CN101278652B - 一种国兰根际细胞转化的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种国兰根际细胞转化的方法，该方法是在自然条件下利用有机植料诱导国兰根际细胞由营养型细胞向胚型细胞转化，其包括以下步骤：(1)植料的配制；(2)废弃兰根的处理；(3)根际细胞的诱变；(4)新苗的换料移植。本发明方法培育出的兰苗具有强抗逆能力，能全面保证基因遗传的准确性和完整性，其新芽成苗、着花与母本自然株完全相同。同时，本发明遵循自然，理念先进，取材方便，操作简单，对保护国兰资源，发展名贵品种，让国兰提前进入千家万户有着极为重要的意义。

Description

一种国兰根际细胞转化的方法

技术领域

本发明涉及一种国兰根际细胞转化的方法，具体的说，是一种自然条件下利用有机植料诱导国兰根际细胞由营养型细胞向胚型细胞转化的方法。

背景技术

兰科植物是千百年来备受人类呵护的高级观赏植物。中国是产兰大国，有上千万人从事兰花养植。随着兰花产业的不断兴起，野生兰花资源越来越少，个别品种已发展到濒临灭绝的边缘。而每年兰花分株换盆时，由于受兰根无自然再生能力的传统观念影响，全国各地有数以万计名贵兰花断裂根被丢弃，造成巨大的资源浪费。尽管多年来一直有专家学者和养兰人士在努力探寻自然条件下利用废弃兰根发苗的方法，但终因各种原因而未能成功。

针对上述情况，本发明研究人员根据细胞全息理论，综合探索废弃兰根在自然条件下存活、演变、能量聚积、细胞转化、生长发育等不同表现，经优化植料组方，改进诱导技术，有效刺激胚胎发育，从而提供一种最终达到着生新苗目的的新型生物技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种自然条件下利用有机植料诱导国兰根际细胞由营养型细胞向胚型细胞转化的方法。

本发明所提供的国兰根际细胞转化的方法，包括以下步骤：

1、植料的配制：按体积比，取柳树皮7-15、松树皮4-10、青冈树皮18-25、青冈叶1-2、银杏叶1-2、桉叶1-2、干海草炭10-25、泥炭土5-12破碎，经水浸泡，取出后自然堆腐发酵，然后拌入黄沙5-12、火烧空心土2-9、海浮石2-10，用沸水浸煮，去除污渍后，暴晒制干，密 封保存，3-5天后，以消毒液和营养液喷洒植料，自然堆放备用；

2、废弃兰根的处理：将废弃兰根用消毒液消毒后，进行清洗，再以营养液浸泡，取出晾晒，以消毒水苔包裹备用；

3、根际细胞的诱变：将上述植料、废弃兰根晾晒，取植料铺放于干燥的盆具中，将同品种的健壮兰株植于盆土正中，再将废弃兰根斜插入兰株周围的植料中，加入植料掩盖废弃兰根，铺设水苔，以消毒液和营养液喷洒兰株及盆面，将培养盆移至阴凉潮湿通风处，5-7天后，用营养液对其进行处理，15-20天后，将兰盆移至自然条件下，再以诱导剂和营养液交替喷淋盆面，并始终保持盆土表面湿润，4-5个月，停止诱导剂和营养液供给，控制兰盆的环境温度在24℃-32℃之间；

4、新苗的换料移植：然后将新苗从培养盆中取出，用水将根部残留植料洗净，用消毒液浸泡后，取出晾晒，备用，将配制好的植料铺放于已消毒的盆具中，将处理好的新苗移入盆土中，用植料掩盖兰根，均匀铺设水苔或干海草炭，以消毒液喷洒全盆，将兰盆放置于阴凉潮湿通风处，5-7天后，用雾状水喷洒盆面，保持盆面湿润，3个月后，喷施少量液肥，转入正常兰苗管理。

上述植料还包括草叶0.5-1.2、豆壳0.2-0.7、蕨根3-7、谷壳1-2、籽壳0.2-0.7、蛇木根4-6、水苔0.5-1.2。

本发明方法中，所述的植料组方及体积比，优选柳树皮10、松树皮7、青冈树皮20、青冈叶1、银杏叶1、桉叶1、干海草炭10、泥炭土7、黄沙10、火烧空心土8、水浮石10、草叶1、豆壳0.5、蕨根5、谷壳2、籽壳0.5、蛇木根5、水苔1。

本发明方法中所述的消毒液选自拖布津液、百菌清、波尔多液中的一种或几种；所述的营养液选自葡萄糖溶液、水杨酸溶液、谷维素溶液、倍多生液、古燕肥液中的一种或几种；所述的诱导剂选自萘乙酸溶液、吲哚乙酸溶液中的一种或几种。

本发明方法中所述的废弃兰根选自三种类型：(1)自然断裂并已愈合伤口的无病毒废弃根：其外观泽较白、肥胖或微黄、肉质饱满、表面组织无损伤。(2)人工修剪废弃的多余兰根或老化根：人工剪除的新根晶莹洁白，晶体透明；老根色泽微黄、表皮老化或有部分黑斑及腐烂带有菌点。(3)腐烂废根残存部分：外观色泽黯淡，一端或两端坏死，残存部分表面组织无损伤或损伤较小。这三种废弃兰根均有一定的成活机率，尤以人工剪除新根为佳。通常情况下，较新的废弃根成活率在百分之五十左右；无病毒损伤老根成活率在百分之四十左右；残存根成活率约为百分之十。

本发明方法中所述的盆具，目前国内流行的兰盆均可适用，其中优选黄泥烧制的短腰大口盆，其处理方法为：将土制大口盆底部透气孔扩大到直径八至十公分，以十二至十五公分旧瓦片四至八块，按一定间隙掩盖透气孔(勿用透气罩。掩盖时不能完全遮蔽透气通道，以避免盆内空气阻滞导致兰根腐烂)，瓦片盖好后，连同兰盆入净水浸泡七天，取置于阴凉潮湿处备用。

本发明方法中，所述的植料破碎成2公分以下，在根际细胞的诱变过程中，用于铺放盆具时，先取1.5公分-2公分颗粒植料覆盖约三公分厚，再以1公分-1.4公分颗粒植料继续铺放二公分厚，最后用0.5公分-0.9公分的植料铺至离盆沿五公分高度。

本发明方法中所述的废弃兰根植入植料时，按健壮兰株生长方向，以45°角轻插入兰株周围的植料中，再以0.5公分-0.9公分的植料堆于兰根表面至高出盆面一公分，以掩盖兰根为限。

本发明方法中所述的新苗的换料移植过程中，植料铺设盆具时，以1公分-2公分的植料轻铺于兰盆三分之二处，再取0.5公分-0.9公分的植料轻铺于兰盆五分之三处；新苗移入盆土后，用来掩盖兰根的植料为0.5公分-0.9公分的植料与培养盆中0.5公分-0.9公分的旧植料以1∶1的比例混合，用消毒液喷洒并混均匀后的植料。

本发明方法步骤1所述的消毒液优选1∶800倍-1∶1000倍的托布津液，最优选1∶800倍的托布津液；所述的营养液优选1∶1000倍-1∶1500倍的葡萄糖溶液，最优选1∶1000倍的葡萄糖溶液。

本发明方法步骤2所述的消毒液优选1∶800倍-1∶1000倍的托布津液，最优选1∶800倍的托布津液；所述的营养液优选1∶1500倍-1∶2000倍的葡萄糖溶液与1∶2500倍-1∶3000倍的水杨酸溶液的混合液，最优选1∶2000倍的葡萄糖溶液与1∶3000倍的水杨酸溶液的混合液。

本发明方法步骤3所述的消毒液优选1∶800倍-1∶1000倍的托布津液，最优选1∶800倍的托布津液；植入废弃兰根时用于喷洒兰株及盆面的营养液优选1∶2000倍-1∶3000倍的水杨酸液，最优选1∶3000倍的水杨酸液；兰盆经阴凉潮湿通风处放置后用于喷洒兰株的营养液优选1∶2500倍-1∶3000倍的葡萄糖溶液和1∶2500倍-1∶3000倍的谷维素溶液，最优选1∶3000倍的葡萄糖溶液和1∶3000倍的谷维素溶液；所述的诱导剂优选1∶4000倍-1∶5000倍的萘乙酸溶液，最优选1∶5000倍的萘乙酸溶液；与诱导剂交替喷洒盆面的营养剂优选1∶1500倍-1∶2000倍的葡萄糖溶液，最优选1∶2000倍的葡萄糖溶液。

本发明方法步骤4用于消毒新苗的消毒剂优选1∶800倍-1∶1000倍的托布津液，最优选1∶800倍的托布津液；新苗移入盆中后，用于喷洒全盆的消毒液优选1∶800倍-1∶1000倍的托布津液，最优选1∶1000倍的托布津液。

废弃兰根由成活到出苗，要经过被动性吸收营养(愈合伤口延续生命)、主动性吸收营养(营养聚积、恢复性生长，营养细胞向胚型细胞演变)、生长点萌动(完成细胞转化过程，产生晶状体、龙蛋、根状茎、形成叶芽基)三大重要阶段，各个阶段的不同表现为：

被动性吸收营养阶段：兰根经消毒处理并上盆后，其存活组织需经七至十天左右的短暂休眠。休眠期间，培养盆内植料释放营养和水分结合空气中的游离氮作用于兰根。兰根在被动性吸收营养过程中， 组织细胞逐渐活跃，自动愈合伤口并修复受损组织。经过约四十天后，兰根原来的受伤组织脱落，原有伤口痕迹消失。其外观表现为色泽白嫩、根茎饱满、表面组织光润、无病斑残留，兰根两端均圆润完好，看不见脱落点，从而形成独立新根，两端均同时具备发芽条件。

主动性吸收营养阶段：兰根完成营养聚积过程中，细胞组织活跃度加大，演变速度加快，其表层组织开始主动大量吸收营养。随着其营养成分的增加，兰根表面变白，内部产生营养过剩现象。兰根自身引发生长需求，发出强烈生长信息。在强烈生长信息的激发下，兰根营养细胞的全息记忆程序被激活并产生联动效应，开始向胚型细胞演变，原有营养型组织大量转化为胚型组织。废根由原次生根逐渐演变为类原生根，形成根状茎或块状茎。此阶段约需五十天左右的时间。

生长点萌动阶段：兰根演变为根状茎或块状茎后，表层组织导生出根毛。十天后，两端或中段出现晶状体。二十天后，形成龙蛋、次生根或叶芽基。此时，兰根内部细胞处于空前活跃状态，各部位生长异常迅速。常规条件下，叶芽基十天左右即可演变为新芽，再经十五天发育，即可出土。此阶段约需六十天左右时间。

本发明方法所述的植料，作为特别优化组方的专用中性生物介质，具备废弃兰根细胞转化所需的全部营养成份，微量元素丰富，肥效释放均衡，既通风透气，又有很好的保湿性，尤其富含诱导废弃兰根存活发育的多糖类有机物、络合物和稀有衍生物，是达成兰根细胞转化的重要物质。其中，柳树皮富含水杨酸等多种益生物，在一定条件下可作用于兰根生长点发育和叶芽基产生；其余材料富含生长素等多种物质，分别提供兰根演变生长所需的各类氨基酸、大量、中量和微量元素，尤其是混合组方后各类有机质产生的衍生物，对于兰根成活并由被动性营养聚积向主动性吸收营养转变从而促进兰根根际营养细胞分裂并向胚型细胞转化有着决定性作用。因此，经六年多反复实验优化的本植料组方，是有效的废弃兰根生长诱导剂，是决定废弃 兰根能否成活发育的关键物质。

本发明方法步骤4所述的国兰根际细胞的诱变过程中，在停止一切药肥供给后，控制兰盆环境温度在24℃-32℃之间，其原因为：新芽着生对温度要求较高，当气温在25℃以下时，废根能快速完成伤口愈合、聚积能量，加快被动吸收营养向主动吸收营养过渡的速度，表面组织易变白，并逐步收缩。五十天左右即可完成伤口愈合和能量聚积。气温在25℃以上时，生长点萌动迅速，较易形成晶状体、龙蛋或根状茎。在一百二十天左右，完全可见不定根(向兰盆底部生长则形成次生根，反之则为芽)、不定芽(向盆面生长即可能发展为新芽，反之则为根)或叶芽基(生长方向明显可辨的晶状体)，此时将温度提升至30℃左右，即可迅速着生幼苗。废根的存活、演变、细胞转化直至出苗，均与温度和光照有着密切的联系：温度高，光照强，表现为多苗；反之则表现为多根。因此，培育期间应维持较高温度。同时，由于废根生长点极为脆弱，易受伤害，日常管理中切勿轻易搬动兰盆或翻动表土，以避免生长点受损。

兰根演变约一百六十天，新芽即可出土。出土新芽由于有已完成营养聚集的类原生根全力提供营养支持，致使新芽生长十分迅速。通常情况下，其生长速度是兰根生长速度的一至二倍。此时，由于培养介质泥化，肥效失衡，应更换兰盆和植料，将小苗移植到新的介质中，以利小苗的快速生长。

利用有机植料自然条件下诱导国兰根际营养细胞转化为胚型细胞，从而培育出的兰苗具有强抗逆能力，能全面保证基因遗传的准确性和完整性。其新芽成苗、着花与母本自然株完全相同。因此，自然条件下利用有机植料，诱导国兰废弃根重发新苗技术，是一项全新的科技成果。这一成果突破了兰科植物细胞转化禁区，推翻了兰根不能再生新苗的传统定论，填补了国兰废根育苗空白，超越了组织培养基本条件和技术范畴，提供了细胞全息理论在兰科植物方面的实证范 例，丰富并拓宽了生物科技基本内容和发展领域，是对兰科植物细胞转化工程和基因遗传工程的重大贡献。同时，本发明遵循自然，理念先进，取材方便，操作简单，对保护国兰资源，发展名贵品种，让国兰提前进入千家万户有着极为重要的意义。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

实施例1

1、植料的配制：将柳树皮10升、松树皮7升、青冈树皮20升、青冈叶1升、银杏叶1升、桉叶1升、干海草炭10升、泥炭土7升破碎成2公分以下，经水浸泡1个月，取出后自然堆腐发酵1年以上，然后拌入黄沙10升、火烧空心土8升、海浮石10升，用沸水浸煮2小时，去除污渍后，暴晒制干，密封保存，5天后，以1∶800倍托布津液和1∶1000倍葡萄糖溶液喷洒植料，自然堆放备用；

2、废弃兰根的处理：将废弃兰根浸于1∶800倍托布津稀释液消毒，消毒三十分钟后取出以清水冲淋，洗去废根表面残留药物，再以1∶2000倍葡萄糖、1∶3000倍水杨酸混合溶液浸泡三十分钟，取出晾晒，以消毒水苔包裹备用。

3、盆具的处理：选择黄泥烧制的短腰大口盆，将土制大口盆底部透气孔扩大到直径八至十公分，以十二至十五公分旧瓦片四至八块，按一定间隙掩盖透气孔(勿用透气罩。掩盖时不能完全遮蔽透气通道，以避免盆内空气阻滞导致兰根腐烂)，瓦片盖好后，连同兰盆入净水浸泡七天，取置于阴凉潮湿处备用。

4、根际细胞的诱变：将预先配制好的植料、废弃兰根经晾晒三十分钟后，取1.5-2公分的植料覆盖于瓦片上约3公分厚，以1-1.4公分的植料继续铺放2公分厚，用0.5-0.9公分的植料轻铺至离盆沿5公分高度，将同品种的健壮兰株植于盆土正中，再将废弃兰根按其生长方向， 以45°角斜插入兰株周围的植料中，加入0.5-0.9公分的植料掩盖兰根至高出盆面1公分，轻拍盆体使兰根与植料自然结合，铺设少许水苔，以1∶800的托布津液和1∶3000倍水杨酸液喷洒兰株及盆面，将培养盆移至阴凉潮湿通风处，以砖块呈三角形衬垫兰盆底部，五天后，于每日早晚以1∶3000倍葡萄糖溶液和1∶3000倍谷维素溶液向盆面各喷洒雾状水一次，每十五天用上述两种混合溶液浸盆一次，每次浸盆十分钟，三十天后，将兰盆移至自然条件下，进行日光照射，其光照时间应高于一般兰株，以每天二分之一至三分之二的光照时间为宜，从第二个月开始，以1∶5000倍萘乙酸稀释液和1∶2000倍葡萄糖溶液交替喷洒盆面，高温期五天一次，低温期一月一次，日常管理应始终保持盆土表面湿润，四个月后，停止萘乙酸稀释液和葡萄糖溶液供给，控制兰盆环境温度在24℃-32℃之间。

5、新苗的换料移植：将新苗从培养盆中取出，用自然净水将根部残留植料冲洗干净，以1∶800倍托布津液浸泡，取出晾晒四十分钟，备用，选取高腰、小口、盆壁不开洞、盆底进气孔直径不低于四公分的育苗盆，经严格消毒后，备用，取预先配制好的1.5-2公分的植料轻铺于兰盆三分之二处，再取1-1.4公分的植料轻铺于兰盆五分之三处，取0.5-0.9公分的植料与培养盆中0.5-0.9公分的旧植料以1∶1的比例混合，以1∶800倍托布津液喷洒并互混均匀，将新苗移入盆中，以上述混合植料铺放于兰根周围至高出盆面1公分，均匀铺设少许水苔或干海草炭，轻拍盆体使植料与兰根自然结合，进行盆面整形，然后以1∶1000倍托布津液喷洒全盆，将兰盆放置于阴凉潮湿通风处，六日后，每天早晚喷洒雾状净水各一次，每十五天浸盆一次，三个月后，可喷施少量液肥，转入正常兰苗管理。

实施例2

基本过程同实施例1，不同的是：植料的配制过程中，植料组分为柳树皮7升、松树皮4升、青冈树皮18升、青冈叶1升、银杏叶1升、桉叶1升、干海草炭10升、泥炭土粒5升、黄沙12升、火烧空心土8升、 海浮石8升，所述消毒剂和营养剂分别为1∶1000倍的托布津液和1∶1500倍的葡萄糖溶液；废弃兰根的处理过程中，所述消毒剂为1∶1000倍的托布津液，所述营养剂为1∶1500倍的葡萄糖溶液和1∶2500倍的水杨酸溶液的混合液；根际细胞的诱变过程中，所述消毒液为1∶1000倍的托布津液，植入废弃兰根时用于喷洒兰株及盆面的营养液为1∶2000倍的水杨酸液；兰盆经阴凉潮湿通风处放置后用于喷洒兰株的营养液为1∶2500倍的葡萄糖溶液和1∶2500倍的谷维素溶液；所述的诱导剂为1∶4000倍的萘乙酸溶液，与诱导剂交替喷洒盆面的营养剂为1∶1500倍的葡萄糖溶液；新苗的换料移植过程中，用于消毒新苗的消毒剂为1∶1000倍的托布津液，新苗移入盆中后，用于喷洒全盆的消毒液优选1∶800倍的托布津液。

实施例3

基本过程同实施例1，不同的是：植料的配制中，植料的组分为柳树皮15升、松树皮10升、青冈树皮25升、青冈叶2升、银杏叶1升、桉叶2升、干海草炭25升、泥炭土10升、黄沙5升、火烧空心土2升、海浮石2升，所述消毒剂和营养剂分别为1∶900倍的百菌清液和1∶1200倍的倍多生液；废弃兰根的处理过程中，所述消毒剂为1∶900倍的百菌清液，所述营养剂为1∶1200倍的倍多生液和1∶2800倍的水杨酸溶液的混合液；根际细胞的诱变过程中，所述消毒液为1∶900倍的百菌清液，植入废弃兰根时用于喷洒兰株及盆面的营养液为1∶2500倍的水杨酸液；兰盆经阴凉潮湿通风处放置后用于喷洒兰株的营养液为1∶2800倍的倍多生液和1∶2800倍的谷维素溶液；所述的诱导剂为1∶4500倍的吲哚乙酸溶液，与诱导剂交替喷洒盆面的营养剂为1∶1800倍的倍多生液；新苗的换料移植过程中，用于消毒新苗的消毒剂为1∶900倍的百菌清液，新苗移入盆中后，用于喷洒全盆的消毒液优选1∶900倍的百菌清液。

实施例4

基本过程同实施例1，不同的是：植料的配制过程中，柳树皮15升、松树皮10升、青冈树皮22升、青冈叶1升、银杏叶1.5升、桉叶1.5 升、干海草炭15升、泥炭土12升、黄沙12升、火烧空心土9升、海浮石4升，所述消毒剂和营养剂分别为1∶800倍的波尔多液和1∶1000倍的古燕肥液；废弃兰根的处理过程中，所述消毒剂为1∶800倍的波尔多液，所述营养剂为1∶2000倍的古燕肥液和1∶3000倍的水杨酸溶液的混合液；根际细胞的诱变过程中，所述消毒液为1∶800倍的波尔多液，植入废弃兰根时用于喷洒兰株及盆面的营养液为1∶3000倍的水杨酸液；兰盆经阴凉潮湿通风处放置后用于喷洒兰株的营养液为1∶3000倍的古燕肥液和1∶3000倍的谷维素溶液；所述的诱导剂为1∶5000倍的萘乙酸溶液，与诱导剂交替喷洒盆面的营养剂为1∶2000倍的古燕肥液；新苗的换料移植过程中，用于消毒新苗的消毒剂为1∶800倍的波尔多液，新苗移入盆中后，用于喷洒全盆的消毒液优选1∶1000倍的波尔多液。

实施例5

基本过程同实施例1，不同的是：植料的组方中还含有草叶1升、豆壳0.5升、蕨根5升、谷壳2升、籽壳0.5升、蛇木根5升、水苔1升。

实施例6

基本过程同实施例2，不同的是：植料的组方中还含有草叶0.5升、豆壳0.7升、蕨根3升、谷壳1升、籽壳0.2升、蛇木根4升、水苔0.5升。

实施例7

基本过程同实施例3，不同的是：植料的组方中还含有草叶1.2升、豆壳0.2升、蕨根7升、谷壳1.5升、籽壳0.7升、蛇木根6升、水苔1.2升。

实施例8

基本过程同实施例4，不同的是：植料的组方中还含有草叶1升、豆壳0.5升、蕨根5升、谷壳2升、籽壳0.5升、蛇木根5升、水苔1升。

实验例1

2006年2月27日，我们分别选取春剑、春兰、蕙兰、四季兰废弃根64条，经实施例1的方法消毒处理后，取预先配制好的植料，将兰根分别植于黄泥烧制的短腰大口盆中，采用实施例1的方法进行培植 管理，同年9月1日起盆时，得到存活根、叶芽基、新苗等33条(苗)；2006年2月27日植盆的一条长约6公分的四季兰旧根，至同年9月1日起盆时，原旧根已完全演变为根状茎，着生2公分长新苗1株，移盆栽培至同年10月6日，新芽即生长到三公分高；我们采用实施例1的方法先后培植出的春剑名花“西蜀道光”和春兰传统名花“富水春”，连续开花2年，其花型、花容、颜色、香味均与自然株完全一致。

Claims (8)

1.一种国兰根际细胞转化的方法，其包括以下步骤：

(1)植料的配制：按体积比，将柳树皮7-15、松树皮4-10、青冈树皮18-25、青冈叶1-2、银杏叶1-2、桉叶1-2、干海草炭10-25、泥炭土5-12进行破碎，经水浸泡，取出后自然堆腐发酵，然后拌入黄沙5-12、火烧空心土2-9、海浮石2-10，用沸水浸煮，去除污渍后，暴晒制干，密封保存，3天～5天后，以消毒液和1∶1000倍葡萄糖溶液喷洒植料，自然堆放备用；

(2)废弃兰根的处理：将废弃兰根用消毒液消毒后，进行清洗，再以1∶2000倍葡萄糖、1∶3000倍水杨酸混合溶液浸泡，取出晾晒，以消毒水苔包裹备用；

(3)根际细胞的诱变：将上述植料、废弃兰根晾晒，取植料铺放于干燥的盆具中，将同品种的健壮兰株植于盆土正中，再将废弃兰根斜插入兰株周围的植料中，加入植料掩盖废弃兰根，铺设水苔，以消毒液和1∶3000倍水杨酸溶液喷洒兰株及盆面，将培养盆移至阴凉潮湿通风处，5天～7天后，于每日早晚以1∶3000倍葡萄糖溶液和1∶3000倍谷维素溶液向盆面各喷洒雾状水一次，15天～20天后，将兰盆移至自然条件下，再以1∶5000倍萘乙酸稀释液和1∶2000倍葡萄糖溶液交替喷淋盆面，并始终保持盆土表面湿润，四～五个月，停止萘乙酸稀释液和葡萄糖溶液的供给，控制兰盆的环境温度在24℃至32℃之间；

(4)新苗的换料移植：然后将新苗从培养盆中取出，用水将根部残留植料洗净，用消毒液浸泡后，取出晾晒，备用，将配制好的植料铺放于已消毒的盆具中，将处理好的新苗移入盆土中，用植料掩盖兰根，均匀铺设水苔或干海草炭，以消毒液喷洒全盆，将兰盆放置于阴凉潮湿通风处，5天～7天后，用雾状水喷洒盆面，保持盆面湿润，三个月后，喷施液肥，转入正常兰苗管理。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植料还包括草叶0.5-1.2、豆壳0.2-0.7、蕨根3-7、谷壳1-2、籽壳0.2-0.7、蛇木根4-6、水苔0.5-1.2。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述植料组方及体积比为柳树皮10、松树皮7、青冈树皮20、青冈叶1、银杏叶1、桉叶1、干海草炭10、泥炭土7、黄沙10、火烧空心土8、海浮石10、草叶1、豆壳0.5、蕨根5、谷壳2、籽壳0.5、蛇木根5、水苔1。

4.如权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于，所述消毒液选自拖布津液、百菌清液、波尔多液中的一种或几种。

5.如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，所述废弃兰根选自自然断裂并已愈合伤口的无病毒废弃根、人工修剪废弃的多余兰根或老化根或腐烂废根残存部分。

6.如权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于，所述盆具为黄泥烧制的短腰大口盆，其处理方法为：将土制大口盆底部透气孔扩大到直径八至十公分，以十二至十五公分旧瓦片四至八块，按一定间隙掩盖透气孔，瓦片盖好后，连同兰盆入净水浸泡七天，取置于阴凉潮湿处备用。

7.如权利要求1-6任意一项所述的方法，其特征在于，所述植料破碎成2公分以下，在根际细胞的诱变过程中，用于铺放盆具时，先取1.5-2公分颗粒植料覆盖约三公分厚，再以1-1.4公分颗粒植料继续铺放二公分厚，最后用0.5-0.9公分的植料铺至离盆沿五公分高度。

8.如权利要求1-7任意一项所述的方法，其特征在于，所述废弃兰根植入植料时，按健壮兰株生长方向，以45°角轻插入兰株周围的植料中，再以0.5-0.9公分的植料堆于兰根表面至高出盆面一公分，以掩盖兰根为限。