CN101223888A - 一种狭叶金粟兰提取物的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种狭叶金粟兰提取物的制备方法，以狭叶金粟兰为原料，采用溶剂提取法、超临界萃取法、微波提取法、超声波提取法、破碎提取法、水蒸汽蒸馏法或萃取法提取得到，同时公开了所述提取物在制备杀虫剂和杀菌剂方面的应用。本发明将狭叶金粟兰变废为宝，制备成一种具有优良杀虫、杀菌活性的植物提取物，防病虫效果显著，且方法简单易行，成本较低，具有良好的应用和推广前景。

Description

一种狭叶金粟兰提取物的制备方法和应用

技术领域

本发明属于农药领域，具体涉及狭叶金粟兰提取物的制备方法以及在制备杀虫剂、杀菌剂中的应用。

背景技术

自上世纪60年代以来，公众对农药毒性和农药对环境的污染问题越来越重视。一些毒性高、残留长的农药品种，如有机汞制剂、有机氯制剂、高毒的有机磷制剂等相继被禁用。到了上世纪90年代，人们对食品安全和环境保护的要求越来越高。世界各国制定了有关逐步取缔、禁用高毒高残留农药的法规。我国加入WTO后，农药残留问题，已经成为限制我国农产品出口的国际贸易技术壁垒。一些发达国家明确禁止从我国进口曾经使用过某种有机合成化学农药品种的农产品。所以，面对日益扩大的经济全球化，寻求高效、安全和对环境友好的农药是我国广大农药科学工作者的机遇和挑战。植物性农药的优势之一是能彻底降解、无残留。

化学合成农药的广泛而不合理使用，有害生物对农药的抗性程度越来越高，抗性产生的速度也越来越快，尤其是对选择性强、药效高的农药品种。抗性问题已成为有害生物防治中的一大难题。上世纪80年代初，拟除虫菊酯使用不到三年，在我国北方棉区出现大面积的棉蚜高抗种群。自上世纪六十年代末内吸剂商品化以来，杀菌剂抗药性的问题已经成为生产上的严重问题，一些重要的杀菌剂品种，比如多菌灵和甲霜灵等都是在使用1～2年后就在生产上出现严重的抗药性问题。根据南京农业大学等单位的有关研究报道，多菌灵等多种杀菌剂在我国已经出现了严重的抗药性问题。使用不同作用机理的农药是解决农药抗药性问题的主要措施之一。但是，目前在世界上，可利用的作用机理不同的农药品种还比较少。因此，发现新的具有不同作用机理的农药是农药科学工作者的另一个机遇和挑战。植物性农药通常不是单一的一种化合物，而是植物有机体的全部或一部分有机物质，成分复杂，作用方式多样，所以有害生物难以对其产生抗药性。

狭叶金粟兰(Chloranthus angustifolius)隶属金粟兰科金粟兰属。仅分布于重庆市和湖北西部的利川、建始、巴东、秭归、宜昌、神农架、兴山。为我国特有种。多年生草本，株高15～43cm；根状茎深黄色，生多数深黄色须根；茎直立，无毛，单生或数个丛生，下部节上对生两片鳞状叶。叶对生，8～10片，披针形或狭椭圆形，长5～11cm，宽1.5～3cm，顶端渐尖，基部楔形，边缘有锐锯齿，齿间有一腺体，近基部或1/4以下全缘，两面均无毛；侧脉4～6对，叶柄长7～10mm；鳞状叶三角形，膜质；托叶条裂成钻形。穗状花序单一，顶生，连总花梗长5～8cm，总花梗长约1cm；苞片宽卵形或近半圆形，全缘，少数为2浅裂；花白色；雄蕊3枚；药隔基部结合，着生于子房上部外侧；中央药隔着生1个2室的花药，两侧药隔各具一个1室的花药，药隔延伸成线形，长4～6mm，水平伸展或斜上，药室在药隔的基部；子房倒卵形，绿色，无花柱；核果倒卵形或近球形，长约2.5mm，近无柄；花期4月，果期5月。生长于海拔400～1200m山坡林下、沟边、路旁或岩缝中。

狭叶金粟兰同属的其它植物是重要的药用资源，我国民间广泛用于通经活络，止血祛风散寒，但狭叶金粟兰目前仅被视为一种野草，没有发现任何经济价值。

发明内容

本发明的一个目的是克服现有技术不足，提供狭叶金粟兰提取物的制备方法，从而实现从野草狭叶金粟兰获得有效药用成分。

本发明的另一个目的是提供所述狭叶金粟兰提取物的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

提供一种狭叶金粟兰提取物的制备方法，以狭叶金粟兰为原料，采用溶剂提取法、超临界萃取法、微波提取法、超声波提取法、破碎提取法、水蒸汽蒸馏法或萃取法提取得到。

所述狭叶金粟兰为狭叶金粟兰的根、茎、叶、花果或全株。

所述溶剂提取法采用的溶剂为水、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、无水乙醚、正丁醇、N，N-二甲基甲酰胺或N，N二甲基亚砜。

本发明同时提供了所述狭叶金粟兰提取物在制备杀虫剂或杀菌剂方面的应用。

狭叶金粟兰提取物应用于制备杀虫剂或杀菌剂时，采用的有效浓度为0.1mg/mL～700mg/mL。

作为优选，采用狭叶金粟兰提取物的有效浓度为0.5mg/mL～100mg/mL。

本发明的有益效果是：

(1)本发明提供了一种具有优良杀虫、杀菌活性的植物提取物；

(2)本发明提供的杀虫杀菌提取物活性高，使用量低，防病虫效果显著。

(3)本发明方法简单易行，成本较低，具有良好的应用和推广前景。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步详细说明本发明。

实施例1

甲醇浸提

采集狭叶金粟兰植物的根、茎、叶、花果或全株，室内晾干或在50～550C烘干，粉碎。粉碎物在室温条件下，用植物干样5～10倍体积的甲醇浸泡3次，每次浸泡1～3天，合并3次浸泡液，过滤、减压浓缩，除去甲醇，即可得到狭叶金粟兰甲醇提取物。

实施例2

乙醇浸提

采集狭叶金粟兰植物的根在50～550C烘干，粉碎。粉碎物在室温条件下，用干样5～10倍体积的乙醇浸泡3次，每次浸泡1～3天，合并3次浸泡液，过滤、减压浓缩，除去乙醇，即可得到狭叶金粟兰根乙醇提取物。

实施例3

N，N-二甲基甲酰胺浸提

将狭叶金粟兰植物的茎在50～550C烘干，粉碎。粉碎物在室温条件下，用干样5～10倍体积的N，N-二甲基甲酰胺浸泡3次，每次浸泡1～3天，合并3次浸泡液，过滤、减压浓缩，除去N，N-二甲基甲酰胺，即可得到狭叶金粟兰茎N，N-二甲基甲酰胺提取物。

实施例4

N，N-二甲基亚砜浸提

将狭叶金粟兰植物的叶在50～550C烘干，粉碎。粉碎物在室温条件下，用干样5～10倍体积的N，N-二甲基亚砜浸泡3次，每次浸泡1～3天，合并3次浸泡液，过滤、减压浓缩，除去N，N-二甲基亚砜，即可得到狭叶金粟兰叶N，N-二甲基亚砜提取物。

实施例5

乙酸乙酯浸提

将狭叶金粟兰植物的叶在50～550C烘干、粉碎。粉碎物在室温条件下，用干样5～10倍体积的乙酸乙酯浸泡3次，每次浸泡1～3天，合并3次浸泡液，过滤、减压浓缩，除去乙酸乙酯，即可得到狭叶金粟兰叶乙酸乙酯提取物。

实施例6

超声波提取

将狭叶金粟兰植物的全株在50～550C烘干，粉碎。粉碎物在室温条件下，用样品5～10倍体积比的丙酮冷浸泡24h后，超声波提取45min，过滤、减压浓缩提取液，除去丙酮，即可得到狭叶金粟兰丙酮提取物。

实施例7

蒸馏法提取

称取狭叶金粟兰果干粉100g，加500mL蒸馏水，蒸馏得蒸馏液，用300mL无水乙醚萃取两次，合并萃取乙醚液，减压浓缩，除去无水乙醚，得黄绿色油状物。

实施例8

超临界提取

将晾干的狭叶金粟兰茎干粉过2号筛，取其细粉末1kg放入萃取池中，加入100mL乙醇改性，在22.0Mpa，60℃条件下先静态萃取2h，然后动态萃取50min，CO2流速为30mL/min，收集提取物。

实施例9

微波提取

在1000mL平底烧瓶中，加入狭叶金粟兰叶干粉20g和300mL乙醇。将烧瓶置于NJL07-3型实验专用微波炉中，设定功率为400W，提取时间15min，重复两次，将两次的提取液过滤、浓缩得狭叶金粟兰叶乙醇提取物。

实施例10

破碎提取

称取狭叶金粟兰茎干粉30g用300mL乙醇浸泡后置于破碎提取器中。破碎提取1～2min，提取液过滤、浓缩得狭叶金粟兰茎乙醇提取物。

实施例11

萃取

将实施例1所获得的狭叶金粟兰的甲醇粗提取物用极少量的甲醇溶解，再加5倍量的水，所得溶液置分液漏斗中，在室温条件下，加入等体积的石油醚(II)进行萃取，重复3～5次，直到石油醚萃取液的颜色变成近无色透明为止。将萃取的石油醚溶液在温度低于50℃下减压浓缩，即获得石油醚提取物。

石油醚萃取后的的水溶液先在55℃的温度下，减压浓缩，除去所含有的甲醇后加入水补充至原来的体积。将水溶液置分液漏斗内，加入等体积的氯仿进行萃取。浓缩回收氯仿然后再次萃取，具体方法和条件同上，直到氯仿萃取液的颜色近无色透明为止。氯仿萃取液减压浓缩除去氯仿后，即获得狭叶金粟兰的氯仿提取物。

根据上述方法和条件，依次用等体积的有机溶剂乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，浓缩回收和再萃取。就可以分别获得狭叶金粟兰的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。最后剩下的水溶液，自然风干，或者在65℃下烘干，即可获得狭叶金粟兰水提取物。

实施例11  狭叶金粟兰全株甲醇提取物对植物病原真菌菌丝生长的抑制作用实验

1.供试病原菌

水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、荔枝霜疫霉病菌(Peronophthora litchii)、黄瓜疫霉菌(Phytophthora meionis)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxyporum)、稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)。

2.试验方法

采用含毒介质的生长速率法测定狭叶金粟兰全株甲醇提取物对植物病原菌菌丝生长的抑制作用。将狭叶金粟兰全株甲醇提取物干物质用灭菌蒸馏水溶解后，配制成一定浓度的母液，然后取1mL母液加入到9mL熔融的、冷却至约50℃左右的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基中，充分摇匀，迅速倒入直径为6cm的培养皿中，静置待凝结，制成含甲醇粗提取物干物质浓度为10mg/mL的PDA含毒培养平板。设加无菌蒸馏水为对照。供试病菌均预先在PDA培养基中培养，用孔径为0.5cm的打孔器在菌落边缘切取生长一致的菌块作为接种体。将接种体移入PDA含毒培养平板中央。置25℃恒温培养。用十字交叉法测量菌落直径，并校正，计算抑菌百分率。

抑菌率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径)×100

3.试验结果

狭叶金粟兰全株甲醇提取物对6种植物病原菌菌丝生长的抑制作用测试结果见表1。

表1狭叶金粟兰全株甲醇提取物对植物病原菌菌丝生长的抑制作用

病原菌	平均抑制率(％)±SE
		水稻纹枯病R.solani黄瓜疫霉菌P.melonis荔枝霜疫霉菌P.litchii西瓜枯萎菌F.oxysporum香蕉炭疽菌C.musae	100±0.00a100±0.00a100±0.00a74.97±0.20c83.66±0.47b

稻瘟菌M.grisea

100±0.00a

注：1)浓度为：10mg/mL

2)表中数据为3次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

从表1可见，在含有狭叶金粟兰全株甲醇提取物干物质10mg/mL的测定浓度下，狭叶金粟兰甲醇提取物对供试的多种植物病原菌的菌丝生长都表现出抑制活性。在供试的植物病原菌中，狭叶金粟兰全株甲醇提取物对水稻纹枯病、荔枝霜疫霉菌、稻瘟菌和黄瓜疫霉菌菌丝生长的抑制率均是100％、对香蕉炭疽菌菌丝生长的抑制率也达83.66％、对西瓜枯萎菌菌丝生长的抑制率为74.97％。

实施例12  不同浓度的狭叶金粟兰全株丙酮提取物对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制作用

供试病原菌和试验方法参见实施例11。试验结果见表2

表2不同浓度的狭叶金粟兰全株丙酮提取物对荔枝霜疫霉病病原真菌菌丝生长的抑制作用

浓度(mg/mL)	平均抑制率(％)±SE
		0.10.5151050	9.89±0.07e32.51±0.09d62.66±0.80c85.05±0.02b100±0.00a100±0.00a

100200

100±0.00a100±0.00a

注：表中数据为3次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例13  狭叶金粟兰全株甲醇提取物的分步萃取物对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制作用

供试病原菌和试验方法参见实施例11。试验结果见表3

表3狭叶金粟兰全株甲醇提取物的分步萃取物对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑菌作用

萃取层	平均抑制率(％)±SE
		石油醚层氯仿层乙酸乙酯层正丁醇层水层	68.79±0.14c100±0.00a95.31±0.15b12.98±0.31d0.00±0.00e

注：1)浓度为1mg/mL

2)表中数据为3次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例14  不同浓度的狭叶金粟兰叶乙酸乙酯提取物对西瓜枯萎菌菌丝生长的抑制作用

供试病原菌和试验方法参见实施例11。试验结果见表4

表4不同浓度的狭叶金粟兰叶乙酸乙酯提取物对西瓜枯萎菌菌丝生长的抑制作用

浓度(mg/mL)	平均抑菌率(％)±SE
		15	9.47±0.03f32.07±0.01e

1050100200400700

59.97±0.40d75.26±0.07c86.19±0.01b100±0.00a100±0.00a100±0.00a

注：表中数据为3次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例15  狭叶金粟兰植株甲醇提取物对家蝇成虫的毒杀活性

1、家蝇(Musca domestica vicina)：引自广东省卫生防疫站。产卵饲料和幼虫饲料配方：麦麸250g、面粉12.5g、奶粉8g、酵母粉2.5～3g和水450～500mL；成虫饲料配方：白糖∶奶粉＝1∶1。面粉、麦麸、奶粉以及酵母粉均为市售。家蝇羽化后，在笼中加入成虫饲料和充分湿润的海绵或棉花团，供成虫取食。成虫羽化3d后清晨将盛满产卵饲料的培养皿放入成虫养虫笼中接卵，下午3点以后取出培养皿，将家蝇卵块挑入盛有少量幼虫饲料的罐头瓶中，每瓶可放家蝇卵约500粒，用尼龙纱封住瓶口，每天增加一定量的新饲料，并清理瓶中残渣，幼虫化蛹后将罐头瓶转入养虫笼中.取羽化后3～4d的成虫供试。养虫室内的相对湿度在75％～80％，温度为26±1℃。

2、试验方法

先称取1g白砂糖于直径为2.5cm、高为7.5cm的试管中，然后将0.1g样品用10mL丙酮溶解，取1mL样品液于盛白砂糖的试管中，摇匀，使样品能均匀地附着在白砂糖上，用风扇吹干备用。挑选羽化后3～4d整齐一致的家蝇成虫，用乙醚麻醉后，迅速向每管中接入13头家蝇成虫。每处理设3个重复，以丙酮为空白对照、10μg/g的阿维菌素作参照。12h、24h后统计死亡虫数，计算死亡率和校正死亡率。

3、试验结果见表5

表5狭叶金栗兰不同部位甲醇提取物对家蝇的毒杀作用

部位	12h平均校正死亡率(％)±	24h平均校正死亡率
			根茎叶花果全株阿维菌素	0.00±0.00d72.78±3.48a70.77±0.00a69.00±3.84b70.60±0.60a60.00±1.81c	0.00±0.00b86.15±4.69a88.86±0.69a86.15±3.69a86.30±0.30a85.32±2.74a

注：1质量百分比浓度为0.5％

2表中数据为3次重复的平均值，每重复13头虫；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)

3方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

试验结果表明，狭叶金粟兰地上部分甲醇提取物对家蝇有较好的活性。

实施例16  狭叶金粟兰茎甲醇提取物的分步萃取物对家蝇成虫的毒杀活性

试虫和试验方法同实施例15。试验结果见表6

表6狭叶金粟兰茎甲醇提取物的分步萃取物对家蝇成虫的毒杀活性

萃取层	12h平均校正死亡率(％)±SE	24h平均校正死亡率(％)±SE
			石油醚层氯仿层乙酸乙酯层正丁醇层水层阿维菌素	63.43±0.00a6.15±10.64c23.86±4.69b0.00±0.00c0.00±0.00c61.33±0.61a	88.12±0.00a41.15±3.33b35.01±1.31c0.00±0.00d0.00±0.00d87.51±0.86a

注：1)质量百分比浓度为0.5％

2)表中数据为3次重复的平均值，每重复13头虫；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

试验结果：0.5％浓度下，以石油醚层萃取物对家蝇的活性最高，处理12h、24h后家蝇成虫死亡率分别约达63.43％，88.12％。氯仿层、乙酸乙酯层也有一定活性。

实施例17  不同溶剂、提取方法所得狭叶金粟兰提取物对家蝇成虫的毒杀活性

试虫和试验方法同实施例15。试验结果见表7

表7不同溶剂、提取方法所得狭叶金粟兰提取物对家蝇成虫的毒杀活性

溶剂、提取方法	提取植物部	12h平均校正死亡	24h平均校正死亡率
				甲醇冷浸乙醇冷浸	全株根	70.60±0.60a0.0±0.008d	86.30±0.30a12.15±1.32c

乙酸乙酯冷丙酮超声乙醇超临界取水蒸汽蒸馏阿维菌素

叶全株茎果

70.77±0.00a69.00±3.84a70.60±0.60a35.23±0.60c60.42±1.32b

88.86±0.97a86.15±4.69a86.30±0.30a46.30±0.30b86.33±1.41a

注：1)质量百分比浓度为0.5％

2)表中数据为3次重复的平均值，每重复13头虫；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例18  狭叶金粟兰不同部位甲醇提取物对致倦库蚊4龄幼虫的毒杀作用

1、试虫致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)：从广东省卫生防疫站引种。幼虫生活在自来水中，自来水须提前静置至少24h以脱氯，喂以酵母片，化蛹后将蛹收集到装有脱氯自来水的杯内，然后放在密闭的纱笼内，羽化后的成虫喂以5％的葡萄糖水，羽化后3～5d在纱笼内放一只小白鼠供成蚊吸血，致倦库蚊在晚上吸血。成蚊吸血后约3～5d可产卵，卵产于笼中装有脱氯自来水的烧杯中。卵孵化后喂以少量酵母片，然后慢慢增加酵母片的用量，脱氯自来水每2-3d更换1次。养蚊室温度26±1℃，相对湿度75％，光周期L∶D＝12∶12。

2、试验方法

将待测样品先用少量丙酮溶解，然后加入脱氯自来水中，丙酮/水的体积比控制在2％以下，配120mL药液，将配好的药液平均分为3份转入3只100mL烧杯，分别向每只烧杯中放入30头致倦库蚊4龄幼虫，以丙酮为空白对照、50μg/mL的鱼藤酮为参照。处理24h、48h后统计死虫数，按下式计算死亡率：

3、试验结果见表8

表8狭叶金粟兰不同部位甲醇提取物对致倦库蚊4龄幼虫的毒杀作用

部位	24h平均校正死亡率(％)±	48h平均校正死亡率(％)±
			根茎叶花果全株鱼藤酮	40.72±0.08d55.23±0.08b50.81±0.03c51.05±0.06c50.85±0.40c59.63±0.06a	65.08±0.02d90.15±0.06b86.23±0.09c84.28±0.08c85.70±0.09c93.78±0.071a

注：1)浓度为5mg/mL

2)表中数据为3次重复的平均值，每重复30头虫；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例19  狭叶金粟兰全株不同浓度丙酮提取物对致倦库蚊4龄幼虫的毒杀作用

试虫和试验方法同实施例18，试验结果见表9。

表9狭叶金粟兰全株不同浓度丙酮提取物对致倦库蚊4龄幼虫的毒杀作用

浓度	24h平均校正死亡率(％)±	48h平均校正死亡率(％)±
			0.10.5	10.22±0.04g29.92±0.06f	12.63±0.09f35.10±0.11e

151050100200400700

40.35±0.04e50.55±0.05d65.25±0.03c95.79±0.09b100±0.00a100±0.00a100±0.00a100±0.00a

68.26±0.04d80.48±0.11c98.13±0.07b100±0.00a100±0.00a100±0.00a100±0.00a100±0.00a

注：表中数据为3次重复的平均值，每重复13头虫；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例20  狭叶金粟兰全株不同部位甲醇提取物对斜纹夜蛾的拒食作用

1.试虫

斜纹夜蛾(Spodoptera litura.)：卵块采自华南农业大学农场.低龄幼虫用芋头(Colocasia esoulenta)叶饲养，高龄幼虫用木薯(Manihot esculenta)叶饲养

2、试验方法

将新鲜木薯叶用打孔器打成直径为2cm的叶碟。提取物0.1g溶于10mL丙酮∶水＝1∶1的混合溶液，浸渍叶碟1-2s，晾干后放入垫有滤纸(加适量水保湿)的9cm培养皿中，每个培养皿放入6片处理叶碟，接入6头已饥饿3-4h的斜纹夜蛾3龄幼虫。每处理设5个重复，用丙酮作空白对照、1μg/mL的印楝素为参照。24h后调查取食叶面积。按如下公式计算拒食率

3、验结果见表10

表10狭叶金粟兰全株甲醇提取物对斜纹夜蛾的拒食作用

部位	24h拒食率(％)±SE
		根茎叶花果全株印楝素	44.89±0.05d98.24±0.11a82.71±0.10c80.30±0.09e85.88±0.02b97.89±0.00a

注：1)浓度为10mg/mL

2)表中数据为5次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

叶碟法结果表明：10mg/mL浓度的狭叶金粟兰地上部分甲醇提取物处理斜纹夜蛾24h后，其拒食率达63％以上。

实施例21  狭叶金粟兰全株不同浓度甲醇提取物对斜纹夜蛾的拒食作用

试虫和试验方法同生物活性实施例20，试验结果见表11。

表11狭叶金粟兰全株不同浓度甲醇提取物对斜纹夜蛾的拒食作用

浓度(mg/mL)	24h拒食率(％)±SE
		151050100200	32.13±0.07e62.69±0.08d85.88±0.19c95.65±0.17b100±0.00a100±0.00a

400700

100±0.00a100±0.00a

注：表中数据为5次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

实施例22  狭叶金粟兰全株甲醇提取物的分步萃取物对斜纹夜蛾的拒食作用

试虫和试验方法同实施例20，试验结果见表12。

表12狭叶金粟兰甲醇提取物的分步萃取物对斜纹夜蛾的拒食作用

萃取层	24h拒食率(％)±SE
		石油醚层氯仿层乙酸乙层正丁醇层水层印楝素	68.10±0.03c95.50±0.24b6.24±0.12d0.00±0.00e0.00±0.00e98.12±0.00a

注：1)浓度为5mg/mL

2)表中数据为5次重复的平均值；同列数据后随相同字母者表示在0.05水平上差异不显著(DMRT法)；方差分析前原始数据经反正弦变换 $X^{\′}=\arcsin \sqrt{x}$

Claims (6)

1.一种狭叶金粟兰提取物的制备方法，其特征在于以狭叶金粟兰为原料，采用溶剂提取法、超临界萃取法、微波提取法、超声波提取法、破碎提取法、水蒸汽蒸馏法或萃取法提取得到。

2.根据权利要求1所述的狭叶金粟兰提取物的制备方法，其特征在于所述狭叶金粟兰为狭叶金粟兰的根、茎、叶、花果或全株。

3.根据权利要求1所述的狭叶金粟兰提取物的制备方法，其特征在于所述溶剂提取法采用的溶剂为水、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、无水乙醚、正丁醇、N，N-二甲基甲酰胺或N，N二甲基亚砜。

4.权利要求1所述制备方法制备得到的狭叶金粟兰提取物的应用，其特征在于在制备杀虫剂或杀菌剂方面的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述制备杀虫剂或杀菌剂采用狭叶金粟兰提取物的有效浓度为0.1mg/mL～700mg/mL。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于所述制备杀虫剂或杀菌剂采用狭叶金粟兰提取物的有效浓度为0.5mg/mL～100mg/mL。