CN101102665A - 酪蛋白激酶胁迫相关多肽及其用于植物的方法 - Google Patents

Abstract

由酪蛋白激酶胁迫相关多肽(CKSRP)的编码核酸转化的转基因植物，其中核酸序列在植物中的表达使其相对于该植物野生型对环境胁迫的耐受性增强。本发明还提供了由该转基因植物产生的包括种子在内的农产品。还提供了分离的CKSRP、分离的CKSRP编码核酸以及含有后者的载体和宿主细胞。

Description

酪蛋白激酶胁迫相关多肽及其用于植物的方法

相关申请的交互参考

本申请为要求于2004年11月17日递交的美国申请号10/904,588优先权的国际申请，是递交于2001年4月6日的美国申请号09/828,313的继续申请，后者要求于2000年4月7日递交的美国临时专利申请系列号60/196,001的优先权。美国申请号10/904,588也是递交于2002年11月12日的美国申请号10/292,408的继续申请，要求于2001年11月9日递交的美国临时专利申请系列号60/346,096的优先权。所述申请的完整内容在此处引用作为参考。

发明背景

发明领域：本发明主要涉及编码植物中非生物胁迫反应和非生物胁迫耐受性相关多肽的核酸序列。具体而言，本发明涉及编码赋予植物旱、冷和/或盐耐受性的多肽的核酸序列。

背景技术：非生物环境胁迫如旱胁迫、盐胁迫、热胁迫和冷胁迫，是植物生长和生产力的主要限制因素。由这些胁迫所导致的主要农作物如大豆、稻、玉米、棉花和小麦的作物损失和作物产量损失具有重要的经济和政治意义，造成了许多不发达国家的粮食短缺。

植物在其生活周期中一般都会面临环境水含量减少的情况。大多数植物进化产生了保护自己免受这些干旱情况影响的策略。然而，如果干旱情况的严重程度过高、持续时间过长，对大部分作物植物的发育、生长和产量都会产生深远影响。持续暴露于干旱会引发植物新陈代谢的显著变化，最终导致细胞死亡和随即的产量损失。

研发胁迫耐受性植物是可能解决或缓和至少部分这些问题的策略。然而，常规采用植物育种产生对这些胁迫具有耐受性的新植物物种的策略相对缓慢，而且需要特定的耐受性物种与所需物种进行杂交。胁迫耐受性的胚质资源有限，以及远亲植物物种间的杂交不相容性给常规育种带来了巨大问题。此外，在抗旱和/或抗盐的模型植物中导致旱、冷和盐耐受性的细胞过程性质复杂，包括细胞适应的多重机制和无数代谢路径。这一胁迫耐受性多元性不仅使耐受性育种多以失败告终，还限制了利用生物技术方法对胁迫耐受性植物进行遗传工程操作的能力。

旱胁迫、热胁迫、冷胁迫和盐胁迫具有植物生长的重要共同要素，即水的可得性。如上所述，大多数植物进化产生了保护自身免受干旱环境影响的策略；然而，如果干旱情况的严重程度过高、持续时间过长，对大部分作物植物的发育、生长和产量都会产生深远影响。此外，大多数作物植物易受土壤中较高盐浓度的影响。由于某些土壤的高盐含量会导致细胞可摄取水量的减少，高盐浓度对植物的影响与干旱对植物的影响具有类似之处。此外，在冰冻温度下，植物细胞由于起始于质外体的结冰从共质体中吸取水而丢失水分。植物对这些胁迫中每一种均具有共同的分子应答机制，而蛋白激酶如酪蛋白激酶在这些分子机制中发挥重要作用。

蛋白激酶形成一个超家族，这一超家族成员催化ATP中磷酸基团向靶多肽上丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸氨基酸侧链的可逆转运。蛋白激酶为植物中信号转导过程的基础元件，已有人报道其在细胞(以及植物)应答环境刺激的信号感知和转导中发挥关键作用。具体而言，酪蛋白激酶I蛋白质为含有高度保守的中央激酶结构域的单体丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶。该家族成员具有多变的N-末端和C-末端延伸。N-末端区域负责底物识别，而C-末端延伸对于激酶与底物的相互作用至关重要。C-末端延伸对通过自磷酸化介导的调节也起重要作用(Gross和Anderson，1998 Cell Signal10：699-711；Graves和Roach，1995，J Biol Chem 270：21689-21694)。

尽管已经表征了涉及植物中胁迫应答和水利用效率的某些基因，对产生胁迫耐受性和水利用效率的植物基因的表征和克隆仍然相当欠缺和破碎。例如，一些研究提示，某些植物中旱胁迫和盐胁迫可能是叠加基因效应所致，而另一些研究则认为植物营养组织中的特定基因在渗透性胁迫时发生了转录活化。虽然一般认为胁迫诱导蛋白在耐受性中发挥一定作用，仍然缺乏直接证据，许多胁迫应答基因的功能仍为未知。

所有陆生光合作用生物中，都存在CO₂吸收和水丢失之间的基本生理化学强制性平衡(Taiz和Zeiger1991 Plant Physiology，Benjamin/Cummings Publishing Co，94页)。CO₂必须处于水溶液中，CO₂固定酶如核酮糖二磷酸缩化酶-加氧酶(Rubisco，核酮糖-1，5-二磷羚化酶/加氧酶)和PEPC(磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶)才能发挥作用。由于CO₂扩散需要湿润的细胞表面，当湿度低于100％时将会不可避免地发生蒸发(Taiz和Zeiger 1991 Plant Physiology，Benjamin/Cummings Publishing Co257页)。植物具有多种生理机制减少水分丢失(例如蜡角质层、气孔关闭、叶毛、下陷气孔窝)。由于这些屏障对于水和CO₂的流出并无差别，这些保水措施也能增强对CO₂摄取的耐受性(Kramer 1983 Water Relations ofPlants，Academic Press 305页)。光合作用性CO₂摄取对于光合自养植物的植物生长和生物量累积是绝对必要的。水利用效率(WUE)是估计水消耗和CO₂摄取/生长之间平衡时常用的参数(Kramer 1983 Water Relations ofPlants，Academic Press 405页)。可以通过多种方法定义和计算WUE。一种方法是计算整个植物干重与该植物一生中消耗水分重量的比值(Chu等人1992 Oecologia 89：580)。另一方法是测量更短时间间隔内的生物量累积和水分利用(Mian等人1998 Crop Sci.38：390)。通常只测量植物中的局限部分，例如仅测量地上部生长量和水利用(Nienhuis等人1994 Amer J Bot81：943)。也可定义WUE为一片叶子或其部分中CO₂摄取与水蒸汽丢失的比值，通常在很短时期内(秒/分钟)测量(Kramer 1983 Water Relations ofPlants，Academic Press 406页)。利用同位素比质谱仪测量的植物组织中固定的¹³C/¹²C比，也可用于估计使用C₃光合的植物中的WUE(Martin等人1999 Crop Sci.1775)。

WUE的提高对生长和水消耗效率的相对改善具有提示意义，但其本身并不能描述这两个过程中何者(或两者都)发生了改变。选择改良作物的性状时，由于水利用减少但生长无改变导致的WUE提高，在水输入耗费昂贵的灌溉农业系统中具有特别优点。主要由生长增加而无相应水利用上升而导致的WUE提高，则可应用于所有的农业体系。在许多供水不受限的农业系统中，即使是以水利用增加为代价(即WUE不改变)的生长增加也能提高产量。因此，需要能同时提高WUE和生物量累积的新方法来提高农业生产力。由于WUE整合了涉及初级代谢和水利用的许多生理学过程，其通常是受到环境相互作用具有广泛基因型的高度多基因性状，(Richards等人2002 Crop Sci 42：111)。由于这种种原因，常规育种项目中鲜有选择WUE改变的尝试获得成功。

因此，需要鉴定在胁迫耐受性植物和水利用有效植物中表达的基因，所述基因能够赋予其宿主植物或其他植物物种胁迫耐受性和水利用效率。新产生的胁迫耐受性植物将具备多种优势，例如通过如降低植物物种的水需求而扩大作物的可培育范围。其他有利优势包括对倒伏的耐受性，即风、雨、虫害或病害引起的苗或茎弯折。

发明概述

本发明部分实现了鉴定新的独特酪蛋白激酶的需求，所述激酶在过量表达时使植物具有胁迫耐受性。本发明描述了对调节植物对环境胁迫应答具有重要作用的新型酪蛋白激酶胁迫相关多肽(CKSRP)及CKSRP编码核酸。更具体而言，这些CKSRP编码核酸在植物中的过量表达，导致该植物对环境胁迫的耐受性增加。

因此，本发明包括分离的含有CKSRP编码核酸的植物细胞，其中该核酸序列在植物细胞中的表达导致其对环境胁迫的耐受性相对于该植物细胞野生型品种增加。优选该CKSRP来自小立碗藓(Physcomitrella patens)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或欧洲油菜(Brassica napus)。即此处所述的为小立碗藓酪蛋白激酶-4(PpCK-4或EST 289)、小立碗藓酪蛋白激酶-1(PpCK-1或EST 194)、小立碗藓酪蛋白激酶-2(PpCK-2或EST 263)、小立碗藓蛋白激酶-4(PpPK-4或EST 142)、酿酒酵母酪蛋白激酶-1(ScCK-1或ORF 760)、欧洲油菜酪蛋白激酶-1(BnCK-1)、欧洲油菜酪蛋白激酶-2(BnCK-2)。欧洲油菜酪蛋白激酶-3(BnCK-3)、欧洲油菜酪蛋白激酶-4(BnCK-4)和欧洲油菜酪蛋白激酶-5(BnCK-5)。

本发明某些实施方案中提供的CKSRP及其编码核酸见于小立宛藓(Physcomitrella)、酵母(Saccharomyces)或芸苔(Brassica)属成员。在另一优选实施方案中，核酸及多肽来自小立碗藓或欧洲油菜植物或酿酒酵母。本发明中的环境胁迫可为盐、旱、温度、金属、化学物、病原体和氧化胁迫或其组合。在优选实施方案中，环境胁迫选自干旱、高盐和低温中的一种或几种。

本发明还提供了CKSRP编码核酸转化的转基因植物产生的种子，其中所述植物为对环境胁迫耐受性相对于该植物野生型品种增强的真实遗传。

本发明还提供了下述任意转基因植物、植物部分或种子产生的农产品。本发明还提供了下述分离的CKSRP。本发明还提供了分离的CKSRP编码核酸，其中CKSRP编码核酸编码下述的CKSRP。

本发明还提供了分离的含有下述CKSRP编码核酸的重组表达载体，其中该载体在宿主细胞的表达使其对环境胁迫的耐受性相对于该宿主细胞的野生型品种增强。本发明还提供了含有载体的宿主细胞和含有该宿主细胞的植物。

本发明还提供了产生含CKSRP编码核酸的转基因植物的方法，其中该核酸在植物中的表达导致其对环境胁迫的耐受性相对于该植物的野生型品种增强，包括：(a)利用含有CKSRP编码核酸的表达载体转化植物细胞，以及(b)从该植物细胞中产生对环境胁迫的耐受性相对于该植物野生型品种增强的转基因植物。优选实施方案中的CKSRP和CKSRP编码核酸如下所述。

本发明还提供了鉴定新CKSRP的方法，包括(a)引起对下述CKSRP或其片段的特异性抗体应答；(b)利用该抗体筛选可能的CKSRP材料，其中抗体与材料的特异性结合提示可能存在新的CKSRP；以及(c)从结合材料中鉴定相对于已知CKSRP的新CKSRP。或者与下述核酸探针杂交可用于鉴定新CKSRP核酸。

本发明也提供了修饰植物胁迫耐受性的方法，包括修饰如下述CKSRP核酸在植物中的表达。可实施本发明提供的方法来增强或降低胁迫耐受性。优选通过提高CKSRP核酸的表达增强植物的胁迫耐受性。

附图简述

图1显示过量表达PpCK-1的转基因植物以及野生型拟南芥(Arabidopsis)株系的干旱胁迫测试结果。转基因株系呈现耐受性表型。显示了个体转化株系。

图2显示过量表达PpCK-1的转基因植物以及野生型拟南芥株系的冰冻胁迫测试结果。转基因物种呈现耐受性表型。显示了个体转化株系。

图3显示过量表达PpCK-2的转基因植物以及野生型拟南芥株系的干旱胁迫测试结果。转基因物种呈现耐受性表型。显示了个体转化株系。

图4的图表说明了公开的小立碗藓和酿酒酵母酪蛋白激酶与其他已知酪蛋白激酶的相对同源性。

图5显示五种公开的小立碗藓和酿酒酵母酪蛋白激酶的氨基酸序列与其他已知酪蛋白激酶的氨基酸序列的比对(按出现顺序分别为SEQ IDNOS 10、47-48、6、4、2、49-52、8和53)。阴影表示在每一序列中均保守的氨基酸残基，以及那些在某些或所有序列中相同或相似的氨基酸残基。

图6的图表说明了五种公开的小立碗藓和酿酒酵母酪蛋白激酶与公开的欧洲油菜、亚麻籽、小麦、大麦、向日葵和大豆酪蛋白激酶的相对同源性。

图7显示五种公开的小立碗藓和酿酒酵母酪蛋白激酶的氨基酸序列与公开的欧洲油菜、亚麻籽、小麦、大麦、向日葵和大豆酪蛋白激酶的氨基酸序列的比对。基因ID和SEQ ID NO的对应性见表A。该图也提示了基于比对序列的酪蛋白激酶I的一致序列。阴影提示在每一序列中均保守的氨基酸残基，以及那些在某些或所有序列中相同或相似的氨基酸残基。

图8：在组成型启动子控制下拟南芥中过量表达PpPK-4、PpCK-4、PpCK-2或PpCK-1。测定转基因株系的相对水利用效率(WUE)、干重(DW)和植物水利用(E)(与对照的％差别)。

发明详述

参考以下本发明优选实施方案的详细描述和此处包括的实施例，有助于理解本发明。然而，在公开和描述本化合物、组合物和方法前，应当理解本发明并不仅限于特定核酸、特定多肽、特定细胞类型、特定宿主细胞、特定条件或特定方法等，因为这些显然会发生变化；对其多种修饰和改变对于本领域技术人员而言显而易见。还应当理解此处所用的术语仅为描述特定实施方案而不意在限制。具体而言，命名氨基酸序列为多肽“酪蛋白激酶胁迫相关多肽”(CKSRP)，并不限制那些序列的功能性。

本发明描述了对调节植物应答环境胁迫有重要作用的新型CSKRP和CSKRP编码核酸。更具体而言，这些CSKRP编码核酸在植物中的过量表达会导致该植物对环境胁迫的耐受性增强。该CKSRP属的代表成员包括但不仅限于PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5。在优选实施方案中，该属的所有成员均为生物活性的酪蛋白激酶。

因此，本发明包括CKSRP多核苷酸和多肽序列，及其在提高植物对环境胁迫耐受性中的用途。在一个实施方案中，CKSRP序列来自植物，优选为小立碗藓植物或芸苔植物，更优选为小立碗藓植物或欧洲油菜植物。在另一个实施方案中，CKSRP序列包括PpCK-1(SEQ ID NOS：3和4)、PpCK-2(SEQ ID NOS：5和6)、PpCK-4(SEQ ID NOS：1和2)、PpPK-4(SEQID NOS：7和8)、ScCK-1(SEQ ID NOS：9和10)、BnCK-1(SEQ ID NOS：11和12)、BnCK-2(SEQ ID NOS：13和14)、BnCK-3(SEQ ID NOS：15和16)、BnCK-4(SEQ ID NOS：17和18)，以及BnCK-5(SEQ ID NOS：19和20)。公开的小立碗藓CKSRP序列和公开的酿酒酵母CKSRP序列与已知的酪蛋白激酶具有显著百分比的同一性，如表1所示。

表1

	ORF760	ORF760	EST142	EST142	EST194	EST194	EST 263	EST263	EST 289	EST289
												相似性(％)	同一性(％)	相似性(％)	同一性(％)	相似性(％)	同一性(％)	相似性(％)	同一性(％)	相似性(％)	同一性(％)
ORF760			32.9	25.4	33.4	24.7	43.3	34.5	42.0	32.4
											AAB68417	50.9	41.2	36.3	26.0	36.8	26.5	42.7	32.8	41.9	31.4
AAA35230	48.8	39.4	36.2	25.8	36.9	26.1	42.3	31.3	43.2	31.1
											EST 263	43.3	34.5	40.4	32.5	40.5	33.2			80.8	74.0
EST 194	33.4	24.7	90.2	86.9			40.5	33.2	42.0	32.4
											EST 289	42.0	32.4	41.3	33.3	41.7	33.7	80.8	74.0
AAH06490	43.7	33.4	44.2	34.6	43.0	33.8	63.7	53.8	63.9	53.4
											AAH03558	42.4	33.0	43.7	34.5	44.1	34.9	63.2	54.5	65.0	54.2
AAH08717	39.7	31.5	50.7	40.0	51.7	40.7	53.3	45.8	54.1	46.7
											AAD26525	41.6	32.8	43.6	32.3	42.5	31.9	48.9	38.4	49.0	38.0
EST 142	32.9	25.4			90.2	86.9	40.4	32.5	41.3	33.3
											AJ487966	44.8	33.6	40.1	30.7	40.5	30.9	72.0	58.6	68.7	55.9

本发明提供了由CKSRP编码核酸转化的转基因植物细胞，其中该核酸序列在植物细胞中的表达导致其对环境胁迫的耐受性相对于该植物细胞野生型品种增强。本发明还提供含有此处所述植物细胞的转基因植物部分和转基因植物。植物部分包括但不仅限于茎、根、胚珠、雄蕊、叶、胚芽、分生组织区、愈伤组织、配子体、孢子体、花粉、小孢子等。在某一实施方案中，转基因植物为雄性可育。也提供了由CKSRP编码核酸转化的转基因植物产生的植物种子，其中种子含有CKSRP编码核酸且其中该植物为对环境胁迫的耐受性相对于该植物细胞野生型品种增强的真实遗传。本发明还提供了由表达CKSRP的转基因植物产生的种子，其中种子含有CKSRP编码核酸且其中该植物为对环境胁迫的耐受性相对于该植物细胞野生型品种增强的真实遗传。本发明也提供了下述任意转基因植物、植物部分及植物种子产生的农产品。农产品包括但不仅限于植物提取物、蛋白质、氨基酸、碳水化合物、脂肪、油、聚合物、维生素等。

此处所用的术语“品种”是指同一物种内具有恒定特征从而将其与该物种中的一般形式或其他可能存在的品种区分开的一组植物。虽然具有至少一种独特性状，品种的特征亦在于品种内个体间存在一些差异，所述差异主要是基于连续传代子代中性状的孟德尔分离。若“品种”为某一性状的遗传纯合子，以至于其自交产生的子代中不出现可观量该性状的独立分离，则该“品种”为该性状的“真实遗传”。在本发明中，该性状由导入植物品种内的一个或多个DNA序列的转基因表达而产生。

本发明首次描述了小立碗藓CKSRP，PpCK-1、PpCK-2、PpCk-4和PpPK-4；酿酒酵母CKSRP ScCK-1；和欧洲油菜CKSRP，BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5可用于增强植物对环境胁迫的耐受性。此处所用的术语多肽是指含有至少4个由肽键相连的氨基酸链。该链可为线性、分支、环状或其组合。因此，本发明提供了选自PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5及其同源物的分离CKSRP。在优选实施方案中，CKSRP选自：1)SEQ ID NO：4定义的小立碗藓酪蛋白激酶-1(PpCK-1)多肽；SEQ IDNO：6定义的小立碗藓酪蛋白激酶-2(PpCK-2)多肽；SEQ ID NO：1定义的小立碗藓酪蛋白激酶-4(PpCK-4)多肽；SEQ ID NO：8定义的小立碗藓蛋白激酶-4(PpPK-4)多肽；SEQ ID NO：10定义的酿酒酵母酪蛋白激酶-1(ScCK-1)多肽；SEQ ID NO：12定义的欧洲油菜酪蛋白激酶-1(BnCK-1)多肽；SEQ ID NO：14定义的欧洲油菜酪蛋白激酶-2(BnCK-2)多肽；SEQ IDNO：16定义的欧洲油菜酪蛋白激酶-3(BnCK-3)多肽；SEQ ID NO：18定义的欧洲油菜酪蛋白激酶-4(BnCK-4)多肽；SEQ ID NO：20定义的欧洲油菜酪蛋白激酶-5(BnCK-5)多肽；及其同源物和直系同源物。氨基酸序列的同源物和直系同源物定义如下。

本发明的CKSRP优选由重组DNA技术产生。例如，将编码多肽的核酸分子克隆入表达载体(如下述)，将该表达载体导入宿主细胞(如下述)，并使CKSRP在宿主细胞中表达。可以利用标准多肽纯化技术，经合适的纯化步骤将CKSRP从细胞中分离出来。在本发明中，术语“重组多核苷酸”是指经遗传工程改变、重排或修饰的多核苷酸。其实例包括任何克隆的多核苷酸，以及与异源序列相连的多核苷酸。术语“重组”并非指自然发生事件导致的多核苷酸改变，如自发突变。除了重组表达外，可以利用标准肽合成技术化学合成CKSRP或其肽。此外，可利用如抗-CKSRP抗体从细胞(如小立碗藓、酿酒酵母或欧洲油菜细胞)中分离出天然的CKSRP，所述抗体可利用CKSRP或其片段通过标准技术产生。

此处所用的术语“环境胁迫”，是指涉及盐、干旱、温度、金属、化学物、病原体和氧化胁迫或其组合的次佳条件。在优选实施方案中，环境胁迫可选自盐、干旱或温度或其组合中的一种或多种；更具体而言，可选自高盐、低水含量或低温中的一种或多种。也应当理解用于该说明书及权利要求书中的“一个”或“一种”，可依据使用语境不同表示一种或多种。因此，“一个细胞”可表示至少使用一个细胞。对于也用于此处的术语“水利用效率”，是指植物生产出的有机物质量除以植物在生产时所利用的水量，即相对于植物用水的植物干重。

也用于此处的术语“核酸”和“多核苷酸”，是指线性或分支、单链或双链的RNA或DNA或其杂交。该术语也包括RNA/DNA杂交物。这些术语也包括位于基因编码区3’和5’端的非翻译序列：编码区5’端上游至少约1000个核苷酸序列以及该基因编码区3’端下游至少约200个核苷酸序列。不常见碱基如肌苷、5-甲基胞嘧啶、6-甲基腺嘌呤、次黄嘌呤等也可用于反义、dsRNA和核酶配对。例如，含有尿嘧啶和胸腺嘧啶C-5丙炔类似物的多核苷酸能以高亲和力结合RNA，是基因表达的潜在反义抑制物。也可进行其他修饰，如对磷酸二酯主干或RNA核糖基团的2’-羟基进修饰。反义多核苷酸和核酶可完全由核糖核苷酸组成，也可含有混合的核糖核苷酸及脱氧核糖核苷酸。可通过包括基因组制备、cDNA制备、体外合成、RT-PCR以及体外或体内转录等任意方法生产本发明的多核苷酸。

“分离的”核酸分子为基本与该核酸天然来源中存在的其他核酸分子(即编码其他多肽的序列)分离的核酸分子。优选地，“分离”核酸中不含有某些在天然存在的复制子中与该核酸天然侧接的序列(即位于核酸5’端和3’端的序列)。例如，克隆的核酸为分离的。在多个实施方案中，分离的CKSRP核酸分子可含有少于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb在获取该核酸的细胞(如小立碗藓细胞、酿酒酵母细胞或欧洲油菜细胞)基因组DNA中与该核酸分子天然侧接的核苷酸序列。若核酸已由人工干预改变，或置于并非其天然位置的基因座或位点，或若通过农杆菌感染法将其导入细胞，则该核酸也为分离的。此外，“分离的”核酸分子如cDNA分子，可不含有其天然伴有的某些其他细胞材料，或通过重组技术生产时的培养基，或化学合成时的化学前体或其他化学物。

具体而言，排除在“分离的核酸分子”定义之外的包括：天然存在的染色体(如染色体扩散)、人工染色体文库、基因组文库和作为体外核酸制备物或转染/转化宿主细胞制备物形式的cDNA文库，其中宿主细胞为体外异源性制备物或作为单个集落的异源种群铺板。同样具体排除在外的为上述文库，其中某一特定核酸仅占据小于5％的插入载体分子的核酸数目。其他具体排除的为全细胞基因组DNA或全细胞RNA制备物(包括机械剪切或酶消化的全细胞制备物)。另外具体排除的是作为体外制备物或由电泳分离的异源混合物，其中本发明核酸尚未进一步从电泳介质中与异源核酸分离(如通过从琼脂糖凝胶或尼龙印迹的异源条带中切下单个条带来进一步分离)的全细胞制备物。

通过标准分子生物学技术及此处提供的序列信息，可以分离本发明的核酸分子，如具有核苷酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19或其部分的核酸分子。例如，可以利用此处公开的序列之一的全部或一部分，将小立碗藓CKSRP cDNA从小立碗藓文库中分离出来。此外，对含有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19中某一序列的全部或一部分的核酸分子而言，利用基于该序列设计的寡核苷酸引物、通过聚合酶链式反应能够分离之。例如，可以从植物细胞中分离mRNA(如通过Chirgwin等人，1979，Biochemistry 18：5294-5299的硫氰酸胍提取方法)，并且可利用逆转录酶制备cDNA(如可获自Gibco/BRL、Bethesda、MD的Moloney MLV逆转录酶；或可获自Seikagaku America，Inc.，St.Petersburg，FL的AMV逆转录酶)。可基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列之一设计合成用于聚合酶链式反应扩增的寡核苷酸引物。以cDNA或基因组DNA为模板，利用合适寡核苷酸引物，根据标准PCR扩增技术扩增本发明的核酸分子。将如此扩增的核酸分子克隆入合适的载体，并以DNA序列分析表征。此外，通过标准合成技术如利用自动DNA合成仪，能制备对应CKSRP核苷酸序列的寡核苷酸。

在优选实施方案中，本发明中分离的核酸分子包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列之一。这些cDNA可能含有编码CKSRP的序列(即“编码区”)，以及5’非翻译序列和3’非翻译序列。或者本发明的核酸分子可仅含有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19中任意序列的编码区，或含有分离自基因组DNA的全基因组片段。本发明也包括编码此处所述CKSRP的CKSRP编码核酸。优选的CKSRP编码核酸为编码选自PpCK-1(SEQ ID NO：4)、PpCK-2(SEQ IDNO：6)、PpCK-4(SEQ ID NO：2)、PpPK-4(SEQ ID NO：8)、ScCK-1(SEQID NO：10)、BnCK-1(SEQ ID NO：12)、BnCK-2(SEQ ID NO：14)、BnCK-3(SEQ ID NO：16)、BnCK-4(SEQ ID NO：18)和BnCK-5(SEQ ID NO：20)的CKSRP的编码核酸。

此外，本发明的核酸分子可含有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17及SEQ ID NO：19中某一序列编码区的一部分，例如可用作探针或引物的片段或者编码CKSRP生物活性部分的片段。通过小立碗藓、酿酒酵母或欧洲油菜的CKSRP基因克隆确定的核苷酸序列，可用于产生探针和引物，用于鉴定和/或克隆其他细胞类型和生物的CKRSP同源物以及其他藓类和相关物种中CKSRP同源物。编码区的部分也可编码CKSRP的生物活性片段。

此处所用的术语CKRSP的“生物活性部分”，指包含CKSRP中参与调节植物胁迫耐受性的某一部分如结构域/部分，更优选为旱耐受性或盐耐受性。在本发明中，对胁迫耐受性的调节是指含CKRSP表达盒(或表达载体)的转基因植物的胁迫耐受性相对于非转基因对照植物的胁迫耐受性增强或减少至少10％。定量胁迫耐受性的方法至少可见下文实施例7。在优选实施方案中，CKSRP的生物活性部分增强了植物对环境胁迫的耐受性。

CKSRP的生物活性部分包含含有氨基酸序列的肽，其中所述氨基酸序列来自CKSRP氨基酸序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20，或来自与CKSRP相同多肽的氨基酸序列，其中所含氨基酸少于全长CKSRP或为与CKSRP相同的全长多肽，且具有至少一种CKSRP活性。一般而言，生物活性部分(如长度为如5、10、15、20、30、35、36、37、38、39、40、50、100或更多氨基酸的肽)含有具有CKSRP活性的至少一种结构域或基序。此外，通过重组技术可制备缺失多肽其他区域的其他生物活性部分，并评估此处描述的一种或多种活性。优选地，CKSRP生物活性部分包含一个或多个选择的具有生物活性的结构域/基序或其部分，如图5和7所示的保守的中央激酶结构域。在优选实施方案中，保守的中央激酶结构域包括4个保守区，其中第一区自位点1的甘氨酸残基开始，且位点3为甘氨酸，位点5为苯丙氨酸残基；第二区位于第一区下游，自位点1的缬氨酸残基开始，位点4为赖氨酸、位点6为谷氨酸残基、位点14为谷氨酰胺残基、位点15为亮氨酸残基、位点18为谷氨酸残基、位点22为酪氨酸残基、位点32为脯氨酸残基、位点38为甘氨酸残基、位点44为天冬酰胺残基、位点50和51为亮氨酸残基、位点52为甘氨酸残基、位点53为脯氨酸残基、位点55为亮氨酸残基、位点58为亮氨酸残基、位点59为苯丙氨酸残基、位点62为半胱氨酸残基、位点66为苯丙氨酸残基、位点69为赖氨酸残基、位点70为苏氨酸残基、位点77为谷氨酰胺残基、位点79为异亮氨酸残基、位点86为组氨酸残基、位点93为精氨酸残基、位点94为天冬氨酸残基、位点96为赖氨酸残基、位点97为脯氨酸残基、位点99为天冬酰胺残基、位点100为苯丙氨酸残基、以及位点101为亮氨酸残基；第三区位于第二区下游，自位点1的天冬氨酸残基开始，位点5为丙氨酸残基、位点6赖氨酸残基、位点8酪氨酸残基、位点10天冬氨酸残基、位点13苏氨酸残基、位点16组氨酸残基、位点17异亮氨酸残基、位点18脯氨酸残基、位点19酪氨酸残基、位点20精氨酸残基、位点23赖氨酸残基、位点27甘氨酸残基、位点28苏氨酸残基、位点29丙氨酸残基、位点30精氨酸残基、位点31酪氨酸残基、位点33丝氨酸残基、位点35天冬酰胺残基、位点37组氨酸残基、位点39甘氨酸残基、位点41谷氨酸残基、位点43丝氨酸残基、位点44精氨酸残基、位点45的精氨酸残基、位点46天冬氨酸残基、位点47天冬氨酸残基、位点49谷氨酸残基、位点52甘氨酸残基、位点57酪氨酸残基、位点58苯丙氨酸残基、位点63亮氨酸残基、位点64脯氨酸残基、位点65色氨酸残基、位点66谷氨酰胺残基、位点67甘氨酸残基；而第四区位于第三区下游，自位点1的脯氨酸残基开始，位点12为精氨酸残基、位点14亮氨酸残基、位点16苯丙氨酸残基、位点20脯氨酸残基、位点21天冬氨酸残基、位点22酪氨酸残基、位点41天冬氨酸残基、位点45天冬氨酸残基，以及位点46为色氨酸残基。

本发明也提供CKSRP嵌合或融合多肽。此处所用的CKSRP“嵌合多肽”或“融合多肽”包含有效连接于非CKSRP的CKSRP。CKSRP是指具有对应于CKSRP的氨基酸序列的多肽，而非CKSRP是指具有的氨基酸序列对应于基本不同于CKSRP的多肽(如不同于CKSRP且来自相同或不同生物的多肽)的多肽。在融合多肽中，术语“有效连接”是指CKSRP与非CKSRP彼此融合，从而使两个序列都能实现所用序列的预期功能。非CKSRP可融合于CKSRP的N-末端或C-末端。例如，在一个实施方案中，融合多肽为GST-CKSRP融合多肽，其中CKSRP序列融合至GST序列的C-末端。此类融合多肽有助于重组CKSRP的纯化。在另一个实施方案中，融合多肽为在其N-末端含有异源信号序列的CKSRP。在某些宿主细胞(如哺乳动物宿主细胞)中，通过使用异源信号序列能提高CKSRP的表达和/或分泌。

优选通过标准重组DNA技术生产本发明的CKSRP嵌合或融合多肽。例如，根据常规技术将编码不同多肽序列的DNA片段按阅读框架连接在一起，如利用平头或错开末端进行连接，限制性酶消化以提供合适的末端，必要时补足粘性末端，碱性磷酸酶处理以避免不必要的结合和酶连接。在另一个实施方案中，可通过常规技术包括自动DNA合成仪合成融合基因。或者利用锚定引物实施基因片段的PCR扩增，所述锚定引物能在两个连续基因片段间产生互补突出端，从而可随后退火并再扩增以产生嵌合基因序列(见如Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel等人编辑.JohnWiley和Sons：1992)。此外，可购买得到多种编码融合部分(如GST多肽)的表达载体。可将CKSRP编码核酸克隆入此类表达载体，而使融合部分按阅读框架连接于CKSRP。

除了此处描述的CKSRP的片段和融合多肽之外，本发明还包括植物中天然CKSRP和CKSRP编码核酸的同源物和类似物。此处定义“同源物”为分别具有相似或“相同”核苷酸或氨基酸序列的两个核酸或多肽。同源物包括此处随后定义的CKSRP等位基因变体、直系同源物、旁系同源物、激动剂和拮抗剂。术语“同源物”还包括由于遗传密码简并而不同于SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17以及SEQ IDNO：19(及其部分)所示核苷酸序列之一的核酸分子，因此与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19所示核苷酸序列编码相同的CKSRP。例如，SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19的同源物描述于SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ IDNO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74和SEQ ID NO：76。

此处所用的“天然存在的”CKSRP，是指天然存在的CKSRP氨基酸序列。优选天然存在的CKSRP含有选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20的氨基酸序列。

CKSRP的激动剂可保留与CKSRP的生物活性基本相同或CKSRP的生物活性的某一亚型。CKSRP的拮抗剂能够抑制CKSRP天然存在形式的一种或多种活性。例如，CKSRP拮抗剂能竞争性结合于包括CKSRP在内的细胞膜成分代谢级联反应的下游或上游成员，或结合于介导化合物跨此类膜转运的CKSRP，从而阻断转位的发生。

基于对应CKSRP cDNA的天然等位基因变体和同源物、直系同源物、旁系同源物的核酸分子与此处所述的小立碗藓、酿酒酵母或欧洲油菜CKSRP核酸的同一性，可以使用CKSRP cDNA或其部分作为杂交探针，在严格杂交条件下根据标准杂交技术分离这些核酸分子。在备选的实施方案中，可通过筛选CKSRP突变体如平截突变体组合文库中CKSRP激动剂或拮抗剂活性，鉴定CKSRP同源物。在一个实施方案中，通过核酸水平的组合诱变产生CKSRP变体的多样性文库，该文库由多样性基因文库编码。可通过如将合成的寡核苷酸混合物酶连接入基因序列而产生CKSRP变体的多样性文库，从而使潜在CKSRP序列的简并组能以个体多肽表达，或以一组含有CKSRP序列组的更大的融合多肽(如噬菌体展示)形式表达。有多种方法可用于从简并寡核苷酸序列中产生潜在的CKSRP同源物。可在自动DNA分析仪中实施简并基因序列的化学合成，然后将合成基因连接入合适的表达载体。使用简并基因使得在同一混合物内能提供所有编码所需潜在CKSRP序列组的序列。合成简并寡核苷酸的方法为本领域公知(见如Narang，S.A.，1983，Tetrahedron 39：3；Itakura等人，1984，Annu.Rev.Biochem.53：323；Itakura等人，1984，Science 198：1056；Ike等人，1983，Nucleic Acid Res.11：477)。

此外，CKSRP编码区片段文库可用于产生CKSRP片段的多样性群体以用于筛选及随后选择CKSRP同源物。在一个实施方案中，通过在每分子仅发生约一次缺刻的条件下用核酶处理CKSRP编码序列的双链PCR片段、变性双链DNA、复性DNA以形成双链DNA(其可包括来自不同缺刻产物的正义/反义对)、利用S1核酶处理从重新形成的二聚体中除去单链部分，并将产生的片段文库连接入表达载体，来产生编码序列片段的文库。通过这一方法可以得到编码CKSRP中不同大小的N-末端、C-末端以及内部片段的表达文库。

若干用于筛选通过点突变或平截产生的组合文库基因产物的技术，以及用于筛选cDNA文库中具有选定性质的基因产物的技术为本领域公知。此类技术适用于快速筛选通过组合诱变CKSRP同源物产生的基因文库。使用最为广泛的可适用于高通量分析的筛选大型基因文库的技术，一般包括将基因文库克隆入可复制的表达载体、利用产生的载体文库转化合适细胞、并在所需活性的检测有助于分离编码该检测产物基因的载体的条件下表达组合基因。循环集成诱变(Recursive ensemble mutagenesis，REM)为提高文库中功能性突变体频率的新技术，可与筛选测定联合使用以鉴定CKSRP同源物(Arkin和Yourvan，1992，PNAS 89：7811-7815；Delgrave等人，1993，Polypeptide Engineering 6(3)：327-331)。在另一实施方案中，可通过本领域公知的方法运用基于细胞的测定分析多样性CKSRP文库。本发明还提供了鉴定新CKSRP的方法，包括(a)引起对此处所述的CKSRP或其片段的特异性抗体应答；(b)利用该抗体筛选假定的CKSRP材料，其中抗体与材料的特异性结合提示可能存在新的CKSRP；以及(c)对照已知CKSRP分析结合材料，以确定其为新的CKSRP。

如上所述，本发明包括CKSRP及其同源物。为确定两个氨基酸序列之间的序列同一性百分比(例如序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20之一及其突变型)，以可供最佳比较的方式比对序列(如可向某一多肽序列中引入空档以达到与另一多肽或核酸的最佳比对)。然后比较对应氨基酸位点上的氨基酸残基。当一个序列(如序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：20之一)中某一位点上的氨基酸残基与另一序列(如序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：18或SEQ ID NO：20的突变型)中相应位点的氨基酸残基相同，则这两个分子在该位点上是一致的。在两个核酸序列间可进行同类比较。

两序列间的序列同一性百分比为两序列共有相同位点数目的函数(即序列同一性百分比＝相同位点数目/总位点数×100)。优选本发明中分离的氨基酸同源物与核心酪蛋白激酶结构域的同一性至少为约50-60％，优选至少约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，最优选至少约96％、97％、98％、99％或更大，其中核心酪蛋白激酶结构域含有SEQ ID NO：2的残基2-304、SEQ ID NO：4的残基77-368、SEQID NO：6的残基2-294、SEQ ID NO：8的残基77-368、SEQ ID NO：10的残基77-336、SEQ ID NO：12的残基1-296、SEQ ID NO：14的残基1-296、SEQ ID NO：16的残基5-300、SEQ ID NO：18的残基1-295，或SEQ IDNO：20的残基25-327所示的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明分离的氨基酸同源物由SEQ ID NO：1中4至912位核苷酸、SEQ ID NO：3中229至1104位核苷酸、SEQ ID NO：5中4至882位核苷酸、SEQ ID NO：7中229至1104位核苷酸、SEQ ID NO：9中229至1008位核苷酸、SEQ IDNO：11中1至888位核苷酸、SEQ ID NO：13中1至888位核苷酸、SEQ IDNO：15中13至900位核苷酸、SEQ ID NO：17中1至885位核苷酸，或SEQ ID NO：19中73至981位核苷酸定义的核酸编码。

酪蛋白激酶I蛋白质家族的成员具有多变的N-末端和C-末端延伸。N-末端负责底物识别而C-末端区域对与底物的相互作用有重要作用，对于介导通过自磷酸化实现的调节也很重要(Gross和Anderson，Cell Signal1998 10：699-711；Graves和Roach，J Biol Chem 1995 270：21689-21694)。Orf 760氨基酸序列(SEQ ID NO：10)含有两个在其他酪蛋白激酶I蛋白质中没有的插入，跨越位点37至53的17个氨基酸以及跨越位点165至180的16个氨基酸。这些新插入的存在对于过量表达Orf 760的转基因系的功能和随后的表型可能很重要。酪蛋白激酶I蛋白质通过自磷酸化C-末端丝氨酸和苏氨酸残基调节自身活性(Graves和Roach J Biol Chem 1995270：21689-21694)。图5中的比对表明在同一性比对约525个氨基酸之后，发现C-末端区域存在于Orf 760、EST 263和EST 289中，而在EST142和EST194则缺失。然而，与Orf760、EST 263和EST 289不同，如图5比对所示，EST142和EST194均含有约72个氨基酸的N-末端区域。这些N-末端和C-末端区域存在与否定义了至少六类作用于胁迫应答的酪蛋白激酶I蛋白质。N-末端区域，或C-末端区域，或核心激酶结构域，或核心激酶结构域与不同或同源的N-末端和/或C-末端延伸区域的组合或定点诱变可用于改变一致的自磷酸化位点，以产生更好的农艺表型。例如，嵌合或融合多肽可含有与图5所示的任何核心激酶结构域融合，或与图5所示的任何C-末端结构域融合，或与图5所示任何多肽的核心激酶结构域和C-末端结构域融合的EST142 1-72位残基(SEQ ID NO：8的N-末端区域)。在另一实施方案中，EST289的295-473位残基(SEQ ID NO：6的C-末端区域)可与图5所示的任意多肽的核心激酶结构域，或图5所示的任意N-末端结构域，或图5所示的任意多肽的核心激酶和N-末端结构域组合，以产生赋予更好农艺表型的嵌合或融合多肽。

在另一实施方案中，本发明包括的分离的氨基酸同源物与SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQID NO：20所示的全氨基酸序列间的同一性，至少为约50-60％，优选至少约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，最优选至少为约96％、97％、98％、99％或更高。例如，SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20氨基酸序列的同源物描述于SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ IDNO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75和SEQID NO：77。

在另一实施方案中，本发明包括的分离的氨基酸同源物与SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19所示核酸序列编码的全氨基酸序列，或与如SEQ ID NO：54、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQID NO：74或SEQ ID NO：76所示的其同源物间的同一性，至少为约50-60％，优选至少约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，最优选至少为约96％、97％、98％、99％或更高。

在其他实施方案中，CKSRP氨基酸同源物与SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20的序列同一性，或与SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ IDNO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：77所述的SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20氨基酸序列同源物的序列同一性，至少为15个连续氨基酸残基，更优选至少为25个连续的氨基酸残基，最优选为至少35个连续氨基酸残基。

在另一实施方案中，本发明中分离的核酸同源物包含的核苷酸序列，与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19所示核酸序列，或与含有至少60个其连续核苷酸的部分间的同一性至少为40-60％，优选至少为约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，甚至更优选至少约95％、96％、97％、98％、99％或更高。优选的核苷酸序列比较长度为至少75个核苷酸，更优选至少100个核苷酸，而最优选为编码区全长。甚至更优选核酸同源物编码的蛋白质与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20在图5和图7所示的中央激酶结构域同源。

还优选本发明分离的核酸同源物编码的CKSRP或其部分与SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQID NO：20氨基酸序列的同一性至少为70％，且作为植物应答环境胁迫的调节物作用。在更优选的实施方案中，核酸同源物在植物中的过量表达增强了该植物对环境胁迫的耐受性。在更优选的实施方案中，核酸同源物编码作为酪蛋白激酶作用的CKSRP。

在本发明中，利用Vector NTI 6.0(PC)软件包(InforMax，7600Wisconsin Ave.，Bethesda，MD 20814)确定两个核酸或多肽序列间的序列同一性百分比。使用空位开放罚分15和空位拓展罚分6.66确定两核酸之间的同一性百分比。使用空位开放罚分10和空位拓展罚分0.1确定两个多肽间的同一性百分比。所有其他参数均设置为默认设置。为进行多重比对(聚类W运算法则)，blosum62矩阵的空位开放罚分为10，而空位拓展罚分为0.05。应当注意当确定DNA序列和RNA序列间的序列同一性时，胸腺嘧啶核苷酸等效于尿嘧啶核苷酸。

本发明另一方面提供了分离的核酸，其包含的多核苷酸在严格条件下与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19的多核苷酸杂交。更具体而言，本发明中分离的核酸分子长度为至少15个核苷酸，并在严格条件下与含有SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19所示核苷酸序列的核酸分子杂交。在其他实施方案中，核酸长度至少为30、50、100、250或更多个核苷酸。优选本发明中分离的核酸同源物包括在高度严格条件下与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：17或SEQ ID NO：19所示核苷酸序列杂交的核苷酸序列，且作为植物中胁迫耐受性调节物作用。在更优选的实施方案中，分离核酸同源物在植物中的过量表达增强了植物对环境胁迫的耐受性。在甚至更优选的实施方案中，分离核酸同源物编码作用如酪蛋白激酶的CKSRP。

此处所用的涉及DNA与DNA印迹杂交的术语“严格条件”，是指在60℃下，10×Denhart杂交溶液、6×SSC、0.5％SDS和100μg/ml变性鲑精DNA中杂交过夜。依次在3×SSC/0.1％SDS，随后在1×SSC/0.1％SDS，最后在0.1×SSC/0.1％SDS中于62℃下洗涤印迹，每次30分钟。在优选的实施方案中短语“高度严格条件”也用于此处，是指在6×SSC溶液、65℃下杂交过夜。在另一实施方案中，“高度严格条件”是指在65℃下，10×Denhart杂交溶液、6×SSC、0.5％SDS和100μg/ml变性鲑精DNA中杂交过夜。依次在3×SSC/0.1％SDS，随后在1×SSC/0.1％SDS，最后在0.1×SSC/0.1％SDS中于65℃洗涤印迹，每次30分钟。核酸杂交的方法见于Meinkoth和Wahl，1984，Anal.Biochem.138：267-284；CurrentProtocols in Molecular Biology，第2章，Ausubel等人编辑，GreenePublishing and Wiley-Interscience，New York，1995；以及Tijssen，1993，Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology：Hybridization with Nucleic Acid Probes，第I部分，第2章，Elsevier，NewYork，1993。优选本发明中分离的核酸分子对应于天然存在的核酸分子，其在严格或高度严格条件下与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19序列杂交。此处所用的“天然存在”的核酸分子，是指具有天然存在核苷酸序列(如编码天然多肽)的RNA或DNA分子。在一个实施方案中，该核酸编码天然存在的小立碗藓CKSRP、酿酒酵母CKSRP或欧洲油菜CKSRP。

利用上述方法和其他本领域技术人员已知的方法，本领域普通技术人员能分离CKSRP的同源物，其包含如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列。此类同源物说明见如SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ IDNO：73、SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：77。

表A为基因ID与序列表中SEQ ID NO的对照。

表A

基因ID	序列类型	序列性质	SEQ ID NO	生物
					EST263	DNA	全长	1	小立碗藓
EST263	蛋白质	全长	2	小立碗藓
					EST194	DNA	全长	3	小立碗藓
EST194	蛋白质	全长	4	小立碗藓
					EST289	DNA	全长	5	小立碗藓
EST289	蛋白质	全长	6	小立碗藓
					EST142	DNA	全长	7	小立碗藓

EST142	蛋白质	全长	8	小立碗藓
					ORF760	DNA	全长	9	酵母
ORF760	蛋白质	全长	10	酵母
					BN42723666	DNA	全长	11	油菜
BN42723666	蛋白质	全长	12	油菜
					BN51274564	DNA	全长	13	油菜
BN51274564	蛋白质	全长	14	油菜
					BN51362554	DNA	全长	15	油菜
BN51362554	蛋白质	全长	16	油菜
					BN51390516	DNA	全长	17	油菜
BN51390516	蛋白质	全长	18	油菜
					BN51392938	DNA	全长	19	油菜
BN51392938	蛋白质	全长	20	油菜
					AAB68417	蛋白质	全长	47	酵母
AAA35230	蛋白质	全长	48	酵母
					AAH06490	蛋白质	全长	49	人
AAH03558	蛋白质	全长	50	人
					AAH08717	蛋白质	全长	51	人
AAD26525	蛋白质	全长	52	人
					AJ487966	蛋白质	全长	53	稻
HV62560799	DNA	全长	54	大麦
					HV62560799	蛋白质	全长	55	大麦
GM59629961	DNA	全长	56	大豆
					GM59629961	蛋白质	全长	57	大豆
GM59587121	DNA	全长	58	大豆
					GM59587121	蛋白质	全长	59	大豆
TA60000862	DNA	全长	60	小麦
					TA60000862	蛋白质	全长	61	小麦
GM59702429	DNA	全长	62	大豆

GM59702429	蛋白质	全长	63	大豆
					LU61714150	DNA	全长	64	亚麻籽
LU61714150	蛋白质	全长	65	亚麻籽
					BN42182310	DNA	全长	66	油菜
BN42182310	蛋白质	全长	67	油菜
					HA66640192	DNA	全长	68	向日葵
HA66640192	蛋白质	全长	69	向日葵
					GM59587863	DNA	全长	70	大豆
GM59587863	蛋白质	全长	71	大豆
					BN51270917	DNA	全长	72	油菜
BN51270917	蛋白质	全长	73	油菜
					BN51343700	DNA	全长	74	油菜
BN51343700	蛋白质	全长	75	油菜
					TA59828214	DNA	全长	76	小麦
TA59828214	蛋白质	全长	77	小麦

这些同源物的一种亚型为等位基因变体。此处所用的术语“等位基因变体”是指含有导致CKSRP氨基酸序列改变且存在于自然种群中(如植物物种或品种)的多态性的核苷酸序列。此类天然等位基因变体一般会造成1-5％的CKSRP核酸差异。通过在多种不同植物中测序目标核酸的序列能鉴定等位基因变体，利用杂交探针可容易地鉴定那些植物中相同的CKSRP基因座。任意及所有由天然等位变异造成且不改变CKSRP功能活性的此类CKSRP的核酸变体及产生的氨基酸多态性或变异性，均包括在本发明范围内。

此外，编码相同或其他物种CKSRP的核酸分子如CKSRP类似物、直系同源物和旁系同源物，均在本发明范围内。此处所用的术语“类似物”，是指具有相同或相似功能，但在非相关生物中独立进化而来的两个核酸。此处所用的术语“直系同源物”是指来自不同物种但根据物种形成由共同祖先基因进化而来的两个核酸。通常直系同源物编码具有相同或相似功能的多肽。也用于此处的术语“旁系同源物”是指通过基因组内重复而相关的两个核酸。旁系同源物通常具有不同的功能，但这些功能可能相关(Tatusov，R.L.等人，1997，Science 278(5338)：631-637)。天然CKSRP的类似物、直系同源物和旁系同源物可由于翻译后修饰、氨基酸序列不同或两者，而与天然CKSRP不同。翻译后修饰包括多肽的体内和体外化学衍生作用，如乙酰化、羧化、磷酸化或糖基化，且此类修饰发生于多肽合成或加工时或用分离的修饰酶处理后。具体而言，本发明的直系同源物一般与天然存在CKSRP氨基酸序列的所有或部分的序列同一性至少为80-85％、更优选85-90％或90-95％、最优选95％、96％、97％、98％或甚至99％或100％，且具有类似于CKSRP的功能。优选本发明的CKSRP直系同源物作用如植物中环境胁迫应答的调节物和/或作用如酪蛋白激酶。更优选CKSRP直系同源物增强了植物的胁迫耐受性。在一个实施方案中，CKSRP直系同源物保留了参与植物细胞膜的构建或分子跨此类膜的转运所必需的化合物代谢的能力。

除了种群中可能存在的天然存在的CKSRP序列变体外，技术人员还知道可通过突变将改变导入SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19的核苷酸序列中，从而改变编码CKSRP的氨基酸序列而不影响CKSRP的功能活性。例如，可在SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ IDNO：19序列中实施核苷酸置换而引发“非必需”氨基酸残基处的氨基酸置换。“非必需”氨基酸残基为可从CKSRP的野生型序列中改变却不会影响所述CKSRP活性的氨基酸残基，而“必需”氨基酸残基为CKSRP活性所必需。然而，其他氨基酸残基(如在那些具CKRSP活性的结构域中非保守或仅半保守的氨基酸残基)可能对活性并非必需，因此可能可以改变而不会影响CKSRP活性。

因此，本发明的另一方面涉及编码CKSRP的核酸分子，其含有对CKSRP活性非必需的氨基酸残基改变。此类CKSRP的氨基酸序列不同于在SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20中含有的序列，但仍保留了至少一种此处所述的CKSRP活性。在一个实施方案中，分离的核酸分子包含编码多肽的核苷酸序列，其中多肽中含有的氨基酸序列与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列的中央蛋白激酶区至少约50％的同一性。优选由该核酸分子编码的多肽与SEQID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQID NO：20之一的氨基酸序列的中央蛋白激酶区至少约50-60％的同一性，更优选与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列的中央蛋白激酶区至少约60-70％的同一性，甚至更优选与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列的中央蛋白激酶区至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％的同一性，最优选与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列的中央蛋白激酶区至少约96％、97％、98％或99％的同一性。在另一实施方案中，核酸分子编码的多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列至少约50-60％的同一性，更优选与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列至少约60-70％的同一性，甚至更优选与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％的同一性，最优选与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20之一的氨基酸序列至少约96％、97％、98％或99％的同一性。本发明优选的CKSRP同源物优选参与植物的胁迫耐受性应答，或更具体而言参与植物中涉及胁迫耐受性应答的多肽的转录，和/或作用如酪蛋白激酶。

分别向SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：17或SEQ ID NO：19的核苷酸序列之一引入一个或多个核苷酸置换、添加或缺失，从而向编码多肽中引入一个或多个氨基酸置换、添加或缺失，能产生分离的核酸分子，所述核酸分子编码的CKSRP与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20中某一多肽序列具有序列同一性。可通过标准技术如定点诱变和PCR介导诱变，向SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：17或SEQ ID NO：19序列之一引入突变。优选在一个或多个预测非必需的氨基酸残基处进行保守性氨基酸置换。“保守性氨基酸置换”即用具有相似侧链的氨基酸残基取代原氨基酸残基。

本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷胺酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β分支侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳香侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选以同一侧链家族中的另一氨基酸残基取代CKSRP中的预测非必需氨基酸残基。或者在另一实施方案中，可通过如饱和诱变向全长或部分的CKSRP编码序列中随机引入突变，筛选所产生突变体中此处所述的CKSRP活性，以鉴定保留CKSRP活性的突变体。诱变SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19的序列之一后，可重组表达编码多肽并通过如实施例7所述分析表达该多肽植物的胁迫耐受性确定该多肽的活性。

此外可产生最优化的CKSRP核酸。优选最优化的CKSRP核酸编码的CKSRP与磷酸基团结合，和/或调节植物对环境胁迫的耐受性，更优选当其在植物中过量表达时增强植物对环境胁迫的耐受性。此处所用的术语“最优化的”是指经遗传工程操作以提高其在给定植物或动物中表达的核酸。为提供植物最优化的CKSRP核酸，可修饰该基因的DNA序列以使其1)含有高表达的植物基因优选的密码子；2)核苷酸碱基组成中A+T的含量与植物中广泛存在者一致；3)形成植物起始序列；或4)消除导致RNA不稳定、不恰当聚腺苷化、降解和终止的序列，或那些形成二级结构发卡或RNA剪切位点的序列。利用一般植物或特定植物中密码子使用的频率分布，能增加CKSRP核酸的表达。最优化植物中核酸表达的方法可见于EPA 0359472；EPA 0385962；PCT申请号WO 91/16432；美国专利号5,380,831；美国专利号5,436,391；Perlack等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：3324-3328；以及Murray等人，1989，Nucleic Acids Res.17：477-498。

此处所用的“优选密码子使用频率”，是指特定宿主细胞所表现出来的指定确定氨基酸的核苷酸密码子的使用偏好。将基因中密码子出现的次数除以基因中指定同一氨基酸的所有密码子的总出现次数，可确定该基因中该密码子的使用频率。与之类似，通过平均化优选密码子在大量宿主细胞表达基因中的使用频率，能计算出宿主细胞中优选密码子使用频率。优选该分析限于宿主细胞高度表达的基因。合成基因中优选密码子使用频率与宿主细胞所用频率的百分比偏差计算如下：首先通过获取所有密码子的平均偏差，确定单个密码子使用频率与宿主细胞使用频率间的百分比偏差。如此处定义，该计算包括特殊密码子(即ATG和TGG)。一般而言，通过等式计算最佳基因的密码子使用与宿主细胞的整体平均偏差：1A＝n＝1Z X_n-Y_n X_n乘以100Z，其中X_n＝宿主细胞中密码子n的使用频率；Y_n＝合成基因中密码子n的使用频率；n代表指定一种氨基酸的密码子；密码子总数为Z。密码子使用频率的总体偏差A，对所有氨基酸而言优选小于约25％，更优选小于约10％。

因此，可以最优化CKSRP核酸使其密码子使用的分布频率相对于那些高度表达植物基因的偏差优选不大于25％，更优选不大于10％。此外，应当考虑简并的第三碱基的G+C含量百分比(单子叶植物在此位点处似乎更偏好G+C，而双子叶植物则不)。也发现XCG(其中X为A、T、C或G)核苷酸为双子叶植物最不优选的密码子，而单子叶和双子叶植物都不使用XTA密码子。本发明的最优化CKSRP核酸也优选具有与所选宿主植物非常接近的CG和TA双联体避免指数(doublet avoidance indices)(例如小立碗藓、欧洲油菜、大豆(Glycine max)或稻(Oryza sativa))。更优选这些指数与宿主间的偏差不大于约10-15％。

除了编码上述CKSRP的核酸分子外，本发明的另一方面涉及分离的与其反义的核酸分子。反义多核苷酸能通过特异性结合于靶多核苷酸并干扰靶多核苷酸的转录、剪切、转运、翻译和/或稳定性，抑制靶多核苷酸的基因表达。现有技术已描述了将反义多核苷酸靶定于染色体DNA、初级RNA转录物或加工后mRNA的方法。优选的靶区域包括剪切位点、翻译起始密码子、翻译终止密码子以及开放阅读框内的其他序列。

本发明中的术语“反义”，是指含有与全部或部分基因、初级转录物或加工后mRNA的互补性足以干扰内源性基因表达的多核苷酸的核酸。“互补”多核苷酸为那些能根据标准Watson-Crick互补法则进行碱基配对的多核苷酸。具体而言，嘌呤与嘧啶进行碱基配对以形成鸟嘌呤配对胞嘧啶(G∶C)和腺嘌呤配对DNA中胸腺嘧啶(A∶T)，或腺嘌呤配对RNA中尿嘧啶(A∶U)的组合。应当理解两个多核苷酸即使彼此不完全互补也可相互杂交，只要彼此间有至少一个区域基本互补。术语“反义核酸”包括单链RNA以及能转录产生反义RNA的双链DNA表达盒。“活性”反义核酸为能与初级转录物或编码多肽的mRNA选择性杂交的反义RNA分子，所述多肽与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20的多肽具有至少80％的序列同一性。

反义核酸可与整个CKSRP编码链互补，或仅与其部分互补。在一个实施方案中，反义核酸分子与编码CKSRP核苷酸序列编码链的“编码区”反义。术语“编码区”指含有能翻译为氨基酸残基的密码子的核苷酸序列区域。在另一实施方案中，反义核酸分子与编码CKSRP核苷酸序列编码链的“非编码区”反义。术语“非编码区”指与编码区侧接而不会被翻译为氨基酸的5’和3’序列(即所谓的5’和3’非翻译区)。反义核酸分子可与CKSRPmRNA的整个编码区互补，但更优选为仅与CKSRP mRNA的编码或非编码区部分反义的寡核苷酸。例如，反义寡核苷酸可互补于CKSRP mRNA翻译起始位点周围的区域。反义寡核苷酸的长度可为如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸。一般而言，本发明的反义分子含有RNA，其与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：17或SEQ ID NO：19，或编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20多肽的多核苷酸的至少14个连续核苷酸具有60-100％的序列同一性。优选的序列同一性为至少70％，更优选至少75％、80％、85％、90％、95％或98％，最优选99％。

利用本领域已知的操作使用化学合成和酶连接反应可构建本发明的反义核酸。例如，可利用天然存在的核苷酸或经多种修饰的核苷酸化学合成反义核酸(如反义寡核苷酸)，设计所述修饰核苷酸以提高分子的生物稳定性或提高反义与正义核酸之间形成二聚体的物理稳定性，例如可使用硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸。可用于产生反义核酸的经修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-巯尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖苷Q核苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤，1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺苷、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖Q核苷(β-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫代-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2，6-二氨基嘌呤。或者可利用表达载体生物产生反义核酸，所述表达载体中以反义方向亚克隆入核酸(即由插入核酸转录的RNA与目标靶核酸间为反义方向，见下文进一步详述)。

在另一实施方案中，本发明的反义核酸分子为α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特定的双链杂交物，其中与通常β-单位不同的是链彼此平行(Gaultier等人，1987，Nucleic Acids.Res.15：6625-6641)。反义核酸分子也可含有2’-邻甲基核糖核苷酸(Inoue等人，1987，Nucleic AcidsRes.15：6131-6148)或嵌合RNA-DNA类似物(Inoue等人，1987，FEBS Lett.215：327-330)。

一般向细胞施用或原位产生本发明的反义核酸分子，以使其能杂交或结合于编码CKSRP的细胞mRNA和/或基因组DNA，从而通过如抑制转录和/或翻译抑制多肽的表达。杂交可为通过常规核苷酸互补形成稳定的二聚体，或如当反义核酸分子结合于DNA二聚体时通过双螺旋大沟内的特异性相互作用而形成。可以通过如将反义核酸分子连接于结合细胞表面受体或抗原的肽或抗体来修饰反义分子，从而使其可特异性结合于所选择细胞表面表达的受体或抗原。也可利用此处所述的载体将反义核酸分子输送至细胞。为达到细胞内反义分子的足够浓度，优选反义核酸分子处于强原核、病毒或真核(包括植物)启动子控制下的载体构建体。

除了反义多核苷酸外，核酶、正义多核苷酸或双链RNA(dsRNA)可用于减少CKSRP多肽的表达。此处所用的术语“核酶”是指基于RNA的催化酶，其具有核酶活性能裂解含有与其互补区的单链核酸如mRNA。核酶(例如Haselhoff和Gerlach，1988，Nature 334：585-591描述的锤头核酶)可用于催化性裂解CKSRP mRNA转录物，从而抑制CKSRP mRNA的翻译。可基于此处所述的CKSRP cDNA的核酸序列(即SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19)，或基于构建本发明教导方法分离的异源性序列，设计对该CKSRP编码的核酸具有特异性的核酶。例如，可构建四膜虫(Tetrahymena)L-19 IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与CKSRP编码mRNA中将裂解的核苷酸序列互补。见如Cech等人的美国专利号4,987,071和5,116,742。或者，可利用CKSRP mRNA从RNA分子集合中选择具有特异性核酶活性的催化性RNA。见如Bartel，D.和Szostak，J.W.，1993，Science261：1411-1418。在优选实施方案中，核酶含有具有至少7、8、9、10、12、14、16、18或20个核苷酸、更优选为7或8个核苷酸的部分，其与靶RNA的部分间互补性为100％。制备核酶的方法为本领域技术人员所公知。见如美国专利号6,025,167；5,773,260和5,496,698。

此处所用的术语“dsRNA”是指包含两条RNA链的RNA杂化物。dsRNA可为线性或环状结构。在优选实施方案中，dsRNA特异于多核苷酸，所述多核苷酸编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20中的多肽，或与SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20多肽之一在中央蛋白激酶结构域具有至少80％序列同一性的多肽。杂交RNA可基本上或完全互补。“基本互补”是指当如上述用BLAST程序最佳比对两个杂交RNA时，杂交部分至少95％互补。优选的dsRNA长度至少为100碱基对。一般而言，杂交RNA的长度相同而不具有突出的5’或3’末端且没有空位。然而，本发明方法可使用5’或3’突出端多达100个核苷酸的dsRNA。

dsRNA可含有核糖核苷酸、核糖核苷酸类似物如2’-O-甲基核糖基残基或其组合。见如美国专利号4,130,641和4,024,222。dsRNA多核糖肌苷酸：多核糖胞嘧啶核苷酸描述于美国专利号4,283,393。生产和使用dsDNA的方法为本领域公知。一种方法包括在体内或在体外单个反应混合物中同时转录两条互补DNA链。见如美国专利号5,795,715。在一个实施方案中，可直接通过标准转化方法向植物或植物细胞中导入dsRNA。或者通过转录两条互补RNA在植物细胞中表达dsRNA。

抑制内源基因表达的其他方法如三螺旋形成(Moser等人，1987，Science 238：645-650，和Cooney等人，1988，Science 241：456-459)和共抑制(Napoli等人，1990，The Plant Cell 2：279-289)为本领域所公知。部分和全长cDNA已被用于内源性植物基因的共抑制。见如美国专利号4,801,340、5,034,323、5,231,020和5,283,184；Van der Kroll等人，1990，The Plant Cell2：291-299；Smith等人，1990，Mol.Gen.Genetics 224：477-481；和Napoli等人，1990，The Plant Cell 2：279-289。

对于正义抑制而言，引入正义多核苷酸会阻断相应靶基因的转录。正义多核苷酸与靶植物基因或RNA间具有至少65％的序列同一性。优选同一性百分比为至少80％、90％、95％或更多。引入的正义多核苷酸相对于靶基因或转录物并不必为全长。优选的正义多核苷酸与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19中至少100个连续氨基酸具有至少65％的序列同一性。同一性区域可包含内含子和/或外显子以及非翻译区。引入的正义多核苷酸可瞬时存在于植物细胞中，或稳定整合入植物染色体或染色体外复制子。

或者通过靶定与CKSRP核苷酸序列的调节区(如CKSRP启动子和/或增强子)互补的核苷酸序列形成可阻断靶细胞中CKSRP基因转录的三螺旋结构，来抑制CKSRP基因的表达。主要见Helene，C.，1991，AnticancerDrug Des.6(6)：569-84；Helene，C.等人，1992，Ann.N.Y. Acad.Sci.660：27-36；以及Maher， L.J.，1992，Bioassays 14(12)：807-15。

除上述CKSRP核酸和多肽外，本发明还涉及这些连接于部分的核酸和多肽。这些部分包括但不仅限于，检测部分、杂交部分、纯化部分、运输部分、反应部分、结合部分等。与部分相连的一类典型核酸为探针和引物。探针和引物一般包括基本分离的寡核苷酸。该寡核苷酸一般包含可在严格条件下与至少约12、优选约25、更优选约40、50或75个连续核苷酸杂交的核苷酸序列区；所述连续核苷酸来自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19所列序列之一的正义链；或SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：17或SEQ ID NO：19所列序列之一的反义序列；或其天然突变体。基于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19核苷酸序列的引物可用于PCR反应克隆CKSRP同源物。基于CKSRP核苷酸序列的探针可用于检测编码相同或基本相同多肽的转录物或基因组序列。在优选实施方案中，探针还包含连接于其上的标记基团，例如标记基团可为放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。此类探针可用作基因组标记测试试剂盒的部分，通过如测量细胞样品中CKSRP编码核酸的水平，如检测CKSRP mRNA水平或确定基因组CKSRP基因是否已突变或缺失，来鉴定表达CKSRP的细胞。

具体而言，确定基因转录物水平(可用于翻译为基因产物的mRNA量的指标)的有用方法，是实施Northern印迹(参考见如Ausubel等人，1988，Current Protocols in Molecular Biology，Wiley：New York)。来自Northern印迹的信息至少部分说明了转化基因的转录水平。可通过均为本领域公知的若干方法从细胞、组织或器官制备总细胞RNA，如Bormann，E.R.等人，1992，Mol.Microbiol.6：317-326所述。为评估是否存在翻译自该mRNA的多肽或其相对量，可使用标准技术如Western印迹。这些技术为本领域普通技术人员公知(见如Ausubel等人，1988，Current Protocols in MolecularBiology，Wiley：New York)。

本发明还提供了分离的含有上述CKSRP核酸的重组表达载体，其中该载体在宿主细胞内的表达导致其对环境胁迫的耐受性相对于该宿主细胞的野生型增强。此处所用的术语“载体”，指能够转运另一与之相连的核酸的核酸分子。一类载体为“质粒”，是指可以连入额外DNA片段的环状双链DNA环。另一种载体为病毒载体，其中额外的DNA片段可连接于病毒基因组。某些载体能在其导入的宿主细胞中自发复制(如具有细菌复制起点的细菌载体以及游离型哺乳动物载体)。其他载体(如非游离型哺乳动物载体)在导入宿主细胞时整合入宿主细胞基因组，因而随宿主基因组复制。此外，某些载体能指导与其有效连接的基因的表达。此处称这种载体为“表达载体”。一般而言，可用于重组DNA技术的表达载体通常为质粒形式。在本说明中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括能发挥相同作用的此类其他形式的表达载体，如病毒载体(如复制缺陷的逆转录病毒、腺病毒和腺病毒相关病毒)。

本发明的重组表达载体中含有以适于在宿主细胞中表达的形式存在的本发明的核酸，即该重组表达载体包含一个或多个基于用于表达的宿主细胞选择的、与待表达核酸序列有效连接的调控序列。此处所用的关于重组表达载体的“有效连接”，是指目标核苷酸序列连接于调控序列的方式使该核苷酸序列得以表达(例如在体外转录/翻译体系，或在导入载体的宿主细胞内)。术语“调控序列”包括启动子、增强子以及其他表达调控元件(例如多聚腺苷酸化信号)。此类调控序列描述于如Goeddel，Gene ExpressionTechnology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)，以及Gruber和Crosby述于Methods in Plant MolecularBiology and Biotechnology，Glick和Thompson编辑，第7章，89-108，CRCPress：Boca Raton，Florida，包括其中的参考文献。调控序列包括那些指导核苷酸序列在多种宿主细胞内组成型表达的序列，以及那些仅在某些宿主细胞或某些条件下指导核苷酸序列表达的序列。本领域技术人员应当知道表达载体的设计取决于如待转化宿主细胞的选择、所需的多肽表达水平等。可将本发明表达载体导入宿主细胞，从而产生由此处所述核酸编码的多肽或肽，包括融合多肽或肽(如CKSRP、CKSRP的突变型、融合多肽等)。

可设计本发明的重组表达载体用于在原核或真核细胞中表达CKSRP。例如，CKSRP基因可表达于细菌细胞如谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)、昆虫细胞(利用杆状病毒表达载体)、酵母以及其他真菌细胞(见Romanos，M.A.等人，1992，Foreign gene expression in yeast：a review，Yeast8：423-488；van den Hondel，C.A.M.J.J.等人，1991，Heterologous geneexpression in filamentous fungi(More Gene Manipulations in Fungi，J.W.Bennet和L.L.Lasure编辑，396-428页：Academic Press：San Diego中)；以及van den Hondel，C.A.M.J.J.& Punt，P.J.，1991，Gene transfer systemsand vector development for filamentous fungi(Applied Molecular Geneticsof Fungi。Peberdy，J.F.等人编辑，1-28页，Cambridge University Press：Cambridge中))、藻类(Falciatore等人，1999，Marine Biotechnology1(3)：239-251)、以下类型的纤毛虫：全毛亚纲(Holotrichia)、缘毛亚纲(Peritrichia)、旋唇亚纲(Spirotrichia)、吸管亚纲(Suctoria)、四膜虫(Tetrahymena)、草履虫(Paramecium)、豆形虫(Colpidium)、瞬膜虫(Glaucoma)、匙口虫(Platyophrya)、Potomacus、假康纤虫(Pseudocohnilembus)、游仆虫(Euplotes)、Engelmaniella以及棘尾虫(Stylonychia)，特别是如PCT申请号WO 98/01572所述的转化方法形成的带载体的浮萍棘尾虫(Stylonychia lemnae)属，以及多细胞植物细胞(见Schmidt，R.和Willmitzer，L.，1988，High efficiency Agrobacteriumtumefaciens-mediated transformation of Arabidopsis thaliana leaf andcotyledon explants，Plant Cell Rep.583-586；Plant Molecular Biology andBiotechnology，C Press，Boca Raton，Florida，第6/7章，S.71-119(1993)；F.F.White，B.Jenes等人，Techniques for Gene Transfer(Transgenic Plants，第1卷，Engineering and Utilization，Kung和R.Wu编辑，128-43，AcademicPress：1993；Potrykus，1991，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Molec.Biol.42：205-225及其中引用的参考文献)，或哺乳动物细胞。合适的宿主细胞进一步讨论于Goeddel的Gene Expression Technology：Methods inEnzymology 185，Academic Press：San Diego，CA(1990)中。或者可在体外转录和翻译重组表达载体，例如使用T7启动子调控序列及T7聚合酶。

最常利用含有能指导融合或非融合多肽表达的组成型或诱导性启动子的载体，实现多肽在原核生物中的表达。融合载体向其中编码的多肽添加了若干氨基酸，通常加在重组多肽的氨基末端，但也可加在其C-末端或融合于多肽的合适区域。此类融合载体一般具有三个功能：1)提高重组多肽的表达；2)提高重组多肽的溶解性；以及3)作为亲和纯化的配体协助重组多肽的纯化。通常在融合表达载体中，向融合部分和重组多肽的连接处引入蛋白水解裂解位点，以在纯化融合多肽后将重组多肽与融合部分分离。此类酶及其关联识别序列包括Xa因子、凝血酶和肠激酶。

一般融合表达载体包括分别将谷胱甘肽S转移酶(GST)、麦芽糖E结合多肽或多肽A融合于靶重组多肽的pGEX(Pharmacia Biotech Inc；Smith，D.B.和Johnson，K.S.，1988，Gene 67：31-40)、pMAL(New England Biolabs，Beverly，MA)和pRIT5(Pharmacia，Piscataway，NJ)。在一个实施方案中，将CKSRP的编码序列克隆入pGEX表达载体以产生编码融合多肽的载体，从N-末端至C-末端包含GST-凝血酶裂解位点-X多肽。可以利用谷胱甘肽-琼脂糖树脂，通过亲和层析法纯化融合多肽。可以通过凝血酶裂解融合多肽回收与GST去融合的重组CKSRP。

合适的诱导型非融合大肠杆菌(E.coli)表达载体的实例包括，pTrc(Amann等人，1988，Gene 69：301-315)和pET 11d(Studier等人，GeneExpression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，SanDiego，California(1990)60-89)。pTrc载体上靶基因的表达取决于由杂交trp-lac融合启动子起始的宿主RNA聚合酶转录。pET 11d载体上靶基因的表达取决于由T7 gn10-lac融合启动子起始的共表达病毒RNA聚合酶(T7gn1)介导的转录。该病毒聚合酶由宿主株BL21(DE3)或HMS174(DE3)提供，来自含有lacUV 5启动子转录调控下的T7 gn1基因的常驻γ原噬菌体。

最大化重组多肽表达的策略之一是在蛋白水解裂解重组多肽能力受损的宿主细菌中表达多肽(Gottesman，S.，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，California(1990)119-128)。另一策略在于改变插入表达载体的核酸序列从而使每一氨基酸使用的单个密码子均为选用于表达的细菌如谷氨酸棒杆菌中优选使用者(Wada等人，1992，Nucleic Acids Res.20：2111-2118)。通过标准DNA合成技术，能够如此改变本发明的核酸序列。

在另一实施方案中，CKSRP表达载体为酵母表达载体。在酿酒酵母中表达的载体实例包括pYepSec1(Baldari等人，1987，EMBO J.6：229-234)、pMFa(Kurjan和Herskowitz，1982，Cell 30：933-943)、pJRY88(Schultz等人，1987，Gene 54：113-123)以及pYES2(Invitrogen Corporation，San Diego，CA)。适用于其他真菌(如丝状真菌)的用于构建载体的载体及方法，包括详述于van den Hondel，C.A.M.J.J.& Punt，P.J.，1991，“Genetransfer systems and vector development for filamentous fungi”，在Applied Molecular Genetics of Fungi，J.F.Peberdy等人编辑，1-28页，Cambridge University Press：Cambridge中的那些。

或者，可利用杆状病毒表达载体在昆虫细胞中表达本发明的CKSRP。可用于在培养昆虫细胞(如Sf 9细胞)中表达多肽的杆状病毒载体包括pAc系列(Smith等人，1983，Mol.Cell Biol.3：2156-2165)和pVL系列(Lucklow和Summers，1989，Virology 170：31-39)。

在另一实施方案中，利用哺乳动物表达载体在哺乳动物细胞中表达本发明的CKSRP核酸。哺乳动物表达载体的实例包括pCDM8(Seed，B.，1987，Nature 329：840)和pMT2PC(Kaufman等人，1987，EMBO J.6：187-195)。当用于哺乳动物细胞时，通常由病毒调控元件调控表达载体。例如，常用的启动子来自多瘤病毒、腺病毒2、巨细胞病毒和猿猴病毒40。其他对原核和真核细胞均适用的表达系统，可见Sambrook，J.，Fritsh，E.F.和Maniatis，T.Molecular Cloning：A Laboratory Manual.最新版，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY，1989的第16和17章。

在另一实施方案中，重组哺乳动物表达载体能指导核酸优选在某一特定细胞类型中的表达(例如使用组织特异性调控元件表达核酸)。组织特异性调控元件为本领域公知。合适组织特异性启动子的非限制性实例包括，白蛋白启动子(肝特异；Pinkert等人，1987，Genes Dev.1：268-277)、淋巴特异性启动子(Calame和Eaton，1988，Adv.Immunol.43：235-275)，特别是T细胞受体启动子(Winoto和Baltimore，1989，EMBO J.8：729-733)和免疫球蛋白启动子(Banerji等人，1983，Cell 33：729-740；Queen和Baltimore，1983，Cell 33：741-748)、神经元特异性启动子(如神经丝启动子；Byrne和Ruddle，1989，PNAS 86：5473-5477)、胰腺特异性启动子(Edlund等人，1985，Science230：912-916)，以及乳腺特异性启动子(如乳清启动子；美国专利号4,873,316和欧洲申请出版号264,166)。也包括发育调节启动子，如鼠hox启动子(Kessel和Gruss，1990，Science 249：374-379)和胎多肽启动子(Campes和Tilghman，1989，Genes Dev.3：537-546)。

为稳定转染哺乳动物细胞，已知根据所用的表达载体和转染技术，仅有小部分细胞可将外源DNA整合入其基因组。为了鉴定和选择这些整合体，一般将编码可选择标记(如对抗生素或除草剂的抗性)的基因与目标基因一起引入宿主细胞。优选的可选择标记包括那些带有对药物如G418、潮霉素和甲氨蝶呤抗性的标记，或植物中那些带有对除草剂如草甘膦、草铵膦或咪唑啉酮抗性的标记。可以编码CKSRP的同一载体将编码可选择标记的核酸分子引入宿主细胞，或可使用分开的载体引入。可通过如除草剂选择鉴定稳定转染导入核酸分子的细胞(例如参入选择标记基因的细胞能够存活，而其他细胞死亡)。

在本发明的优选实施方案中，CKSRP表达于植物和植物细胞中如单细胞植物细胞(如藻类)(见Falciatore等人，1999，Marine Biotechnology1(3)：239-251及其参考文献)，以及高等植物细胞(如种子植物如农作物)。可通过任意方法将CKSRP“导入”植物细胞中，包括转染、转化或转导、电穿孔、粒子轰击、农杆菌感染法等。本领域技术人员已知的转化方法之一是将开花植物浸入农杆菌(Agrobacteria)溶液中，所述农杆菌中含有CKSRP核酸，然后育种转化配子。

转化或转染宿主细胞(包括植物细胞)的其他合适方法可见于Sambrook等人(Molecular Cloning：A Laboratory Manual.最新版，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY，1989)及其他实验室手册如Methods in MolecularBiology，1995，44卷，Agrobacterium protocols，Gartland和Davey编辑，Humana Press，Totowa，New Jersey。由于生物和非生物胁迫耐受性为多种植物期望具备的性质，如玉米、小麦、黑麦、燕麦、黑小麦、稻、大麦、大豆、花生、棉花、油菜籽和油菜、木薯、胡椒、向日葵和万寿菊、茄科植物如马铃薯、烟草、茄子和番茄、野豌豆某种、豌豆、苜蓿、灌生植物(咖啡、可可、荼)、柳某种、树(油棕榈、椰子树)、多年生草和牧草作物，这些作物植物也为本发明另一实施方案中优选的基因工程靶植物。牧草作物包括但不仅限于小麦草(Wheatgrass)、鹝草(Canarygrass)、雀麦(Bromegrass)、披碱草(Wildrye Grass)、蓝草(Bluegrass)，鸭茅草(Orchardgrass)、苜蓿、Salfoin、百脉根(Birdsfoot Trefoill)、杂三叶(AlsikeClover)、红三叶(Red Clover)和甜三叶草(Sweet Clover)。

在本发明的一个实施方案中，通过农杆菌介导的基因转移将CKSRP转染入植物。可利用如GV3101(pMP90)(Koncz和Schell，1986，Mol.Gen.Genet.204：383-396)或LBA4404(Clontech)根瘤农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)菌株实施农杆菌介导植物转化。可通过标准转化和再生技术实施转化(Deblaere等人，1994，Nucl.Acids.Res.13：4777-4788；Gelvin，Stanton B.和Schilperoort，Robert A，Plant Molecular Biology Manual，第2版-Dordrecht：Kluwer Academic Publ.，1995.-in Sect.，RingbucZentrale Signatur：BT11-P ISBN 0-7923-2731-4；Glick，Bernard R.；Thompson，John E.，Methods in Plant Molecular Biology andBiotechnology，Boca Raton：CRC Press，1993 360 S.，ISBN0-8493-5164-2)。例如通过子叶或下胚轴转化来转化油菜籽(Moloney等人，1989，Plant Cell Report 8：238-242；De Block等人，1989，Plant Physiol.91：694-701)。农杆菌和植物选择中的抗生素应用取决于用于转化的二元载体和农杆菌菌株。通常利用卡那霉素为可选择植物标记来进行油菜籽选择。利用如Mlynarova等人，1994，Plant Cell Report 13：282-285所述的技术可实施农杆菌介导向亚麻的基因转移。此外，可利用如欧洲专利号0424 047、美国专利号5,322,783、欧洲专利号0397 687、美国专利号5,376,543，或美国专利号5,169,770所述的技术转化大豆。通过颗粒轰击、聚乙二醇介导DNA摄取、或通过碳化硅纤维技术可转化玉米(见如Freeling和Walbot“The maize handbook”Springer Verlag：New York(1993)ISBN3-540-97826-7)。玉米转化的具体实例见于美国专利号5,990,387，而小麦转化的具体实例见于PCT申请号WO 93/07256。

根据本发明，如导入的CKSRP参入非染色体的自发性复制子或整合入植物染色体中，则可稳定保留在植物细胞中。或者导入的CKSRP存在于染色体外非复制性载体上，可能为瞬时表达或具有瞬时活性。

在一个实施方案中，可产生CKSRP整合入染色体的同源重组微生物，制备含有至少一部分导入缺失、添加或置换的CKSRP基因的载体，从而改变(如功能性破坏)CKSRP基因。优选的CKSRP基因为小立碗藓、欧洲油菜、大豆或稻CKSRP基因，但也可为来自相关植物或甚至是来源于哺乳动物、酵母或昆虫的同源物。在一个实施方案中，设计载体使在同源重组时内源性CKSRP基因受到功能性破坏(即不再编码功能性多肽；也称为敲除载体)。或者可设计载体以使同源重组后内源性CKSRP基因被突变或受到其他改变，但仍然能编码功能性多肽(例如改变上游调控区域从而改变内源性CKSRP的表达)。为通过同源重组产生点突变，可将DNA-RNA杂化物用于所谓嵌合修复术的技术(Cole-Strauss等人，1999，Nucleic AcidsResearch 27(5)：1323-1330，以及Kmiec，1999，Gene Therapy AmericanScientist 87(3)：240-247)。小立碗藓的同源重组方法也为本领域公知并考虑用于此处。

而在同源重组载体中，CKSRP基因的改变部分在其5’和3’末端侧接CKSRP基因的另一核酸分子，从而使载体携带的外源性CKSRP基因与内源性CKSRP基因间能在微生物或植物中发生同源重组。额外的侧翼CKSRP核酸分子具有足够长度以与内源性基因进行成功的同源重组。一般而言，载体中含有数百对碱基对甚至数千碱基对的侧翼DNA(5’和3’末端均有)(见如Thomas，K.R.和Capecchi，M.R.，1987，Cell 51：503中同源重组载体的描述或Strepp等人，1998，PNAS，95(8)：4368-4373中基于cDNA的小立碗藓重组)。将载体导入微生物或植物细胞中(例如通过聚乙二醇介导DNA)，通过本领域已知的技术选择其中导入的CKSRP基因与内源性CKSRP基因发生同源重组的细胞。

在另一实施方案中，产生含有能调节导入基因表达的选择系统的重组微生物。例如，将CKSRP基因引入载体并置于lac操纵子的调控之下，能使该CKSRP基因仅在IPTG存在时进行表达。此类调控体系为本领域所公知。

不管是位于染色体外的非复制载体中，还是位于染色体整合的载体中，CKSRP多核苷酸都优选位于植物表达盒内。植物表达盒优选含有的能驱动基因在植物细胞中表达的调控序列，该序列为有效连接因而每一序列均可实现其自身功能，例如通过多聚腺苷酸化信号终止转录。有效的多聚腺苷酸化信号为那些来自根瘤农杆菌t-DNA的信号，如基因3，Ti-质粒pTiACH5的章鱼碱合酶(Gielen等人，1984，EMBO J.3：835)或其功能性等效物，但所有其他在植物中具有功能活性的终止子也适用。由于植物基因表达经常不仅限于转录水平，植物表达盒中优选含有其他有效连接的序列如翻译增强子，如含有烟草花叶病毒中5’非翻译先导序列的能增强每RNA的多肽产率的过驱动序列(Gallie等人，1987，Nucl.Acids Research15：8693-8711)。植物表达载体的实例详述于：Becker，D.，Kemper，E.，Schell，J.和Masterson，R.，1992，New plant binary vectors with selectable markerslocated proximal to the left border，Plant Mol.Biol.20：1195-1197；以及Bevan，M.W.，1984，Binary Agrobacterium vectors for plant transformation，Nucl.Acid.Res.12：8711-8721；Vectors for Gene Transfer in Higher Plants：于Transgenic Plants，第1卷，Engineering and Utilization，Kung和R.Wu编辑，Academic Press，1993，S.15-38中。

植物基因表达应当有效连接于合适的启动子，从而使基因表达具有时序性、细胞特异性或组织特异性。可用于本发明表达盒的启动子包括能够起始植物细胞转录的任意启动子。此类启动子包括但不仅限于，可获自植物、植物病毒以及含有能在植物中表达的基因的细菌(如农杆菌和根瘤菌(Rhizobium))的启动子。

启动子可为组成型、诱导型、发育阶段优选、细胞类型优选、组织优选或器官优选。组成型启动子在大部分情况下均有活性。组成型启动子的实例包括CaMV 19S和35S启动子(Odell等人，1985，Nature313：810-812)、sX CaMV 35S启动子(Kay等人，1987，Science236：1299-1302)，以及Sep1启动子、稻肌动蛋白启动子(McElroy等人，1990，Plant Cell 2：163-171)、拟南芥肌动蛋白启动子、泛酰启动子(Christensen等人，1989，Plant Molec.Biol.18：675-689)、pEmu(Last等人，1991，Theor.Appl.Genet.81：581-588)、玄参花叶病毒35S启动子、Smas启动子(Velten等人，1984，EMBO J3：2723-2730)、GRP1-8启动子、肉桂醇脱氢酶启动子(美国专利号5,683,439)、农杆菌T-DNA启动子(如甘露碱合酶、胭脂碱合酶和章鱼碱合酶)、二磷酸核酮糖羧化酶小亚基(ssuRUBISCO)启动子等。

诱导型启动子优选在某些环境条件下具有活性，如有或无某一营养素或代谢物、热或冷、光、病原体攻击、乏氧条件等。例如油菜的hsp80启动子由热休克诱导；PPDK启动子由光诱导；烟草、拟南芥和玉米的PR-1启动子由病原体感染诱导；而Adh1启动子由低氧和冷胁迫诱导。诱导型启动子可有助于植物基因表达(综述见Gatz，1997，Annu.Rev.PlantPhysiol.Plant Mol.Biol.48：89-108)。化学诱导型启动子尤其适用于需要以时间特异性方式进行基因表达时。此类启动子的实例为水杨酸诱导型启动子(PCT申请号WO 95/19443)、四环素诱导型启动子(Gatz等人，1992，PlantJ.2：397-404)以及乙醇诱导型启动子(PCT申请号WO 93/21334)。

在本发明的优选实施方案中，诱导型启动子为胁迫诱导型启动子。在本发明中胁迫诱导型启动子优选在下述一种或多种胁迫下具有活性：涉及盐、旱、温度、金属、化学物、病原体和氧化胁迫的次佳条件。胁迫诱导型启动子包括但不仅限于，Cor78(Chak等人，2000，Planta 210：875-883；Hovath等人，1993，Plant Physiol.103：1047-1053)、Cor15a(Artus等人，1996，PNAS 93(23)：13404-09)、Rci2A(Medina等人，2001，Plant Physiol.125：1655-66；Nylander等人，2001，Plant Mol.Biol.45：341-52；Navarre和Goffeau，2000，EMBO J.19：2515-24；Capel等人，1997，Plant Physiol.115：569-76)、Rd22(Xiong等人，2001，Plant Cell 13：2063-83；Abe等人，1997，Plant Cell 9：1859-68；Iwasaki等人，1995，Mol.Gen.Genet.247：391-8)、cDet6(Lang和Palve，1992，Plant Mol.Biol.20：951-62)、ADH1(Hoeren等人，1998，Genetics 149：479-90)、KAT1(Nakamura等人，1995，Plant Physiol.109：371-4)、KST1(Müller-Rber等人，1995，EMBO 14：2409-16)、Rha1(Terryn等人，1993，Plant Cell 5：1761-9；Terryn等人，1992，FEBS Lett.299(3)：287-90)、ARSK1(Atkinson等人，1997，GenBank登录号L22302，以及PCT申请号WO 97/20057)、PtxA(Plesch等人，GenBank登录号X67427)、SbHRGP3(Ahn等人，1996，Plant Cell 8：1477-90)、GH3(Liu等人，1994，Plant Cell 6：645-57)、病原体诱导型PRP1-基因启动子(Ward等人，1993，Plant.Mol.Biol.22：361-366)、番茄热诱导型hsp80-启动子(美国专利号5187267)、马铃薯冷诱导型α淀粉酶启动子(PCT申请号WO 96/12814)，或创伤诱导型pinII启动子(欧洲专利号375091)。其他旱、冷和盐诱导型启动子的实例，如RD29A启动子，见Yamaguchi-Shinozalei等人，1993，Mol.Gen.Genet.236：331-340。

发育阶段优选的启动子优选表达于发育的某些阶段。组织和器官优选启动子包括那些优选在某些组织或器官中表达的启动子，如叶、根、种子或木质部。组织优选和器官优选型启动子的实例包括但不仅限于果实优选型、胚珠优选型、雄性组织优选型、种子优选型、珠被优选型、块茎优选型、主茎优选型、果皮优选型、以及叶优选型、柱头优选型、花粉优选型、花药优选型、花瓣优选型、萼片优选型、花梗优选型、长角果优选型、茎优选型、根优选型启动子等。种子优选型启动子优选在种子发育和/或萌发时表达。例如，种子优选型启动子可为胚胎优选型、胚乳优选型以及种皮优选型。见Thompson等人，1989，BioEssays 10：108。种子优选型启动子的实例包括但不仅限于纤维素合酶(celA)、Cim1、γ玉米醇溶蛋白、球蛋白-1、玉米19kD玉米醇溶蛋白(cZ19B1)等。

其他合适的组织优选型或器官优选型启动子包括油菜籽的油菜籽蛋白基因启动子(美国专利号5,608,152)、蚕豆(Vicia faba)USP启动子(Baeumlein等人，1991，Mol.Gen.Genet.225(3)：459-67)、拟南芥油体蛋白启动子(PCT申请号WO 98/45461)，菜豆(Phaseolus vulgaris)菜豆蛋白启动子(美国专利号5,504,200)、油菜Bce4启动子(PCT申请号WO 91/13980)，或豆球蛋白B4启动子(LeB4；Baeumlein等人，1992，Plant Journal，2(2)：233-9)，以及能在单子叶植物如玉米、大麦、小麦、黑麦、稻等中进行种子特异性表达。已知的合适启动子为大麦lpt2或lpt1基因启动子(PCT申请号WO 95/15389和PCT申请号WO 95/23230)，或如PCT申请号WO99/16890所述者(大麦大麦醇溶蛋白基因启动子、稻谷蛋白基因、稻水稻素基因、稻谷醇溶蛋白基因、小麦麦醇溶蛋白基因、小麦谷蛋白基因、燕麦谷蛋白基因、高粱kasirin基因和黑麦裸麦醇溶蛋白基因)。

其他可用于本发明表达盒的启动子包括但不仅限于，主要叶绿素a/b结合蛋白启动子、组蛋白启动子、Ap3启动子、β-大豆球蛋白(β-conglysin)启动子、油菜籽蛋白启动子、大豆血凝素启动子、玉米15kD玉米醇溶蛋白启动子、22kD玉米醇溶蛋白启动子、27kD玉米醇溶蛋白启动子、g-玉米醇溶蛋白启动子、蜡质、萎缩1、萎缩2和青铜色启动子、Zm13启动子(美国专利号5,086,169)、玉米多聚半乳糖醛酸酶启动子(PG)(美国专利号5,412,085和5,545,546)和SGB6启动子(美国专利号5,470,359)，以及合成或其他天然启动子。

利用外源DNA结合结构域及应答元件(即非植物来源的DNA结合结构域)，能更灵活地调控植物中外源基因表达。此类外源DNA结合结构域的实例为LexA DNA结合结构域(Brent和Ptashne，1985，Cell 43：729-736)。

本发明还提供了含有以反义方向克隆入表达载体的本发明CKSRPDNA分子的重组表达载体。即DNA分子有效连接于调控序列，使与CKSRP mRNA反义的RNA分子得以表达(通过DNA分子的转录)。可选择有效连接于反义方向克隆入的核酸分子的调控序列，指导多种细胞类型中反义RNA分子的连续表达。例如，可选择病毒启动子和/或增强子或调控序列，以指导反义RNA的组成型、组织特异性或细胞类型特异性表达。反义表达载体的形式可为重组质粒、噬粒或减毒病毒，其中反义核酸在高效调控区的调控下产生。通过导入载体的细胞类型能确定调控区域的活性。有关利用反义基因调节基因表达的讨论，见Weintraub，H.等人，1986，Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis，Reviews-Trends inGenetics，Vol.1(1)，和Mol等人，1990，FEBS Letters 268：427-430。

本发明的另一方法涉及导入本发明重组表达载体的宿主细胞。此处术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”可交互使用。应当理解此类术语不仅指特定的个体细胞，也指此类细胞的子代或潜在子代。由于连续传代中可发生因突变或环境影响而导致的某些修饰，此类子代实际上可能与亲代细胞不同，但仍然包括在此处所用术语的范围内。宿主细胞可为任何原核或真核细胞。例如CKSRP可在细菌细胞如谷氨酸棒杆菌、昆虫细胞、真菌细胞或哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵母细胞(CHO)或COS细胞)，藻类、纤毛虫、植物细胞、真菌或其他微生物如谷氨酸棒杆菌中表达。其他合适的宿主细胞为本领域技术人员所公知。

本发明的宿主细胞如培养中的原核或真核细胞，可用于产生(即表达)CKSRP。因此，本发明还提供利用本发明宿主细胞生产CKSRP的方法。在某一实施方案中，该方法包括在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞(其中已经导入了编码CKSRP的重组表达载体，或其中已经导入了编码野生型或改变的CKSRP基因)，直至产生CKSRP。在另一实施方案中，该方法还包括从培养基或宿主细胞中分离CKSRP。

本发明的另一方面涉及分离的CKSRP及其生物活性部分。“分离的”或“纯化的”多肽或其生物活性部分中不含有某些细胞材料(当用重组DNA技术产生时)，或化学前体或其他化学物(当化学合成时)。表述“基本不含有细胞材料”包括CKSRP的制备，其中多肽从其天然或重组产生细胞的某些细胞成分中分离出来。在某一实施方案中，表述“基本不含有细胞材料”包括含有少于约30％(干重)的非CKSRP材料(此处也称为“杂质多肽”)的CKSRP制备物，更优选少于约20％的非CKSRP材料，更优选少于约10％的非CKSRP材料，最优选少于约5％的非CKSRP材料。

当CKSRP或其生物活性部分为重组产生时，也优选其基本不含培养基，即培养基占多肽制备物量少于约20％，更优选少于约10％，最优选少于约5％。表述“基本不含化学前体或其他化学物”包括CKSRP制备物，其中多肽与涉及多肽合成的化学前体或其他化学物分离。在某一实施方案中，表述“基本不含化学前体或其他化学物”包括CKSRP制备物，其中含有少于约30％(干重)的化学前体或非CKSRP化学物，更优选少于约20％化学前体或非CKSRP化学物，更优选少于约10％化学前体或非CKSRP化学物，而最优选少于约5％化学前体或非CKSRP化学物。在优选的实施方案中，分离的多肽或其生物活性部分中没有来自与CKSRP同一来源生物的杂质多肽。一般而言，此类多肽为通过重组表达所产生，例如在除小立碗藓或欧洲油菜以外的植物或微生物如谷氨酸棒杆菌、纤毛虫、藻类或真菌中表达小立碗藓或欧洲油菜CKSRP。

此处所述的核酸分子、多肽、多肽同源物、融合多肽、引物、载体以及宿主细胞可用于以下一种或多种方法：鉴定小立碗藓、酿酒酵母或欧洲油菜及相关生物；对与小立碗藓、酿酒酵母或欧洲油菜相关的生物进行基因组作图；鉴定和定位小立碗藓、酿酒酵母或欧洲油菜的目标序列；进化研究；确定功能必需的CKSRP区域；调节CKSRP活性；调节一种或多种细胞功能的代谢；调节一种或多种化合物的跨膜转运；调节胁迫抗性；以及调节CKSRP核酸的表达。在这些方法的一个实施方案中，CKSRP作用如有活性的钾转运蛋白。在这些方法的另一实施方案中，CKSRP作用如锌转运蛋白。

藓类小立碗藓与其他藓类相关，如能在无光下生长的角齿藓(Ceratodon purpureus)。如角齿藓和小立碗藓的藓类在DNA序列和多肽水平上具有高度的序列同一性，因而可利用来自其他藓类或生物的探针对DNA分子进行外源性筛选，从而确保得到适于在第三种物种中异源筛选或功能性注释和预测基因功能的一致序列。因此，鉴定此类功能的能力具有显著意义，例如预测酶的底物特异性。此外，这些核酸分子能作为藓类基因组或相关生物基因组作图的参考点。

本发明的CKSRP核酸分子具有多种用途。最重要的是本发明的核酸和氨基酸序列可用于转化植物，从而诱导出对胁迫如旱、高盐和冷的耐受性。因而本发明提供了由CKSRP核酸转化的转基因植物，其中该核酸序列在植物中的表达使其对环境胁迫的耐受性相对于该植物野生型品种增强。该转基因植物可为单子叶或双子叶植物。本发明还提供转基因植物可选自如玉米、小麦、黑麦、燕麦、黑小麦、稻、大麦、大豆、花生、棉花、油菜籽和油菜、木薯、胡椒、向日葵、万寿菊、茄科植物、马铃薯、烟草、茄子、番茄、野豌豆某种、豌豆、苜蓿、咖啡、可可、荼、柳某种、油棕榈、椰子树、禾草和牧草作物。

因此，本发明提供了产生转基因的方法。具体而言，本发明描述了利用小立碗藓的PpCk-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4；酿酒酵母的ScCK-1；以及欧洲油菜的BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5的表达，来产生抗旱、抗盐和/或抗冷植物。此处证明将该策略用于拟南芥、油菜籽/油菜、大豆、玉米和小麦，但其应用不仅限于这些植物。因此，本发明提供了含有CKSRP的转基因植物，所述CKSRP如SEQ ID NO：4定义的PpCK-1、SEQ ID NO：6定义的PpCK-2、SEQ ID NO：2定义的PpCK-4、SEQ ID NO：8定义的PpPK-4、SEQ ID NO：10定义的ScCK-1、SEQ IDNO：12定义的BnCK-1、SEQ ID NO：14定义的BnCK-2、SEQ ID NO：16定义的BnCK-3、SEQ ID NO：18定义的BnCK-4，和SEQ ID NO：20定义的BnCK-5，其中该植物对选自干旱、高盐或低温或高温中一种或多种的环境胁迫的耐受性增强。在优选实施方案中，该环境胁迫为干旱或低温。

含有CKSRP编码核酸的植物(其中核酸在该植物中表达使其相对环境胁迫的耐受性对于该植物野生型品种增强)包括：(a)向植物细胞中导入含有CKSRP核酸的表达载体，且(b)从植物细胞中产生相对于该植物野生型品种对环境胁迫耐受性增强的转基因植物。植物细胞包括但不仅限于，原生质体、配子产生细胞以及能再生为整个植物的细胞。此处所用的术语“转基因”，指含有至少一种重组多肽的全部或部分的任意植物、植物细胞、愈伤组织、植物组织或植物部分。在许多情况下，全部或部分重组多肽稳定整合于染色体或稳定的染色体外元件，可连续传代。在优选实施方案中，CKSRP核酸编码含有SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20多肽的蛋白质。

本发明也提供了调控植物对环境胁迫耐受性的方法，包括调节CKSRP编码核酸在植物中的表达。通过分别提高或减少CKSRP的表达，能增强或降低植物对环境胁迫的耐受性。优选通过提高CKSRP的表达增强植物对环境胁迫的耐受性。可通过本领域技术人员已知的任意方法修饰CKSRP的表达。这些提高CKSRP表达的方法可用于转基因或非转基因植物中。当植物为转基因时，可用含有任意上述CKSRP编码核酸的载体转化该植物，或如可用指导天然CKSRP在植物中表达的启动子转化该植物。本发明提供此类启动子可为组织优选型、发育调节型、胁迫诱导型或其组合。或者非转基因植物中可含有由引入天然启动子修饰的天然CKSRP表达。SEQ ID NO：4定义的PpCK-1、SEQ ID NO：6定义的PpCK-2、SEQ IDNO：2定义的PpCK-4、SEQ ID NO：8定义的PpPK-4、SEQ ID NO：10定义的ScCK-1、SEQ ID NO：12定义的BnCK-1、SEQ ID NO：14定义的BnCK-2、SEQ ID NO：16定义的BnCK-3、SEQ ID NO：18定义的BnCK-4或SEQ ID NO：20定义的BnCK-5在靶植物中的表达可以但不仅限于通过以下实例之一实现：(a)组成型启动子、(b)胁迫诱导型启动子、(c)化学物诱导型启动子，以及(d)带有如锌指来源的转录因子的设计的启动子过量表达(Greisman和Pabo，1997，Science 275：657)。

在优选实施方案中，利用如Greisman和Pabo，1997，Science 275：657所述、Sangamo Biosciences，Inc.生产的锌指来源的转录因子(ZFP)调节CKSRP的转录。ZFP既含有DNA识别结构域，也含有能导致靶核酸如CKSRP核酸活化或受抑的功能性结构域。因此，能产生特异性识别上述CKSRP启动子的活化型或抑制型ZFP，并用于提高或降低CKSRP在植物中的表达，从而调节植物的胁迫耐受性。本发明也包括对靶植物中SEQID NO：4定义的PpCK-1、SEQ ID NO：6定义的PpCK-2、SEQ ID NO：2定义的PpCK-4、SEQ ID NO：8定义的PpPK-4、SEQ ID NO：10定义的ScCK-1、SEQ ID NO：12定义的BnCK-1、SEQ ID NO：14定义的BnCK-2、SEQ ID NO：16定义的BnCK-3、SEQ ID NO：18定义的BnCK-4和SEQ IDNO：20定义的BnCK-5的同源物的鉴定，以及对该同源物启动子的鉴定。本发明也提供了相对于宿主细胞野生型品种提高目标基因在该宿主细胞中表达的方法，其中该目标基因在应答CKSRP时转录，包括(a)用含有CKSRP编码核酸的表达载体转化宿主细胞，和(b)在宿主细胞中表达CKSRP，从而提高应答CKSRP转录的基因相对于该宿主细胞野生型品种的表达。

除了将CKSRP核酸序列导入转基因植物外，这些序列也可用于鉴定小立碗藓、欧洲油菜、酿酒酵母或其近缘生物。它们也可用于鉴定在微生物混合种群中是否存在小立碗藓、欧洲油菜、酿酒酵母或其近缘。本发明提供了若干小立碗藓、欧洲油菜以及酿酒酵母基因的核酸序列；通过在严格条件下对单一或混合微生物种群培养物的基因组DNA提取物使用跨小立碗藓、欧洲油菜或酿酒酵母基因中某一该生物特有区域的探针，可以确定是否存在该生物。

此外，本发明的核酸和多肽分子可用作基因组特定区域的标记。这不仅可用于基因组作图，也可用于小立碗藓、欧洲油菜或酿酒酵母多肽的功能研究。例如，为鉴定基因组中与特定小立碗藓DNA结合多肽结合的区域，可以消化小立碗藓基因组，并将其片段与DNA结合多肽孵育。那些结合多肽的片段还可用本发明的核酸分子作探针检测，优选探针带有容易检测的标记。此类核酸分子与基因组片段的结合使该片段得以在小立碗藓的基因组图上定位，且使用不同的酶多次实施可有助于快速确定与多肽结合的核酸序列。此外，本发明的核酸分子可能与相关物种序列足够一致足以作为构建相关藓类基因组图的标记。

本发明的CKSRP核酸分子也可用于进化和多肽结构研究。很多原核和真核细胞利用有本发明分子参与的代谢和转运过程；通过将本发明的核酸分子序列与其他生物中那些编码相似蛋白质的核酸分子序列进行比较，可以评价这些生物间的进化相关性。与之类似，此类对比能够评价序列中哪些为保守区域而哪些不是，从而有助于确定多肽中那些对该酶行使功能极为关键的区域。此类确定对于多肽改造研究很有价值，可能提示什么样的多肽能够耐受诱变且不丧失其功能。

对本发明的CKSRP核酸分子加工可能会产生与野生型CKSRP具有功能性差异的CKSRP。这些多肽的有效性或活性可能有所提高，在细胞中的数量可能多于正常，或有效性或活性可能降低。

对本发明CKSRP的改变可以通过多种机制直接影响胁迫应答和/或胁迫耐受性。在表达CKSRP的植物中，转运增加能改善植物组织和器官中盐和/或溶质分区。提高从细胞中运出离子分子的转运蛋白分子的数目或活性，有可能会影响细胞的盐耐受性。

通过将被修饰微生物或植物在次合适的条件下生长，然后分析植物的生长特征和/或代谢，能够评价植物、谷氨酸棒杆菌、真菌、藻类或纤毛虫中遗传修饰对胁迫耐受性的影响。此类分析技术为本领域技术人员所公知，包括干重、湿重、多肽合成、碳水化合物合成、脂质合成、蒸发蒸腾作用速率、全植物和/或作物产量、开花、繁殖、结实、根生长、呼吸速率、光合作用速率等(Laboratory Techniques in Biochemistry and MolecularBiology，17卷中的Applications of HPLC in Biochemistry；Rehm等人，1993 Biotechnology，第3卷第III章：Product recovery and purification，469-714页，VCH：Weinheim；Belter，P.A.等人，1988，Bioseparations：downstream processing for biotechnology，John Wiley and Sons；Kennedy，J.F.和Cabral，J.M.S.，1992，Recovery processes for biological materials，John Wiley and Sons；Ulmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry，B3卷第11章，1-27页，VCH：Weinheim中的Shaeiwitz，J.A.和Henry，J.D.，1988，Biochemical separations；以及Dechow，F.J.，1989，Separation andpurification techniques in biotechnology，Noyes Publications)。

例如，可以利用标准方法构建含有此处公开核酸或其片段的酵母表达载体，并将其转化至酿酒酵母中。然后测定产生的转基因细胞对旱、盐和温度胁迫的耐受性的消失或改变。与之类似，可以利用标准方法，构建含有此处公开核酸或其片段的植物表达载体，并将其转化入合适的植物细胞如拟南芥、大豆、油菜、玉米、小麦、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)中。然后可检测产生的转基因细胞和/或由此衍生的植物对旱、盐和温度胁迫的耐受性的下降或改变。

对本发明一种或几种CKSRP基因的改造也可产生活性改变的CKSRP，间接影响藻类、植物、纤毛虫或真菌或其他微生物如谷氨酸棒杆菌的胁迫应答和/或胁迫耐受性。例如，代谢的正常生物化学过程会产生一系列产物(如过氧化氢和其他活性氧种类)，活跃干扰同一代谢过程。例如，过氧亚硝酸已知能够硝化酪氨酸的侧链，由此使一些在活性位点含有酪氨酸的酶失活(Groves，J.T.，1999，Curr.Opin.Chem.Biol.3(2)：226-235)。虽然这些产物通常是分泌的，可对细胞进行遗传改造以使其转运出的产物多于一般野生型细胞。最佳化涉及特定分子如盐分子外运的一种或多种本发明CKSRP的活性，有可能会改善细胞的胁迫耐受性。

此外，此处公开的序列或其片段可用于在多种生物的基因组中产生敲除突变，如细菌、哺乳动物细胞、酵母细胞和植物细胞(Girke，T.，1998，ThePlant Journal 15：39-48)。然后评价产生的敲除细胞耐受多种胁迫情况的能力、对多种胁迫情况的应答以及对突变表型和/或基因型的影响。其他基因失活的方法，见美国专利号6,004,804“非嵌合突变载体”，以及Puttaraju等人，1999，Spliceosome-mediated RNA trans-splicing as a tool for genetherapy，Nature Biotechnology 17：246-252。

前述可产生胁迫耐受性增强的CKSRP诱变策略并无限制性；对这些策略的改变对于本领域技术人员显而易见。利用此类策略，辅以此处公开的机制，可利用本发明的核酸和多肽分子产生表达突变CKSRP核酸和多肽分子从而改善胁迫耐受性的藻类、纤毛虫、真菌或其他微生物如谷氨酸棒杆菌。

本发明也提供了能与此处所述核酸编码的CKSRP或其部分特异性结合的抗体。抗体可由多种已知方法制备(见如Harlow和Lane，“Antibodies；A Laboratory Manual，”Cold Spring Harbor Laboratory，Cold SpringHarbor，New York，(1988))。简言之，可将纯化抗原注射入动物体内，其注射量和间隔均足以激发出免疫应答。可直接纯化抗体，或获取动物的脾细胞。然后可将这些细胞与永生细胞系融合并筛选其抗体分泌。抗体可用于筛选核酸克隆文库中分泌抗原的细胞。然后测序那些阳性克隆(见如Kelly等人，1992，Bio/Technology 10：163-167；Bebbington等人，1992，Bio/Technology 10：169-175)。

表述“选择性结合”和“特异性结合”于多肽，是指能确定外源性多肽种群和其他生物制剂中是否存在多肽的结合反应。因此在指定的免疫测定条件下，结合于特定多肽的特异性抗体不会与样品中存在的其他多肽大量结合。此种情况下抗体的选择性结合可能需要选择对特定多肽具有特异性的抗体。多种免疫测定形式可用于选择与特定多肽选择性结合的抗体。例如，常规使用固相ELISA免疫测定以选择与多肽发生选择性免疫反应的抗体。见Harlow和Lane，“Antibodies，A Laboratory Manual”Cold SpringHarbor Publications，New York，(1988)中对可用于确定选择性结合的免疫测定形式和条件的描述。

在某些情况下，需要制备来自多种宿主的单克隆抗体。对制备此类单克隆抗体的技术描述可见于Stites等人编辑，“Basic and ClinicalImmunology，”(Lange Medical Publications，Los Altos，Calif.，FourthEdition)及其中引用参考文献，以及Harlow和Lane“Antibodies，ALaboratory Manual”Cold Spring Harbor Publications，New York，1988。

本申请中参考了多种出版物。所有这些出版物及其中引用参考文献的公开此处全部引用入本申请作为参考，以期更全面地描述本发明涉及的领域的状态。

也应当理解前文涉及本发明优选实施方案，可不背离本发明范围而其进行多种改动。以下实施例进一步说明了本发明，这些实施例的构建不在于对本发明的范围实施限制。与之相反，应当清楚认识到可以采用多种其他实施例、修饰及其等效物，其在阅读此处说明后对于本领域技术人员而言显而易见，且不背离本发明的精神和/或所附权利要求书的范围。

实施例

实施例1-小立碗藓培养物生长。本研究中使用来自University ofHamburg遗传学研究部保藏的植物物种小立碗藓(Hedw.)B.S.G.。它们来自Gransden Wood，Huntingdonshire(England)的H.L.K.Whitehouse保藏的植株16/14，是Engel(1968，Am.J.Bot.55，438-446)孢子的亚培养。通过孢子方法和配子体再生方法实施植物的增殖。单倍体孢子产生原丝体，成为富叶绿体的绿丝体和少叶绿体的茎丝体，约12天后其上形成芽。这些生长成为带有配子托的精子器和颈卵器。受精后产生带有短蒴柄和孢子囊的双倍体孢子体，减数孢子在其中成熟。

在气温25℃、光密度55微摩尔/米²×秒(白光；Philips TL 65W/25荧光管)、光/暗变化为16/8小时的气候室中进行培养。在如Reski和Abel(1985，Planta 165：354-358)使用的Knop培养基的液体培养物中修饰藓类，或在使用1％Oxoid琼脂(Unipath，Basingstoke，England)的Knop固体培养基上培养之。在通风的液体培养基中培养用于RNA和DNA分离的原丝体。每9天粉碎原丝体并转移到新鲜培养基中。

实施例2-从植物中分离总DNA。分离总DNA的细节涉及操作湿重1克的植物材料。使用的材料包括以下缓冲液：CTAB缓冲液：2％(w/v)N-十六烷基-N，N，N-三甲基溴化铵(CTAB)；100mM Tris HCl pH8.0；1.4MNaCl；20mM EDTA；N-月桂醇肌氨酸缓冲液：10％(w/v)N-月桂醇肌氨酸；100mM Tris HCl pH8.0；和20mM EDTA。

液氮下于研钵中研磨植物材料，得到细微粉末并转移到2ml的Eppendorf管中。然后用一层1ml的分解缓冲液(1ml CTAB缓冲液，100μlN-月桂醇肌氨酸缓冲液，20μlβ-巯基乙醇和10μl蛋白酶K溶液，10mg/ml)覆盖冰冻的植物材料，并在60℃持续摇晃温育1小时。将得到的匀浆分到2个Eppendorf管(2ml)中，并用相同体积的氯仿/异戊醇(24∶1)振荡提取两次。为了相分离，将每份在8000g和室温下离心15分钟。然后使用冰冷的异丙醇将DNA在-70℃下沉淀30分钟。在4℃和10,000g下沉积沉淀DNA30分钟并重悬浮于180μlTE缓冲液中(Sambrook等人，1989，Cold SpringHarbor Laboratory Press：ISBN 0-87969-309-6)。为进一步纯化，用NaCl(终浓度1.2M)处理DNA，并用两倍体积的纯乙醇在-70℃再度沉淀30分钟。用70％乙醇清洗之后，干燥DNA，随后以50μl水+RNAse(最终浓度50mg/ml)溶解之。在4℃过夜溶解DNA，然后在37℃进行RNAse消化1小时。4℃下存放DNA。

实施例3-从小立碗藓分离总RNA和聚腺苷酸化RNA以及cDNA文库的构建。为研究转录物，分离了总RNA和聚腺苷酸化RNA。根据GTC方法(Reski等人，1994，Mol.Gen.Genet.，244：352-359)从野生型9天龄的原丝体中获取总RNA。采用Dyna Beads(Dynal，Oslo，Norway)方法，根据生产商手册分离聚腺苷酸化RNA。确定了RNA或聚腺苷酸化RNA的浓度后，通过加入1/10体积的pH4.6的3M醋酸钠和2倍体积的乙醇沉淀RNA并贮存于-70℃。

为建立cDNA文库，利用鼠白血病病毒逆转录酶(Roche，Mannheim，德国)和寡聚-d(T)-引物合成第一链，与DNA聚合酶I、Klenow酶和RNAseH在12℃(2小时)、16℃(1小时)和22℃(1小时)温育消化，合成第二链。在65℃温育10分钟以终止反应，然后转移到冰上。在37℃(30分钟)用T4-DNA聚合酶(Roche，Mannheim)将双链DNA分子补平。用酚/氯仿提取和Sephadex G50旋转柱除去核苷酸。用T4-DNA连接酶(Roche，12℃，过夜)将EcoRI衔接子(Pharmacia，Freiburg，德国)连接到cDNA末端，并与多核苷酸激酶(Roche，37℃，30分钟)温育而磷酸化。在低熔点琼脂糖凝胶上分离该混合物。从凝胶上洗脱大于300碱基对的DNA分子、酚提取、在Elutip-D-柱上浓缩(Schleicher和Schuell，Dassel，德国)、并且将其连接入载体臂，和根据生产商的材料和指南，利用Gigapack Gold试剂盒(Stratagene，Amsterdam，荷兰)将其包装进λZAPII噬菌体或λZAP-Express噬菌体。

实施例4-小立碗藓EST的测序和功能注释。根据标准方法将实施例3描述的cDNA文库用于DNA测序，具体而言利用ABI PRISM Big DyeTerminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit(Perkin-Elmer，Weiterstadt，德国)通过链终止方法进行。通过体内大量剪切、再转化和随后在琼脂平板上铺上DH10B(具体材料和方法来自Stratagene，Amsterdam，荷兰)，从cDNA文库中回收制备的质粒后，实施随机测序。根据生产商的方法，在Qiagene DNA制备自动机械上(Qiagen，Hilden)，从在含有氨苄青霉素的Luria-Broth培养基中过夜生长的大肠杆菌(E.coli)培养物中制备质粒DNA(见Sambrook等人，1989，Cold Spring HarborLaboratory Press：ISBN 0-87969-309-6)。使用具有下列核苷酸序列的测序引物：

5’-CAGGAAACAGCTATGACC-3’    SEQ ID NO：21

5’-CTAAAGGGAACAAAAGCTG-3’   SEQ ID NO：22

5’-TGTAAAACGACGGCCAGT-3’    SEQ ID NO：23

采用Bio-Max(Munich，德国)商业提供的软件包EST-MAX处理序列并进行注释。该程序实际上整合了蛋白质序列的功能和结构性表征的所有重要生物信息学方法。参见pedant.mips.biochem.mpg.de.网站。整合入EST-MAX中最重要的算法有：FASTA(估计统计显著性的高灵敏度的序列数据库搜索；Pearson W.R.，1990，Rapid and sensitive sequence comparisonwith FASTP and FASTA.Methods Enzymol.183：63-98)；BLAST(估计统计显著性的高灵敏度的序列数据库搜索；Altschul S.F.等人，Basic localalignment search tool，Journal of Molecular Biology 215：403-10)；PREDATOR(从单个和多个序列预测高精确度的二级结构。Frishman，D.和Argos，P.，1997，75％accuracy in protein secondary structure prediction.Proteins，27：329-335)；CLUSTALW：多重序列比对.Thompson，J.D.等人，1994，CLUSTAL W(通过序列权重、位置特异性空位罚分和权重矩阵选择，提高累进多重序列比对的灵敏度。Nucleic Acids Research，22：4673-4680)；TMAP(从多个比对的序列预测跨膜区域。Persson，B.和Argos，P.，1994，Prediction of transmembrane segments in proteins utilizing multiplesequence alignments.J.Mol.Biol.237：182-192)；ALOM2(从单个序列预测跨膜区域。Klein，P.等人，Prediction of protein function from sequenceproperties：A discriminate analysis of a database.Biochim.Biophys.Acta787：221-226(1984).第2版由Dr.K.Nakai提供)；PROSEARCH(检测PROSITE蛋白质序列模式。Kolakowski L.F. Jr.，Leunissen J.A.M.，SmithJ.E.，1992，ProSearch：fast searching of protein sequences with regularexpression patterns related to protein  structure and function.Biotechniques 13，919-921)；BLIMPS(对无空位模块数据库的相似性搜索，J.C.Wallace and Henikoff S.，1992)；PATMAT(一种序列、模式、模块查询和数据库的搜索和提取程序，CABIOS 8：249-254.由Bill Alford所写)。

实施例5-鉴定对应于PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4的小立碗藓ORF。采用EST-MAX程序，通过BLAST分析，在小立碗藓EST测序程序中鉴定了部分PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4的小立碗藓部分cDNA(EST)。选择编码蛋白质激酶的特定克隆进一步分析。

表2

PpCK-1与其它激酶的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum 62)

Swiss-Prot编号	Q8LR51	T04265	Q8VYK9	B84577	H96751
						多肽名称	推测的酪蛋白激酶I-	可能的酪蛋白激酶	推测的Col-0酪蛋白激酶I	可能的酪蛋白激酶I	可能的酪蛋白激酶I
物种	稻	拟南芥	拟南芥	拟南芥	拟南芥
						同一性％	32.9	34.3	34.3	34.4	31.4
相似性％	42.4	43.2	43.2	43.9	40.9

表3

PpCK-2与其它激酶的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

Swiss-Prot编号	Q8LR51	T04265	Q8VYK9	Q8S1A8	H96751
						多肽名称	推测的酪蛋白激酶I-	可能的酪蛋白激酶	推测的Col-0酪蛋白激酶I	推测的酪蛋白激酶	可能的酪蛋白激酶I
物种	稻	拟南芥	拟南芥	稻	拟南芥
						同一性％	67.6	63.9	63.9	61.7	64.3
相似性％	76.6	73.3	73.3	71.0	73.8

表4

PpCK-4与其它激酶的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

Swiss-Prot编号	Q8LR51	T04265	Q8S1A8	Q8VYK9	H96751
						多肽名称	推测的酪蛋白激酶I-	可能的酪蛋白激酶	推测的酪蛋白激酶	推测的Col-0酪蛋白激酶I	可能的酪蛋白激酶I
物种	稻	拟南芥	稻	拟南芥	拟南芥
						同一性％	62.8	62.1	59.4	62.1	62.6
相似性％	72.9	71.7	68.3	71.7	71.5

表5

PpPK-4与其它激酶的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

Swiss-Prot编号	Q9SZI1	Q9ZUP4	P42158	Q39050	Q9LW62
						多肽名称	COL-0酪蛋白激酶I-相似蛋白质	推测的酪蛋白激酶I	酪蛋白激酶I，相似δ异构体	酪蛋白激酶I	酪蛋白激酶
物种	拟南芥	拟南芥	拟南芥	拟南芥	拟南芥
						同一性％	35％	35％	37％	35％	35％
相似性％	46％	44％	47％	45％	44％

实施例6-克隆编码PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4的小立碗藓全长cDNA。为从小立碗藓中分离编码PpCK-1(SEQ ID NO：3)、PpCK-2(SEQ ID NO：5)、PpCK-4(SEQ ID NO：1)和PpPK-4(SEQ IDNO：7)的克隆，根据生产商说明，利用SMART RACE cDNA扩增试剂盒(Clontech Laboratories)建立cDNA文库。以如实施例3中所述分离的总RNA为模板。在分离RNA前如下处理培养物：盐胁迫：用添加1M NaCl的培养基处理2、6、12、24、48小时；冷胁迫：以与盐胁迫同样的时间点在4℃下处理；旱胁迫：以与盐胁迫同样的时间点在干滤纸上温育培养物。

5’RACE方法利用实施例5所述的数据库搜索中鉴定的PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4的EST序列，设计RACE的寡聚引物(见表6)。根据生产商的指南，利用Biometra T3循环变温器，使用Advantage 2PCR试剂盒(Clontech Laboratories)和SMART RACE cDNA扩增试剂盒(Clontech Laboratories)，通过实施快速扩增cDNA末端的聚合酶链式反应(RACE PCR)，得到这些基因的延伸序列。从RACE反应中得到的对应于PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4全长编码区域的序列，可用于设计用于每一基因全长克隆的寡聚引物(见以下全长扩增)。

全长扩增利用基因特异性引物(见表6)，以原始EST为模板，通过聚合酶链式反应(PCR)获得对应于PpCK-1、PpCK-2和PpCK-4的全长克隆。反应条件是PWO DNA聚合酶(Roche)的标准条件。根据标准条件和生产商说明实施PCR(Sambrook等人，1989，Molecular Cloning，A LaboratoryManual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，N.Y.，Biometra T3 Thermocycler)。反应参数为：94℃5分钟，随后5个循环(94℃1分钟、50℃1分钟和72℃1.5分钟)。然后是25个循环(94℃1分钟、65℃1分钟和72℃1.5分钟)。

通过利用表6中给定的基因特异性引物的重复RACE方法，分离PpPK-4(SEQ ID NO：7)的全长克隆。

根据生产商说明，采用QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)从琼脂糖凝胶提取扩增的片段，并连接进入TOPO pCR 2.1载体(Invitrogen)。在标准条件下将重组载体转化入Top 10细胞(Invitrogen)(Sambrook等人，1989，Molecular Cloning，A Laboratory Manual.第2版，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY)。在含有100mg/ml羧苄青霉素、0.8mg X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)和0.8mg IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)的LB琼脂上37℃过夜生长以选择转化的细胞。选择白色的菌落，用于接种含有100mg/ml氨苄青霉素的3ml液体LB，并于37℃过夜生长。根据生产商说明，使用QIAprep Spin Miniprep Kit(Qiagen)提取质粒DNA。根据标准的分子生物学技术分析随后的克隆和限制性图谱(Sambrook等人，1989，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)。

表6

用于克隆全长克隆的方案和引物。

基因	终产物位点	分离方法	引物种类	RT-PCR引物
					PpCK-1	XmaI/HpaI	5’RACE和RT-PCR，用于全长克隆	NVT：(SEQ ID NO：24)CGACCGCAGCCCATGAGGAAGTTAT	RC614：(SEQ ID NO：25)ATCCCGGGCTCACGTAGTGCACTGAACTCTGTCRC615：(SEQ ID NO：26)GCGTTAACATGCCCATCTTCTCATACTCAGACC
PpCK-2	XmaI/HpaI	5’RACE和RT-PCR，用于全长克隆	NVT：(SEQ ID NO：27)CTCGCCTACCAAGCCCCATTAGAAA	RC1012：(SEQ ID NO：28)ATCCCGGGTTGTCGAGGACGGAGAGAGAAGAGRC1015：(SEQ ID NO：29)GCGTTAACCTTAGGAATCGTATGGCAGAGAGCT
					PpCK-4	XmaI/HpaI	5’RACE和RT-PCR，用于全长克隆	NVT：(SEQ ID NO：44)GCCTGCCTAGCCCCATCAAGAAATT	RC598：(SEQ ID NO：45)ATCCCGGGCGCAGCATGTGACTCGTCACCTGRC599：(SEQ ID NO：46)GCGTTAACAGCTACTACTTGCTCTAGGAAGCTG
PpPK-4	XmaI/EcoRV	5’RACE和RT-PCR，用于全长克隆	RC072：5’TGTGTCTACGTGTCGCGGGGTCGAT3’(SEQ ID NO：30)	RC133N：5’ATCCCGGGAGGCATTGAACTACCTGGAGTGAG3’(SEQ ID NO：31)RC134N：5’GCGATATCGTTGAACTAGTAATCTGTGTTAACTT3’(SEQ ID NO：32)

实施例7-鉴定对应于ScCK-1的酿酒酵母ORF。酿酒酵母中编码酪蛋白激酶I的ORF 760基因，首次描述于Metanomics Inc.递交于2003年9月30日的欧洲专利申请号03022225.1。Metanomics的专利申请在此处整体引用作为参考。通过用于扩增操作的Pfu DNA聚合酶或PfulTaq DNA聚合酶混合物(Herculase)标准方法，分离ORF 760基因。通过凝胶电泳分析扩增的ORF片段。每个引物由1个通用5’端和ORF特异的3’端组成，依上所述的通用序列对于正向和反向引物不同(正向引物序列对酵母含有EcoRI或者对大肠杆菌含有SmaI，反向引物序列对酵母含有SmaI或对大肠杆菌含有SacI)，从而进行单向克隆。扩增的PCR反应物包括：1x PCR缓冲液、.2mM dNTP、100ng酿酒酵母基因组DNA(S288C)或60ng大肠杆菌K-12基因组DNA(MG1655)、25pmol反向引物、2.5u Pfu或Herculase DNA聚合酶。反应条件包括：94℃3分钟1个循环；接着是25个循环，94℃30秒、55℃30秒和72℃5-6分钟；接着是在72℃6-10分钟1个循环，然后于4℃不确定时间。ScCK-1(ORF 760)的正向序列是5’-GGAATTCCAGCTGACCACCATGTCCCAACGATCTTCACAACAC-3’(SEQ ID NO：33)。ScCK-1(ORF 760)的反向序列是5’-GATCCCCGGGAATTGCCATGTCAAAAAAAAAAAGGAAAAAGAGAAAAG-3’(SEQ ID NO：34)。

实施例8-鉴定对应于BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5的欧洲油菜ORF。

收获组织、分离RNA和构建cDNA文库在多种条件和处理下生长油菜植物，并在各个发育阶段收获不同的组织。以策略性方式进行植物生长和收获，使在至少一个或更多产生的文库中获得全部可表达基因的概率最大化。如实施例3所述从每个收集的样品中分离mRNA，并构建cDNA文库。在生产文库过程中不采用扩增步骤，以最大程度减少样品中的基因冗余并保留表达信息。所有的文库都从寡聚dT柱纯化的mRNA的3’产生。随机挑选cDNA文库转化入大肠杆菌的菌落，并置于微量滴定板上。

探针杂交从大肠杆菌菌落中分离质粒DNA，然后点在膜上。一组288个³³P放射性标记的7核苷酸的寡核苷酸依次与这些膜杂交。为提高通量，处理双份膜。每次杂交后，通过磷屏图像扫描捕捉印迹图像，产生每一寡核苷酸的杂交谱。经由LIMS将这一初步的数据图像自动传送至计算机。通过对图像盒、过滤器以及盒中方位进行条形编码，使其保持完全一致。然后用相对温和的条件处理过滤器以除去结合的探针，并送回到杂交箱进行下一轮杂交。重复杂交和成像的循环，直至完成该组288个寡聚体。

完成杂交后，对于每一斑点(代表一个cDNA插入片段)均产生了关于288个³³P放射性同位素标记的7核苷酸的寡核苷酸中哪些与该特定点(cDNA插入片段)结合，以及结合到什么程度的谱。该谱被定义为由该克隆产生的识别标志。将从每个克隆产生的识别标志与相同生物产生的所有其它识别标志比较，以鉴定相关识别标志的簇。此方法在测序前将来自一个生物的所有克隆“分选”为簇。

基因分离根据这些克隆相同或相似的杂交识别标志，将其分选入不同的簇。簇应该是单个基因或基因家族的表达提示。该分析的副产物是在特定文库中每个基因丰度的表达谱。采用从5’端的单程测序，通过在序列数据库中进行相似性和基序搜索，预测特定克隆的功能。

将酿酒酵母ScCK-1(SEQ ID NO：9)的全长DNA序列对私有的油菜叠连群数据库进行比对，E值为E-10(Altschul，Stephen等人，Gapped BLASTand PSI_BLAST：a new generation of protein database search program，Nucleic Acids Res.25：3389-3402)。分析对于推测的全长序列的所有命中的叠连群，并对代表推测的全长叠连群的最长克隆进行全长测序。从私有叠连群数据库中分离的5个这样的叠连群为BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5。在表8-12中显示了BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5的氨基酸序列与现有技术已知最近基因的同源性。

表8

BnCK-1与相似蛋白质的氨基酸同一性和相似性程度(使用成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

基因名称	公共数据库序列	蛋白质名称	物种	序列同一性(％)	序列相似性(％)
						BnCK-1	Q93Z18	丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶	拟南芥	53.9	65.1

表9

BnCK-2与相似蛋白质的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

基因名称	公共数据库序列	蛋白质名称	物种	序列同一性(％)	序列相似性(％)
						BnCK-2	NP_680447	推测的酪蛋白激酶	拟南芥	91.3	94.7

表10

BnCK-3与相似蛋白质的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

基因名称	公共数据库序列	蛋白质名称	物种	序列同一性(％)	序列相似性(％)
						BnCK-3	NP_567812	推测的酪蛋白激酶	拟南芥	92.5	95.6

表11

BnCK-4与相似蛋白质的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

基因名称	公共数据库序列	蛋白质名称	物种	序列同一性(％)	序列相似性(％)
						BnCK-4	Q9SE85	酪蛋白激酶I相似蛋白质	甘蓝(Brassicaoleracea)	91.2	91.4

表12

BnCK-5与相似蛋白质的氨基酸同一性和相似性程度(使用了成对比较：空位罚分：10；空位拓展罚分：0.1；分数矩阵：blosum62)

基因名称	公共数据库序列	蛋白质名称	物种	序列同一性(％)	序列相似性(％)
						BnCK-5	NP_197320	蛋白激酶家族蛋白质	拟南芥	70.2	73.5

实施例9-通过过量表达PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5基因，改造产生胁迫耐受性拟南芥植物： 二元载体构建：pBPS-JH001。根据生产商说明，用HindIII(Roche)消化pLMNC53质粒构建体(Mankin，2000，Ph.D.thesis，University of North Carolina)，并用Klenow酶和0.1mM dNTP补平。用琼脂糖凝胶纯化该片段，并根据生产商说明通过QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)提取。然后再用EcoRI(Roche)消化纯化的片段，琼脂糖凝胶纯化，并根据生产商说明使用QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)提取。得到的1.4kb片段，庆大霉素盒，包括nos启动子、aacCI基因和g7终止子。

根据生产商说明用EcoRI和SmaI(Roche)消化pBlueScript载体，再根据生产商说明用QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)，从琼脂糖凝胶提取产生的片段。根据生产商说明用T4 DNA连接酶(Roche)将消化的pBluescript载体和庆大霉素盒片段连在一起，使两个分别的EcoRI位点相连，平端化的HindIII位点和SmaI位点相连。

采用标准条件，将重组载体(pGMBS)转化进入Top10细胞(Invitrogen)。在含有100μg/ml羧苄青霉素、0.8mg X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)和0.8mg IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)的LB琼脂上37℃过夜生长，筛选转化细胞。选择白色菌落，用于接种含有100mg/ml氨苄青霉素的3ml液体LB，并在37℃过夜生长。根据生产商说明，使用QIAprep Spin Miniprep Kit(Qiagen)提取质粒DNA。根据标准的分子生物学技术(Sambrook等人，1989，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)，分析随后的克隆和限制性图谱。

根据生产商说明用XbaI和KpnI(Roche)消化pGMBS载体和plbxSuperGUS载体，从pGMBS上切下庆大霉素盒，并从plbxSuperGUS载体产生骨架。根据生产商说明，利用QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)从琼脂糖凝胶提取产生的片段。根据生产商说明利用T4 DNA连接酶(Roche)将这两个片段相连。

采用标准条件，将产生的重组载体(pBPS-JH001)转化进入Top10细胞(Invitrogen)。在含有100μg/ml羧苄青霉素、0.8mg X-gal(5-溴-4-氯-3-吲噪-β-D-半乳糖苷)和0.8mg IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)的LB琼脂上37℃过夜生长，筛选转化细胞。选择白色菌落，用于接种含有100mg/ml氨苄青霉素的3ml液体LB，并在37℃过夜生长。根据生产商指南，使用QIAprep Spin Miniprep Kit(Qiagen)提取质粒DNA。根据标准分子生物学技术(Sambrook等人，1989，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)，分析随后的克隆和限制性图谱。

将PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、RnCK-2、 BnCK-3、BnCK-4和BnCK-5亚克隆入二元载体。根据生产商说明，采用限制性酶两端消化，从重组的PCR2.1 TOPO载体中切下含有不同小立碗藓酪蛋白激酶的片段(见表13)。再根据生产商说明，用QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)从琼脂糖凝胶切下随后的片段，连接入二元载体，用合适的酶裂解(见表13)，并在连接之前去磷酸化。产生的重组载体含有处于组成型超级启动子控制之下的对应正义方向的酪蛋白激酶。

表13

列出用于植物转化的小立碗藓酪蛋白激酶构建体的名称。

基因	用于产生基因片段的酶	用于限制性切割二元载体的酶	重组二元载体构建体
				PpCK-1	XmaI/HpaI	XmaI/Ecl136	pBPS-SY012
PpCK-2	XmaI/HpaI	XmaI/Ecl136	pBPS-JYW034
				PpCK-4	XmaI/HpaI	XmaI/Ecl136	pBPS-SY018
PpPK-4	XmaI/EcoRV	XmaI/Ecl136	pBPS-LVM015

将ScCK-1亚克隆进入二元载体。将ScCK-1基因亚克隆进入含有bar基因(由其T-DNA上的mas1启动子驱动)的二元载体(Velten等人，1984，EMBO J.3：2723-2730；Mengiste等人，1997，Plant J.，12：945-948)。该T-DNA的克隆盒前含有一个组成型启动子，后面为nos终止子(Depicker等人，J.Mol.Appl.Gen.1(6)：561-573)。克隆盒由序列：

5’-GGAATTCCAGCTGACCACCATGGCAATTCCCGGGGATC-3’(SEQID NO：37)组成。其它选择系统和启动子为本领域所公知，并可在本发明中有相似应用(例如，AHAS标记物、泛素启动子(Callis等人，J.Biol. Chem.1990，265：12486-12493；US 5,510,474；US 6,020,190；Kawalleck等人，1993，Plant Mol.Biol.21：673-684)、34S启动子(GenBank登录号M59930和X16673))。

利用供应商(MBI Fermentas，德国)提供的标准方法，用EcoRI和SmaI消化二元载体和ORF 760基因(100ng)。使用Qiagen柱(Qiagen，Hilden，德国)纯化ORF 760基因，并根据标准方法(Maniatis等人)与限制性消化的二元载体(30ng)相连。

农杆菌转化。根据标准条件，将重组载体转化进入根瘤农杆菌C58C1和PMP90中(Hoefgen和Willmitzer，1990；Koncz和Schell，1986，Mol.Gen.Genet.204：383-396)。

植物转化。根据标准条件，生长并转化拟南芥生态型C24(Bechtold，1993，Acad.Sci.Paris.316：1194-1199；Bent等人，1994，Science265：1856-1860)。

筛选含有小立碗藓基因的转化植株。根据标准方法对T1种子进行灭菌(Xiong等人，1999，Plant Molecular Biology Reporter 17：159-170)。在添加1％蔗糖和2μg/ml苯来特(benomyl)(Sigma-Aldrich)的1/2 Murashige和Skoog培养基(MS)(Sigma-Aldrich)、0.6％琼脂上筛选种子。于4℃春化处理平板上的种子4天。这些种子在气温22℃、光密度40微摩尔/米²秒(白光；Philips TL 65W/25荧光管)的气候室中萌发，并采用16小时光照和8小时黑暗的循环。14天后筛选转化的幼苗并转移至添加了0.6％琼脂、1％蔗糖的1/2MS培养基中，使其恢复5-7天。

含有小立碗藓基因的转化植株的干旱耐受性筛选将T1幼苗转移至培养皿中的干燥无菌滤纸，并使其在Sanyo生长箱MLR-350H，微摩尔/米²秒(白光；Philips TL 65W/25荧光管)中，以80％RH(相对湿度)干燥2小时。然后将RH降为60％，再干燥幼苗8小时。然后移出幼苗，置于添加2μg/ml苯来特的1/2MS 0.6％琼脂平板上，5天后记录。然后筛选干旱耐受性提高的转基因植株。

在干旱胁迫条件下，过量表达PpCK-1的拟南芥植株干旱胁迫的存活率为50％(10个受胁迫植株中存活5个)，过量表达PpCK-2的拟南芥植株干旱胁迫的存活率为52％(31个受胁迫植株中存活16个)，而过量表达PpCK-4的拟南芥植株干旱胁迫中的存活率为14％(7个受胁迫植株中存活1个)，相对未转化的对照植株在干旱胁迫中的存活率为11％(9个受胁迫植株中存活1个)。

在三个独立的实验中，筛选含有ScCK-1基因的转基因拟南芥植株的干旱耐受性。第一个实验将植株置于为期12天的干旱条件下。12天之后筛选转基因植株中干旱耐受性提高者。如其膨胀的外观和持续的绿色所示，含ScCK-1转基因的转基因植株(11个植株)保持活力，其存活时间比未转化的野生型对照植株平均多2.2天。

第二个实验中采用来自多个独立转基因株系的植株。将含有ScCK-1转基因的三周龄的转基因植株置于干旱胁迫条件下。如其膨胀的外观和持续的绿色所示，含ScCK-1转基因的转基因植株(6个植株)保持活力，其存活时间比未转化的野生型对照植株平均多0.3天。

第三个实验中，采用来自一个独立转基因株系的多个植株。将含有ScCK-1转基因的三周龄的转基因植株置于干旱胁迫条件下。结果如表14显示。含ScCK-1转基因的转基因植株的光合产量显著高于未转化的野生型对照植株。对于ScCK-1，列出了5个重复植株的平均结果；对于野生型植株，列出了20-25个植株的平均结果。

表14

	光合产量(最后灌溉6天后)	光合产量(最后灌溉10天后)	光合产量(最后灌溉14天后)
				ScCK-1	767	780	147
野生型	757	610	16

对含有小立碗藓基因转化植株的冰冻耐受性筛选将幼苗转移至含有添加2％蔗糖和2μg/ml苯来特的1/2MS 0.6％琼脂的培养皿中。4天后，4℃下温肓幼苗1小时，再用冰屑覆盖。然后把幼苗放置在EnvironmentalSpecialist ES2000环境室中，从-1.0℃开始，每小时降低-1.0℃，温育3.5小时。此后将这些幼苗在-5.0℃孵育24小时，然后在5℃融化12小时。将水排出，5天后记录幼苗。

筛选这些转基因植株提高的冰冻耐受性，证明转基因表达能赋予冰冻耐受性。在冰冻胁迫条件下，过量表达PpCK-1的拟南芥植株在冰冻胁迫中的存活率为100％(14个受胁迫植株中存活14个)，相比而言，未转化的对照植株存活率为2％(48个受胁迫植株中存活1个)。

盐耐受性筛选盐耐受性筛选前的晚上，将幼苗转移至浸泡在1/2MS的滤纸上，并置于添加2μg/ml苯来特的1/2MS、0.6％琼脂上。为了盐耐受性筛选，将载有幼苗的滤纸转移到无菌滤纸纸堆上，浸泡于50mM NaCl的培养皿中。2小时后，将载有幼苗的滤纸转移到无菌滤纸纸堆上，浸泡于200mM NaCl的培养皿中。2小时后，将载有幼苗的滤纸转移到无菌滤纸纸堆上，浸泡于600mM NaCl的培养皿中。10小时后，将幼苗转移到添加2μg/ml苯来特的1/2MS、0.6％琼脂的培养皿中。5天后记录幼苗。

筛选过量表达转基因的转基因植株的盐耐受性，证明转基因表达赋予盐耐受性。在冰冻胁迫条件下，过量表达PpCK-1的拟南芥植株在冰冻胁迫中的存活率为0％(20个受胁迫植株中存活0个)，过量表达PpCK-2的拟南芥植株在冰冻胁迫中的存活率为10％(10个受胁迫植株中存活1个)，过量表达PpCK-4的拟南芥植株在冰冻胁迫中的存活率为0％(6个受胁迫植株中存活0个)，相比而言，未转化的对照植株在冰冻胁迫中的存活率为13％(23个受胁迫植株中存活3个)。

在水限制条件下的生长筛选在组成型启动子控制下，于拟南芥中过表达pCK-1、PpCK-2、PpCK-4和PpPK-4基因。测定转基因株系的水利用效率(WUE)，并在干旱循环后测定某些株系的生物量(图8)。SC024代表空载体对照，BPS C24代表用于转化的拟南芥生态型。DW表示干重，E代表植物水利用。测定柱下面的字母代表独立的实验。

在组成型启动子驱动表达时，测定的转基因株系中，EST 289(PpCK-4)转基因株的干重显著提高。EST 142(PpCK-4)转基因株在干旱循环条件下的WUE和生物量显著提高。EST 194(PpCK-1)在干旱循环条件下的生物量显著提高。对于所有的转基因株，每一参数的平均值与两个对照相比都有提高，WUE为5-8％，DW为11-19％，E为6-9％。可以用转基因表达水平和转基因插入位点的差异来解释基因与基因之间的表型差异。特殊的字母指定每一独立的测定。

表15

在组成型启动子控制下于拟南芥中过量表达ScCK-1(ORF 760)。测定转基因株系的干燥耐受性，在野生型对照死亡后测量存活的平均天数。

株系	实验	平均天数转基因/野生型植株
			760-3	12	0.750.33
760-4	123	0.52.21.053
			平均值		0.97

实施例10-在转基因拟南芥植株中检测转基因。为检测转基因拟南芥株系中转基因的存在，如下例对污染RNA样品的基因组DNA进行PCR。根据生产商说明，采用TaqDNA聚合酶(Roche Molecular Biochemicals)，在50μlPCR反应使用2.5微升RNA样品。

在其中克隆入每个基因的二元载体质粒用作PCR反应中的阳性对照，而野生型C24基因组DNA用作PCR反应中的阴性对照。在0.8％的琼脂糖-溴乙啶凝胶上分析10μl PCR反应物。

PcCK-1：用于反应的引物是：

GCTGACACGCCAAGCCTCGCTAGTC(SEQ ID NO：38)

GCGTTAACATGCCCATCTTCTCATACTCAGACC(SEQ IDNO：39)

PCR程序如下：94℃1分钟、62℃1分钟和72℃4分钟，进行30个循环，然后72℃10分钟。从阳性对照和转基因植株中产生1.7kb的片段。

PcCK-2：用于反应的引物是：

GCTGACACGCCAAGCCTCGCTAGTC(SEQ ID NO：40)

GCGTTAACCTTAGGAATCGTATGGCAGAGAGCT(SEQ IDNO：41)

PCR程序如下：94℃1分钟、62℃1分钟和72℃4分钟，进行30个循环，然后72℃10分钟。从阳性对照和转基因植株中产生1.9kb的片段。

PpPK-4：用于反应的引物是：

5’ATCCCGGGAGGCATTGAACTACCTGGAGTGAG3’(SEQ IDNO：42)

5’GCGATATCGTTGAACTAGTAATCTGTGTTAACTTTATC3’(SEQ ID NO：43)

PCR程序如下：94℃1分钟、62℃1分钟和72℃4分钟，进行30个循环，然后72℃10分钟。从阳性对照和转基因植株中产生1.7kb的片段。

从T1转基因株系中成功扩增了转基因，但野生型C24中则没有。该结果提示T1转基因植株含有至少一个转基因拷贝。没有迹象显示在未转化的拟南芥对照中存在相同或非常相似的基因，所述基因可以通过此法从野生型植株中扩增。

实施例11-通过过量表达PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4或BnCK-5基因，改造胁迫耐受性大豆植株。用70％乙醇对大豆种子进行表面灭菌，在室温下持续摇晃4分钟，接着加入添加0.05％(v/v)吐温的20％(v/v)Clorox持续摇晃20分钟。然后，用蒸馏水洗涤种子4次，并于培养皿中湿润的无菌滤纸上在室温下留置6-39小时。剥去种皮，从胚轴上除去子叶。检查胚轴确定没有破坏分生组织区。将切开的胚轴收集于半开的无菌培养皿中，并在封口的培养皿中用空气干燥至水分含量少于20％(鲜重)，以备后用。

从加入合适选择试剂的LB固体培养基上的单菌落制备根瘤农杆菌，使单菌落生长于液体LB培养基中，直至其600nm下光密度为0.8。然后于室温以7000rpm离心7分钟使细菌培养物沉淀，并重悬浮于加入100μM乙酰丁香酮的MS(Murashige和Skoog，1962)培养基中。使用前在此预诱导培养基中于室温孵育细菌培养物2小时。使水分含量约为15％的大豆合子种子胚轴在室温下吸收预诱导的农杆菌重悬物2小时。从吸涨培养物中取出胚，转移到加入2％蔗糖的含有固体MS培养基的培养皿中，室温下黑暗中孵育2天。或者将胚置于培养皿中湿润的(液体MS培养基)无菌滤纸顶端，于上述同样条件下温育。其后，将胚胎转移到含有500mg/L羧苄青霉素或300mg/L头孢噻肟的固体或液体MS培养基中，以杀死农杆菌。利用液体培养基润湿无菌滤纸。在150μmol m^-2秒^-1和12小时光周期下，将胚胎在25℃孵育4周。一旦幼苗生长出根，将其转移到无菌的Metromix土壤。在将植物转移至土壤之前，洗去体外植株的培养基。将植株在塑料封盖下保持1周，以促进其环境适应过程。然后转移植株到生长室，在其内150μmol m^-2秒^-1光密度和12小时光周期下，于25℃孵育约80天。

根据实施例9所述的筛选方法，筛选转基因植株提高的干旱、盐和冷冻耐受性，证明转基因表达能赋予胁迫耐受性和/或提高水利用效率。

实施例12-通过过量表达PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4或BnCK-5基因，改造胁迫耐受性油菜籽/油菜植株。此处描述的植物转化方法也可应用于芸苔和其它作物。用70％乙醇对油菜种子在室温进行持续摇晃的表面灭菌4分钟，接着加入含0.05％(v/v)吐温的20％(v/v)Clorox，室温下持续摇晃20分钟。然后用蒸馏水洗涤种子4次，并室温下在培养皿中湿润的无菌滤纸上留置18小时。然后剥去种皮，在半开的培养皿中空气干燥过夜。此过程中种子会失去约85％的水含量。接着将种子保藏在室温密闭的培养皿中直至进一步使用。DNA构建体和胚吸收作用如实施例10所述。用PCR分析初级转基因植株样品(T0)，以确认存在T-DNA。用Southern杂交确认此结果，其中DNA在1％的琼脂糖凝胶上电泳并转移到带有正电荷的尼龙膜上(RocheDiagnostics)。利用PCR DIG探针合成试剂盒(Roche Diagnostics)通过PCR制备标记有地高辛配基的PCR探针，并根据生产商推荐的方法使用。

根据实施例9所描述的筛选方法，筛选转基因植株提高的胁迫耐受性，证明转基因表达赋予胁迫耐受性和/或提高的水利用效率。

实施例13-通过过量表达PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4或BnCK-5基因，改造胁迫耐受性的玉米植株。利用Ishida等人，1996，Nature Biotech.14745-50中描述的方法用目标基因转化玉米(Zea Mays L.)。将未成熟胚与带有“超级二元”载体的根瘤农杆菌共同培养，通过器官形成回收转基因植株。此方法的转化效率在2.5％-20％之间。根据实施例9所述的筛选方法，筛选转基因植株提高的干旱、盐和冷冻耐受性，证明转基因表达赋予胁迫耐受性和/或提高水利用效率。

实施例14-通过过量表达PpCK-1、PpCK-2、PpCK-4、PpPK-4、ScCK-1、BnCK-1、BnCK-2、BnCK-3、BnCK-4或BnCK-5基因，改造胁迫耐受性小麦植株。采用Ishida等人1996年描述的方法(Ishida等人，1996，NatureBiotech.14745-50)用目标基因转化小麦。将未成熟胚与带有“超级二元”载体的根瘤农杆菌共同培养，通过器官形成回收转基因植株。此方法的转化效率在2.5％-20％之间。根据实施例9所述的筛选方法，筛选转基因植株提高的胁迫耐受性，证明转基因表达赋予胁迫耐受性和/或提高水利用效率。

实施例15-鉴定同源和异源基因。基因序列可用于从cDNA文库或基因组文库中鉴定同源或异源基因。可使用如cDNA文库通过核酸杂交分离同源基因(例如全长cDNA克隆)。根据目标基因的丰度，铺板100,000到1,000,000个重组噬菌体并转移其至尼龙膜上。碱变性后，通过UV交联将DNA固定在膜上。在高严格条件下进行杂交。在水溶液中，以1M NaCl的离子强度和温度68℃的条件进行杂交。通过如放射性(³²P)缺口转录标记(High Prime，Roche，Mannheim，德国)，产生杂交探针。通过放射自显影检测信号。

可用与上述操作相似的方法，使用低严格度的杂交和洗脱条件鉴定相关但不完全相同的部分同源或异源的基因。对于水相杂交，通常保持离子强度为1M NaCl而将温度从68℃逐步降低至42℃。

利用合成的放射标记的寡核苷酸探针，分离只在一个明显结构域(如10-20个氨基酸)具有同源性(或序列同一性/相似性)的基因序列。利用T4多核苷酸激酶通过磷酸化两条互补寡核苷酸的5’端，来制备放射性标记的寡核苷酸。将互补的寡核苷酸退火，并连接形成串联体。然后用如缺口转录方法，放射性标记该双链串联体。通常在低严格条件下，采用高浓度的寡核苷酸进行杂交。

寡核苷酸杂交溶液：

6×SSC

0.01M磷酸钠

1mM EDTA(pH8)

0.5％SDS

100μg/ml变性鲑精DNA

0.1％脱脂干奶粉

杂交过程中逐步将温度降低到估测寡核苷酸Tm的5-10℃以下或降至室温，然后进行洗脱步骤和放射自显影。在低严格条件下洗脱，如采用4×SSC洗脱3次。更多细节见述于Sambrook，J等人，1989，“MolecularCloning：A Laboratory Manual，”Cold Spring Harbor Laboratory Press或者Ausubel，F.M.等人，1994，“Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley & Sons。

实施例16-用抗体筛选表达文库鉴定同源基因。cDNA克隆可用于在如大肠杆菌中生产重组蛋白质(例如Qiagen QIAexpress pQE系统)。然后通常用Ni-NTA亲和层析(Qiagen)亲合纯化重组蛋白质。此后使用如兔免疫的标准技术，将重组蛋白质用于生产特异性抗体。如Gu等人，1994，BioTechniques 17：257-262所述，用重组抗原饱和的Ni-NTA柱亲合纯化抗体。该抗体可用于筛选表达cDNA文库，以通过免疫筛选鉴定同源或异源基因(Sambrook，J.等人，1989，“Molecular Cloning：A LaboratoryManual”，Cold Spring Harbor Laboratory Press或Ausubel，F.M.等人，1994，“Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley和Sons)。

实施例17-体内诱变。可以通过经由大肠杆菌或其他微生物(例如芽孢杆菌(Bacillus spp.)或酵母如酿酒酵母)的质粒DNA(或其它载体)传代，进行微生物的体内诱变，其破坏维持遗传信息完整性的能力。典型的突变菌株在DNA修复系统基因具有突变(例如mutHLS、mutD、mutT等，参见Rupp，W.D.，1996，DNA repair mechanisms，in：Escherichia coli andSalmonella，p.2277-2294，ASM：Washington.作为参考)。此类菌株为本领域技术人员所公知。此类菌株的使用见于如Greener，A.和Callahan，M.，1994，Strategies 7：32-34。优选在微生物筛选和测试之后，将突变的DNA分子转入植物。根据本发明文档中不同的说明例，生产转基因植株。

实施例18-体外分析转基因生物中小立碗藓基因的功能。酶活性和动力学参数的确定已经为本领域所熟知。确定任一给定的改变酶活性的实验，必须与野生型酶的特异性活性相适应，并为本领域的技术人员的能力所及。对酶类的一般说明，以及关于结构、动力学、原理、方法、应用和许多确定酶活性的实例可见于以下参考文献：Dixon，M.和Webb，E.C.，1979，Enzymes.Longmans：London；Fersht，1985，Enzyme Structure andMechanism.  Freeman：New York；Walsh，1979，Enzymatic ReactionMechanisms.Freeman：San Francisco；Price，N.C.，Stevens，L.，1982，Fundamentals of Enzymology.Oxford Univ.Press：Oxford；Boyer，P.D.编辑，1983，The Enzymes，第3版.Academic Press：New York；Bisswanger，H.，1994，Enzymkinetik，第2版.VCH：Weinheim(ISBN 3527300325)；Bergmeyer，H.U.，Bergmeyer，J.，Graβl，M.编辑，1983-1986，Methods ofEnzymatic Analysis，第3版，卷I-XII，Verlag Chemie：Weinheim；以及Ullmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry，1987，卷A9，Enzymes.VCH：Weinheim，352-363页。

可以用若干明确的方法如DNA条带转移测定(也叫做凝胶阻滞测定)，测定结合DNA的蛋白质活性。用报告基因测定法可测量此类蛋白质对其它分子表达的影响(如Kolmar，H.等人，1995，EMBO J.14：3895-3904及其所引的文献)。报告基因测试系统众所周知，并已使用如β-半乳糖苷酶、绿色荧光蛋白和一些其他种类的酶，建立用于原核和真核细胞中。

根据如Gennis，R.B.，1989，Pores，Channels and Transporters，inBiomembranes，Molecular Structure and Function，第85-137、199-234和270-322页，Springer：Heidelberg.所述的技术，可以确定膜转运蛋白的活性。

实施例19-从转化生物中纯化目的产物。利用本领域公知的多种方法，可以从植物材料(即小立碗藓或拟南芥)、真菌、藻类、纤毛虫、谷氨酸棒杆菌细胞或其它用此处所述核酸序列转化的细菌细胞中，或上述培养物的上清液中回收目的产物。如果目的产物并非从细胞分泌，则可用低速离心从培养物中收获细胞，并采用标准技术如机械力或超声裂解细胞。可以从其他组织或器官机械分离植物器官。匀浆后，离心除去细胞残骸，保留含有可溶蛋白质的上清液部分以进一步纯化得到目的化合物。如果该产物为目的细胞所分泌，则用低速离心将这些细胞从培养物除去，并保留上清液部分用于进一步纯化。

将任一纯化方法得到的上清液进行合适树脂的层析，其中目的分子被层析树脂保留而样品中的许多杂质则不能被保留，或者杂质被树脂保留而样品不被保留。必要时可采用相同或不同的层析树脂，重复这些层析步骤。本领域技术人员熟练掌握合适层析树脂的选择，及其对特定待纯化分子的最有效应用方法。可用通过过滤或超滤浓缩纯化的产物，并保存于该产物最稳定的温度下。

很多纯化方法为本领域所公知，并不仅限于前面描述的纯化方法。这些纯化技术已述于如Bailey，J.E.和Ollis，1986，D.F.BiochemicalEngineering Fundamentals，McGraw-Hill：New York。此外，可利用本领域标准技术评定分离化合物的特征和纯度。这些包括高效液相色谱(HPLC)、分光法、染色方法、薄层层析、MRS、酶测定或者微生物方法。这些分析方法的综述见于Patek等人，1994，Appl.Environ.Microbiol.60：133-140；Malakhova等人，1996，Biotekhnologiya 11：27-32；和Schmidt等人，1998，Bioprocess Engineer.19：67-70；Ulmann’s Encyclopedia ofIndustrial Chemistry，1996，卷A27，VCH：Weinheim，第89-90页，521-540页，540-547页，559-566、575-581和581-587页；Michal，G.，1999，Biochemical Pathways：An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology，John Wiley和Sons；Fallon，A.等人，1987，Laboratory Techniques inBiochemistry and Molecular Bioloy，卷17中的Applications of HPLC inBiochemistry。

序列表

<110>巴斯福植物科学有限公司

<120>酪蛋白激酶胁迫相关多肽及其用于植物的方法

<130>15068-PCT

<140>

<141>

<150>10/904,588

<151>2004-11-17

<150>10/292,408

<151>2002-11-12

<150>60/346,096

<151>2001-11-09

<150>09/828,313

<151>2001-04-06

<150>60/196,001

<151>2000-04-07

<160>77

<170>PatentIn Ver.3.3

<210>1

<211>1942

<212>DNA

<213>小立碗藓(Physcomitrella patens)

<400>1

atcccgggcg cagcatgtga ctcgtcacct gcagtttatt gaagaagaaa tccgtacaga 60

ataaaaggaa tacaacggcg tcgtcttcga tggaaccccg cgtcggcaac aagtatcgcc 120

ttggccggaa aattgggagt ggttcctttg gtgagatcta cctggggacc aatctcgtga 180

ctcatgagga ggtcggcatc aagctggaga gcatcaaggc caagcatcca caattgcttt 240

atgagtccaa gttgtaccgt attcttcaag gaggaactgg gattcccaac atcagatggt 300

acggaattga aggagactat aatgtgatgg ttcttgatct tctgggaccc agtcttgaag 360

atcttttcaa tttctgcagc cggaaattct ctttgaagac agttctcatg cttgccgacc 420

agctgatcaa tcgagtggag tatgtgcatg ccaagagttt cctccacagg gacataaagc 480

ctgacaattt cttgatgggg ctaggcaggc gagcaaatca ggtctatatg attgactttg 540

gtcttgcaaa gaagtatcgc gatcccacta ctcatcagca cattccttat agagagaaca 600

aaaatcttac tggaaccgct cgatatgcaa gtatcaacac tcatcttggt attgaacaaa 660

gcaggagaga tgatctggag tctcttggat atgttctcat gtatttcttg agaggcagcc 720

tgccttggca aggaatgaaa gcaggaacca agaagcagaa gtatgaaaaa atcagtgaga 780

aaaagatgtc cacccctata gagttccttt gtaaagctta cccgtctgag tttgcttcat 840

acttccacta ctgtcggtct cttcggttcg atgacaaacc ggactatgct tacctgaaga 900

gaattttccg agatctcttc attcgtgagg gttttcagtt tgattatgtt ttcgactgga 960

cgattttgaa gtatcagcaa acacattttt ctggtggtcc tctccgtcca gcggctgcgg 1020

cgggaggttc aagtggagca gcagcagcag cggcagcagg aattggtaca gtcccaagag 1080

acgcccagcg agcaattgag cctactgatg ttgccgctcg aactcgaatg gttggtgcga 1140

ctcgctctag tggattaaat ccactggacg cgtcaaagca taagagtact agcccagatg 1200

aagccgcttc taaggacata gcccttagcg gtcttgcaga accagagcgc acgcatgctt 1260

cttcgtttgt gcgggggagc tcatcatcaa ggagagctgt tgttggatgt gctaggccag 1320

cagggtcaac agaggcggga gatggaacgc gggtgttggc tggcaaaatg ggccccacta 1380

gcctgcgcac atcagcagga atgcagagga gctctccggt ggcatctacg gatcccaagc 1440

ggacgggacg agattcttat gctggaaact ccggaagaaa tcctagttcc tctcgaaatt 1500

cgaaagagtg agcacattgg ttgaactggg tcctgcatct tgttcgaaga gcattacaac 1560

tgtatctggc cttggtatct gctgtggttt aggaatttgg ccttgtactt gatttgaaga 1620

acaggttcgt aagaaattga tcaaatttca atgtcgtggg cgtccagttc aggatatggt 1680

tggtggcttg tgatggatat attatctgtt tctatctttg aaggtgttgc ccccagccgt 1740

atagttttca tctttcatag cttgtagttg gcaaagccca ttgccatctg tcaatattca 1800

gagtgtggtt gagggagctg tttagccttc tagataagag atctggattg cgttctggat 1860

tgctgcacag accttgaaga tttgtggctg ttcgagatta tgaaatgaac agcttcctag 1920

agcaagtagt agctgttaac gc                                          1942

<210>2

<211>473

<212>PRT

<213>小立碗藓

<400>2

Met Glu Pro Arg Val Gly Asn Lys Tyr Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

 1                5                 10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Leu Val Thr His

            20                  25                  30

Glu Glu Val Gly Ile Lys Leu Glu Ser Ile Lys Ala Lys His Pro Gln

        35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Arg Ile Leu Gln Gly Gly Thr Gly

    50                  55                  60

Ile Pro Asn Ile Arg Trp Tyr Gly Ile Glu Gly Asp Tyr Asn Val Met

 65                 70                  75                  80

Val Leu Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                85                  90                  95

Ser Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Leu

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Val His Ala Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Met Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Pro Thr

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Ile Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Met Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Lys Ile Ser Glu Lys Lys Met Ser Thr Pro Ile Glu Phe Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Ala Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Thr His Phe Ser Gly Gly Pro

    290                 295                 300

Leu Arg Pro Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ser Ser Gly Ala Ala Ala Ala

305                 310                 315                 320

Ala Ala Ala Gly Ile Gly Thr Val Pro Arg Asp Ala Gln Arg Ala Ile

                325                 330                 335

Glu Pro Thr Asp Val Ala Ala Arg Thr Arg Met Val Gly Ala Thr Arg

            340                 345                 350

Ser Ser Gly Leu Asn Pro Leu Asp Ala Ser Lys His Lys Ser Thr Ser

        355                 360                 365

Pro Asp Glu Ala Ala Ser Lys Asp Ile Ala Leu Ser Gly Leu Ala Glu

    370                 375                 380

Pro Glu Arg Thr His Ala Ser Ser Phe Val Arg Gly Ser Ser Ser Ser

385                 390                 395                 400

Arg Arg Ala Val Val Gly Cys Ala Arg Pro Ala Gly Ser Thr Glu Ala

                405                 410                 415

Gly Asp Gly Thr Arg Val Leu Ala Gly Lys Met Gly Pro Thr Ser Leu

            420                 425                 430

Arg Thr Ser Ala Gly Met Gln Arg Ser Ser Pro Val Ala Ser Thr Asp

        435                 440                 445

Pro Lys Arg Thr Gly Arg Asp Ser Tyr Ala Gly Asn Ser Gly Arg Asn

    450                 455                 460

Pro Ser Ser Ser Arg Asn Ser Lys Glu

465                 470

<210>3

<211>1736

<212>DNA

<213>小立碗藓

<400>3

atcccgggct cacgtagtgc actgaactct gtctgaattt taggggatga gaggtagatt 60

tgaagaatac tggtgtctaa ttttctgtta atttttcacc cttgaggtag ctcatggatt 120

tgggaggtga tcgcatgaga gctcctcaga ggcagtctcg agaatatcaa tatagatcat 180

tggacgtctt cacagagcag cacgagcagt tgcaaaagca gcagcagcaa gatgagtatc 240

agagaacaga attgaagctc gagacactgc caaaaatgtt aagcaatgcg accgtgtcat 300

cttcccctcg aagcagtccg gatggacgta gactacgtac agtcgcgaat aagtatgctg 360

tggaaggtat ggttgggagt ggcgcattct gcaaggtgta tcagggctcc gatttgacga 420

accacgaggt tgtgggcatc aagctggagg atacgagaac tgagcacgct cagttaatgc 480

acgagtcgcg cttgtacaac atattgcggg gtgggaaggg agtgcccaac atgagatggt 540

tcggaaaaga gcaagactac aatgtgatgg tgctagacct attggggccg aacctgttgc 600

acctctttaa ggtgtgtggg ctaaggtttt cgttgaagac cgtgattatg ctcggttacc 660

aaatgattga ccgggtggaa tacgtgcatt ctcgagggct cgttcaccgt gacctgaagc 720

cggataactt cctcatgggc tgcggtcggc aaggaaacca agtgttcatt atagattttg 780

gcttggcaaa ggagtacatg gacccggcaa cacgaaggca tatcccttac cgagatagga 840

agagcttcac agggacggca cggtacgcta gtaggaatca gcacagagga atcgagcaca 900

gtagaagaga tgacatagaa tcacttggtt acattcttat gtactttcta agaggcaatt 960

tgccatggca agggaagggc gggcaacgcc tcactgacca gaagcaacac gagtacatgc 1020

acaacaaaat caagatgaac accactgtgg aggagctttg tgatgggtat cccagtcaat 1080

ttgccgactt tttgcaccac gcgcgaagtc taggtttcta cgagcagcct gactactgtt 1140

acctccgaag cttgttccgt gatcttttca ttcagaaaaa attccagctc gaccatgtgt 1200

acgactggac tgtgtatact caactccccc agaatggctc tctgcaatca gtgcgcagcc 1260

agaattccgc tgcttcgtcc catttgcaaa atcgaccttc gaatgtatca tattgtccac 1320

ccttgaccaa gtcggagttc cgtcgtgagg ttgttgcggc gaattagggc ttacgttggg 1380

aggactagtg gttcatcctc tgctctggta ctaaaatagc acaaggttgc ttactgtttc 1440

cctctctcaa gtcttacatg attgtgaatg ggggtttatg gagttgagga tgaggcaact 1500

aagcagagtg taggaaaaga gttgtagact ctctagtgtg tagtgtgtaa atcaaggctt 1560

ctagcattgt gtcggtagct tgtatggatc agactagaaa tgactttatc cattacaaga 1620

atttttactc ggaaagccca tgacggtgat gatttcaata cgttgcacaa gcaactttct 1680

tctgtaattg aaatagagga tctggtctga gtatgagaag atgggcatgt taacgc     1736

<210>4

<211>417

<212>PRT

<213>小立碗藓

<400>4

Met Asp Leu Gly Gly Asp Arg Met Arg Ala Pro Gln Arg Gln Ser Arg

 1                5                  10                  15

Glu Tyr Gln Tyr Arg Ser Leu Asp Val Phe Thr Glu Gln His Glu Gln

             20                  25                  30

Leu Gln Lys Gln Gln Gln Gln Asp Glu Tyr Gln Arg Thr Glu Leu Lys

         35                  40                  45

Leu Glu Thr Leu Pro Lys Met Leu Ser Asn Ala Thr Val Ser Ser Ser

     50                  55                  60

Pro Arg Ser Ser Pro Asp Gly Arg Arg Leu Arg Thr Val Ala Asn Lys

 65                  70                  75                  80

Tyr Ala Val Glu Gly Met Val Gly Ser Gly Ala Phe Cys Lys Val Tyr

                85                  90                  95

Gln Gly Ser Asp Leu Thr Asn His Glu Val Val Gly Ile Lys Leu Glu

            100                 105                 110

Asp Thr Arg Thr Glu His Ala Gln Leu Met His Glu Ser Arg Leu Tyr

        115                 120                 125

Asn Ile Leu Arg Gly Gly Lys Gly Val Pro Asn Met Arg Trp Phe Gly

    130                 135                 140

Lys Glu Gln Asp Tyr Asn Val Met Val Leu Asp Leu Leu Gly Pro Asn

145                 150                 155                 160

Leu Leu His Leu Phe Lys Val Cys Gly Leu Arg Phe Ser Leu Lys Thr

                165                 170                 175

Val Ile Met Leu Gly Tyr Gln Met Ile Asp Arg Val Glu Tyr Val His

            180                 185                 190

Ser Arg Gly Leu Val His Arg Asp Leu Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met

        195                 200                 205

Gly Cys Gly Arg Gln Gly Asn Gln Val Phe Ile Ile Asp Phe Gly Leu

    210                 215                 220

Ala Lys Glu Tyr Met Asp Pro Ala Thr Arg Arg His Ile Pro Tyr Arg

225                 230                 235                 240

Asp Arg Lys Ser Phe Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Arg Asn Gln

                245                 250                 255

His Arg Gly Ile Glu His Ser Arg Arg Asp Asp Ile Glu Ser Leu Gly

            260                 265                 270

Tyr Ile Leu Met Tyr Phe Leu Arg Gly Asn Leu Pro Trp Gln Gly Lys

        275                 280                 285

Gly Gly Gln Arg Leu Thr Asp Gln Lys Gln His Glu Tyr Met His Asn

    290                 295                 300

Lys Ile Lys Met Asn Thr Thr Val Glu Glu Leu Cys Asp Gly Tyr Pro

305                 310                 315                 320

Ser Gln Phe Ala Asp Phe Leu His His Ala Arg Ser Leu Gly Phe Tyr

                325                 330                 335

Glu Gln Pro Asp Tyr Cys Tyr Leu Arg Ser Leu Phe Arg Asp Leu Phe

            340                 345                 350

Ile Gln Lys Lys Phe Gln Leu Asp His Val Tyr Asp Trp Thr Val Tyr

        355                 360                 365

Thr Gln Leu Pro Gln Asn Gly Ser Leu Gln Ser Val Arg Ser Gln Asn

    370                 375                 380

Ser Ala Ala Ser Ser His Leu Gln Asn Arg Pro Ser Asn Val Ser Tyr

385                 390                 395                 400

Cys Pro Pro Leu Thr Lys Ser Glu Phe Arg Arg Glu Val Val Ala Ala

                405                 410                 415

Asn

<210>5

<211>1900

<212>DNA

<213>小立碗藓

<400>5

atcccgggtt gtcgaggacg gagagagaag agagagagag agagagagag aggtgttgtt 60

taggggaggc atgcgggagc aggattggtg ttaagttcgt aaggagaagg gagtacatgc 120

aagtgcgtgc ttgtcggata tcggacagct ggatttgtaa ataagcggag aggagggtcg 180

gtaatcaggg gcgtacatcg atggagccgc gtgtgggaaa caagtatcgg ctgggacgga 240

aaattgggag cggttccttt ggggagatct atcttgggac caatgttcag accaatgagg 300

aggtcggaat aaagctggaa agcatcaaga cgaagcatcc acaattgctg tacgagtcca 360

agctctaccg gatactacaa ggaggaactg ggattcccaa tatcagatgg ttcgggatag 420

aaggagacta caatgtcttg gttctggatc tgttggggcc aagtctcgaa gaccttttca 480

acttctgcag ccggaagttc tctttaaaga ctgttctcat gcttgctgac cagctgatca 540

acagagtgga gtatgtgcat gcgaaaagct ttcttcatag agacatcaag cctgataatt 600

ttctaatggg gcttggtagg cgagcaaacc aggtctacat tattgatttt ggtcttgcca 660

agaagtaccg cgacccttcc acgcatcagc atattcccta cagggagaac aaaaatctga 720

cagggactgc tcggtatgca agcatcaaca ctcatcttgg tattgagcaa agcagacgag 780

atgatttgga atctcttgga tatgtgctca tgtacttcct gagaggcagt cttccatggc 840

aaggactgaa agcgggaacc aagaagcaga agtacgagaa gatcagtgag aaaaaaatgt 900

ccacgcccat tgaggtcctt tgtaaaaatt atccttcaga attcgcctcg tacttccact 960

actgccggtc cttgcgtttt gatgacaaac ccgactatgc atatttgaaa agaatcttcc 1020

gtgacctctt tattcgtgag ggttttcaat ttgactacgt ttttgactgg acaattctga 1080

agtaccagca gtcacaaatt tccggtggca gttcaactcg actgggtgct tctgcagggc 1140

aaaccagtgg tgcacttgga actggggcta caggaagccg agacctgcag cggcccaccg 1200

aaccaatgga tccttctcgg cgcaggcttc ctggaggagc aaatggctcc ggggtcgcaa 1260

atgctttgga ctcatctaag cacaaaagtc ctggacttga tgaatctgct aaggattctg 1320

ctcttgctgt tgtgtcagaa ccagagcgca tgcatacatc ttcgtatgca actcgggggg 1380

gttcttcctc caggcgagct gtcctatcta gcagcaggcc ctcaggggca tcagcagaag 1440

tcgtagattc ctctcgaaca gggagcagta agcttggtcc caccagctta cggtcgtcag 1500

cagggatgca gaggagctct ccagttactt cggacccaaa gcggatatct agccgccatc 1560

cacaaccgcc atctgccaac ttgaggattt acgaagccgc tatcaaggga gttgaatcac 1620

tttctgttga ggtggatcaa agccgttata agtaggccca ggcttgtggt tatatagccg 1680

ggctctgtct tctatcaaac cctcttgtta tgtagatgag agttgctcta catttggcaa 1740

cagcctgatt gaggggaaaa cggtggttct gtcctacaat ggtgctaaga ctacaggtct 1800

ctcatactta ggaatgaatg gatctctatc ttgttaccat caaaccattg tcagtgcttt 1860

gtgtggtagc tctctgccat acgattccta aggttaacgc                       1900

<210>6

<211>484

<212>PRT

<213>小立碗藓

<400>6

Met Glu Pro Arg Val Gly Asn Lys Tyr Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

 1                5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Val Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Gly Ile Lys Leu Glu Ser Ile Lys Thr Lys His Pro Gln

        35                   40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Arg Ile Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asn Ile Arg Trp Phe Gly Ile Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Leu Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                85                   90                  95

Ser Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Leu

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Val His Ala Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Pro Ser

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Ile Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Lys Ile Ser Glu Lys Lys Met Ser Thr Pro Ile Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Asn Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Ile Ser Gly Gly Ser

    290                 295                 300

Ser Thr Arg Leu Gly Ala Ser Ala Gly Gln Thr Ser Gly Ala Leu Gly

305                 310                 315                 320

Thr Gly Ala Thr Gly Ser Arg Asp Leu Gln Arg Pro Thr Glu Pro Met

                325                 330                 335

Asp Pro Ser Arg Arg Arg Leu Pro Gly Gly Ala Asn Gly Ser Gly Val

            340                 345                 350

Ala Asn Ala Leu Asp Ser Ser Lys His Lys Ser Pro Gly Leu Asp Glu

        355                 360                 365

Ser Ala Lys Asp Ser Ala Leu Ala Val Val Ser Glu Pro Glu Arg Met

    370                 375                 380

His Thr Ser Ser Tyr Ala Thr Arg Gly Gly Ser Ser Ser Arg Arg Ala

385                 390                 395                 400

Val Leu Ser Ser Ser Arg Pro Ser Gly Ala Ser Ala Glu Val Val Asp

                405                 410                 415

Ser Ser Arg Thr Gly Ser Ser Lys Leu Gly Pro Thr Ser Leu Arg Ser

            420                 425                 430

Ser Ala Gly Met Gln Arg Ser Ser Pro Val Thr Ser Asp Pro Lys Arg

        435                 440                 445

Ile Ser Ser Arg His Pro Gln Pro Pro Ser Ala Asn Leu Arg Ile Tyr

    450                 455                 460

Glu Ala Ala Ile Lys Gly Val Glu Ser Leu Ser Val Glu Val Asp Gln

465                 470                 475                 480

Ser Arg Tyr Lys

<210>7

<211>1795

<212>DNA

<213>小立碗藓

<400>7

gcccttatcc cgggaggcat tgaactacct ggagtgagat ttttttggga atttgaaaga 60

gaattacata tatacaaggt tgaggctcac cgagaacaag tctgctgata gcttcttcac 120

tcttgaaata gatagttcat catggattca ggaggtgacc gcgtgcgagc tcctcagaag 180

cagtctcgcg aggaggatca gtaccgttca ttgaacattg ctacagagca tcgtcagcat 240

atacagaagc accaacaaca ccaacagcag ccggggactg gattggttgt tgaaacgctt 300

caaaaaacac tatgtaacgt gactgtgacc tcacctacaa gcagtccgga ggggggtaga 360

ttacgtactg ttgcgaacaa gtatgcagtg gaaggaatgg tcggcagtgg cgcattttgc 420

aaggtgtacc agggttctga cttaaccaac catgaggttg tgggcatcaa gctcgaggat 480

acaagaacag agcacgcaca attgatgcac gagtcgcgat tatacaacat tttgcggggt 540

ggaaagggag tgcccaacat gagatggttt gggaaagagc aagactacaa tgtgatggtg 600

ctagatttgc tggggcctaa cctactgcac cttttcaagg tgtgtgggca aagattttcg 660

ttgaagacgg tgatcatgtt ggggtaccaa atgatcgacc gggtggagta cgtgcactcg 720

cgaggtctag ttcatcgtga cttgaaacca gataatttcc tcatgggctg cggccggcaa 780

gggaaccaag tgttcattat tgactttggc ttggcaaaag agtacatcga ccccgcgaca 840

cgtagacaca ttccttaccg agatagaaag agctttacag gaacagcgcg gtatgctagt 900

aggaatcagc acaaaggaat cgaacacagc aggagagatg acatagaatc acttggttac 960

attcttatgt actttcttag ggggaattta ccatggcaag gtcaaggggg gcaacgtttc 1020

accgatcaga agcaacatga gtacatgcac aacaaaatta agatggagac taccatcgag 1080

gatctctgcg atgggtaccc cagacaattt gccgactttt tacaccacgc gcgcgagttg 1140

ggattctatg agcagcctga ctactcgtac cttcgcagcc tgttccgtga tcttttcatt 1200

cagaagaaat tccagcttga ccatgtctac gactggacag tgtacactca acctcctcag 1260

aatggctctg cacaaacagt tcgaagcccg gctgccggtc cacagactca cttacaaagt 1320

cgcccttcca atgtatcata ttgtccacct ctgactaaac cagagttccg gcgtgaggta 1380

gttgcggcga attagggttt acacaggaag agatgtggta aagcatctca tcttcttcgt 1440

tctggtgcca aaatggtaca aggtcgtctg ctgtctcttt ctcgcaagcc ctcacatata 1500

gatgaaggtt tgtgaagtta gagatgcaac taccaagcaa aggctaggaa aagagctgta 1560

gactttctag tgtgtagtgt gtaaatcaag gcttctggca tggtatcggc agtcaggtgc 1620

atggagcaga atagaaatta cttcgtgcat gacaagattt tttttcttgc agagctctcg 1680

acggttctgc gatctcactt ctctacacaa ccagcgctcc tttaattgaa aagaggatct 1740

ggtacgagta tgataaagtt aacacagatt actagttcaa cgatatcgca agggc      1795

<210>8

<211>417

<212>PRT

<213>小立碗藓

<400>8

Met Asp Ser Gly Gly Asp Arg Val Arg Ala Pro Gln Lys Gln Ser Arg

 1                5                  10                  15

Glu Glu Asp Gln Tyr Arg Ser Leu Asn Ile Ala Thr Glu His Arg Gln

             20                  25                  30

His Ile Gln Lys His Gln Gln His Gln Gln Gln Pro Gly Thr Gly Leu

         35                  40                  45

Val Val Glu Thr Leu Gln Lys Thr Leu Cys Asn Val Thr Val Thr Ser

    50                   55                  60

Pro Thr Ser Ser Pro Glu Gly Gly Arg Leu Arg Thr Val Ala Asn Lys

 65                  70                  75                  80

Tyr Ala Val Glu Gly Met Val Gly Ser Gly Ala Phe Cys Lys Val Tyr

                85                   90                  95

Gln Gly Ser Asp Leu Thr Asn His Glu Val Val Gly Ile Lys Leu Glu

            100                 105                 110

Asp Thr Arg Thr Glu His Ala Gln Leu Met His Glu Ser Arg Leu Tyr

        115                 120                 125

Asn Ile Leu Arg Gly Gly Lys Gly Val Pro Asn Met Arg Trp Phe Gly

    130                 135                 140

Lys Glu Gln Asp Tyr Asn Val Met Val Leu Asp Leu Leu Gly Pro Asn

145                 150                 155                 160

Leu Leu His Leu Phe Lys Val Cys Gly Gln Arg Phe Ser Leu Lys Thr

                 165                 170                 175

Val Ile Met Leu Gly Tyr Gln Met Ile Asp Arg Val Glu Tyr Val His

            180                 185                 190

Ser Arg Gly Leu Val His Arg Asp Leu Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met

        195                 200                 205

Gly Cys Gly Arg Gln Gly Asn Gln Val Phe Ile Ile Asp Phe Gly Leu

    210                 215                 220

Ala Lys Glu Tyr Ile Asp Pro Ala Thr Arg Arg His Ile Pro Tyr Arg

225                 230                 235                 240

Asp Arg Lys Ser Phe Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Arg Asn Gln

                245                 250                 255

His Lys Gly Ile Glu His Ser Arg Arg Asp Asp Ile Glu Ser Leu Gly

            260                 265                 270

Tyr Ile Leu Met Tyr Phe Leu Arg Gly Asn Leu Pro Trp Gln Gly Gln

        275                 280                 285

Gly Gly Gln Arg Phe Thr Asp Gln Lys Gln His Glu Tyr Met His Asn

    290                 295                 300

Lys Ile Lys Met Glu Thr Thr Ile Glu Asp Leu Cys Asp Gly Tyr Pro

305                 310                 315                 320

Arg Gln Phe Ala Asp Phe Leu His His Ala Arg Glu Leu Gly Phe Tyr

                325                 330                 335

Glu Gln Pro Asp Tyr Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Phe Arg Asp Leu Phe

            340                 345                 350

Ile Gln Lys Lys Phe Gln Leu Asp His Val Tyr Asp Trp Thr Val Tyr

        355                 360                 365

Thr Gln Pro Pro Gln Asn Gly Ser Ala Gln Thr Val Arg Ser Pro Ala

    370                 375                 380

Ala Gly Pro Gln Thr His Leu Gln Ser Arg Pro Ser Asn Val Ser Tyr

385                 390                 395                 400

Cys Pro Pro Leu Thr Lys Pro Glu Phe Arg Arg Glu Val Val Ala Ala

                405                 410                 415

Asn

<210>9

<211>1575

<212>DNA

<213>酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)

<400>9

atgtcccaac gatcttcaca acacattgta ggtattcatt atgctgtagg acctaagatt 60

ggcgaagggt ctttcggagt aatatttgag ggagagaaca ttcttcattc ttgtcaagcg 120

cagaccggta gcaagaggga ctctagtata ataatggcga acgagccagt cgcaattaaa 180

ttcgaaccgc gacattcgga cgcaccccag ttgcgtgacg aatttagagc ctataggata 240

ttgaatggct gcgttggaat tccccatgct tattattttg gtcaagaagg tatgcacaac 300

atcttgatta tcgatttact agggccatca ttggaagatc tctttgagtg gtgtggtaga 360

aaattttcag tgaaaacaac ctgtatggtt gccaagcaaa tgattgatag agttagagca 420

attcatgatc acgacttaat ctatcgcgat attaaacccg ataacttttt aatttctcaa 480

tatcaaagaa tttcacctga aggaaaagtc attaaatcat gtgcctcctc ttctaataat 540

gatcccaatt taatatacat ggttgacttt ggtatggcaa aacaatatag agatccaaga 600

acgaaacaac atataccata ccgtgaacga aaatcattga gcggtaccgc cagatatatg 660

tctattaata ctcattttgg aagagaacag tcacgtaggg atgatttaga atcgctaggt 720

cacgtttttt tttatttctt gaggggatcc ttgccatggc aaggtttgaa agcaccaaac 780

aacaaactga agtatgaaaa gattggtatg actaaacaga aattgaatcc tgatgatctt 840

ttattgaata atgctattcc ttatcagttt gccacatatt taaaatatgc acgttccttg 900

aagttcgacg aagatccgga ttatgactat ttaatctcgt taatggatga cgctttgaga 960

ttaaacgact taaaggatga tggacactat gactggatgg atttgaatgg tggtaaaggc 1020

tggaatatca agattaatag aagagctaac ttgcatggtt acggaaatcc aaatccaaga 1080

gtcaatggca atactgcaag aaacaatgtg aatacgaatt caaagacacg aaatacaacg 1140

ccagttgcga cacctaagca acaagctcaa aacagttata acaaggacaa ttcgaaatcc 1200

agaatttctt cgaacccgca gagctttact aaacaacaac acgtcttgaa aaaaatcgaa 1260

cccaatagta aatatattcc tgaaacacat tcaaatcttc aacggccaat taaaagtcaa 1320

agtcaaacgt acgactccat cagtcataca caaaattcac catttgtacc atattcaagt 1380

tctaaagcta accctaaaag aagtaataat gagcacaact taccaaacca ctacacaaac 1440

cttgcaaata agaatatcaa ttatcaaagt caacgaaatt acgaacaaga aaatgatgct 1500

tattctgatg acgagaatga tacattttgt tctaaaatat acaaatattg ttgttgctgt 1560

ttttgttgct gttga                                                  1575

<210>10

<211>524

<212>PRT

<213>酿酒酵母

<400>10

Met Ser Gln Arg Ser Ser Gln His Ile Val Gly Ile His Tyr Ala Val

 1                5                  10                  15

Gly Pro Lys Ile Gly Glu Gly Ser Phe Gly Val Ile Phe Glu Gly Glu

             20                  25                  30

Asn Ile Leu His Ser Cys Gln Ala Gln Thr Gly Ser Lys Arg Asp Ser

     35                  40                  45

Ser Ile Ile Met Ala Asn Glu Pro Val Ala Ile Lys Phe Glu Pro Arg

     50                  55                  60

His Ser Asp Ala Pro Gln Leu Arg Asp Glu Phe Arg Ala Tyr Arg Ile

 65                  70                  75                  80

Leu Asn Gly Cys Val Gly Ile Pro His Ala Tyr Tyr Phe Gly Gln Glu

                 85                  90                  95

Gly Met His Asn Ile Leu Ile Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu

            100                 105                 110

Asp Leu Phe Glu Trp Cys Gly Arg Lys Phe Ser Val Lys Thr Thr Cys

        115                 120                 125

Met Val Ala Lys Gln Met Ile Asp Arg Val Arg Ala Ile His Asp His

    130                 135                 140

Asp Leu Ile Tyr Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Ile Ser Gln

145                 150                 155                 160

Tyr Gln Arg Ile Ser Pro Glu Gly Lys Val Ile Lys Ser Cys Ala Ser

                165                 170                 175

Ser Ser Asn Asn Asp Pro Asn Leu Ile Tyr Met Val Asp Phe Gly Met

            180                 185                 190

Ala Lys Gln Tyr Arg Asp Pro Arg Thr Lys Gln His Ile Pro Tyr Arg

        195                 200                 205

Glu Arg Lys Ser Leu Ser Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ser Ile Asn Thr

    210                 215                 220

His Phe Gly Arg Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly

225                 230                 235                 240

His Val Phe Phe Tyr Phe Leu Arg Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu

                245                 250                 255

Lys Ala Pro Asn Asn Lys Leu Lys Tyr Glu Lys Ile Gly Met Thr Lys

            260                 265                 270

Gln Lys Leu Asn Pro Asp Asp Leu Leu Leu Asn Asn Ala Ile Pro Tyr

        275                 280                 285

Gln Phe Ala Thr Tyr Leu Lys Tyr Ala Arg Ser Leu Lys Phe Asp Glu

    290                 295                 300

Asp Pro Asp Tyr Asp Tyr Leu Ile Ser Leu Met Asp Asp Ala Leu Arg

305                 310                 315                 320

Leu Asn Asp Leu Lys Asp Asp Gly His Tyr Asp Trp Met Asp Leu Asn

                325                 330                 335

Gly Gly Lys Gly Trp Asn Ile Lys Ile Asn Arg Arg Ala Asn Leu His

            340                 345                 350

Gly Tyr Gly Asn Pro Asn Pro Arg Val Asn Gly Asn Thr Ala Arg Asn

        355                 360                 365

Asn Val Asn Thr Asn Ser Lys Thr Arg Asn Thr Thr Pro Val Ala Thr

    370                 375                 380

Pro Lys Gln Gln Ala Gln Asn Ser Tyr Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser

385                 390                 395                 400

Arg Ile Ser Ser Asn Pro Gln Ser Phe Thr Lys Gln Gln His Val Leu

                405                 410                 415

Lys Lys Ile Glu Pro Asn Ser Lys Tyr Ile Pro Glu Thr His Ser Asn

            420                 425                 430

Leu Gln Arg Pro Ile Lys Ser Gln Ser Gln Thr Tyr Asp Ser Ile Ser

        435                 440                 445

His Thr Gln Asn Ser Pro Phe Val Pro Tyr Ser Ser Ser Lys Ala Asn

    450                 455                 460

Pro Lys Arg Ser Asn Asn Glu His Asn Leu Pro Asn His Tyr Thr Asn

465                 470                 475                 480

Leu Ala Asn Lys Asn Ile Asn Tyr Gln Ser Gln Arg Asn Tyr Glu Gln

                485                 490                 495

Glu Asn Asp Ala Tyr Ser Asp Asp Glu Asn Asp Thr Phe Cys Ser Lys

            500                 505                 510

Ile Tyr Lys Tyr Cys Cys Cys Cys Phe Cys Cys Cys

        515                 520

<210>11

<211>1525

<212>DNA

<213>欧洲油菜(Brassica napus)

<400>11

agttgtctga atttgagaaa aaaagtctga gactttgttt tagagagaaa tcaatggatc 60

ttgtgattgg tgggaaattc aaacttggca gaaaaattgg cagtggatca tttggagagc 120

tctatcttgg tgtaaatgtc caaaccggag aagaagttgc tgttaagctg gaatctgtca 180

agaccaagca tcctcagcta cactatgagt ccaaattgta tacgttgctt caaggaggaa 240

gtggtattcc taacatcaag tggtatggag ttgatggaga atacaatgtt atggttattg 300

accttctagg tccaagtctt gaagacttgt tcaactactg caaccgaaaa ctctctttga 360

aaaccgttct catgcttgct gatcaactta ttaacagagt tgagtatatg cacactagag 420

gtttccttca ccgtgatatt aagcctgaca acttcttaat gggcctcggc cgcaaagcaa 480

accaggttta tataattgat tttggattgg ggaagaaata cagagacctt cagactcaca 540

ggcacattcc ttacagagaa aacaaaaacc tcactggaac agctcggtat gcaagtgtca 600

acacacacct tggagtagaa caaagtcgaa gggacgattt ggaagcagtt ggttatgtgc 660

ttatgtactt cctcaaagga agcttaccat ggcagggatt aaaagctggg acaaggaagc 720

agaagtatga cagaataagt gagaagaaag tctcaactcc tatagaggtc ttatgtagaa 780

accaaccgtc tgagtttgtt tcttacttcc gctactgccg gtctctacgg tttgatgaca 840

aacctgatta ctcttacctc aagaggctat tccgagactt gtttattaga gaaggttatc 900

agtttgatta tgtatttgac tggaccgtct tgaagcatcc gcaaactggt tccagctcca 960

gttctagttc aagaacacgg gatcatacaa ctggaaaacc ggagttaact gctggaaaac 1020

cggagaggac tgctggcaat aggttatcag gtgcggttga agctttttca agaaggcatg 1080

caacaccacg tgatcggtct gcatcaagaa actctgatga tgtccctgtt ggtggtggtg 1140

agtcagaaag aagaggcagt tcgtcaagaa acggaagctc ttcaaggaga gcaatcgcct 1200

cgagctcacg tccaagttca gctgggggtc ctagtgatag cagatcctct agccgtttgg 1260

tgacttcaag cggcggtggt ggaatgggat caacgagcca gagaatggga ccaggaggat 1320

atgagtcaaa gaagagttcg actctttccc gtggtgctag aaacactcgg ggagatccgt 1380

taaggaggag cttcgagctt ctttctcttc gtaaatcatg agaaacatac aaagaaagag 1440

attttataca aacgaaaatc tatatatata tatataagat atacaataca aacgattcat 1500

atacttcaaa aaaaaaaaaa aaaaa                                       1525

<210>12

<211>455

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>12

Met Asp Leu Val Ile Gly Gly Lys Phe Lys Leu Gly Arg Lys Ile Gly

 1                5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Leu Tyr Leu Gly Val Asn Val Gln Thr Gly

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Ser Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu His Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Thr Leu Leu Gln Gly Gly Ser Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asn Ile Lys Trp Tyr Gly Val Asp Gly Glu Tyr Asn Val Met

 65                  70                  75                  80

Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Tyr Cys

                 85                  90                  95

Asn Arg Lys Leu Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Leu

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Met His Thr Arg Gly Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Lys Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Gly Lys Lys Tyr Arg Asp Leu Gln

145                 150                 155                 160

Thr His Arg His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His Leu Gly Val Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ala Val Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Lys

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Arg Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Asp Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Pro Ile Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Asn Gln Pro Ser Glu Phe Val Ser Tyr Phe Arg Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ser Tyr Leu Lys Arg Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Tyr Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Val Leu Lys His Pro Gln Thr Gly Ser Ser Ser Ser Ser

    290                 295                 300

Ser Ser Arg Thr Arg Asp His Thr Thr Gly Lys Pro Glu Leu Thr Ala

305                 310                 315                 320

Gly Lys Pro Glu Arg Thr Ala Gly Asn Arg Leu Ser Gly Ala Val Glu

                325                 330                 335

Ala Phe Ser Arg Arg His Ala Thr Pro Arg Asp Arg Ser Ala Ser Arg

            340                 345                 350

Asn Ser Asp Asp Val Pro Val Gly Gly Gly Glu Ser Glu Arg Arg Gly

        355                 360                 365

Ser Ser Ser Arg Asn Gly Ser Ser Ser Arg Arg Ala Ile Ala Ser Ser

    370                 375                 380

Ser Arg Pro Ser Ser Ala Gly Gly Pro Ser Asp Ser Arg Ser Ser Ser

385                 390                 395                 400

Arg Leu Val Thr Ser Ser Gly Gly Gly Gly Met Gly Ser Thr Ser Gln

                405                 410                 415

Arg Met Gly Pro Gly Gly Tyr Glu Ser Lys Lys Ser Ser Thr Leu Ser

            420                 425                 430

Arg Gly Ala Arg Asn Thr Arg Gly Asp Pro Leu Arg Arg Ser Phe Glu

        435                 440                 445

Leu Leu Ser Leu Arg Lys Ser

    450                 455

<210>13

<211>1716

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>13

gaaagagaga gataaagcaa aggagacaat ctacattcct ttttgttgtt cccccagatc 60

acgagaagaa ggagtctaga gagaaggtga ctatcgggtt cctctgtttt cccctgtttc 120

atcaacccta attccccaga aaattcaatc tttccttgct tctttccctg agacaatcct 180

gggtttgcgg ctctgactcc gttggattaa aaggtttctt caaagacgca ttttgctttc 240

gatagaggat aaaagtttcc tcttttaagt cggctttggg gttgatggag gctcgtgtgg 300

ggaacaagtt tcgtctcgga cgcaaaatcg ggagcggttc ttttggagag atccatctcg 360

gtactcatct tcaaacgaat gaagaagtcg ccatcaagct tgaaaatgcc aagacaaaac 420

atccacagct gctttatgaa tccaagttat acagacttct acagggagga actggtgttc 480

caaatctcaa gtggtttggt gttgaaggcg actacaatgt tctggtcatg gatttacttg 540

gacctagtct tgaagacttg ttcaatttct gtagcaggaa actttctctc aagtccgtcc 600

tcatgcttgc tgatcaaatg ataaaccgtg ttgagtattt ccattcgaaa tctttcctcc 660

accgagatct caagcctgac aacttcctca tggggttagg gagacgcgcc aaccaggtat 720

acatcatcga ctttggtctt gcaaagaagt acagagataa cactactcat cagcacattc 780

cttaccgaga aaacaagaat ctcactggaa ctgcaagata tgctagtatg aacactcact 840

tgggaattga acaaagcaga agggatgact tagaatctct tggttacatt ctcatgtatt 900

tccttaaagg aagtcttcca tggcaagggc ttaaagctgg aaccaagaaa caaaaatatg 960

agagaatcag cgaaaagaaa gtctctacat ccattgagtc cttatgccgt ggctacccat 1020

ctgagttcgc atcctacttc cattactgcc gctccctccg gtttgatgat aaaccagatt 1080

acggttacct caaaagaata ttcagagatc tcttcatccg cgaagggttt caattcgatt 1140

atgtctttga ctggaccata ctgaagtacc aacagtcaca gctaacagct cctccaacac 1200

gtggccctgc ggctggaacc agttcgggtt tgtctccagg attgaccagc actgatagat 1260

acggagagga agatggaggg agaccaccga tggattcatc aagaaggaga acatcaggag 1320

ctctcgagaa ctcatcagct gctgttagag ctccaatgat gccaagctcg tcgctgttcg 1380

gacaatcagc aggatcatcg aggagagtaa cgtctgagga gctgcagaga agccgtacgg 1440

gcagtggatt gagaaactct gggatggttt caacgtcgga gaggaagaga tcttcttcca 1500

ctaggaaaca atatgattct gctatcaaag gcattgagac tctccatgtc tctgacgaaa 1560

ggtatcacca ccattgatct atcggttaga aagagaaaaa acatgtcatg tttgtattaa 1620

tcatataaag attcgactct atatattaga gaaaccagta ttttttgtgt tgtttttaat 1680

cttctcattt tttacgtgaa aaaaaaaaaa aaaaaa                           1716

<210>14

<211>430

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>14

Met Glu Ala Arg Val Gly Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

 1                5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile His Leu Gly Thr His Leu Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Asn Ala Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Arg Leu Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Val Pro Asn Leu Lys Trp Phe Gly Val Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Leu Ser Leu Lys Ser Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Phe His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Leu Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Asn Thr

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Ile Leu Met Tyr Phe Leu Lys

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ser Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Gly Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Gly Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Leu Thr Ala Pro Pro

    290                 295                 300

Thr Arg Gly Pro Ala Ala Gly Thr Ser Ser Gly Leu Ser Pro Gly Leu

305                 310                 315                 320

Thr Ser Thr Asp Arg Tyr Gly Glu Glu Asp Gly Gly Arg Pro Pro Met

                325                 330                 335

Asp Ser Ser Arg Arg Arg Thr Ser Gly Ala Leu Glu Asn Ser Ser Ala

            340                 345                 350

Ala Val Arg Ala Pro Met Met Pro Ser Ser Ser Leu Phe Gly Gln Ser

        355                 360                 365

Ala Gly Ser Ser Arg Arg Val Thr Ser Glu Glu Leu Gln Arg Ser Arg

    370                 375                 380

Thr Gly Ser Gly Leu Arg Asn Ser Gly Met Val Ser Thr Ser Glu Arg

385                 390                 395                 400

Lys Arg Ser Ser Ser Thr Arg Lys Gln Tyr Asp Ser Ala Ile Lys Gly

                405                 410                 415

Ile Glu Thr Leu His Val Ser Asp Glu Arg Tyr His His His

            420                 425                 430

<210>15

<211>1830

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>15

cggcgattca actcttcttc cacggcggca ttggatggtt ccttctctga cgcaggagag 60

aaagagagaa agaattttga aacaggtgtt tagggttctt gtctgaatgg acttgaaaat 120

ggataatgta atcggtggca agtttaagct tggtcggaag atcggcggtg gctcttttgg 180

agagcttttt cttggagtaa gtgtgcaaac cggagaagag gtcgctgtaa agctggagcc 240

tgcgaaaact aagcatccac aacttcatta tgagtccaag atttatatgc ttctacaagg 300

aggaactggc atccccagcc tcaagtggtt tggggttcag ggagactaca atgcgatggt 360

cattgatctc cttggtccga gtttggaaga tttgttcaac tattgtaata gaaagctcac 420

tttgaaggca gttctgatgc ttgcggatca actgattagc agagttgagt atatgcattc 480

aagaggattt ctacaccgag acataaaacc agacaatttc ttgatgggac ttggtcgcaa 540

agcaaaccag gtgtatgtca ttgattttgg ccttgcaaag aagtataggg atctccaaac 600

acatagacac atcccctaca gagaaaacaa gaaccttacg ggcacagctc ggtatgctag 660

cgtcaacact caccttggtg ttgagcaaag tcgaagggat gatctggagt ctcttggtta 720

cgtgctcatg tatttcctca gaggaagcct gccatggcag ggactaaaag ctggcacaaa 780

gaagcagaag tatgacagaa tcagtgagaa gaaagtttca actcctatag aggtcttgtg 840

caagtcctat ccacaagaat tcgtatcata ctttcaatac tgcaggtcct tgcgattcga 900

agacaaacca gactactcgt atctaaagag gctattccgg gatttgttta tccgcgaagg 960

ctatcagttt gactatgtat ttgactggac tgcactgaaa caccctcaga gtagttctag 1020

ctcccggtcc agctcacacg gaaggcatcg tacgggtaaa ccagttgcgg ccgcaggacc 1080

gtctgctgag aaacctgaaa ggatctcagt tgggagggaa atccgcgaca gattctctgg 1140

tgcagttgaa gcattcgcga gaaggaacgc tacaggagcc actccccatc aaaaccaaac 1200

caagcatcga actcttgacg atgttcctcc accaatgaaa cctgctgtga atatggtatc 1260

tgagaaagga agaaacactt ccggatacgg cagtgcttca aggagagcgg tggcctcagg 1320

gagtagacca agctcatcag gtgaacaagg ggacagccgc ggttcaagcc gtgtggcctc 1380

tagtggaggt ggtgttcgac cttctgtttt ccagagagct caagcggcag ctggtgtgag 1440

tggatatgag tcgaagacag cctctgcctt taaccgcaac agagtggctg cttctaggac 1500

tgcacgtgac gatgctctca gaagctttga gcttctttct atccgcaaat gagaaagtta 1560

gtaagaacaa acgaaagtta ctatcaactc tttttctgta aattggattc ttctttacac 1620

gtgtgttgtt tggtcctcac gtttccacga aactaccaaa tttttcatgt attatgaatg 1680

taacgtttct ctggattttt gtattaaatt gttacgctct tgtactgtaa tcacgacaag 1740

ttgttactcg tatatcttaa tttttgtgta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800

aaaaaaaaaa ataaaaaaaa aaaaaaaaaa                                  1830

<210>16

<211>481

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>16

Met Asp Leu Lys Met Asp Asn Val Ile Gly Gly Lys Phe Lys Leu Gly

  1               5                  10                  15

Arg Lys Ile Gly Gly Gly Ser Phe Gly Glu Leu Phe Leu Gly Val Ser

             20                  25                  30

Val Gln Thr Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Pro Ala Lys Thr

         35                  40                  45

Lys His Pro Gln Leu His Tyr Glu Ser Lys Ile Tyr Met Leu Leu Gln

     50                  55                  60

Gly Gly Thr Gly Ile Pro Ser Leu Lys Trp Phe Gly Val Gln Gly Asp

 65                  70                  75                  80

Tyr Asn Ala Met Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu

                 85                  90                  95

Phe Asn Tyr Cys Asn Arg Lys Leu Thr Leu Lys Ala Val Leu Met Leu

            100                 105                 110

Ala Asp Gln Leu Ile Ser Arg Val Glu Tyr Met His Ser Arg Gly Phe

        115                 120                 125

Leu His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg

    130                 135                 140

Lys Ala Asn Gln Val Tyr Val Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr

145                 150                 155                 160

Arg Asp Leu Gln Thr His Arg His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn

                165                 170                175

Leu Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His Leu Gly Val

            180                 185                 190

Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met

        195                 200                 205

Tyr Phe Leu Arg Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr

    210                 215                 220

Lys Lys Gln Lys Tyr Asp Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Pro

225                 230                 235                 240

Ile Glu Val Leu Cys Lys Ser Tyr Pro Gln Glu Phe Val Ser Tyr Phe

                245                 250                 255

Gln Tyr Cys Arg Ser Leu Arg Phe Glu Asp Lys Pro Asp Tyr Ser Tyr

            260                 265                 270

Leu Lys Arg Leu Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Tyr Gln Phe

        275                 280                 285

Asp Tyr Val Phe Asp Trp Thr Ala Leu Lys His Pro Gln Ser Ser Ser

    290                 295                 300

Ser Ser Arg Ser Ser Ser His Gly Arg His Arg Thr Gly Lys Pro Val

305                 310                 315                 320

Ala Ala Ala Gly Pro Ser Ala Glu Lys Pro Glu Arg Ile Ser Val Gly

                325                 330                 335

Arg Glu Ile Arg Asp Arg Phe Ser Gly Ala Val Glu Ala Phe Ala Arg

            340                 345                 350

Arg Asn Ala Thr Gly Ala Thr Pro His Gln Asn Gln Thr Lys His Arg

        355                 360                 365

Thr Leu Asp Asp Val Pro Pro Pro Met Lys Pro Ala Val Asn Met Val

    370                 375                 380

Ser Glu Lys Gly Arg Asn Thr Ser Gly Tyr Gly Ser Ala Ser Arg Arg

385                 390                 395                 400

Ala Val Ala Ser Gly Ser Arg Pro Ser Ser Ser Gly Glu Gln Gly Asp

                405                 410                 415

Ser Arg Gly Ser Ser Arg Val Ala Ser Ser Gly Gly Gly Val Arg Pro

            420                 425                 430

Ser Val Phe Gln Arg Ala Gln Ala Ala Ala Gly Val Ser Gly Tyr Glu

        435                 440                 445

Ser Lys Thr Ala Ser Ala Phe Asn Arg Asn Arg Val Ala Ala Ser Arg

    450                 455                 460

Thr Ala Arg Asp Asp Ala Leu Arg Ser Phe Glu Leu Leu Ser Ile Arg

465                 470                 475                 480

Lys

<210>17

<211>1887

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>17

ttcgccgagg ctatttcacc ggaagtcaaa cgaaatccac cgctactcct accttcaatc 60

cgattgattc ccttccgctg tagctatctc atacgcctta agtacgctgc tccagtagct 120

tcttgtggtg gctagtagta tagaggtagt tctagggttt cgatttgatg gagccgcgag 180

tcggaaacaa gtttcggctg gggcggaaga tcggaagtgg atcattcgga gagatctatc 240

ttggtactga tatacagact aatgaagaag ttgccattaa actcgaaaat gtgaaaacta 300

agcatcctca gttactgtat gaatcaaaat tatataaagt attacaagga ggaaccggcg 360

ttccaaacat taaatggtat ggtgttgaag gggaatataa cgtccttgtg atagacttgt 420

ttgggcctag ccttgaagat ctattcaatt tctgtagtag gaaactctca ctaaagactg 480

tactgatgct tgccgatcaa atgatcaatc gcattgaatt tgttcatcag aggtcatttc 540

tacaccggga catcaagcct gacaactttc tgatgggtct cgggaggcgc gcaaatcagg 600

tatacatcat cgactttggt ctagcgaaga agtacagaga ctcgaatcat cagcatattc 660

cgtacaggga aaacaaaaac ttaactggaa ctgctagata cgccagcatg aacactcacc 720

ttggcattga acaaagccgt agggatgatt tggagtcact tggatttgtt ctcatgtact 780

ttttaaaagg aagtcttcct tggcaaggac tgaaagctgg taataagaag caaaagtatg 840

agaggattag tgaaaagaaa gtatcgacat ctattgagtc tttatgccga ggatatccat 900

ctgaatttgc ttcttacttc cattattgcc ggtccctgag attcgatgac aagccagact 960

atgcctacct gaaacggctt ttccgtgacc tgtttattcg cgaaggcttc cagtttgatt 1020

atgtatttga ctggactatc ttgaagtatc agcaatcaca gctttctact cctccccgtc 1080

ccaatgtccc tggagttggg caaagctctg gccttccccc tgctattgct agtgctgaga 1140

ggccatcagg tggcgaggaa gctagaactt ctggctggcc atcaggaaac gctaggcgga 1200

tttctggaca aatatttaat tcaggcaact tagctaaaca aaaagcacca gtttcaagtg 1260

atcctgcaat ctctaaaaat gtaatgttat ctagctctag ctttctccgc gcaactgggt 1320

catcaagacg tgctgctgtc tccggtagtc gcgaggctgc agttcctgga actgattctg 1380

agccatcaaa ccctcaaatc attgaagctg gaacaagctc caacccaaag attcatggtg 1440

gtcgaagctc acctatagtc tcatctgaga acaagaagct atcatctcca tcaaggggaa 1500

atacttcagt tatgaagaac tatgagtcca atcttaataa agggatcgag ggtctgcact 1560

tttagccgct gggtacccac tgaccagtga atgatgtttg taaatttaaa gaccaaagaa 1620

aacctttctt aggccctccc caggttttag agggagggag actttgattg tgcttgtaag 1680

cactctcaaa taacagaaga taaagtaaag actctggaag aagtgattcc agaggaatac 1740

aaactcagaa gtgagtcaag gagtcaaaag actgttgtgt atgtctcgtt tggtactgca 1800

aagttaattt cgagtctcaa agggatttga agtgtaagcg ataattgtac tgtttttttt 1860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa                                     1887

<210>18

<211>465

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>18

Met Glu Pro Arg Val Gly Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asp Ile Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Asn Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Lys Val Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Val Pro Asn Ile Lys Trp Tyr Gly Val Glu Gly Glu Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Ile Asp Leu Phe Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Leu Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Ile Glu Phe Val His Gln Arg Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Ser Asn

145                 150                 155                 160

His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr Ala

                165                 170                 175

Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg Arg

            180                 185                 190

Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Phe Val Leu Met Tyr Phe Leu Lys Gly

        195                 200                 205

Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Asn Lys Lys Gln Lys Tyr

    210                 215                 220

Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ser Leu Cys

225                 230                 235                 240

Arg Gly Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg Ser

                245                 250                 255

Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Leu Phe

            260                 265                 270

Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe Asp

        275                 280                 285

Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Leu Ser Thr Pro Pro Arg

    290                 295                 300

Pro Asn Val Pro Gly Val Gly Gln Ser Ser Gly Leu Pro Pro Ala Ile

305                 310                 315                 320

Ala Ser Ala Glu Arg Pro Ser Gly Gly Glu Glu Ala Arg Thr Ser Gly

                325                 330                 335

Trp Pro Ser Gly Asn Ala Arg Arg Ile Ser Gly Gln Ile Phe Asn Ser

            340                 345                 350

Gly Asn Leu Ala Lys Gln Lys Ala Pro Val Ser Ser Asp Pro Ala Ile

    355                 360                 365

Ser Lys Asn Val Met Leu Ser Ser Ser Ser Phe Leu Arg Ala Thr Gly

370                 375                 380

Ser Ser Arg Arg Ala Ala Val Ser Gly Ser Arg Glu Ala Ala Val Pro

385                 390                 395                 400

Gly Thr Asp Ser Glu Pro Ser Asn Pro Gln Ile Ile Glu Ala Gly Thr

                405                 410                 415

Ser Ser Asn Pro Lys Ile His Gly Gly Arg Ser Ser Pro Ile Val Ser

            420                 425                 430

Ser Glu Asn Lys Lys Leu Ser Ser Pro Set Arg Gly Asn Thr Ser Val

        435                 440                 445

Met Lys Asn Tyr Glu Ser Asn Leu Asn Lys Gly Ile Glu Gly Leu His

    450                 455                 460

Phe

465

<210>19

<211>2276

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>19

ggagaagagg tggtggtggt ggtagaggaa gaggaaccgc tgcagcttta gccaaagccg 60

ccgcacctcc aagaccgact ggtgctaccg gtaggggtcg aggcatcagg ttaatagatt 120

tagaagcaga gcctataggt gagcctgctt ttaatcaagt ccaaggggta gctgataagg 180

gtatcgccat ggaaggtggt agcccggaga agatagttgg tgtgggagaa gatccaagca 240

cagctccagt ccctgaaagg gtacaagttg gaagctctcc tgtttataag actgagagga 300

aactcggtaa aggaggcttt ggtcaagttt ttgttggtag aagggtgagt ggtggcagcg 360

ataggattgg ccctgatgca gttgaggtgg ctctgaaatt tgagcacaaa aatagcaaag 420

gatgcaattt tggtccacct tacgagtggc aagtgtacag taatctcaac ggttgctatg 480

gagttcctgc ggtacattat aagggtcgtc aaggagattt ttacatcctt gtcatggaca 540

tgcttggtcc gagtctctgg gatgtttgga actcttcagg gcaatcgatg tcaccaaaca 600

tggtagcgtg cattgcagtt gagtctatat ctattcttga gaaacttcac atgaaagggt 660

ttgtccatgg agatgtgaag cctgaaaact ttttactcgg tcaacccgga acagcagatg 720

agaaaaaact ctaccttatc gatcttggtc tagcatcaaa atggaaagaa gctcactcag 780

gcctgcatgt tgaatatgat caaagacctg atgtgttcag ggggactgta aggtatgcaa 840

gtgttcatgc acatctagga cgtactggaa gtcgaagaga tgatcttgag tcattggctt 900

atactctaat ttttctattg aaaggaagat tgccatggca aggttaccag ggtgataaca 960

agagctttct tgtttgcaag aaaaagatgt caacttctcc tgaagtgatg tgctgtttct 1020

gtccaccacc gtttaagcta ttccttgagg cagttactaa tctgaagttt gacgaggagc 1080

ctaattatgc aaagcttatt tcgattttcg atactttaat tgagccgtgc gctctatcta 1140

gaccagttag aatcgatggg gctctcaagg ttggacaaaa gcgtggaaga ctggttctca 1200

atttggaaga ggatgaacaa ccgaagaaga agatcagaat aggcactcct gccactcaat 1260

ggatttcagt ttataatgct cgtcgtccca tgaaacagag atatcactac aatgttgcag 1320

agacaagact gagccagcat gtacagaagg gtaatgaaga tggtcttttg attagctgtg 1380

tagcatcagc agcgaatctc tgggccctta ttatggatgc tggaactgga tttacctctc 1440

aagtttatga attgtcaaag gtcttcctgc acaaggattg gattatggaa caatgggaaa 1500

agaactacta tataagttcc atagctggtg cagataacgg gagctcctta gttgttatgt 1560

caaaaggaac tacttatact cagcagtcat acaaagtgag cgactcgttt ccattcaagt 1620

ggataaacaa gaaatggaaa gaagattttc atgtgacgtc catgacaact gctggtaatc 1680

gttggggtgt ggtaatgtcg aggaactctg gcttctctga tcaggtggtg gagcttggac 1740

tttttgtacc caagcgatgg aatacatagg acctgggaga gtgggtatag aatcacatca 1800

atggcagcaa ctgcagatca agcagccttc atattaagca taccaaaacg taaaatgatg 1860

gatgaaactc aggagactct tcggaccacc gcctttccaa gtactcatgt caaggagaaa 1920

tgggcgaaaa atctgcacat tgcatcagta tgctatggca ggacagtgtg ctgaactgct 1980

gatactacat ttaacatcat atgttcagtt agaaagccaa agacaattag agctgcttat 2040

ggatcgtcat aataccccaa tcaaaagagg taaaaacgag acgcagcctg tttggctggt 2100

tgaatgtaat gaatagatgt cttggtaatg tatgtaacaa gttacaaaag cgaagatgga 2160

attaggaatt agagaaaaga tttgagggct tttgaagcct taagtgtgtg cttacttatt 2220

gttatcgttt tacttgcttg aaataatgtg agaaacgcaa aaaaaaaaaa aaaaaa     2276

<210>20

<211>526

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>20

Met Glu Gly Gly Ser Pro Glu Lys Ile Val Gly Val Gly Glu Asp Pro

  1               5                  10                  15

Ser Thr Ala Pro Val Pro Glu Arg Val Gln Val Gly Ser Ser Pro Val

             20                  25                  30

Tyr Lys Thr Glu Arg Lys Leu Gly Lys Gly Gly Phe Gly Gln Val Phe

        35                   40                  45

Val Gly Arg Arg Val Ser Gly Gly Ser Asp Arg Ile Gly Pro Asp Ala

     50                  55                  60

Val Glu Val Ala Leu Lys Phe Glu His Lys Asn Ser Lys Gly Cys Asn

 65                  70                  75                  80

Phe Gly Pro Pro Tyr Glu Trp Gln Val Tyr Ser Asn Leu Asn Gly Cys

                 85                  90                  95

Tyr Gly Val Pro Ala Val His Tyr Lys Gly Arg Gln Gly Asp Phe Tyr

            100                 105                 110

Ile Leu Val Met Asp Met Leu Gly Pro Ser Leu Trp Asp Val Trp Asn

        115                 120                 125

Ser Ser Gly Gln Ser Met Ser Pro Asn Met Val Ala Cys Ile Ala Val

    130                 135                 140

Glu Ser Ile Ser Ile Leu Glu Lys Leu His Met Lys Gly Phe Val His

145                 150                 155                 160

Gly Asp Val Lys Pro Glu Asn Phe Leu Leu Gly Gln Pro Gly Thr Ala

            165                 170                 175

Asp Glu Lys Lys Leu Tyr Leu Ile Asp Leu Gly Leu Ala Ser Lys Trp

            180                 185                 190

Lys Glu Ala His Ser Gly Leu His Val Glu Tyr Asp Gln Arg Pro Asp

    195                 200                 205

Val Phe Arg Gly Thr Val Arg Tyr Ala Ser Val His Ala His Leu Gly

    210                 215                 220

Arg Thr Gly Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Ala Tyr Thr Leu

225                 230                 235                 240

Ile Phe Leu Leu Lys Gly Arg Leu Pro Trp Gln Gly Tyr Gln Gly Asp

                245                 250                 255

Asn Lys Ser Phe Leu Val Cys Lys Lys Lys Met Ser Thr Ser Pro Glu

            260                 265                 270

Val Met Cys Cys Phe Cys Pro Pro Pro Phe Lys Leu Phe Leu Glu Ala

        275                 280                 285

Val Thr Asn Leu Lys Phe Asp Glu Glu Pro Asn Tyr Ala Lys Leu Ile

    290                 295                 300

Ser Ile Phe Asp Thr Leu Ile Glu Pro Cys Ala Leu Ser Arg Pro Val

305                 310                 315                 320

Arg Ile Asp Gly Ala Leu Lys Val Gly Gln Lys Arg Gly Arg Leu Val

                325                 330                 335

Leu Asn Leu Glu Glu Asp Glu Gln Pro Lys Lys Lys Ile Arg Ile Gly

            340                 345                 350

Thr Pro Ala Thr Gln Trp Ile Ser Val Tyr Asn Ala Arg Arg Pro Met

        355                 360                 365

Lys Gln Arg Tyr His Tyr Asn Val Ala Glu Thr Arg Leu Ser Gln His

    370                 375                 380

Val Gln Lys Gly Asn Glu Asp Gly Leu Leu Ile Ser Cys Val Ala Ser

385                 390                 395                 400

Ala Ala Asn Leu Trp Ala Leu Ile Met Asp Ala Gly Thr Gly Phe Thr

                405                 410                 415

Ser Gln Val Tyr Glu Leu Ser Lys Val Phe Leu His Lys Asp Trp Ile

                420                 425                 430

Met Glu Gln Trp Glu Lys Asn Tyr Tyr Ile Ser Ser Ile Ala Gly Ala

        435                 440                 445

Asp Asn Gly Ser Ser Leu Val Val Met Ser Lys Gly Thr Thr Tyr Thr

    450                 455                 460

Gln Gln Ser Tyr Lys Val Ser Asp Ser Phe Pro Phe Lys Trp Ile Asn

465                 470                 475                 480

Lys Lys Trp Lys Glu Asp Phe His Val Thr Ser Met Thr Thr Ala Gly

                485                 490                 495

Asn Arg Trp Gly Val Val Met Set Arg Asn Ser Gly Phe Ser Asp Gln

            500                 505                 510

Val Val Glu Leu Gly Leu Phe Val Pro Lys Arg Trp Asn Thr

        515                 520                 525

<210>21

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>21

caggaaacag ctatgacc                 18

<210>22

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>22

ctaaagggaa caaaagctg                19

<210>23

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>23

tgtaaaacga cggccagt                 18

<210>24

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>24

cgaccgcagc ccatgaggaa gttat                 25

<210>25

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>25

atcccgggct cacgtagtgc actgaactct gtc        33

<210>26

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>26

gcgttaacat gcccatcttc tcatactcag acc        33

<210>27

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>27

ctcgcctacc aagccccatt agaaa                 25

<210>28

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>28

atcccgggtt gtcgaggacg gagagagaag ag         32

<210>29

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>29

gcgttaacct taggaatcgt atggcagaga gct            33

<210>30

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>30

tgtgtctacg tgtcgcgggg tcgat                     25

<210>31

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>31

atcccgggag gcattgaact acctggagtg ag             32

<210>32

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>32

gcgatatcgt tgaactagta atctgtgtta actt           34

<210>33

<211>43

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>33

ggaattccag ctgaccacca tgtcccaacg atcttcacaa cac  43

<210>34

<211>48

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>34

gatccccggg aattgccatg tcaaaaaaaa aaaggaaaaa gagaaaag     48

<210>35

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>35

gcgctgcaga tttcatttgg agaggacacg                         30

<210>36

<211>35

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>36

cgcggccggc ctcagaagaa ctcgtcaaga aggcg                   35

<210>37

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成寡核苷酸

<400>37

ggaattccag ctgaccacca tggcaattcc cggggatc                38

<210>38

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>38

gctgacacgc caagcctcgc tagtc                              25

<210>39

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>39

gcgttaacat gcccatcttc tcatactcag acc                 33

<210>40

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>40

gctgacacgc caagcctcgc tagtc                          25

<210>41

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>41

gcgttaacct taggaatcgt atggcagaga gct                33

<210>42

<211>32

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>42

atcccgggag gcattgaact acctggagtg ag                 32

<210>43

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>43

gcgatatcgt tgaactagta atctgtgtta actttatc            38

<210>44

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>44

gcctgcctag ccccatcaag aaatt                          25

<210>45

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>45

atcccgggcg cagcatgtga ctcgtcacct g                   31

<210>46

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成引物

<400>46

gcgttaacag ctactacttg ctctaggaag ctg                 33

<210>47

<211>538

<212>PRT

<213>酿酒酵母

<400>47

Met Ser Met Pro Ile Ala Ser Thr Thr Leu Ala Val Asn Asn Leu Thr

  1               5                  10                  15

Asn Ile Asn Gly Asn Ala Asn Phe Asn Val Gln Ala Asn Lys Gln Leu

             20                  25                  30

His His Gln Ala Val Asp Ser Pro Ala Arg Ser Ser Met Thr Ala Thr

         35                  40                  45

Thr Ala Ala Asn Ser Asn Ser Asn Ser Ser Arg Asp Asp Ser Thr Ile

     50                  55                  60

Val Gly Leu His Tyr Lys Ile Gly Lys Lys Ile Gly Glu Gly Ser Phe

 65                  70                  75                  80

Gly Val Leu Phe Glu Gly Thr Asn Met Ile Asn Gly Val Pro Val Ala

                 85                  90                  95

Ile Lys Phe Glu Pro Arg Lys Thr Glu Ala Pro Gln Leu Arg Asp Glu

            100                 105                 110

Tyr Lys Thr Tyr Lys Ile Leu Asn Gly Thr Pro Asn Ile Pro Tyr Ala

        115                 120                 125

Tyr Tyr Phe Gly Gln Glu Gly Leu His Asn Ile Leu Val Ile Asp Leu

    130                 135                 140

Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asp Trp Cys Gly Arg Lys Phe

145                 150                 155                 160

Ser Val Lys Thr Val Val Gln Val Ala Val Gln Met Ile Thr Leu Ile

                165                 170                 175

Glu Asp Leu His Ala His Asp Leu Ile Tyr Arg Asp Ile Lys Pro Asp

            180                 185                 190

Asn Phe Leu Ile Gly Arg Pro Gly Gln Pro Asp Ala Asn Asn Ile His

        195                 200                 205

Leu Ile Asp Phe Gly Met Ala Lys Gln Tyr Arg Asp Pro Lys Thr Lys

    210                 215                 220

Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Lys Lys Ser Leu Ser Gly Thr Ala Arg

225                 230                 235                 240

Tyr Met Ser Ile Asn Thr His Leu Gly Arg Glu Gln Ser Arg Arg Asp

                245                 250                 255

Asp Met Glu Ala Leu Gly His Val Phe Phe Tyr Phe Leu Arg Gly His

            260                 265                 270

Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Pro Asn Asn Lys Gln Lys Tyr Glu

        275                 280                 285

Lys Ile Gly Glu Lys Lys Arg Ser Thr Asn Val Tyr Asp Leu Ala Gln

    290                 295                 300

Gly Leu Pro Val Gln Phe Gly Arg Tyr Leu Glu Ile Val Arg Ser Leu

305                 310                 315                 320

Ser Phe Glu Glu Cys Pro Asp Tyr Glu Gly Tyr Arg Lys Leu Leu Leu

                325                 330                 335

Ser Val Leu Asp Asp Leu Gly Glu Thr Ala Asp Gly Gln Tyr Asp Trp

            340                 345                 350

Met Lys Leu Asn Asp Gly Arg Gly Trp Asp Leu Asn Ile Asn Lys Lys

        355                 360                 365

Pro Asn Leu His Gly Tyr Gly His Pro Asn Pro Pro Asn Glu Lys Ser

    370                 375                 380

Arg Lys His Arg Asn Lys Gln Leu Gln Met Gln Gln Leu Gln Met Gln

385                 390                 395                 400

Gln Leu Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Tyr Ala Gln Lys Thr Glu

                405                 410                 415

Ala Asp Met Arg Asn Ser Gln Tyr Lys Pro Lys Leu Asp Pro Thr Ser

            420                 425                 430

Tyr Glu Ala Tyr Gln His Gln Thr Gln Gln Lys Tyr Leu Gln Glu Gln

        435                 440                 445

Gln Lys Arg Gln Gln Gln Gln Lys Leu Gln Glu Gln Gln Leu Gln Glu

    450                 455                 460

Gln Gln Leu Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Leu Arg Ala Thr

465                 470                 475                 480

Gly Gln Pro Pro Ser Gln Pro Gln Ala Gln Thr Gln Ser Gln Gln Phe

                485                 490                 495

Gly Ala Arg Tyr Gln Pro Gln Gln Gln Pro Ser Ala Ala Leu Arg Thr

            500                 505                 510

Pro Glu Gln His Pro Asn Asp Asp Asn Ser Ser Leu Ala Ala Ser His

        515                 520                 525

Lys Gly Phe Phe Gln Lys Leu Gly Cys Cys

    530                 535

<210>48

<211>546

<212>PRT

<213>酿酒酵母

<400>48

Met Ser Gln Val Gln Ser Pro Leu Thr Ala Thr Asn Ser Gly Leu Ala

  1                5                 10                  15

Val Asn Asn Asn Thr Met Asn Ser Gln Met Pro Asn Arg Ser Asn Val

             20                  25                  30

Arg Leu Val Asn Gly Thr Leu Pro Pro Ser Leu His Val Ser Ser Asn

         35                  40                  45

Leu Asn His Asn Thr Gly Asn Ser Ser Ala Ser Tyr Ser Gly Ser Gln

     50                  55                  60

Ser Arg Asp Asp Ser Thr Ile Val Gly Leu His Tyr Lys Ile Gly Lys

 65                  70                  75                  80

Lys Ile Gly Glu Gly Ser Phe Gly Val Leu Phe Glu Gly Thr Asn Met

                 85                  90                  95

Ile Asn Gly Leu Pro Val Ala Ile Lys Phe Glu Pro Arg Lys Thr Glu

            100                 105                 110

Ala Pro Gln Leu Lys Asp Glu Tyr Arg Thr Tyr Lys Ile Leu Ala Gly

        115                 120                 125

Thr Pro Gly Ile Pro Gln Glu Tyr Tyr Phe Gly Gln Glu Gly Leu His

    130                 135                 140

Asn Ile Leu Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe

145                 150                 155                 160

Asp Trp Cys Gly Arg Arg Phe Ser Val Lys Thr Val Val Gln Val Ala

                165                 170                 175

Val Gln Met Ile Thr Leu Ile Glu Asp Leu His Ala His Asp Leu Ile

            180                 185                 190

Tyr Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Ile Gly Arg Pro Gly Gln

        195                 200                 205

Pro Asp Ala Asn Lys Val His Leu Ile Asp Phe Gly Met Ala Lys Gln

    210                 215                 220

Tyr Arg Asp Pro Lys Thr Lys Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Lys Lys

225                 230                 235                 240

Ser Leu Ser Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ser Ile Asn Thr His Leu Gly

                245                 250                 255

Arg Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Met Glu Ala Met Gly His Val Phe

            260                 265                 270

Phe Tyr Phe Leu Arg Gly Gln Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Pro

        275                 280                 285

Asn Asn Lys Gln Lys Tyr Glu Lys Ile Gly Glu Lys Lys Arg Leu Thr

    290                 295                 300

Asn Val Tyr Asp Leu Ala Gln Gly Leu Pro Ile Gln Phe Gly Arg Tyr

305                 310                 315                 320

Leu Glu Ile Val Arg Asn Leu Ser Phe Glu Glu Thr Pro Asp Tyr Glu

                325                 330                 335

Gly Tyr Arg Met Leu Leu Leu Ser Val Leu Asp Asp Leu Gly Glu Thr

            340                 345                 350

Ala Asp Gly Gln Tyr Asp Trp Met Lys Leu Asn Gly Gly Arg Gly Trp

        355                 360                 365

Asp Leu Ser Ile Asn Lys Lys Pro Asn Leu His Gly Tyr Gly His Pro

    370                 375                 380

Asn Pro Pro Asn Glu Lys Ser Lys Arg His Arg Ser Lys Asn His Gln

385                 390                 395                 400

Tyr Ser Ser Pro Asp His His His His Tyr Asn Gln Gln Gln Gln Gln

                405                 410                 415

Gln Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Lys Val Gln

            420                 425                 430

Gln Gln Gln Leu Gln Gln Ala Gln Ala Gln Gln Gln Ala Asn Arg Tyr

        435                 440                 445

Gln Leu Gln Pro Asp Asp Ser His Tyr Asp Glu Glu Arg Glu Ala Ser

    450                 455                 460

Lys Leu Asp Pro Thr Ser Tyr Glu Ala Tyr Gln Gln Gln Thr Gln Gln

465                 470                 475                 480

Lys Tyr Ala Gln Gln Gln Gln Lys Gln Met Gln Gln Lys Ser Lys Gln

                485                 490                 495

Phe Ala Asn Thr Gly Ala Asn Gly Gln Thr Asn Lys Tyr Pro Tyr Asn

            500                 505                 510

Ala Gln Pro Thr Ala Asn Asp Glu Gln Asn Ala Lys Asn Ala Ala Gln

        515                 520                 525

Asp Arg Asn Ser Asn Lys Ser Ser Lys Gly Phe Phe Ser Lys Leu Gly

    530                 535                 540

Cys Cys

545

<210>49

<211>416

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>49

Met Glu Leu Arg Val Gly Asn Lys Tyr Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Asp Ile Tyr Leu Gly Ala Asn Ile Ala Ser Gly

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Cys Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu His Ile Glu Ser Lys Phe Tyr Lys Met Met Gln Gly Gly Val Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Ser Ile Lys Trp Cys Gly Ala Glu Gly Asp Tyr Asn Val Met

 65                  70                  75                  80

Val Met Glu Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Leu Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Ser Arg Ile Glu Tyr Ile His Ser Lys Asn Phe Ile His Arg Asp

        115                 120                 125

Val Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Lys Lys Gly Asn Leu

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Ala Arg

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Ile Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Asn Leu

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Ala Thr Lys Arg Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Met Ser Thr Pro Ile Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Gly Tyr Pro Ser Glu Phe Ser Thr Tyr Leu Asn Phe Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ser Tyr Leu Arg Gln Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asn Leu Phe His Arg Gln Gly Phe Ser Tyr Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Asn Met Leu Lys Phe Gly Ala Ala Arg Asn Pro Glu Asp Val

    290                 295                 300

Asp Arg Glu Arg Arg Glu His Glu Arg Glu Glu Arg Met Gly Gln Leu

305                 310                 315                 320

Arg Gly Ser Ala Thr Arg Ala Leu Pro Pro Gly Pro Pro Thr Gly Ala

                325                 330                 335

Thr Ala Asn Arg Leu Arg Ser Ala Ala Glu Pro Val Ala Ser Thr Pro

            340                 345                 350

Ala Ser Arg Ile Gln Pro Ala Gly Asn Thr Ser Pro Arg Ala Ile Ser

        355                 360                 365

Arg Val Asp Arg Glu Arg Lys Val Ser Met Arg Leu His Arg Gly Ala

    370                 375                 380

Pro Ala Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Thr Gly Arg Gln Glu Val Ser

385                 390                 395                 400

Arg Ile Pro Ala Ser Gln Thr Ser Val Pro Phe Asp His Leu Gly Lys

                405                 410                 415

<210>50

<211>415

<212>PRT

<213>智人

<400>50

Met Glu Leu Arg Val Gly Asn Arg Tyr Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Asp Ile Tyr Leu Gly Thr Asp Ile Ala Ala Gly

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Cys Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu His Ile Glu Ser Lys Ile Tyr Lys Met Met Gln Gly Gly Val Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Thr Ile Arg Trp Cys Gly Ala Glu Gly Asp Tyr Asn Val Met

 65                  70                  75                  80

Val Met Glu Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Leu Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Ser Arg Ile Glu Tyr Ile His Ser Lys Asn Phe Ile His Arg Asp

        115                 120                 125

Val Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Lys Lys Gly Asn Leu

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Ala Arg

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Ile Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Asn Leu

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Ala Thr Lys Arg Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Met Ser Thr Pro Ile Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Gly Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Thr Tyr Leu Asn Phe Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ser Tyr Leu Arg Gln Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asn Leu Phe His Arg Gln Gly Phe Ser Tyr Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Asn Met Leu Lys Phe Gly Ala Ser Arg Ala Ala Asp Asp Ala

    290                 295                 300

Glu Arg Glu Arg Arg Asp Arg Glu Glu Arg Leu Arg His Ser Arg Asn

305                 310                 315                 320

Pro Ala Thr Arg Gly Leu Pro Ser Thr Ala Ser Gly Arg Leu Arg Gly

                325                 330                 335

Thr Gln Glu Val Ala Pro Pro Thr Pro Leu Thr Pro Thr Ser His Thr

            340                 345                 350

Ala Asn Thr Ser Pro Arg Pro Val Ser Gly Met Glu Arg Glu Arg Lys

        355                 360                 365

Val Ser Met Arg Leu His Arg Gly Ala Pro Val Asn Ile Ser Ser Ser

    370                 375                 380

Asp Leu Thr Gly Arg Gln Asp Thr Ser Arg Met Ser Thr Ser Gln Ile

385                 390                 395                 400

Pro Gly Arg Val Ala Ser Ser Gly Leu Gln Ser Val Val His Arg

                405                 410                 415

<210>51

<211>337

<212>PRT

<213>智人

<400>51

Met Ala Ser Ser Ser Gly Ser Lys Ala Glu Phe Ile Val Gly Gly Lys

  1               5                  10                  15

Tyr Lys Leu Val Arg Lys Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Asp Ile Tyr

             20                  25                  30

Leu Ala Ile Asn Ile Thr Asn Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu

         35                  40                  45

Ser Gln Lys Ala Arg His Pro Gln Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr

     50                  55                  60

Lys Ile Leu Gln Gly Gly Val Gly Ile Pro His Ile Arg Trp Tyr Gly

 65                  70                  75                  80

Gln Glu Lys Asp Tyr Asn Val Leu Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser

                 85                  90                  95

Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys Ser Arg Arg Phe Thr Met Lys Thr

            100                 105                 110

Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met Ile Ser Arg Ile Glu Tyr Val His

        115                 120                 125

Thr Lys Asn Phe Ile His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met

    130                 135                 140

Gly Ile Gly Arg His Cys Asn Lys Leu Phe Leu Ile Asp Phe Gly Leu

145                 150                 155                 160

Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Asn Arg Thr Arg Gln His Ile Pro Tyr Arg

                165                 170                 175

Glu Asp Lys Asn Leu Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Ile Asn Ala

            180                 185                     190

His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Met Glu Ser Leu Gly

        195                 200                     205

Tyr Val Leu Met Tyr Phe Asn Arg Thr Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu

    210                 215                     220

Lys Ala Ala Thr Lys Lys Gln Lys Tyr Glu Lys Ile Ser Glu Lys Lys

225                 230                 235                 240

Met Ser Thr Pro Val Glu Val Leu Cys Lys Gly Phe Pro Ala Glu Phe

                245                 250                 255

Ala Met Tyr Leu Asn Tyr Cys Arg Gly Leu Arg Phe Glu Glu Ala Pro

            260                 265                 270

Asp Tyr Met Tyr Leu Arg Gln Leu Phe Arg Ile Leu Phe Arg Thr Leu

        275                 280                 285

Asn His Gln Tyr Asp Tyr Thr Phe Asp Trp Thr Met Leu Lys Gln Lys

    290                 295                 300

Ala Ala Gln Gln Ala Ala Ser Ser Ser Gly Gln Gly Gln Gln Ala Gln

305                 310                 315                 320

Thr Pro Thr Gly Lys Gln Thr Asp Lys Thr Lys Ser Asn Met Lys Gly

                325                 330                 335

Phe

<210>52

<211>447

<212>PRT

<213>智人

<400>52

Met Glu Asn Lys Lys Lys Asp Lys Asp Lys Ser Asp Asp Arg Met Ala

  1               5                  10                  15

Arg Pro Ser Gly Arg Ser Gly His Asn Thr Arg Gly Thr Gly Ser Ser

             20                  25                  30

Ser Ser Gly Val Leu Met Val Gly Pro Asn Phe Arg Val Gly Lys Lys

         35                  40                 45

Ile Gly Cys Gly Asn Phe Gly Glu Leu Arg Leu Gly Lys Asn Leu Tyr

     50                  55                  60

Thr Asn Glu Tyr Val Ala Ile Lys Leu Glu Pro Met Lys Ser Arg Ala

 65                  70                  75                  80

Pro Gln Leu His Leu Glu Tyr Arg Phe Tyr Lys Gln Leu Gly Ser Gly

                 85                  90                  95

Asp Gly Ile Pro Gln Val Tyr Tyr Phe Gly Pro Cys Gly Lys Tyr Asn

            100                 105                 110

Ala Met Val Leu Glu Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asp

        115                 120                 125

Leu Cys Asp Arg Thr Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Ile Ala Ile

    130                 135                 140

Gln Leu Ile Ser Arg Met Glu Tyr Val His Ser Lys Asn Leu Ile Tyr

145                 150                 155                 160

Arg Asp Val Lys Pro Glu Asn Phe Leu Ile Gly Arg Pro Arg Asn Lys

                165                 170                 175

Thr Gln Gln Val Ile His Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Glu Tyr

            180                 185                 190

Ile Asp Pro Glu Thr Lys Lys His Ile Pro Tyr Arg Glu His Lys Ser

        195                 200                 205

Leu Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ser Ile Asn Thr His Leu Gly Lys

    210                 215                 220

Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ala Leu Gly His Met Phe Met

225                 230                 235                 240

Tyr Phe Leu Arg Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Asp Thr

                245                 250                 255

Leu Lys Glu Arg Tyr Gln Lys Ile Gly Asp Thr Lys Arg Ala Thr Pro

            260                 265                 270

Ile Glu Val Leu Cys Glu Asn Phe Pro Glu Met Ala Thr Tyr Leu Arg

        275                 280                 285

Tyr Val Arg Arg Leu Asp Phe Phe Glu Lys Pro Asp Tyr Glu Tyr Leu

    290                 295                 300

Arg Lys Leu Phe Thr Asp Leu Phe Asp Arg Lys Gly Tyr Met Phe Asp

305                 310                 315                 320

Tyr Glu Tyr Asp Trp Ile Gly Lys Gln Leu Pro Thr Pro Val Gly Ala

                325                 330                 335

Val Gln Gln Asp Pro Ala Leu Ser Ser Asn Arg Glu Ala His Gln His

            340                 345                 350

Arg Asp Lys Met Gln Gln Ser Lys Asn Gln Ser Ala Asp His Arg Ala

        355                 360                 365

Ala Trp Asp Ser Gln Gln Ala Asn Pro His His Leu Arg Ala His Leu

    370                 375                 380

Ala Ala Asp Arg His Gly Gly Ser Val Gln Val Val Ser Ser Thr Asn

385                 390                 395                 400

Gly Glu Leu Asn Thr Asp Asp Pro Thr Ala Gly Arg Ser Asn Ala Pro

                405                 410                 415

Ile Thr Ala Pro Thr Glu Val Glu Val Met Asp Glu Thr Lys Cys Cys

            420                 425                 430

Cys Phe Phe Lys Arg Arg Lys Arg Lys Thr Ile Gln Arg His Lys

        435                 440                 445

<210>53

<211>463

<212>PRT

<213>稻(Oryza sativa)

<400>53

Met Glu His Val Ile Gly Gly Lys Phe Lys Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Leu Tyr Leu Gly Val Asn Ile Gln Ser Ser

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Ser Val Lys Ser Arg His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu His Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Met Leu Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro His Leu Lys Trp Phe Gly Val Glu Gly Glu Tyr Asn Val Met

 65                  70                  75                  80

Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Tyr Cys

                 85                  90                  95

Asn Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Met His Thr Arg Gly Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Lys Ala Ser Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Val Ile Asp Tyr Val Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Leu Gln

145                 150                 155                 160

Thr His Lys His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His Leu Gly Val Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Asp Lys Ile Ser Glu Lys Lys Met Leu Thr Pro Val Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Ser Tyr Pro Thr Glu Phe Ile Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Glu Asp Lys Pro Asp Tyr Ser Tyr Leu Lys Arg Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Tyr Gln Leu Asp Tyr Ile Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Lys Gln Gly Ser Glu Ser Asn Arg Leu Arg Ser Ser Gly

    290                 295                 300

Arg Thr Ser Gly Leu Val Gly Pro Ser Ala Glu Arg Thr Glu Arg Ala

305                 310                 315                 320

Ala Ala Arg Gln Asp Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Thr Val Asp Pro

                325                 330                 335

Phe Ala Arg Arg Thr Gly Ser Gly Ser Gly His Tyr Gly Glu His Thr

            340                 345                 350

Lys His Arg Asn Ile Leu Asp Ser Leu Leu Ala Pro Lys Thr Ala Val

        355                 360                 365

Asp Leu Asp Lys Arg Arg Pro Thr Ser Ser Ser Arg Asn Gly Ser Thr

    370                 375                 380

Ser Arg Lys Ala Leu Leu Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ser Gly Asp Pro

385                 390                 395                 400

Ile Asp Pro Asn Arg Ser Asn Leu Ile Pro Thr Ser Ser Gly Ser Ser

                405                 410                 415

Arg Pro Ser Thr Met Gln Arg Leu His Gln Ser Thr Gly Leu Glu Thr

            420                 425                 430

Arg Ser Ser Leu Thr Lys Thr Ala Arg Asn Val His Asp Asp Pro Thr

        435                 440                 445

Leu Arg Thr Phe Glu Arg Leu Ser Ile Ser Ala Asp Arg Arg Lys

    450                 455                 460

<210>54

<211>2250

<212>DNA

<213>大麦(Hordeum vulgare)

<400>54

ggaaggccag ctccaaaggc tagaggaaag agggtcgagg ctattgattt ggctgaccag 60

ccttttgagg acatccctga agctattgtt ggagaggcag ttgcaggcac agcccagcag 120

gtccttggtt tgaacaaggt agctgacagg gccgccaact tcaaaatgga aggtgcaagc 180

ggtgacagac ttgcagcggc ggaggatgaa gccacgacga cgccagtgcc tgagagggtt 240

caagttggtg gctctccaga atatataact gataggaagt tgggcaaagg tggatttggc 300

caggtctatg ttggcagaag aataactggt ggggcttctc gtacaggccc agatgcatac 360

gaggttgcac tcaaacttga acatcgaaga agcaaaggat gtagttatgg ccccccgttt 420

gagtggcagg tttatcagtc tctcaatggt tgttatggca taccatcagt ccactacaag 480

ggtcgccagg gagactacta cattcttgtc atggatatgc ttggtcctag cctctgggat 540

gtttggaatt caatgggaca ggcgatgtct tctcatatgg tggcttgcat tgccgtggag 600

tccatatcaa tccttgagaa gcttcattcc aaaggctttg tccatggaga tgtaaagcca 660

gaaaactttc tgcttggtca acctggatca cctgatgaga agaagctttt cctaattgat 720

cttggtttag catccaagtg gaaaaaagca tcatccagtc agcatgttga atatgaccag 780

aggccagaca tctttagggg aacaattaga tatgctagtg tccatgctca tttaggccgg 840

acaggcagta gaagggatga tttggagtca ctagcgtaca cccttatttt tttaataaga 900

ggaagattac cttggcaagg ttttcaggga gacaacaaga gctttcttgt ttgtaagaag 960

aagatggcta cctctgcgga tgttctgagt tgcttttgtc cacctccatt caagcatttt 1020

cttgagatgg tcactaatat gaaatttgat gaagagccaa attacgcaaa actcatttct 1080

ctctttgata gtttgattga agtgcctgct tcaagaccca tcagaattga tggggctcta 1140

aaggttgggc agaaacgtgg aagaatggtt gtaaatcttg aagaagagga acagcctaag 1200

aagaaagttc ggttggggag cccagcaact caatggattt cggtttataa tgctaggcgg 1260

cccatgaagc agcgatacca ctacaatgta gccgattcaa ggttgcacca gcatatagaa 1320

aaaggcaatg aagatggctt gtatattagt tgcgtagctt cttcagcaaa tttttgggct 1380

ctcataatgg acgctgggac cggttttggt tctcaagtgt atgagctttc acaaattttc 1440

ctgcacaagg attggattat ggagcaatgg gaaaagaact tctatataac agcaatagct 1500

ggagcaacca atggaagctc actggttgtg atgtccaaag gaactccgta cacgcagcag 1560

tcatacaaag tcagcgaatc ttttccttat aagtggatta ataaaaagtg gaaagaaggt 1620

tttcatgtaa catccatggg tactgctggg aaccgttggg gagttgtcat gtcgaggaat 1680

gctggctact ctgaccaggt tgtggagttg gattttctgt atccaagtga aggactgcat 1740

cggcgatggg agagtggcta cagaataact tcatccgcag gcacacctga ccaagctgct 1800

tttatcttga gcataccaaa gaggaagcca ctggacgaga cccaggaaac ccttcgaact 1860

tctgccttcc ctagtaacca tgtgaaggag aagtgggcga agaacctgta catcgcctcg 1920

atctgctacg gacgaactgc gtgttgatgc cgtacttgag cttgagggcg aaatcacctg 1980

agttttacca ctggagccag aagagagttc gagacggaac aaactccgcg tcaaccttat 2040

tacctaggtt tcaagcgcaa ttggctggca ctggcactgg gctggcctct ttcggttggc 2100

ggcatgctat tctaattgta aagaatctcg tgaagatcat cggtgttgta tcagtcagtc 2160

ctcatcggat ggatatgaac ctgttgataa gataaggtca tattattggc agatttgctg 2220

ttgttcattc cgaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                  2250

<210>55

<211>593

<212>PRT

<213>大麦

<400>55

Met Glu Gly Ala Ser Gly Asp Arg Leu Ala Ala Ala Glu Asp Glu Ala

  1               5                  10                  15

Thr Thr Thr Pro Val Pro Glu Arg Val Gln Val Gly Gly Ser Pro Glu

             20                  25                  30

Tyr Ile Thr Asp Arg Lys Leu Gly Lys Gly Gly Phe Gly Gln Val Tyr

         35                  40                  45

Val Gly Arg Arg Ile Thr Gly Gly Ala Ser Arg Thr Gly Pro Asp Ala

     50                  55                  60

Tyr Glu Val Ala Leu Lys Leu Glu His Arg Arg Ser Lys Gly Cys Ser

 65                  70                  75                  80

Tyr Gly Pro Pro Phe Glu Trp Gln Val Tyr Gln Ser Leu Asn Gly Cys

                 85                  90                  95

Tyr Gly Ile Pro Ser Val His Tyr Lys Gly Arg Gln Gly Asp Tyr Tyr

            100                 105                 110

Ile Leu Val Met Asp Met Leu Gly Pro Ser Leu Trp Asp Val Trp Asn

        115                 120                 125

Ser Met Gly Gln Ala Met Ser Ser His Met Val Ala Cys Ile Ala Val

    130                 135                 140

Glu Ser Ile Ser Ile Leu Glu Lys Leu His Ser Lys Gly Phe Val His

145                 150                 155                 160

Gly Asp Val Lys Pro Glu Asn Phe Leu Leu Gly Gln Pro Gly Ser Pro

                165                 170                 175

Asp Glu Lys Lys Leu Phe Leu Ile Asp Leu Gly Leu Ala Ser Lys Trp

            180                 185                 190

Lys Lys Ala Ser Ser Ser Gln His Val Glu Tyr Asp Gln Arg Pro Asp

        195                 200                 205

Ile Phe Arg Gly Thr Ile Arg Tyr Ala Ser Val His Ala His Leu Gly

    210                 215                 220

Arg Thr Gly Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Ala Tyr Thr Leu

225                 230                 235                 240

Ile Phe Leu Ile Arg Gly Arg Leu Pro Trp Gln Gly Phe Gln Gly Asp

                245                 250                 255

Asn Lys Ser Phe Leu Val Cys Lys Lys Lys Met Ala Thr Ser Ala Asp

            260                 265                 270

Val Leu Ser Cys Phe Cys Pro Pro Pro Phe Lys His Phe Leu Glu Met

        275                 280                 285

Val Thr Asn Met Lys Phe Asp Glu Glu Pro Asn Tyr Ala Lys Leu Ile

    290                 295                 300

Ser Leu Phe Asp Ser Leu Ile Glu Val Pro Ala Ser Arg Pro Ile Arg

305                 310                 315                 320

Ile Asp Gly Ala Leu Lys Val Gly Gln Lys Arg Gly Arg Met Val Val

                325                 330                 335

Asn Leu Glu Glu Glu Glu Gln Pro Lys Lys Lys Val Arg Leu Gly Ser

            340                 345                 350

Pro Ala Thr Gln Trp Ile Ser Val Tyr Asn Ala Arg Arg Pro Met Lys

        355                 360                 365

Gln Arg Tyr His Tyr Asn Val Ala Asp Ser Arg Leu His Gln His Ile

    370                 375                 380

Glu Lys Gly Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ile Ser Cys Val Ala Ser Ser

385                 390                 395                 400

Ala Asn Phe Trp Ala Leu Ile Met Asp Ala Gly Thr Gly Phe Gly Ser

                405                 410                 415

Gln Val Tyr Glu Leu Ser Gln Ile Phe Leu His Lys Asp Trp Ile Met

            420                 425                 430

Glu Gln Trp Glu Lys Asn Phe Tyr Ile Thr Ala Ile Ala Gly Ala Thr

        435                 440                 445

Asn Gly Ser Ser Leu Val Val Met Ser Lys Gly Thr Pro Tyr Thr Gln

    450                 455                 460

Gln Ser Tyr Lys Val Ser Glu Ser Phe Pro Tyr Lys Trp Ile Asn Lys

465                 470                 475                 480

Lys Trp Lys Glu Gly Phe His Val Thr Ser Met Gly Thr Ala Gly Asn

                485                 490                 495

Arg Trp Gly Val Val Met Ser Arg Asn Ala Gly Tyr Ser Asp Gln Val

            500                 505                 510

Val Glu Leu Asp Phe Leu Tyr Pro Ser Glu Gly Leu His Arg Arg Trp

        515                 520                 525

Glu Ser Gly Tyr Arg Ile Thr Ser Ser Ala Gly Thr Pro Asp Gln Ala

    530                 535                 540

Ala Phe Ile Leu Ser Ile Pro Lys Arg Lys Pro Leu Asp Glu Thr Gln

545                 550                 555                 560

Glu Thr Leu Arg Thr Ser Ala Phe Pro Ser Asn His Val Lys Glu Lys

                565                 570                 575

Trp Ala Lys Asn Leu Tyr Ile Ala Ser Ile Cys Tyr Gly Arg Thr Ala

            580                 585                 590

Cys

<210>56

<211>1999

<212>DNA

<213>大豆(Glycine max)

<400>56

agcaacgtgg ttgaatgtag caccagtcta gtcagttgca ggcttcctgc acgctactga 60

aaaagaaaga aaatccgttt ggatgaatgc gcgaggggaa gagagactct ctctcctctt 120

ccttctacac gtttagagag agaaagtgtg tctcattttt caatcttgcc cgcatctttt 180

tgcgatttct catttttctc ctgttccttt cctttccgtt tctctgctac tacttccaac 240

tccttccatt ctcaactttc tttcaatctc tagggtttaa ttcgccactc atcgaatgga 300

acctcgggtt gcgaacaagt tccgtcttgg ccgcaagatt ggtagcggat ccttcggcga 360

gatctatctc ggtacgaata ctcagacaaa tgaagaggtt gcagttaagc tcgaaaatgt 420

caaaactaag catcctcaat tgttgtacga atcaaagttg tataaaatac tgcaaggagg 480

aactgggatc ccaaatgtga gatggtttgg agttgaagga gattacaatg tccttgtgat 540

ggatttactg ggacctagtc ttgaggattt attcaatttc tgtacccgta aattgtccct 600

caaaactgtt ctcatgcttg ctgatcagat gataaatcga gttgaattta ttcattccaa 660

atcattttta catagggaca tcaagccaga caacttccta atgggtttgg ggaggcgtgc 720

aaatcaagtt tatgccattg actttggtct tgctaagaag cacagagaca cctctaccca 780

tcaacatatt ccttacagag agaataagaa tttgactgga actgctagat atgctagtat 840

gaatactcat cttggaattg agcaaagccg tagggacgac ttagaatcac ttggatttgt 900

tcttatgtat tttttgagag gaagtctccc atggcaggga ttgaaagcag gtactaagaa 960

gcagaagtat gagagaatca gtgagaagaa agtttctact tctattgagt ctctgtgccg 1020

tagctacccc tcagagttcg cttcatactt tcattactgt cggtcactgc aatttgatga 1080

taaaccagat tatgcttatc tgaaaaggct tttccgtgac cttttcattc gtgaaggatt 1140

ccagtttgat tatgtctttg attggaccat tttgaaatat cagcaatctc aaattgccac 1200

acctcctgct cgtgctattg gtcctgctgc tggaccaagt tctgggctgc caccagctgt 1260

tgtaaatgct gatagacaga caggtgggga aaacagtagg catactggtt ggtcttcatc 1320

tgatcctgct cgaagaagaa actctggacc tattgcaaat gatggaatgt tgtcaagaca 1380

aaaagcccca tttccaagtg attcaactcg atctaaagat gttatgttgt ctagttctaa 1440

tttccgttca agtggatcta caaggcgagg tgttgtatca agcagtcgtg atgcaactgt 1500

tggcaatgag actgagcctt ctcatcctct caccgtggat gctagtcaag gagcacttcg 1560

taaaatctcc ggtgctcaaa gaagttcacc tattatgcca tttgagcaca accgaacatc 1620

ctctggaaga aatacatcaa acatgaagaa ttacgagtca actatccggg gtattgagac 1680

cctaaatttc aatgacgaga ggttacagta ttagcagctt ccattctcga ctacctatca 1740

tagtaaattc ttaaaagaat tttataaact accgagtgga gtgtgttgtg ttgtctgtgc 1800

attttgttgg aggaaagctg caacaagatg gtaatggtca ctataaagtg ttaaagaaag 1860

atatgctcaa ccctgacaaa tctggccttg aaaaggcttt tgttaacaca gttgaccgtg 1920

ttggttctaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980

aaaaaaaaaa aaaaaaaaa                                              1999

<210>57

<211>472

<212>PRT

<213>大豆

<400>57

Met Glu Pro Arg Val Ala Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Thr Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Asn Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Lys Ile Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asn Val Arg Trp Phe Gly Val Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Thr Arg Lys Leu Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Phe Ile His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ala Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys His Arg Asp Thr Ser

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Phe Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ser Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Ser Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Gln Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Ile Ala Thr Pro Pro

    290                 295                 300

Ala Arg Ala Ile Gly Pro Ala Ala Gly Pro Ser Ser Gly Leu Pro Pro

305                 310                 315                 320

Ala Val Val Asn Ala Asp Arg Gln Thr Gly Gly Glu Asn Ser Arg His

                325                 330                 335

Thr Gly Trp Ser Ser Ser Asp Pro Ala Arg Arg Arg Asn Ser Gly Pro

            340                 345                 350

Ile Ala Asn Asp Gly Met Leu Ser Arg Gln Lys Ala Pro Phe Pro Ser

        355                 360                 365

Asp Ser Thr Arg Ser Lys Asp Val Met Leu Ser Ser Ser Asn Phe Arg

    370                 375                 380

Ser Ser Gly Ser Thr Arg Arg Gly Val Val Ser Ser Ser Arg Asp Ala

385                 390                 395                 400

Thr Val Gly Asn Glu Thr Glu Pro Ser His Pro Leu Thr Val Asp Ala

                405                 410                 415

Ser Gln Gly Ala Leu Arg Lys Ile Ser Gly Ala Gln Arg Ser Ser Pro

            420                 425                 430

Ile Met Pro Phe Glu His Asn Arg Thr Ser Ser Gly Arg Asn Thr Ser

        435                 440                 445

Asn Met Lys Asn Tyr Glu Ser Thr Ile Arg Gly Ile Glu Thr Leu Asn

    450                 455                 460

Phe Asn Asp Glu Arg Leu Gln Tyr

465                 470

<210>58

<211>2035

<212>DNA

<213>大豆

<400>58

cccatcactc ttacgctttc tttctttttt tcttccaaat tctctctttc ttctaaccta 60

accctacaat tatgccccat taacacaaat cgcaattacc ccaaattcct caccctagcg 120

tagatcgatc tcttcttcct tcgtgaattc tggttcaggg tggctgccat gtatggcact 180

tagtattttc cctttttgaa gattaggggt gggtgggttg tgtctcgctt agggttccaa 240

agtttgttgt tttgaatgga acctcgcgtt gggaataagt ttcgcctggg tcggaagatc 300

ggaagtggct cctttgggga gatctattta ggcactaata ttcagacaaa tgaagaggtt 360

gcaattaagc ttgaaaatgt caagacaaaa catcctcaat tgctgtatga gtccaagttg 420

tacagaattc tccagggagg aactggaatt ccaaatgtca gatggtttgg agtggaggga 480

gattacaatg ttttagtgat ggatctgctt ggaccgagtc ttgaagatct ttttaacttc 540

tgcagtagaa agctatcact aaagacagtt ctcatgcttg ctgatcaaat gatcaaccgt 600

gttgagttca ttcattcaaa atcgtttctg catcgggata tcaaaccgga taattttcta 660

atgggattag gaaggcgtgc aaaccaggtt tatgctattg attttggttt ggctaagaaa 720

tacagagata gttcaacaca tcaacacatt ccttacaggg aaaataagaa tttgactgga 780

actgcaaggt atgccagcat gaacactcac cttggcattg aacaaagcag aagagatgat 840

cttgagtctc ttggttatgt tttgatgtac ttcttgagag gaagtcttcc ttggcagggt 900

cttaaagcgg gaacaaagaa acagaagtat gagaaaatca gtgaaaaaaa ggtttctacc 960

tcgattgaag ccttgtgtcg aggttatcca acagaatttg catcttactt ccattactgc 1020

cgatcattga ggtttgatga taagccagat tatgcgtacc tcaaaaggat atttcgtgac 1080

ctgtttattc gtgaaggatt ccagtttgat tatgtctttg actggaccat tttgaagtat 1140

cagcaatcac agctagccac tcctccaaca cgggccattg gtcctagtgc tggaaccagc 1200

tctggaatgc cccccgctgt tactaatgct gataggcata caggagggga agaaggtaga 1260

cctcctgctt tggtttcagt ggattcctcg aggcgcagaa tgtcagggcc cattttaaat 1320

actttatcaa gtgccaatgc cttgggtcag tcaagtggat catctaggag ggttgctgtc 1380

tctagtagcc gtgatgcatt tgttggtgct gagtcagata tccgtactcg cactgctgag 1440

gctagccctg gagcagcaca tcgagctttg agtgggcaaa gaagttctcc aattggatct 1500

tctgatccta agagagttgt atcatcaggg agaaatgctt ctcatgtgaa aaattatgac 1560

actgcactta ggggcatgga aggtttgcaa ttagaaaatg atgagaggac ccattattaa 1620

tttcacaact tctctcctat taatttgtga gttgataggc actgccaacg ttgcttgtgt 1680

tgctaagttg agctgtgaga aaattcggat ctgaacttga aattctggct ttgtattgtt 1740

aacccatctg gtcaaaccga tgaagctgtg aagctgaaat aatttgagcc aaaccaggga 1800

ttgtgcttgc tgtaaagctc agttttaatt ggttcttcta gctggaactc ctaagtttta 1860

taacattttt ctgagttatt atattggttt accagatgtt tacagtttca cgtggactgc 1920

aaatgtcaaa aactatcaaa taccagcaaa aatgtaatta gccattgtac tcttgttgga 1980

taagattccc ttggtttaca cgatgtaatt gtctggcaaa aaaaaaaaaa aaaaa      2035

<210>59

<211>454

<212>PRT

<213>大豆

<400>59

Met Glu Pro Arg Val Gly Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Ile Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Asn Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Arg Ile Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asn Val Arg Trp Phe Gly Val Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Leu Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Phe Ile His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ala Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Ser Ser

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Lys Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ala Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Gly Tyr Pro Thr Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ala TyT Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Leu Ala Thr Pro Pro

    290                 295                 300

Thr Arg Ala Ile Gly Pro Ser Ala Gly Thr Ser Ser Gly Met Pro Pro

305                 310                 315                 320

Ala Val Thr Asn Ala Asp Arg His Thr Gly Gly Glu Glu Gly Arg Pro

                325                 330                 335

Pro Ala Leu Val Ser Val Asp Ser Ser Arg Arg Arg Met Ser Gly Pro

            340                 345                 350

Ile Leu Asn Thr Leu Ser Ser Ala Asn Ala Leu Gly Gln Ser Ser Gly

        355                 360                 365

Ser Ser Arg Arg Val Ala Val Ser Ser Ser Arg Asp Ala Phe Val Gly

    370                 375                 380

Ala Glu Ser Asp Ile Arg Thr Arg Thr Ala Glu Ala Ser Pro Gly Ala

385                 390                 395                 400

Ala His Arg Ala Leu Ser Gly Gln Arg Ser Ser Pro Ile Gly Ser Ser

                405                 410                 415

Asp Pro Lys Arg Val Val Ser Ser Gly Arg Asn Ala Ser His Val Lys

            420                 425                 430

Asn Tyr Asp Thr Ala Leu Arg Gly Met Glu Gly Leu Gln Leu Glu Asn

        435                 440                 445

Asp Glu Arg Thr His Tyr

    450

<210>60

<211>2560

<212>DNA

<213>普通小麦(Triticum aestivum)

<400>60

ctctctcgca gcgaacacac tccgcgtcta gccgatttgt atacatcagc accaccgcct 60

ccgccctcgg ccctcgctcc cattcccttc cctcaaatct gcgccggcac caccgctccc 120

gtcccgctcc ccgcactcgc caccgcacgc cgcgaccgga accttgccgc accgccccct 180

ccccttcgag atcggcgccg ttactgctgt ttggcggcgg aatctgaggg atcgacagcg 240

gcgggggcgt gggccatggg gctcaatcgt tgacgatgcc tgtgctgcgt agtgcggctc 300

ggagggcccg tgaggcgcag gagaatccgg cggcggcggc ggcggcggcg gcggaagcac 360

cggttgtgcc accggcggcg aggaggcgca gggcggcgag aaggcaggag gcgggaggcg 420

ttcgtgaggc cgccgcggcg gcggaggaga tcgcgcccgc ggaggactcg agtgaacgcg 480

ccggtgagga gccgatggat gaccaggaca gcgccgacaa acaggccggc gaggatgcct 540

ctccaatccc tgagacggtc caggtggcca attcacctag gtataaagtt gaaaggaagc 600

ttgggaaagg aggatttggc caagtatatg ttggccgccg catttcagct aatgctccag 660

gcgcagttga ggtggcgtta aagtttgagc ataagaacag caaaggatgt aaccatgggc 720

ctccttatga gtggcaggtt tacgatatcc tcggtggcat tcacggggtt cctcgagtcc 780

actacaaagg gcgccaaggg gattacttca ttatggttat ggatatgctc ggtctcagtc 840

tgtgggatgc atgtagtaat aattcccaca caatgtcagt tgagatggtt gcttgcattg 900

ctatcgaagc tatctccata cttgagaaag tgcactcaaa aggatatgtc cacggggatg 960

tgaaacccga gaatttcttg ctaggacccc ctggaactcc tgaagagaaa aaactgtttc 1020

tcgtcgacct tggcttagct actaagtgga aggatagatc gacaggccat catgttgagt 1080

atgaccagcg acctgatatt ttcaggggaa cgtttcgtta tgctagtgtt catgcacatc 1140

ttgggaggat aggcagcagg agggatgatt tagaatctct agcttataca ctagtctttc 1200

ttctacgggg acgtctacct tggcaaggct accagggtga aaacaagggt tttcttgttt 1260

gcaaaaagaa aatgtgcacc tctcctgaat ctctctgtag cttctgccct cagcccttta 1320

aggagtttgt agaatatgtg gtcaacttga agtttgatga agaacccaac tatgccaagt 1380

gtatctccct ttttgatagt atagtgggcc caaatccaga tatcaggcca attaacacag 1440

atggtgctca gaagcttata caccaagttg gccaaaagag agggcgtata tcgttggaag 1500

gagagacaga tgagcaacca aagaagaaga tcaggatggg aatgcctgca acacagtgga 1560

taagtgttta taatgcaagg cggcctatga aacaaaggta ccactacaat gttgcagatt 1620

caaggcttgt acaacacatt gacaaaggga atgaagatgg actgtttatt agttgcatat 1680

catcttgtgc gaatctgtgg gcactaatca tggatgctgg cactgggttc tcttctcaag 1740

tttatgaact ttcaccacat ttccttcaca aagaatggat aatggaccaa tgggatagga 1800

actactatat aactgcactt gctggagcaa acaatgggag ttccctggta gtgatgtcta 1860

aaggaacact gtatactcag cagtcctaca aagtaagtga tacctttccc ttcaagtgga 1920

taaacaagaa atggcgtgat ggtttctatg tgacttccat ggcaactgct gggaataaat 1980

gggcgattgt tatgtcccgc aatgcagggt tttcggaaca ggttgttgag ctggacttct 2040

tgtaccctag tgagggagtc cataagaggt gggatagtgg ttaccgaata acagcagttg 2100

ctgcgacttg ggatcagact gcattgatct taagtgtacc aagaaggaag cctactgatg 2160

aaactcaaga gacactgaga acatctgctt tccccagtca gcatgtgaag gagaaatggt 2220

ccaagaatct ctaccttgct tcagtatgtt atgggcgtac cgtatcgtag aaatcctttg 2280

ccatgagagc tgaagcgtga gttaacctca tctttttgat ccagctcagc agtagttttc 2340

tgtttgtggg caagttgtga atgcggccta gtgtgttctt gtgaagatgt ttctgcctgt 2400

cgctgttaat tatagaaaaa tagtgtgtac agtagtaaat gttttgtagt cgtgttaatc 2460

ctttctgtag cggacgactc ttgactctag tgtaaggtga tacttagatg tgtaaacacc 2520

tgacttaatg ttttgtgctc cgaaaaaaaa aaaaaaaaaa                       2560

<210>61

<211>664

<212>PRT

<213>普通小麦

<400>61

Met Pro Val Leu Arg Ser Ala Ala Arg Arg Ala Arg Glu Ala Gln Glu

  1               5                  10                  15

Asn Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Glu Ala Pro Val Val Pro

             20                  25                  30

Pro Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ala Ala Arg Arg Gln Glu Ala Gly Gly

         35                  40                  45

Val Arg Glu Ala Ala Ala Ala Ala Glu Glu Ile Ala Pro Ala Glu Asp

     50                  55                  60

Ser Ser Glu Arg Ala Gly Glu Glu Pro Met Asp Asp Gln Asp Ser Ala

 65                  70                  75                  80

Asp Lys Gln Ala Gly Glu Asp Ala Ser Pro Ile Pro Glu Thr Val Gln

                 85                  90                  95

Val Ala Asn Ser Pro Arg Tyr Lys Val Glu Arg Lys Leu Gly Lys Gly

            100                 105                 110

Gly Phe Gly Gln Val Tyr Val Gly Arg Arg Ile Ser Ala Asn Ala Pro

        115                 120                 125

Gly Ala Val Glu Val Ala Leu Lys Phe Glu His Lys Asn Ser Lys Gly

    130                 135                 140

Cys Asn His Gly Pro Pro Tyr Glu Trp Gln Val Tyr Asp Ile Leu Gly

145                 150                 155                 160

Gly Ile His Gly Val Pro Arg Val His Tyr Lys Gly Arg Gln Gly Asp

                165                 170                 175

Tyr Phe Ile Met Val Met Asp Met Leu Gly Leu Ser Leu Trp Asp Ala

            180                 185                 190

Cys Ser Asn Asn Ser His Thr Met Ser Val Glu Met Val Ala Cys Ile

        195                 200                 205

Ala Ile Glu Ala Ile Ser Ile Leu Glu Lys Val His Ser Lys Gly Tyr

    210                 215                 220

Val His Gly Asp Val Lys Pro Glu Asn Phe Leu Leu Gly Pro Pro Gly

225                 230                 235                 240

Thr Pro Glu Glu Lys Lys Leu Phe Leu Val Asp Leu Gly Leu Ala Thr

                245                 250                 255

Lys Trp Lys Asp Arg Ser Thr Gly His His Val Glu Tyr Asp Gln Arg

            260                 265                 270

Pro Asp Ile Phe Arg Gly Thr Phe Arg Tyr Ala Ser Val His Ala His

        275                 280                 285

Leu Gly Arg Ile Gly Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Ala Tyr

    290                 295                 300

Thr Leu Val Phe Leu Leu Arg Gly Arg Leu Pro Trp Gln Gly Tyr Gln

305                 310                 315                 320

Gly Glu Asn Lys Gly Phe Leu Val Cys Lys Lys Lys Met Cys Thr Ser

                325                 330                 335

Pro Glu Ser Leu Cys Ser Phe Cys Pro Gln Pro Phe Lys Glu Phe Val

            340                 345                 350

Glu Tyr Val Val Asn Leu Lys Phe Asp Glu Glu Pro Asn Tyr Ala Lys

        355                 360                 365

Cys Ile Ser Leu Phe Asp Ser Ile Val Gly Pro Asn Pro Asp Ile Arg

    370                 375                 380

Pro Ile Asn Thr Asp Gly Ala Gln Lys Leu Ile His Gln Val Gly Gln

385                 390                 395                 400

Lys Arg Gly Arg Ile Ser Leu Glu Gly Glu Thr Asp Glu Gln Pro Lys

                405                 410                 415

Lys Lys Ile Arg Met Gly Met Pro Ala Thr Gln Trp Ile Ser Val Tyr

            420                 425                 430

Asn Ala Arg Arg Pro Met Lys Gln Arg Tyr His Tyr Asn Val Ala Asp

        435                 440                 445

Ser Arg Leu Val Gln His Ile Asp Lys Gly Asn Glu Asp Gly Leu Phe

    450                 455                 460

Ile Ser Cys Ile Ser Ser Cys Ala Asn Leu Trp Ala Leu Ile Met Asp

465                 470                 475                 480

Ala Gly Thr Gly Phe Ser Ser Gln Val Tyr Glu Leu Ser Pro His Phe

                485                 490                 495

Leu His Lys Glu Trp Ile Met Asp Gln Trp Asp Arg Asn Tyr Tyr Ile

            500                 505                 510

Thr Ala Leu Ala Gly Ala Asn Asn Gly Ser Ser Leu Val Val Met Ser

        515                 520                 525

Lys Gly Thr Leu Tyr Thr Gln Gln Ser Tyr Lys Val Ser Asp Thr Phe

    530                 535                 540

Pro Phe Lys Trp Ile Asn Lys Lys Trp Arg Asp Gly Phe Tyr Val Thr

545                 550                 555                 560

Ser Met Ala Thr Ala Gly Asn Lys Trp Ala Ile Val Met Ser Arg Asn

                565                 570                 575

Ala Gly Phe Ser Glu Gln Val Val Glu Leu Asp Phe Leu Tyr Pro Ser

            580                 585                 590

Glu Gly Val His Lys Arg Trp Asp Ser Gly Tyr Arg Ile Thr Ala Val

        595                 600                 605

Ala Ala Thr Trp Asp Gln Thr Ala Leu Ile Leu Ser Val Pro Arg Arg

    610                 615                 620

Lys Pro Thr Asp Glu Thr Gln Glu Thr Leu Arg Thr Ser Ala Phe Pro

625                 630                 635                 640

Ser Gln His Val Lys Glu Lys Trp Ser Lys Asn Leu Tyr Leu Ala Ser

                645                 650                 655

Val Cys Tyr Gly Arg Thr Val Ser

            660

<210>62

<211>2269

<212>DNA

<213>大豆

<400>62

gttcctgctt ccactccatc aaatccaaac cataataatc ataatgcatg agagagagat 60

ttcattcctc cattttctct ctaaccatca ttttcttttc ttttagccta aaataattca 120

tccttctttt ttattatttc tatattttta tttatttatt ttttccatcg gagctgcatt 180

ttcctcttcc tttttttatg ttttttgaat ccgatcgatg aacgcggctt ctttgtttgt 240

agaatttttg gcattaaatg atcggaattc ggcgttggga tttgcttagg gtttcaaaaa 300

ctctctctet tttaaaaatt gttttttgaa tggaacctcg cgttgggaat aagtttcggc 360

ttggccgtaa gattggtagc ggatcgtttg gagagatcta tttaggtact aatattcaaa 420

ctaatgaaga ggttgcaatt aagcttgaaa atgtcaagac aaagcatcct cagttgctat 480

atgagtccaa gttgtacaga gttctccagg gaggaactgg aattccagat gttagatggt 540

ttggagtgga gggagattac aatgttctag tgatggatct gcttggacct agtcttgaag 600

atctatttaa cttctgcagt agaaagctct cactaaagac agttctcatg cttgctgatc 660

acatgatcaa ccgtgttgag tttgttcatt ctaaatcatt tcttcatcgg gatatcaaac 720

cagataattt cctcatgggc ttgggaaggc gggcaaacca ggtttactgt attgattttg 780

gtttggccaa gaaatataga gatagttcaa cccatcaaca cattccttac agggaaaaca 840

agaatttaac tgggactgct agatacgcga gtatgaatac ccaccttggc attgagcaaa 900

gtcgaagaga tgatttggag tctgttggtt ttgtcttgat gtatttcttg agaggaagtc 960

tcccttggca aggacttaaa gcaggaacaa agaaacacaa gtacgagaga atcagtgaaa 1020

aaaaggtttc tacctcaatt gaggccttgt gtcgaggtta tccaacagaa tttgcatcat 1080

acttccatta ctgccgctca ttaaggtttg atgataggcc agattatgct tacctcaaaa 1140

gaatattttg cgacttgttt attcgtgaag gattccagtt tgattatgtg tttgattgga 1200

caatcttgaa gtatcagcaa tcacagctag ctgctcctcc agcacgtgcc attggtccta 1260

atgttggaac tagttctgca atgccaccgg ctgtgactaa tgctgataga cagacaggag 1320

aggaagaagg gcgacctcct ggtctggttt caggggattc cacaaggcga agaatgtcag 1380

ggcccatcac aaactctgta aatatttcaa agcagaaaaa tccagtcact acggatgctg 1440

cccttaataa ggaagccatg ttatcaaggc ccaatgtctt ggggcagtca agtggatcaa 1500

ggcgagctgc ggtttctagt aggcgtgatg catttgttgg ttcggatttg gatcttcgta 1560

ctcgttctac tgaggctaac cctggaacag caattaaaac atcatctgcg agaaatgctt 1620

ctcatgtcaa gaactatgaa actgcaatca agggcattga gggtttgcaa ttagaaaatg 1680

atgagaaggc acattattga ttcctcacct tttcatgttg taaatataag ctttggttga 1740

cgggcactac aatagttgca tgttgccaag gtgagtcgcg aagggacgtg aatttgaact 1800

cagaagtctg ggcttgtgtt gtttaaccct tgtgctcatg ctgatcaagc atggaagctg 1860

aaaaaatttg agctaaatca gggattgttc ttgcttcgaa gctcagggtt tacgctggca 1920

ctagtcttct ggcgggaacc ctaaattttg taaccttttc ctgtgagtta ttattgattt 1980

accagatgtc taaagtgtca tgtggatcac attgttcaaa actatcaaat accagcaaaa 2040

atatctactc aagttttgga taagaccaaa gtttccaaga tgtttctgga gattactgcg 2100

gtatttagga atattcaagg ttcttgaaat gtttctacct tgtgaaattc ttataagctt 2160

gaatcctcgt atttctttag tttgtcttta atgttatctc gtaataatat ctgtaaattt 2220

ttattccaat aatttggaag gttttctttg caaaaaaaaa aaaaaaaaa             2269

<210>63

<211>456

<212>PRT

<213>大豆

<400>63

Met Glu Pro Arg Val Gly Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Ile Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Asn Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Arg Val Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asp Val Arg Trp Phe Gly Val Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Leu Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp His Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Phe Val His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Cys Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Ser Ser

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Val Gly Phe Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys His Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ala Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Gly Tyr Pro Thr Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Arg Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Cys Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Leu Ala Ala Pro Pro

    290                 295                 300

Ala Arg Ala Ile Gly Pro Asn Val Gly Thr Ser Ser Ala Met Pro Pro

305                 310                 315                 320

Ala Val Thr Asn Ala Asp Arg Gln Thr Gly Glu Glu Glu Gly Arg Pro

                325                 330                 335

Pro Gly Leu Val Ser Gly Asp Ser Thr Arg Arg Arg Met Ser Gly Pro

            340                 345                 350

Ile Thr Asn Ser Val Asn Ile Ser Lys Gln Lys Asn Pro Val Thr Thr

        355                 360                 365

Asp Ala Ala Leu Asn Lys Glu Ala Met Leu Ser Arg Pro Asn Val Leu

    370                 375                 380

Gly Gln Ser Ser Gly Ser Arg Arg Ala Ala Val Ser Ser Arg Arg Asp

385                 390                 395                 400

Ala Phe Val Gly Ser Asp Leu Asp Leu Arg Thr Arg Ser Thr Glu Ala

                405                 410                 415

Asn Pro Gly Thr Ala Ile Lys Thr Ser Ser Ala Arg Asn Ala Ser His

            420                 425                 430

Val Lys Asn Tyr Glu Thr Ala Ile Lys Gly Ile Glu Gly Leu Gln Leu

        435                 440                 445

Glu Asn Asp Glu Lys Ala His Tyr

    450                 455

<210>64

<211>1808

<212>DNA

<213>亚麻(Linum usitatissimum)

<400>64

tgccccgtct ctctcgccat ccgttttagt tctagggttt actttggatc cccgatctaa 60

ccctaatttt ttgctgggtt tcttatcgag gaagatcgct gctttttata atctttcgtc 120

agggtttcga tctctttttt cgttgattcc ttttctcgcc tgtgagttgg aatatgtgaa 180

gttgggaaat ttgtttcagc ataagtaggc agtcagtgat ttaaagtttt gagcttctgc 240

tgtgttgaac gatggagaag atgaaggttg accatatcgt cggtggtaag tttaagcttg 300

ggaggaagat tgggagtgga tcttttggag agctctatct gggtgtaaat gtgcagactg 360

gagaagaagt tgctgttaag ctggaatctg tgaagaccaa gcatcctcag cttcagtatg 420

agtcaaagtt gtatatgctt ctccaaggag ggactggaat tcctcatctg aagtggtttg 480

gagttgaggt ggagtataat atcatggtta ttgatcttct tggaccgagt ttggaagatc 540

tattcaacta ctgtaatagg aaatttactt tgaaaacagt gctaatgctt gctgatcaac 600

tgattaatag ggttgaatat atgcattcaa gaggatttct tcaccgtgac ataaagcctg 660

ataacttctt gatgggccta ggtcgcaaag ccaatcaggt ctatgtaatt gattatggcc 720

ttgcaaagaa atacagggat ctccagactc acaagcacat tccatacaga gaaaataaga 780

acctaacagg cactgctcgt tatgcaagtg tcaacaccca cctcggagtt gagcaaagca 840

gaagggatga tttggagtca cttggatatg tgcttatgta tttcctccga ggaagcctcc 900

catggcaagg attaaaggct ggcacaaaaa agcagaaata tgacaggatc agtgaaaaga 960

aagtgcagac ttcaatagag tctctttgta aatcttatcc atccgagttt gtatcctact 1020

tccactactg tcgctcattg cgattcgaag ataaaccaga ttactcgtat ttgaagaggc 1080

ttttccggga cttatttatt cgggaaggtt atcaattcga ctatgtgttc gactggactg 1140

tactgaagta tcctcaagtt ggttccagct ctagagcacg agtaagtgtg aaaccaggtc 1200

ctgcactcgc ggcaggacca tctactgtaa gagtgcccga gagagtttct gttggcaaag 1260

agatccggga gagattctca ggcgctgttg aggctttttc aatcaggaga atcactggtg 1320

ctagcccgct cgacaattcg agagccagga caaatgagac tcaacagcag cctgaggcgg 1380

agaaaggtcg cagcacgtct aggcatggaa gtagctcgag acgagccatc gttccgaacg 1440

gcaagccaag ttcctcaggt gatcacggag atggtcgcct gacgagaaca caccattctt 1500

ctggccatat ctcttccaca caaagaatcc tacctgcgta cgaacccatc aagtcatccg 1560

gtgctcgagc agctgctgcc aaatcccgcg aggaaaatct aaagagcttc gagttcctca 1620

ccctgaaccg acgatgaaag tagcggaaaa tgaatctgct ccttcataaa tcattgtcat 1680

gtttggttac acttgttggt atacaaagaa ttcgaaatcg taactctgaa gaaaccgagt 1740

ctccccactg ctgcatgtaa cacattgtga agaagagaaa tcagaaaccc aaaaaaaaaa 1800

aaaaaaaa                                                          1808

<210>65

<211>461

<212>PRT

<213>亚麻

<400>65

Met Glu Lys Met Lys Val Asp His Ile Val Gly Gly Lys Phe Lys Leu

  1               5                  10                  15

Gly Arg Lys Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Glu Leu Tyr Leu Gly Val

             20                  25                  30

Asn Val Gln Thr Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Ser Val Lys

         35                  40                  45

Thr Lys His Pro Gln Leu Gln Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Met Leu Leu

     50                  55                  60

Gln Gly Gly Thr Gly Ile Pro His Leu Lys Trp Phe Gly Val Glu Val

 65                  70                  75                  80

Glu Tyr Asn Ile Met Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp

                 85                  90                  95

Leu Phe Asn Tyr Cys Asn Arg Lys Phe Thr Leu Lys Thr Val Leu Met

            100                 105                 110

Leu Ala Asp Gln Leu Ile Asn Arg Val Glu Tyr Met His Ser Arg Gly

        115                 120                 125

Phe Leu His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly

    130                 135                 140

Arg Lys Ala Asn Gln Val Tyr Val Ile Asp Tyr Gly Leu Ala Lys Lys

145                 150                 155                 160

Tyr Arg Asp Leu Gln Thr His Lys His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys

                165                 170                 175

Asn Leu Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His Leu Gly

            180                 185                 190

Val Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu

        195                 200                 205

Met Tyr Phe Leu Arg Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly

    210                 215                 220

Thr Lys Lys Gln Lys Tyr Asp Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Gln Thr

225                 230                 235                 240

Ser Ile Glu Ser Leu Cys Lys Ser Tyr Pro Ser Glu Phe Val Ser Tyr

                245                 250                 255

Phe His Tyr Cys Arg Ser Leu Arg Phe Glu Asp Lys Pro Asp Tyr Ser

            260                 265                 270

Tyr Leu Lys Arg Leu Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Tyr Gln

        275                 280                 285

Phe Asp Tyr Val Phe Asp Trp Thr Val Leu Lys Tyr Pro Gln Val Gly

    290                 295                 300

Ser Ser Ser Arg Ala Arg Val Ser Val Lys Pro Gly Pro Ala Leu Ala

305                 310                 315                 320

Ala Gly Pro Ser Thr Val Arg Val Pro Glu Arg Val Ser Val Gly Lys

                325                 330                 335

Glu Ile Arg Glu Arg Phe Ser Gly Ala Val Glu Ala Phe Ser Ile Arg

            340                 345                 350

Arg Ile Thr Gly Ala Ser Pro Leu Asp Asn Ser Arg Ala Arg Thr Asn

        355                 360                 365

Glu Thr Gln Gln Gln Pro Glu Ala Glu Lys Gly Arg Ser Thr Ser Arg

    370                 375                 380

His Gly Ser Ser Ser Arg Arg Ala Ile Val Pro Asn Gly Lys Pro Ser

385                 390                 395                 400

Ser Ser Gly Asp His Gly Asp Gly Arg Leu Thr Arg Thr His His Ser

                405                 410                 415

Ser Gly His Ile Ser Ser Thr Gln Arg Ile Leu Pro Ala Tyr Glu Pro

            420                 425                 430

Ile Lys Ser Ser Gly Ala Arg Ala Ala Ala Ala Lys Ser Arg Glu Glu

        435                 440                 445

Asn Leu Lys Ser Phe Glu Phe Leu Thr Leu Asn Arg Arg

    450                 455                 460

<210>66

<211>1383

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>66

ttcttccaca ctatttgact ctccacaaaa ctttttcctc agaactcaga tccgaatcct 60

actaaattcc cctttccttt caaactcttt tcctatattc ttcttcttct tgcttcctat 120

cctaaactta ctttcttttt ctttgtctcg ttcttgcaac tttcaccatc aaaaccagct 180

tcaacaactg ttgcttgggt ggtttcggtt tagtgatgag attgccattt agtgggtaaa 240

tcggatagtg ggtatttcta aagtggtgat tttgaagcgg aaaaaagagg atggaacgga 300

atcagaagaa gatggatcac gtcatcggcg gaaagtttaa gttgggtagg aaactcggca 360

gcggatcgtt cggtgaactt tatttaggga tcaatattca gactggagaa gaagtcgcag 420

ttaagctgga agctgtgaag acgaggcatc ctcaactgca gtatgagtcg aagatatata 480

tgcatctcca aggaggaact ggtgttcccc atctcaaatg gttcggagtc gggggtgact 540

acagttgcat ggttatcgac cttcttggcc ccagcttgga ggacttattc aattactgca 600

ctcgaaagtt tactttgaaa tctgttttaa tgcttgcaga tcagttgata tgcagagttg 660

agtacacgca ttcacggggc tttcttcacc gcgatattaa accggacaac tttttgatgg 720

gtcttgggcg caaagcaaac caggtttata tcatcgatta tggccttgct aaaaaataca 780

aggattttca aacacaaaag catataccat acagggaaaa caagaatcta acgggaactg 840

cacggtatgc aagtgtcaac acgcaccttg gcattgagca aagtagaaga gatgatctgg 900

agtcacttgg ttatgtgttg atgtattttc tacgaggaag tcttccgtgg caagggttaa 960

aaggtgggac aaagaagcag aagtatgaca agattagtga aaagaagatg cttactcctg 1020

tagaggtata gcttttgtaa tgaggatata atgttttcaa atatccaaat agattttgac 1080

ttagcttggt tttaatcttt tttttttctt tttggagatt ctgtgcaagt cacatccatc 1140

agagttcacc tcctatttcc attactgtcg atcactgaga tttgaggaca aaccagatta 1200

ttcatatctg agaagacttt tcagagacct tttcattcgt gaaggttacc agctggacta 1260

cgtgtttgat tggacaacct tgaaatatcc tcagtctggc tctacttcga gaccaaggct 1320

gactccaaga ccagccttgg acccggaccc tccaggacca cctgcaaaaa aaaaaaaaaa 1380

aaa                                                               1383

<210>67

<211>246

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>67

Met Glu Arg Asn Gln Lys Lys Met Asp His Val Ile Gly Gly Lys Phe

  1               5                  10                  15

Lys Leu Gly Arg Lys Leu Gly Ser Gly Ser Phe Gly Glu Leu Tyr Leu

             20                  25                  30

Gly Ile Asn Ile Gln Thr Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Ala

         35                  40                  45

Val Lys Thr Arg His Pro Gln Leu Gln Tyr Glu Set Lys Ile Tyr Met

     50                  55                  60

His Leu Gln Gly Gly Thr Gly Val Pro His Leu Lys Trp Phe Gly Val

 65                  70                  75                  80

Gly Gly Asp Tyr Ser Cys Met Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu

                 85                  90                  95

Glu Asp Leu Phe Asn Tyr Cys Thr Arg Lys Phe Thr Leu Lys Ser Val

            100                 105                 110

Leu Met Leu Ala Asp Gln Leu Ile Cys Arg Val Glu Tyr Thr His Ser

        115                 120                 125

Arg Gly Phe Leu His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly

    130                 135                 140

Leu Gly Arg Lys Ala Asn Gln Val Tyr Ile Ile Asp Tyr Gly Leu Ala

145                 150                 155                 160

Lys Lys Tyr Lys Asp Phe Gln Thr Gln Lys His Ile Pro Tyr Arg Glu

                165                 170                 175

Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His

            180                 185                 190

Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr

        195                 200                 205

Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys

    210                 215                 220

Gly Gly Thr Lys Lys Gln Lys Tyr Asp Lys Ile Ser Glu Lys Lys Met

225                 230                 235                 240

Leu Thr Pro Val Glu Val

                245

<210>68

<211>1475

<212>DNA

<213>向日葵(Helianthus annuus)

<400>68

cctaataatt cactcctcta taatacgtta caattcaatt tctttatctt caaaacccta 60

gaacatcttc atggagcctc gtgttgctaa taagtttcga ttaggtcgta agattggaag 120

cggatccttc ggagagatct atttaggtac taatgttcag acaaatgaag aagttgcaat 180

taagcttgaa aatgttaaga caaaacatcc tcagctgctg tacgagtcca agttatacag 240

gattctacag ggaggaactg gtattccaaa tgtgagatgg tttggagtgg agggagatta 300

taatgttctc gtgatggatt tgctcgggcc tagtcttgag gatttattca atttctgtaa 360

cagaaaactt tctttaaaaa ccgttctcat gcttgcagat caaatgatca accgtattga 420

atttgtgcac tctaaatcat ttctacatcg cgatatcaag cctgacaatt ttcttatggg 480

cctgggacga cgtgcaaatc aagtctacat cattgatttt ggtctggcca agaaatacag 540

ggatactaca actcaccagc acattccgta cagagacaac aaaaacttga ccgggactgc 600

tagatacgca agcatgaata ctcatcttgg aattgaacaa agcaggaggg atgatttaga 660

atctcttgga tacgttctca tgtatttcct aagagggagc cttccttggc aagggctgaa 720

agcgggaaat aagaaacaga aatacgagaa aataagtgag aaaaaagttt ctacatcaat 780

tgaggcctta tgtcgcggtt atccaacaga gtttgcatca tacttccatt actgccgttc 840

gttgcggttt gaggacaaac ccgattatgc ttatctgaag aggatattcc gtgacctctt 900

tatccgtgaa gggtttcagt ttgattacgt ttttgattgg acgattttga agtatcagca 960

atcacagatt gctcctcctc cgacccgcgg tcctggtatg gatgctgggc caagctctgc 1020

tattccaaat ggcgagcaaa gtgggagaca ggtgggctta tcttcattgg atccttcgcg 1080

tagaagaaat tccggcaatt tactacctag ggaaaagagc ccggttgcta atgatgcaac 1140

aatcagcaca gatgccatga gagcaagtgg atcgacgagg catgtggact ccagtggtcg 1200

ggcccgcatc ccagacacta gaccgagaag ctcaccacga gacggatcct tgactcagaa 1260

tgcagctgcg gggacaaaca agtatgaaac cactcttaag ggaatggaaa gtctaaattt 1320

tgatgataat aaaagggttg gttaatctct tgtaaattgt gcaactttat tccataaaac 1380

aaagaaattg gccttgatag taattgtgat agttggtgac ccagtaatat gtaaatttgt 1440

agctttttat gactttcaaa aaaaaaaaaa aaaaa                            1475

<210>69

<211>424

<212>PRT

<213>向日葵

<400>69

Met Glu Pro Arg Val Ala Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Val Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Asn Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Arg Ile Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asn Val Arg Trp Phe Gly Val Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Asn Arg Lys Leu Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Ile Glu Phe Val His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Thr Thr

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Asp Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Asn Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Lys Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ala Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Gly Tyr Pro Thr Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Glu Asp Lys Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Ile Ala Pro Pro Pro

    290                 295                 300

Thr Arg Gly Pro Gly Met Asp Ala Gly Pro Ser Ser Ala Ile Pro Asn

305                 310                 315                 320

Gly Glu Gln Ser Gly Arg Gln Val Gly Leu Ser Ser Leu Asp Pro Ser

                325                 330                 335

Arg Arg Arg Asn Ser Gly Asn Leu Leu Pro Arg Glu Lys Ser Pro Val

            340                 345                 350

Ala Asn Asp Ala Thr Ile Ser Thr Asp Ala Met Arg Ala Ser Gly Ser

        355                 360                 365

Thr Arg His Val Asp Ser Ser Gly Arg Ala Arg Ile Pro Asp Thr Arg

    370                 375                 380

Pro Arg Ser Ser Pro Arg Asp Gly Ser Leu Thr Gln Asn Ala Ala Ala

385                 390                 395                 400

Gly Thr Asn Lys Tyr Glu Thr Thr Leu Lys Gly Met Glu Ser Leu Asn

                405                 410                 415

Phe Asp Asp Asn Lys Arg Val Gly

        420

<210>70

<211>1803

<212>DNA

<213>大豆

<400>70

gtggctttga tttcggttcc gaagggacaa ccaacgacca ccctctcttc tgactcactt 60

ctcgaacctt ccaaacatgg aacgcatcgt tggcggcaag tacaagctcg gccgcaagat 120

cggaagtgga tccttcggcg aaatctacct cgcgacgcat attgatacct tcgagatcgt 180

cgccgtcaag atcgagaata gtaaaacaaa acatccacaa ctgctttacg aggcaaagct 240

atacaatatt cttcaaggag gaagtggcat tccgaacata aaatggtctg gcatagacgg 300

ggaggataat gtgcttgtta ttgatttgct tgggccgagt cttgaggatc tctttgtgta 360

ttgtggaagg aagttttcat tgaagacagt attaatgttg gctgatcaaa tgatcactag 420

aatagaatat gtgcattcta aaggattttt acacagggat attaaacctg ataactttct 480

catgggactt ggtcgaaagg ccaaccaggt ttacataatt gattttgggc ttgcaaaacg 540

atatcgggat tccactacca atcgccacat cccttacagg gagaacaaaa acttaacggg 600

tactgctcga tatgcaagtt gcaatactca tcttgggatt gagcaaagtc gccgggatga 660

tttggaatca ctaggatatg tacttctgta cttcctaaga ggaagccttc cttggcaagg 720

tctaaaggcg gctacaaaga aacagaagta tgataaaata tgccagaaga aattatcaac 780

tcctattgag gtactatgca aatctcatcc tgtagagttt gcttcgtact tccattactg 840

ccactctttg acatttgatc aacgacctga ttatggtttc ttgaagcgcc tatttcggga 900

cctatttgct cgtgatggtt atgattttga ttacgttttt gattggacca ttttgaagta 960

ccagcaatct caaaagaatc cagttccagg agcaagtaac agtcgtgcaa ttccaatgga 1020

tattgacaat catcaaggtc ttaattcata ttcagggcat gttaaagagc gtattagagc 1080

tggtgatgct actggttctg gtgttaaaat tcagtttaaa tcaccagtgg gtaaaaattt 1140

gagttatgag aaaccacttg acaaaaatat ttttggagaa gcaaatattc cctctacttc 1200

attttctcct gctagtactt cacaaaggaa ctccttgaag caatccttgt ctgctgaagc 1260

ttccaaccct ggacatgcac aaggcagtaa aattggccct tcaagtagct tgatgtcatc 1320

tctgcagcac atgtcttctg ctaaatgatt gcaaaatatg ctatgaagct ttgaagaaga 1380

ttctgtgcat tgtttcccct attatttggt caagaatatt caagtcatta ttaattcatg 1440

gagactgcaa atgtgccaga aagttgacaa attgcatagc tcctattttg aggccattta 1500

gtgttgcttc tttcctgagg tgactacaaa tgcttgtgcg gtataaaaca gacttcccag 1560

gcttggctcc tgtgctgtac atagatgtca aatttggcac acagcaatat tttgtattca 1620

tgttttcatg taacattaat gtgtgtagta gccctgttac tccgatatgt tacttgatga 1680

tgattatcat tgtgccatac aataaatggt gacagagtgt tttaaaactt ctaaattatt 1740

tgtcaatatt ataaattgca aatgtatttt cagtttctcc taaaaaaaga gagaccgaca 1800

cgc                                                               1803

<210>71

<211>423

<212>PRT

<213>大豆

<400>71

Met Glu Arg Ile Val Gly Gly Lys Tyr Lys Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Ala Thr His Ile Asp Thr Phe

             20                  25                  30

Glu Ile Val Ala Val Lys Ile Glu Asn Ser Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Ala Lys Leu Tyr Asn Ile Leu Gln Gly Gly Ser Gly

     50                  55                  60

Ile Pro Asn Ile Lys Trp Ser Gly Ile Asp Gly Glu Asp Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Val Tyr Cys

                 85                  90                  95

Gly Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Thr Arg Ile Glu Tyr Val His Ser Lys Gly Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Lys Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Arg Tyr Arg Asp Ser Thr

145                 150                 155                 160

Thr Asn Arg His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Cys Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Leu Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Ala Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Asp Lys Ile Cys Gln Lys Lys Leu Ser Thr Pro Ile Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Ser His Pro Val Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys His

                245                 250                 255

Ser Leu Thr Phe Asp Gln Arg Pro Asp Tyr Gly Phe Leu Lys Arg Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Lys Asn Pro Val Pro

    290                 295                 300

Gly Ala Ser Asn Ser Arg Ala Ile Pro Met Asp Ile Asp Asn His Gln

305                 310                 315                 320

Gly Leu Asn Ser Tyr Ser Gly His Val Lys Glu Arg Ile Arg Ala Gly

                325                 330                 335

Asp Ala Thr Gly Ser Gly Val Lys Ile Gln Phe Lys Ser Pro Val Gly

            340                 345                 350

Lys Asn Leu Ser Tyr Glu Lys Pro Leu Asp Lys Asn Ile Phe Gly Glu

        355                 360                 365

Ala Asn Ile Pro Ser Thr Ser Phe Ser Pro Ala Ser Thr Ser Gln Arg

    370                 375                 380

Asn Ser Leu Lys Gln Ser Leu Ser Ala Glu Ala Ser Asn Pro Gly His

385                 390                 395                 400

Ala Gln Gly Ser Lys Ile Gly Pro Ser Ser Ser Leu Met Ser Ser Leu

                405                 410                 415

Gln His Met Ser Ser Ala Lys

            420

<210>72

<211>1628

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>72

agagagagac attccttttg ttcccagatc gcgagaagga agatatatga caactgggtt 60

tctctgttct cagccctagt ttcccagaaa aatgggatct ttccttattt cattcggatt 120

tgcgctgatt ctggtgtgtt aaaagtttct ttcttggaaa agagagagag agggtaaagt 180

tgagattatc atcctagtta gggcttagga ggcatcgatg gagcatcttg tgggaaaaaa 240

gtttcggctg ggaaggaaaa ttggaagcgg ttcttttgga gagatccatc tcggtactca 300

tattcaaacc aacgaagaag tcgccatcaa gcttgaaaat gcaaagacaa aacatccaca 360

gctgctctac gaacccaagt tatacaaact tctacaggga ggaactggtg ttccaaatat 420

caagtggttt ggtgttgaaa gtgactacaa tgtgctggtc atggatttac ttggccctag 480

tcttgaagac ttgttcaatt tctgtagcag gaaactttct ctcaagtccg ttctcatgct 540

tgctgatcaa atgataaacc gtgttgagta tttccactct aagtctttcc ttcaccgaga 600

tctcaagcca gacaatttcc tcatggggct aggaagacgc gcaaaccagg tatacatcat 660

cgactttggt cttgctaaga agtacaggga taacactact catcagcaca ttccttacag 720

agaaaataag aatctcactg gaactgcaag atatgctagt atgaatactc acttgggaat 780

tgaacaaagc cgaagggatg atctcgaatc tcttggttac attctcatgt atttccttaa 840

aggaagtctt ccatggcaag gacttaaagc tggaaccaag aaacaaaagt acgagagaat 900

cagcgaaaag aaagtctcta cttccattga gtctttatac cgtggctacc catcagagtt 960

tgcttcttac ttccattact gccgctcgct tcggtttgat gacaaaccgg attacggtta 1020

tctcaaaaga atattcagag atctctttat ccgtgaaggg tttcagttcg attatgtctt 1080

tgactggacc atactgaagt accaacagtc acaactgaca gctcctccaa cccgtggcct 1140

cggaactcct gcagctggaa caagtgcggc tttgccccca ggattgacca ccatggatag 1200

atacgcaggg gaggaagaag gaggaaggcc accgatggat tcatcaagaa ggagaacgtc 1260

tggtgctctt gacaactctg gcaacttgag agccccaatg atgcatagct cgtcggtgtt 1320

cgcgcaatca gcaggatcat caaggagatt aacatcggag gagctacaga ggtcccgtac 1380

gggcagcgga ttaagaaaca caccggtggt tacaacgtcg gaagggaaga ggtcttcttc 1440

caccagaaaa cattacgatt ctgccatcaa aggcatcgag actcttcaag tctccagcga 1500

aaggtttcac caccattgat gatgatccat ctgttagaga aaaacatgtc gtgtttattt 1560

gttcagaact cagaagttat tatttatatg tagttttcgg ctctatatcg aaaaaaaaaa 1620

aaaaaaaa                                                          1628

<210>73

<211>433

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>73

Met Glu His Leu Val Gly Lys Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile His Leu Gly Thr His Ile Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Asn Ala Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Pro Lys Leu Tyr Lys Leu Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Val Pro Asn Ile Lys Trp Phe Gly Val Glu Ser Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Met Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Leu Ser Leu Lys Ser Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Phe His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Leu Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Asn Thr

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Ile Leu Met Tyr Phe Leu Lys

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Ser Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Gly Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Gly Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Leu Thr Ala Pro Pro

    290                 295                 300

Thr Arg Gly Leu Gly Thr Pro Ala Ala Gly Thr Ser Ala Ala Leu Pro

305                 310                 315                 320

Pro Gly Leu Thr Thr Met Asp Arg Tyr Ala Gly Glu Glu Glu Gly Gly

                325                 330                 335

Arg Pro Pro Met Asp Ser Ser Arg Arg Arg Thr Ser Gly Ala Leu Asp

            340                 345                 350

Asn Ser Gly Asn Leu Arg Ala Pro Met Met His Ser Ser Ser Val Phe

        355                 360                 365

Ala Gln Ser Ala Gly Ser Ser Arg Arg Leu Thr Ser Glu Glu Leu Gln

    370                 375                 380

Arg Ser Arg Thr Gly Ser Gly Leu Arg Asn Thr Pro Val Val Thr Thr

385                 390                 395                 400

Ser Glu Gly Lys Arg Ser Ser Ser Thr Arg Lys His Tyr Asp Ser Ala

                405                 410                 415

Ile Lys Gly Ile Glu Thr Leu Gln Val Ser Ser Glu Arg Phe His His

            420                 425                 430

His

<210>74

<211>1806

<212>DNA

<213>欧洲油菜

<400>74

gagaagcgtc taagaaacga cattccgttg agattggatt gtgttttctc cagatcgaga 60

cgaggaggat gaagatagct attgggtttt tttgattctt gttgggtcct tctttcttcc 120

cgcttttgaa tctgctttat tttttggggg ttgagattct aaattagggt ttcgtgggtt 180

atattgatgg aatctcgtgt tggaaacaag tttcgccttg gccggaagat cggtagcggt 240

tccttcgggg agatctatct gggtactaat attcaaacga atgaagaagt tgcaatcaag 300

cttgaaagtg tgaagacgaa acatcctcag ctgctttatg aattgaagtt atacaagatt 360

ctacaaggag gaactggtgt cccaaatgtg aaatggtacg gtgttgaagg ggactacaat 420

gttttggtga tcgatctact agggccgagt cttgaagatc tgttcaattt ctgtagcagg 480

aaactttcct tgaagtcggt cctcatgctt gctgatcaaa tgatcaaccg tgttgagttt 540

ttccattcaa aatctttcct tcaccgagat cccaagcctg acaatttcct catgggcctt 600

ggaaggcgtg ccaaccaggt ttacatcatc gactttggtc tagctaagaa gtacagagat 660

agtacaacac atcagcacat tccctacaga gaaaataaga acctgacagg aactgcacgt 720

tacgctagta tgaacaccca cttgggaatt gaacaaagcc gaagggatga tctagagtct 780

cttggttata tccttatgta tttcctcaaa ggaagtcttc cttggcaagg actgaaagct 840

ggaaacaaga agcaaaagta cgagagaatt agcgaaaaga aagtttccac atccattgag 900

gtcttatgtc ggggttaccc atcagaattt gcatcctatt tccactactg ccggtcgctt 960

cgttttgatg ataaaccaga ctacgcttat ctcaaacgga tattcagaga tctctttatc 1020

cgtgaaggat ttcaatttga ttacgtgttt gactggacca tcttgaagta ccaacaatca 1080

caactaaccg ctcctccttc tcgtaatctc aaccctgcgg ttggaactag cgcagcattg 1140

ccacctggcg tttccaacat tgatagatac acaggcgagg aagaagggcg accggttggt 1200

tactcgcata tggaatcatc tcgacggaga gcttcaggca ctcttgacca ctcagggaat 1260

ctttcgaacc aacagacatc atcatttaac agagaatcca tgatgccgag ctcctcgatg 1320

tttgcacaat cagcaggatc atcgaggaga gtagcggcag tgagcagccg agacaatctt 1380

ctgagcgggg aagagtttca gagaagccac cgtacaggtg acgtaagccg cggaggagtg 1440

atctctagga actcccctgt ggaggctggg aagaggtctt cttcctcgag aagacactac 1500

gaatcagcca tcaaaggcat tgataatctt caagtctcct ccgacgacaa gtttcaccac 1560

caccactgat aataataata ataacaacat taattgtact tgcaccgtat tggtcaaacg 1620

acctcagaag tttcatatgt tttttcttct tcttaattac gcactacgaa agtttgaata 1680

caatcgagtt aatccacttt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800

aaaaaa                                                            1806

<210>75

<211>460

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>75

Met Glu Ser Arg Val Gly Asn Lys Phe Arg Leu Gly Arg Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Ile Gln Thr Asn

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Ile Lys Leu Glu Ser Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu Leu Tyr Glu Leu Lys Leu Tyr Lys Ile Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Val Pro Asn Val Lys Trp Tyr Gly Val Glu Gly Asp Tyr Asn Val Leu

 65                  70                  75                  80

Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Phe Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Leu Ser Leu Lys Ser Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Phe Phe His Ser Lys Ser Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Pro Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Arg Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Phe Gly Leu Ala Lys Lys Tyr Arg Asp Ser Thr

145                 150                 155                 160

Thr His Gln His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Met Asn Thr His Leu Gly Ile Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Ile Leu Met Tyr Phe Leu Lys

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Asn Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Glu Arg Ile Ser Glu Lys Lys Val Ser Thr Ser Ile Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Arg Gly Tyr Pro Ser Glu Phe Ala Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Asp Asp Lys Pro Asp Tyr Ala Tyr Leu Lys Arg Ile

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Phe Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Gln Gln Ser Gln Leu Thr Ala Pro Pro

    290                 295                 300

Ser Arg Asn Leu Asn Pro Ala Val Gly Thr Ser Ala Ala Leu Pro Pro

305                 310                 315                 320

Gly Val Ser Asn Ile Asp Arg Tyr Thr Gly Glu Glu Glu Gly Arg Pro

                325                 330                 335

Val Gly Tyr Ser His Met Glu Ser Ser Arg Arg Arg Ala Ser Gly Thr

            340                 345                 350

Leu Asp His Ser Gly Asn Leu Ser Asn Gln Gln Thr Ser Ser Phe Asn

        355                 360                 365

Arg Glu Ser Met Met Pro Ser Ser Ser Met Phe Ala Gln Ser Ala Gly

    370                 375                 380

Ser Ser Arg Arg Val Ala Ala Val Ser Ser Arg Asp Asn Leu Leu Ser

385                 390                 395                 400

Gly Glu Glu Phe Gln Arg Ser His Arg Thr Gly Asp Val Ser Arg Gly

                405                 410                 415

Gly Val Ile Ser Arg Asn Ser Pro Val Glu Ala Gly Lys Arg Ser Ser

            420                 425                 430

Ser Ser Arg Arg His Tyr Glu Ser Ala Ile Lys Gly Ile Asp Asn Leu

        435                 440                 445

Gln Val Ser Ser Asp Asp Lys Phe His His His His

    450                 455                 460

<210>76

<211>2189

<212>DNA

<213>普通小麦

<400>76

ctgcttgctg cctcctccgg cgaaggccca gtttttgccc ccgtctctcc ggatctcctc 60

gcccgacccg ctcgcctcga ttcgtttcgt ttattcgatt tttgctcccc tgtcctgtac 120

atatctgctc ggtcggcgcc cggatttctc ggcggcgtgt ctggatctgg ccttgcgagg 180

cgcctcgcgg tccgaatcct tgctcgattc gcccaggccc cgcggcggcg ggtttggatc 240

tcgcggggga ttcgtcggga ggcaggcagc ggtaatcgga gatggatcac atcgtcggcg 300

gcaagttcaa gctcggcaag aagatcggga gcggatcctt cggggagctc ttcctcgctg 360

tgaatgtgca gaccggagag gaggtcgccg tcaaactgga aaatgtcaag accaagcacc 420

cgcagctcca ttacgagtcc aagctctaca tgcttctcca gggaggaact ggcattccgc 480

acctcaagtg gttcggtgtg gagggggagt ataatgtgat ggtgattgat cttctcggac 540

ccagcctcga ggacctcttc aactactgca gtagaaagtt ctcgctcaag accgtgctca 600

tgctcgctga tcagatgata aaccgagttg agtacatgca tcagaaggga tttcttcatc 660

gtgacataaa acctgataat ttccttatgg gcctcggaag gaaagccaat caggtatata 720

taatagatta tggacttgca aagaaattca gagaccttca gactcataag cacatcccct 780

acagggagaa caagaatctc actggaactg cacgctatgc tagtgtcaat acccaccttg 840

gcgttgagca aagcaggaga gatgatttag aatcacttgg ttatgtactt atgtacttcc 900

tcagaggcag tctgccatgg caggggctga aagcgggcac taagaagcag aaatatgaca 960

aaattagtga gaagaagatg cttactcctg tggaggtact ctgcaagtct tacccttcag 1020

aattcatttc ttacttccac tactgtcgat cattgcggtt tgaagacaag ccagattatt 1080

cttacctaaa gagactattc cgtgatctct tcatccggga agggtaccaa ttcgattatg 1140

tgtttgactg gaccattttg aaatatcccc agataggctc caatccaagg atgaggccaa 1200

gtgaaagagt cagtggagct gctggacctt ctatcgagaa gatagagaag gccccaggcg 1260

aagcatctgc tagaaggaat cccagtgctt ctctgaatca gagtgacaac cacgcaacca 1320

gaccacggga aactgtatcg atgtcattaa aggagattat gcatagcaca gaccggtccg 1380

gtgaaaggac tgtggagagg accgtggaga gacctcgtac atcctcccgt acaggcagcg 1440

catccaggag agcagttgca tcaagcagca ggccaggctc atccatggaa ccgagcgagc 1500

agcagtacag ccggacgagc aggttgttct ccagcagcaa taacggcggc agccgcccgt 1560

ccagcaccca gagagtcaat cctggagtgg gcgagtcacg ggccacgtcc ctctcacggg 1620

cggcggtcgc aagagggtcg cgtgatgagc ccctccaccg cagcctcgag ctcctgtccc 1680

tcggcaccgg caagaggaaa taacaggaag gagggggaca agggaacccg aacctgagaa 1740

cgaacgatga aagaaggaac gacgccgttt gcgactctgt aaatgacagg ataccaccac 1800

cctattcgtc aacagcccgc ctggagcatc ccataatttc catggtgctc cagcctgttg 1860

gtagtatcac caccaccatc attgtttgat agatagcaat aatttgctgc tgctgctgct 1920

gttggttgtt gttgtcgtcc tcgtcggcgt gtgcgtgtta gggccaagtc ctagctttgt 1980

ggtgattaat ttagaggtgg tcaagattca acatatttat gtttctttat taccttcccg 2040

ctgggacttg gcaaactttt ttccgagact ttgttgtatt ttctcttcct gtttgttgca 2100

acctctggat ctgcctgttc agcaacagaa agttgatgaa agtaacttcc agtataaaaa 2160

ttagagagag agagagagac cgacacgca                                   2189

<210>77

<211>473

<212>PRT

<213>普通小麦

<400>77

Met Asp His Ile Val Gly Gly Lys Phe Lys Leu Gly Lys Lys Ile Gly

  1               5                  10                  15

Ser Gly Ser Phe Gly Glu Leu Phe Leu Ala Val Asn Val Gln Thr Gly

             20                  25                  30

Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Asn Val Lys Thr Lys His Pro Gln

         35                  40                  45

Leu His Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Met Leu Leu Gln Gly Gly Thr Gly

     50                  55                  60

Ile Pro His Leu Lys Trp Phe Gly Val Glu Gly Glu Tyr Asn Val Met

 65                  70                  75                  80

Val Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp Leu Phe Asn Tyr Cys

                 85                  90                  95

Ser Arg Lys Phe Ser Leu Lys Thr Val Leu Met Leu Ala Asp Gln Met

            100                 105                 110

Ile Asn Arg Val Glu Tyr Met His Gln Lys Gly Phe Leu His Arg Asp

        115                 120                 125

Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly Arg Lys Ala Asn Gln

    130                 135                 140

Val Tyr Ile Ile Asp Tyr Gly Leu Ala Lys Lys Phe Arg Asp Leu Gln

145                 150                 155                 160

Thr His Lys His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys Asn Leu Thr Gly Thr

                165                 170                 175

Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His Leu Gly Val Glu Gln Ser Arg

            180                 185                 190

Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu Met Tyr Phe Leu Arg

        195                 200                 205

Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly Thr Lys Lys Gln Lys

    210                 215                 220

Tyr Asp Lys Ile Ser Glu Lys Lys Met Leu Thr Pro Val Glu Val Leu

225                 230                 235                 240

Cys Lys Ser Tyr Pro Ser Glu Phe Ile Ser Tyr Phe His Tyr Cys Arg

                245                 250                 255

Ser Leu Arg Phe Glu Asp Lys Pro Asp Tyr Ser Tyr Leu Lys Arg Leu

            260                 265                 270

Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Tyr Gln Phe Asp Tyr Val Phe

        275                 280                 285

Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Pro Gln Ile Gly Ser Asn Pro Arg Met

    290                 295                 300

Arg Pro Ser Glu Arg Val Ser Gly Ala Ala Gly Pro Ser Ile Glu Lys

305                 310                 315                 320

Ile Glu Lys Ala Pro Gly Glu Ala Ser Ala Arg Arg Asn Pro Ser Ala

                325                 330                 335

Ser Leu Asn Gln Ser Asp Asn His Ala Thr Arg Pro Arg Glu Thr Val

            340                 345                 350

Ser Met Ser Leu Lys Glu Ile Met His Ser Thr Asp Arg Ser Gly Glu

        355                 360                 365

Arg Thr Val Glu Arg Thr Val Glu Arg Pro Arg Thr Ser Ser Arg Thr

    370                 375                 380

Gly Ser Ala Ser Arg Arg Ala Val Ala Ser Ser Ser Arg Pro Gly Ser

385                 390                 395                 400

Ser Met Glu Pro Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Arg Thr Ser Arg Leu Phe

                405                 410                 415

Ser Ser Ser Asn Asn Gly Gly Ser Arg Pro Ser Ser Thr Gln Arg Val

            420                 425                 430

Asn Pro Gly Val Gly Glu Ser Arg Ala Thr Ser Leu Ser Arg Ala Ala

        435                 440                 445

Val Ala Arg Gly Ser Arg Asp Glu Pro Leu His Arg Ser Leu Glu Leu

    450                 455                 460

Leu Ser Leu Gly Thr Gly Lys Arg Lys

465                470

Claims (26)

1.用编码多肽的核酸转化的转基因植物细胞，其中该多肽如SEQ IDNO：2所定义。

2.权利要求1的转基因植物细胞，其中该核酸包含如在SEQ ID NO：1中定义的多核苷酸。

3.用编码多肽的核酸转化的转基因植物细胞，其中该多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种环境胁迫的耐受性增加；其中所述核酸在严格条件下与SEQ ID NO：1序列及SEQ ID NO：1序列的全长互补序列中至少一个序列杂交；且其中所述严格条件包括于65℃在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)溶液中杂交。

4.用编码多肽的核酸转化的转基因植物细胞，所述多肽与SEQ IDNO：2定义的多肽之间具有至少80％的序列同一性，其中多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种环境胁迫的耐受性增加。

5.含有权利要求1、2、3或4中任一项的转基因植物细胞的转基因植物。

6.含有权利要求1、2、3或4中任一项的转基因植物细胞的种子。

7.由含有权利要求1、2、3或4中任一项的植物细胞的转基因植物产生的种子，其中所述种子含有编码多肽的核酸，其中所述种子为相对于该植物细胞野生型品种对环境胁迫的耐受性增强的真实遗传，且其中环境胁迫选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种。

8.分离的编码多肽的核酸，其中所述核酸包含编码如SEQ ID NO：2所定义多肽的多核苷酸。

9.权利要求8的核酸，其中所述核酸包含如SEQ ID NO：1定义的多核苷酸。

10.分离的编码多肽的核酸，其中所述多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种环境胁迫的耐受性增加；其中所述核酸在严格条件下与SEQ ID NO：1序列及SEQ ID NO：1序列的全长互补序列中至少一个序列杂交；且其中严格条件包括于65℃在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)溶液中杂交。

11.分离的编码多肽的核酸，所述多肽与SEQ ID NO：2定义的多肽之间具有至少80％的序列同一性，其中该多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种环境胁迫的耐受性增加。

12.包含权利要求8、9、10或11中任一项的分离的核酸的种子。

13.包含权利要求8、9、10或11中任一项的核酸的分离的重组表达载体，其中所述多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对环境胁迫的耐受性增强，且其中环境胁迫选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种。

14.产生含有编码多肽核酸的转基因植物的方法，包括

a.使用权利要求13的表达载体转化植物细胞；和

b.从该植物细胞产生表达所述多肽的转基因植物；

其中该多肽如SEQ ID NO：2所定义。

15.产生含有编码多肽核酸的转基因植物的方法，其中所述多肽在植物中的表达使该植物相对于该植物的野生型品种对环境胁迫的耐受性增强，包括，

a.使用权利要求13的表达载体转化植物细胞；和

b.从该植物细胞产生表达多肽的转基因植物；

其中所述核酸在严格条件下与SEQ ID NO：1序列及SEQ ID NO：1序列的全长互补序列中的至少一个序列杂交；其中严格条件包括于65℃在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)溶液中杂交；且其中环境胁迫选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种。

16.产生含有编码多肽核酸的转基因植物的方法，其中所述多肽在植物中的表达使该植物相对于该植物的野生型品种对环境胁迫的耐受性增强，包括，

a.使用权利要求13的表达载体转化植物细胞；和

b.从该植物细胞产生表达多肽的转基因植物；

其中所述多肽与SEQ ID NO：2定义的多肽之间具有至少80％的序列同一性，且其中环境胁迫选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种。

17.用编码多肽的核酸转化的转基因植物细胞，所述多肽与SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQID NO：20定义多肽的中央蛋白激酶结构域具有至少50％的序列同一性，其中多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种环境胁迫的耐受性增加。

18.权利要求17的转基因植物细胞，其中所述核酸编码的多肽所具有的中央蛋白激酶结构域包含：

a.第一区，从位置1的甘氨酸残基开始，且在其位置3为甘氨酸而在位置5为苯丙氨酸残基；

b.位于第一区下游的第二区，从位置1的缬氨酸残基开始，且在位置4为赖氨酸，位置6谷氨酸残基、位置14谷氨酰胺残基，位置15亮氨酸残基，位置18谷氨酸残基，位置22酪氨酸残基，位置32脯氨酸残基，位置38甘氨酸残基，位置44天冬酰胺残基，位置50和51为亮氨酸残基，位置52甘氨酸残基，位置53脯氨酸残基，位置55亮氨酸残基，位置58亮氨酸残基，位置59苯丙氨酸残基，位置62半胱氨酸残基，位置66苯丙氨酸残基，位置69赖氨酸残基，位置70苏氨酸残基，位置77谷氨酰胺残基，位置79异亮氨酸残基，位置86组氨酸残基，位置93精氨酸残基，位置94天冬氨酸残基，位置96赖氨酸残基，位置97脯氨酸残基，位置99天冬酰胺残基，位置100苯丙氨酸残基，以及位置101为亮氨酸残基；

c.位于第二区下游的第三区，从位置1的天冬氨酸残基开始，且其位置5为丙氨酸残基，位置6赖氨酸残基，位置8酪氨酸残基，位置10天冬氨酸残基，位置13苏氨酸残基，位置16组氨酸残基，位置17异亮氨酸残基，位置18脯氨酸残基，位置19酪氨酸残基，位置20精氨酸残基，位置23赖氨酸残基，位置27甘氨酸残基，位置28苏氨酸残基，位置29丙氨酸残基，位置30精氨酸残基，位置31酪氨酸残基，位置33丝氨酸残基，位置35天冬酰胺残基，位置37组氨酸残基，位置39甘氨酸残基，位置41谷氨酸残基，位置43丝氨酸残基，位置44精氨酸残基，位置45精氨酸残基，位置46天冬氨酸残基，位置47天冬氨酸残基，位置49谷氨酸残基，位置52甘氨酸残基，位置57酪氨酸残基，位置58苯丙氨酸残基，位置63亮氨酸残基，位置64脯氨酸残基，位置65色氨酸残基，位置66谷氨酰胺残基，位置67甘氨酸残基，以及

d.位于第三区下游的第四区，从位置1的脯氨酸残基开始，且其位置12为精氨酸残基，位置14亮氨酸残基，位置16苯丙氨酸残基，位置20脯氨酸残基，位置21天冬氨酸残基，位置22酪氨酸残基，位置41天冬氨酸残基，位置45天冬氨酸残基，以及位置46色氨酸残基。

19.含有权利要求17的转基因植物细胞的转基因植物。

20.含有权利要求18的转基因植物细胞的转基因植物。

21.含有权利要求17的转基因植物细胞的种子。

22.含有权利要求18的转基因植物细胞的种子。

23.由含有权利要求17的植物细胞的转基因植物产生的种子，其中所述种子含有编码多肽的核酸，其中所述种子为相对于该植物细胞野生型品种对环境胁迫的耐受性增强的真实遗传，且其中环境胁迫选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种。

24.由含有权利要求18的植物细胞的转基因植物产生的种子，其中所述种子含有编码多肽的核酸，其中所述种子为相对于该植物细胞野生型品种对环境胁迫的耐受性增强的真实遗传，且其中环境胁迫选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种。

25.分离的编码多肽的核酸，所述多肽与SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20所定义多肽的中央蛋白激酶结构域具有至少80％的序列同一性，其中多肽在植物细胞中的表达使该植物细胞相对于该植物细胞野生型品种对选自干旱和温度低于或等于0℃中的一种或多种环境胁迫的耐受性增加。

26.权利要求25的分离的核酸，其中所述核酸编码的多肽具有的中央蛋白激酶结构域包含：

a.第一区，从位置1的甘氨酸残基开始，且在其位置3为甘氨酸而在位置5为苯丙氨酸残基；

b.位于第一区下游的第二区，从位置1的缬氨酸残基开始，且其位置4为赖氨酸，位置6谷氨酸残基、位置14谷氨酰胺残基，位置15亮氨酸残基，位置18谷氨酸残基，位置22酪氨酸残基，位置32脯氨酸残基，位置38甘氨酸残基，位置44天冬酰胺残基，位置50和51为亮氨酸残基，位置52甘氨酸残基，位置53脯氨酸残基，位置55亮氨酸残基，位置58亮氨酸残基，位置59苯丙氨酸残基，位置62半胱氨酸残基，位置66苯丙氨酸残基，位置69赖氨酸残基，位置70苏氨酸残基，位置77谷氨酰胺残基，位置79异亮氨酸残基，位置86组氨酸残基，位置93精氨酸残基，位置94天冬氨酸残基，位置96赖氨酸残基，位置97脯氨酸残基，位置99天冬酰胺残基，位置100苯丙氨酸残基，以及位置101为亮氨酸残基；

c.位于第二区下游的第三区，从位置1的天冬氨酸残基开始，且其位置5为丙氨酸残基，位置6赖氨酸残基，位置8酪氨酸残基，位置10天冬氨酸残基，位置13苏氨酸残基，位置16组氨酸残基，位置17异亮氨酸残基，位置18脯氨酸残基，位置19酪氨酸残基，位置20精氨酸残基，位置23赖氨酸残基，位置27甘氨酸残基，位置28苏氨酸残基，位置29丙氨酸残基，位置30精氨酸残基，位置31酪氨酸残基，位置33丝氨酸残基，位置35天冬酰胺残基，位置37组氨酸残基，位置39甘氨酸残基，位置41谷氨酸残基，位置43丝氨酸残基，位置44精氨酸残基，位置45精氨酸残基，位置46天冬氨酸残基，位置47天冬氨酸残基，位置49谷氨酸残基，位置52甘氨酸残基，位置57酪氨酸残基，位置58苯丙氨酸残基，位置63亮氨酸残基，位置64脯氨酸残基，位置65色氨酸残基，位置66谷氨酰胺残基，位置67甘氨酸残基，以及

d.位于第三区下游的第四区，从位置1的脯氨酸残基开始，且其位置12为精氨酸残基，位置14亮氨酸残基，位置16苯丙氨酸残基，位置20脯氨酸残基，位置21天冬氨酸残基，位置22酪氨酸残基，位置41天冬氨酸残基，位置45天冬氨酸残基，以及位置46色氨酸残基。

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