CN101133833B - 枸杞活性多糖制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种枸杞活性多糖制备方法，其特征在于：用经过40-60度酒精冷浸或加热提取后的枸杞药渣为原料，以水为溶剂进行提取，从而获得枸杞多糖提取物；选择具有α-(1→4)糖苷键内切活性的α-淀粉酶对枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的活性更高的枸杞多糖酶解物——枸杞活性多糖。此方法不仅有利于规模化工业生产，而且产品质量目标性很强，产品质量稳定性得以保证。
Description
技术领域
属于传统农业改造领域，和生物工程领域，主要应用领域是保健食品。
背景技术
植物多糖类物质具有广泛的生理活性，如抗肿瘤、增强免疫力、抗衰老等，已被开发成抗肿瘤药、延缓衰老药。但目前植物多糖类的利用或开发存在以下两个方面的问题：
其一是在植物药化学成分提取过程中，多数使用酒精为溶剂，或者以水为溶剂再醇沉除去多糖类，因此植物多糖类在工业生产过程中常未被利用。
其二是植物多糖属于大分子类，多糖分子量及其分布对多糖的生物活性影响较大，大分子多糖很难在体内发挥多糖的生物活性。Blaschek(1992)，Fabre(1984)，Kojima(1986)研究就已发现，分子的大小是多糖具备生物活性的必备条件，这可能同多糖分子形成的高级构型有关。
目前枸杞子也被广泛用于保健食品开发，其常规工艺是以40-60度酒精冷浸或加热提取，在该条件下，多糖类物质不能溶解于提取液中，所以多糖类物质被丢弃了，在产品质量标准中一般不使用多糖为指标。目前亦有直接对枸杞药材进行水提取多糖的工艺，而且产品亦以多糖为指标，但由于成分复杂，而且需要粉碎，含量也较低(一般在40-50％)。
目前枸杞多糖的利用方式皆为直接将枸杞提取物混合入其它原料中进行配料，亦见专利(02115382.5)报道了膜分离枸杞多糖而得到不同分子量范围的不同组份，甚至还有采取柱层析的分离纯化方法(专利号02108915.9)，前者是分离出不同分子量范围的多糖，但不能转化全部多糖为目标分子量范围多糖，结果还是浪费了原料资源；后者显然不适宜于大规模工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提出一种枸杞活性多糖制备方法，解决以下两个问题：一是将枸杞子中的枸杞多糖利用起来；二是提高枸杞多糖活性。
本发明的技术方案是：一种枸杞活性多糖制备方法，其特征在于：用经过40-60度酒精冷浸或加热提取后的枸杞药渣为原料，以水为溶剂再进行水提取，从而获得枸杞多糖提取物；
选择具有α-(1→4)糖苷键内切活性的α-淀粉酶对枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的活性更高的枸杞多糖酶解物——枸杞活性多糖。
如上所述的枸杞活性多糖制备方法，其特征在于具体步骤如下：
①秤取200g已干燥的枸杞药渣，加入1800-2200ml水置于70-90℃水浴搅拌提取2-4小时，提取多次，合并全部提取液，冷却后过滤，减压浓缩后进行醇沉，并以乙醇洗涤沉淀多次，将沉淀置于真空干燥箱内干燥，得黄棕色多糖粉；多糖粉末以水溶解为多糖溶液，备用；
②取40ml多糖溶液与20ml酶液(以500ml pH4.5醋酸缓冲液溶解0.02g5000u/g的淀粉酶粉)混合，40℃水浴15-30min，然后煮沸将酶灭活，再加入乙醇析出酶蛋白，3000rpm离心得沉淀物真空干燥，即得枸杞多糖酶解物干粉。
枸杞多糖含有4个级分，分子质量均为2万以上，是由阿拉伯糖(Ara)，鼠李糖(Rha)，木糖(Xyl)，甘露糖(Man)，半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)，6种中性单糖和半乳糖醛酸及18种氨基酸组成的复合性多糖，主要为β-(1→4)(1→6)连接，含有少量的α-(1→4)(1→6)连接。
本发明方法是基于枸杞多糖含有少量的α-(1→4)(1→6)糖苷键，选择具有α-(1→4)糖苷键内切活性的α-淀粉酶对枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的活性多糖(活性增强这一事实得到了验证)。此方法不仅有利于规模化工业生产，而且产品质量目标性很强，产品质量稳定性得以保证。
具体的实施方式
本发明的枸杞活性多糖制备方法，其特征在于：用经过40-60度酒精冷浸或加热提取后的枸杞药渣为原料，以水为溶剂再进行水提取，从而获得枸杞多糖提取物；
选择具有α-(1→4)糖苷键内切活性的α-淀粉酶对枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的活性更高的枸杞多糖酶解物。
本发明的枸杞活性多糖制备方法，其一般步骤如下：
①秤取200g已干燥的枸杞药渣，加入1800-2200ml水置于70-90℃水浴搅拌提取2-4小时，提取多次，合并全部提取液，冷却后过滤，减压浓缩后进行醇沉，并以乙醇洗涤沉淀多次，将沉淀置于真空干燥箱内干燥，得黄棕色多糖粉；多糖粉末以水溶解为多糖溶液，备用；
②取40ml多糖溶液与20ml酶液(以500ml pH4.5醋酸缓冲液溶解0.02g5000u/g的淀粉酶粉)混合，，40℃水浴15-30min，然后煮沸将酶灭活，再加入乙醇析出酶蛋白，3000rpm离心得沉淀物真空干燥，即得枸杞多糖酶解物干粉。
工艺步骤举一较好的实施例如下：
秤取经40-60％乙醇提取过的200g已干燥的枸杞药渣，加入2000ml水置于80℃水浴搅拌提取2-4小时，共提取3-4次，合并全部提取液，冷却后过滤，减压浓缩至提取液体积的1/10，进行醇沉，并以95％乙醇洗涤沉淀2-3次。将沉淀置于真空干燥箱内干燥，得黄棕色粉末98g，经测定，其含量为63.4％。多糖粉末以水溶解为糖液，定容至1800ml，备用。
取40ml糖液与20ml酶液(以500ml pH4.5醋酸缓冲液溶解0.02g5000u/g的淀粉酶粉)，混合，40℃水浴15-30min，然后煮沸10min将酶灭活，再缓慢加入95％乙醇析出酶蛋白，3000rpm离心15min得沉淀物真空干燥，即得枸杞多糖酶解物干粉。以激光散射法进行分子量测定，得到酶解前后多糖的分子量如下：酶解前组份1Mw＝33390，组份2Mw＝38340；酶解后组份1Mw＝17110，组份2Mw＝16840。并经动物实验证实该酶解物较粗多糖对增加小鼠免疫功能具有显著的提高。
Claims (1)
1.一种枸杞活性多糖制备方法，其特征在于：用经过40-60度酒精冷浸或加热提取后的枸杞药渣为原料，以水为溶剂进行提取，从而获得枸杞多糖提取物；
选择具有α-(1→4)糖苷键内切活性的α-淀粉酶对枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的活性更高的枸杞多糖酶解物——枸杞活性多糖；
具体步骤如下：
①秤取200g已干燥的枸杞药渣，加入1800-2200ml水置于70-90℃水浴搅拌提取2-4小时，提取多次，合并全部提取液，冷却后过滤，减压浓缩后进行醇沉，并以乙醇洗涤沉淀多次，将沉淀置于真空干燥箱内干燥，得黄棕色多糖粉；多糖粉末以水溶解为多糖溶液，备用；
②取40ml多糖溶液与20ml酶液混合，酶液——以500ml pH4.5醋酸缓冲液溶解0.02g 5000u/g的淀粉酶粉，40℃水浴15-30min，然后煮沸将酶灭活，再加入乙醇析出酶蛋白，3000rpm离心得沉淀物真空干燥，即得枸杞多糖酶解物干粉。
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| 高春燕,李蕴成,田呈瑞.枸杞多糖酶法提取及其对油脂抗氧化性能研究.粮食与油脂.2007,(01),31-33. * |
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