CN101198374B - 具有抗hiv中和活性的抗体或其片段 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种单克隆抗体或其片段，其识别如SEQ ID NO 7所示肽序列或其类似物，其中其H链可变区的互补决定簇3(CDR3)包括如SEQ ID NO1所示的肽序列或其功能类似物。

Description

具有抗HIV中和活性的抗体或其片段
本发明涉及一种具有抗HIV中和活性的抗体或其片段，以及其在治疗和/或预防HIV感染中的应用。本发明还涉及一种包括所述抗体的药物组合物、一种诊断组合物和一种用于提供被动免疫治疗的方法。
人类免疫缺陷病毒(HIV)是动物逆转录病毒的慢病毒家族成员之一，并且是获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的病原体。迄今，已经在分子水平上鉴定并表征了两种密切相关的HIV类型，即HIV-1型(HIV-1)和HIV-2型(HIV-2)。
采用抗HIV的抗病毒剂(例如逆转录酶抑制剂)已经使得受AIDS影响的患者的症状显著改善。然而，在大多数情况下，这些药物对AIDS的疗效是局部的或暂时的，并且另外，这些药物表现出毒性或者抑制造血细胞的生长，并因此抑制已经缺陷的免疫系统的重建。
因此，通常认为艾滋病的预防方案和抗逆转录病毒的药物治疗(VALDISERRI，2003，Nat.Med，9：881)需要结合有效的杀菌剂和疫苗。但是设计并测试这些疫苗被证明是很复杂的(LETVIN，et al.2002，Annu.Rev.Immunol.，20：73；McMICHAEL&HANKE，2003，Nat.Med.，9：874)。
粘膜表面是HIV-1进入的主要位点(NICOLOSI，et al.1994，J.Acquir.Immun.Defic.Syndr.，7：296)。通过使粘膜表面暴露于被HIV-1感染的液体，例如精液、初乳、母乳和子宫颈阴道的液体可以发生HIV-1的传播(CHERMANN，1998，Am.J.Reprod.Immunol.，40：183；MILMAN&SCHARMA，1994，AIDS，10：1305)。
由于HIV与粘膜表面的相互作用，被设计成抗HIV疫苗的组分需要引起粘膜免疫系统对粘膜病毒传播的早期步骤和潜在受体的干扰。
已经认识到中和AIDS病毒的抗体可以明显地在防护中起到重要作用。
然而，尽管可以获得抗一种生长在实验室的特定病毒株的中和抗体，但是还没有发现类似成功地实现可以中和大量株系并且可以在体内有效作用的抗体。
因此，需要一种抗体，其可以中和HIV感染，和尤其是HIV-1感染。
需要一种抗体，其可以预防和/或减少通过粘膜表面的HIV感染。
还需要提供一种抗体，其用于生产意图被用于被动免疫治疗的药物。
需要一种抗体，其可以被用于诊断的目的。
本发明的目的在于满足上述提及的全部或部分需求。
本发明人已经获得了一种有效的单克隆抗体，其可以满足上述提及的未满足的需求。尤其是，本发明人已经鉴定出一种新的分泌型IgA(S-IgA)抗体Fab，其H链可变区具有一个特异的互补决定簇3(CDR3)，所述抗体识别从HIV-1的gp41蛋白上的特异的肽。该新鉴定的抗体也具有抑制HIV-1转胞吞作用和阻止CD4+T细胞感染的能力。
因此，根据本发明的一个方面，本发明涉及一种单克隆抗体或其片段，其识别如SEQ ID NO 7所示序列的肽或其类似物，其中所述抗体或其片段在H链可变区的互补决定簇3(CDR3)包括如SEQ ID NO 1所示序列的肽或其功能类似物。
本文所使用的术语“抗体片段”意指氨基酸末端和/或羧基末端缺失的抗体，但其保留的氨基酸序列与自然产生的序列在对应位置上相同且具有保留了的生物活性或没有负面影响。所述抗体片段可以包括其它的修饰，例如氨基酸残基的插入、缺失和/或取代和/或与其它肽或蛋白质融合以产生嵌合蛋白。术语“抗体片段”也可以包含抗体的不同部分，即恒定区、可变区、重链和轻链。
在本发明的含义中，关于肽的短语“功能类似物”意指具有氨基酸同源序列或与另一氨基酸序列相同，以及相对于所述其它肽序列具有类似或保守的生物特性的肽。典型地，肽类似物包括相对于自然产生的序列而保守的氨基酸取代物(和/或插入物和/或缺失物)。
根据本发明的另一方面，本发明针对于一个H链可变区，其识别如SEQID NO 7所示的肽序列或其类似物，其中所述H链可变区的CDR3包括如SEQID NO 1所示的肽序列或其类似物。
根据本发明的另一方面，本发明的抗体或其片段具有中和HIV的能力。
根据本发明的另一方面，本发明还涉及编码本发明抗体或其片段的核酸序列，以及包括所述核酸序列的表达载体和宿主细胞。
根据本发明的另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包括有效量的选自本发明的抗体或其片段、本发明的核酸序列、本发明的载体或本发明的宿主细胞的试剂作为活性剂，和适宜的载体。
根据本发明的另一方面，本发明还针对于一种诊断组合物和一种用于在体外检测样品中HIV株系的方法。
根据本发明的另一方面，本发明还涉及一种用于向易于被HIV感染的个体提供被动免疫治疗的方法，其包括给予治疗上有效量的至少一种本发明的抗体或其片段。
抗体
根据本发明的抗体指一个完整的免疫球蛋白或其片段，和尤其指该蛋白的抗原结合部分。
免疫球蛋白是由相同的两对多肽链组成的四聚体分子，每对多肽链具有一条“轻链”(L)(大约25kDa)和一条“重链”(H)(大约50～70kDa)。每条链的氨基末端部分包括一个大约100～110或更多氨基酸的可变区(V)，其主要负责抗原识别。每条链的羧基末端部分限定一个恒定区(C)，其主要负责效应功能。人类的轻链被分成λ和κ轻链。重链恒定区被分成μ，δ，γ，α或ε，和分别被定义为同型抗体IgM，IgD，IgG，IgA和IgE。每一轻/重链对的可变区形成抗体的结合位点，以致于完整的免疫球蛋白通常具有至少两个结合位点。
在本发明的一个特别的具体实施方式中，本发明的单克隆抗体或其片段可以是IgA，和尤其是分泌型IgA(S-IgA)。
根据另一个具体实施方式，本发明的单克隆抗体或其片段可以是人抗体。
免疫球蛋白链显示出相同的通用结构，其相对保守的框架区(FR)被自由的超变区(也称为互补决定簇或CDRs)所结合。每对多肽链的两条链上的CDRs通过框架区配对，使得其结合到特异的抗原表位(抗体的抗原结合部分)。不管是轻链还是重链，从N-末端到C-末端都包括FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4结构域。
本发明的抗体明显包括如SEQ ID NO 1所示的肽序列或其功能类似物作为H链可变区的CDR3。所述序列是21个氨基酸长度和在其中部包括例如色氨酸或苯丙氨酸(W或F)(N-端开始的第十个氨基酸，在SEQ ID NO 1的单字母氨基酸密码中被鉴定为W)的芳香疏水氨基酸残基。
不需要结合任何特殊的理论，本发明人认为该芳香疏水氨基酸残基可以在识别抗原中起关键作用，所述抗原即被如SEQ ID NO 7所示肽序列所鉴定的P1肽。因此认为本发明的CDR3序列的任何功能类似物应该具有至少大约15个氨基酸长度的序列，优选至少大约18个氨基酸，和更尤其是大约20～21个氨基酸并且应该在其序列的中部包括例如色氨酸或苯丙氨酸或其类似物的芳香疏水残基。
根据另一个具体实施方式，本发明单克隆抗体的H链可变区或其片段进一步包括至少一个选自CDR1和CDR2的CDR或其功能类似物，所述CDR1和CDR2分别具有如SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示的肽序列。
根据一个特别的具体实施方式，本发明单克隆抗体的H链可变区或其片段包括分别具有如SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 1所示肽序列的CDR1、CDR2和CDR3作为CDRs。
在另一个具体实施方式中，本发明也针对于如前所定义的H链可变区。
本发明的H链可变区可以识别具有如SEQ ID NO 7所示的肽序列且被称作P1的肽或其类似物。
该P1肽对应于出现在HIV包膜蛋白gp41上的氨基酸序列，所述蛋白gp41在病毒与靶细胞作用之前暴露于病毒颗粒表面。在HIV-1株中，这一序列包括gp41蛋白第650～685位的氨基酸。
在水溶液中，所述肽可以采用结构化的、浓度依赖的寡聚状态，即二聚或四聚状态(ALFSEN&BOMSEL，2002，J.Biol.Chem.，277：25649)。
因此，根据本发明的抗体或H链可变区或其片段可以识别单体或寡聚形式的P1肽。
P1的肽序列(SEQ ID NO 7)包括被本领域公知的各种抗体所识别的多种抗原表位序列。所述抗原表位是被单克隆抗体IgG 2F5所识别的ELDKWA抗原表位和被单克隆抗体IgG 4E10所识别的NWFDIT抗原表位。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的抗体或其片段不识别2F5和4E10的抗原表位。
在本发明的另一个具体实施方式中，根据本发明的抗体或其片段也可以包括一个L链可变区，其包括至少一种选自CDR1、CDR2和CDR3的互补决定簇或其功能类似物，所述CDR1、CDR2和CDR3分别具有如SEQ ID NO4、SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6所示的肽序列。
因此，根据本发明的另一个具体实施方式，本发明涉及一个L链可变区，其包括至少一个选自CDR1、CDR2和CDR3的CDR或其功能类似物，所述CDR1、CDR2和CDR3分别具有如SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 5和SEQ ID NO6所示的肽序列。
根据另一个具体实施方式，本发明的L链可变区包括分别具有如SEQ IDNO 4、SEQ ID NO 5和/或SEQ ID NO 6所示肽序列CDR1、CDR2和CDR3作为CDRs。
根据另一个具体实施方式，本发明的单克隆抗体或其片段包括分别具有如SEQ ID NO 8和SEQ ID NO 9所示氨基酸序列的H链可变区和L链可变区。
根据一个具体实施方式，本发明的抗体是在实验部分被鉴定为克隆43的Fab，并且其包括分别具有如SEQ ID NO 8和SEQ ID NO 9所示氨基酸序列的H链可变区和L链可变区。
根据另一个具体实施方式，本发明的抗体可以是重组抗-HIV抗体或其片段，其包括本发明的H链可变区。
根据另一个具体实施方式，本发明的重组抗体可以另外包括本发明的L链可变区。
因此，本发明的H链可变区的CDR3或H链可变区作为整体可以被用于构建具有IgA同型框架区的嵌合抗体或重组抗体，所述框架区例如IgG同型框架区。可以通过任何本领域已知的分子生物学工具获得所述构建，例如在“Molecular Cloning-A Laboratory Manual”(2nd ed.)，Sambrook et al.，1989，Coldspring Harbor Laboratory，Coldspring Harbor Press，N.Y.(Sambrook)中所描述。所述嵌合或重组抗体可以是一个整体抗体或其片段。
因此，本发明的H链可变区或L链可变区的CDR功能类似物一旦代替原始序列而被插入到根据本发明的抗体中，其保持或不负面影响所述抗体识别SEQ ID NO 7所示的肽或其功能类似物，以及中和HIV和/或抑制HIV感染的能力。
本发明还涉及包括衍生自本发明的人抗体Fab片段和衍生自例如IgG等另一Ig亚型的人Fc结构域的抗体。
因此，根据一个具体实施方式，本发明还针对于根据本发明抗体的抗原结合部分或其片段，其包括如前所定义的H链可变区。所述抗原结合部分可以任选地包括如前所定义的L链可变区。
可以利用任何已知的重组DNA技术或对完整抗体的酶解或化学裂解产生所述抗原结合部分。所述抗原结合部分可以包括inter alia、Fab(由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段)、F(ab’)2(包括由在铰链区的二硫桥链接的两个Fab片段的双价片段)、Fv(由抗体的单臂VL和VH结构域组成的片段)、Fd(由VH和CH1结构域组成的片段)、dAb片段(由VH结构域组成)、scFv(由抗体组成，其中VL和VH区域通过合成接头配对以形成单价分子)、嵌合抗体、双价抗体和互补决定簇(CDR)片段。
可以通过抑制转胞吞作用检测法和阻断CD4+T细胞感染检测法评价本发明的抗体或其片段对HIV的中和能力，其在下面进行描述并用实例说明。
抗体的中和活性
可以通过抑制HIV经上皮细胞的转胞吞作用和/或抑制HIV感染CD4+T细胞而评价本发明的抗体或其片段抗HIV的中和活性。
根据一个具体实施方式，被中和的HIV更具体而言是HIV-1株系。
可以在任何极化细胞上对本发明单克隆抗体抑制HIV经细胞的转胞吞作用的能力进行评价。在一个具体实施方式中，所述极化细胞可以是上皮细胞，例如肠细胞系HT-29或子宫内膜细胞系HEC-1或来自人粘膜活组织检查的细胞(BOMSEL et al.，Immunity，1998，3：277)。典型地，所述细胞系在可渗透的过滤载体(例如孔径为0.45μm)上生长成致密的极化单细胞层以在两个独立的腔室间形成界面，上面腔室充满上皮单细胞层的顶端表面(apicalsurface)和下面腔室充满底外侧表面或者使用腔室固定生物活检。
可以在顶端腔室，通过接触被HIV-感染的细胞，例如HIV-1-感染的外周血单核细胞(PBMC)而引发转胞吞作用。
可以在接种被HIV感染的细胞之前或在接种后将待检测的抗体接种于顶端腔室或者将待检测的抗体与HIV-1病毒或HIV-1感染的细胞一起预培育。
待检测的本发明抗体可以各种浓度接种，例如大约0.01～大约10ng/ml，尤其是大约0.1～大约5ng/ml或更优选大约0.5～大约1ng/ml。
可以利用诸如PCR、RT-PCR或ELISA之类的本领域已知的技术，通过检测底外侧培养基中HIV核酸或蛋白而对病毒转胞吞作用和其可能的抑制进行评价。
在一个具体实施方式中，可以被用于评价病毒转胞吞作用的HIV肽可以是p24肽，例如使用PASTEUR-SANOFI(法国)提供的试剂盒，通过ELISA检测法可以检测出该p24肽。
在一个特别的具体实施方式中，当将本发明的单克隆抗体或其片段以浓度大约0.5ng/ml～大约5ng/ml添加到大约106个被HIV-1感染的PBMCs中并在大约17℃培育大约1小时或在将被感染的细胞接种到顶端腔室以前在大约4℃培育大约1小时，相对于没有抗体而进行的病毒转胞吞作用，本发明的单克隆抗体或其片段对因向顶端腔室添加106个HIV-1+PBMC而引发的病毒转胞吞作用可以抑制至少大约50％，尤其是至少大约75％和更尤其是至少大约95％。
在另一个具体实施方式中，可以在添加被HIV感染的PBMCs之前将本发明的抗体或其片段添加到顶端腔室。在该具体实施方式中，转胞吞作用的抑制可以至少是没有抗体所进行的病毒转胞吞作用的大约50％。
作为实例，也是本发明目的的克隆43的Fab和Fd可以分别抑制HIV转胞吞作用至少大约70％和大约80％。
在一个特别的具体实施方式中，根据本领域已知的常规方法，通过流式细胞仪分析测量，也是本发明目的的克隆43的Fab和Fd能够特异地结合到在被HIV-1感染的PBMCs(JRCSF克隆R5)表面上表达的gp41。
在另一个具体实施方式中，根据本发明的单克隆抗体或其片段可以显示出抑制HIV-感染CD4+T细胞的能力。
在一个特别的具体实施方式中，在大约37℃将大约1ng/ml的病毒与本发明的抗体或其片段培育大约30分钟后，相对于没有抗体或者使用不识别该病毒的非特异性抗体进行CD4+T细胞的HIV-感染，被HIV感染的CD4+T细胞可以被抑制至少大约75％，和尤其是至少大约95％。
作为实例，也是本发明目的的克隆43的Fab可以抑制CD4+T细胞的HIV-感染至少95％。
核酸、载体和宿主细胞
通过筛选如实验部分描述所获得的IgA Fab噬菌体展示文库鉴定出本发明的抗体。
组合文库的产生和操作方法已经被文献广泛描述以及来自于本领域技术人员的常识。
利用固定于一个固体载体(例如酶联免疫(ELISA)板上)上的抗原迭代淘选，用具有如SEQ ID NO 7所示序列的P1肽筛选组合的Fab噬菌体展示文库，此方法即AZZAY&HIGHSMITH(Clinical Biochemistry，2002，35：425-445)中描述的微量淘选法。
例如，起始浓度可以是大约125μM，其中P1肽采用二聚体/四聚体的寡聚状态。
可以通过本领域公知的任何技术来估算对抗原(即P1肽)和展示在细菌噬菌体外面的抗原结合结构域之间的相互作用的检测。例如，可以使用ELISA检测法，其中P1肽在ELISA板的小孔里被包被，然后接种文库中的噬菌体。
然后可以从被选定噬菌体的噬菌体核酸中回收编码抗原结合位点的基因，所述基因对每个噬菌体都是唯一的，将该基因测序并用于构建完整抗体分子或其类似物的基因，例如上述Fab片段，F(ab’)2或scFv。
可以根据本领域技术人员公知的技术对从被选定噬菌体中回收的编码抗原结合位点的基因序列进行测序。
例如，可以利用带有Taq荧光双脱氧核酸终止剂循环测序试剂盒(Applied Biosystems)的自动DNA测序仪进行测序。例如可以从细菌中制备双链DNA，并且使用一对引物来测序，其中该引物与克隆Fab的H链和L链所使用的载体在每个Fab链的上游和下游特异性退火。例如，当使用pComb3X载体时，可以使用具有表II所示序列的引物。
因此，根据另一个具体实施方式，本发明也涉及例如cDNA，RNA等的核酸分子，其编码本发明的重链和轻链可变区的氨基酸序列，其中这些序列分别如SEQ ID NO 8和SEQ ID NO 9所示。
特别地，本发明的核酸序列可以是如SEQ ID NO 10所示的H链可变区序列，和如SEQ ID NO 11所示的L链可变区序列。
当然，由于基因编码的简并性，需要考虑分别如SEQ ID NO 10和SEQID NO 11所示的重链和轻链可变区的核酸序列的改变，其导致能够指导产生抗体或其功能类似物的核酸序列改变，所述抗体或其功能类似物包括如SEQID NO 8所示的重链可变区氨基酸序列和如SEQ ID NO 9所示的轻链可变区氨基酸序列。
根据本发明的一个具体实施方式，本发明还涉及编码本发明抗体或其片段的核酸序列。所述核酸可以是RNA，cDNA等。利用本领域公知的分子生物学技术，可以将本发明的核酸序列与其它核酸序列融合以构建嵌合蛋白。例如，本发明的核酸序列可以与编码His-Tag或HA-Tag的核酸融合，例如，其随后可以被用于纯化本发明的抗体。
根据本发明的又一个具体实施方式，本发明还涉及一种表达载体，所述表达载体包括编码根据本发明的单克隆抗体或其片段的核酸序列。
所述表达载体可以被用于在各种类型的细胞中表达根据本发明的单克隆抗体或其片段。所述载体可以是质粒或病毒载体。所述载体可以在宿主细胞中自主复制，或者被整合到宿主细胞的基因组中。
作为实例，可以提及的用于完成本发明的载体是pComb3X或pASK88。
本发明还涉及通过各种宿主细胞表达根据本发明的抗体或其片段，所述宿主细胞例如细菌、哺乳细胞(CHO或HEK293)、昆虫细胞(例如Sf9细胞)或植物细胞(烟草，蕃茄)。
表达以后，可以通过本领域公知的技术分离和纯化本发明的抗体。例如，抗体可以与His-Tag或HA-Tag一起表达，和随后可以按本领域的常规方法使用Nickel柱或者与特异抗体进行纯化。
因此，本发明还针对于由编码根据本发明单克隆抗体或其片段的核酸序列所转化的宿主细胞。可以根据本领域公知的转化技术获得所述宿主细胞，所述转化技术例如电转化、磷酸钙技术、脂质体和诸如使用重组病毒的感染。本发明针对于由编码根据本发明单克隆抗体或其片段的核酸序列所转化的宿主细胞，例如电转化的细菌或脂质体哺乳细胞(CHO)。
药物组合物
根据本发明的一个具体实施方式，本发明涉及一种药物组合物，其包括有效量的选自本发明的抗体或其片段(尤其是克隆43)、本发明的H链可变区、本发明的重组抗-HIV抗体或其片段、根据本发明的核酸序列、根据本发明的表达载体或根据本发明的宿主细胞之中至少一种试剂作为活性剂，以及适宜的载体。
根据另一个具体实施方式，上述活性剂可以被用于生产意欲被用以预防和/或治疗HIV-感染，和尤其是HIV-1感染的药剂。
术语“有效量”指观察到期望的效果(即中和HIV和/或预防HIV感染)所需的最小量。对于单个患者，治疗学上或预防上有效量的根据本发明的抗体或其片段，可以被确定为达到治疗或预防效果(即减少或预防感染)同时副作用最少时所给予个体的抗体用量。可以通过个体HIV抗原量的血清降低来测定该有效量。
作为实例，本发明的抗体或其片段在治疗学上或预防上有效量的非限制性范围是大约0.1～100mg/kg，尤其是大约0.5～50mg/kg，更尤其是大约1～20mg/kg和特别尤其是大约1～10mg/kg。
根据另一个具体实施方式，本发明的单克隆抗体或其片段或者本发明的药物组合物可以被用于被动免疫治疗，通过给予易于被感染或者易于暴露于HIV中的个体治疗上有效量的至少一种根据本发明的抗体或其片段，或者本发明的药物组合物。本发明的被动免疫治疗可以在由HIV感染所造成的表现为AIDS或相关症状的个体上或者在有HIV感染风险的个体上实施。
根据一个具体实施方式，也可以预防性地实施本发明的被动免疫治疗，即在暴露于HIV感病前。
本发明的药物组合物可以口服、非经肠道(静脉或鼻息肉等)、局部、直肠、阴道等给药。
因此，可以各种盖仑制剂(galenic forms)形式制备本发明的药物组合物，例如注射的或不溶的无菌溶液、散剂或混悬剂、片剂、丸剂、粉剂、脂质体、栓剂和乳膏剂。
根据要实现的盖仑制剂形式采用适宜用于生产本发明药物组合物的载体。所述适宜的载体包括但不限于水、生理盐水、磷酸盐缓冲液、葡萄糖、甘油等以及其组合。本发明的药物组合物也可以包括药物学上可接受的物质，例如湿润剂或乳化剂，防腐剂或缓冲液。
除了本发明的活性剂，本发明的药物组合物也可以包括至少一种其它抗HIV的活性剂，例如抗逆转录病毒药。根据另一个具体实施方式，所述其它的抗逆转录病毒药物可以与本发明的药物组合物结合而同时、分别或者先后给药。
在另一个具体实施方式中，为了治疗目的也可以标记本发明的抗体或其片段，在此种情况下，标记试剂可以是药物结合物或者毒素，例如放射性同位素或放射性核素(131I，99Tc，111In等)、百日咳毒素、紫杉醇、细胞松弛素B和阿霉素等。
诊断组合物和应用
本发明的单克隆抗体或其片段也可以作为诊断试剂被用于在体外样品中检测HIV株系，和尤其是HIV-1株的方法中。
在一个具体实施方式中，本发明的方法包括至少下述步骤：
a)在适合所述抗体或其片段与包括具有如SEQ ID NO 3所示序列的肽或其功能类似物的HIV蛋白之间形成复合体的条件下，将样品与至少一种本发明的抗体或其片段接触，和
b)检测所述复合体的存在。
可以利用本领域公知的免疫测定法检测所述复合体。
所述测定法包括但不限于放射免疫测定法、Western blot测定法、荧光免疫测定法、酶免疫测定法(例如ELISA)、化学发光免疫测定法和免疫组化测定法等。
另外，为了简化检测，可以利用可检测的标记对本发明的单克隆抗体或其片段进行标记。作为实例，可以提及的标记试剂是荧光化合物，例如荧光素或罗丹明；酶，例如辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶或荧光素酶；生物素，其允许通过间接测量亲和素或链霉亲和素的结合而检测；或者被放射标记的氨基酸，其包括例如3H，14C或125I作为放射性同位素或放射性核素。
根据本发明的另一个具体实施方式，本发明还针对于一种包括根据本发明的抗体或其片段的诊断组合物。
为了更好的理解本发明，给出下述实施例。
这些实例仅仅为了说明而不被认为以任何方式限制本发明的范围。
附图说明
图1表示出gp41-衍生的HIV-1蛋白的免疫印迹，该蛋白暴露于高暴露持续IgG血清阴性(HEPS)个体的抗-HIV-1 IgA-含量颈-阴道分泌物。作为阳性对照，使用获得自HIV血清反应阳性个体的血清进行gp41肽的免疫印迹。而作为阴性对照，使用HIV血清反应阴性个体的血清进行相同的实验。
图2表示出质粒pComb3X的简图，其中IgA Fab噬菌体文库中的重链和轻链的可变和恒定区都分别被插入到限制性酶切位点Sac1和Xba1以及Xho1和Spe1之间。
图3表示出被选出的IgA Fab克隆对经子宫内膜HEC-1细胞系的HIV-1转胞吞作用的抑制。使用在ELISA中不识别P1的非特异性Fab克隆进行实验来获得阴性对照。使用2F5抗体IgA获得阳性对照。
图4表示出Hela CD4+CXCR4+LTR LacZ细胞感染的抑制，其通过使HIV-1 Lai2按1ng/ml的浓度与已选择的Fabs在37℃预培育30min，然后其在37℃与上述细胞培育1h。阴性对照(标准)是使用无Fabs或在ELISA中不识别P1的非特异性Fab克隆进行。阳性对照是使用2F5抗体IgA进行。
图5表示出根据本发明抗体的H链可变区的互补决定簇3(CDR3)(SEQID NO 1)以及CDR1和CDR2(SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3)的氨基酸序列。也表示出根据本发明抗体的L链可变区的互补决定簇CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6所示。也表示出如SEQ ID NO 7所示氨基酸序列的P1肽，其对应于HIV-1的gp41第649～684位所包含的氨基酸序列。
图6A和6B表示出克隆43Fab的重链可变区(SEQ ID NO 8和SEQ ID NO10)和轻链可变区(SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 11)的氨基酸序列和核酸序列。
图7表示出使用网络上免费的IMTG程序(由M.P.LEFRANC开发，法国)获得的克隆43IgA Fab的轻链和重链的框架区(FR)以及互补决定簇(CDR)的氨基酸序列。IMGT/V-QUEST软件(http://imgt.cines.fr)。
表I表示用于扩增获得自HEPS个体的DNA的引物序列。
表II表示用于对噬菌体展示文库中IgA Fab核酸序列进行鉴定和测序的引物序列。
实施例1、在高暴露持续IgG血清阴性(HEPS)个体的子宫颈-阴道分泌物中的抗-HIV-1 IgA的鉴定
对来自于柬埔寨的56位HEPS的宫颈分泌物检测HIV-包膜糖蛋白S-IgA。在性节制2天后使用3ml灭菌的PBS收集分泌物。将样品离心并冷冻储存于-80℃。使用精液检测法测定被精子污染的样品(SEMA；HUMANGEN FERTILITY DIAGNOSTICS，Charlottesville，VA)，根据使用说明进行所述检测法但是通过增加培育时间和使用邻苯二胺二盐酸盐作为底物进行优化。丢弃被污染的样品。
使用市售可得的试剂盒(New Lav Blot1，Sanofi-Pasteur，France)，按照产品说明书的步骤，利用western blot检测特异IgA抗体的存在。在被测试的样品中，22个样品包含高水平的抗-HIV包膜gp41分泌型IgA(S-IgA)(图1)。
实施例2、构建表达IgA Fab的噬菌体展示组合文库
使用实施例1中的22个已鉴定的HEPS的粘膜B细胞构建表达IgA Fab的组合噬菌体展示文库。
使用标准技术从22位HEPS个体的形成子宫颈-阴道分泌物的富集B细胞群中制备总RNA。利用基于RNA分离的异硫氰酸胍/酚氯仿快速一步法(CHOMCZYNSKI&SACCHI，Anal.Biochem.，1987，162：156-9.)从宫颈B细胞中纯化总RNA(60μg)。利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)将该总RNA转变成互补DNA(cDNA)。使用表I所示的粘膜IgA Fab特异引物扩增所获得的cDNA文库。
然后将扩增后的DNA用Sac I和Xba 1对轻链(L)进行酶切，和用Xho1和Spe 1对重链(H)进行酶切，并将酶切产物插入到经相同的酶酶切的载体pComb3X(BARBAS等，Proc Natl Acad Sci U S A，1991，88：7978-82)中。使用T4噬菌体DNA连接酶连接所述酶切载体和酶切的PCR产物(4个插入片段+1个载体+T4 DNA连接酶，14℃过夜)(图2)。然后利用电转化将所获得的重组质粒转化大肠杆菌E.coli(菌毛+，雄性)TG1。
然后，大肠杆菌转化后，培养基中的抗体cDNAs文库通过与辅助噬菌体VCS-M13(1012pfu)(Stratagene，La Jolla，CA)的重叠感染在细菌噬菌体中表达。
收集所制备的噬菌体。添加20％(wt/vol)聚乙二醇8000和2.5M NaCl使噬菌体析出，然后在冰上培育1小时。离心后，在磷酸盐缓冲液(PBS)中重悬噬菌体团和将噬菌体团碎片微量离心几分钟。
从滴度板对单独的菌落的限制性酶切分析显示大约35％的噬菌体含有IgA Fab和典型地，该文库所含效价接近107cfu/ml，和107个独立克隆(different clones)。
实施例3、用P1肽(SEQ ID N0 7)筛选IgA Fab噬菌体文库
利用微量淘选筛选IgA Fab噬菌体展示文库，其中在每一轮中抗原浓度是变化的。用于筛选的抗原是P1肽(ALFSEN&BOMSEL，2002，J.Biol.Chem.，277：25649-59；obtained from Eurogentec，Belgium)。所用P1肽的起始量为20μg，和该用量在每轮减半至第四轮的最终量为2.5μg。
使用125μM的P1肽包被96孔板(Exiqon peptide Immobilirez，10202-111-10)的小孔，P1肽在此浓度下是二聚体状态，然后在37℃用BSA封闭2小时。然后在37℃将从文库中制备的浓缩噬菌体以1012-1013pfu接种于小孔，反应2小时。然后通过强力洗涤除去未结合的噬菌体，在第一轮和第二轮淘选时用含有0.1％Tween-20的PBS清洗10次，然后用PBS清洗10次以除去清洗剂。在接下来的淘选中，用含有0.1％Tween-20的PBS清洗20次，然后用PBS清洗20次。用调节pH至2.2的0.1M甘氨酸-HCl处理进行具有P1结合表面Fab的抗原表位的噬菌体的特异洗脱，洗脱10分钟。立即中和洗脱液并用其感染2ml新鲜的E.coli TG1细菌培养基(OD600＝1)。在30℃培养细菌大约30分钟，培养基体积增加和在37℃将培养基振荡培养1小时。然后加入1012pfu/ml的辅助噬菌体VCS-M13，过夜培养以产生重组噬菌体。在每轮淘选时扩增被洗脱下来的噬菌体。
淘选以后，使筛选四轮后的单个克隆生长和使用表II所示的特异引物利用PCR监测Fab的存在，所述引物与Fab轻链和重链的上游和下游载体杂交。利用在大肠杆菌琥珀非抑制株中的转化使含有IgA Fab的克隆转变成可溶的Fab并使用IMGT/V-QUEST软件(图7)对Fab测序以测定重链(H)和轻链(L)的可变区序列。
免疫球蛋白基因的测序
使用Taq荧光双脱氧核酸终止剂循环测序试剂盒(Applied Biosystems)，利用自动DNA测序仪进行测序。从细菌中制备双链DNA并使用与pComb3X载体在每条Fab链上游和下游特异退火的一对引物(见表II)进行测序。
图6显示了克隆43的H链和L链可变区的测序结果(SEQ ID NO 10和SEQ ID NO 11)。
图7显示了使用IMGT软件对互补决定簇所对应的氨基酸序列的鉴定。
用于克隆的载体在标签(His-tag和HA-tag)序列和噬菌体蛋白pIII之间具有一个琥珀密码子，其提供了使用例如TG1的大肠杆菌抑制株系而与噬菌体包被蛋白产生融合抗体的机会，或者提供了通过在例如TOP-10的非抑制株系中表达载体而产生可溶性抗体的机会。考虑到这一优点，使用噬菌体DNA转化TOP 10E.coli(琥珀非抑制株系)以便表达没有pIII融合蛋白的可溶的Fab片段。使用1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Fab表达。
对于本发明单克隆抗体的大规模表达，将整个操纵子从pComb3X转化到载体pASK88(SKERRA A.，Gene，1994，151(1-2)：p.131-5；SKERRA A.，Gene，1994，141(1)：p.79-84；SKERRA A.，et al.，Biotechnology(N Y)，1991.9(3)，p.273-8；SKERRA A.&A.PLUCKTHUN，Protein Eng，1991，4(8)：p.971-9)中。通过特异引物在pASK88载体上引入进行亚克隆所需的限制性位点，来扩增本发明的单克隆抗体的Fab DNA。利用琼脂糖凝胶电泳纯化扩增产物并用限制性内切酶在重链的PstI和NcoI酶切，在轻链的SacI和HindIII酶切。利用标准方法将Fd(VH-CH1)和轻链(VL-CL)基因分别插入并连接到按照标准方法使用同种限制性酶酶切的pASK88中。将连接物转化到热感受态JM83细菌细胞(Dr.Skerra提供)中并涂平板以分离单个克隆。利用限制性酶切分析多个克隆的质粒DNA和通过使用特异引物对其中一些进行双链测序分析。
表达载体pASK88被设计成用于免疫球蛋白可变结构域基因以及Escherichia大肠杆菌中相应的Fab片段的胞质分泌物的常规克隆。在该质粒中，表达受到四环素启动子的控制。
使用这种载体获得大量本发明的单克隆抗体。使用E.coli K-12 JM83作为表达宿主，按1升规模进行制备表达。细胞在对数中期生长，和然后用0.2mg/L无水四环素诱导Fab表达4小时或者过夜。
在Ni-NTA离心柱(Qiagen)上通过与His-tag相互作用进行本发明单克隆抗体的纯化。将无菌的胞质流分过滤物上柱和使用在层析缓冲液中梯度为250～500mM的咪唑收集样品。
实施例4、用来自噬菌体展示文库的可溶IgA Fab克隆进行ELISA检测
使用获得自TOP 10F’细菌(pComb3x系统)的可溶的IgA Fab和使用获得自K-12 JM83细菌(pASK88系统)的可溶的IgA Fab进行ELISA。
使用P1肽(HIV-1的gp41的第649～684位氨基酸序列)包被板(Exiqonpeptide Immobilirez，10202-111-10或NUNC，439454)中的小孔并在37℃使用BSA封闭2小时。然后加入2ng/ml纯化的IgA和在37℃培育2小时。使用鼠抗-Ha抗体(克隆12CA5，Roche)或抗-His(PentaHis，Qiagen 34660)其后用辣根过氧化物酶山羊抗-鼠抗体(产品目录，H1003)进行检测。添加TMB(3，3’，5，5’-四甲基-联苯胺，Kikergaard&Perry Laboratories Inc.)作为底物进行酶反应和在添加1M磷酸后用酶标仪在450nm测量吸收值。2F5抗体作为阳性对照和在淘选后通过ELISA不识别P1的克隆作为阴性对照。
实施例5、转胞吞作用的抑制
在肠细胞系HEC-1上进行HIV-1经上皮细胞的转胞吞作用以及抗体对转胞吞作用的中和，该肠细胞系HEC-1在一个可渗透的过滤载体(孔径0.45μm)上生长7天成为紧密型的极化单细胞层而在两个独立的腔室间形成界面，上面腔室充满上皮单细胞层的顶端(管腔)表面和下面腔室充满底外侧(浆膜)表面。如在Lagaye等(J.Virol，2001，75：4780)中所述获得并制备PBMC。然后用植物血球凝激素(PhA)活化PBMCs 48小时和与HIV-1 JRCSF克隆R5或YU2培育并在感染后第7天使用。向顶端腔室中加入纯化的S-IgA(5ng/ml)并在37℃培育10分钟。为了启动病毒转胞吞作用，向顶端腔室中加入2.106 HIV-1+PBMC。HIV-1+PBMC和上皮细胞单细胞层之间的接触导致HIV-1病毒体快速出芽，其随后从上皮细胞顶端向底外侧孔进行转胞吞作用。2小时后，利用ELISA(Coulter，France或PASTEUR SANOFI，FRANCE)测定在底外侧培养基中HIV的p24蛋白以确定抗体对转胞吞作用的抑制。在不含抗体或在P1非特异Fab存在下或在对照IgA 2F5存在下，所测量的p24水平分别作为阴性对照和阳性对照，其值分别是100，98和35％。将阴性对照值作为100％的转胞吞作用和用于表示结果。
以3个独立的实验进行上述实验。
该结果使得鉴定出3个克隆，其能够抑制HIV转胞吞作用大于50％，其中一个克隆是克隆43和44(图3)。
实施例6、HIV感染的抑制
按1ng/ml的浓度使HIV-1 Lai2与已选择的Fabs在37℃预培育30min，然后在37℃与HeLa CD4+CXCR4+LTR LacZ(Dragic等，1992，J.Virol.，66：4794-4802)培育1h。通过清洗小孔两次移除未结合的病毒，然后在37℃培育36h。然后使用CPRG底物和通过比色测量法测定细胞提取物中β-半乳糖苷酶的活性从而分析细胞的HIV含量。阴性对照是使用无Fabs或在ELISA中不识别P1的非特异性Fab克隆进行的。
图3所示的结果是分别重复进行的至少两组独立实验的平均值。
该结果使得鉴定出5个克隆，其能够抑制HIV-1感染CD4+细胞大于75％或大于95％(图4)。在这些克隆中，2个克隆还可以抑制HIV转胞吞作用，它们是克隆43和44(见实施例4)。
表I：用于扩增humanα，(Fd)和K和λ的引物序列
Figure 2005800501396A00800011
Figure 2005800501396A00800021
表II：用于对噬菌体展示文库中IgA Fab核酸序列进行鉴定和测序的引物序列
Figure 2005800501396A00800022
序列表.ST25
序列表
<110>健康与医药研究学院(INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE(INSERM))
<120>具有抗HIV中和活性的抗体或其片段
<130>BR39642/CR/HG/klp
<140>PCT/IB2005/001180
<141>2005-05-02
<160>11
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>21
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(21)
<223>
<400>1
Ala Arg Asp Pro Arg Tyr Tyr Asp Ala Trp Ser Gly Pro Gln Leu Tyr
1               5                   10                  15
Tyr Tyr Met Asp Val
            20
<210>2
<211>9
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(9)
<223>
<400>2
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala Thr
1               5
<210>3
<211>8
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(8)
<223>
<400>3
Ile Ser His Asn Gly Asn Ile Glu
1               5
<210>4
<211>13
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(13)
<223>
<400>4
Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Ser Asn Ser Ala His
1               5                   10
<210>5
<211>7
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(7)
<223>
<400>5
Met Asn Ile Glu Arg Pro Ser
1               5
<210>6
<211>11
<212>PRT
<213>人类免疫缺陷病毒型
<220>
<221>链
<222>(1)..(11)
<223>
<400>6
Glu Leu Trp Gly Gly Pro Lys Leu Thr Val Pro
1               5                   10
<210>7
<211>35
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(35)
<223>
<400>7
Ser Gln Thr Gln Gln Glu Lys Asn Glu Gln Glu Leu Leu Glu Leu Asp
1               5                   10                  15
Lys Trp Ala Ser Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Thr Asn Trp Leu Trp
             20                  25                  30
Tyr Ile Lys
        35
<210>8
<211>226
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(226)
<223>
<400>8
Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser
1               5                   10                  15
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala Ile His Trp Val
            20                  25                  30
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser His
        35                  40                  45
Asn Gly Asn Ile Glu Tyr Phe Gly Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu His Met Asn Ser
65                  70                  75                  80
Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Arg
                85                  90                  95
Tyr Tyr Asp Ala Trp Ser Gly Pro Gln Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp
            100                 105                 110
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Pro Thr
        115                 120                 125
Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr Gln Pro Asp Gly
    130                 135                 140
Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe Pro Gln Glu Pro
145                 150                 155                 160
Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val Thr Ala Arg Asp
               165                 170                 175
Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr Thr Thr Ser Ser
            180                 185                 190
Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly Lys Ser Val Thr
        195                 200                 205
Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp Val Thr Val Pro
    210                 215                 220
Cys Pro
225
<210>9
<211>206
<212>PRT
<213>人类(Homo Sapiens)
<220>
<221>链
<222>(1)..(206)
<223>
<400>9
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Asp Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Ser Ala His Trp His Gln Arg Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Met Asn Ile Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Ile Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Asp Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Ser Gly Asp Glu Val Asp Tyr Phe Cys Glu Leu Trp Gly Gly Pro Lys
                85                  90                  95
Leu Thr Val Pro Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe
            100                 105                 110
Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys
        115                 120                 125
Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala
    130                 135                 140
Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys
145                 150                 155                 160
Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro
                165                 170                 175
Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu
            180                 185                 190
Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
        195                 200                 205
<210>10
<211>678
<212>DNA
<213>人类序列
<220>
<221>其它特征区
<222>(1)..(678)
<223>
<400>10
gagtctgggg gaggcgtcgt ccagcctggg cggtccctga gactctcctg tgcagcctct    60
ggcttcagcc tcagtacgta tgctatacac tgggtccgcc aggctccagg caagggactg    120
gagtgggtgg ctgttatttc tcacaacggc aacattgaat acttcggaga ctccgtgagg    180
ggacgattca gcatctccag agataattcc aaaaacacag tgtatctcca tatgaacagc    240
ctgacaactg aggacacggc tgtctattat tgtgcgagag atcctcggta ttacgatgct    300
tggagcggcc cccaacttta ctactactac atggacgtct ggggcaaagg gaccacggtc    360
accgtctcct cagcatcccc gaccagcccc aaggtcttcc cgctgagcct cgacagcacc    420
cagccagatg ggaacgtggt catcgcctgc ctggtccagg gcttcttccc ccaggagcca    480
ctcagtgtga cctggagcga aagcggacag ggcgtgaccg ccagagactt cccacccagc    540
caggatgcct ccggggacct gtacaccacg agcagccagc tgaccctgcc ggccacacag    600
tgcctagccg gcaagtccgt gacatgccac gtgaagcact acacgaatcc cagccaggat    660
gtgactgtgc cctgccca                                                  678
<210>11
<211>618
<212>DNA
<213>人类序列
<220>
<221>其它他特征区
<222>(1)..(618)
<223>
<400>11
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggacaccatc    60
tcttgttctg gaagcagtcc caacatcgga agtaattctg ctcactggca ccagcgggtc    120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat atgaatattg agcggccctc aggggtccct    180
gaccgaatct ctggctccaa gtctgactcc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg    240
tccggggatg aagttgatta tttctgtgag ttgtgggggg ggcccaagct gaccgtccca    300
ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa    360
gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg    420
gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa    480
caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag    540
tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg    600
gcccctacag aatgttca                                                  618

Claims (20)

1.一种单克隆抗体或其片段，其识别如SEQ ID NO 7所示肽序列，其中其H链可变区的互补决定簇3(CDR3)是如SEQ ID NO 1所示的肽序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其片段，其中所述H链可变区进一步包括至少一个选自CDR1和CDR2的CDR，所述CDR1和CDR2分别是如SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示的肽序列。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包括一个L链可变区，所述L链可变区包括至少一个选自CDR1、CDR2和CDR3的CDR，所述CDR1、CDR2和CDR3分别是如SEQ ID NO 4、SEQ IDNO 5和SEQ ID NO 6所示的肽序列。
4.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包括一个L链可变区，所述L链可变区包括至少一个选自CDR1、CDR2和CDR3的CDR，所述CDR1、CDR2和CDR3分别是如SEQ ID NO 4、SEQ IDNO 5和SEQ ID NO 6所示的肽序列。
5.根据上述任意一项权利要求所述的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体是IgA。
6.根据上述任意一项权利要求所述的单克隆抗体或其片段，其中所述抗体是人抗体。
7.根据上述任意一项权利要求所述的单克隆抗体或其片段，其中所述H链可变区是如SEQ ID NO 8所示的氨基酸序列和轻链可变区是如SEQ ID NO9所示的氨基酸序列。
8.根据上述任意一项权利要求所述的单克隆抗体或其片段，其具有中和HIV的活性。
9.根据权利要求8所述的单克隆抗体或其片段，其中被中和的HIV是HIV-1株系。
10.一种H链可变区，其识别如SEQ ID NO 7所示肽序列，其中所述H链可变区的CDR3是如SEQ ID NO 1所示的肽序列。
11.根据权利要求10所述的H链可变区，其中其进一步包括至少一个选自CDR1和CDR2的CDR，所述CDR1和CDR2分别是如SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示的肽序列。
12.一种重组抗-HIV抗体或其片段，其包括根据权利要求10或11所述的H链可变区。
13.一种编码上述任意一项权利要求所述的单克隆抗体或其片段的核酸序列。
14.根据权利要求13所述的核酸序列，其中所述H链可变区的序列如SEQ ID NO 10所示，和所述轻链可变区的序列如SEQ ID NO 11所示。
15.一种表达载体，其包括权利要求14所述的核酸序列。
16.一种宿主细胞，其由根据权利要求13或14所述的核酸序列或者由根据权利要求15所述的载体所转化。
17.一种药物组合物，其包括有效量的选自根据权利要求1-12中任意一项权利要求所述的抗体或其片段、根据权利要求13或14所述的核酸序列、根据权利要求15所述的载体或者根据权利要求16所述的宿主细胞的试剂作为活性剂，和适宜的载体。
18.一种根据权利要求1-12中任意一项权利要求所述的抗体或其片段、根据权利要求13或14所述的核酸序列、根据权利要求15所述的载体或者根据权利要求16所述的宿主细胞在生产意欲被用于预防和/或治疗HIV感染的药剂上的应用。
19.一种诊断组合物，其包括根据权利要求1-12中任意一项权利要求所述的抗体或其片段。
20.一种在体外检测样品HIV株系的方法，包括至少下述步骤：
a)在适合所述抗体或其片段与如SEQ ID NO7所示肽的HIV蛋白之间形成复合体的条件下，将样品与至少一种根据权利要求1-12中任意一项权利要求所述的抗体或其片段接触，和
b)检测所述复合体的存在。
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