该疫苗，或者将其作为溶液经腹膜内给药。因此，没有任何实施例描述到用于粘膜给药的固体制剂，诸如舌下给药。
EP 1516615涉及一种固体给药粘膜粘着圆片或薄膜制剂，它适于透膜传送，其中圆片或薄膜由稳定的多元醇和溶解或分散其中的治疗剂构成。此多元醇例如可为海藻糖，治疗剂可为抗原和佐剂。此申请未提出含有含氧金属盐、抗原及一种或多种赋形剂的含水悬浮液的冻干物固体疫苗制剂，而且特别是未提出含有变应原、氢氧化铝及一种或多种赋形剂的含水悬浮液的冻干物疫苗制剂。
US 5,591,433涉及含有变应原的口服制剂，该变应原微囊包封在肠溶衣中。
本发明的目的是提供一种用于粘膜给药的改良的固体疫苗制剂。
发明总结
本发明涉及一种固体疫苗制剂，该制剂含有一种悬浮液的冻干物，此悬浮液含有一种含氧金属盐，至少一种抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。
本发明还涉及一种悬浮液的冻干物在制备一种粘膜给药的固体疫苗制剂中的应用，此悬浮液含有一种含氧金属盐，至少一种抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。
另一方面，本发明涉及受试者免疫接种的方法，其中包括将有效量的上述固体制剂进行粘膜给药。
本发明尤其涉及治疗变态反应或减轻变态反应症状的方法，它包括将有效量的上述固体制剂进行粘膜给药，此制剂至少含有一种变应原。
本发明基于这种认识，即在粘膜给药的固体疫苗制剂中包含佐剂是可取的，而且该佐剂具有粘膜粘着特性也是可取的。另外还认识到，诸如氢氧化铝的含氧金属盐既具有佐剂特性，也具有粘膜粘着特性，因此这种物质可成为粘膜给药的固体疫苗制剂中所应用的理想选择。
本发明基于这种发现，即海藻糖、蔗糖和某些其他赋形剂在防止氢氧化铝和相应的含氧金属盐对冷冻干燥的不良作用方面具有高度的特性，而且因此含氢氧化铝的固体物质易于再水合，形成具有多种特性的铝凝胶，冷冻干燥方法对这些特性影响的程度很小，这种固体物质是通过对氢氧化铝以及海藻糖、蔗糖和某些其他赋形剂进行冷冻干燥而获得的。
本发明还基于这种认识，即海藻糖、蔗糖和某些其他赋形剂的上述惊人功能性可用于制备固体疫苗制剂，诸如快速溶解片剂，可将其设计为当与粘膜接触时即进行再水合，这种固体疫苗制剂含有含氧金属盐佐剂，诸如氢氧化铝。
因此，本发明提出了制备粘膜给药的固体疫苗制剂的可能性，该疫苗制剂含有含氧金属盐佐剂，诸如氢氧化铝。
附图简述
附图1显示各种抑制剂制剂对Der p-特异性IgE与生物素化Der p结合的抑制度。
附图2显示各种抑制剂制剂对Der p-特异性IgE与生物素化Der p结合的抑制度。
附图3显示这三对试验制剂效力估计值的比较。
附图4显示用不同Phl p制剂对小鼠免疫三次的Phl p特异性IgG水平。
附图5显示用不同Der p制剂对小鼠免疫两次(上图)和五次(上图)的Der p 1特异性IgG水平。
附图6表明免疫程序过程中Der p 1特异性IgG随时间的发展。
本发明的详细描述
本发明提供一种固体疫苗制剂，该制剂含有一种悬浮液的冻干物，此悬浮液含有含氧金属盐，至少一种抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。
本发明还涉及一种悬浮液的冻干物在制备一种固体疫苗制剂中的应用，此悬浮液含有含氧金属盐，至少一种抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。
此悬浮液适宜为含水悬浮液。
在本发明的一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖醇的赋形剂。
在本发明的再一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自氨基酸及其药物可接受的盐的赋形剂。
在本发明的另外一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂和一种选自糖醇的赋形剂。
在本发明的另外一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂和一种选自氨基酸及其药物可接受的盐的赋形剂。
在本发明的另外一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖醇的赋形剂和一种选自氨基酸及其药物可接受的盐的赋形剂。
在上述本发明的一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂、一种选自糖醇的赋形剂和一种选自氨基酸及其药物可接受的盐的赋形剂。
此处所用的糖类指单糖、二糖和寡糖。
该糖适宜选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、纤维二糖、棉子糖、异麦芽糖和环糊精。
该糖优先选自海藻糖和蔗糖。
此处所用的糖醇指糖(适宜为单糖)的氢化形式，该糖的羰基被还原为一级羟基或二级羟基。
该糖醇适宜选自甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油、赤藓醇、阿糖醇和蒜糖醇，并且该糖醇优选为甘露醇。
该氨基酸适宜选自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸和组氨酸，以及它们药物可接受的盐。此氨基酸优选为甘氨酸。
该氨基酸的盐可为碱或碱土金属盐，诸如钠、钾或镁盐，或者与其他氨基酸形成的盐，诸如谷氨酸盐或天门冬氨酸盐。
在另一种实施方式中，该悬浮液含有附加的赋形剂，它为一种聚合物。该聚合物可选自葡聚糖、麦芽糖糊精、淀粉、纤维素、明胶、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)和聚乙二醇(PEG)。该聚合物优选葡聚糖。
因此，在本发明的一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂，诸如海藻糖和蔗糖；一种选自糖醇的赋形剂，诸如甘露醇；以及一种为聚合物的赋形剂，诸如葡聚糖。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂，诸如海藻糖或蔗糖；一种选自氨基酸及其药物可接受的盐的赋形剂，诸如甘氨酸；以及一种为聚合物的赋形剂，诸如葡聚糖。
在本发明另一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖醇的赋形剂，诸如甘露醇；一种选自氨基酸及其药物可接受的盐的赋形剂，诸如甘氨酸；以及一种为聚合物的赋形剂，诸如葡聚糖。
在本发明另一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖类的赋形剂，诸如海藻糖或蔗糖；以及一种为聚合物的赋形剂，诸如葡聚糖。
在本发明另一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自糖醇的赋形剂，诸如甘露醇；以及一种为聚合物的赋形剂，诸如葡聚糖。
在本发明另一种实施方式中，该悬浮液含有一种选自氨基酸及其药物可接受盐的赋形剂，诸如甘氨酸；以及一种为聚合物的赋形剂，诸如葡聚糖。
各种等级的葡聚糖都是可利用的，适宜葡聚糖的分子量大于10000，诸如平均分子量为10000至200000。该葡聚糖的分子量优选为40000、60000或70000道尔顿。
按照本发明的一种实施方式，该悬浮液含有蔗糖和甘露醇的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有蔗糖、甘氨酸和葡聚糖的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有海藻糖和甘露醇的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有蔗糖、甘露醇和葡聚糖的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有海藻糖、甘氨酸和葡聚糖的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有海藻糖、甘露醇和葡聚糖的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有海藻糖和甘氨酸的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有蔗糖和甘氨酸的混合物。
在本发明的另一种实施方式中，该悬浮液含有甘氨酸和甘露醇的混合物。
本发明所用赋形剂的优选组合为糖、糖醇或氨基酸或其药物可接受盐、以及聚合物的组合。
当该悬浮液含有蔗糖和甘露醇时，蔗糖与甘露醇的重量比适宜为1∶4至4∶1，或者1∶2至2∶1，例如为1∶4、3∶2、2∶3、4∶1、2∶1、1∶2或1∶1，而且该比率优选为1∶1。
当该悬浮液含有蔗糖、甘氨酸和葡聚糖时，蔗糖、甘氨酸与葡聚糖的重量比适宜为5∶4∶1、4∶5∶1、3∶5∶2、2∶5∶3、4∶4∶2、3∶4∶3、2∶4∶4、6∶3∶1、7∶2∶1和8∶1∶1，而且蔗糖、甘氨酸与葡聚糖的重量比优选为5∶4∶1。
当该悬浮液含有海藻糖和甘露醇时，海藻糖与甘露醇的重量比适宜为1∶4至4∶1，或者1∶2至2∶1，例如为1∶4、3∶2、2∶3、4∶1、2∶1、1∶2或1∶1，而且该重量比优选为1∶1。
当该悬浮液含有蔗糖、甘露醇和葡聚糖时，蔗糖、甘露醇与葡聚糖的重量比适宜为5∶4∶1、4∶5∶1、3∶5∶2、2∶5∶3、4∶4∶2、3∶4∶3、2∶4∶4、6∶3∶1、7∶2∶1和8∶1∶1，而且该重量比优选为3∶5∶2。
当该悬浮液含有海藻糖、甘露醇和葡聚糖时，海藻糖、甘露醇与葡聚糖的重量比适宜为5∶4∶1、4∶5∶1、3∶5∶2、2∶5∶3、4∶4∶2、3∶4∶3、2∶4∶4、6∶3∶1、7∶2∶1或8∶1∶1。
当该悬浮液含有海藻糖、甘氨酸和葡聚糖时，海藻糖、甘氨酸与葡聚糖的重量比适宜为5∶4∶1、4∶5∶1、3∶5∶2、2∶5∶3、4∶4∶2、3∶4∶3、2∶4∶4、6∶3∶1、7∶2∶1和8∶1∶1。
当该悬浮液含有海藻糖和甘氨酸时，海藻糖与甘氨酸的重量比适宜为1∶4至4∶1，或者1∶2至2∶1，例如为1∶4、3∶2、2∶3、4∶1、2∶1、1∶2或1∶1，而且该重量比优选为1∶1。
当该悬浮液含有蔗糖和甘氨酸时，蔗糖与甘氨酸的重量比适宜为1∶4至4∶1，或者1∶2至2∶1，例如为1∶4、3∶2、2∶3、4∶1、2∶1、1∶2或1∶1，而且该重量比优选为1∶1。
当该悬浮液含有甘露醇和甘氨酸时，甘露醇与甘氨酸的重量比适宜为1∶4至4∶1，或者1∶2至2∶1，例如为1∶4、3∶2、2∶3、4∶1、2∶1、1∶2或1∶1，而且该重量比优选为1∶1。
上述悬浮液可另外含有0.1-5％(重量)的表面活性剂，例如聚乙二醇脱水山梨醇单月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween 80)、聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物(Pluronic)。
按照一种实施方式，本发明的制剂为片剂。
该片剂可为非压制片(例如快速溶解片)。
按照本发明的另一种实施方式，该片剂为压制片。
上述任一种片剂可用于舌下给药。
本发明的制剂也可为粉剂。
在本发明的另一种实施方式中，该制剂为微粒形式。
另外，该制剂可为颗粒。
在另一种实施方式中，该制剂为胶囊剂，它含有冻干物。该胶囊中所含的冻干物的形式可为粉剂、微粒或颗粒剂。在一种实施方式中，该胶囊含有如下所述的包被微粒。
抗原
本发明的固体制剂可含有一种抗原，或者抗原可为一种以上。
变应原
本发明的特殊实施方式中，该抗原为变应原。该变应原可为任意天然存在的蛋白质，已报告当它们反复暴露于个体时，它们可诱导变应性反应，即IgE介导的反应。天然存在变应原的实例包括花粉变应原(树、草药、杂草和草花粉变应原)、昆虫变应原(吸入性、唾液和毒液变应原，例如螨变应原、蟑螂和蠓变应原、膜翅目毒液变应原)、动物毛发和皮屑变应原(例如来自狗、猫、马、大鼠、小鼠等的变应原)以及食物变应原。树、草和草药的重要变应原是来自下列的那些变应原：壳斗目、木犀目、松杉目和悬铃木科，包括i.a.桦树(桦属)、桤木(桤木属)、榛树(榛属)、鹅耳栎(鹅耳栎属)和橄榄树(木樨榄属)、雪松(柳杉属和桧属)、悬铃木(悬铃木属)；禾本目，包括i.a.黑麦草属、梯牧草属、早熟禾属、狗牙根属、鸭茅属、绒毛草属、Phalaris、黑麦属和高梁属的草；菊目和荨麻目，包括i.a.豚草属、蒿属和墙草属的草。其他重要的吸入性变应原是表皮螨属和嗜霉螨属的尘螨、例如嗜鳞螨属、食甜螨属和食酪螨属的储螨的变应原；例如小蠊属、大蠊、摇蚊属和头梳蚤属等蟑螂、蠓和跳蚤的变应原；以及诸如猫、狗和马等哺乳动物的变应原；毒液变应原，包括叮或咬昆虫的变应原，诸如膜翅目分类规则那些昆虫，包括蜜蜂(蜜蜂科)、黄蜂(胡蜂总科)和蚂蚁(蚁科)。来自真菌的重要吸入性变应原是i.a.链格孢属和分子孢子菌属的那些变应原。
本发明更优选的实施方式中，该变应原为Bet v 1、Aln g 1、Cora 1和Car b 1、Que a 1、Cry j 1、Cry j 2、Cup a 1、Cup s 1、Jun a 1、Jun a 2、jun a  3、Ole e 1、Lig v 1、Pla l 1、Pla a 2、Amb a 1、Amb a 2、Amb t 5、Art v 1、Art v 2 Par j 1、Par j 2、Par j 3、Sal k 1、Ave e 1、Cyn d 1、Cyn d 7、Dac g 1、Fes p 1、Hol l 1、Lol p 1和5、Pha a 1、Pas n 1、Phl p 1、Phl p 5、Phlp 6、Poa p 1、Poa p 5、Sec c 1、Sec c 5、Sor h 1、Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2、Der p 7、Der m 1、Eur m 2、Gly d 1、Lep d 2、Blo t 1、Tyr p 2、Bla g 1、Bla g  2、Per a 1、Fel d1、Can f 1、Can f 2、Bos d 2、Equ c 1、Equ c 2、Equ c 3、Mus m 1、Rat n 1、Apis m 1、Api m  2、Ves v 1、Ves v 2、Ves v5、Dol m 1、Dil m 2、Dol m 5、Pol a 1、Pol a 2、Pol a 5、Soli 1、Sol i 2、Sol i 3和Sol i 4、Alt a 1、Cla h 1、Asp f 1、Bos d 4、Mal d 1、Gly m 1、Gly m 2、Gly m 3、Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3、Ara h 4、Ara h 5或任何这些分子育种而获得的shufflanthybrids。
本发明最优选的实施方式中，该变应原为草花粉变应原或尘螨变应原或豚草变应原或雪松花粉或猫变应原或桦树变应原。
适宜的草变应原选自Phl p 1、Phl p 5和Phl p。桦树花粉变应原为Bet v 1。豚草变应原选自Art v 1和Art v 2。
本发明另一种实施方式中，此固体疫苗制剂至少含有两种不同类型的变应原，它们的变应性来源或者相同或者不同，例如草组1和草组5变应原或螨组1和组2变应原，它们分别来自不同的螨和草种，如短小和巨大豚草变应原的杂草抗原，如交链孢属和枝孢属的不同真菌变应原，如桦木、榛木、鹅耳栎、橡树和桤木变应原的树变应原，如花生、大豆和奶变应原的食物变应原。
此固体疫苗制剂中所加入的变应原的形式可为提取物、提取物的混合物、纯化的变应原、改性变应原、重组变应原或重组变应原的突变体。变应原提取物可天然含有同一变应原的一种或多种异构体，而重组变应原通常仅代表变应原的一种异构体。在一种优选实施方式中，该变应原的形式为提取物。在另一种优选实施方式中，该变应原为重组变应原。在另一种优选实施方式中该变应原为天然存在的低IgE-结合突变体或重组低IgE-结合突变体。
重组变应原指应用表达系统，通过重组技术而产生的变应原。
这些变应原可为等摩尔量的，或者这些变应原的比率变化优选至1∶20。
本发明的另一种实施方式中，低IgE结合变应原为按照WO99/47680、WO 02/40676或WO 03/096869公开的变应原。
微生物剂
本发明的另一种特殊实施方式中，该抗原为一种微生物剂。特别是该微生物剂为病毒、细菌、真菌、寄生虫或其任意部分。
微生物剂的实例为弧菌种、沙门氏菌种、博代氏杆菌种、嗜血杆菌种、鼠弓形体、巨细胞病毒、衣原体种、链球菌种、诺瓦克病毒、大肠埃希氏杆菌、幽门螺杆菌、猫胃螺杆菌、轮状病毒、淋病奈瑟氏球菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、腺病毒、爱巴病毒、日本脑炎病毒、卡氏肺囊虫、单纯疱疹病毒、梭状芽孢杆菌种、呼吸道合胞体病毒、克雷白氏杆菌种、志贺氏菌种、绿脓杆菌、细小病毒、弯曲杆菌种、立克次体种、水痘带状疱疹病毒、耶尔森氏菌种、罗斯河病毒、J.C.病毒、马红球菌、卡他莫拉菌、伯氏疏螺旋体、溶血性巴斯德氏菌、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、霍乱弧菌和肠伤寒沙门氏杆菌血清变型。
微生物剂的其他实例是可预防或减轻下列疾病症状的那些：流行性感冒、结核、脑膜炎、肝炎、百日咳、脊髓灰质炎、破伤风、白喉、疟疾、霍乱、疱疹、伤寒、HIV、AIDS、麻疹、莱姆病、旅行者腹泻、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、中耳炎、登革热、狂犬病、副流感、风疹、黄热病、痢疾、军团病、弓形体病、Q热、出血热、阿根廷出血热、龋齿、恰加斯氏病、大肠埃希氏菌引起的尿路感染、肺炎球菌病、流行性腮腺炎和基孔贡雅病。
含氧金属盐
适宜含氧金属盐的实例例如为那些金属盐，其中阳离子选自Al、K、Ca、Mg、Zn、Ba、Na、Li、B、Be、Fe、Si、Co、Cu、Ni、Ag、Au和Cr。
含氧化合物的阴离子可为有机或无机阴离子，或者有机和无机阴离子的联合。适宜含氧金属盐的实例例如为那些金属盐，其中阴离子选自硫酸盐、氢氧化物、磷酸盐、硝酸盐、碘酸盐、溴酸盐、碳酸盐、水合物、乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐和酒石酸盐，以及它们的混合形式。此含氧金属盐还含有配位络合物。例如在The Handbook ofChemistry and Physics 56 Ed.，Section B，Chapter 7(1975-76)中有配位络合物的定义。
在上下文中，“混合形式”是要包括各种阴离子的联合，以及它们例如与氯化物和硫化物的联合。
尽管固体疫苗制剂含有含氧金属盐，但期待可用另一种VIA族原子，诸如S、Se或Te取代氧。
符合本发明所用的含氧金属盐可为任意含氧金属盐，只要将其配制在粘膜传送系统中时它可具有所需的作用。这种含氧物质的实例为氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝、硫酸铝钾、磷酸钙、Maalox(氢氧化铝和氢氧化镁的混合物)、氢氧化铍、氢氧化锌、碳酸锌、氯化锌和硫酸钡。优选的含氧金属盐为氢氧化铝、磷酸铝和磷酸钙。最优选的含氧金属盐为氢氧化铝。
冻干物的制备
先形成含氧金属盐、赋形剂和抗原的悬浮液，并可选择地加入其他基质形成剂和/或其他试剂，由此制备含氧金属盐、赋形剂和抗原的悬浮液的冻干物。根据所制成的制剂类型而选择其他基质形成剂和/或其他试剂。此悬浮液优选为含水悬浮液。
当例如氢氧化铝用作含氧金属盐时，此液体悬浮液中氢氧化铝的浓度(mg Al/ml)优选为0.035-1000mg/ml，更优选为0.10-100mg/ml，最优选为2-30mg/ml。对于其他含氧金属盐而言，该金属盐的浓度(mg阳离子/ml)优选为0.035-1000mg/ml，更优选为0.35-100mg/ml，更优选为0.7-75mg/ml，最优选为1.5-50mg/ml。
当抗原为变应原时，此悬浮液中变应原的浓度优选为0.01-100mg/ml，更优选为0.1-10mg/ml。含氧金属盐与变应原的重量比优选为0.1至100，更优选为1至20。变应原吸附于含氧金属盐的吸附度通常为添加量的5至99％，更优选为10至99％。变应原对含氧金属盐的吸附依赖于吸附发生时的缓冲系统和反应条件，包括温度和反应时间。
含氧金属盐的pI通常为2-11。变应原蛋白的pI通常为4-9。更优选的是，对变应原和含氧金属盐进行选择，使变应原的pI低于含氧金属盐的pI。
悬浮液中赋形剂的总浓度优选为0.1mM至1.2M，更优选为0.5mM至800mM，最优选为100至500mM。
悬浮液所含赋形剂的重量优选为总重量的5-25％，更优选为10-15％。
然后将该悬浮液进行冷冻干燥。按照所要制备的固体制剂的类型，例如粉末、微粒或颗粒，选择冷冻干燥的方法和技术。
在本发明的一种实施方式中，将该悬浮液分为小滴，并将其冷冻而获得冷滴，然后将其进行冷冻干燥，而获得颗粒。在本发明的另一种实施方式中，将适宜量的悬浮液置于容器中，冷冻干燥，获得饼状残余物，然后对其进行研磨，形成微粒或具有所需大小的微粒粉末。
在本发明的另一种实施方式中，将该悬浮液装入多层层压小泡板的凹陷内，将该板进行冻干，形成非压制片。然后可选择地将该板进行密封。
在另一种实施方式中，按照US 2003/0202978所述，将该悬浮液进行喷雾冻干，该悬浮液中固体浓度可选择地采用较低的浓度，或者按照US 2005/0266021中所述进行喷雾干燥。
粘膜给药的固体疫苗制剂
可通过任何粘膜应用本发明固体疫苗制剂，所述粘膜包括经口(通过消化系统粘膜，例如胃肠粘膜)、鼻、阴道、舌下、眼睛、直肠、尿路、乳房内、肺、耳鼻喉(otolar)(即通过耳)、颊或口腔粘膜，优选通过颊或舌下粘膜，或者胃肠粘膜。
已推测通过此粘膜完成疫苗的粘膜给药是优选的，使此粘膜自然暴露于该抗原。因此，对于针对空中传播的粘膜抗原而产生的变态反应来说，可优选采用通过呼吸系统的给药，优选是颊给药或舌下给药。相应的，对于针对与消化系统的粘膜接触的粘膜剂而产生的变态反应来说，优选采用口服给药。
本发明的固体疫苗制剂可具有任何固体形式，此固体形式适于进行粘膜给药，而且它由冻干物组成或者含有冻干物，包括选自粉末、微粒、颗粒、压制片、非压制片、植入物、具有单壁并含冻干物的胶囊(此冻干物的形式例如为粉末、微粒或颗粒)，以及内含凝聚性包裹剂和冻干物(此冻干物为粉末、微粒或颗粒形式)的微颗粒。该制剂也可为含有冻干物的胶囊(例如明胶胶囊)，其冻干物的形式为粉末、颗粒、微粒或其形式为上述包入胶囊的微颗粒。
压制片
冻干物例如为粉末、微粒或颗粒的形式，可将其用于制备压制片。此压制片可包括任何常见成片剂或赋形剂。该片也可含有微颗粒形式的冻干物，此微颗粒中含有凝聚性包裹剂。
非压制片
在本发明的特殊实施方式中，此固体疫苗制剂为一种快速溶解的非压制片，它适于颊或舌下给药。快速溶解非压制片的实例公开于US-A-5,648,093、WO 00/51568、WO 02/13858、WO 99/21579、WO00/44351、US-A-4,371,516、EP-278877、WO 2004/047794和WO2004/075875中。通过冷冻干燥可生产那些优选的快速溶解非压制片。优选的基质形成剂为鱼胶和改良淀粉。
除了冻干物外，该非压制片还可包括任何常见的成片剂或赋形剂，诸如佐剂、抗酸剂、稀释剂、增强剂、粘膜粘着剂、增香剂、掩味剂、防腐剂、抗氧化剂、表面活性剂、粘度增强剂、着色剂、pH修改剂、增甜剂等。根据常规制药程序对这些赋形剂进行选择，变应原疫苗制备领域中的熟练技术人员对这些选择方式很清楚。
在本发明优选实施方式中，该片剂含有蛋白稳定剂。蛋白稳定剂的实例为聚乙二醇(PEG)，例如PEG300、PEG400、PEG600、PEG1000、PEG1500、PEG3000、PEG3050、PEG4000、PEH6000、PEG20000和PEG35000；氨基酸，诸如甘氨酸、丙氨酸、精氨酸；单-、二和三糖，诸如海藻糖和蔗糖；聚乙烯醇(PVA)；聚氧化乙烯山梨醇脂肪酸酯(聚山梨醇、吐温或司盘)；人血清白蛋白(HSA)；牛血清白蛋白(BSA)。优选PEG用作蛋白稳定剂。除了用作蛋白稳定剂外，据信PEG还给剂型的基质赋予了弹性。
适宜的着色剂包括氧化铁红、氧化铁黑和氧化铁黄，以及FD&C染料，诸如FD&C蓝No.2和FD&C红No.40。适宜的增香剂包括薄荷、红莓、甘草、柑橘、柠檬、美国柚、焦糖、香草、樱桃和葡萄香料以及这些香料的组合。适宜的pH修改剂包括柠檬酸、酒石酸、磷酸、盐酸和马来酸。适宜的增甜剂包括天冬甜素、丁磺氨钾和thaumatic。适宜的掩味剂包括碳酸氢钠、离子交换树脂、环糊精包涵化合物、吸附物或微囊包封活性物。
通常佐剂用于提高抗原(例如变应原)的吸收，还可提高该抗原(例如变应原)的免疫刺激特性。
在本发明的一种实施方式中，除了含氧金属盐外，本发明的片剂中还加入至少一种佐剂。适宜佐剂的实例为不耐热肠毒素(LT)、霍乱毒素(CT)(及其去毒部分)、霍乱毒素B(CTB)、聚合脂质体、突变体毒素(例如LTK63和LTR72)、微胶囊、无毒细菌片段、细胞因子、壳聚糖、同源不耐热大肠埃希氏菌(及其去毒部分)、皂角甙、细菌产物(诸如脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP))、脂质体、CpG(免疫刺激DNA序列)、微粒聚合物形式的丙交酯/乙交酯均共聚物等。变应原疫苗中佐剂的使用是由于所采用的变应原不能穿透应当通过的屏障。因此这些佐剂可充当吸收增强剂或者它们可充当免疫刺激剂。
本发明的非压制快速溶解片剂可本身具有一定的粘膜粘着性，但是在本发明的优选实施方式中，期望还在所述剂型中加入粘膜粘着剂赋形剂，以增加该剂型与口腔粘膜的接触时间。适宜的粘膜粘着性赋形剂为聚丙烯酸聚合物，诸如卡波姆及其衍生物；纤维素衍生物，诸如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素和羧甲基纤维素钠；天然聚合物，诸如明胶、藻酸钠、果胶和甘油。
微颗粒
派伊尔氏淋巴集结是位于小肠、大肠和阑尾壁的淋巴结的集合体，它是人体防御感染物质和体外其他物质对人体附着和穿透的重要部分。派伊尔氏淋巴集结也称为淋巴滤泡集结。在呼吸道、直肠、鼻腔、口腔、咽、泌尿生殖道、大肠及其他机体粘膜组织中也可发现类似的淋巴滤泡集结。所述组织通常称为粘膜相关淋巴组织(MALT)。
已表明配制为微颗粒的药物活性物质可被派伊尔氏淋巴集结和MALT有效吸收，此微颗粒应具有适当的大小和适宜的理化性质。
微颗粒的使用涉及防止药物活性物质降解的优势，在该剂型生产和贮存期间和将此活性物质应用于患者过程中均具有此优势。当活性物质为变应原时，这一点非常重要。众所周知微囊包封可用于防止敏感生物活性物质的降解。通常，将生物活性物质包封在任意数量的保护壁材料中，一般此材料为天然的聚合物。可根据需要而改变此微颗粒中物质的量，范围为小量至高达微颗粒组合物的95％或以上。此微颗粒的直径优选小于20μm，更优选小于15μm，再优选小于10μm，最优选小于1至10μm。
微囊包封剂可为任意可生物降解的物质，优选为聚合剂。此微囊包封剂优选选自聚丙交酯、聚丙交酯-聚(乙二醇)、聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、共聚草酸酯、聚己内酯、聚(丙交酯-共-己内酯)、聚(酯酰胺、聚原酸酯和聚(8-羟丁酸)，以及聚酐类，最优选聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)。微囊包封剂的其他实例为聚(丁基-2-氰丙烯酸酯)、聚(3-羟丁酸酯)和富马酸与癸二酸的聚酐共聚物，聚(FA:SA)。另外，按照本发明所使用的适宜的微囊包封剂包括来源于动物或植物蛋白的那些物质，诸如明胶、糊精，以及大豆、小麦和车前子的蛋白；树胶，诸如阿拉伯胶、瓜尔胶、琼脂胶和黄原胶；多糖；淀粉和改良淀粉、藻酸盐、羧甲基纤维素；角叉菜胶；葡萄聚糖；果胶；合成聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；以及多肽/蛋白或者多糖络合物，诸如明胶-阿拉伯胶络合物。在本发明的一种实施方式中应用两种或以上的微囊包封剂。优选地，选择微囊包封剂，以生产疏水的微颗粒。相信此疏水的微颗粒更易于被MALT吸收，或者更易于通过MALT而发挥其作用。
在一种实施方式中，所用的微囊包封剂为乙基丙烯酸酯甲基丙烯酸共聚物的肠溶包衣、羟丙基甲基纤维素乙酸丁二酸酯或其他肠溶包衣，例如参见US专利No.5,591,433。
胶囊
本发明的胶囊可为任意常见类型的胶囊。在本发明的一种特殊实施方式中，此胶囊壁由明胶构成。特别是，该胶囊可适于口服给药。该胶囊壁可由与微颗粒相关的上述任意微囊包封剂构成或涂敷此微囊包封剂。
按照本发明，该胶囊可含有悬浮液的冻干物，此悬浮液含有抗原、含氧金属盐和赋形剂，其形式为粉末、颗粒或微粒。可选择的是，此胶囊可含有上述微颗粒。
颊或舌下治疗
此固体疫苗制剂可用于接种方案中，此方案包括每日应用疫苗。另一种接种方案包括隔日、隔两日或隔三日应用疫苗。例如，此接种方案包括疫苗应用4周以上，优选8周以上，更优选12周以上，更优选16周以上，更优选20周以上，更优选24周以上，更优选30周以上，最优选36周以上。
给药期可为一个连续周期。可选择的是，给药期也可为不连续的周期，期间间隔一个或以上的非给药期。(总的)非给药期优选小于(总的)给药期。
此疫苗给予受试个体可为一天一次。可选择的是，此疫苗给予受试个体可为一天两次。此疫苗可为单剂量疫苗。可选择的是，此疫苗可为多剂量疫苗。
标准的增量脱敏治疗减轻变态反应的症状，该治疗中固体制剂形式的变应原剂量可被增加到某种最大量，缓解变态反应的症状。该片剂单位剂量的优选效力为150-1000000SQ-u/片，更优选为500-500000SQ-u/片，更优选为1000-250000SQ-u/片，更优选为1500-125000SQ-u/片，最优选为1500-75000SQ-u/片。
在本发明的另一种实施方式中，该片剂为一种重复的单剂量，优选为1500-75000SQ-u/片。
定义
本发明中应用下列定义：
术语“冷冻干燥”和“冷冻-干燥”可相互替换。
术语“冻干物”指冷冻干燥过程所得的任意形式的固体残余物，例如为饼状、颗粒或粉末形式。
术语“口腔粘膜的”指与口腔粘膜、咽粘膜和舌下粘膜相关。
术语“颊的”指与口腔相关。
术语“舌下”指与口腔舌下面的部位相关。
术语“SQ”指SQ单位。根据ALK-Abell óA/S的“SQ生物效能”标准化方法确定SQ单位，100,000SQ单位相当于标准皮下维持剂量。正常情况下，根据变应原的来源及其所用的生产方法，1mg提取物含有100,000至1,000,000SQ单位。通过免疫测定法，即主要变应原总含量和变应原总活性，可测定变应原的精确量。
具体实施方式
实施例1：含有氢氧化铝和各种赋形剂的悬浮液的喷雾冷冻干燥接受喷雾冷冻干燥(SFD)的悬浮液组合物显示在表1中。
  制剂  组合物  SFD前的固体含量   铝含量(mg/ml，液体制剂中)
  蔗糖/甘露醇  1∶1   10％   1.17
  蔗糖/甘氨酸/葡聚糖  5∶4∶1   10％   1.17
  蔗糖/甘露醇  1∶1   10％   2.34
  海藻糖/甘露醇  1∶1   10％   2.34
  蔗糖/甘露醇  1∶1   15％   2.34
  海藻糖/甘露醇  1∶1   15％   2.34
  蔗糖/甘露醇  1∶1   15％   2.34
  蔗糖/甘露醇/葡聚糖  3∶5∶2   15％   2.34
表1：喷雾冷冻干燥的制剂。葡聚糖的分子量为70.000道尔顿。
应用系统：冷冻造粒机LS 2(PowderPro AB)对该制剂进行冷冻干燥，并应用Lyovac GT-2冷冻干燥器(PowderPro)或Usifroid冷冻干燥器(ALK-Abell ó的FRD0001)对其进行干燥。系统包括两流体喷嘴，此喷嘴安装在磁性搅拌器上的玻璃烧杯上面。为减少液体氮的丢失，在玻璃烧杯的顶端放置一个盖。此烧杯大约一半装满液体氮。停顿2-3分钟，使此液体氮表面稳定。应用4I/小时(适于大多数制剂)的加料速度将该制剂喷淋至此液体氮中，此加料速度由蠕动泵控制。喷雾期间所用的气压为0.15巴-0.3巴。持续搅拌所形成冷冻微粒的分散体，并将其转移至液氮覆盖的冷冻干燥盘。在尽可能最低的压力下(相当于-33℃左右)，于Lyovac GT-2冻干器上进行PowderPro干燥。采用表2的设置在Usifroid冻干器(FRD0001)上进行ALK-Abelló干燥。
  程序   保存温度℃  压力μbar   时间分钟
  冷却前保存   -50    -   -
  冷冻1   -50±5→-55±5    -   5
  冷冻2   -55±5    -   15
  转移冷冻(transitionfreezing)-冷凝冷却   -55±5    -   120
  冷凝器温度   -40℃
  初级11   -55±5→-10±5   130   45
  初级2   -10±5   130   1440
  次级1   -10±5→20±5   130   30
  次级2   20±5   130   1440
表2：Usifroid冻干器(FRD0001)设置
粉末的控制由视觉检查、流动性、重建和堆密度组成。通过沉积试验和显微镜分析(目测和偏振光)测定Alhydrogel特性。应用表1中所有的赋形剂组合物制备可接受的粉末，尽管某些粉末有吸收水分的倾向，而这些水分可引起胶粘/大颗粒聚集。在所列举赋形剂存在的条件下，喷雾冷冻干燥过程不会对Alhydrogel造成影响。观察到沉积方式的变化较小，而应用显微镜分析未发现大范围的凝结。
实施例2：氢氧化铝基疫苗制剂的冷冻干燥
背景技术和目的
如果要保持该制剂的效力和特性，则必须将氢氧化铝(Al(OH)3)基疫苗制剂贮存在冷藏而非冷冻的条件下。另外，疫苗制剂的冷冻干燥既减小疫苗重建后的效力，也减小其基本特性(沉积速度、流动性)。
海藻糖为一种二糖碳水合物，它已被用作冷冻干燥和贮存过程中稳定各种化合物的添加剂。本研究的目的是测定海藻糖对疫苗制剂的作用，尤其是在冷冻干燥过程中的作用，此疫苗制剂的形式为氢氧化铝含水悬浮液和Der p或Phl p变应原的提取物的混合物，特别是对疫苗的物理和化学特性、活性/效力及免疫原性的作用。
方法
样品制备
在所有仅对氢氧化铝进行的分析中，应用来自Brenntag的20％Alhydrogel
Figure A20068004037800281
1.3％(灰分残余物(Al2O3)含量：1.3％w/w；对应的Al(OH)3含量：1.99％w/w；铝含量：6.25mg Al/ml±5％)。
吸附
在4-8℃下，将10％变应原，1000000SQ/ml与20％Alhydrogel1.3％(灰分残余物(Al2O3)含量：1.3％w/w；对应的Al(OH)3含量：1.99％w/w；铝含量：6.25mg Al/ml±5％)混合过夜，以制备液体制剂。加入附加的70％Coca’s缓冲液，其中含或不含海藻糖。在一种情况下，在吸附中应用标记FITC的Phl p提取物。
冷冻干燥
将1mL(小鼠免疫方案中采用1.2mL)样品等分至玻璃小瓶中。在-80℃将这些样品冷冻5分钟，然后冷冻干燥过夜。在将样品再溶解于1mL MilliQ水中之前，对此冷冻干燥粉末进行研究。
显微镜分析
应用Leica TCS SP2/Leica DC500，进行样品的相衬显微镜和荧光显微镜分析。还应用偏振显微镜(Olympus SZ 60)对这些样品进行分析。
火箭免疫电泳RIE
按照Axelsen等1973[1]所述的方案进行RIE。在RIE中，于琼脂糖凝胶上通过电泳将样品在一维空间上进行分离。在RIE中通过火箭形状的沉淀物而进行蛋白的鉴别。对于Phl p疫苗，流动含有针对样品上清液产生的抗Ph1 p和抗Ph1 p 6的RIE。对于Der p疫苗，流动含有针对样品上清液产生的抗Der p、抗Der p 1和抗Der p 2的RIE。
IgE抑制实验
在Advia Centaur系统上进行IgE抑制实验。将血清样品(25μL血清混合物，通过混合等量尘螨变应性个体的血清而获得此血清混合物)与固体相(PMP，顺磁颗粒)固定的抗IgE抗体混合。孵育和冲洗后，将抑制剂(提取物、疫苗或冻干和再溶解疫苗)的连续稀释物与固定量的生物素化Der p混合。加入丫啶酯标记的链霉亲和素、孵育和冲洗后，将与吸附IgE抗体的固体相结合的生物素化Der p的量估计为发射的光量(RLU)。
按照公式1，将所测定的RLU值转换为结合度(DoB)。
DoB = RLU i - RLU BasePool RLU i = 0 - RLU BasePool 公式1，
其中RLUi为给定剂量的抑制剂i存在情况下所获得的读数，RLUBasePool为背景信号，RLUi＝0为缓冲剂作为抑制剂(0％抑制)时获得的信号。所有RLU值均测定一式三份，计算中采用它们的均值。
按照公式2将每种试验抑制剂制剂的数据集(log10Dose，DoB)调整(GrapPad Prism v.4.03)为LOG函数。
DoB = B + T - B 1 + 10 ( log EC 50 - log Dose ) * HS 公式2，
其中B，T，logEC50和HS为非线性拟合所测定的参数。B为S形曲线的“底部”渐近线，T为S形曲线的“顶部”渐近线，EC50为获得50％抑制所需的剂量，HS(Hill Slope)为陡度或S形曲线的“斜度”的估计量。在拟合步骤中直接比较HS值，如果所比较曲线的斜度在统计学上无法区别，则计算基于常见斜度估计值的logEC50，并在效力比较中应用它。应用GraphPad Prism v.4.03进行所有的统计学计算。
在独立的两天进行抑制实验，在分析前汇总数据。
应用含海藻糖的制剂进行小鼠免疫-免疫方案
每两周对小鼠进行i.p.(腹膜内)免疫，共进行6次，应用含有下列组合物的100μl液体制剂：
1.偶联Alhydrogel的Ph1 p(猫尾草提取物)(Ph1 p Alum)。
2.偶联Alhydrogel的Ph1 p，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Ph1 p Alum)。
3.偶联Alhydroge1的Ph1 p+100mM海藻糖(Ph1 p TH100)。
4.偶联Alhydroge1的Ph1 p+200mM海藻糖(Ph1 p TH200)。
5.偶联Alhydroge1的Ph1 p+300mM海藻糖(Ph1 p TH 300)。
6.偶联Alhydroge1的Ph1 p+100mM海藻糖，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Ph1 p TH100)。
7.偶联Alhydroge1的Ph1 p+200mM海藻糖，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Ph1 p TH200)。
8.偶联Alhydroge1的Ph1 p+300mM海藻糖，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Ph1 p TH 300)。
9.偶联Alhydroge1的Derp(Dermatophagoides pteronyssinus提取物)(Der p Alum)。
10.偶联Alhydrogel的Der p，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Der p Alum)。
11.偶联Alhydroge1的Der p+100mM海藻糖(Der p TH100)。
12.偶联Alhydroge1的Der p+200mM海藻糖(Der p TH200)。
13.偶联Alhydroge1的Der p+300mM海藻糖(Der p TH 300)。
14.偶联Alhydroge1的Der p+100mM海藻糖，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Der p TH100)。
15.偶联Alhydroge1的Der p+200mM海藻糖，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Der p TH200)。
16.偶联Alhydroge1的Der p+300mM海藻糖，进行了冷冻干燥，并在应用前即刻进行再溶解(FD Der p TH 300)。
每组包括7-8个小鼠，1-8组使用Balb c/A，9-16组使用SJL。
通过在4-8℃下将10％变应原，1000000SQ/ml与由Brenntag获得的20％Alhydroge1
Figure A20068004037800311
1.3％(灰分残余物(Al2O3)含量：1.3％w/w；对应的Al(OH)3含量：1.99％w/w；铝含量：6.25mg Al/ml±5％)混合过夜而制备此液体制剂。加入附加的70％Coca’s缓冲液，其中含或不含海藻糖。按照上述冷冻干燥的方法，将每种制剂的一部分进行冷冻干燥。将冷冻干燥的样品贮存在冰箱中，在进行每种免疫之前进行再溶解。
在第0、2、3、5和6次免疫后采集血样，收集血清，通过下面的方法测定变应原特异性IgG的水平。
IgG测定方法
通过直接ELISA法分别测定1-8组和9-16组的Ph1 p、Der p 1或Der p 2特异性IgG。ELISA的步骤是：包被变应原，封阻，用血清孵育，并用HRP标记的抗小鼠IgG进行测定，然后用TMB和酸性酸终止反应。在ELISA读数器上测定吸光度。每步骤之间均进行冲洗。
结果和讨论
显微镜分析和RIE
首先测定海藻糖对不含抗原的氢氧化铝的作用。
贮存于5℃不含海藻糖和含300mM海藻糖的未处理氢氧化铝的相衬影像，以及冷冻干燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氢氧化铝的相衬影像显示，当将样品贮存在5℃下时海藻糖似乎不影响氢氧化铝微粒。当将氢氧化铝冷冻干燥时，甚至在将样品再溶解后也形成小板结晶。另外还发现，冷冻干燥和再溶解的含300mM海藻糖的氢氧化铝的凝胶结构似乎与贮存于5℃的参照样品的结构相同。
冷冻干燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氢氧化铝的偏振显微镜影像清楚地显示在冷冻干燥再溶解的不含海藻糖的氢氧化铝中形成结晶。但是当在海藻糖存在情况下对氢氧化铝进行冷冻干燥时未发现任何结晶。
贮存于5℃海藻糖浓度为0、50、100、150、200和300mM的FITC标记氢氧化铝Ph1 p的相衬影像，以及冷冻干燥和再溶解的海藻糖浓度为0、50、100、150、200和300mM的FITC标记氢氧化铝Ph1 p的相衬影像显示，随着海藻糖浓度的升高，再溶解样品中凝胶微粒的结构逐渐保持参照样品的凝胶结构。从相衬影像中可见，浓度为150-200mM的海藻糖似乎足以保持其凝胶结构。
贮存于5℃海藻糖浓度为0、50、100、150、200和300mM的氢氧化铝Ph1 p的偏振显微镜影像，以及冷冻干燥和再溶解的海藻糖浓度为0、50、100、150、200和300mM的氢氧化铝Ph1 p的偏振显微镜影像，显示冷冻干燥氢氧化铝Ph1 p，应用50mM足以防止结晶的形成。
RIE按照下列完成：A)试验样品为氢氧化铝Ph1 p上清液，其中i)氢氧化铝Ph1 p已被冷冻干燥和再溶解和ii)将其贮存在5℃，海藻糖浓度为0和300mM，用兔抗Ph1 p抗体进行沉淀，B)试验样品为标准Ph1 p溶液，其中含有25000SQ和50000SQ，由兔抗Ph1 p 6抗体沉淀，C)试验样品为氢氧化铝Ph1 p上清液，贮存在5℃，海藻糖浓度为0、50、100、150、200和300mM，用兔抗Ph1 p 6抗体进行沉淀，以及D)试验样品为冷冻干燥和再溶解的氢氧化铝Ph1 p上清液，海藻糖浓度为0、50、100、150、200和300mM，用兔抗Ph1 p 6抗体进行沉淀，RIE结果显示海藻糖存在情况下，可提高上清液中Ph1p和Ph1 p 6的量，表明海藻糖的存在可解吸某些Ph1 p/Ph1 p 6。还观察到当将海藻糖浓度从50升高至300mM时，Ph1 p 6的解吸略微提高。
将不含海藻糖和含300mM海藻糖的FITC标记氢氧化铝Ph1 p进行冷冻干燥和再溶解，以通过相衬显微镜观察Ph1 p提取物是否吸附于氢氧化铝凝胶微粒。当相衬显微镜和荧光显微镜的两种影像重叠形成后，通过这两种影像对样品进行分析。似乎FITC标记所测定的荧光与氢氧化铝凝胶微粒的位置相同，对于不含海藻糖和含300mM海藻糖的冷冻干燥样品均如此，表明Ph1 p提取物吸附于氢氧化铝凝胶微粒。另外，与没有海藻糖情况下冷冻干燥的凝胶微粒相比，似乎海藻糖存在情况下冷冻干燥的凝胶微粒更小，分布更均匀，而且与未经受冷冻干燥的凝胶微粒更相似。
从贮存于5℃不含海藻糖和含300mM海藻糖的未处理氢氧化铝Derp的相衬显微镜影像，以及冷冻干燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氢氧化铝Der p的相衬显微镜影像中可见，海藻糖的存在似乎不对贮存于5℃的氢氧化铝凝胶微粒产生影响，但是海藻糖可明确地在冷冻干燥过程中稳定氢氧化铝Der p，其凝胶微粒的结构与贮存于5℃参照制剂的结构保持相同。
从贮存于5℃不含海藻糖和含300mM海藻糖的未处理氢氧化铝Derp的偏振显微镜影像，以及冷冻干燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氢氧化铝Der p的偏振显微镜影像中清晰可见，在不含海藻糖情况下将氢氧化铝Der p进行冷冻干燥时则形成结晶，而300mM海藻糖存在情况下将氢氧化铝Der p进行冷冻干燥时，未发现任何结晶。
RIE按照下列完成：A)试验样品为氢氧化铝Der p上清液，其中i)氢氧化铝Der p已被冷冻干燥和再溶解和ii)将其贮存在5℃，海藻糖浓度为0和300mM，用兔抗Der p抗体进行沉淀，B)试验样品为标准Der p 1溶液，其中含有33000SQ、100000SQ和300000SQ，以及氢氧化铝Der p上清液，其中i)氢氧化铝Der p已被冷冻干燥和再溶解和ii)将其贮存在5℃，海藻糖浓度为0和300mM，用兔抗Der p 1抗体进行沉淀，C)试验样品为标准Der p 1溶液，其中含有33000SQ、100000SQ和300000SQ，以及氢氧化铝Der p上清液，其中i)氢氧化铝Der p已被冷冻干燥和再溶解和ii)将其贮存在5℃，海藻糖浓度为0和300mM，用兔抗Der p 2抗体进行沉淀，RIE结果显示海藻糖的存在似乎不引起任何解吸。
IgE抑制实验
必须将氢氧化铝为佐剂的疫苗制剂保持在冰点之上，以防止发生对该制剂不可逆的损害，而且将疫苗制剂进行冷冻干燥而不影响疫苗的活性是不可能的。已知海藻糖具有蛋白稳定特性，而且如下所述此化合物可稳定冷冻干燥条件下的氢氧化铝制剂。
附图1显示不同抑制剂对Der p-特异性IgE与生物素化Der p结合的抑制度，这些抑制剂为Der p提取物溶液(Der p IMP 7331-_23，240205)、氢氧化铝Der p(Dp_Alu-TH_5C_230205)、含300mM海藻糖的氢氧化铝Der p(Dp_Alu+TH_5C_230205)、氢氧化铝Der p上清液(Dp_Sup-TH_5C_230205)和含300mM海藻糖的氢氧化铝Der p上清液(Dp_Sup+TH_5C_230205)。附图1表明可将海藻糖(300mM)与氢氧化铝制剂混合，而不对疫苗活性产生任何可检测的变化，而且在上清液中未检测到任何活性，表明海藻糖未洗脱任何氢氧化铝结合/吸附蛋白。
附图2显示不同抑制剂对Der p-特异性IgE与生物素化Der p结合的抑制度，这些抑制剂为Der p提取物溶液(Der p IMP 7331-_23，240205)、冻干氢氧化铝Der p(Dp_Alu-TH_Lyo_230205)、含300mM海藻糖的氢氧化铝Der p(Dp_Alu+TH_Lyo_230205)、氢氧化铝Derp上清液(Dp_Sup-TH_LyoSup_230205)和含300mM海藻糖的氢氧化铝Der p的上清液(Dp_Sup+TH_LyoSup_230205)。
附图2显示在冷冻干燥和在缓冲液中重建后，海藻糖可保持氢氧化铝疫苗制剂的效力。如果在冷冻干燥过程中省略海藻糖，则该疫苗将会丧失其原先效力的85％。
附图3显示三对试验组制剂效力估计值的比较，即使用上述名称的i)Dp_Alu-TH_Lyo对Dp_Alu+TH_Lyo，ii)IMP对Dp_Alu+TH_Lyo，iii)IMP对Dp_Alu-TH_Lyo。对不同试验组绘制LogEC50值的差值，包括95％可信区间(CL)。如果试验组的CL包括0，则该值无统计学意义；如果不包括0，则该值具有统计学显著性差异。如附图3所示，冻干和再溶解的含海藻糖氢氧化铝制剂与未处理参照制剂的差异无统计学意义，而冻干的不含稳定剂的制剂却明显丧失效力。
小鼠免疫
附图4显示用不同Ph1 p制剂免疫3次的小鼠中Ph1 p特异性IgG的水平，其中Ph1 p特异性IgG表示为相对OD值(用稀释度1∶40000的参照样品的OD值校正稀释度1∶64000的血清样品的OD值)，每个点代表一个小鼠血清。“Ph1 p铝”指氢氧化铝Ph1 p，FD指冻干的，TH 100，200和300分别指海藻糖100，200和300mM。这些结果表明，其中的海藻糖在任何浓度下均不抑制对Ph1 p的免疫反应。如所预期的那样，观察到对没有海藻糖存在的情况下冻干的氢氧化铝Ph1 p的免疫反应无明显减小。
附图5显示用不同Der p制剂免疫2次(上图)和5次(上图)的小鼠中Der p 1特异性IgG的水平，其中Der p 1特异性IgG表示为相对OD值(用稀释度1∶45000的参照样品的OD值校正稀释度1∶15000的血清样品的OD值)，每个点代表一个小鼠血清。
应用不同Der p制剂免疫的小鼠的结果还显示，海藻糖不抑制变应原特异性免疫反应(附图5，两个图)，此与Ph1 p制剂的数据一致。与非冻干制剂相比，不含海藻糖的冻干Der p制剂具有延迟和减弱的反应(附图5，上和下图)，而在制剂中加入海藻糖可在冻干过程中对其进行保护，因为含海藻糖的冻干制剂中特异性IgG水平与未冻干的氢氧化铝Der p的相当(附图5，下图)。对于所检测的海藻糖浓度来说，其改善的保护水平相同。
附图6表明免疫程序中Der p 1特异性IgG随时间的发展。如上所述，与未接受冻干的氢氧化铝Der p相比，冻干氢氧化铝Der p制剂的免疫反应发生时间更为推迟。在冻干前加入海藻糖大约接近IgG对非冻干制剂反应的发展，其中300mM海藻糖作为优选制剂。
结论
显微镜和火箭免疫电泳(RIE)
对氢氧化铝Ph1 p和氢氧化铝Der p的分析显示：
1.当样品贮存于5℃时，海藻糖似乎不影响凝胶微粒。
2.加入50mM海藻糖，在冷冻干燥过程中此海藻糖的存在可防止结晶形成。
3.相衬影像显示，海藻糖浓度大于150mM情况下，冻干和再溶解制剂的凝胶微粒的结构与未接受冷冻干燥的参照制剂的结构相似。
氢氧化铝Ph1 p样品上清液的RIE显示，海藻糖的存在可引起Phlp和Ph1 p 6的解吸。但是，FITC标记氢氧化铝Ph1 p的显微镜影像显示Ph1 p与该凝胶微粒结合。
氢氧化铝Der p样品的RIE分析显示未检测到Der p、Der p 1和Der p 2的解吸。
IgE抑制实验
1.在冷冻干燥过程中海藻糖保护Der p Alutard疫苗制剂，而且重建的疫苗在效力和组成方面与未接受冷冻干燥的参照制剂相当。
2.海藻糖不洗脱疫苗制剂的蛋白。
3.当在缓冲液中重建时，混合物中不含海藻糖的冻干氢氧化铝疫苗丧失其85％的效力。
小鼠免疫
1.对于氢氧化铝Ph1 p和Der p制剂来说，其中的海藻糖本身并不抑制免疫反应。
2.与未接受冻干的氢氧化铝Der p相比，冻干氢氧化铝Der p制剂的免疫反应发生时间更为推迟。在冻干前加入海藻糖大约接近IgG对非冻干制剂反应的发展，其中300mM海藻糖作为优选制。
参考文献
Axelsen N H，
Figure A20068004037800361
J and Weeke B；1973；A Manual ofQuantitative Immunoelectrophoresis-Methods and Applications；Scandinavian Journal of Immunology；vol.2；Supplement no.1

Claims (43)

1.一种固体疫苗制剂，该制剂适于粘膜给药，而且含有至少一种抗原作为活性物质，其中该制剂含有悬浮液的冻干物，此悬浮液含有含氧金属盐，抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。
2.按照权利要求1的制剂，其中该悬浮液含有糖，此糖选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、纤维二糖、棉子糖、异麦芽糖和环糊精。
3.按照权利要求2的制剂，其中该悬浮液含有糖，此糖选自海藻糖和蔗糖。
4.按照权利要求1-3的任一制剂，其中该悬浮液含有糖醇。
5.按照权利要求4的制剂，其中该悬浮液含有糖醇，此糖醇选自甘露醇、山梨醇和蒜糖醇。
6.按照权利要求1-5的任一的制剂，其中该悬浮液含有氨基酸，此氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、丝氨酸、精氨酸、赖氨酸和组氨酸及其药物可接受的盐。
7.按照权利要求1-6的任一的制剂，其中该悬浮液含有附加的赋形剂，此赋形剂为聚合物，优选为葡聚糖。
8.按照上述任一权利要求的制剂，其中该悬浮液含有下列混合物：
(a)蔗糖和甘露醇，
(b)蔗糖、甘氨酸和葡聚糖，
(c)海藻糖和甘露醇，
(d)蔗糖、甘露醇和葡聚糖，
(e)海藻糖、甘氨酸和葡聚糖，
(f)海藻糖、甘露醇和葡聚糖，
(g)海藻糖和甘氨酸，
(h)蔗糖和甘氨酸，或者
(i)甘氨酸和甘露醇。
9.按照上述任一权利要求的制剂，其中抗原为变应原。
10.按照上述任一权利要求的制剂，其中含氧金属盐为氢氧化铝。
11.按照上述任一权利要求的制剂，其中该制剂为片剂。
12.按照权利要求11的制剂，其中该片剂为非压制片。
13.按照权利要求12的制剂，其中非压制片为快速溶解片。
14.按照权利要求11的制剂，其中该片剂为压制片。
15.按照权利要求11-14任一的制剂，其中该片剂用于舌下给药。
16.按照权利要求1-10任一的制剂，其中该制剂为粉末。
17.按照权利要求1-10任一的制剂，其中该制剂为微粒形式。
18.按照权利要求1-10任一的制剂，其中该制剂为颗粒。
19.按照权利要求1-10任一的制剂，其中该制剂为含有冻干物的胶囊。
20.悬浮液的冻干物在制备粘膜给药的固体疫苗制剂中的应用，此悬浮液含有含氧金属盐，至少一种抗原和至少一种赋形剂，此赋形剂选自(1)糖类、(2)糖醇和(3)氨基酸或其药物可接受的盐。
21.按照权利要求20的应用，其中该悬浮液含有糖，此糖选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、纤维二糖、棉子糖、异麦芽糖和环糊精。
22.按照权利要求21的应用，其中该糖选自海藻糖和蔗糖。
23.按照权利要求20-22的任一应用，其中该悬浮液含有糖醇。
24.按照权利要求23的应用，其中此糖醇选自甘露醇、山梨醇和蒜糖醇。
25.按照权利要求20-24的任一应用，其中该悬浮液含有氨基酸，此氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、丝氨酸、精氨酸、赖氨酸和组氨酸及其药物可接受的盐。
26.按照权利要求20-25的任一应用，其中该悬浮液含有附加的赋形剂，此赋形剂为聚合物，优选为葡聚糖。
27.按照上述权利要求20-26中任一应用，其中该悬浮液含有下列混合物：
(a)蔗糖和甘露醇，
(b)蔗糖、甘氨酸和葡聚糖，
(c)海藻糖和甘露醇，
(d)蔗糖、甘露醇和葡聚糖，
(e)海藻糖、甘露醇和葡聚糖，
(f)海藻糖、甘氨酸和葡聚糖，
(g)海藻糖和甘氨酸，
(h)蔗糖和甘氨酸，或者
(i)甘露醇和甘氨酸。
28.按照上述权利要求20-27的任一应用，其中抗原为变应原。
29.按照上述权利要求20-28的任一应用，其中含氧金属盐为氢氧化铝。
30.按照上述权利要求20-29的任一应用，其中该制剂为片剂。
31.按照权利要求30的应用，其中该片剂为非压制片。
32.按照权利要求31的应用，其中非压制片为快速溶解片。
33.按照权利要求30的应用，其中该片剂为压制片。
34.按照权利要求30-33任一的应用，其中该片剂用于舌下给药。
35.按照权利要求20-29任一的应用，其中该制剂为粉末。
36.按照权利要求20-29任一的应用，其中该制剂为微粒形式。
37.按照权利要求20-29任一的应用，其中该制剂为颗粒。
38.按照权利要求20-29的任一应用，其中该制剂为含有冻干物的胶囊。
39.给受试者免疫接种的方法，包括将有效量的按照权利要求1-19中任一的固体制剂进行粘膜给药。
40.治疗变态反应或减轻变态反应症状的方法，包括将有效量的按照权利要求1-19中任一的固体制剂进行粘膜给药，该制剂中至少含有一种变应原。
41.按照权利要求39或40中任一的方法，其中通过口腔粘膜进行给药。
42.按照权利要求41的方法，其中通过舌下粘膜进行给药。
43.按照权利要求39-40中任一的方法，其中经由口腔，而且通过胃肠道粘膜给药。
CNA2006800403788A 2005-10-04 2006-10-04 固体疫苗制剂 Pending CN101296705A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200501392 2005-10-04
DKPA200501392 2005-10-04
US60/722,948 2005-10-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101296705A true CN101296705A (zh) 2008-10-29

Family

ID=35602348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2006800403788A Pending CN101296705A (zh) 2005-10-04 2006-10-04 固体疫苗制剂

Country Status (3)

Country Link
CN (1) CN101296705A (zh)
BR (1) BRPI0616879A2 (zh)
ZA (1) ZA200802953B (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102933230A (zh) * 2010-04-15 2013-02-13 株式会社新日本科学 用于鼻内递送的方法和组合物
CN103781491A (zh) * 2011-05-17 2014-05-07 索利吉尼克斯公司 热稳定性疫苗组合物及其制备方法
CN105051537A (zh) * 2012-12-28 2015-11-11 塞尔雷斯蒂斯有限公司 细胞介导的免疫应答试验
CN108289948A (zh) * 2015-11-27 2018-07-17 日东电工株式会社 口腔内给药用疫苗药物组合物和口腔内给药用疫苗药物组合物的制造方法
CN110114062A (zh) * 2016-11-21 2019-08-09 前品牌股份有限公司 液体变应原组合物和制备其的方法
CN111447947A (zh) * 2017-12-07 2020-07-24 默沙东公司 登革病毒疫苗组合物的制剂

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102933230A (zh) * 2010-04-15 2013-02-13 株式会社新日本科学 用于鼻内递送的方法和组合物
US10463723B2 (en) 2010-04-15 2019-11-05 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Methods and compositions for intranasal delivery
CN102933230B (zh) * 2010-04-15 2016-03-02 株式会社新日本科学 用于鼻内递送的方法和组合物
US9687536B2 (en) 2010-04-15 2017-06-27 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Methods and compositions for intranasal delivery
CN103781491A (zh) * 2011-05-17 2014-05-07 索利吉尼克斯公司 热稳定性疫苗组合物及其制备方法
CN107625958A (zh) * 2011-05-17 2018-01-26 索利吉尼克斯公司 热稳定性疫苗组合物及其制备方法
CN110118871A (zh) * 2012-12-28 2019-08-13 塞尔雷斯蒂斯有限公司 细胞介导的免疫应答试验
CN105051537B (zh) * 2012-12-28 2019-04-12 塞尔雷斯蒂斯有限公司 细胞介导的免疫应答试验
CN105051537A (zh) * 2012-12-28 2015-11-11 塞尔雷斯蒂斯有限公司 细胞介导的免疫应答试验
CN108289948A (zh) * 2015-11-27 2018-07-17 日东电工株式会社 口腔内给药用疫苗药物组合物和口腔内给药用疫苗药物组合物的制造方法
CN110114062A (zh) * 2016-11-21 2019-08-09 前品牌股份有限公司 液体变应原组合物和制备其的方法
CN110114062B (zh) * 2016-11-21 2023-04-07 雀巢产品有限公司 液体变应原组合物和制备其的方法
CN111447947A (zh) * 2017-12-07 2020-07-24 默沙东公司 登革病毒疫苗组合物的制剂
CN111447947B (zh) * 2017-12-07 2024-01-12 默沙东有限责任公司 登革病毒疫苗组合物的制剂
US11883480B2 (en) 2017-12-07 2024-01-30 Merck Sharp & Dohme Llc Formulations of dengue virus vaccine compositions

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200802953B (en) 2009-01-28
BRPI0616879A2 (pt) 2011-07-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20090155351A1 (en) Solid Vaccine Formulation
CN101918028B (zh) 赋予针对诺如病毒的保护性免疫应答的疫苗
CN101296705A (zh) 固体疫苗制剂
CN1758899B (zh) 具有糖基质的剂型
ES2602506T3 (es) Forma de dosificación de disolución rápida de una vacuna oral usando almidón
MXPA03001392A (es) Vacuna de dosis solida oral.
TW200416042A (en) Improvements in or relating to vaccines
US20120034305A1 (en) Solid dispersing vaccine composition for oral delivery
US20210052725A1 (en) Adjuvant system for oral vaccine administration
CN102427828A (zh) 含具有信号肽的细菌毒素作为载体的半抗原-载体缀合物和它们在免疫原性组合物中的用途
ES2227885T3 (es) Composicion de vacuna de dispersion solida para administracion oral.
JP4653262B2 (ja) ロタウイルスワクチン製剤類
CN1338947B (zh) 粘膜递送系统
US20020197321A1 (en) Solid dispersing vaccine composition for oral delivery
TWI819156B (zh) 包含類病毒體之口服分散疫苗
WO2019021957A1 (ja) 点鼻用乾燥粉末医薬組成物
RU2808276C2 (ru) Перорально диспергируемая вакцина, содержащая виросомы
CN106075430A (zh) 多价肺炎球菌‑acyw135脑膜炎球菌联合疫苗
US20220096375A1 (en) Stabilized non-enveloped virus compositions
Burger Stabilization of live attenuated measles virus vaccine in glassy matrices
WO2004052341A1 (en) Adjuvant compositions containing a sugar in crystalline form and aminoalkyl glucosaminide-4-phosphate

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20081029