CN101184510A - 通过给予持续释放的l-精氨酸治疗各种病症的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供使用L－精氨酸制剂(如缓释制剂)治疗各种病症的方法，包括降低甘油三酯水平、诱发热产生、体重减轻以及治疗或预防肥胖和肥胖相关症状，如糖尿病。此外，本发明提供治疗或预防其它症状(如哮喘)的方法。

Description

通过给予持续释放的L-精氨酸治疗各种病症的方法

相关申请

本申请要求2005年4月14日提交的题为“通过给予L-精氨酸缓释制剂治疗各种病症的方法”的美国申请号11/107395和2005年1月24日提交的题为“通过给予L-精氨酸缓释制剂治疗各种病症的方法”的美国申请号11/042017的优先权，后者是2004年4月28日提交的题为“L-精氨酸缓释制剂及其制备和使用方法”的PCT/US2004/013255的部分继续申请，其要求2003年10月24日提交的题为“L-精氨酸缓释制剂及其制备和使用方法”的PCT/US2003/033931的优先权，其进一步要求2002年10月24日提交的题为“治疗脑血管和心血管疾病和病症的方法和组合物”的美国临时专利申请系列号60/421,258、2003年9月29日提交的题为“治疗脑血管和心血管疾病和病症的方法和组合物”的美国临时专利申请系列号60/507,312以及2003年10月17日提交的题为“L-精氨酸缓释制剂及其制备和使用方法”的美国临时专利申请系列号60/512,035的优先权。以上所提及的各申请的全部内容特别以其全文通引用方式结合到本发明中。

发明背景

L-精氨酸是一种涉及人体生理和新陈代谢的多个领域的半-必需氨基酸。虽然精氨酸可由瓜氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸和脯氨酸重新合成，但饮食吸收的精氨酸对维持必要的血浆精氨酸水平十分关键。

L-精氨酸的重要性很大部分得自其作为一氧化氮(NO)的生物学前体的作用。的确，称为一氧化氮合酶(NOS)的酶家族从L-精氨酸合成NO。NO是内源性信使分子，其涉及心血管系统中的多种内皮组织依赖性生理效应。此外，NO对内皮组织依赖性舒张和可溶性鸟苷酸环化酶的激活、中枢和外周神经系统中的神经转移以及活化的巨噬细胞的细胞毒性都十分重要。此外，当对多种血管活性剂以及甚至自然刺激物响应时，所述内皮细胞释放一种称为内皮细胞衍生舒张因子(EDRF)(也称为内皮细胞衍生一氧化氮(EDNO))的短效血管舒张剂，其称为一氧化氮(NO)。炎症和血小板聚集的产物，如5-羟色胺、组胺、缓激肽、嘌呤和凝血酶，通过刺激NO的释放而发挥它们的全部或部分作用。舒张的内皮细胞依赖性机制在各种血管床(包括冠状循环)中十分重要。在脉管系统中，EDNO具有多种作用，其中其对血小板聚集、炎症细胞粘附和平滑肌细胞增殖具有抑制作用。尤其是EDNO是血管紧张度的重要调节剂。流动依赖性扩张，一种常用的内皮细胞功能指标，也主要通过NO介导。

发明概述

本发明部分基于L-精氨酸(例如一种L-精氨酸缓释制剂)可用于降低甘油三酯的水平的发现。另外，本发明部分基于L-精氨酸(例如一种L-精氨酸缓释制剂)可用于预防或治疗各种病症，包括肥胖、肥胖相关病症和哮喘的发现。

在一方面，本发明提供一种通过给予患者L-精氨酸(例如一种L-精氨酸缓释制剂)而在患者中降低甘油三酯水平的方法。在各实施方案中，所述方法可在患者中减低约低于100mg/dL、50mg/dL或25mg/dL的甘油三酯水平。

在一方面，本发明提供一种通过给予患者L-精氨酸(例如一种L-精氨酸缓释制剂)而在患者中诱导热产生作用(thermogenesis)的方法。

在另一方面，本发明提供一种通过给予患者L-精氨酸(例如一种L-精氨酸缓释制剂)而在患者中保持指定体重或诱导体重减轻(例如20、15、10或5磅以下)的方法。

在另一方面，本发明提供一种通过给予患者L-精氨酸(例如一种L-精氨酸缓释制剂)而在患者中治疗肥胖或肥胖相关病症(如糖尿病)的方法。

在另一方面，本发明提供一种通过给予患者一种包括L-精氨酸的缓释制剂，例如一种L-精氨酸缓释制剂，而在患者中预防或治疗哮喘的方法。

在另一方面，本发明提供一种通过给予患者一种L-精氨酸缓释制剂而在患者中预防或治疗以下疾病的方法：勃起功能障碍、女性不孕症、男性不孕症、间质性膀胱炎、人免疫缺陷病毒感染(HIV)、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、先兆子痫(preeclampsia)、烧伤和创伤性损伤、癌症、胃肠道病症(包括例如胃食管返流疾病(GERD)和括约肌运动紊乱)、早产和老年性痴呆。在另一方面，L-精氨酸的缓释制剂可用作手术期间的营养物。

在本发明以上方面的各实施方案中，所述缓释制剂包含约25％-75％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；约0.5％-5％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约5％-40％重量的羟丙基甲基纤维素；约2％-20％重量的微晶纤维素；小于约3％重量的二氧化硅；和小于约3％重量的硬脂酸镁。例如，所述制剂可包括约50％重量的L-精氨酸，其中L-精氨酸是L-精氨酸单盐酸盐；约3％-4％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约35％重量的羟丙基甲基纤维素；约10％的重量的微晶纤维素；小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅是二氧化硅胶体；和小于约1％重量的硬脂酸镁。

在本发明以上方面的另一实施方案中，所述缓释制剂包含约50％-90％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；约0.5％-5％重量的聚乙烯吡咯烷酮；和约5％-40％重量的羟丙基甲基纤维素。例如，所述制剂可包括约70％重量的L-精氨酸，其中L-精氨酸是L-精氨酸单盐酸盐；约2％-3％重量的聚乙烯吡咯烷酮；和约27％-28％重量的羟丙基甲基纤维素。

在以上方面的又一实施方案中，所述缓释制剂包含约35％-90％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；约0.5％-5％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约5％-40％重量的羟丙基甲基纤维素；约2％-20％重量的微晶纤维素；小于约1％重量的二氧化硅；例如，所述制剂可包括约51％重量的L-精氨酸，其中L-精氨酸是L-精氨酸单盐酸盐；约3％-4％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约35％重量的羟丙基甲基纤维素；约10％-11％重量的微晶纤维素；小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅是二氧化硅胶体。另外，所述制剂可包括约56％重量的L-精氨酸，其中L-精氨酸是L-精氨酸单盐酸盐；约3％-4％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约31％-32％重量的羟丙基甲基纤维素；约9％-10％重量的微晶纤维素；小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅是二氧化硅胶体。

在以上方面的再一实施方案中，所述缓释制剂包含约50％-90％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；约0.5％-10％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约5％-40％重量的羟丙基甲基纤维素；以及小于约1％重量的二氧化硅。例如，所述制剂可包括约69％重量的L-精氨酸，其中L-精氨酸是L-精氨酸单盐酸盐；约6％-7％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约24％-25％重量的羟丙基甲基纤维素；以及小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅是二氧化硅胶体

在以上各方面的还一实施方案中，所述缓释制剂包含约35％-70％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；约0.5％-10％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约40％-60％重量的羟丙基甲基纤维素；和小于约1％重量的二氧化硅。例如，所述制剂可包括约50％重量的L-精氨酸，其中L-精氨酸是L-精氨酸单盐酸盐；约4％-5％重量的聚乙烯吡咯烷酮；约45％重量的羟丙基甲基纤维素；以及小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅是二氧化硅胶体。

在其它方面，本发明提供胶囊剂、片剂和食物棒(bars)，其包含带有L-精氨酸的缓释制剂(例如L-精氨酸的缓释颗粒剂)以及红色酵母米提取物(red yeast rice extract)。在各实施方案中，所述食物棒用于在患者中降低甘油三酯、维持指定体重或诱导体重减轻、诱导热产生作用、治疗或预防肥胖病或与肥胖病有关的病症(如糖尿病)、用于治疗或预防哮喘或者用于增加一氧化氮。在一特别的实施方案中，所述食物棒还包括辅酶Q10。

本发明的其它特征和优点将从下列详述的说明书和权利要求书中表现出来。

附图简述

图1是描述包含L-精氨酸和辛伐他汀的制剂的释放模式的曲线图。

图2是用L-精氨酸和辛伐他汀处理的小鼠大脑与未处理小鼠大脑中梗塞面积的NMR影像的照片。

图3是描述用L-精氨酸、辛伐他汀和L-精氨酸与辛伐他汀两者处理的小鼠中梗塞体积的柱状图。

图4是描述用L-精氨酸和不同水平的辛伐他汀处理的小鼠中总梗塞体积的柱状图。

图5是描述L-精氨酸缓释片的制备方法的流程图。

图6是描述L-精氨酸缓释片的制备方法的流程图。

图7是比较L-精氨酸缓释制剂性能的柱状图。

图8是在人体中给予辛伐他汀，同时伴有或不伴有本发明的L-精氨酸缓释组合物对内皮细胞依赖性血管舒张的影响的比较图。

图9是概述在人体中给予辛伐他汀和本发明的L-精氨酸缓释组合物对胆固醇水平的协同效应的图。

图10是描述与L-精氨酸的即释制剂比较，本发明L-精氨酸缓释制剂的释放方式的曲线图。

图11是描述本发明缓释制剂的药物代谢动力学的曲线图。

图12是描述在患者中给予的本发明缓释制剂中L-精氨酸与ADMA的比率的图。

发明详述

本发明提供通过给予患者L-精氨酸而在患者中降低甘油三酯水平、诱发热产生、维持指定体重或诱导体重减轻以及治疗或预防哮喘、肥胖和肥胖相关病症(如糖尿病)的方法。在一实施方案中，所述L-精氨酸是L-精氨酸的缓释制剂。本发明部分基于L-精氨酸(尤其是缓释的L-精氨酸)可在患者中降低甘油三酯的水平的这种发现。本发明部分基于L-精氨酸(尤其是缓释的L-精氨酸)具有热产生作用，由此可用于诱导体重减轻、保持目前体重和/或预防或治疗肥胖和肥胖相关病症的这种发现。

本发明还提供通过给予患者L-精氨酸的缓释制剂而治疗和预防至少一种下列疾病和病症的方法：勃起功能障碍、女性不孕症、男性不孕症、间质性膀胱炎、人免疫缺陷病毒感染(HIV)、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、先兆子痫、烧伤和创伤性损伤、癌症、胃肠道病症(包括例如胃食管返流疾病(GERD)和括约肌运动紊乱)、早产和老年性痴呆。在另一方面，L-精氨酸的缓释制剂可用作手术期间的营养物。

此外，本发明提供一种L-精氨酸缓释制剂以及制备具有最佳释放方式的组合物的方法。另外，所述制剂和制备方法使得组合物适合压缩，但不过度的易碎。

在一实施方案中，本发明方法中使用的制剂包含至少一种缓释剂(对于本发明的目的，控制释放和缓释释放可以互换使用)。在另一实施方案中，所述L-精氨酸被慢慢释放至患者的系统中。L-精氨酸的缓慢释放确立血浆中L-精氨酸的一种药代动力学模式，其在一个延长时期内提供了一种产生NO所需的伴有基本上恒量提供的L-精氨酸的NOS。因此，所述制剂可慢慢溶于体内，然后在一定时期内释放基本上均一量的L-精氨酸，使得对患者达到治疗效果。

本发明还提供补充有L-精氨酸的食物。该食物优选为棒状形式，如一种处方健康食物棒。与添加到单一片剂中相比，食品的用途能够提供大量L-精氨酸。因此，本发明提供一种可提供1g以上L-精氨酸以及其它药物(如果需要)的棒。在一实施方案中，向食物棒中加入作为一种即释制剂的L-精氨酸，如L-精氨酸的即释颗粒剂。在另一实施方案中，所述棒包括一种缓释制剂，其包括例如L-精氨酸的缓释颗粒剂。在另一实施方案中，该棒还包含其它药物，如HMG-CoA还原酶抑制剂，如辛伐他汀或红酵母米提取物。

定义

在进一步说明本发明之前，为方便起见，在此集中本说明书、实施例和权利要求书中所用的某些术语。

除另有说明，本发明所用术语“患者”包括哺乳动物。术语“哺乳动物”包括但不限于狗、猫、牛、马、猪和人。

本发明所用术语“治疗”、“处理”等指对患者施用或给予治疗剂或制剂、或者对患者的离体组织施用或给予治疗剂或制剂，所述患者患有疾病或病症、疾病或病症的症状或者对某种疾病或病症具有易患病体质，其目的是治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、预防、改善、延迟所述疾病或病症和/或病情的发病，减慢所述疾病或病症的进展，改善或影响所述疾病或病症、疾病或病症的症状或者对疾病或病症和/或病情的易患病体质。

本发明所用术语“血管疾病”或“血管病症”通常指血管的疾病或病症，包括但不限于心血管、脑血管和外周血管疾病或病症。心血管疾病指心脏的血管疾病。参见，例如Kaplan，R.M.等“Cardiovascular diseases”in Health and Human Behavior，pp.206-242(McGraw-Hill，New York 1993)。心血管疾病通常是数种形式中的一种，包括，例如血压过高(也称为高血压)、冠心病、中风和风湿性心脏病。与心血管疾病有关的疾病和病症，如心绞痛和充血性心力衰竭，也意欲包括该术语中。外周血管疾病或病症指心脏以外的任何血管疾病。例如，外周血管疾病可指传送血液至腿和手臂肌肉的血管狭窄。脑血管疾病指影响血管为脑中供应血液的能力的疾病。

术语“动脉粥样硬化”包括相关医学领域中从业医生公认和了解的血管疾病和紊乱以及病征。动脉粥样硬化性心血管疾病、冠心病(也称为冠状动脉疾病或缺血性心脏病)、脑血管疾病和外周血管疾病都是动脉粥样硬化的临床特征，因此都囊括在术语“动脉粥样硬化”和“动脉粥样硬化疾病”之中。

本发明所用术语“肥胖”指患者体重超出医学上推荐的限度(例如，其中体重指数(BMI)大于NIH/WHO BMI指引(其通过引用结合到本文中)所定义的用于描述健康个体的值)的症状。

本发明所用术语“肥胖相关病症”是由肥胖引起的或相关的(例如通过生化或分子相关)或者是由体重增加和/或临床肥胖症之前的相关生物学过程引起的或相关的任何疾病或病症。术语“治疗”或“处理”患者的与肥胖相关的病症指在患有该病症或面临患有该病症风险的患者中减轻或缓解该疾病。优选将该疾病或者发展为该疾病的可能性最适降低到一种程度，即患者不再患有或者不再发展为该疾病和/或不适和/或与该疾病相关的改变功能的和有害的症状。

本发明所用术语“哮喘”是本领域公认的，通常包括其中出现在患者肺内呼吸道的平滑肌过度收缩的状态。

本发明所用术语“勃起功能障碍”是本领域公认的，一般指阴茎的海绵体组织以及相关组织的某些疾病，其产生性无能，即不能达到性功能勃起。

本发明所用术语“热产生”是本领域公认的，一般指最低限度的或无ATP产生的脂肪酸的氧化作用。热产生一般与体重减轻或者预防体重增加有关。

当用于描述将两种或两种以上化合物给予患者时，本发明所用术语“联合给药”或者“联合给予”指可以通过相同或不同的途径，将各化合物同时(例如以混合物形式)或连续给予，从而及时使各药理作用重叠。除另有详细说明，当应用至少两种化合物给药时，本文所用的术语“连续”指给予各化合物，以便及时使得各药理作用重叠。在某些实施方案中，将各药物基本上同时给予。“基本上同时”指给予患者本发明制剂后，即刻给予至少一种其它的药物，使得各药物可以发挥累加的或者甚至协同的作用，例如，但不限定于增加NOS活性、NO产生或者血管舒张。

发明所用术语“NO的前体”包括天然NO的任何底物前体，如L-精氨酸。

本发明所用术语“天然NO”指通过L-精氨酸的生物转化或者L-精氨酸依赖性途径产生的一氧化氮。可将“内皮衍生的松弛因子(EDRF)”或“内皮衍生的一氧化氮(EDNO)”与“天然NO”互换使用。

本发明所用术语“L-精氨酸”指用作NOS的底物的L-精氨酸及其所有的生化等价物，例如盐酸L-精氨酸、前体及其碱性形式，其结果使NO的产生增加。该术语包括L-精氨酸的药学上可接受的盐。还包括含L-精氨酸的肽，如聚(L-精氨酸)和鱼精蛋白。

术语“药学上可接受的盐”指由药学上可接受的非毒性酸或碱(包括无机酸和碱以及有机酸和碱)形成的盐。适合的非毒性酸包括无机和有机酸，如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、氢氯酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双氢萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选的是氢氯酸、氢溴酸、磷酸和硫酸，最特别优选的是氢氯酸盐。

由于本发明方法中使用的L-精氨酸可以是游离碱和/或盐酸，盐可以由药学上可接受的非毒性酸或碱(包括无机和有机酸或者无机和有机碱)制备。这些盐可包含任何下列阴离子：乙酸根、苯磺酸根、苯甲酸根、樟脑磺酸根、柠檬酸根、富马酸根、葡糖酸根、氢溴酸根、氢氯酸根、乳酸根、马来酸根、扁桃酸根、粘酸根、硝酸根、双氢萘酸根、磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根、溴离子、氟离子、碘离子、硼酸根、次溴酸根、次氯酸根、亚硝酸根、连二次硝酸根(hyponitrite)、重硫酸根(disulfate)、亚硫酸根、磺酸根、二磷酸根、亚磷酸根、膦酸根、二膦酸根、高氯酸根、过次氯酸根(perchlorite)、草酸根、丙二酸根、碳酸根、碳酸氢根、甲苯磺酸根、高锰酸根、锰酸根、丙醇酸根(propanolate)、丙酸根、乙二醇酸根(ethandioate)、丁酸根、丙醇盐、铬酸根、重铬酸根、硒酸根、原硅酸根、硅酸根、高锝酸根(pertechnetate)、锝酸根(technetate)、二甲醇酸根、二甲醇盐、硫氰酸根、氰酸根、异氰酸根、1，4-环己烷二硫羟酸根(dithiolate)、氧化丁酸根、3-亚磺基(sulfido)环丁烷-1-磺酸根、2-(2-羧基(carboxylato)乙基)-环己烷羧酸根、2-氨基-4-(甲硫基)-丁酸盐根等。特别优选的是苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氯酸盐和硫酸盐。这些盐还可含有下列阳离子：铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌、苄星青霉素、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(meglumine)和普鲁卡因。所述阳离子优选是氢。

本发明所用术语“激动剂”或“eNOS或cNOS的激动剂”指能刺激底物生物转化的试剂，如L-精氨酸生物转化为NO。eNOS或cNOS的激动剂包括例如HMG-CoA还原酶抑制剂。“HMG-CoA还原酶(3-羟基-3-甲基戊二酰(glutaryl)-辅酶A)”是一种微粒体酶，其在胆固醇生物合成中催化限速反应速率。“HMG-CoA还原酶抑制剂”抑制HMG-CoA还原酶。HMG-CoA还原酶抑制剂被称为“他汀类药物”。

目前本领域中有大量通过天然或合成获得的化合物，其抑制HMG-CoA还原酶，被称之为“他汀类药物”，其构成了实现本发明使用的药物类别。实例包括，但不限于那些商业上获得的药物，如辛伐他汀(美国专利号4,444,784)、洛伐他汀(美国专利号4,231,938)、帕伐他汀钠(美国专利号4,346,227)、氟伐他汀(美国专利号4,739,073)、阿托伐他汀(美国专利号5,273,995)、西立伐他汀、罗苏伐他汀和大量其它的药物，如康帕丁、达尔伐他汀、米法斯丁、fluindostatin、帕伐他丁、HR-780、GR-95030、CI 980、BMY 22089、BMY 22566以及以下专利中公开的那些，例如美国专利号5,622,985、美国专利号5,135,935、美国专利号5,356,896、美国专利号4,920,109、美国专利号5,286,895、美国专利号5,262,435、美国专利号5,260,332、美国专利号5,317,031、美国专利号5,283,256、美国专利号5,256,689、美国专利号5,182,298、美国专利号5,369,125、美国专利号5,302,604、美国专利号5,166,171、美国专利号5,202,327、美国专利号5,276,021、美国专利号5,196,440、美国专利号5,091,386、美国专利号5,091,378、美国专利号4,904,646、美国专利号5,385,932、美国专利号5,250,435、美国专利号5,132,312、美国专利号5,130,306、美国专利号5,116,870、美国专利号5,112,857、美国专利号5,102,911、美国专利号5,098,931、美国专利号5,081,136、美国专利号5,025,000、美国专利号5,021,453、美国专利号5,017,716、美国专利号5,001,144、美国专利号5,001,128、美国专利号4,997,837、  美国专利号4,996,234，美国专利号4,994,494、美国专利号4,992,429、美国专利号4,970,231、美国专利号4,968,693、美国专利号4,963,538、美国专利号4,957,940、美国专利号4,950,675、美国专利号4,946,864、美国专利号4,946,860、美国专利号4,940,800、美国专利号4,940,727、美国专利号4,939,143、美国专利号4,929,620、美国专利号4,923,861、美国专利号4,906,657、美国专利号4,906,624和美国专利号4,897,402，以上各公开内容均结合到本发明中作为参考。另外，可以使用红酵母米提取物。虽然不希望受任何具体理论的束缚，但红酵母提取物可通过洛伐他汀(mevinolin)的作用抑制HMG-CoA还原酶，洛伐他汀化学上等同于罗伐他丁，与辛伐他汀类似。在本发明的方法中可以使用能抑制HMG-CoA还原酶的类别化合物的任何其它成员。在本发明的方法中，还可以将两种或两种以上的HMG-CoA还原酶抑制剂联合使用。

本发明所用术语“eNOS活性”指细胞能由底物L-精氨酸产生NO的能力。可通过大量不同的方法实现eNOS活性的增加。例如，eNOS蛋白的量的增加或者该蛋白活性的增加(同时保持恒定的蛋白水平)可致使“活性”增加。有效蛋白量的增加可起因于，例如但不限定于eNOS基因的转录的增加、eNOS mRNA翻译的增加、eNOSmRNA稳定性的增加、eNOS的激活或者eNOS蛋白降解的降低。

细胞或组织中eNOS活性可根据各种不同方法测定。一种直接的测量方法是测定eNOS存在的量。另一种直接的测量方法是在特定条件(如组织的生理条件)下，测定通过eNOSL-精氨酸转化为左旋瓜氨酸的量或者通过eNOS而产生的一氧化氮的量。eNOS活性还可经间接方法测定，例如通过测定mRNA半衰期(一种上游指标)或者通过对NO(一种下游指标)存在的显型性反应(phenotypic response)。本领域中使用的一种表型性测定法是测定对乙酰胆碱响应的内皮依赖性的舒张，该响应受eNOS活性的影响。可使用NO计量器测定样本中存在的NO水平。对于本领域普通技术人员而言，所有以上技术都是熟知的。

本发明的方法，即通过引起NO产生的增加，不仅允许eNOS活性的正常基线水平的重建，还使得这种活性增加至正常基线水平之上。正常基线水平是正常对照组中活性的量，其受控于年龄并且没有表明内皮细胞NOS活性(如低氧条件、高脂血症等)变更的症状。而实际的水平将取决于所选择的特定年龄组以及用于评估活性的具体方法。在异常情况下，内皮细胞NOS活性(和NO产生)被压低在正常水平以下。因此，本发明的制剂不仅能恢复这种异常状态下NO产生的正常基线水平，而且还能增加内皮细胞NOS活性(以及NO产生)至远高于正常基线水平。

术语“载体”指用于制备药用组合物的混合物的稀释剂、赋形剂等。

本发明所用术语“剂型”指一种药用组合物，其包含给予患者的适当量的活性成分，例如以单剂量或多剂量给予患者。

本发明所用单位“mg/Kg”指每千克患者体重药物的毫克量。

除非另有说明，本发明所用术语“半衰期”指有机体的血浆中的药物浓度降低至给药时药物浓度的大约一半时所需要的时间。

除非另有说明，本发明所用术语“立即释放”指无外来因素延迟一或多种药物的体外释放。

本发明所用的、在此可互相互换使用的术语“药用组合物”或“药用制剂”指包含药学上可接受的成分的组合物。

本发明所用术语“药学上可接受的”指制剂的类型，其是经联邦或州政府管理机构考察并可能批准的或者在美国药典或其它普遍公认的药典中列出的用于动物，更特别用于人体的制剂。

除非另有说明，本发明所用术语“药学上可接受的载体”指不干扰活性成分的生物活性的效能并且对所给药的患者没有毒性的载体介质。这种用于药学上的活性制剂的介质和试剂的用途在本领域是熟知的。除与所述活性成分不相容的任何常规介质或试剂之外，其在本发明方法中使用的制剂中的用途都涵盖在内。

本发明所用术语“药学上可接受的盐”指由药学上可接受的非毒性酸(包括无机酸和有机酸)制备的盐。

除非另有说明，本发明所用术语“缓慢释放”被定义为一或多种药物的延长释放方式，使得所述各药物在一定时间期内释放。缓释制剂是一种具有释放动力学的制剂，其使所述药物的血清可测水平持续一定的时期，该时期长于静脉注射后或者口服给予即释口服剂型后的时间。缓释制剂在短暂给药后给出药物的生物半衰期后的持续效果；降低可能呈现药物的Cmax-依赖性副作用的副作用；并通过减少给药的次数而改善顺从性。对于本发明的目的，持续释放、缓慢释放、控制释放、延长释放、延续释放、控释和延长释放可以互换使用。

本发明所用术语“盐或复合物”用于描述一种化合物或组合物，其包含通过至少一种类型的相互作用(包括但不限于范德华力、离子和/或氢键)而结合的两个或两个以上的化学部分。盐或复合物可以以固体或液体形式存在。

本发明所用术语“重量百分比”，当用于描述制剂中成分的量时，指基于制剂中所有成分的重量计的某特定成分的重量。

在下列各小节中进一步详细说明本发明的各个方面：

I.制型

本发明的方法包括通过给予患者L-精氨酸而在患者中保持指定体重或诱导体重减轻的方法、治疗和预防哮喘、肥胖和肥胖相关病症(如糖尿病)的方法。本发明的方法还包括通过给予患者L-精氨酸而诱导热产生的方法。在一实施方案中，所述L-精氨酸是L-精氨酸的缓释制剂。另外，本发明的方法包括通过给予患者L-精氨酸的缓释制剂而治疗和预防本文所述的其它病症的方法。

在一实施方案中，本发明方法中使用的制剂包含治疗有效量的L-精氨酸和至少一种缓释剂。为了制剂的给药、防腐、美观等，所述制剂还可包括其它必要的成分，以改变该制剂。在一实施方案中，本发明的制剂还包括粘合剂、填充剂和润滑剂。在一优选的实施方案中，所述制剂包含缓释的L-精氨酸制剂，其包含L-精氨酸、粘合剂、一或多种缓释剂、助流剂和释放剂或润滑剂。所述制剂还可包含填充剂和/或压缩剂。本发明的缓释制剂具有特别优点，原因是与即释药物或可商业获得的缓释药物所需的剂量相比，它们释放的方式允许较低剂量的给药，即可在体内保持相同的药物水平。

L-精氨酸可由技术熟练的执业医生熟知的许多来源经市售获得。例如，USP级别的L-精氨酸可由各种来源经市售获得，包括Sigma-Aldrich(Milwaukee，WI)。适合的精氨酸和精氨酸衍生物化合物包括，但不限于精氨酸盐，如精氨酸HCl、天冬氨酸精氨酸或烟酸精氨酸。其它精氨酸化合物或衍生物可选自包括精氨酸的二肽，如丙氨酰-L-精氨酸(ALA-ARG)、缬氨酰(valiny)-L-精氨酸(VAL-ARG)、异亮氨酰-L-精氨酸(ISO-ARG)和亮氨酰-L-精氨酸(LEU-ARG)，和包括精氨酸的三肽，如精氨酰-赖氨酰-谷氨酸(ARG-LYS-GLU)和精氨酰-甘氨酰-L-精氨酸(ARG-GLY-ARG)。L-精氨酸优选是一盐酸L-精氨酸。

在一实施方案中，L-精氨酸的存在量约为该制剂的10％-90％重量。在另一实施方案中，L-精氨酸的存在量约为该制剂的25％-75％重量。在各实施方案中，L-精氨酸存在的量约为50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90％。在各具体的实施方案中，L-精氨酸存在的量约为50、51、56、69或70％。以上各范围内的所有范围都涵盖在本发明范围之内。

在某些实施方案中，所述制剂可含有小于约7gL-精氨酸，例如小于约6g、约5g、约4g、约3g、约2g或约1gL-精氨酸。例如，所述制剂可含有约1g-约7g、约2g-约6g或者约3g-约5g的L-精氨酸。例如，还包括使用任何上述值的组合作为上和/或下限的值的范围。所述制剂优选含有小于约4g的L-精氨酸。在不冒受限于理论的风险下，但L-精氨酸的缓释制剂允许使用较小的剂量，即L-精氨酸的总量可以是较低的，但仍能达到治疗效果。

在各特别的实施方案中，本发明的制剂还可包含瓜氨酸或其生物等价物。瓜氨酸是L-精氨酸的生物前体，即大多数内源性精氨酸源于肾内瓜氨酸的处理过程。瓜氨酸可任选以缓释形式存在。

一或多种缓释剂的用途是使L-精氨酸在一段延长时间期间内缓慢释放。例如，所述缓释剂可以以一定速率释放L-精氨酸，该速率不引起加剧与血流中L-精氨酸的高或低浓度有关的副作用的浓度峰或谷。适合于本发明方法中使用的制剂的缓释剂包括水合剂，如纤维素，其当与水性环境接触时部分水合，形成一种胶状屏障，该屏障阻止正被水合剂包被的药物溶解。换言之，所述缓释剂对水形成一种临时的屏障，使得水慢慢被吸收到制剂中，从而制剂吸收水分，随后以基本上比无缓释剂的制剂慢的速率释放出活性成分，例如L-精氨酸。另外，所述缓释剂以一定的粒度存在，当掺入胶囊或压紧或压缩成片、丸或软胶囊时，水慢慢渗入该结构内。

在一实施方案中，所述缓释剂包括但不限于纤维素醚产物、聚甲基甲基丙烯酸酯或者聚乙烯醇。在另一实施方案中，缓释剂包括纤维素，包括但不限于甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或其组合。在一优选的实施方案中，所述缓释剂包括一或多种羟丙基甲基纤维素。适合的缓释剂可由The Dow Chemical Company市售提供，商标为METHOCEL和ETHOCEL。在一优选的实施方案中，所述缓释剂是METHOCELK100 M CR Premium和/或METHOCELE 4M CR Premium。

所述缓释剂一般以足以在所要求的时间期间内释放所述活性成分(如L-精氨酸)的量存在。在一实施方案中，所述缓释剂以制剂的约5％-40％重量的量存在。在另一实施方案中，所述缓释剂以约5％-75％重量的量存在。在再一实施方案中，所述缓释剂以制剂的约15％-50％重量的量存在。在各实施方案中，所述缓释剂的存在量约为5％-40％，例如约24％-25％，约27％-28％，约31％-32％以及约35％。在其它各实施方案中，所述缓释剂的存在量约为40％-60％，例如约45％。以上各范围内的所有范围都涵盖在本发明范围之内。

在一实施方案中，如图1中所示，所述缓释剂在10小时期间内释放L-精氨酸。在一实施方案中，所述制剂在约4小时至约24小时期间内基本均匀地释放L-精氨酸。在另一实施方案中，本发明的制剂在约8小时至约24小时期间内基本均匀地释放L-精氨酸。在再一实施方案中，L-精氨酸的缓释制剂在约12小时至约48小时期间内基本均匀地释放L-精氨酸。

在另一实施方案中，本发明方法中使用的制剂以提供一种药代动力学模式(profile)的方式释放L-精氨酸，在该模式中，半衰期(T_1/2)和T_max足以保持L-精氨酸在一基本恒定的水平。换言之，在一实施方案中，本发明的缓释制剂释放L-精氨酸，以便达到循环的L-精氨酸的稳态，并保持恒量。在一实施方案中，所述药代动力学模式是使T_1/2未大约4-12小时，而T_max是大约4小时。在再一实施方案中，T_1/2是大约4-8小时，而T_max是大约4小时。在再一实施方案中，T_1/2是大约6-9小时，而T_max是大约2小时。

所述制剂中使用的粘合剂包括本领域技术人员常规已知的那些。粘合剂包括但不限于糖类，如乳糖、蔗糖、葡萄糖、右旋糖和糖蜜；天然和合成树胶，如阿拉伯胶、瓜尔胶、藻酸钠、角叉菜提取物、panwar胶、印度胶；其它粘合剂包括聚氧化乙烯和聚乙二醇的混合物、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸、乙基纤维素、微晶纤维素、卡波姆、玉米朊(zein)、淀粉、糊精、麦芽糖糊精、明胶、预胶凝淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚维酮及其混合物。在一优选的实施方案中，粘合剂为聚维酮均聚物。

在一实施方案中，粘合剂以小于制剂的大约20％重量的量存在。在各实施方案中，粘合剂的存在量约为0.5％-10％，例如约0.5％-5％，约2％-3％，约3％-4％，约4％-5％，约5％-6％，约6％-7％，约7％-8％，约8％-9％，约9％-10％。以上各范围内的所有范围都涵盖在本发明范围之内。

在一优选的实施方案中，缓释的L-精氨酸的制剂还包括助流剂。助流剂可以是任何已知USP级的助流剂，包括例如二氧化硅。在一优选的实施方案中，助流剂是胶体二氧化硅。

在一实施方案中，助流剂以小于制剂的约3％重量存在。在另一实施方案中，助流剂以小于制剂的约2％重量存在。在一优选的实施方案中，助流剂以小于制剂的约1％重量存在。

制剂中可用的填充剂包括本领域技术人员通常已知的那些。典型的填充剂包括，但不限于糖类，如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和山梨醇、乳清、磷酸氢钙、磷酸钙、硫酸钙及其混合物。其它填充剂包括，但不限于纤维素制品，如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮及其混合物。微晶纤维素也可发挥压缩剂和填充剂的功能。在一优选的实施方案中，所述填充剂/压缩剂是微晶纤维素。所述微晶纤维素更优选是The Dow ChemicalCompany所售的指定商品AVICELPH 102。

在一实施方案中，填充剂以小于制剂的约50％重量存在。在另一实施方案中，填充剂以小于制剂的约2％-20％重量存在，包括约8％-9％，约9％-10％，约10％-11％，约11％-12％以及约12％-13％重量的制剂。在一优选的实施方案中，填充剂以制剂的约10％重量存在。以上各范围内的所有范围都涵盖在本发明范围之内。

可加入辅料以增加制剂中存在的固体的量。在用于本发明目的所发现的辅料中，常组合应用的为磷酸钠或钾、碳酸钙、磷酸钙、氯化钠、柠檬酸、酒石酸、明胶和糖类，如葡萄糖、蔗糖、乳糖、山梨醇、肌醇、甘露醇和葡聚糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物，如聚乙二醇。除在此提及的那些外，其它为本领域技术人员熟知的。

可在制剂中使用的释放剂或润滑剂包括本领域技术人员通常已知的那些。可选择润滑剂使得确保营养素的最佳吸收和利用。典型的润滑剂包括但不限于硬脂酸盐、硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸钙、硬脂酸、氢化植物油(例如氢化棉子油)、硬脂酰富马酸钠、棕榈酰硬脂酸甘油酯(glyceryl palmitostearate)、甘油二十二烷酸酯、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、矿物油、滑石粉及其混合物。在一优选实施方案中，润滑剂是硬脂酸镁。在一优选实施方案中，润滑剂是硬脂酸镁。

在一实施方案中，润滑剂的以小于制剂的约20％重量存在。在另一实施方案中，润滑剂以制剂的约2％-20％重量存在。在一优选的实施方案中，润滑剂以制剂的约10％重量存在。

崩解剂包括但不限于单独的柠檬酸或者柠檬酸与下列物质的联合使用：碳酸氢盐、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉、预胶凝淀粉、微晶纤维素、藻酸、安伯莱特离子交换树脂、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、羧甲基纤维素钠、琼脂、其盐(如藻酸钠)、Primogel及其混合物。

压缩剂能使得制剂被定型为片剂、锭剂、软胶囊或其它供固体形式给药的形式。在一实施方案中，压缩剂能使得制剂被定型为片剂、锭剂或软胶囊。压缩剂包括但不限于微晶纤维素、硬脂酸镁、蜡、树胶、celleusics、硬脂酸盐或其组合。在一优选的实施方案中，压缩剂是微晶纤维素。

在一实施方案中，压缩剂以制剂的约0.01％至约5％重量的量存在。在另一实施方案中，压缩剂以约0.5％至约3％的量存在。在另一实施方案中，压缩剂以制剂的约1％至约2％重量的量存在。

在一实施方案中，L-精氨酸制剂包括单位剂量的L-精氨酸，该剂量对于约5mg/Kg至约40mg/Kg患者体重是足够的。在另一实施方案中，L-精氨酸制剂包括单位剂量的L-精氨酸，该剂量对于约20mg/Kg至约25mg/Kg是足够的。

在一实施方案中，可将HMG-CoA还原酶抑制剂(如红酵母米提取物，一种天然来源的洛伐他汀)与所述L-精氨酸制剂一起给予。例如，可将包括L-精氨酸的缓释制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂的缓释制剂(由Merck&Company，Inc.(Rahway，NJ)市售提供)或者包含L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂两者的缓释制剂给予患者。在一实施方案中，本发明包括包含L-精氨酸的制剂，可将L-精氨酸与至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂同时或顺次给予，其中该制剂在一定延长时期内以基本恒定的浓度释放L-精氨酸，而所述HMG-CoA还原酶抑制剂以即释制剂形式存在。在另一实施方案中，本发明包括包含高浓度且为缓释制剂形式的L-精氨酸的制剂，其中该药代动力学模式为零级释放动力学(即随时间的线性释放速率)。可将两类药物的释放特性进行改良，以提供允许适合于每日一次单一剂量单位的组合用药的释放方式。

在一特定实施方案中，L-精氨酸和HMG-CoA还原酶抑制剂都处于一个缓释制剂中。HMG-CoA还原酶抑制剂的量可根据制剂中存在的特定抑制剂而变化，原因是某些抑制剂比其它抑制剂更有效。例如，罗苏伐他汀可以以每片约0.1mg-0.8mg的量存在，辛伐他汀可以以每片约10mg-80mg的量存在，和/或红酵母米提取物可以以约1mg-80mg的量存在。本领域技术人员将能够根据所使用的具体抑制剂来确定治疗的有效量。在一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂是辛伐他汀，其以每Kg患者体重约0.5mg-3mg的充足的单位剂量存在。在另一实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂是辛伐他汀，其以每Kg患者体重约1.2mg-1.4mg的充足的单位剂量存在。由于给予带有HMG-CoA还原酶抑制剂的L-精氨酸缓释制剂还能增加所述HMG-CoA还原酶抑制剂(如辛伐他汀)的效能，因此，使用本发明的制剂还能在具有等同有益作用下降低HMG-CoA还原酶抑制剂的剂量。

在一具体实施方案中，本发明制剂还可包括辅酶Q₁₀。辅酶Q₁₀(也称为CoQ₁₀、Q₁₀、维生素Q₁₀、泛醌或癸稀醌(ubidecarenone))是一种体内自然产生的化合物。细胞利用辅酶Q₁₀产生细胞生长和维持所需要的能量。体内还可利用其作为抗氧剂。他汀类药物在所述甲羟戊酸途径中合成胆固醇之前抑制酶HMG-CoA还原酶。使用该同一途径合成基本的生化辅酶Q₁₀。因此，对他汀类药物所推测的主要副作用是降低辅酶Q₁₀水平，导致对心脏和骨骼肌的潜在性伤害。该作用在细胞中最为显著，其具有高的代谢率，例如肌肉细胞和神经细胞。因此，提供辅酶Q₁₀将用于弥补该酶的缺失。

本发明方法中使用的制剂可包含常规制药配制技术的药用载体。根据口服给药所要求的制剂的形式，载体可采用多种形式。在制备口服剂型的制剂时，可使用任何常用的药用介质。最优选的口服固体制剂是片剂和软胶囊剂。另外，可将本发明的制剂加入到胶囊中。在该实施方案中，可将缓释的L-精氨酸颗粒装填到胶囊中。

由于易于给药，片剂和胶囊剂代表最适合的口服单位剂量形式，其中使用固体药用载体。片剂和胶囊剂可在不同结构的相同的片剂或胶囊中含有L-精氨酸成分。结构包括一种两半部分的片剂或胶囊、包裹第二种药的一种剂型、一种成分在另一成分中的分散液、两种成分混合的颗粒剂等。如果要求，可将片剂或胶囊通过标准水性或非水性技术包衣。

本发明方法中使用的制剂可包含其它药学上可接受的成分，如本领域通常使用的那些。参见Remington：the Science & Practice ofPharmacy，by Alfonso R.Gennaro，20th ed.，Williams & Wilkins，2000。本发明方法中使用的制剂中所用的其它成分包括但不限于水、乙二醇、油类、醇类、淀粉、糖、稀释剂、崩解剂、防腐剂、赋形剂、润滑剂、崩解剂、稀释剂、载体、稳定剂、着色剂、矫味剂及其组合。适合的稀释剂的实例包括水、乙醇、多元醇、植物油、可注射有机酯(如油酸酯)及其组合。制剂还可含有辅助剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。预防微生物的作用可通过各种抗菌剂和抗真菌剂保证，包括但不限于尼泊金类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。还可要求包括等渗剂，包括但不限于糖类、氯化钠等。

在本发明的另一实施方案中，还可将所述各成分与至少一种其它药物联合给予。药物分类的实例包括：肾上腺素能药；肾上腺皮质类固醇；肾上腺皮质抑制剂；醛甾酮拮抗剂；氨基酸；氨解毒剂；蛋白同化剂(anabolic)；强壮剂；止痛剂；雄激素；麻醉剂；厌食剂；拮抗剂；垂体前叶抑制剂；驱虫剂；抗痤疮剂；抗肾上腺素能药；抗过敏剂；抗阿米巴药；抗雄激素；补血药；抗心绞痛药；抗焦虑药；抗关节炎药；止喘药；抗动脉粥样硬化药；抗菌剂；防胆石形成药；抗胆石形成剂；抗胆碱能药；抗凝血剂；抗球虫药；抗惊厥剂；抗抑郁剂；抗糖尿病剂；止泻剂；抗利尿剂；止吐剂；抗癫痫剂；抗雌激素；抗纤维蛋白溶解剂；抗真菌药；抗青光眼剂；抗血友病药；止血药；抗组胺剂；抗高血脂药；抗高脂蛋白血症剂；抗高血压药；抗感染药；抗炎药；抗角质化药；抗疟药；抗微生物剂；抗偏头痛剂；抗有丝分裂剂；抗霉菌剂；止恶心药；抗肿瘤剂；抗中性白细胞减少症药；抗强迫症药；抗寄生物药；抗震颤麻痹药；抗蠕动药物；抗肺囊虫药；抗增殖剂；抗前列腺肥大剂；抗原虫药；止痒剂；抗精神病药物；抗风湿剂；抗血吸虫药；抗皮脂溢剂；抑制分泌剂；镇痉剂；抗凝血剂；止咳剂；抗溃疡剂；抗尿石症剂；抗病毒剂；食欲抑制剂；良性前列腺增生治疗剂；血糖调节剂；骨再吸收抑制剂；支气管扩张药；碳酸酐酶抑制剂；心脏抑制药；心脏保护剂；强心药；心血管药物；利胆剂；胆碱能药；胆碱酯酶失活剂；抗球虫药；认知辅助剂；镇静剂；利尿剂；多巴胺能药；杀体外寄生虫药；催吐剂；酶抑制剂；雌激素；溶解纤维蛋白剂；荧光剂；游离氧自由基清除剂；胃肠蠕动效应物；糖皮质激素；促性腺物质；毛发生长刺激物；止血剂；组胺H2受体拮抗剂；激素；降血胆固醇剂(hypocholesterolemic)；降血糖药；降血脂剂；降压剂；显像剂；免疫剂；免疫调节剂；免疫调节剂；免疫促进剂；免疫抑制剂；阳萎治疗辅助剂；角质层分离剂；LNRII激动剂；肝病治疗剂；黄体溶解素；心理作业增强剂；情绪调节剂；粘液溶解剂；粘膜保护剂；散瞳剂；鼻粘膜充血消除药；神经肌肉阻断剂；神经保护剂；NMDA拮抗剂；非激素类甾醇衍生物；催产药；纤溶酶原活化剂；血小板激活因子拮抗剂；血小板聚集抑制剂；增效剂；黄体激素；前列腺素；前列腺生长抑制剂；促甲状腺激素；促精神剂；放射性药物；调节剂；弛缓剂；区分性药物(repartitioning agent)；杀疥螨药；硬化剂；镇静剂；选择性阿糖腺苷A1拮抗剂；5-羟色胺拮抗剂；5-羟色胺抑制剂；5-羟色胺受体拮抗剂；甾体类药物；兴奋剂；抑制剂；症状性多发性硬化症；增效剂；甲状腺激素；甲状腺抑制剂；拟甲状腺素；镇定剂；脑缺血治疗剂；佩吉特氏治疗剂；不稳定心绞痛治疗剂；促尿酸排除剂；血管收缩剂；血管舒张剂；疗创药；伤口愈合剂；或黄嘌呤氧化酶抑制剂。

另一种药物的实例包括血管紧张素转换酶抑制剂(ACE抑制剂)。ACE是一种催化血管紧张素I转化为血管紧张素II的酶。ACE抑制剂包括氨基酸及其衍生物、肽(包括二肽和三肽)以及ACE的抗体，其通过抑制ACE的活性，从而减少或消除加压物质血管紧张素II的形成而干扰肾素-血管紧张素系统。ACE抑制剂在医学上一直用于治疗高血压、充血性心力衰竭、心肌梗塞和肾病。已知用作ACE抑制剂的化合物的类别包括酰基巯基和巯基烷酰基脯氨酸类，如卡托普利(美国专利号4,105,776)和佐诺普利(美国专利号4,316,906)、羧基烷基二肽类，如恩纳普利(美国专利号4,374,829)、赖诺普利(美国专利号4,374,829)、喹那普利(美国专利号4,344,949)、雷米普利(美国专利号4,587,258)和哌道普利(美国专利号4,508,729)，羧基烷基二肽拟似物，如西拉普利(美国专利号4,512,924)和贝那普利(美国专利号4,410,520)、氧膦基烷酰基脯氨酸，如福森普利(美国专利号4,337,201)和trandolopril。雌激素正调节NOS表达，而ACE抑制剂不影响表达，但代替的是其影响NOS对L-精氨酸作用的效能。因此，可通过多种方法增加活性。一般而言，与不用本发明的还原酶抑制剂处理的细胞中的活性酶的量比较，通过本发明的还原酶抑制剂增加细胞中存在的活性酶的量能增加活性。

II预防和治疗的方法

在一方面，本发明提供通过给予患者L-精氨酸(优选L-精氨酸的缓释制剂)降低甘油三酯水平的方法。在一方面，本发明的方法降低患者甘油三酯水平约100、90、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或5mg/dL以下(使用任何上述值的组合作为上和/或下限的值的范围都囊括在本发明指导的范围之内)。

在一方面，本发明提供维持指定体重或者诱导体重减轻的方法。在另一方面，本发明提供治疗或预防肥胖或肥胖相关病症(如糖尿病)的方法。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信给予精氨酸诱发患者体内热产生作用。科学文献中增加的数据表明抑制NO的形成直接影响热产生作用(例如，Kamerman等，Can J Physiol Pharmacol.2003 Aug；81(8)：834-8)以及NO的增加促进热产生作用(例如，Saha等，Jpn J Physiol.1996 Oct；46(5)：375-382；Saha等，Jpn J Physiol.2000Jun；50(3)：337-342)。一般地，非偶合的热产生作用包括带有最低限度或无ATP产生的游离脂肪酸的氧化作用(即燃烧)，使得该过程中产生的能量作为热量被消散至周围组织中。由于热产生作用包括带有最低限度相应的能量产生的脂肪酸的分解，热产生作用是一种浪费性的或代谢性的无效能的过程，因此导致体重减轻或预防体重增加。通过分解脂肪酸减少体内脂肪被认为确实是一种控制体重的重要途径。L-精氨酸刺激热产生作用以分解脂肪酸的能力提出了给予L-精氨酸作为一种有效减轻体重的方法。

另外，通过其它机制，给予L-精氨酸可导致体重减轻。肥胖的特征是胰岛素水平升高(部分原因是高糖食物和饮料所致)和低于正常的生长激素(GH)释放。胰岛素促进脂肪和碳水化合物的贮存，而GH刺激脂解作用(脂肪燃烧)。与纤瘦的人相比，胖人的胰岛素/GH比率明显升高。高胰岛素和低GH的联合加深了肥胖。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但L-精氨酸能用于增加GH水平，从而诱发脂解作用和减少脂肪储存。

在进行本发明的某些实施方案中，可将缓释的L-精氨酸制剂给予患者。虽然不希望受理论的束缚，但确信L-精氨酸的缓释制剂使得循环的L-精氨酸高于基线水平，其增强营养物和氧流入细胞，从而增强了代谢和热产生作用。

在各实施方案中，给予L-精氨酸可使患者体重降低约50、45、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5或4磅以下。

在另一方面中，本发明提供通过给予患者精氨酸(优选L-精氨酸的缓释制剂)预防或治疗哮喘的方法。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信由摄取精氨酸导致的一氧化氮水平的升高可用于预防或治疗哮喘。

在其它方面中，本发明提供通过给予患者精氨酸(优选L-精氨酸的缓释制剂)而治疗在诸如镰状细胞疾病中的急性胸综合征的方法。患有镰状细胞病患者的肺炎可能特别严重，现已被称为急性胸综合征。急性胸综合征是镰状细胞疾病患者发病的通常原因，并且是镰状细胞疾病患者死亡的最通常的原因。涉及镰状细胞疾病中的急性肺损伤的严重性有很多因素。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信一氧化氮水平的升高可能有利地影响镰状细胞中的急性胸综合征，原因是镰状细胞疾病中L-精氨酸-一氧化氮途径和血管-阻塞之间的关系。血管阻塞危象过程中低精氨酸水平可反映急性底物耗尽的一种状态，其导致一氧化氮产生的降低。因此，补充精氨酸可用于提高NO水平。

在又一方面，本发明提供通过给予患者精氨酸(优选本发明公开的L-精氨酸的缓释制剂)预防或治疗勃起机能障碍的方法。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信由摄取精氨酸导致的一氧化氮水平的升高可用于预防或治疗勃起机能障碍。

另外，可利用精氨酸治疗或预防女性不孕症，例如改善卵巢反应、子宫内膜感受性和妊娠率。体外授精候选者可使用这种疗法。类似地，可利用精氨酸治疗或预防男性不孕症，例如，通过增强精子产生和增加精子数量以及精子活动力进行。

在再一方面，可使用精氨酸治疗、预防或缓解间质性膀胱炎的症状，例如通过减轻泌尿排泄不适感、降低腹痛、尿频和阴道/尿道疼痛而进行。

在还一方面，可使用精氨酸(例如本发明的缓释制剂)治疗、预防或缓解人免疫缺陷病毒(HIV)感染和/或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的症状。在治疗或预防用药法的各具体实施方案中，可将精氨酸与谷酰胺、丁酸羟基甲酯和/或必需脂肪酸(如3ω脂肪酸)联合给予。

根据本发明，可使用精氨酸(例如本发明所述的缓释制剂)治疗或预防先兆子痫。因此，本发明可使用精氨酸增强体能。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信精氨酸能增强生长激素的分泌，由此增强体能。

另外，可利用精氨酸(例如，如本发明所述的那些缓释的L-精氨酸制剂)治疗灼伤或创伤。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信烧伤患者经受精氨酸氧化过程，使得精氨酸储量降低。因此，给予患有此类损伤的患者精氨酸，可作为精氨酸储量的补充。在某些实施方案中，可将精氨酸与鱼油、canola oil和/或核苷酸组合给予。

在另一方面，精氨酸(例如，如本发明所述的那些缓释的L-精氨酸制剂)可用于治疗或预防癌症。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但可用精氨酸干扰肿瘤诱导作用；保持或改善免疫功能，例如一般性化疗或化疗过程中；增强肿瘤浸润淋巴细胞的能力；和/或降低癌症患者中化疗诱发的NK-细胞的抑制和淋巴因子激活的杀伤细胞的细胞毒性，以及淋巴细胞促有丝分裂的反应性。

根据本发明，还可利用精氨酸(例如，如本发明所述的那些缓释的L-精氨酸制剂)治疗或预防胃肠疾病。例如，可给予精氨酸例如通过呈现充血、生成血管和促进生长活性而治疗或预防胃炎或溃疡。另外，可使用精氨酸治疗、预防或缓解与胃食管返流疾病(GERD)或括约肌运动紊乱有关的症状。

根据本发明的另一方面，还可将精氨酸(例如，如本发明所述的那些缓释的L-精氨酸制剂)作为手术期间的营养物。例如，可将精氨酸用于分解代谢病症，如脓毒症和手术后紧张状态。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但确信精氨酸可用作免疫调节剂，并可正调节免疫功能并降低术后感染的发生率。

另外，可用精氨酸(包括本文所述的缓释制剂)例如通过降低脂质过氧化反应和增加认知功能而治疗或预防老年性痴呆。

还可用精氨酸例如通过抑制子宫收缩和保持子宫静止而预防妇女早产。

在另一方面，本发明提供通过给予具有脑血管和/或心血管疾病或病症风险的患者一种包含L-精氨酸的制剂，而在患者中预防血管疾病或病症的方法，如脑血管和/或心血管疾病或病症，包括例如心绞痛、充血性心力衰竭、动脉粥样硬化、冠心病、高血压和间歇性跛行。具有脑血管和/或心血管疾病或病症(包括病情)风险的患者可通过诸如动脉粥样硬化的诱因、动脉粥样硬化的症状或者存在的诸如下列的因素鉴别：吸烟、高血压、糖尿病、家族史、遗传因素、高胆固醇水平、年纪变大和酒精滥用等。

给予作为预防剂的用于本发明方法中的制剂可在特定适应症的特征性症状显示之前进行，例如预防该疾病或病症、减慢其进展或者延迟其发病。

另外，可使用本发明方法在患有不对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的患者中增加一氧化氮产生和/或增加血管舒张。不对称二甲基精氨酸(ADMA)是eNOS的一种内源性竞争抑制剂。ADMA通过蛋白质中L-精氨酸残基的翻译后甲基化形成，然后其水解后从蛋白质中释放出来。ADMA水平的升高与高胆固醇血症、高血压、糖尿病、先兆子痫、吸烟和老龄有关。ADMA的提高原因可能是该物质通过二甲基精氨酸二甲氨基水解酶或DDAH改变机制引起。DDAH是与ADMA代谢作用相关的主要的酶。已在糖尿病和高胆固醇血症动物模型中发现DDAH水平降低。

虽然不希望受任何理论的束缚，但确信ADMA的抑制作用通过L-精氨酸而被克服。L-精氨酸水平的增加克服ADMA对NOS的抑制作用。另外，给予L-精氨酸，任选带有HMG-CoA还原酶抑制剂，能刺激体外内皮NO合成酶(eNOS)的表达，并增强体内内皮依赖性的NO-介导的血管舒张。因此，这种治疗方案可在患有ADMA升高的患者中增加内皮功能。

通过给予患有ADMA升高的患者L-精氨酸，本发明的方法可增加一氧化氮产生和/或增加血管舒张。这种给药可增加内皮功能约5％-15％，或者可增加约7％-约12％。在本发明的一实施方案中，所述患者患有内皮功能障碍。

对于任何给药方式，所转运的化合物的准确量以及达到本发明所述的有利的药代动力学分布所必需的给药方案，将部分取决于诸如以下的因素：化合物(和/或其活性代谢物)的生物利用度、所治疗的疾病、所要求的治疗剂量以及本领域技术人员清楚的其它因素。所述准确的转运量以及给药方案很容易由不需过多实验的技术人员，通过监测所给予的化合物和/或其活性代谢物的血浆水平以及调整达到所要求的药代动力学分布所必需的剂量和给药方案来确定。

可将本发明方法中使用的各组分(如本发明中所述)或其药学上可接受的加成盐或水合物通过使用各种给药途径或方式而给予患者，以消除或降低本发明所述的不良的副作用。在一实施方案中，所述患者是动物。在另一实施方案中，所述患者是哺乳动物。在还一个实施方案中，所述患者是人。在任何给定情况下的最适合的途径取决于所治疗的病症的性质和严重程度。本发明的最优选的给药途径是口服途径。所述组合物可适合以单位剂量形式呈现，并可通过制药领域熟知的任何方法制备。给予所述组合物的技术和配方可在Williams & Wilkins，2000出版的Alfonso R.Gennaro编辑的第20版Remington：the Science & Practice of Pharmacy中发现。

一般使用有效量的本发明的制剂来达到预期的目的，例如诱发热产生作用、维持指定的体重或诱导体重减轻、治疗或预防肥胖或肥胖相关病症或者治疗或预防哮喘。所述治疗有效量指一种疾病、病症、与疾病或病症相关的症状或者易患有一种疾病或病症的有效治疗量。如前文所述，术语“治疗”指将治疗药物或制剂应用于或给予患者，或者将治疗药物或制剂应用于或给予患者的分离出的组织，所述患者患有一种疾病或病症、与疾病或病症相关的症状或者易患有一种疾病或病症，其目的是治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、改善、延缓所述疾病或病症和/或病情的发病，减慢所述疾病或病症的进展，改善或影响所述疾病或病症、疾病或病症的症状或者对一种疾病或病症和/或病情的易患病体质。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力之内，尤其参考本发明提供的所详细公开的内容。

适于本发明使用的药物制剂包括其中包含治疗有效量(即达到预期目的的有效量)的L-精氨酸的制剂。有效量通常是单独或者与其它剂量一起产生所要求的反应的药物制剂的量。这可包括仅暂时性减慢疾病的进展。在另一实施方案中，其包含永久性阻止疾病进展或者延迟疾病或病症的发病或防止疾病或病症的出现。剂量对任何具体疾病的作用可通过常规方法监测。这些量当然取决于所治疗的具体病症、病症的严重性、个别患者的参数，包括年龄、身体状况、身高和体重，治疗的持续时间、同时治疗的性质(如果有的话)、给药的特定途径以及健康从业者知识和专门技术范围内的各因素。

活性化合物的剂量通常为每日约0.01mg/kg-1000mg/kg。在一实施方案中，预期剂量范围为约50-500mg/kg将是适合的。在另一实施方案中，给药为口服、每日以一或数次给药进行。

在另一实施方案中，患者每日接受小于约10g的缓释L-精氨酸，例如每日小于约9g、约8g、约7g、约6g、约5g、约4g、约3g、约2g或约1g的缓释L-精氨酸。例如，患者可接受的日剂量约为1g-7g，约2g-6g或者约3g-5g缓释的L-精氨酸。使用任何上述值的组合作为上和/或下限的值的范围也包括在内。所述患者优选每日接受小于约4g的缓释的L-精氨酸。虽然没有受限于理论的风险，但L-精氨酸的缓释制剂允许使用较小的剂量，即L-精氨酸的总量可以较低，但仍能达到治疗效果。

当然，L-精氨酸的准确量将取决于诸多因素，其中包括患者的病情以及患者的体重和代谢。将制剂特别制备为确实包含一定量的L-精氨酸，以有效地尤其缓解特定目标疾病或病症的有害作用，即阻止已存在的症状的发展或缓解、或者延长所治疗患者的存活率。有效量的确定完全在本领域技术人员的能力之内，尤其参考本发明所详细公开的内容。

还可从动物模型中估计人体使用的治疗有效量。例如，将人用的剂量配制成达到在动物中发现的有效血浆浓度的剂量。

还可从人体药代动力学数据中估算出治疗有效量。虽然不希望受限于任何具体的理论，但确信有效性与患者总体暴露于所给予的药物(和/或其活性代谢物)的应用量有关，该量可通过测定血浓度-时间曲线(AUC)下的面积确定。因此，根据本发明方法的给药剂量，其具有所给予的化合物(和/或其活性代谢物)的AUC处于对于所治疗的适应症有效的已知剂量的约50％AUC之中时，被期望为有效。优选具有所给予的化合物(和/或其活性代谢物)的AUC处于已知有效剂量的AUC的约70％、约80％或者甚至约90％或以上的剂量。各药物的毒性和治疗效果可根据细胞培养或实验动物中的标准药学方法测定，例如测定LD₅₀(半数致死量)和ED₅₀(半数有效量)。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，其可被表示为LD₅₀/ED₅₀。优选呈现大治疗指数的制剂。虽然可使用呈现毒副作用的成分，当应注意设计一种转运系统，其将这些成分靶向作用于被侵袭的组织的部位，以使对非感染细胞的潜在性伤害最小，从而降低副作用。

可将所述细胞培养试验和动物研究中获得的数据用于配制用于人体的剂量范围之内的剂量中。在一实施方案中，本发明这些制剂的剂量处于循环浓度的范围之内，其包括具有极低或无毒性的ED₅₀。所述剂量可在一定范围之内变化，这取决于所用的剂型和所用的给药途径。对于本发明的治疗或预防方法中所用的任何组成分来讲，治疗有效量可最初由细胞培养试验中估算。可在动物模型中配制一种剂量，使得达到一种循环血浆浓度范围，该范围包括如在细胞培养中测定的IC₅₀值(即达到半数最大症状抑制的试验化合物的浓度)。可用这些信息更准确地测定人体中的有用剂量。血浆中的水平例如可通过高效液相色谱测定。

根据以上所述的方法，调节剂量以达到在患者体内的最大效能，尤其依据所给予的化合物或其活性代谢物的血药浓度和持续时间，这些都在本领域技术人员的能力范围之内。

III.制备方法

已发现L-精氨酸颗粒在一种基质中有效和基本的混和或者覆盖能改善本发明组合物的缓释特性。对于纤维质基质，其一经与水接触，该基质即部分水解，形成一层可控制L-精氨酸释放速率的凝胶层。L-精氨酸颗粒的有效涂层或混合对溶解创造了一种暂时的屏障，其延长了L-精氨酸的释放。基质中基本的间隙使得L-精氨酸非常快速溶解。与直接压缩制成的产品相比，本发明的方法导致形成一种具有改进特性的产品。另外，本发明比包括流化作用分散相的那些方法具有优点，原因是那些方法费时且昂贵。

有效和生效的覆盖(coverage)的关键是在进行本发明的制粒、粉碎和混合步骤中。参考图5，在一优选的实施方案中，片剂根据包括以下步骤的方法制备：将L-精氨酸制粒(步骤110)、将L-精氨酸粉碎(步骤125、140)、将L-精氨酸与剩余的各成分混合(步骤145、150、155)以及将各成分压制形成片剂(步骤160)。该方法还优选包括将各成分过筛(步骤105)和/或在粉碎过程中干燥L-精氨酸(步骤135)中的任一步骤或者该两个步骤。

如果在使用之前，将各成分过筛(步骤105)，对于某些或者所有成分，可使用#20和/或#30目筛。在一优选实施方案中，在制粒前将颗粒过筛(步骤105)，并在粉碎前再过筛(未显示)。过筛提供了具有范围较窄的粒度分布的颗粒，其有利于进行包衣和/或压制。

制粒步骤的优点在于其提供更为均匀的粒子。可使用本领域已知的任何适合的方法，将活性药物制丸或制粒。通常可将制丸或制粒定义为一种尺寸增大的过程，该过程中小粒子聚集成为较大的、固定的聚集物，其中原粒子仍能被鉴定出来并使得它们成为一种一种自流状态。在制粒前，可将粘合剂加入到活性组分之中以改善制粒过程。制粒过程中可加入其它添加剂。它们包括例如甜味剂、矫味剂、着色剂、抗氧剂等。

可任选加入水或其它溶剂以帮助制粒过程。所加入的水或其它溶剂的量取决于例如所选择的制粒方法，并且可由本领域技术人员很容易地确定。可在制粒过程中的任何适合的时间点加入水或其它溶剂。例如，可将粘合剂与溶剂(如水)混合形成一种颗粒状物质，然后将这种颗粒化的物质喷洒到活性药物上。另外，如果制粒剂太粘稠而不能均匀喷洒到活性药物上，可希望先将该粘合剂与各活性成分混合，然后喷洒水或其它溶剂，以产生一种活性药物颗粒或小丸的均匀模式。

可使用任何适合的制粒方法制备包含活性药物的粒子。可使用湿法制粒和/或干法制粒。

干制粒指不使用热量和溶剂的制剂制粒法。干法制粒技术一般包括制毛坯(slugging)或滚动紧压过程。制毛坯由将制剂干混并在压片机上将该制剂压制成大片或毛坯组成。将得到的片或毛坯粉碎成颗粒。滚动紧压过程类似于制毛坯，但在滚动紧压过程中，使用滚动压缩机代替压片机。参见，例如Handbook of PharmaceuticalGranulation Technology，D.M.Parikh，eds.，Marcel-Dekker，Inc.pages102-103(1997)。干法制粒技术可用于某些情况下，例如当活性药物对热或溶剂敏感时。

另外，可使用湿法制粒。在湿法制粒中，一般将溶剂和粘合剂加入制剂中以提供较大的颗粒聚集物。可将制粒过程的温度设定为任何合适的温度点，一般不超过该制剂的任何组分的熔点。一般在约35℃-65℃温度下，将该混和物制粒约20-90分钟。在一优选的实施方案中，在室温下，将混和物制粒约20分钟以下，更优选约1-10分钟(参见实施例11)。然后一般将颗粒持续干燥适合的时间(例如1或1小时以上)。

优选将所述各活性药物通过高剪切力混和制粒法(“HSG”)或流化床制粒法(“FBG”)制粒。这两种制粒方法均提供扩大的颗粒或小丸，但区别在于所使用的仪器和操作过程的机理不同。这些制粒技术可使用商业提供的设备进行。

在HSG中，混合和湿混合可通过经叶轮和切碎器的高机械性搅拌实现。湿润物质的混合、致密化和凝聚可通过叶轮推进的剪切力和压制力达到。切碎器的主要功能是将块状物切成较小的碎片并帮助液体粘合剂的分布。可将液体粘合剂倒入所述容器内或喷洒在粉末上，以实现更均匀的液体分布。

在另一方面，流化作用是一种操作过程，通过该过程微细固体物可经与气体接触而被转化为流体样状态。在某些气体速度下，该流体将支持粒子，使它们自由迁移而不被雾沫状带走。这种流化床类似于剧烈沸腾的液体，固体微粒经历非常紊流的运动，该运动随气体速度而增加。因此流化床制粒是一种操作过程，通过该过程在流化床上经将粘合剂溶液喷洒在流态化的粉末床上形成较大的颗粒而制备颗粒。可将粘合剂溶液由例如以任何适合方式(例如顶部或底部)定位的喷枪来喷射。喷洒的位置和喷洒的速率可以取决于活性药物的性质和所用的粘合剂，其可通过本领域技术人员容易地确定。

在本发明的一优选方法中，L-精氨酸的制粒(步骤110)包括将所述L-精氨酸与粘合剂(如聚维酮)与混合形成混和物(步骤115)，然后在制粒机中将混和物与制粒剂(制粒介质)制粒(步骤120)的步骤。制粒剂可以是例如溶解于纯净水中的聚维酮。优选使用高切应力制粒机，如Niro PMA 65高剪切力制粒机。可使用制粒机混和L-精氨酸和粘合剂，也可用于当将制粒介质喷射在混和物上时将混和物制粒。

将制剂的一或多种组分制粒后，可任选将该颗粒化的制剂粉碎。粉碎可使用任何适合的商业上提供的设备(例如装备有0.039英寸筛网的CoMil)进行。筛网的筛目尺寸可根据所要求的颗粒尺寸选择。如果要求，在粉碎颗粒化的各活性成分之后，可进一步干燥(如空气干燥)。

在一优选实施方案中，L-精氨酸的粉碎包括根据本领域熟知的技术(一般参见美国专利号5,145,684和欧洲专利申请498,482，两专利内容均结合到本发明中作为参考)将湿颗粒粉碎或湿法磨碎(步骤125)、将颗粒干燥(步骤130)，然后将该干颗粒粉碎或干法磨粉(步骤140)的各步骤。可使用诸如CoMil的碾磨机将颗粒湿粉碎和干粉碎。在一实施方案中，粉碎机装备有用于湿粉碎的’375Q筛和用于干粉碎的′062R筛。通过将颗粒在床式干燥机(例如Aeromatic S-2流化床干燥机)中干燥至所要求的干燥失重(LOD)水平(如≤3％LOD)，完成所述干燥步骤。可在各阶段中进行干燥步骤(步骤135)直至达到所要求的LOD。

L-精氨酸与剩余成分的混合可包括预混合步骤(步骤145)、混合步骤(步骤150)以及终混合步骤(步骤155)。预混合步骤可包括将L-精氨酸/聚维酮颗粒与填充剂和助流剂(如微晶纤维素和胶体二氧化硅)混合。预混合步骤可在例如8夸脱V-混合器中通过以25rpm速度混合5分钟完成。混合步骤可包括向该混和物中加入一或多种缓释剂(如一或多种羟丙基甲基纤维素)和填充剂(如微晶纤维素)。混合步骤可在例如2立方英尺V-混合器中通过以25rpm速度混合20分钟完成。终混合步骤可包括向在2立方英尺V-混合器中的该混和物中加入释放剂/润滑剂(如硬脂酸镁)，并在25rpm速度下混合约5分钟完成。

在按如上所述制备制剂混合物后，将该制剂混合物压制(步骤160)成片剂形式。在有或无压缩力下，可通过任何适合的方法将药片成形。例如，制粒后的制剂混合物的压制可通过使用任何压片机(例如，装备有0.748″×0.380″椭圆形、凸面、通常工具的Manesty Beta压片机)完成，优选在需要时将该制剂组合物用润滑剂(例如硬脂酸镁)适度润滑。现有很多种影响该步骤的其它方法，本发明并不局限于使用任何特定的设备。压片步骤可使用旋转型打片机进行。旋转型打片机具有一个为形成片剂而带有多个穿孔或模具的旋转板。将制剂插入到模具中，然后模压。

另外，可通过模压制备片剂。模制片可通过在适合的机器中将湿润的粉末化化合物与惰性液体稀释剂的混和物模压制备。

片剂的直径和形状取决于所选择用于颗粒化组合物的成型或压制的模具、冲模和冲头(punches)。片剂可以是盘状、椭圆形、长方形、圆形、圆柱状、三角形等。可将片剂刻痕以易于断裂。可用符号或字母，将片剂的顶部或下表面进行压印或凹陷刻痕(debossed)。

可根据压力的类型/模型、片剂产品所要求的物理性质(例如所要求的硬度和脆碎度(friability)等)、所要求的片剂的外观和尺寸等来选择压片力。所应用的压片力一般是使所压制的片剂具有至少约2kp的硬度。这些片剂通常可提供充分的硬度和强度，使得能够被包装、运送或使用者操作。如果要求，可向药片施加更高的压片力，以增加片剂的硬度。但是，优选选择压片力使得其不使片剂中含有活性药物的颗粒变形(例如裂化或破碎)。所施用的压缩力优选使所压制的片剂具有小于约10kp的硬度。在某些实施方案中，可优选将药片的硬度压缩至约3kp-7kp之间，任选在约3kp-5kp之间，或者约为3kp。

一般片剂的最终重量为约50mg-2000mg，更一般为大约200mg-1000mg，或者约400mg-700mg。

本发明的特有制剂以及制备本发明制剂的方法为所述缓释的L-精氨酸组合物提供了独特的优点。尤其是，本发明的制剂和方法使得组合物达到一种理想的持续释放的溶出特性。最理想地，L-精氨酸的缓释制剂能在体外维持至少最长达14小时的药物释放，优选在约1小时时释放约1 0％-40％，在约4小时约30％-70％。在约6小时约55％-75％，在约8小时约65％-85％，在约12小时约75％-95％，以及在约14小时约80％-100％。如图7中所示，本发明的制剂实现这种最佳的溶出性能。另外，如实施例11和实施例17中所示，溶出度和稳定性的研究表明本发明的制剂在制造后1和2个月中呈现最佳的溶出性能。

另外，本发明的制剂和方法提供不非常易碎的缓释L-精氨酸组合物。另外，本发明的制剂和方法提供一种L-精氨酸的缓释组合物，其具有充足的可压缩性，能够适于顺利制备该组合物。

如果要求，可在片剂的实施方案中加入其它的修饰。例如，还可通过本领域任何已知的技术，例如应用各种包衣，例如带有诸如Amberlite IRP-69的离子交换复合物，实现活性药物通过本发明的片剂基质的释放的修饰。本发明的片剂还可包括降低胃肠运动力的药物或者与降低胃肠运动力的药物共同给药。还可将所述活性药物通过生物活性化合物的化学转化而进行修饰产生一种前药，其在体内通过酶促或水解断裂等释放所述活性化合物。其它各层或包衣可作为扩散障碍，为控制药物释放的速率和时间提供另外的方式。

如果包括HMG CoA-还原酶抑制剂{即辛伐他汀)和/或另外的药物，优选将这些药物在混和步骤(步骤145、150、155)中加入。当片剂包含缓释的L-精氨酸制剂和HMG-CoA还原酶抑制剂制剂时，该片剂可具有一个缓慢释放的L-精氨酸制剂的片芯以及包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的制剂的第二个外罩层或外包层。另外，该片剂可在一共享层面中包含一种L-精氨酸制剂(如缓释L-精氨酸制剂)和一种HMG-CoA还原酶抑制剂制剂。

当将L-精氨酸与HMG-CoA还原酶抑制剂连续或者同时给予时，各片剂、扁囊剂、锭剂或胶囊剂含有约0.01mg-200mg的HMG-CoA还原酶抑制剂。HMG-CoA还原酶抑制剂的量将根据所用的具体的HMG-CoA还原酶抑制剂而变化。

在本发明的另一方面，以食物形式提供用于治疗如本发明所述的诸如以下各种适应症的组合物，诱发热产生作用、诱导体重减轻、保持指定体重、治疗或预防肥胖或肥胖相关病症(如糖尿病)或者治疗或预防哮喘。所述食物优选为棒状形式，如一种处方健康食物棒(prescription health bar)。食物的使用能比添加到单一片剂中提供更大量的L-精氨酸，例如在单一片剂中很难加入超过1克的L-精氨酸。因此，要求多个片剂来转运超过1g量的L-精氨酸。本发明提供一种食物棒，其可提供1克以上的L-精氨酸以及所需要的其它成分。在一实施方案中，将L-精氨酸以即释制剂形式(例如L-精氨酸的即释颗粒)加入到食物棒中。该食物棒优选包括一种缓释制剂，其包含例如L-精氨酸的缓释颗粒。在一优选的实施方案中，所述颗粒包括掩味成分，例如掩味的包衣。在另一实施方案中，该食物棒还包含其它药物，如HMG-CoA还原酶抑制剂，例如辛伐他汀。另外，可在该健康食品棒中加入红酵母米提取物。红酵母米提供一种天然来源的洛伐他汀。食物介质形式中L-精氨酸与他汀类药物的混合为给予该制剂提供了适度和容易的方式。当要求一种更高的剂量时，使用食物还能降低服用很多片L-精氨酸的片剂的需求。在一特定实施方案中，所述食物棒还可包括辅酶Q10。

在一实施方案中，所述食物棒含有约1-10g的L-精氨酸。在一优选的实施方案中，食物棒每根提供总量约为4g的L-精氨酸或其盐，以及与之混合的糖、水果成分、蛋白质和维生素及矿物质。食物棒的重量范围约为25-100g。在一具体的制备方法中，通过在升高的温度下将糖和水果糊混和，然后在降低的温度下，将该糖浆与少量成分混合制备所述食物棒。将少量的成分在糖浆中混合后，加入L-精氨酸，尤其是与一种蛋白添加剂混合，接着加入增量剂和食物，尤其是水果片或提供所要求的质地和滋味的其它颗粒性可食用成分，以及大豆蛋白。得到的产品可稳定储存，在味道上具有所要求的特殊感觉特性，并提供一种与L-精氨酸配合的健康成分组合。制备含有L-精氨酸和左旋赖氨酸的健康食物棒的方法和配方在例如美国专利No.6,063,432中说明，该专利结合到本发明中作为参考。可任选将约1-80g，优选约10mg的辛伐他汀或红米酵母提取物与L-精氨酸同时加入。可任选将约1-100mg，优选约10mg的Co Q₁₀与L-精氨酸和红米酵母提取物同时加入。

本发明的另一方面是一种制备上述食物棒的方法。该方法包括按如上所述并结合图5步骤110，将L-精氨酸制粒。该制粒步骤优选包括预混和步骤(步骤115)和制粒步骤(步骤120)。该方法还优选包括上述的湿粉碎步骤(步骤125)。可通过将所述L-精氨酸与如上详述的适当赋形剂经湿法制粒而获得这些食物棒。可将得到的颗粒或者直接使用或者将其用掩味的纤维质(cellulosics)包被。

本发明可通过下列不应视为限定的实施例进一步说明。本申请中引用的所有参考文献、专利和公布的专利申请都通过引用结合到本发明中作为参考。

实施例

实施例1：片剂1

将约250gL-精氨酸置于混合器中，然后随着以100 RPM速度慢慢混合，加入100g EUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯酸水性聚合物分散液(Rhm America，Piscataway，NJ)，形成一种湿性物质。将该湿性物质通过18-20筛网，使之在50℃干燥24小时。将得到的干燥L-精氨酸颗粒(250g)与84g METHOCEL K100 M CR甲基纤维素(The Dow Chemical Company，Danbury，CT)和3g硬脂酸镁干混，得到一种混合物。使用7/16凹形冲头，将得到的混合物压制成片剂。

实施例2：片剂2

将250gL-精氨酸置于混合器中，然后随着慢慢混合，加入84gMETHOCEL K100 M CR甲基纤维素和3g硬脂酸镁。使用7/16凹形冲头，将得到的混合物压制成片剂。

实施例3：胶囊剂1

将250gL-精氨酸置于混合器中，然后随着慢慢混合，加入100gEUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯酸水性聚合物分散液，形成一种湿性物质。将该湿性物质通过18-20筛网，使之在50℃干燥24小时。将得到的干燥的L-精氨酸颗粒(250g)与84g METHOCEL K100 MCR甲基纤维素和3g硬脂酸镁干混，得到一种混合物。将得到的混合物放入00胶囊中。

实施例4：胶囊剂2

将250gL-精氨酸置于混合器中，然后随着慢慢混合，加入84gMETHOCEL K100 M CR甲基纤维素和3g硬脂酸镁。将得到的混合物放入00胶囊中。

实施例5：片剂3

使用Kitchen Aid混合器，在低速下，将250gL-精氨酸和50gMETHOCEL K100 M CR甲基纤维素混合并匀化10分钟，形成一种干燥混合物。向该干燥混合物中以5g的增量加入115g EUDRAGITRS 30D低渗透性甲基丙烯酸水性聚合物分散液，直至该物质均匀湿润。将该湿性物质顺次通过12目筛和20目筛，使之在30℃干燥24小时，直至水分含量为1％重量。将得到的干燥的L-精氨酸颗粒与7g硬脂酸镁干混，然后采用Beta Manesy压片机，使用7/16凹形冲头，将该混合物压制成片剂。

实施例6：胶囊剂3

将500g游离碱性精氨酸和30g Kollidon 30混合4分钟。制备15g Kollidon 30和63.3g纯净水的溶液。将该溶液加入到混合器内，滚动混合6.5分钟。然后将该颗粒干燥。向混合器的该颗粒中加入约5g硅胶。加入375g Methocel K100M PCR和75g Methocel E4M CR，如前述混合。如上所述，将该物质装胶囊。

实施例7：胶囊剂4

将500g游离碱性精氨酸和30g Kollidon 30混合4分钟。将15gKollidon 30和63.3g纯净水的溶液加入到混合器内，滚动混合6.5分钟。将该颗粒干燥。向混合器的该颗粒中加入约5g硅胶。向混合物中加入137.5g Methocel K100M PCR和37.5g E4M CR，如前述混合。如上所述，将该物质装胶囊。

实施例8：L-精氨酸制剂

通过上述技术，制备一种L-精氨酸制剂，其包括50.75％L-精氨酸碱、3.5％Kollidon 30、27.5％Methocel K100M PCR、7.5％MethocelE4M CR、10.25％MCC 102和0.5％二氧化硅。

另外，通过上述技术，制备一种L-精氨酸制剂，其包括55.9％L-精氨酸碱、3.1％Kollidon 30、24.6％Methocel K100M PCR、6.7％Methocel E4M CR、9.2％MCC 102和0.46％二氧化硅。

通过类似技术制备另一种L-精氨酸制剂，其部分包括70％L-精氨酸碱、2.8％Kollidon 30、21.7％Methocel KM100 PCR和5.5％Methocel E4M CR。

实施例9：缓释片剂的制备

在GP-1高剪切力混合机(制粒机)中，以100 RPM速度，将约1000gL-精氨酸和约200g METHOCEL K100M CR甲基纤维素混合约5分钟。然后在200RPM速度以及1.5bar压力下的运转的旋转混合器中，加入约138g EUDRAGIT RS 30D低渗透性甲基丙烯酸水性聚合物分散液。在200RPM下，将混合物制粒1分钟。然后在入口温度为45℃、气流为100CMH至约2％含水量的MP-I流化床制粒机中干燥颗粒。然后使用带有尺寸为55R筛和圆形叶轮的Comil 197S，以90％速度将干燥的颗粒研磨。在一8Qt.V-混合器中，将约27g硬脂酸镁加入到所研磨的颗粒中，混合2分钟。然后使用带有7/16″标准凹面工具的Beta Manesty压片机，将该物质压制成最大可能硬度的目标重量为682.5mg的片剂。以每瓶60片，将该片剂手工包装在75cc HDPE瓶中。

使用高效液相色谱(HPLC)绘制所述片剂对购自BioEnergy(Warren，NJ)的市售获得的缓释L-精氨酸片的释放分布曲线图。图7是描述两种制剂的释放分布曲线图。

实施例10：L-精氨酸的药动学的评估

对14名处于禁食条件下的健康成人自愿者进行随机、四-向交叉(four-way crossover)研究，以评估L-精氨酸缓释片与即释胶囊剂的比较药代动力学。此处所用“健康”指没有心血管疾病风险的非高胆固醇血症的受试者。该研究对实施例9的L-精氨酸缓释片剂(L-精氨酸SR)与市售获得的购自Montiff(Los Angeles，CA)的L-精氨酸即释胶囊(L-精氨酸IR)进行比较。

该研究的目的是测定缓释L-精氨酸的药代动力学参数。如下表I中所示，根据对各药动学参数进行的双尾配对t-检验得到的p-值，在C_max和T_max之间存在统计学明显的差异。如所期待的那样，与即释胶囊剂相比，L-精氨酸的缓释片剂具有较低的C_max(14.9ug/mL对24.1ug/mL)和较长的T_max(4.4h对1.4h)。

表I：L-精氨酸SR对L-精氨酸IR的PK参数

L-精氨酸	Cmax	AUC0-t	AUC0-10	Tmax0-t	Tmax0-10
						L-Arg SR	14.9	143	68.56	4.4	3.27
L-Arg IR	24.1	147	92.23	1.4	1.35
						％率	0.62	0.97	0.74	3.2	2.43
P-值	0.0005	0.677	0.0382	0.0133	0.0073

实施例11：L-精氨酸的改良缓释片剂的制备

表II列出为制备改良的缓释片剂所需要的成分以及各成分的使用量。

表II：成分

组分	Mg/片	百分比(％)	重量/批(Kg)
				L-精氨酸单盐酸盐	500	50	12.5
聚维酮(K29/32)	35	3.5	O.88
				纯净水	-	-	2*
羟丙基甲基纤维素(METHOCEL K100M P CR)	275	27.5	6.87
				羟丙基甲基纤维素(METHOCEL E 4M CR)	75	7.5	1.88

微晶纤维素(AVICEL PH 102)	102.5	10.2	2.56
				二氧化硅胶体	5	0.5	0.13
硬脂酸镁	7.5	0.75	0.18
				总计：	1000	100.0	25

^*在制粒中使用水，然后将该混合物干燥。

除硬脂酸镁外，将所有组分在#20目筛中过筛。将硬脂酸镁通过#30目筛过筛。将约一半量的聚维酮溶于纯净水中，放置作为制粒剂。在Niro PMA 65高剪切制粒机中，将L-精氨酸和剩余的聚乙烯吡咯烷酮干混4分钟，然后通过向其中喷射制粒剂制粒约6.5分钟。然后将该湿的颗粒在装备有′375Q筛的CoMil研磨机中研磨。随后将研磨的颗粒在Aeromatic S-2型流化床干燥机中干燥至LOD≤3％。然后将干燥的颗粒在装备有′062R筛的CoMil研磨机中研磨。将大约一半量的微晶纤维素和胶体二氧化硅在一8夸脱的V-混合器中，以25rpm速度混合5分钟，然后转移至2立方英尺的V-混合器中。随后将剩余部分的微晶纤维素和羟丙基甲基纤维素也加入到该2立方英尺的V-混合器中，以25 rpm速度混合20分钟。然后将硬脂酸镁加入到该2立方英尺的V-混合器中，以25rpm速度混合5分钟。最后，使用装备有0.748″×0.380″椭圆形、凸面、通常工具的Manesty Bet压片机，将混合物压制成目标重量为1000mg的片剂。图6是该方法的概略流程图。

在制备过程中可使用标准过程控制试验和技术指标，该实施例中使用的指标在下表III中列出。

表III：L-精氨酸SR片的制备过程控制：技术指标和方法

技术指标	方法	验收标准
			混合均匀度	CTMLP-663	平均值：标示量的90.0％-110.0％RSD％NMT 5.0％
堆积密度	SOP Lab 2010	报告结果
			粒度分布	SOP LAB 2018	报告结果
湿度	SOP Lab 2059	NMT 3.5％

可使用标准释放方法和技术指标，该实施例中使用的指标等在下表IV中给出。

表IV：L-精氨酸SR片释放方法和技术指标

技术指标	方法	验收标准
			物理性状	目检	白至灰白色片椭圆形、凸面片
鉴别	CTMPLP-663	样品的保留时间和联机操作的UV光谱(200-400nm)与参考标准品的一致
			效价(potency)	CTMLP-663	标示量(label claims)的90.0-110.0％
有关物质	CTMLP-663	单一：NMT 0.5％总：NMT 2.0％
			水分	SOP LAB 2059	NMT 3.5％
溶出分布	CTMLP-663	1hr 10-40％4hr 30-70％12hr≥75％记录分布
			含量均匀度	CTMLP-663	USP<905>
微生物限度	USP<61>	总需氧菌数≤100cfu/mL霉菌和酵母菌总数≤50cfu/mL无大肠杆菌无金黄色葡萄球菌无铜绿假单胞菌无沙门氏菌种

另外，该研究已证明一些所要求的物理特性，包括本发明L-精氨酸的缓释制剂的脆碎度和含量均匀度。

表V：两批SRL-精氨酸制剂的物理测试、效价、 含量均匀度和溶解度

批号	1	2
			平均片重n＝20，mg	1003.3	1014.5
片硬度n＝20，kp	11.0	12.4

片厚度n＝20，mm	7.89	7.70
			片脆碎度，％	0.1	0.1
效价，％	98.4	100.5
			含量均匀度n＝10；％	99.0	100.8
含量均匀度，％RSD	1.5	1.8
			溶出时间，hr	％释放度
0	0	0
			1	27.3	26.8
2	42.1	42.1
			4	59 9	60.2
6	73.0	73.6
			8	82.8	83.4
10	90.3	90.3
			12	95.1	94.9
14	98.4	92.5

实施例12：伴有或不伴有辛伐他汀的L-精氨酸SR以及伴有或不伴有L-精氨酸SR的辛伐他汀的药动学评估

研究伴有或不伴有有辛伐他汀的L-精氨酸SR以及伴有或不伴有L-精氨酸SR的辛伐他汀的药动学。使用实施例9的L-精氨酸SR片以及购自BioEnergy(Warren，NJ)市售提供的辛伐他汀片。

如表VI中可见到的那样，以对各药代动力学参数进行的双-尾配对t检验得到的p-值为基础计算，各处理组之间，在C_max、AUC_0-10和T_max上无统计学上的显著性差异。如表VII中所示，L-精氨酸SR对单剂量的辛伐他汀的药代动力学无统计学上的明显影响。

表VI：伴有或不伴有辛伐他汀的L-精氨酸的PK参数

L-精氨酸	Cmax(mg/ml)	AUC0-10(mg-hr/ml)	Tmax(hr)
				L-ArgSR	14.77	68.56	3.27
伴有辛伐他汀的L-Arg SR	13.49	51.55	3.23
				％率	1.09	1.33	1.01
P-值	0.5001	0.0713	0.9716

表VII：伴有或不伴有L-精氨酸的辛伐他汀的PK参数

辛伐他汀	Cmax(ng/ml)	AUC0-10(ng-hr/ml)	Tmax(hr)	Kellm(1/hr)	t1/2(hr)
						辛伐他汀w/oL-精氨酸SR	21.15	107.93	2.68	0.1248	6.56
伴有L-精氨酸SR的辛伐他汀	18.95	114.36	2.29	0.0950	10.01
						P-值	0.5360	0.6302	0.4758	0.1526	0.1059

实施例13：给予辛伐他汀和L-精氨酸对小鼠梗塞面积的影响

研究小鼠中给予辛伐他汀和L-精氨酸对梗塞面积的影响。腹腔注射给予小鼠溶解于盐水溶液中的辛伐他汀以及辛伐他汀加L-精氨酸，给予量见图3中所示。图2和图3中描述与对照组相比这些小鼠梗塞面积的结果。

实施例14：辛伐他汀和L-精氨酸的最佳剂量组合

研究小鼠中给予辛伐他汀和L-精氨酸的最佳剂量组合。图4中显示，给小鼠注射不同水平的辛伐他汀和L-精氨酸。该研究结果也在图4中显示。统计分析预测最佳组合剂量范围为辛伐他汀1.2-1.4mg/Kg和L-精氨酸约20-25mg/Kg。

实施例15：在ADMA水平升高的患者中联合给予辛伐他汀与缓释L-精氨酸，可增强辛伐他汀的内皮依赖性血管舒张的改善功能

他汀类药物刺激内皮NO合酶(eNOS)在体外的表达，并增强体内内皮依赖性、NO-介导的血管舒张。不对称二甲基精氨酸(ADMA)是eNOS的一种内源性竞争性抑制剂。血浆ADMA水平升高的存在与内皮细胞功能异常有关。发现仅在如果ADMA的抑制作用被补充的L-精氨酸缓释制剂克服之时，辛伐他汀在患者中增强与ADMA升高有关的内皮功能。

在一个三周期的交叉给药设计中(在各治疗之间有至少3周的清除期)，对ADMA水平升高的1 5名无临床症状的老年患者随机排序，将辛伐他汀(40mg/日)、实施例11中所述制备的L-精氨酸缓释制剂(3g/日)或者两者的组合各给予所述患者3周。使用计算机辅助图像分析，通过肱动脉超声评定内皮依赖性血管舒张；通过验证的HPLC方法测定ADMA和L-精氨酸血浆浓度。

对完成该项研究的15名患者的分析表明与治疗前测定的数据相比，单独使用L-精氨酸缓释制剂或者与辛伐他汀联合应用均增加内皮依赖性血管舒张的百分比。与单独使用辛伐他汀所观察到结果相比，联合用药明显增加从处理前内皮依赖性血管舒张百分率的变化3.87％(p＜0.025)。联合用药与单独使用L-精氨酸缓释制剂之间内皮依赖性血管舒张百分率的变化的差别很小。硝酸甘油引起的内皮非依赖性血管舒张不受任何所述治疗的影响。L-精氨酸缓释制剂无论单独或与辛伐他汀联合使用都能明显改善血浆L-精氨酸/ADMA比率(基线为82.3±4.0，对应的分别为102.8±9.2和102.6±10.8，各自p＜0.05)。这些结果在图8中概述。

辛伐他汀在其中eNOS被升高的ADMA水平阻断的患者中不增加内皮功能；辛伐他汀与口服的L-精氨酸缓释制剂联合给药对内皮功能具有协同作用。由于NO-介导的作用在他汀类的治疗效果中发挥重要作用，应在ADMA浓度升高的患者中考虑与L-精氨酸缓释制剂联合应用。

实施例16：通过L-精氨酸缓释剂处理来改善胆固醇和甘油三酯水平

在实施例15所述的研究中，分析治疗前和治疗后总胆固醇(TC)、LDL胆固醇、HDL胆固醇和甘油三酯的变化。表VIII-X表明用指定的用药方案治疗对甘油三酯水平影响的结果。

表VIII.用指定的用药方案治疗前甘油三酯的水平(mg/dL)

	缓释L-精氨酸和辛伐他汀	辛伐他汀	缓释L-精氨酸
				患者数	15	15	15
正常范围以外的患者数	5	5	5
				平均值	178.2	165.1	161.1
中位值	124.0	155.0	143.0
				标准偏差	107.10	77.40	87.04
最小-最大值	66-450	51-337	67-332

表IX.用指定的用药方案治疗后甘油三酯的水平(mg/dL)

	缓释L-精氨酸和辛伐他汀	辛伐他汀	缓释L-精氨酸
				患者数	15	15	15
正常范围以外的患者数	2	1	3
				平均值	113.7	140.2	162.0
中位值	105.0	134.0	135.0
				标准偏差	52.11	94.12	89.42
最小-最大值	43-212	58-440	60-385

表X.由指定的用药方案治疗所引起的甘油三酯水平的变化(mg/dL)

	缓释L-精氨酸和辛伐他汀	辛伐他汀	缓释L-精氨酸
				患者数	15	15	15
平均值	-64.5	-24.9	0.9
				中位值	-36.0	-38.0	-10.0
标准偏差	78.87	87.40	44.51
				最小-最大值	-241-17	-143-205	-80-97

表XI-XIII显示由于用指定的用药方案治疗引起的总胆固醇水平、低密度脂蛋白胆固醇水平和高密度脂蛋白胆固醇水平的变化。

表XI.由指定的用药方案治疗所引起的总胆固醇水平的变化(mg/dL)

	缓释L-精氨酸和辛伐他汀	辛伐他汀	缓释L-精氨酸
				患者数	15	15	15
平均值	-89.0	-76.3	-11.9
				中位值	-87.0	-78.0	-2.0
标准偏差	20.99	29.50	20.67
				最小-最大值	-138--53	-134--14	-42-15

表XII.由指定的用药方案治疗所引起的低密度脂蛋白胆固醇水平 的变化(mg/dL)

	缓释L-精氨酸和辛伐他汀	辛伐他汀	缓释L-精氨酸
				患者数	14	14	15
平均值	-77.9	-70.7	-12.0
				中位值	-77.5	-78.0	-5.0
标准偏差	18.49	27.45	25.48
				最小-最大值	-115--50	-121--20	-64-30

表XIII.由指定的用药方案治疗所引起的高密度脂蛋白胆固醇水平 的变化(mg/dL)

	缓释L-精氨酸和辛伐他汀	辛伐他汀	缓释L-精氨酸
				患者数	15	15	15
平均值	2.8	1.2	-0.3
				中位值	3.0	0.0	-2.0
标准偏差	5.77	7.05	7.88
				最小-最大值	-9-11	-7-20	-13-18

图9中图解表明了该分析的结果。如结果所证明，给予缓释L-精氨酸降低甘油三酯水平。

实施例17：HPLC法测定500mg精氨酸HCl缓释片剂中精氨酸HCl的溶出释放量

流动相按如下制备。首先，通过将约0.9g重量的1-戊烷磺酸钠盐的单水合物和3.5g磷酸二氢钠单水合物加入到适合的容器中，制备1升pH 3.3的缓冲溶液。加入约100mL去离子水溶解。通过加入磷酸，将pH调节至3.3。接着，将850mL该pH3.3缓冲液与150mL甲醇合并并加入到适合的容器中混合。将混合液通过0.45μm尼龙膜滤器过滤。最后，使用前将该混合物脱气。

如下制备溶出介质(50mM磷酸盐缓冲液，pH6.8)。首先，将20.0mL 10M NaOH由移液管加入到1000mL容量瓶中，用去离子水稀释以制备0.2M NaOH。接着称量54.44g无水磷酸二氢钾，加入到适合的容器中，用2000mL去离子水溶解并稀释。向容器中加入896mL 0.2M NaOH，用去离子水稀释至8000mL。最后将该混合物使用前脱气。

如下制备溶出样本。将按实施例11所述制备的6片500mg精氨酸HCl称重。将各片置于装有900mL磷酸盐缓冲液(pH6.8)的不锈钢沉降器(sinker)中。接着将沉降器下降至USP仪器2(搅拌桨)的容器中，立即以75rpm速度在约37℃±0.5℃下旋转。在1、2、4、6、8、10、12和14小时时间点处，从容器中取出10mL溶液，对各时间点分别进行溶出分析。将这些样本溶液各自通过0.45μm PVDF注射器式滤器过滤。将滤液收集到HPLC瓶中分析，其中弃去最开始的1-2mL。在每个取样点后，使用10μm全流量过滤器，将预热至37℃±0.5℃的10mL溶液介质再回加至溶解容器中。操作者应该清楚该样本溶液在室温下能稳定最长达1日，在4℃下可稳定最长达3日。

如下制备精氨酸HCl的标准溶液。准确称量28±2mg精氨酸HCl参考标准品至50mL容量瓶中。将该标准物用溶出介质溶解并稀释至体积。

使用BDS Hypersil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)进行HPLC，检测波长UV 210nm。将柱温设置为室温。运行时间一般为9分钟，注射体积为10μL，流速为0.8mL/min，流动相为如上制备的pH3.3缓冲液/甲醇(85/15，v/v)。

如下进行各试验。先注射溶出介质、接着连续注射5份精氨酸HCl标准溶液，最后注射各样本溶液一次。在6个样本各注射一次后以及程序运行结束后，再注射精氨酸HCl标准溶液。运行中系统漂移(drift)时间应该在约97％-103％之间(即：标准溶液的百分回收率与精氨酸HCl标准溶液的5个连续注射的平均值比较)。

在测定所释放的精氨酸的百分率中，操作者必须注意保证在工作标准溶液的注射中精氨酸HCl的USP拖尾(trailing)因子(T)小于2。T按下式计算：

T＝W_.05/2f

其中W_0.5是精氨酸HCl峰在距基线5％峰高处的峰宽，f是峰顶点至峰前沿之间的距离(在从基线的5％峰高点处测定该距离)。

精氨酸HCl的释放百分率按下式计算：

其中n是测定总数，V_r是各测定的溶出介质的体积(10mL)，V是溶出介质的最初体积(900mL)，C_s是工作标准溶液中精氨酸HCl的浓度(mg/mL)，C_i是各样品溶液中精氨酸HCl的浓度mg/mL(其中i＝1至i＝n-1)，R_u是样品溶液中获得的精氨酸HCl峰的峰面积响应，R_s是连续注射的工作标准溶液中得到的精氨酸HCl峰的平均峰面积响应，LC是精氨酸HCl的标示量(500mg)。

在1、2、4、6、8、10、12和14小时时间点处，计算释放率。表V和XIV概述了各溶出度研究的结果。

表XIV：在约40℃/75％RH稳态下L-精氨酸SR片的溶出分布

时间点	最初	1个月	2个月
				溶出时间.hr	释放％
0	0	0	0
				1	20 4	21.8	28.1
2	36.4	36.6	41.1
				4	53.5	54.3	58.5
6	66.8	67.5	71.5
				8	76.6	77.9	81.3
10	83.1	85.5	88.3
				12	872	89.7	92.9
14	89.1	92.4	96.0

实施例18：L-精氨酸食品棒的制备

如上所述并结合图5步骤110，包括预混合步骤(步骤115)和制粒步骤(步骤120)，将L-精氨酸制粒。接着，将所述颗粒和上述适合的赋形剂一起湿研磨(步骤125)。可使用得到的颗粒或者可将其用遮味的纤维质包衣。

将糖和水果糊在升高的温度下混合，然后在降低的温度下与糖浆和微量成分混合。将所述L-精氨酸颗粒、填充剂和包括水果片或可食用成分的食物组分加入，使达到所要求的构成和滋味。用蛋白挤压机制出食物棒。

实施例19：用L-精氨酸缓释制剂治疗引起的体重减轻

一名45岁如性自愿者每日2次服用3粒缓释L-精氨酸制剂胶囊。该制剂由350mgL-精氨酸、纤维素、聚乙稀吡咯烷酮、亮氨酸和二氧化硅组成。在该段期间，注意到自愿者饮食上无其它明显变化。该L-精氨酸给药方案两个月后，自愿者减轻9磅。

一名53岁男性自愿者在相同时间每日2次服用3粒缓释L-精氨酸制剂胶囊。在该段期间，注意到自愿者饮食上无其它明显变化。两个月后，自愿者减轻4磅。另外，该志愿者注意到体温升高0.25℃。体温增加是热产生作用的指示。

实施例20：L-精氨酸的生热作用

通过动物产生热量而消耗氧是本领域任一普通技术人员熟知的原理。参见，例如M.Kleiber，“The Fire of Life”，Robert E.Kreiger Pub.Co.，New York，New York，1975。在增加热量消耗过程中，可将代谢的燃料(如葡萄糖或脂肪酸)氧化成CO₂和H₂O，并伴随放出热量，即生热作用。因此，测定动物(包括人和伴侣动物)中氧的消耗是一种热产生作用的间接测定法。有关这点，间接量热法已被证实是一种测定能量消耗的有效方法，并被广泛用于动物(包括人)中。

以下实验方案显示L-精氨酸产生热产生反应并由此可用于治疗月巴胖的能力。

设计该实验方案以测定给予肥胖Zucker大鼠服药6日的氧消耗量。在开始研究之前，将体重范围在约400-500g的雄性肥胖Zucker大鼠在标准实验室条件下在单独各笼中室内饲养至少3-7日。在每日下午3-6点间，将L-精氨酸制剂以适合的形式和剂量，以单日剂量通过口腔管饲法给予大鼠6日。

使用开路(open circuit)、间接热量计(Oxymax，ColumbusInstruments，950 North Hague Ave.，Columbus，Ohio 43204)，在最后一次给药后测定氧消耗量。实验前，将Oxymax气体传感器用N₂气和气体混合物(0.5％ CO₂，20.5％ O₂，79％ N₂)校准。将大鼠从其饲养笼中取出，记录其体重，然后置于热量计的密闭的箱(43×43×10cm)中，将各箱置于活动监测仪之中。将通过各箱的空气流速设定为1.6-1.7I/min。根据通过各箱的空气流速以及在入气口和排气口氧含量的差别，Oxymax热量计软件计算耗氧量(ml/kg/h)。活动监测仪在各轴的距离的1英寸间隔带有15条红外线光束；当两个相连的光束被打断时，记录走动的活动，并按计数记录结果。每10分钟测定耗氧量和走动的活动，共进行5-6.5小时。通过对各大鼠的测定值进行平均，排除前5个值和在时间期限内其中走动的活动超过100次所得到的值，计算静止期耗氧量。

实施例21：L-精氨酸缓释制剂的体外释放分布曲线

对市售提供的普通L-精氨酸制剂和根据本公开制备的包括350mg L-精氨酸、纤维素、聚乙稀吡咯烷酮、亮氨酸和二氧化硅的L-精氨酸缓释胶囊制剂进行体外释放分布分析。图10图示性说明两个试验的释放分布。本发明的缓释制剂在10小时内释放L-精氨酸。

实施例22：L-精氨酸缓释制剂的药代动力学分布

给予患者L-精氨酸的缓释制剂。在多个时间点上测定患者中L-精氨酸水平。图11描述所述缓释制剂的药代动力学分布。给予所述缓释制剂使循环的L-精氨酸水平明显高于基线水平至少8小时。

另外，图12描述在给予本发明缓释制剂的患者中L-精氨酸对ADMA的改善比率。

等同意义

本领域技术人员将认可或能够确定：在不超出常规实验的情况下，可对本文所述的具体实施方案进行很多等价替代。这些等价物都囊括在下列权利要求书中。

Claims (24)

1.一种在患者中降低甘油三酯水平的方法，该方法包括给予所述患者持续释放的L-精氨酸。

2.权利要求1的方法，其中所述方法降低甘油三酯水平小于约100mg/dL。

3.权利要求1的方法，其中所述方法降低甘油三酯水平小于约50mg/dL。

4.权利要求1的方法，其中所述方法降低甘油三酯水平小于约25mg/dL。

5.权利要求1的方法，其中所述患者经口服给予持续释放的L-精氨酸。

6.权利要求1的方法，其中所述患者每日给予小于10g持续释放的L-精氨酸。

7.权利要求1的方法，其中所述患者每日给予约1g-7g持续释放的L-精氨酸。

8.权利要求1的方法，其中所述患者每日给予约2g-6g持续释放的L-精氨酸。

9.权利要求1的方法，其中所述患者每日给予约3g-5g持续释放的L-精氨酸。

10.权利要求9的方法，其中所述患者每日给予约3g持续释放的L-精氨酸。

11.权利要求9的方法，其中所述患者每日两次给予约1g-2g持续释放的L-精氨酸。

12.权利要求1的方法，其中所述缓释制剂包含：

(a)约25％-75％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；

(b)约0.5％-5％重量的聚乙烯吡咯烷酮；

(c)约5％-40％重量的羟丙基甲基纤维素；

(d)约2％-20％重量的微晶纤维素；

(e)小于约3％重量的二氧化硅；和

(f)小于约3％重量的硬脂酸镁。

13.权利要求1的方法，其中所述缓释制剂包含：

(a)约50％重量的L-精氨酸，其中所述L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；

(b)约3％-4％重量的聚乙烯吡咯烷酮；

(c)约35％重量的羟丙基甲基纤维素；

(d)约10％的重量的微晶纤维素；

(e)小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅包括胶体二氧化硅；和

(f)小于约1％重量的硬脂酸镁。

14.一种在患者中诱发热产生的方法，该方法包括给予所述患者L-精氨酸。

15.一种在患者中维持指定体重或诱导体重减轻的方法，该方法包括给予所述患者L-精氨酸。

16.权利要求15的方法，其中所述方法降低患者体重约20磅以下。

17.权利要求15的方法，其中所述方法降低患者体重约10磅以下。

18.权利要求15的方法，其中所述方法降低患者体重约5磅以下。

19.一种在患者中预防或治疗肥胖或肥胖相关病症的方法，该方法包括给予所述患者L-精氨酸。

20.权利要求19的方法，其中所述肥胖相关病症是糖尿病。

21.一种在患者中预防或治疗哮喘的方法，该方法包括给予所述患者L-精氨酸。

22.权利要求14、15、19或21的任一项的方法，其中所述L-精氨酸包括L-精氨酸的缓释制剂。

23.权利要求22的方法，其中所述缓释制剂包含：

(a)约25％-75％重量的L-精氨酸或其药学上可接受的盐；

(b)约0.5％-5％重量的聚乙烯吡咯烷酮；

(c)约5％-40％重量的羟丙基甲基纤维素；

(d)约2％-20％重量的微晶纤维素；

(e)小于约3％重量的二氧化硅；和

(f)小于约3％重量的硬脂酸镁。

24.权利要求22的方法，其中所述缓释制剂包含：

(a)约50％重量的L-精氨酸，其中所述L-精氨酸包含L-精氨酸单盐酸盐；

(b)约3％-4％重量的聚乙烯吡咯烷酮；

(c)约35％重量的羟丙基甲基纤维素；

(d)约10％的重量的微晶纤维素；

(e)小于约1％重量的二氧化硅，其中所述二氧化硅包括胶体二氧化硅；和

(f)小于约1％重量的硬脂酸镁。

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