CN101259290A - 一种靶向肿瘤介入治疗剂的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种靶向肿瘤介入治疗剂，属于医药技术领域。本发明是由经化学修饰过的多孔性载体键合放射性核素，并根据个性化用药需要，选择性地载入免疫调控剂、显影剂和辅助药物共同组成的一种肿瘤联合治疗剂。为了控制免疫调控剂的程序性释放，本发明的肿瘤介入治疗剂包裹有外层材料。本发明的优点是：应用了多孔性载体的高载药能力去络合放射性核素，保证能将有效的放射剂量准确地送达到肿瘤部位，同时也可以防止核素渗漏进入血液循环，避免出现普通放射治疗中常见的严重副作用，从而保证治疗的安全性和有效性。本发明适用于制备治疗原发性肿瘤、继发性肿瘤以及组织增生性疾病的药物制剂。

Description

一种靶向肿瘤介入治疗剂的制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种靶向肿瘤介入治疗剂，更具体地说涉及将放射性核素与多孔性载体结合，并与适当的免疫调控剂共同组成的一种肿瘤联合治疗剂，属于医药技术领域。

背景技术

癌症是当今人类健康的头号杀手。虽然近年来全世界在癌症的手术治疗、化学治疗、放射治疗等方面均不断有所进展，但肿瘤的临床疗效仍然很难令人满意，许多病人最终还是死于癌症。因此迫切需要寻求新的更加有效的治疗手段。

为了克服传统放射疗法的严重副作用，人们坚持不懈地做了很多探索。自二十世纪五十年代以来，放射免疫疗法(RIT)有了较大进展。目前采用单克隆抗体作为靶向载体，用能产生α--射线或β--射线的放射性核素对其进行放射性标记。这种含放射性核素的单克隆抗体注入体内后与肿瘤细胞相应抗原特异性结合，使肿瘤组织内聚集较大剂量的放射性核素，通过辐射破坏或干扰肿瘤细胞的结构及功能，起到抑制、杀伤或杀死肿瘤细胞的作用。这种疗法对淋巴瘤效果较好(Dillman RO.，J Clin Oncol，2002，20：3454)，但对临床上最常见的大多数实体肿瘤疗效并不理想。

在用内放射法(亦称介入疗法)治疗肝癌方面，人们已经有了较为成功的经验。典型的方法是使用含有钇-90(简称Y-90)的放射性微球玻璃或微球树脂，通过血管输入。Y-90-微球停留在肿瘤的毛细血管中，起到杀伤肿瘤细胞的作用。由于这种方法是通过毛细血管内径定位的，其定位的准确性相对较差，即使对微球的粒径严格地加以限制，但由于病变部位血管通路和毛细血管内径的不确定性等种种原因，总还是有少量的Y-90-微球循环于正常的肝组织内，同时通过血管间的通路分流到胃和肺，从而导致相关脏器的严重损害，这种损害对许多病人来说是难以耐受的。另有报道，这种方法还会导致骨髓抑制。(“Hepatocellular carcinoma：pilot trial of treatment with Y-90microspheres.”By Houle S，Yip TK，Shephered FA，.Rotstein LE，SnidermanKW，Theis E，Cawthorn RH，Richmond-Cox K.，Radiology.1989Sep；172(3)：857-860；“A phase I dose escalation trial of Y-90microspheresin the treatment of primary hepatocellular carcinoma.”By Shephered FA，Rotstein LE，Houle S，Yip TC，Paul K，Sniderman KW.，Cancer，1992Nov1；70(9)：2250-2254.)。肿瘤的内放射治疗剂(亦称介入治疗剂)对于放射性核素载体的性能有其特定的要求，例如载药量要大，结合力要强，生物相容性要好。因此载体的选择是肿瘤的内放射治疗剂研发的关键技术之一。在将壳聚糖等材料用作药物载体方面人们已经做过一定的探索，包括有人尝试着将它们做成微球以期改善其载药能力和使用性能(Effect of crosslinking agents onchitosan microspheres in controlled release of diclofenac sodium.Vanessa L Goncalves，Mauro C M Laranjeira，Valfredo T Favere，Polimeros：Ciencia e Tecnologia，(15)6-12，2005.)。但对比测试结果证明，即使是上述方法制作的微球，在经过交联和嵌入螯合剂之后，其载药能力仍然有限。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的缺陷，提供一种更为安全有效的靶向肿瘤介入治疗剂。

本发明的另一个目的是提供该靶向肿瘤介入剂的制备方法。

本发明的再一个目的是提供该靶向肿瘤介入剂在制备治疗各种原发性和继发性肿瘤以及组织增生性疾病的药物中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实施的：该靶向肿瘤介入治疗剂中包括与多孔性载体键合的放射性核素，所述多孔性载体由多孔材料经化学修饰制成，所述放射性核素是α-射线发射体、β-射线发射体和γ-射线发射体中一种或一种以上组合；所述的靶向肿瘤介入治疗剂中还包括免疫调控剂与外层材料，其中，所述免疫调控剂包括白介素、淋巴因子、趋化因子、抗体、肿瘤相关抗原、变异的肿瘤相关抗原、免疫佐剂、配体、免疫增强剂、调控性T-细胞抑制剂、受体、肽类、NK细胞激活剂、T-细胞激活剂、巨噬细胞激活剂、病毒产物、细菌产物、DNA和RNA的一种或一种以上混合物；所述的外层材料包括蛋白质、聚合氨基酸、壳聚糖及其衍生物、聚氨酯、亚乙基乙烯基醋酸酯共聚体、高级醇、高级脂肪酸、多糖和磷脂中的一种或一种以上混合物。所述的靶向肿瘤介入治疗剂中还包括显影剂和辅助药物，其中，所述显影剂包括In-111、Tc-99m以及钆、铁、锰；所述辅助药物包括抗肿瘤药、抗肿瘤前体药物、放射性增敏剂、金属螯合物。所述多孔材料以包括含有氨基、羟基、羧基、氰基或磺酸基的亲水性基团的天然或以化学方法制得的大分子化合物为原料制备得到，所述大分子化合物包括蛋白质、壳聚糖及其衍生物、聚合氨基酸、树状聚酰氨基胺类、聚丙烯酸酯、亚乙基乙烯基乙酸聚合物、聚氨基甲酸酯、聚乙烯基咪唑、氯磺化聚乙烯、聚氧化乙烯、聚乙烯醇、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯丙胺、聚丙烯酰胺、聚二醇、聚丙二醇-双-(2-氨基丙基)醚、聚对苯二甲酸烃酯、聚乙烯基吡咯烷酮、聚硅氧烷、纤维素衍生物中的一种或一种以上混合物。

本发明的另一个目的通过以下技术方案实现：该靶向肿瘤介入治疗剂的制备步骤如下，(1)制备多孔材料步骤：将所述多孔材料的原料经溶解、沉淀、洗涤、离心、冷冻、破碎、干燥后制得；所述原料为蛋白质时，以水溶解，加入碱或酸使之变性沉淀；所述原料为壳聚糖时，以稀酸水溶液溶解，继而滴加到稀碱溶液中使之沉淀；所述原料为化学合成的聚合物时，用丙酮、氯仿等有机溶剂溶解继而滴加到水或乙醇溶液中使之沉淀；所述冷冻步骤的温度范围为0～-80℃和-81～-240℃，冷冻方法是机械制冷或制冷剂制冷，制冷剂为干冰或低温液态气体；所述干燥步骤中，干燥方法包括常规方法干燥和真空冷冻干燥；

(2)形成多孔性载体步骤：将步骤(1)中得到的多孔材料进行化学修饰，首先将其放在1％～5％的交联剂溶液中浸泡12～36h后取出，以去离子水洗去多余的交联剂；其次嵌入螯合剂，将经上述处理的多孔材料浸泡在pH8.5、0.1M浓度的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液中，滴加5～50mg/ml浓度的螯合剂乙醇溶液，于10～50℃下搅拌过夜使充分反应，以去离子水洗涤除去未被键合的螯合剂，离心收集；

(3)用放射性核素对上述多孔性载体进行标记步骤：将步骤(2)中得到的多孔性载体置于pH6、0.1M的醋酸氨缓冲溶液内浸泡1～2小时，添加事先也用上述缓冲液调节到pH6的放射性核素溶液，30～40℃保温孵化0.5～1小时，以50mM的EDTA终止反应，用去离子水充分洗去未能与载体结合的放射性核素，完成放射性核素与多孔性载体键合；

(4)载入免疫调控剂、显影剂以及辅助药物步骤：将步骤(3)中标记过放射性核素的多孔性载体真空干燥，以吸附法按每毫克载体干基加入5～200微克的免疫调控剂、显影剂或辅助药物；当选用放射性核素铟-111或钆-159作为显影剂时，载入显影剂的操作与步骤(3)在相同条件下同时进行，所述显影剂的放射性剂量为治疗剂放射性剂量的0.1％～1.0％；

(5)添加外层材料步骤：包括溶液喷涂法和溶液浸渍法，将步骤(4)中得到的含药多孔性载体真空干燥，在表面喷涂含外层材料的乙醇溶液，或置于含外层材料的乙醇溶液中快速浸渍，取出挥干，即为靶向肿瘤介入治疗剂。

所述步骤(2)中交联剂包括醛类、多元醇及其酯类、二羧酸或多羧酸酰肼类、二异氰酸酯类、环氧烷类和碳二亚烯胺类交联剂的一种或一种以上混合；所述螯合剂包括氨羧络合剂类、烷基磷酸类、巯基羧酸类的一种或一种以上混合。为配合不同用药所需，所述靶向肿瘤介入治疗剂的外形包括分散微球形、组合微球形、球形、锭形、棒形和片形。

本发明中的交联是指将制得的多孔材料与交联剂相互作用，目的是进一步增大多孔材料的分子量，使之更加稳定；嵌入螯合剂是将多孔材料与螯合剂相互键合，目的是进一步增大多孔材料的载药能力，尤其是增大对含金属元素药物的载药量和结合力；所选用的交联剂具体包括：甲醛、甘油醛、戊二醛、葡聚糖二醛、乙二醛、二乙二醛，丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇二异丁烯酸酯、二乙二醇二异丁烯酸酯、聚乙二醇二异丁烯酸酯、聚异丁烯酸月桂酯共聚乙二醇异丁烯酸酯、丙二醇异丁烯酸酯、二丙二醇异丁烯酸酯、聚丙二醇异丁烯酸酯，丙二酸二酰肼、乙基马来酸二酰肼、琥珀酸二酰肼、戊二酸二酰肼、己二酸二酰肼、间苯二甲酸二酰肼、草酸二酰肼、庚二酸二酰肼、3，3’-磺酰基二苯磺酸二酰肼、间苯二亚甲基二异氰酸酯、4-甲基间苯亚甲基二异氰酸酯、2-甲基间苯亚甲基二异氰酸酯、3，3’-二甲氧基-4，4’-二苯甲烷二异氰酸酯、4-溴-6-甲基-1，3-苯亚甲基二异氰酸酯、4-氯-6-甲基1，3-苯亚甲基二异氰酸酯、2，4-二异氰酸甲苯酯、1，3-苯亚甲基二异氰酸酯、1，4-苯亚甲基二异氰酸酯、2，4，6-三甲基-1，3-苯亚甲基二异氰酸酯、1，4-四亚甲基二异氰酸酯、1，6-六亚甲基二异氰酸酯、1，8-八亚甲基二异氰酸酯、异佛尔酮二异氰酸酯、3-氯-1，2-环氧丙烷、碳二亚烯胺类、以及二乙烯砜、磺酰脲、可水解的聚轮烷、L-赖氨酸甲酯、京尼平中的一种或一种以上混合。所选用的螯合剂具体包括：1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(简称DOTA)、环己烷-1，2-二胺五乙酸(简称CDPA)、环己基二乙烯基三胺五乙酸(简称CTPA)、二亚乙基三胺五乙酸(简称DTPA)、1-(对氨基苄基)-DTPA、1，6-二氨基己烷-N，N，N’，N’-四乙酸(简称DHTA)、亚乙基双(氧乙烯基次氮基)-四乙酸(简称EGTA)、乙二胺四乙酸(简称EDTA)、四氮杂环十四烷-N，N’，N”，N’”-四乙酸(简称TETA)、6-[对-(溴乙酰氨基)苄基]-TETA(简称：BAT)、N，N’-双(羟苄基)-乙二胺-N，N’-二乙酸(简称HBED)、三亚乙基四胺六乙酸(简称TTHA)、羟乙基二胺三乙酸(简称HEDTA)、羟基亚乙基二磷酸(简称HEDP)、二巯基琥珀酸(简称DMSA)、二亚乙基三胺四亚甲基磷酸(简称DTTP)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四-(亚甲基磷酸)(简称DOTMP)、甲基苄基二亚乙基三胺五乙酸(简称MX-DTPA)、溴乙烯氨基苄基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N’，N”，N”’-四乙酸(简称BAD)、3，12-双(羧甲基)-6，9-二氧杂-3，12-二氮十四烷二酸、N(4)，N(alpha)，N(alpha)，N(epsilon)，N(epsilon)-五-{[(N-羟基-N-甲基)羰基]甲基}-2，6-二氨基-4-氮-己酰肼(5，DTPH)、N-(2-羟乙基)-乙二胺四乙酸(简称HEDTA)、反式-1，2-二氨基环己烷-N，N，N’，N’-四乙酸(简称CDTA)和N-琥珀酰氨基-N-(4-{211At}砹苯乙基)琥珀酸(简称：SAPS)。本发明中所选取的放射性核素具体包括：Y-90，In-111，Tc-99m，Ho-166，Lu-177，Re-186，Re-188，Sr-89，Sr-90，Sm-153，Ac-225，Bi-212，Bi-213，Pb-212，Dy-165，Au-198，Cu-67，Sc-47，Ga-67，Rh-105，Pr-142，Nd-147，Pm-151，Gd-159，Th-161，Eu-152，Er-169，Er-171，T1-201，Pd-103，At-211，I-123，I-125，I-131，P-32。

本发明的再一个目的是提供该靶向肿瘤介入治疗剂在制备治疗原发性和继发性肿瘤以及组织增生性疾病的药物中的应用，包括在制备对脑瘤、头颈部癌、肺癌、胸膈部肿瘤、乳腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫肌瘤、皮肤癌、肉瘤、上皮细胞癌、淋巴瘤，以及乳房、子宫、前列腺、心脏等部位的良性异常增生疾病的药物中的应用。

利用本发明所述步骤制作的多孔材料与原有方法制备的同类材质材料相比，其结构和性能均发生了显著变化：显微照片显示，本发明制备的材料产生了非常明显的网索状多孔隙结构；放射性同位素标记测试结果表明，其载药能力提高了70-300倍。

利用此多孔材料制成的靶向肿瘤介入治疗剂可以单独使用，也可以与其他化学治疗、单克隆抗体治疗、或免疫治疗等方法联合使用，也可以通过系统给药，尤其是当放射性核素与抗体、受体、或配体连接时使用。

本发明的优点体现在：应用了多孔性载体的高载药能力去络合放射性核素，保证能将有效的放射剂量准确地送达到肿瘤部位，同时也可以防止核素渗漏进入血液循环，避免出现普通放射治疗中常见的严重副作用，从而保证治疗的安全性和有效性。本发明制备的肿瘤介入治疗剂在荷瘤动物实际治疗试验中副反应极小。放射性核素与免疫调控剂联合使用，有助于防止肿瘤复发。外层材料具有双重功能，其一是束缚多孔载体以进一步防止放射性核素外泄，其二是当放射性核素失去活性后，这种外层材料在释放免疫调控剂方面起程序控制作用：在内放射治疗约10天以后，肿瘤细胞辐因射致死，死亡的肿瘤细胞导致肿瘤部位的pH值降低，并同时释放出细胞内酶，较低的pH值环境和所释放的酶引起外层材料崩解或降解，使原先束缚在多孔性载体内的免疫调控剂得以释放，从而打破肿瘤引起的免疫耐受状态和激活体内的细胞免疫反应，增强机体的抗肿瘤免疫能力。

本发明还对短射距和短半衰期放射源的进行合理应用，既限制了射线的作用范围，又限制了射线的作用时间。放射性核素只作用于射距范围内的肿瘤细胞，而不会过多伤及肿瘤周边的正常组织。同时，放射性核素在完成了对肿瘤的辐射治疗后，很快就蜕变失效，因而安全性好，副作用小，靶向定位准确。相较于血管内给药的其它近距放射疗法，本发明不受载药微粒粒径大小的限制。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明做进一步说明。

实施例一以白蛋白为多孔材料原料的靶向肿瘤介入治疗剂的制备

(1)制备多孔材料步骤：以1.0M的氢氧化钠溶液处理白蛋白使之变性，离心，沉淀以去离子水洗涤至少3次，直到洗出水的pH值达到7.0为止，将沉淀在-80℃下冷冻过夜，然后置磁力搅拌器中搅拌15～30min，将搅碎的沉淀通过过滤器控制其颗粒大小。离心收集沉淀，即为白蛋白多孔材料。冷藏供用或经干燥、冷冻干燥后供用；

(2)形成多孔性载体步骤：将步骤(1)中得到的多孔材料进行化学修饰，首先将上述颗粒状白蛋白多孔材料悬浮在10倍量的去离子水中，滴加表氯醇液0.49ml，50℃下保温1h，接着加入0.1M的NaOH溶液7ml，煮沸2h，依次用0.1M的HCl、0.1M的NaOH溶液漂洗，再以去离子水洗涤至中性，即完成交联；将经过上述处理的颗粒状白蛋白多孔材料浸泡在PH8.5、0.1M浓度的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液中，滴加浓度为10mg/ml的1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(简称DOTA)乙醇溶液，DOTA与白蛋白多孔颗粒的质量比为0.1∶1(mg/mg)，在37.0℃下搅拌过夜使充分反应，以去离子水洗涤3遍以除去未被键合的螯合剂，离心收集沉淀，冷藏供用或经干燥、冷冻干燥后供用；

(3)用放射性核素对上述多孔性载体进行标记步骤：将10mg上述经过交联和螯合剂嵌接的白蛋白多孔性载体置于1ml、PH6、浓度为0.1M的醋酸氨缓冲溶液内浸泡30分钟，添加事先也用上述缓冲液调节到相同pH值的20毫居里钇-90(yttium-90)溶液，在37℃下保温孵化30min后，以50mM的EDTA终止反应，以去离子水离心洗涤3次，完成放射性核素与多孔性载体键合；

(4)上载免疫调控剂步骤：将经过放射性标记的多孔性载体置于真空干燥枪内，在60℃/720mmHg条件加热减压下干燥，然后以溶液吸附法按每毫克多孔性载体干品对100微克白介素IL-15的比例上载免疫调控剂；

(5)添加外层材料步骤：采用溶液喷涂法，将上载完白介素和放射性核素的荷药多孔性载体再次真空干燥后，表面喷涂浓度为15％的聚赖氨酸乙醇溶液，挥干即得。

实施例二以壳聚糖为多孔材料原料的靶向肿瘤介入治疗剂的制备

(1)制备多孔材料步骤：将壳聚糖溶于3％的醋酸，然后滴加到1.0M的氢氧化钠中和使之沉淀，离心，沉淀物以去离子水洗涤至少3次，直到洗出水的pH值达到7.0为止。将沉淀在-80℃下冷冻过夜，然后置磁力搅拌器中搅拌15～30min.，将搅碎的沉淀通过过滤器控制其颗粒大小。离心收集沉淀，直接使用、经干燥或冷冻干燥后供用；

(2)形成多孔性载体：将步骤(1)中制得的颗粒状壳聚糖多孔材料进行化学修饰，首先将上述颗粒状壳聚糖多孔材料以2.5％(w/v)的戊二醛水溶液浸泡24h.，再以去离子水洗涤3次，即完成交联；其次，嵌入螯合剂：将经过上述处理的壳聚糖多孔载体1.0g浸泡在100ml pH8.5、浓度为0.1M的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液中，滴加10mg/ml浓度的螯合剂DOTA的乙醇溶液，DOTA与壳聚糖多孔载体的质量比为0.1∶1(mg/mg)。于37.0℃下搅拌过夜使充分反应，以去离子水洗涤3遍以除去未被键合的螯合剂。离心收集，冷藏供用或干燥、冷冻干燥后供用；

(3)用放射性核素对上述多孔性载体进行标记步骤：将10mg上述经过交联和螯合剂嵌接的颗粒状壳聚糖多孔载体置于1ml，pH6、浓度为0.1M的醋酸氨缓冲溶液内浸泡30分钟，添加事先也用上述缓冲液调节到相同pH值的20毫居里鈥-166(Holmium-166，)盐溶液和40微居里钆-159(Gadolinium-159)盐溶液，37℃保温孵化30min后，以50mM的EDTA终止反应。以去离子水离心洗涤3次，完成放射性核素与多孔性载体键合；钆-159在这里作为显影剂；

(4)上载免疫调控剂步骤：将放射性标记过的颗粒状多孔载体置真空干燥枪内，在60℃/720mmHg条件加热减压下干燥后，按每mg多孔颗粒干品对100微克的比例以溶液吸附法上载白介素；

(5)添加外层材料步骤：采用溶液浸渍法，将上载完白介素的放射性颗粒再次减压干燥，置于10％的聚精氨酸乙醇溶液中快速浸渍，取出挥干即得。实施例三颗粒状多孔材料的放射性核素载药性能测试

两种壳聚糖颗粒的制备：(1)按实施例二制备壳聚糖多孔颗粒并进行交联和DOTA链接，得到本发明所述的多孔材料试验样品；(2)将壳聚糖按背景技术部分所述文献方法制成微球，并同样按实施例二所述的条件进行交联和DOTA链接，制得微球状的非多孔颗粒对照样品。

放射性标记：取上述试验样品和对照样品各1mg，分别置于10.0ml浓度为0.1M的醋酸氨缓冲溶液(pH6)内浸泡30分钟，摇匀，依次吸取0.01、0.1、1.0ml，各添加事先也用上述缓冲液调节到pH6的500微居里铟-111(indium-111)盐酸盐溶液，同在37℃下保温孵化30min后，以50mM的EDTA终止反应。将标记好的颗粒各自以去离子水离心洗涤3次，离心收集沉淀。以闪烁计数仪分别测定试验样品和对照样品经标记后的放射性强度，多孔颗粒(试验样)和非多孔颗粒(对照样)对放射性核素铟-111载药量比较结果见表1。

表1多孔颗粒(试验样)和非多孔颗粒(对照样)的载药量比较

从表1可以清楚地看出，按本发明方法制备的多孔颗粒和按现有方法制备的非多孔颗粒相比，其载药能力依试验条件不同可分别高出70倍-300倍。对于相同质量的放射性核素，载体的用量越少，二者之间的差异越显著。

实施例四C57黑鼠B16-F10鼠黑色素瘤模型动物治疗试验

选择合格的C57黑鼠，进行B16-F10鼠黑色素瘤荷瘤动物造型。当肿瘤大小达到0.2cm³时，将荷瘤鼠随机分为3组，每组15只：(1)磷酸盐缓冲溶液(简称PBS)空白对照组，(2)不含免疫调节剂白介素IL-15的钇-90多孔性载体组，(3)含有免疫调节剂白介素IL-15的钇-90多孔性载体组。第二组和第三组的钇-90剂量均为500微居里，于肿瘤部位一次性局部注射给药。各组每3天测定一次肿瘤大小。一旦瘤体积达到2.0cm³，随即处死相应荷瘤动物，并记录该动物的生存天数。分别统计30天、60天时各组动物的平均瘤体积见表2和各组动物的平均存活天数见表3。

组别	15天时的瘤体积(cm3)	100天时的瘤体积(cm3)
			PBS空白对照组	1.72±0.11	＞2.0(所有小鼠均死亡)
钇-90多孔性载体组	0.12±0.06	0.01±0.03
			钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	0.12±0.02	0.00(未测到)

表2.各组动物的瘤体积平均值

组别	平均存活天数	180天时的动物存活率
			PBS空白对照组	16.4±2.0	0/15(所有小鼠均死亡)
钇-90多孔性载体组	169.6±20.5	8/15
			钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	＞180	15/15(所有小鼠均存活)

表3.荷瘤动物平均存活天数和180天时的存活率

实施例五裸鼠乳腺癌模型(BT-474)荷瘤动物治疗试验

选择合格的裸鼠，进行乳腺癌荷瘤动物造型。当肿瘤大小达到0.2cm³时，将荷瘤裸鼠随机分为4组，每组10只：(1)PBS空白对照组，(2)单克隆抗体贺赛汀(Trastuzumab)组，(3)钇-90多孔性载体结合贺赛汀组，(4)钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组。单克隆抗体组在整个实验期间每周静脉注射贺赛汀一次，剂量为1mg/kg，直至实验结束。钇-90多孔性载体结合贺赛汀组仅于实验开始时一次性静脉给药，钇-90的标记剂量为100微居里(接近静脉给药的安全极限剂量)。钇-90多孔性载体加白介素-15治疗组于实验开始时一次性病灶部位局部给药，钇-90的标记剂量为500微居里。各组每3天测定一次肿瘤大小。一旦瘤体积达到2.0cm³，随即处死相应荷瘤动物，并记录该动物的生存天数。分别统计30天、60天时各组动物的平均瘤体积见表4和各组动物的平均存活天数见表5。

组别	30天时的瘤体积(cm3)	60天时的瘤体积(cm3)
			PBS空白对照组	1.77±0.53	＞2.0(所有小鼠均被处死)
单克隆抗体贺赛汀组	1.73±0.44	＞2.0(所有小鼠均被处死)
			钇-90多孔性载体加贺赛汀组	1.06±0.41	＞2.0(所有小鼠均被处死)
钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	0.00(未测到)	0.00(未测到)

表4.各组动物的瘤体积平均值

组别	平均存活天数
		PBS空白对照组	34.46±6.02
单克隆抗体贺赛汀组	36.15±7.13
		钇-90多孔性载体结合贺赛汀组	44.13±7.21
钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	＞150(所有动物在150天时均活着)

表5.荷瘤动物平均存活天数

实施例六裸鼠B细胞淋巴瘤模型(Daudi)荷瘤动物治疗试验

选择合格的裸鼠，进行B细胞淋巴瘤荷瘤动物造型。当肿瘤大小达到0.2cm³时，将荷瘤裸鼠随机分为4组，每组10只：(1)PBS空白对照组，(2)单克隆抗体美罗华(Rituximab)组，(3)钇-90多孔性载体结合美罗华组，(4)钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组。单克隆抗体组在整个实验期间每周静脉注射美罗华一次，剂量为10mg/kg，直至实验结束。钇-90多孔性载体结合美罗华组仅在实验开始时一次性静脉给药，剂量为20微克美罗华和100微居里钇-90(接近静脉给药的安全极限剂量)。钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组于实验开始时一次性病灶部位局部给药，钇-90的剂量为500微居里。各组每3天测定一次肿瘤大小。一旦瘤体积达到2.0cm³，随即处死相应荷瘤动物，并记录该动物的生存天数。实验结束后分别统计30天、60天时各组动物的平均瘤体积见表6和各组动物的平均存活天数见表7。

组别	24天时的瘤体积(cm3)	60天时的瘤体积(cm3)
			PBS空白对照组	1.75±0.29	＞2.0(所有小鼠均被处死)
单克隆抗体美罗华组	0.32±0.14	1.43±0.41
			钇-90多孔性载体结合美罗华组	0.18±0.18	0.57±0.23
钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	0.12±0.21	0.00(未测到)

表6.各组动物的瘤体积平均值

组别	平均存活天数
		PBS空白对照组	27.53±3.70
单克隆抗体美罗华组	65.67±7.57
		钇-90多孔性载体加美罗华组	88.33±7.02
钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	＞180(所有动物在180天时均活着)

表7.荷瘤动物平均存活天数

实施例七裸鼠结肠癌模型(HT-29)荷瘤动物治疗试验

选择合格的裸鼠，进行结肠癌荷瘤动物造型。当肿瘤大小达到0.5cm³时，将荷瘤裸鼠随机分为4组，每组10只：(1)PBS空白对照组，(2)单克隆抗体爱必妥(抗表皮生长因子受体单克隆抗体，Cetuximab)组，(3)钇-90多孔性载体结合爱必妥组，(4)钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组。单克隆抗体组在整个实验期间每3天静脉注射爱必妥一次，剂量为1mg/kg，直至实验结束。钇-90多孔性载体结合爱必妥组仅于实验开始时一次性静脉给药，钇-90的标记剂量为100微居里(接近静脉给药的安全极限剂量)。钇-90多孔性载体加白介素-15治疗组于实验开始时一次性病灶部位局部给药，钇-90的标记剂量为500微居里。各组每3天测定一次肿瘤大小。一旦瘤体积达到2.0cm³，随即处死相应荷瘤动物，并记录该动物的生存天数。试验结束时分别统计30天、60天时各组动物的平均瘤体积见表8和各组动物的平均存活天数见表9。

组别	30天时的瘤体积(cm3)	60天时的瘤体积(cm3)
			PBS空白对照组	0.59±0.07	1.64±0.34
单克隆抗体爱必妥组	0.43±0.13	1.28±0.13
			钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	0.00(未测到)	0.00(未测到)

表8.各组动物的瘤体积平均值(cm³)

组别	平均存活天数
		PBS空白对照组	67.13±6.19
单克隆抗体爱必妥组	69.27±5.75
		钇-90多孔性载体加白介素IL-15治疗组	＞180(所有动物在180天时均活着)

表9.荷瘤动物平均存活天数

以上多种瘤株的荷瘤动物治疗试验结果证明，本发明提供的靶向肿瘤介入治疗剂对多种实体瘤均具有非常显著的治疗效果，尤其是当放射性核素与免疫调控剂白介素IL-15联合使用时。

除上述实施例以外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (8)

1.一种靶向肿瘤介入治疗剂，其特征是：所述的靶向肿瘤介入治疗剂中包括与多孔性载体键合的放射性核素，所述多孔性载体由多孔材料经化学修饰制成，所述放射性核素是α-射线发射体、β-射线发射体和γ-射线发射体中一种或一种以上组合。

2.根据权利要求1所述的靶向肿瘤介入治疗剂，其特征是：所述的靶向肿瘤介入治疗剂中还包括免疫调控剂与外层材料，其中，所述免疫调控剂包括白介素、淋巴因子、趋化因子、抗体、肿瘤相关抗原、变异的肿瘤相关抗原、免疫佐剂、配体、免疫增强剂、调控性T-细胞抑制剂、受体、肽类、NK细胞激活剂、T-细胞激活剂、巨噬细胞激活剂、病毒产物、细菌产物、DNA和RNA的一种或一种以上混合物；所述外层材料包括蛋白质、聚合氨基酸、壳聚糖及其衍生物、聚氨酯、亚乙基乙烯基醋酸酯共聚体、高级醇、高级脂肪酸、多糖和磷脂中的一种或一种以上混合物。

3.根据权利要求1或2所述的一种靶向肿瘤介入治疗剂，其特征是：所述的靶向肿瘤介入治疗剂中还包括显影剂和辅助药物，其中，所述显影剂包括In-111、Tc-99m以及钆、铁、锰；所述辅助药物包括抗肿瘤药、抗肿瘤前体药物、放射性增敏剂、金属螯合物。

4.根据权利要求1所述的一种靶向肿瘤介入治疗剂，其特征是：所述多孔材料以包括含有氨基、羟基、羧基、氰基或磺酸基的亲水性基团的天然或以化学方法制得的大分子化合物为原料制备得到，所述大分子化合物包括蛋白质、壳聚糖及其衍生物、聚合氨基酸、树状聚酰氨基胺类、聚丙烯酸酯、亚乙基乙烯基乙酸聚合物、聚氨基甲酸酯、聚乙烯基咪唑、氯磺化聚乙烯、聚氧化乙烯、聚乙烯醇、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯丙胺、聚丙烯酰胺、聚二醇、聚丙二醇-双-(2-氨基丙基)醚、聚对苯二甲酸烃酯、聚乙烯基吡咯烷酮、聚硅氧烷、纤维素衍生物中的一种或一种以上混合物。

5.根据权利要求1或2所述的一种靶向肿瘤介入治疗剂的制备方法，其特征是：制备步骤如下，(1)制备多孔材料步骤：将所述多孔材料的原料经溶解、沉淀、洗涤、离心、冷冻、破碎、干燥后制得；所述原料为蛋白质时，以水溶解，加入碱或酸使之变性沉淀；所述原料为壳聚糖时，以稀酸水溶液溶解，继而滴加到稀碱溶液中使之沉淀；所述原料为化学合成的聚合物时，用丙酮、氯仿等有机溶剂溶解继而滴加到水或乙醇溶液中使之沉淀；所述冷冻步骤的温度范围为0～-80℃和-81～-240℃，冷冻方法是机械制冷或制冷剂制冷，制冷剂为干冰或低温液态气体；所述干燥步骤中，干燥方法包括常规方法干燥和真空冷冻干燥；

(2)形成多孔性载体步骤：将步骤(1)中得到的多孔材料进行化学修饰，首先将其放在1％～5％的交联剂溶液中浸泡12～36h后取出，以去离子水洗去多余的交联剂；其次嵌入螯合剂，将经上述处理的多孔材料浸泡在pH8.5、0.1M浓度的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液中，滴加5～50mg/ml浓度的螯合剂乙醇溶液，于10～50℃下搅拌过夜使充分反应，以去离子水洗涤除去未被键合的螯合剂，离心收集；

(3)用放射性核素对上述多孔性载体进行标记步骤：将步骤(2)中得到的多孔性载体置于pH6、0.1M的醋酸氨缓冲溶液内浸泡1～2小时，添加事先也用上述缓冲液调节到pH6的放射性核素溶液，保温孵化，以50mM的EDTA终止反应，用去离子水充分洗去未能与载体结合的放射性核素，完成放射性核素与多孔性载体键合；

(4)载入免疫调控剂、显影剂以及辅助药物步骤：将步骤(3)中标记过放射性核素的多孔性载体真空干燥，以吸附法按每毫克载体干基加入5～200微克的免疫调控剂、显影剂或辅助药物；当选用放射性核素铟-111或钆-159作为显影剂时，载入显影剂的操作与步骤(3)在相同条件下同时进行，所述显影剂的放射性剂量为治疗剂放射性剂量的0.1％～1.0％；

(5)添加外层材料步骤：包括溶液喷涂法和溶液浸渍法，将步骤(4)中得到的含药多孔性载体真空干燥，在表面喷涂含外层材料的乙醇溶液，或置于含外层材料的乙醇溶液中快速浸渍，取出挥干，即为靶向肿瘤介入治疗剂。

6.根据权利要求5所述的一种靶向肿瘤介入治疗剂的制备方法，其特征是：所述步骤(2)中交联剂包括醛类、多元醇及其酯类、二羧酸或多羧酸酰肼类、二异氰酸酯类、环氧烷类和碳二亚烯胺类交联剂的一种或一种以上混合；所述螯合剂包括氨羧络合剂类、烷基磷酸类、巯基羧酸类的一种或一种以上混合。

7.根据权利要求1所述的一种靶向肿瘤介入治疗剂，其特征是：所述靶向肿瘤介入治疗剂的外形包括分散微球形、组合微球形、球形、锭形、棒形和片形。

8.根据权利要求1所述的一种靶向肿瘤介入治疗剂在制备治疗原发性和继发性肿瘤以及组织增生性疾病的药物中的应用。