CN101215259A - 吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐、包括上述物质的组合物、及上述物质的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有以下通式(1)的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐。本发明还提供了一种抗肿瘤药物组合物，它含有治疗有效量的以上所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐和任选的药理上可接受的辅剂。本发明还提供另一种抗肿瘤药物组合物，它含有治疗有效量的以上所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐和任选的含有一种或多种治疗有效量的其他已知抗肿瘤药物。本发明还提供了上述吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗肿瘤，比如治疗白血病的药物中的应用。

Description

吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐、包括上述物质的组合物、及上述物质的用途

技术领域

本发明涉及一种吡啶类衍生物、包括该吡啶类衍生物的组合物、该吡啶类衍生物的用途。

背景技术

根据肿瘤发生的分子机理来开发新一代高效、特异、低毒性的抗肿瘤新药是科学家和制药公司一直在努力的目标。由于肿瘤发病的过程很长、并且有许多细胞内的生理和病理过程在其间起作用，因此对大部分肿瘤发生的细胞分子机理迄今仍然不是很清楚。人类慢性髓性白血病(CML)发生的分子机理的研究已经取得重大突破，CML的发生是因为白血病细胞的第9号和第22号染色体部(分)交换后形成的BCR/ABL融合基因，结果使得融合基因中ABL酪氨酸蛋白激酶的活性被持续活化而使细胞处于异常的分裂状态并且不发生衰亡(Biochimica et Biophysica Acta 2001，1551：M11-M18)。

根据上述机理，1996年Druker等人发现tyrosine kinrse酶的抑制剂STI571可以有效地抑制调控费城染色体之前肿瘤基因BCR/ABL融合基因。STI571的作用机(理)在于占据TK酶的口袋，使酶与BCR/ABL作用的磷酸酶无法活化，造成BCR/ABL与其介质无法被产生磷酸化作用，因此抑制了癌细胞增生信号的传递，从而起到治疗白血病的效果。

近年来，又有许多针对其它蛋白激酶的药物被成功地用于肿瘤的治疗中，例如能够有效治疗晚期肺癌的埃罗替尼(Erlotinib)就是一种人类表皮生长因子1型受体/表皮生长因子受体(HER1/EGFR)酪氨酸激酶抑制剂；而对晚期肝癌和肾癌有着较好治疗作用的索拉菲尼(Sorafenib)是一种对存在于细胞膜和细胞浆内的多种激酶有着抑制作用的化学分子。因此，寻找和研发能够抑制和肿瘤相关激酶的靶向性药物是二十一世纪肿瘤药物研发的一个趋势，也为人类治疗肿瘤提供一种新的手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐。为此，本发明采用以下技术方案：它为具有以下通式(1)的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐：

其中：

R₁，R₂，R₃，R₄从下列基团中选择：

-H，含1-6碳的低链烷基，卤素，NHR₆，N(R₆)₂；

具有-OH，COR₆，-CN或-CONH₂取代的上述低链烷基；

环烷基；具有-OH取代的环烷基；

R₆是含1-6碳的低链烷基

R₅是-CH₂-R₇或-O-R₇

R₇是含N的饱和杂环或具有下列基团取代的含N的饱和杂环：

R₈，OR₈，NHR₈，N(R₈)₂

R₈是H或含1-6碳的低链烷基；

Het从下列杂环中选择：

在以上技术方案的基础上，本发明的通式(1)优选为以下通式(2)的：

更进一步地，在通式(2)中优选为以下通式(3)：

其中，R₉是H或含1-6碳的低链烷基。

再更进一步地，在通式(3)中优选为4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-{4-甲基-3-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-基氨基}苯基}苯甲酰胺，即NRJ3，其化学结构式为：

本发明另一个所要解决的技术问题是提供一种抗肿瘤药物组合物，它含有治疗有效量的以上所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐和任选的药理上可接受的辅剂。

本发明再一个所要解决的技术问题是提供另一种抗肿瘤药物组合物，它含有治疗有效量的以上所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐和任选的含有一种或多种治疗有效量的其他已知抗肿瘤药物。

本发明还有一个所要解决的技术问题是提供上述吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明再还有一个所要解决的技术问题是提供上述吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗白血病的药物中的应用。本发明的发明人，对很多化合物进行了研究，结果发现了具有上述通式的化合物，尤其是NRJ3具有抑制白血病细胞的作用。上述白血病可以是人慢性髓性白血病或人淋巴细胞白血病或其他白血病。

本发明的吡啶类衍生物和(或)其药理上可接受的盐可经口服或不经过口给药，给药量因药物的不同而各有不同，一般为5-5000毫克每天。

经口服时，可与药学可接受的辅剂混合，将其制成片剂，包衣片，糖衣片，硬胶囊、软胶囊，溶液剂，乳剂或混悬剂。不经过口给药时，它们可以通过直肠给药，比如栓剂，或肠道外给药，比如注射剂。

本发明涉及的由吡啶类衍生物和(或)其相应的药理上可接受的盐所组成的药物制剂，可以通过常规工艺制备而成，例如常规的混合，装胶囊，溶解，制粒，乳化，压片，包衣或冻干处理。这些药物制剂可以与无治疗活性的有机或无机辅料组成药物制剂，其中乳糖，淀粉或其衍生物，滑石粉，酸或其盐，都可以用作片剂，包衣片，糖衣片及硬胶囊的辅料。软胶囊的合适辅料包括植物油，蜡及脂肪，但软胶囊一般不添加辅料。溶液剂和糖浆剂的合适辅料为水，多羟基化合物，蔗糖，及葡萄糖等。注射剂的合适辅料可以是水，酒精，多羟基化合物，甘油，植物油，磷脂和表面活性剂。栓剂的合适辅料为植物油，蜡，脂肪，半液体多羟基化合物。

该药物制剂的制备还可以包含防腐剂，促溶剂，稳定剂，增湿剂，增乳剂，甜味剂，增色剂，调味剂、盐(用以改变药剂的渗透压)，缓冲剂，包衣剂或抗氧化剂。该药剂还可以包含其他活性物质，包括不同于NRJ3的附加活性成分，特别是其他抗肿瘤剂。

附图说明

图1为本发明所提供的NRJ3的化学合成路线示意图。

图2为本发明所提供的NRJ3作用于不同白血病细胞48小时后对细胞增值影响的柱形图。

图3为本发明所提供的NRJ3作用于人慢性髓性白血病细胞(CML)和正常人外周血细胞(NOR)48小时后对两种细胞影响的柱形图。

具体实施方式

实施例1吡啶类衍生物NRJ3的制备方法，如图1所示。

1)、2-{(4-氯)-吡啶基-2-亚胺基}-1-甲基-4-硝基苯(3)

往2，4-二氯吡啶1(2.00g，13.5mmol)，2-甲基-5-硝基苯胺2(2.26g，14.9mmmol)，醋酸钯(II)(121.0mg)，BINAP(336mg)和叔丁醇钾(2.26g，20.25mmol)的混合物中加入甲苯(120ml)，加热至70℃，通氩气保护，保温反应23小时，降温，过滤，滤液浓缩至干，残留物硅胶柱层析，得粗品2.3g，用少量冷乙醚洗涤得黄色目标物(1.2g，34％)，MP.130-133℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.38(3H，s)，6.40(1H，br)，6.74(1H，d)，6.85(1H，dd)，7.38(1H，d)，7.90(1H，dd)，8.15(1H，d)，8.57(1H，d).

2)、1-甲基-4-硝基-2-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-亚胺基}-苯的合成(4)

往2-{(4-氯)-吡啶基-2-亚胺基}-1-甲基-4-硝基苯3(264mg，1mmol)加入脱气处理的四氢呋喃∶水(1∶1，20ml)的混合液，再加入3-吡啶硼酸(271mg，1.1mmol)，碳酸钾(470mg，3.4mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(173mg，0.15mmol)，反应物加热至80℃，氩气做保护气，反应44小时。降至室温，反应物中加入适量的乙酸乙酯，有机层分离，水层用乙酸乙酯提取三次，合并有机层，分别用适量的水和饱和食盐水洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，有机层浓缩至干，残留物硅胶柱层析，得粗品247mg，用氯仿/甲醇重结晶得橘黄色晶体(143mg，46.7％)MP.170-173℃.¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.43(3H，s)，6.49(1H，br)，6.99(1H，s)，7.07(1H，dd)，7.41(2H，m)，7.87(2H，m)，8.37(1H，d)，8.68(1H，dd)，8.69(1H，s)，8.86(1H，d).

3)、4-甲基-3-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-亚胺基}-苯胺(5)

往1-甲基-4-硝基-2-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-亚胺基}-苯4(126mg，0.41mmol)加入浓盐酸(1ml)，加热至60℃搅拌，加入二水合氯化亚锡(465mg，2.06mmol)的1ml浓盐酸溶液中，然后温度慢慢升高至100℃，搅拌反应40分钟，冷却至室温，加入适量的水，再加入10％的氢氧化钠溶液将溶液中和至中性，混合物用乙酸乙酯提取三次，合并有机层，分别用适量的水和饱和食盐水洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，有机层浓缩至干，得粗品用少量氯仿洗涤得浅黄色目标物(93mg，82％)Mp.183-186℃.¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.19(3H，s)，3.60(2H，br)，6.37(1H，br)，6.47(1H，dd)，6.82(1H，s)，6.88(1H，d)，6.91(1H，dd)，7.04(1H，d)，7.37(1H，dd)，7.83(1H，dt)，8.26(1H，d)，8.64(1H，dd)，8.81(1H，d).

4)、N³(3，4’)二吡啶基-2’-基-N1-4-(氯甲基-苯基)-4-甲基-苯-1，3-二胺(6)

将(0.45g，2.38mmol)4-氯甲基-苯甲酰氯的THF5ml溶液加入(0.55g，2mmol)4-甲基-3-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-亚胺基}-苯胺4的THF10ml溶液中，室温搅拌反应1小时，加入适量乙酸乙酯，在加入适量饱和食盐水结束反应，静置分层，会有类白色固体析出，过滤，再用饱和食盐水洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥后浓缩至干得到浅黄色固体，用少量的乙酸乙酯洗涤，得目标物(0.35+0.14g，58.8％)

5)、4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-{4-甲基-3-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-基氨基}苯基}苯甲酰胺(7)

在(0.31g，3.1mmol)甲基哌嗪的乙腈溶液中，加入(0.27g，0.63mmol)的N³(3，4’)二吡啶基-2’-基-N¹-4-(氯甲基-苯基)-4-甲基-苯-1，3-二胺6的二氯甲烷溶液，悬浊液反应回流过夜，冷却至室温，加入氯仿溶解，用适量的水和饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，，浓缩后加入适量丙酮，过滤得目标物(0.18g，58％)。API-Es m/z 527.2(M⁺+Cl)；m/z 493.1(m^-+H)

实施例2、K562和U937细胞的培养

K562和U937属于建代的人体白血病细胞株，可选用合适的培养条件在体外培养，如含有胎牛血清的RPMI 1640培养液(R.Ian Freshney.Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique；Wiley，John & Sons，Incorporated，2000)。当不同浓度的NRJ3作用于细胞一定时间后，可以用MTT法来检测细胞的生长情况(Pieters R，Loonen AH，Huismans DR，Broekema GJ，Dirven MW，Heyenbrok MW，Hahlen K，Veerman AJ.In vitro drug sensitivity of cells from children with leukemiausing the MTT assay with improved culture conditions.Blood.1990 Dec1；76(11)：2327-36.)。

实施例3、正常人和慢性白血病患者外周血白血细胞的分离和原代培养：

正常人和慢性白血病患者外周血白血细胞的分离可以用密度梯度离心的方法来分离后，可用合适的培养条件在体外培养，如含有胎牛血清的RPMI1640培养液。

实施例4 NRJ3的生物学作用

1、NRJ3对培养的白血病细胞株的作用，参照图2：为了观察NRJ3对白血病细胞的作用，我们选用了BCR-ABL阳性的K562细胞和阴性的U937细胞。结果表明，用不同浓度的NRJ3作用于K562细胞48小时后，对细胞的生长有抑制作用，抑制作用与药物的浓度成正比。而同样浓度的NRJ3对BCL-ABL阴性细胞U937却没有抑制作用。从图2中可以得知，NRJ3对K562细胞的抑制作用在5uM时开始出现，到40uM时达到饱和，在此浓度范围内抑制作用和浓度呈正相关。

在图2中横坐标代表NRJ3的浓度，纵坐标代表不同浓度的NRJ3作用细胞48小时后的光吸收值(OD)，每一个数值代表三个平行实验孔的平均值。其中K562细胞为BCR/ABL阳性而U937为阴性。

2、NRJ3对慢性白血病人和正常人外周血细胞的作用，参照图3：为了验证NRJ3对BCL-ABL白血病的治疗作用，我们观察了其对BCR-ABL阳性白血病患者外周血白细胞(含31％的白血病细胞)的直接抑制作用，并用相同数量的正常人的外周血白细胞作对照。结果发现NRJ3对白血病患者外周血白细胞的生长有明显的抑制作用，此抑制作用与浓度成正比，而相同浓度的NRJ3对正常人外周血的白细胞几乎没有抑制作用。

在图3中横坐标代表NRJ3的浓度，纵坐标代表不同浓度的NRJ3作用细胞48小时后的光吸收值(OD)，每一个数值代表三个平行实验孔的平均值。

Claims (10)

1.具有以下通式(1)的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐：

其中：

R₁，R₂，R₃，R₄从下列基团中选择：

-H，含1-6碳的低链烷基，卤素，NHR₆，N(R₆)₂；

具有-OH，COR₆，-CN或-CONH₂取代的上述低链烷基；

环烷基；具有-OH取代的环烷基；

R₆是含1-6碳的低链烷基

R₅是-CH₂-R₇或-O-R₇

R₇是含N的饱和杂环或具有下列基团取代的含N的饱和杂环：

R₈，OR₈，NHR₈，N(R₈)₂

R₈是H或含1-6碳的低链烷基；

Het从下列杂环中选择：

2.如权利要求1所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐，其特征在于它具有以下通式(2)：

其中：

R₁，R₂，R₃，R₄从下列基团中选择：

-H，含1-6碳的低链烷基，卤素，NHR₆，N(R₆)₂；

具有-OH，COR₆，-CN或-CONH₂取代的上述低链烷基；

环烷基；具有-OH取代的环烷基；

R₆是含1-6碳的低链烷基

R₅是-CH₂-R₇或-O-R₇

R₇是含N的饱和杂环或具有下列基团取代的含N的饱和杂环：

R₈，OR₈，NHR₈，N(R₈)₂

R₈是H或含1-6碳的低链烷基。

3.如权利要求2所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐，其特征在于它具有以下通式(3)：

其中：

R₁，R₂，R₃，R₄从下列基团中选择：

-H，含1-6碳的低链烷基，卤素，NHR₆，N(R₆)₂；

具有-OH，COR₆，-CN或-CONH₂取代的上述低链烷基；

环烷基；具有-OH取代的环烷基；

R6是含1-6碳的低链烷基

R9是H或含1-6碳的低链烷基。

4.如权利要求3所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐，其特征在于它为4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-{4-甲基-3-{4-(3-吡啶基)吡啶-2-基氨基}苯基}苯甲酰胺，即NRJ3，其化学结构式为：

5.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于它含有治疗有效量的权利要求1、2、3或4所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐和任选的药理上可接受的辅剂。

6.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于它含有治疗有效量的权利要求1、2、3或4所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐和任选的含有一种或多种治疗有效量的其他已知抗肿瘤药物。

7.权利要求1、2、3或4所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

8.权利要求1、2、3或4所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗白血病的药物中的应用。

9.权利要求1、2、3或4所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗人慢性髓性白血病的药物中的应用。

10.权利要求1、2、3或4所述的吡啶类衍生物或其药理上可接受的盐在制备治疗人淋巴细胞白血病以及其他白血病的药物中的应用。

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