CN101264111A - 菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用，属于中药领域。本发明菱角挥发油可通过现有文献报导的方法获得，优选为用超临界流体萃取方法获得。菱角挥发油对肿瘤细胞的生长增殖具有较明显的抑制作用，药效学实验表明对人宫颈癌和肝癌的抑制作用明显，并且无明显的毒性反应。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域。
背景技术
菱角为菱科植物的果实，又称菱、菱实，是一种应用广泛的药食同用水生植物，菱实味甘鲜，性平，无毒，具有清热祛暑，除湿祛风，益气健脾功效，被药典、中药大辞典等广泛收载。近年来研究表明，菱角具有抗肿瘤作用，可用于肿瘤的辅助治疗，但其作用的有效成分一直未明确。
发明内容
本发明提供一种菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用。
本发明菱角挥发油可通过现有文献报导的方法获得，优选为以下超临界流体萃取方法获得。具体方法是：
1、仪器、试剂与原料
HA221-50-06超临界流体萃取仪(江苏南通华安超临界萃取有限公司)；TRACE-MS气相色谱-质谱联用仪(美国Finnigan公司)；AB104型电子天平(瑞士Mettle toledo公司)。CO2(食用级，液态纯度为99.99％)乙醚、无水硫酸钠等均为分析纯。所用菱角均采自吉林省大安县，并经吉林农业大学樊绍钵教授鉴定为东北菱(Trapa manshurica Fler)。
2、实验方法
将干燥菱壳粉粹并过24目筛，称取1760g盛入5L萃取釜。萃取温度40℃-45℃，分离温度45℃-50℃，萃取压力25Mpa-30Mpa，分离压力12Mpa-15Mpa，CO2流量15-20kg/hr，待各条件稳定后开始等压循环萃取，共萃取4h，每小时接取一次萃取物。将萃取物溶于50ml乙醚，无水硫酸钠干燥，低温存放，用于GC-MS检测。
3、挥发油GC-MS检测条件
气相色谱：HP-5MS弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)；进样口温度280℃；起始柱温80℃，保持1min，以每分钟20℃升至280℃，保持15min；载气：氦气，流量1.0mL/min；分流比30∶1；进样量1μL。质谱：EI离子源；电子能量70eV；界面温度280℃；离子流温度180℃。扫描范围：33-600U。通过G1701BA化学工作站数据处理系统，检索Nist98谱图库，相对含量在1％以上的14种，含量占总化合物的75.2％，其中香豆素类1种，占总化合物的22.97％，脂肪族类2种，占总化合物的26.26％，酮类5种，占总化合物的13.08％，醛类1种，占总化合物的2.36％，吡喃类1种，占总化合物的2.15％，醇类1种，占总化合物的1.87％，酯类1种，占总化合物的1.47％，酚类1种，占总化合物的1.83％；含量较高的化合物依次为蛇床子素(22.97％)，9，12-亚油酸(17.18％)，棕榈酸(9.08％)，4，5，6，7-四甲基苯并[c]呋喃酮(5.49％)。其中含量最高的香豆精类物质蛇床子素，具有抗菌、镇静、降压、抗心律不齐、抗癌抗突变及提高机体免疫力等作用。另外，占挥发油总量26.26％的两种脂肪酸具有较多的应用价值，其中亚油酸(LA)为人体必需脂肪酸，是共轭亚油酸(CLA)的前体物，而共轭亚油酸具有抗癌、抗动脉粥样硬化等生理功能。
本发明的积极效果是：菱角挥发油对肿瘤细胞的生长增殖具有较明显的抑制作用，药效学实验表明对人宫颈癌和肝癌的抑制作用明显，并且无明显的毒性反应。本发明药物用法用量，口服剂量20毫克-100毫克/次·人，一日三次。
附图说明
图1是菱角挥发油总离子流图。
图2是菱角挥发油对Hela细胞的生长抑制曲线。
图3是24h后对照组Hela细胞(×200)。
图4是给药24h后Hela细胞(×200)。
图5是检测挥发油诱导Hela细胞凋亡电泳图。
具体实施方式
下面通过药效学实验来进一步说明菱角挥发油的抑瘤作用。
1.菱角挥发油对人宫颈癌细胞Hela的增殖抑制作用
体外MTT实验结果表明，菱角挥发油对Hela细胞作用24h，显示具有较强的抑制增殖作用，由表2可知IC50为228.39μg·mL-1。由图2可见当菱角挥发油浓度为12.5、25、50、100、200、300、400、500μg·mL-1时，随着给药浓度的增大，对肿瘤细胞的抑制作用逐渐增强，两者呈明显的量效关系，与对照组相比，差异显著(P＜0.05)。给药前后细胞形态变化见图3，图4，在倒置显微镜下观察菱角挥发油对Hela细胞的作用，发现未给药的细胞生长旺盛，而给药组随着菱角挥发油浓度的增加细胞数目逐渐减少，体积变小、变形，贴壁细胞出现皱缩、脱落，细胞胞浆内颗粒增多、增粗，细胞膜边缘变粗糙。
表2 菱角挥发油对Hela细胞24h生长抑制作用(x±s)
*P＜0.05vs.阴性对照，**P＜0.01vs.阴性对照
2.琼脂糖凝胶电泳检测挥发油诱导Hela细胞凋亡
如图5所示，泳道1和3没有可见的清晰梯状条带，而泳道2则表现为特征性梯状条带(DNA Ladder)。说明Hela细胞经25μg·mL-1的菱角挥发油作用24h后没有明显的诱导凋亡作用，而当浓度达5025μg·mL-1时，在核小体连接处的DNA能被挥发油随机切断，形成寡聚核小体，导致Hela细胞发生凋亡。
3.菱角挥发油对体外培养肝癌细胞SMMC-7721抑制作用
采用MTT法评价菱角挥发油的体外抗肿瘤活性。体外实验MTT结果表明，超临界提取挥发油对SMMC-7721细胞增殖也具有明显抑制作用，四个时间点的半数抑制浓度IC50分别为25.88μg·mL-1、10.3μg·mL-1、8.46μg·mL-1和5.09μg·mL-1。菱角超临界提取挥发油均具有抑制SMMC-7721增殖及诱导细胞凋亡的作用。并且挥发油对SMMC-7721的抑制作用明显。
表3 菱角挥发油作用24h对SMMC-7721细胞生长抑制作用(x±s)
*P＜0.05vs.阴性对照；**P＜0.01vs.阴性对照
表4 菱角挥发油作用48h对SMMC-7721细胞生长抑制作用(x±s)
*P＜0.05vs.阴性对照；**P＜0.01vs.阴性对照
表5 菱角挥发油作用72h对SMMC-7721细胞生长抑制作用(x±s)
*P＜0.05vs.阴性对照；**P＜0.01vs.阴性对照
表6 菱角挥发油作用96h对SMMC-7721细胞生长抑制作用(x±s)
*P＜0.05vs.阴性对照；**P＜0.01vs.阴性对照
本发明超临界挥发油对SMMC-7721细胞24、48、72、96h，半数抑制率IC50分别为25.88、10.30、8.46和5.09μL·mL-1，抑制作用显著。
实施例
本发明胶丸剂型的制备：
菱角挥发油200克，常规辅料800克，制成10000粒胶丸。
Claims (3)
1、菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用。
2、如权利要求1所述的菱角挥发油在制备抑人宫颈癌药物中的应用。
3、如权利要求1所述的菱角挥发油在制备抑肝癌药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2008100506681A CN101264111A (zh) | 2008-04-29 | 2008-04-29 | 菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CNA2008100506681A CN101264111A (zh) | 2008-04-29 | 2008-04-29 | 菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101264111A true CN101264111A (zh) | 2008-09-17 |
Family
ID=39986951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2008100506681A Pending CN101264111A (zh) | 2008-04-29 | 2008-04-29 | 菱角挥发油在制备抑瘤药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101264111A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101433564B (zh) * | 2008-12-24 | 2011-03-16 | 吉林大学 | 菱角提取物在制备治疗白血病药物中的应用 |
| CN102319276A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-18 | 河南大学 | 南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用 |
-
2008
- 2008-04-29 CN CNA2008100506681A patent/CN101264111A/zh active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101433564B (zh) * | 2008-12-24 | 2011-03-16 | 吉林大学 | 菱角提取物在制备治疗白血病药物中的应用 |
| CN102319276A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-18 | 河南大学 | 南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用 |
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