CN101176428A - 一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法，步骤如下：1)培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0～2.0mg/L+IBA0.3～0.5mg/L；(3)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0～3.0mg/L；(4)增殖培养基：WPM+TDZ0.2～0.5mg/L+IBA0.1～0.2mg/L+GA0.1mg/L。2)外植体的选取与灭菌；3)诱导培养：直接从外植体诱导出初代幼芽；4)在叶片诱导培养基上进行培养，形成胚性愈伤组织或直接形成具备完整植株的再生不定芽；5)增殖培养。本发明的有益效果是：1)培养基针对性强、适用性好，芽的诱导率高；2)增殖系数高，节约了组培成本。3)遗传性状一致，克服了常规繁殖系数低的缺点。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，主要是一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法。
背景技术
蓝莓(blueberry)是新兴功能型水果，它以优异的品质、优良的加工性能、独特的保健功能、而迅速成为世界第三大浆果，并被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。
蓝莓果实低能量且含有多种抗氧化成份，因此它不仅具有防癌抗癌的奇特功效、并可以显著降低心血管疾病、糖尿病、帕金斯病等的发病率，还是重要的抗衰老、减肥美容水果。蓝莓适宜加工成果汁、果酱、果酒及天然色素、保健食品等加工产品，是集鲜食、加工、保健于一身的优良树种。但是，当前蓝莓生产用苗极度紧张是我省乃至全国发展蓝莓发展的技术瓶颈。而采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖率高，且因为其是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优良性状，近年来在生产上应用越来越广。但是现有的文献报道大都使用价格昂贵的玉米素来进行增殖，使得组培成本成倍上升，使其无法实现大规模工厂化生产。
发明内容
本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种组培成本相对较低且适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案。这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0～2.0mg/L+IBA0.3～0.5mg/L；
(3)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0～3.0mg/L；
(4)增殖培养基：WPM+TDZ0.2～0.5mg/L+IBA0.1～0.2mg/L+GA0.1mg/L。
这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0～2.0mg/L+IBA0.3～0.5mg/L；
(3)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0～3.0mg/L；
(4)增殖培养基：WPM+TDZ0.2～0.5mg/L+IBA0.1～0.2mg/L+GA0.1mg/L；
2)、外植体的选取与灭菌：取蓝莓健康无病饱满芽，经灭菌处理后备用；
3)、诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导培养基上，经30～40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；
4)、取无菌苗叶片在叶片诱导培养基上进行培养，经30-40天形成胚性愈伤组织或直接形成具备完整植株的再生不定芽；
5)、增殖培养：将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养30～45天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤5)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽；将步骤4)诱导出的胚性愈伤组织或再生不定芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养50～60天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤5)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽。
所述的灭菌处理是蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗1h，先经体积比为75％酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.1％升汞溶液灭菌6～8分钟，最后用无菌水冲洗3～5次。
所述的各组织培养阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为1500～2500Lx，光照时间为12h/d。
本发明的有益效果是：
1)、提出的蓝莓组培优化培养基针对性强、适用性好，芽的诱导率达90％以上；芽的增殖率每个培养周期达5倍以上，年组培苗生产能力可达100万苗以上(一年为8个培养周期)。
2)、该方法由于用价格低廉的TDZ代替价格昂贵的ZT，而增殖系数高，大大节约了组培成本，使得工厂化育苗成为可能。
3)、提出的组织培养快速繁殖方法得到的蓝莓组培苗，遗传性状一致，克服了常规繁殖系数低的缺点。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：本实施例1中的这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0mg/L+IBA0.3mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.2mg/L+IBA0.1mg/L+GA0.1mg/L。
这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0mg/L+IBA0.3mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.2mg/L+IBA0.1mg/L+GA0.1mg/L；
2)、外植体的选取与灭菌：蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗1h，先经体积比为75％酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.1％升汞溶液灭菌6～8分钟，最后用无菌水冲洗3～5次。
3)、诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导培养基上，经30～40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；
4)、增殖培养：将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养30～45天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤4)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽；
该实施例中各组培阶段的培养条件是：培养温度为25±2℃，光照光强为1500～2500Lx，光照时间为12h/d。
实施例2：本实施例2中的这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ2mg/L+IBA0.5mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.5mg/L+IBA0.2mg/L+GA0.1mg/L。
这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ2mg/L+IBA0.5mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.5mg/L+IBA0.2mg/L+GA0.1mg/L；
2)、外植体的选取与灭菌：蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗1h，先经体积比为75％酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.1％升汞溶液灭菌6～8分钟，最后用无菌水冲洗3～5次。
3)、诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导培养基上，经30～40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；
4)、增殖培养：将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养30～45天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤4)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽；
该实施例中各组培阶段的培养条件是：培养温度为25±2℃，光照光强为1500～2500Lx，光照时间为12h/d。
实施例3：本实施例3中的这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.2mg/L+IBA0.1/L+GA0.1mg/L。
这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.2mg/L+IBA0.1/L+GA0.1mg/L；
2)、取无菌苗叶片在叶片诱导培养基上进行培养，经30-40天形成胚性愈伤组织或直接形成具备完整植株的再生不定芽；
3)、增殖培养：将步骤2)诱导出胚性愈伤组织和不定芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养50～60天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤3)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽；
所述的各组织培养阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为1500～2500Lx，光照时间为12h/d。
实施例4：本实施例4中的这种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)叶片诱导培养基：WPM+TDZ3.0mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.5mg/L+IBA0.2mg/L+GA0.1mg/L。
这种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，按如下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)叶片诱导培养基：WPM+TDZ3.0mg/L；
(3)增殖培养基：WPM+TDZ0.5mg/L+IBA0.2mg/L+GA0.1mg/L；
2)、取无菌苗叶片在叶片诱导培养基上进行培养，经30-40天形成胚性愈伤组织或直接形成具备完整植株的再生不定芽；
3)、增殖培养：将步骤2)诱导出胚性愈伤组织和不定芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养50～60天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤3)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽；
所述的各组织培养阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为1500～2500Lx，光照时间为12h/d。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
Claims (4)
1.一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物，其特征在于：培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0～2.0mg/L+IBA0.3～0.5mg/L；
(3)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0～3.0mg/L；
(4)增殖培养基：WPM+TDZ0.2～0.5mg/L+IBA0.1～0.2mg/L+GA0.1mg/L。
2.一种适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：WPM，其中白糖30g/L，琼脂7～8g/L，pH5.3；
(2)诱导培养基：WPM+TDZ1.0～2.0mg/L+IBA0.3～0.5mg/L；
(3)叶片诱导培养基：WPM+TDZ2.0～3.0mg/L；
(4)增殖培养基：WPM+TDZ0.2～0.5mg/L+IBA0.1～0.2mg/L+GA0.1mg/L；
2)、外植体的选取与灭菌：取蓝莓健康无病饱满芽，经灭菌处理后备用；
3)、诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的芽在无菌条件下，用滤纸吸干后，接种在诱导培养基上，经30～40天后，直接从外植体诱导出初代幼芽；
4)、取无菌苗叶片在叶片诱导培养基上进行培养，经30-40天形成胚性愈伤组织或直接形成具备完整植株的再生不定芽；
5)、增殖培养：将步骤3)诱导出的初代幼芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养30～45天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤5)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽；将步骤4)诱导出的胚性愈伤组织或再生不定芽在无菌条件下，接种在增殖培养基上，培养50～60天分化出腋芽；每隔30～45天，将步骤5)分化的腋芽切成单株再接种在增殖培养基上，再分化出腋芽。
3.根据权利要求2所述的适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，其特征在于所述的灭菌处理是蓝莓健康无病饱满芽用软毛刷洗干净，再在流水下冲洗1h，先经体积比为75％酒精浸泡0.5分钟，再用体积比为0.1％升汞溶液灭菌6～8分钟，最后用无菌水冲洗3～5次。
4.根据权利要求2所述的适宜蓝莓试管苗增殖的组培方法，其特征在于：所述的各组织培养阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为1500～2500Lx，光照时间为12h/d。
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