CN101223277A - 在超表达hsrp基因的植物中的产量增加 - Google Patents

Abstract

由Hookless样胁迫相关多肽(HSRP)的编码核酸转化的转基因作物，其中作物中该核酸序列的表达导致相对于该植物野生型品种植物根生长增加、和/或产量增加、和/或对环境胁迫的耐受性增强。本发明还提供了由该转基因作物产生的包括种子在内的农产品。本发明还提供了分离的新HSRP、分离的新HSRP编码核酸，以及含有后者的载体和转基因植物。

Description

在超表达HSRP基因的植物中的产量增加

相关申请的相互引用

本申请要求于2005年7月15日递交的美国临时专利申请系列号60/699,729的优先权，所述申请的完整内容在此处引用作为参考。

发明背景

技术领域

本发明主要涉及编码根发育相关多肽的核酸序列，其在非生物胁迫或非胁迫条件下有助于植物生长并最终影响植物产品(即产量)。具体而言，本发明涉及编码赋予植物根生长增加、产量增加、和/或干旱、冷和/或盐耐受性增强的多肽的核酸序列，以及该分离核酸的应用。

背景技术

作物的产量对于人类的康宁很重要，并且直接受到物理环境下植物生长的影响。非生物环境胁迫如干旱胁迫、盐胁迫、热胁迫和冷胁迫，是植物生长和生产力的主要限制因素。由这些胁迫所导致的主要作物如大豆、稻、玉蜀黍(玉米)、棉花和小麦的作物损失和作物产量损失具有重要的经济和政治意义，并造成了许多不发达国家的食物短缺。

植物生物量是饲料作物的全部产量，所述饲料作物如苜蓿、青贮饲料玉米和干草。已将很多产量的代表用于谷类作物。其中主要的产量代表是植物大小的估量。根据物种和发育阶段可通过许多方式测量植物大小，还包括全部植物干重、地上干重、地上鲜重、叶面积、茎体积、株高、丛生根(rosette)直径、叶长、根长、根质量、分蘖数和叶数。很多物种在给定的发育阶段中，植物不同部分的大小之间存在恒定的比例。将这些迅速发展的联系用于从这些大小的测量之一推断出另一大小。早期发育阶段的植物大小一般与此后发育的植物大小有关。具有较大叶面积的较大植物与较小植物相比一般吸收更多的光和二氧化碳，因此很可能在同一时间段内获得更多的重量。这是除了植物获得较大尺寸早期必须的微环境或基因优势之外的潜在延续。植物大小和生长率存在强遗传成分，因此就各种基因型范围而言，处于一种环境条件下的植物大小很可能与处于另一种环境条件下的大小相关。这样，将标准环境作为本领域中作物在不同地点和时间遇到的多样动态环境的代表。

收获指数，即种子产量与地上干重的比例，在许多环境条件下相对稳定，因此经常可以获得植物大小与和谷类产量之间的确定关系。这些过程本质上相关，因为大部分谷类生物量取决于由植物叶和茎现有或储存的光合作用生产力。因此，即使在发育早期阶段，已经可将选择植物大小作为未来潜力的指示物。当检验遗传差异对于胁迫耐受性的影响时，标准化土壤特性、温度、可用水和养分，和光强度的能力是温室或植物生长室环境与野外相比的内在优势。然而，对于产量的人工限制是因为由于缺少风或昆虫导致的授粉不足，或对成熟根或株冠生长来说不足的空间，所述人工限制局制了这些受控环境用于检测产量差别的应用。因此，发育早期在生长室或温室的标准化条件下测量植物大小，是提供潜在遗传产量优势指标的标准操作规程。

植物在其生命周期中常暴露于环境水含量减少的条件下。大部分植物已进化出在这些干燥条件下保护自身的策略。然而，如果干旱条件的强度太大、持续时间太长的话，其对大多数作物的发育、生长、植物大小和产量的影响是极大的。持续暴露于干旱情况引起植物代谢的较大改变，这最终导致细胞死亡并因此引起产量损失。

因此开发胁迫耐受植物是可能解决或调解至少部分这些问题的策略。然而，开发对这些类型的胁迫表现出抗性和/或耐受性的植物新品系的传统植物育种策略相对缓慢，并需要特定抗性品系与所需品系杂交。用于胁迫耐受性的有限种质资源和关系较远的植物物种间杂交的不相容性是常规育种中遇到的重要问题。另外，在干旱-、冷-、和/或盐-耐受性模式植物中引起干旱、冷和盐耐受性细胞过程在本质上是复杂的而且涉及细胞适应的多重机制和大量代谢途径。胁迫耐受性的多成分特性不仅使得耐受性育种很大程度上不成功，而且还限制了使用生物技术方法遗传改造胁迫受性植物的能力。

因此，有鉴定这些导致生长增加和/或胁迫耐受性增强的多成分过程所涉及的基因和蛋白质的必要。阐明胁迫耐受性植物中表达的基因的功能不仅能促进我们了解植物对环境胁迫的适应性和耐受性，而且也能为设计改进作物的新策略提供重要信息。

根是高等植物的重要器官。植物根部系统对在所有陆生植物物种的适当生长发育都很重要。除了吸收水和养分并提供物理支持以外，根还介导络合物与土壤微生物以及其他植物之间的令人难以理解的沟通交换。在农艺学系统中，土壤中水和养分的有效性影响产量：根生长对地面器官的生长和产量有直接或间接影响，尤其在养分有限的条件下。根也与次级植物产物的产量相关，所述次级植物产物如防御化合物和植物激素。建立合适的根构型是植物有效利用环境中可用的水和养分，并使植物生长和产量最大化的重要因素。另外，在干旱条件下，根能适应继续生长，同时产生并向枝条发送预警信号来抑制植物在地上生长。

此外，改进作物的根生长也将增强其与杂草类植物的竞争力，并将通过增加对水的获得和吸收来改善其在干旱地区的生长。改进根生长也与生态学目的有关，例如生物除污和防止/阻碍土壤腐蚀。较长的根不仅可以减少土壤缺水的影响，而且可以改善植物固着和站立，从而减少倒伏。另外，较长根有覆盖较大量土壤和改善养分吸收的能力。因此，改变根生物量，尤其是增加根长，将改善植物生长以及增加作物产量。

根也是很多重要的主要作物的存储器官，所述作物例如甜菜、马铃薯、木薯、薯蓣和白薯。根也是很多蔬菜(例如：胡萝卜、萝卜)、草(例如：姜、菊麻(kukuma))和药用植物(例如：人参)的用于消费的相关器官。另外，根中发现的一些次级植物产物对化学和制药工业具有经济重要性，例如在薯蓣中发现用于类固醇激素合成的基本分子，以及紫草(Lithospermum erythrorhizon)的根产生紫草素，其由于抗炎、抗肿瘤和创伤-愈合特性而被广泛使用。

根构型是基本上传统育种未探索的领域，因为在该领域中很难评估其性状。因此，生物工程学可能对改进此性状具有重要影响。

根系结构源于遗传倾向性和自然环境的共同作用。从模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)和几种对其根部生长发育已有所了解的作物物种中分离出几个根突变体。

在黑暗中生长的幼苗在土壤萌发(soil emergenc)过程中下胚轴形成顶钩结构，该结构起保护子叶和脆弱的顶端原始分生组织(meristematicprimordial of the apex)的作用。动力学分析揭示钩的形成是由下胚轴中分化的细胞延伸导致，并且这种分化生长由植物生长激素和乙烯的相互作用组织。

hookless1(hls1)突变体分离自拟南芥，且在下胚轴中表现出缺乏分化细胞生长，因此没有顶钩(Vered和Ecker，1999，Development126：3661-3668)。除了缺乏顶钩，hls1突变体还表现出子叶和叶柄中增加的细胞伸长，以及下胚轴和根中减少的伸长。另外，成年hls植物表现出降低的顶端优势和减少的初生花序长度。

hls1的分子克隆揭示AtHLS1是之前在植物中未描述的N-乙酰转移酶家族的部分(Lehman等人，1996，Cell 85：183-194)。AtHLS1 mRNA增加对乙烯的响应，并且是钩形成所需要的。原位杂交显示顶钩和根组织中AtHLS1转录的均匀分布。另外，Du等人，Plant Cell Physiol.42：374-378(2001)报道来自豌豆的拟南芥AtHLS1的同源物，其被命名为Ps-HLS1和Ps-HLS2，并以登录号AF277895和AF277896保藏。

虽然已经表征了植物中涉及胁迫反应的一些基因，但是赋予胁迫耐受性的植物基因的表征和克隆基本上尚不全面和完整。例如，某些研究表明在一些植物中干旱和盐胁迫可能是由于基因相加效应，与其形成对比的是其他研究指出植物营养组织中特定基因在渗透胁迫条件下受到转录激活。虽然通常假定胁迫-诱导蛋白质在耐受性中起作用，但是仍然缺乏直接证据，并且很多胁迫-应答基因的功能还是未知的。

因此需要鉴定在胁迫耐受性植物中表达的其他基因，所述其他基因具有使其宿主植物和其他植物物种生长增加，和/或胁迫耐受性增强的能力。新产生的胁迫耐受性植物具有许多优势，例如可通过例如减少植物物种的需水量来增加作物的种植范围。

发明概述

本发明涉及分离的核酸，其编码与该植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下能调节根生长，和/或植物生长，和/或产量，和/或胁迫耐受性的多肽。具体而言，本发明涉及分离的核酸的应用，所述核酸编码Hookless样蛋白胁迫相关多肽(HSRP)，所述Hookless样蛋白胁迫相关多肽(HSRP)对调节植物根生长、产量和/或对环境胁迫的应答很重要。更具体而言，作物中这些HSRP编码核酸的超表达导致在正常或胁迫条件下根生长增加和/或产量增加，和/或对环境胁迫的耐受性增强。

因此，在第一个实施方案中，本发明涉及用分离的核酸转化的转基因作物，其中所述核酸包含选自下列的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示的序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸具有至少70％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽具有至少70％序列同一性；以及

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸。

优选地，转基因作物表达此类分离的核酸，使得与非转化的野生型植物相比，优选改变植物的表型。具体而言，转基因作物与该植物的野生型品种相比，在正常或胁迫条件下显示出对调节的根生长(优选增加根生长)、和/或植物生长、和/或产量、和/或胁迫耐受性。HSRP优选来自拟南芥、油菜或稻。

在另一实施方案中，本发明涉及转基因作物，其超表达HSRP编码核酸并与植物野生型品种相比，在正常或胁迫条件下表现出根生长增加，更优选表现出根长增加。在一个实施方案中，在植物中HSRP编码核酸的超表达表明与植物野生型品种相比，对环境胁迫的耐受性增强。在另一实施方案中，在植物中HSRP编码核酸的超表达表明与植物野生型品种相比产量增加。前提是环境胁迫可为盐度、干旱、温度、金属、化学物质、病原体和氧化胁迫，或其组合。优选环境胁迫为干旱胁迫。

在另一实施方案中，本发明涉及用HSRP编码核酸转化的转基因作物产生的种子，其中所述植物其与该植物野生型品种相比，根生长增加，和/或产量增加、和/或对环境胁迫的耐受性增强真实遗传。

在另一个的实施方案中，本发明涉及在农业区中种植作物的方法，其中所述方法包括获得上述转基因作物和在农业区种植该植物。

在另一方面中，本发明涉及由或从转基因植物、其植物部分或其种子产生的产物，例如食物、饲料、食品添加剂、饲料添加剂、化妆品或药物。

在另一实施方案中，本发明涉及与该植物野生型品种相比，在正常或胁迫条件下增加作物植物根生长和/或产量，和/或增强其对环境胁迫的胁迫耐受性的方法，其中该方法包括获得上述转基因作物，并在分离核酸表达的条件下生长植物。

在另一实施方案中，本发明涉及产生上述转基因作物的方法，其中该方法包含(a)用包含HSRP编码核酸的表达载体转化植物细胞，以及(b)自植物细胞产生表达所编码多肽的转基因作物。多核苷酸优选与一个或多个调节序列有效连接，并且多核苷酸在植物中的表达导致与该植物野生型品种相比，在正常或胁迫条件下增加根生长，和/或增加产量，和/或增强对环境胁迫的耐受性。一个或多个调节序列优选包含启动子。更优选地，该启动子为组织特异性或发育调节性启动子。

在另一实施方案中，本发明涉及一种分离的新HSRP编码核酸，其中该核酸包含选自下列的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：24所示序列的多肽具有至少91％的序列同一性；

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸；以及

f)与以上a)到d)的任意多核苷酸互补的多核苷酸。

在另一实施方案中，本发明涉及用这类分离的核酸转化的转基因植物，以及这类转基因植物产生的种子。优选转基因植物表达这类分离的核酸，以便与非转化的野生型品种相比，优选改变植物的表型。具体而言，与该植物的野生型品种相比，在正常或胁迫条件下转基因植物将显示改变的(优选增加的)根生长，和/或植物生长，和/或产量，和/或胁迫耐受性。

在另一实施方案中，本发明涉及包含分离的HSRP编码核酸的重组表达载体，其中所述核酸包含选自下列的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽具有至少91％序列同一性；

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸；以及

f)与以上a)到d)的任意多核苷酸互补的多核苷酸。

多核苷酸优选与一个或多个调节序列有效连接。更优选地，一个或多个调节序列包括启动子。进一步优选地，该启动子为组织特异性或发育调节性启动子。

在另外的实施方案中，本发明涉及包含这类重组载体的转基因植物。优选HSRP编码核酸在植物中的表达导致与该植物的野生型品种相比，增加根生长，和/或增加产量，和/或增强对环境胁迫的耐受性。

在另一实施方案中，本发明涉及鉴定新HSRP的方法，其包括(a)如下所述引起对HSRP或其片段的特异性抗体应答；(b)利用该抗体筛选推定的HSRP物质，其中抗体与该物质的特异性结合表明存在可能的新的HSRP；以及(c)与已知的HSRP相比较来从结合物质中鉴定新的HSRP。可选地，可用如下所述的核酸探针杂交来鉴定新的HSRP核酸。

在另外的实施方案中，本发明也涉及改变植物的根生长和/或产量和/或胁迫耐受性的方法，其包括改变植物中HSRP编码核酸的表达。优选地，与该植物野生型品种相比，这类改变导致增加或减少根生长和/或产量和/或胁迫耐受性。优选通过增加HSRP编码核酸的表达来增加植物中的根生和/或产量和/或胁迫耐受性。

附图简述

图1显示拟南芥转化所用的长为1243bp的AtHLS1基因(SEQ IDNO：1；At4g37580)的核苷酸序列。该基因的编码区为1209bp，起始密码子(即ATG)和终止密码子(即TAA)下标有下划线。

图2显示拟南芥转化所用的AtHLS1基因的预测的403个氨基酸序列(SEQ ID NO：2)。

图3显示用于转化AtHLS1基因(SEQ ID NO：1)的二元载体T-DNA的示意图。LB，左边框；pAHAS，拟南芥AHAS启动子；3′AHAS，AHAS终止信号；SP，超级启动子；AtHLS1，AtHLS1的cDNA；3′NOS，终止信号；RB，右边框。

图4A和4B显示拟南芥AtHLS1(SEQ ID NO：1)转基因植物的平板分析。4A表明所有品系均显示出根长增加的表型。与野生型对照相比，P4、P6、P7、P8、P9和P11品系显示出更明显的根长增加。4B显示AtHLS1转基因植物的基因水平分析，证实AtHLS1植物表现出根长增加的表型。根据该分析，AtHLS1转基因植物表现出根长增加21％。在4A和4B中，所附的表显示用于形成条形图的实际平均值。

图5显示AtHLS1(SEQ ID NO：1)植物根的土壤分析，其中测量了AtHLS1拟南芥品系的根长。

图6显示AtHLS1(SEQ ID NO：1)转基因植物的基因水平ANOVA分析。综合所有转基因品系的分析数据来测定总体基因特性。

图7显示AtHLS1(SEQ ID NO：1)转基因植物的丛生根干重的基因水平ANOVA分析。

图8显示表1第4列所提供的氨基酸序列之间的序列同一性百分比(Needleman-Wunsch算法，用于全序列比对，J.Mol.Biol.48(3)：443-53；矩阵：Blosum 62；空位开放罚分：10.0；空位延伸罚分：2.0)。

发明详述

参考以下对本发明优选实施方案的详细描述和本文包括的实施例，可以更容易地理解本发明。然而，在公开和描述本化合物、组合物和方法前，应当理解本发明并不仅限于特定核酸、特定多肽、特定细胞类型、特定宿主细胞、特定条件或特定方法等，因为这些显然会发生变化；其多种修饰和改变对于本领域技术人员而言显而易见。还应当理解此处所用的术语仅为描述特定实施方案而不意在限制。具体而言，命名氨基酸序列为多肽“Hookless样胁迫相关多肽(Hookless-like Stress-Related Polypeptides)”(HSRP)，并不限制那些序列的功能性。

本发明涉及HSRP和HSRP编码核酸，其对增加植物根生长和/或产量，和/或调节植物对环境胁迫的应答来说是重要的。更具体而言，这些HSRP编码核酸在作物中的超表达导致调节(增加或减少，优选增加)根生长，和/或增加产量，和/或增强对环境胁迫的耐受性。该HSRP属的代表性成员为从拟南芥分离的AtHLS1，以及从欧洲油菜(Brassica napus)分离的BnHLS1。在优选的实施方案中，该属的所有成员均为有生物学活性的N-乙酰转移酶。

因此，本发明包括含有HSRP多核苷酸和多肽序列的转基因作物以及产生这类转基因作物的方法，其中植物中HSRP多肽的表达导致增加根生长和/或产量和/或对环境胁迫的耐受性。在一个实施方案中，HSRP序列来自植物，优选来自拟南芥植物、油菜植物或稻植物。在另一实施方案中，HSRP序列为表1中概括的基因。公开的HSRP序列优选与已知的N-乙酰转移酶具有显著的同一性百分比。

表1.HSRP基因、其来源、核苷酸序列和相应的氨基酸顺序

第1列	第2列	第3列	第4列
				基因名称	生物	核苷酸SEQID NO：	氨基酸SEQID NO：
AtHLS1	拟南芥	1	2
				BPS_WIPO_PROT|US20040123343A1.152641	稻(Oryzasativa)	3	4
ABB93278	拟南芥	5	6
				NP_001031403	拟南芥	7	8
NP_179888	拟南芥	9	10
				NP_180570	拟南芥	11	12
NP_201544	拟南芥	13	14
				NP_919127	稻	15	16
XP_464325	稻	17	18
				XP_469881	稻	19	20
Q67UR2_ORYSA	稻	21	22
				BnHLS1	欧洲油菜	23	24

本发明还包括新的HSRP多核苷酸和多肽序列，以及其在增加植物根生长和/或产量和/或增强对环境胁迫的耐受性中的应用。在这个实施方案中，HSRP序列来自欧洲油菜或其同源物。在该实施方案中，HSRP多核苷酸和多肽序列优选是来自BnHLS1(SEQ ID NO：23和24)的那些。

本发明提供了由HSRP编码核酸转化的转基因植物，其中该核酸序列在植物中的表达导致其与该植物野生型品种相比，增加的根生长和/或增加的产量和/或增强的对环境胁迫的耐受性。具体而言，增加的根生长是根长的增加。本文所用的术语“植物”根据上下文理解为指整株植物、植物细胞和包括种子的植物部分。词语“植物”还指任意植物，特别是种子植物，并且可包括但不限于作物。植物部分包括但不仅限于茎、根、胚珠、雄蕊、叶、胚、分生组织区、愈伤组织、配子体、孢子体、花粉、小孢子等。在一个实施方案中，转基因植物为雄性不育的。本发明还提供了由HSRP编码核酸转化的转基因植物产生的植物种子，其中种子含有HSRP编码核酸且其中该植物为与该植物野生型品种相比，根生长增加和/或产量增加和/或对环境胁迫的耐受性增强真实遗传。本发明还提供了由表达HSRP的转基因植物产生的种子，其中种子含有HSRP且其中植物为与该植物野生型品种相比，根生长增加和/或产量增加和/或对环境胁迫的耐受性增强真实遗传。本发明还提供了由表达HSRP编码核酸的转基因植物、其植物部分或其种子产生或来自它们的产品。可以利用本领域已知的多种方法获得该产品。本文所用的词语“植物”包括但不限于食物、饲料、食品添加剂、饲料添加剂、化妆品或药物。食物是被认为是用作营养物的组合物。这些还包括补充营养的组合物。具体而言，动物饲料和动物饲料添加剂被认为是食物。本发明还提供了任意转基因植物、植物部分及植物种子产生的农产品。农产品包括但不仅限于植物提取物、蛋白质、氨基酸、糖类、脂肪、油类、聚合物、维生素等。

本文所用的术语“品种”是指同一物种内共有恒定特征从而将其与该物种中的一般形式或其他可能存在的品种区分开的一组植物。在具有至少一种独特性状的同时，品种的特征还在于品种内个体间的一些差异，所述差异主要是基于连续传代子代中性状的孟德尔分离(Mendeliansegregation)。若“品种”对某一性状是“遗传纯合的”以至于达到当真实遗传品种为自花传粉时，没有观察到子代中该性状显著量的自由分离，则该“品种”被认为对于该特定性状为“真实遗传”。在本发明中，该性状由导入植物品种内的一个或多个DNA序列的转基因表达而产生。

本发明中的作物应理解为包括双子叶作物，例如来自豆科(Leguminosae)，如豌豆、苜蓿和大豆；伞形科(Umbelliferae)，尤其是胡萝卜(Daucus)属(特别为胡萝卜物种(胡萝卜))和芹属(Apium)(特别为芹菜(graveolens var.dulce)物种(芹菜))和许多其他作物；茄科(Solanaceae)，尤其是番茄属(Lycopersicon)，特别是番茄(Lycopersicon esculentum)物种(番茄)和茄(Solanum)属，特别是马铃薯(Solanum tuberosum)物种(马铃薯)和茄(Solanum melongena)(茄子)、烟草和许多其他作物；以及辣椒属(Capsicum)，特别是辣椒(Capsicum annum)物种(胡椒)和许多其他作物；豆科(Leguminosae)，特别是大豆属(Glycine)，更特别是大豆(Glycin max)物种(大豆)和许多其他作物；以及十字花科(Cruciferae)，特别是芸苔属(Brassica)，更特别是欧洲油菜物种(油菜)、芸苔(Brassica campestris)(甜菜)、Brassica oleracea cv Tastie(甘蓝)、Brassica oleracea cv Snowball Y(花椰菜)和Brassica oleracea cv Emperor(椰菜)；以及拟南芥属(Arabidopsis)，特别是拟南芥物种和许多其他作物；菊科(Compositae)，特别是莴苣属(Lactuca)，非常特别是莴苣(Lactuca sativa)物种(莴苣)和许多其他作物；以及锦葵科(Malvaceae)，特别是棉属(Gossypium)，特别是已知为棉花的物种；以及豆科(Fabaceae)，特别是落花生属(Arachis)，更特别是落花生(Arachis hypogaea)物种(花生)。

根据本发明的作物还包括单子叶作物，如和谷类，例如小麦、大麦、高粱和粟、黑麦、黑小麦、玉米、稻或燕麦和甘蔗。更优选的是树，例如苹果、梨、温柏、李子、樱桃、桃、油桃、杏、番木瓜、芒果及其他木本物种，包括松类和落叶树，例如白杨、松树、红杉、雪松、橡树等。尤其优选的是拟南芥、烟草(Nicotiana tabacum)、油菜、大豆、玉米(玉蜀黍)、小麦、亚麻子、马铃薯和万寿菊。

本发明首次描述了HSRP可用于增加作物根生长和/或产量和/或对环境胁迫的耐受性。本文所用的术语多肽是指含有至少4个由肽键相连的氨基酸的链。该链可为线性、分支的、环状或其组合。因此，本发明提供了选自拟南芥、稻、芸苔属的分离HSRP及其同源物在作物中的应用。在优选的实施方案中，HSRP选自：1)如表1第4列中所提供的任意HSRP多肽；以及2)其同源物和直系同源物。氨基酸序列的同源物和直系同源物定义如下。

本发明的HSRP优选由重组DNA技术产生。例如，将编码多肽的核酸分子克隆入表达载体(如下所述)，将该表达载体导入宿主细胞(如下所述)，并使HSRP在宿主细胞中表达。可以利用标准多肽纯化技术，经适当的纯化方案将HSRP从细胞中分离出来。对于本发明的目的，术语“重组多核苷酸”是指经遗传工程改变、重排或修饰的多核苷酸。其实例包括任意的克隆多核苷酸，以及与异源序列相连或结合的多核苷酸。术语“重组”并非指自然发生事件导致的多核苷酸改变，如自发突变。除了重组表达以外，可以利用标准肽合成技术化学合成HSRP或其肽。此外，可利用如抗-HSRP抗体从细胞(如拟南芥细胞)中分离出天然的HSRP，所述抗体可利用HSRP或其片段通过标准技术产生。

本文所用的术语“环境胁迫”，是指涉及盐度、干旱、温度、金属、化学物质、病原体和氧化胁迫或其组合的次佳条件。在优选的实施方案中，环境胁迫可选自盐度、干旱或温度或其组合中的一种或多种；更具体而言，可选自高盐度、低水含量(干旱)或低温中的一种或多种。在更优选的实施方案中，环境胁迫是干旱胁迫。对于也用于本文的术语“水利用效率”，是指植物产生的有机物量除以植物在产生时所利用的水量，即相对于植物用水的植物干重。本文所用的术语“干重”，是指在植物中除了水以外的所有东西，并且包括如糖类、蛋白质、油类和矿物质营养物。也应当理解用于本说明书及权利要求书中的“一个”或“一种”，可依据其所用语境来表示一种或多种。因此，例如“一个细胞”可表示至少可以使用一个细胞。

也用于本文的术语“核酸”和“多核苷酸”，是指线性或分支、单链或双链的RNA或DNA或其杂化物。该术语也包括RNA/DNA杂化物。这些术语也包括位于基因编码区3′和5′末端的非翻译序列：编码区5′末端上游至少约1000个核苷酸序列以及该基因编码区3′末端下游至少约200个核苷酸序列。不常见碱基如肌苷、5-甲基胞嘧啶、6-甲基腺嘌呤、次黄嘌呤等也可用于反义、dsRNA和核酶配对。例如，已经表明含有尿嘧啶和胸腺嘧啶C-5丙炔类似物的多核苷酸能以高亲和力结合RNA，是基因表达的强力反义抑制物。也可进行其他修饰，如对磷酸二酯主链或RNA核糖基团的2′-羟基进行修饰。反义多核苷酸和核酶可完全由核糖核苷酸组成，或者含有混合的核糖核苷酸及脱氧核糖核苷酸。可通过包括基因组制备、cDNA制备、体外合成、RT-PCR以及体外或体内转录的任意方法来产生本发明的多核苷酸。

“分离的”核酸分子为与该核酸天然来源中存在的其他核酸分子(即编码其他多肽的序列)基本分离的核酸分子。优选地，“分离”核酸中不含有某些在天然存在的复制子中与该核酸天然侧接的序列(即位于该核酸的5′端和3′端的序列)。例如，认为克隆的核酸是分离的。在各种实施方案中，分离的HSRP核酸分子可含有小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，其在获取该核酸的细胞(如拟南芥细胞)基因组DNA中与该核酸分子天然侧接。若核酸已由人工干涉改变，或置于并非其天然位置的基因座或位置，或若通过农杆菌感染法将其导入细胞，则也认为该核酸是分离的。此外，“分离的”核酸分子如cDNA分子，可不含有其天然相关的其他细胞物质，或通过重组技术产生时的培养基，或化学合成时的化学前体或其他化学物。

具体而言，排除在“分离的核酸”定义之外的包括：天然存在的染色体(如染色体扩散)、人工染色体文库、基因组文库和作为体外核酸制品或转染/转化宿主细胞制品形式的cDNA文库，其中宿主细胞为体外异源制品或作为单个集落的异源群被铺板。同样具体排除在外的为上述文库，其中某一特定核酸所占小于载体分子中核酸插入片段数量的5％。其他具体排除的为全细胞基因组DNA或全细胞RNA制品(包括机械剪切或酶消化的全细胞制品)。另外具体排除的是作为体外制品或由电泳分离的异源混合物所发现的全细胞制品，其中本发明核酸尚未进一步从电泳介质中与异源核酸分离(如通过从琼脂糖凝胶或尼龙印迹中通过从异源条带群中切下单个条带来进一步分离)。

利用标准分子生物学技术及本文提供的序列信息，可以分离本发明的核酸分子，如具有如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO所示的核苷酸序列的核酸分子或其部分。例如，可以利用如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的全部或一部分，将HSRP cDNA从任意作物文库中分离出来。此外，对含有如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的全部或一部分的核酸分子而言，可将其利用基于该序列设计的寡核苷酸引物、通过聚合酶链式反应分离。例如，可以从植物细胞中分离mRNA(如通过Chirgwin等人，1979，Biochemistry 18：5294-5299的硫氰酸胍提取方法)，并且可利用逆转录酶(如可获自Gibco/BRL，Bethesda，MD的MoloneyMLV逆转录酶；或可获自Seikagaku America，Inc.，St.Petersburg，FL的AMV逆转录酶)制备cDNA。可基于如表1第3列中的任意序列中所示的核苷酸序列来设计用于聚合酶链式反应扩增的合成寡核苷酸引物。以cDNA或(可选的)基因组DNA为模板，利用适当的寡核苷酸引物，根据标准PCR扩增技术扩增本发明的核酸分子。将如此扩增的核酸分子克隆入适当的载体，并以DNA序列分析表征。此外，通过标准合成技术如利用自动DNA合成仪，能制备对应HSRP核苷酸序列的寡核苷酸。

在优选的实施方案中，本发明中分离的核酸分子包含如表1第3列中所示的任意序列所列的核苷酸序列。这些cDNA可能包含编码HSRP的序列(即“编码区”)，以及5′非翻译序列和3′非翻译序列。可选地本发明中的核酸分子可以仅包含如表1第3列中所提供的任意序列的编码区，或者可以包含从基因组DNA分离出来的全基因组片段。本发明也包含编码本文所述编码HSRP的HSRP编码核酸。优选是HSRP编码核酸，其编码如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO所示的HSRP。

此外，根据本发明所述的核酸分子可含有如表1第3列中所提供的任意序列编码区的一部分，例如可用作探针或引物的片段或者编码HSRP生物活性部分的片段。从表1所提供的任意生物的HSRP基因克隆确定的核苷酸序列，可用于产生探针和引物，它们被设计用来鉴定和/或克隆其他细胞类型和生物中的HSRP同源物，以及来自作物和相关物种的HSRP同源物。编码区的部分也可编码HSRP的生物活性片段。

本文所用的术语HSRP的“生物学活性部分”旨在包含HSRP中的一部分如结构域/基序，所述部分参与调节植物中根生长和/或胁迫耐受性，更优选为干旱耐受性。为了本发明的目的，对根生长和/或胁迫耐受性的调节是指含HSRP表达盒(或表达载体)的转基因植物的根生长和/或胁迫耐受性相对于非转基因对照植物的根部生长和/或胁迫耐受性增加或减少至少10％。定量生长和/或胁迫耐受性的方法至少可见下文实施例5、6，以及17-19。在优选的实施方案中，HSRP的生物学活性部分增加了植物根部生长，优选通过增加根长。

HSRP的生物学活性部分包括含有氨基酸序列的肽，其中所述氨基酸序列来自HSRP的氨基酸序列，如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的氨基酸序列，或与HSRP相同的多肽的氨基酸序列，其包含比全长HSRP或比与HSRP相同的全长多肽少的氨基酸，并且显示至少一种HSRP活性。一般而言，生物学活性部分(如长度为如5、10、15、20、30、35、36、37、38、39、40、50、100或更多氨基酸的肽)含有具有至少一种HSRP活性的结构域或基序。此外，通过重组技术可制备其中缺失多肽其他区域的其他生物学活性部分，并评估本文描述的一种或多种活性。HSRP生物学活性部分优选包含一个或多个具有N-乙酰转移酶活性和/或增加植物中根长度的选定的结构域/基序或其部分。在一个实施方案中，选定的一个或多个HSRP结构域/基序或其部分响应于生长素和/或参与增加植物的营养生长。

本发明也提供HSRP嵌合或融合多肽。本文所用的HSRP“嵌合多肽”或“融合多肽”包含有效连接于非-HSRP的HSRP。HSRP是指具有对应于HSRP的氨基酸序列的多肽，而非-HSRP是指这样的多肽，其具有的氨基酸序列对应于基本不同于HSRP的多肽，如不同于HSRP且来自相同或不同生物的多肽。在融合多肽中，术语“有效连接”是指HSRP与非-HSRP彼此融合，从而使两个序列都能实现所用序列的预期功能。非-HSRP可融合于HSRP的N-末端或C-末端。例如，在一个实施方案中，融合多肽为GST-HSRP融合多肽，其中HSRP序列融合至GST序列的C-末端。此类融合多肽有助于重组HSRP的纯化。在另一实施方案中，融合多肽为在其N-末端含有异源信号序列的HSRP。在某些宿主细胞(如哺乳动物宿主细胞)中，通过使用异源信号序列能增加HSRP的表达和/或分泌。

优选通过标准重组DNA技术生产本发明的HSRP嵌合或融合多肽。例如，根据常规技术将编码不同多肽序列的DNA片段按阅读框连接在一起，如利用平头末端或交错末端进行连接，限制性酶消化以提供适当的末端，必要时补足粘性末端，碱性磷酸酶处理以避免不必要的结合和酶连接。在另一实施方案中，可通过常规技术包括自动DNA合成仪合成融合基因。或者利用锚定引物进行基因片段的PCR扩增，所述锚定引物能在两个连续基因片段间产生互补突出端，从而所述基因片段可随后退火并再扩增以产生嵌合基因序列(参见，例如Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel等人编辑.John Wiley和Sons：1992)。此外，市售可得多种已经编码融合部分(如GST多肽)的表达载体。可将HSRP编码核酸克隆入此类表达载体，而使融合部分按阅读框连接于HSRP。

除了本文描述的HSRP片段和融合多肽之外，本发明还包括植物中天然存在的HSRP和HSRP编码核酸的同源物和类似物。本文定义的“同源物”为分别具有相似或“相同”核苷酸或氨基酸序列的两个核酸或多肽。同源物包括下文定义的HSRP等位基因变体、直系同源物、旁系同源物、激动剂和拮抗剂。术语“同源物”还包括这样的核酸分子，其由于遗传密码简并而不同于如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO所示核苷酸序列(和其部分)，因此编码的HSRP与如表1第3列中所提供的此类SEQ ID NO所示相应核苷酸序列编码的HSRP相同。本文所用的“天然存在的”HSRP是指存在于自然界的HSRP氨基酸序列。天然存在的HSRP优选包含如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的氨基酸序列。

HSRP的激动剂可保留与HSRP基本相同的生物学活性或HSRP的生物活性的某一亚集。HSRP的拮抗剂能够抑制天然存在形式HSRP的一种或多种活性。

基于对应HSRP cDNA的天然等位基因变体和同源物、直系同源物和旁系同源物的核酸分子与本文所述的HSRP核酸的同一性，可以使用HSRP cDNA或其部分作为杂交探针，在严谨杂交条件下根据标准杂交技术分离这些核酸分子。在可选的实施方案中，可通过筛选HSRP突变体如截短突变体组合文库中HSRP激动剂或拮抗剂活性，来鉴定HSRP同源物。在一个实施方案中，通过核酸水平的组合诱变产生HSRP变体的多样性文库，该文库由多样性基因文库编码。可通过如将合成的寡核苷酸混合物酶连接入基因序列而产生HSRP变体的多样性文库，从而使潜在HSRP序列的简并组能以个体多肽形式，或以一组含有HSRP序列组的更大的融合多肽(如噬菌体展示)形式表达。有多种方法可用于从简并寡核苷酸序列中产生潜在的HSRP同源物。可在自动DNA合成仪中进行简并基因序列的化学合成，然后将合成基因连接入适当的表达载体。使用简并基因组使得在同一混合物内能提供所有编码所需潜在HSRP序列组的序列。合成简并寡核苷酸的方法为本领域公知。

此外，可将HSRP编码区片段的文库用于产生HSRP片段的多样性群体以用于筛选及随后选择HSRP同源物。在一个实施方案中，通过下列步骤来产生编码序列片段的文库：在对每个分子仅产生约一次缺口的条件下用核酶处理HSRP编码序列的双链PCR片段，变性双链DNA，变性双链DNA、复性DNA以形成双链DNA(其可包含来自不同缺刻产物的有义/反义对)，利用S1核酸酶处理从重新形成的双链体中除去单链部分，并将产生的片段文库连接入表达载体。通过这一方法可以得到编码HSRP中不同大小的N-末端、C-末端以及内部片段的表达文库。

本领域已知若干用于筛选通过点突变或截短产生的组合文库基因产物的技术，以及用于筛选cDNA文库中具有选定性质的基因产物的技术。此类技术适用于快速筛选通过组合诱变HSRP同源物产生的基因文库。使用最为广泛的可用于高通量分析来筛选大型基因文库的技术，一般包括将基因文库克隆入可复制的表达载体、利用产生的载体文库转化适当的细胞、并在一定条件下表达组合基因，在所述条件中所需活性的检测有助于分离编码其产物被检测的基因的载体。循环整体诱变(Recursive ensemblemutagenesis，REM)是一种提高文库中功能性突变体频率的技术，可与筛选试验联合使用以鉴定HSRP同源物(Arkin和Yourvan，1992，PNAS89：7811-7815；Delgrave等人，1993，Polypeptide Engineering 6(3)：327-331)。在另一实施方案中，可使用本领域公知的方法，利用基于细胞的测定来分析多样性HSRP文库。本发明进一步提供了鉴定新HSRP的方法，包括(a)引起对本文所述的HSRP或其片段的特异性抗体应答；(b)利用该抗体筛选推定的HSRP物质，其中抗体与该物质的特异性结合表明可能存在新的HSRP；以及(c)与已知的HSRP相比较来分析结合物质，以确定其新颖性。

如上所述，本发明涉及HSRP及其同源物。为了确定两个氨基酸序列之间的序列(例如：如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的序列及其突变体形式)的同一性百分比，以可供最佳比较的方式比对这些序列(例如：可向一个多肽序列中引入空位以达到与另一个多肽或核酸的最佳比对)。然后比较对应氨基酸位置上的氨基酸残基。当一个序列(如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的序列)中某一位置上所占据的氨基酸残基与另一个序列(如表1第4列中所提供的相应SEQ ID NO的突变体形式的序列)中相应位置的氨基酸残基相同，则这两个分子在该位置上是一致的。在两个核酸序列间可进行同类比较。

两序列之间的百分比序列同一性为序列共有相同位置数目的函数(即：百分比序列同一性＝相同位置数目/总位置数×100)。优选本发明所包括的分离的氨基酸同源物与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO所示整个氨基酸序列具有至少约50-60％，优选至少约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，最优选至少约96％、97％、98％、99％或更大的同一性。在另一实施方案中，本发明所包括的分离的氨基酸同源物与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO所示核酸序列所编码的整个氨基酸序列具有至少约50-60％，优选至少约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，最优选至少约96％、97％、98％、99％或更高的同一性。在另一实施方案中，本发明包括的分离的氨基酸同源物包含PFAM00583中所示的基序。

在另一优选的实施方案中，本发明的分离核酸同源物含有与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO所示的核苷酸序列或与含有其至少60个连续核苷酸的部分具有至少约40-60％，优选至少约60-70％，更优选至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％，甚至更优选至少约95％、96％、97％、98％、99％或更大同一性的核苷酸序列。核苷酸序列比较的优选长度为至少75个核苷酸，更优选至少100个核苷酸，最优选编码区的全长。更优选的是核酸同源物编码与如表1第4列中所提供的任意SEQ IDNO具有同源性的蛋白质。

另外优选本发明中分离的核酸同源物编码HSRP或其部分，它们与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的氨基酸序列具有至少80％同一性，而且作为植物中根生长和/或产量和/或环境胁迫应答的调节物起作用。在更优选的实施方案中，植物中核苷酸同源物的超表达增加植物的根生长和/或增加产量和/或增强植物对环境胁迫的耐受性。在更优选的实施方案中，核酸同源物编码起N-乙酰转移酶作用的HSRP。

为了本发明的目的，用Vector NTI 9.0(PC)软件包(Invitrogen，1600Faraday Ave.，Carlsbad，CA92008)测定两个核苷酸或多肽序列的百分比序列同一性。使用空位开放罚分15以及空位延伸罚分6.66来测定两个核酸的同一性百分比。使用空位开放罚分10以及空位延伸罚分0.1来测定两个多肽的同一性百分比。所有其他参数设置为默认设置。为了进行多重比对(Clustal W算法)，blosum62矩阵的空位开放罚分为10，空位延伸罚分为0.05。应当了解为了确定序列同一性，当比较DNA序列和RNA序列时，胸腺嘧啶核苷酸等价于尿嘧啶核苷酸。

另一个方面中，本发明涉及分离的核酸，其包含在严谨条件下与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的多核苷酸杂交的多核苷酸。更具体而言，本发明中分离的核酸分子长度为至少15个核苷酸，并在严谨条件下与含有如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的核苷酸序列的核酸分子杂交。在其他实施方案中，核酸长度至少为30、50、100、250或更多个核苷酸。优选本发明中分离的核酸同源物包含在高度严谨条件下与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO所示的核苷酸序列杂交的核苷酸序列，且作为植物中根生长和/或产量和/或胁迫耐受性的调节物起作用。在更优选的实施方案中，分离的核酸同源物超表达在植物中增加植根生长和/或产量和/或植物对环境胁迫的耐受性。在更优选的实施方案中，分离的核酸同源物编码起N-乙酰转移酶作用的HSRP。

本文所用的涉及DNA与DNA印迹杂交的术语“严谨条件”，是指在60℃下，10×Denhart溶液、6×SSC、0.5％SDS和100μg/ml变性鲑精DNA中杂交过夜。依次在3×SSC/0.1％SDS，随后在1×SSC/0.1％SDS，最后在0.1×SSC/0.1％SDS中于62℃下洗涤印迹，每次30分钟。在优选的实施方案中，短语“严谨条件”是指在6×SSC溶液、65℃下杂交。同样如本文所用的，短语“高度严谨条件”，是指在65℃下，10×Denhart溶液、6×SSC、0.5％SDS和100μg/ml变性鲑精DNA中杂交过夜。依次在3×SSC/0.1％SDS，随后在1×SSC/0.1％SDS，最后在0.1×SSC/0.1％SDS中于65℃洗涤印迹，每次30分钟。核酸杂交的方法见于Meinkoth和Wahl，1984，Anal.Biochem.138：267-284；Current Protocols in Molecular Biology，第2章，Ausubel等人编辑，Greene Publishing and Wiley-Interscience，纽约，1995；以及Tijssen，1993，Laboratory Techniques in Biochemistry andMolecular Biology：Hybridization with Nucleic Acid Probes，第I部分，第2章，Elsevier，纽约，1993。优选本发明中分离的核酸分子对应于天然存在的核酸分子，在严谨或高度严谨条件下与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的序列杂交。本文所用的“天然存在”的核酸分子，是指具有天然存在(如编码天然多肽)的核苷酸序列的RNA或DNA分子。在一个实施方案中，该核酸编码天然存在的HSRP。

利用上述方法和其他本领域技术人员已知的方法，本领域普通技术人员能分离HSRP的同源物，其包含如表1第4列中所提供的任意SEQ IDNO所示的氨基酸序列。这些同源物的一种亚型为等位基因变体。本文所用的术语“等位基因变体”是指含有导致HSRP氨基酸序列改变且存在于自然群体中(如植物物种或品种)的多态性的核苷酸序列。此类天然等位基因变体一般会造成HSRP核酸的1-5％的差异。通过在多种不同植物中测序目的核酸序列可以鉴定等位基因变体，这可以通过利用杂交探针鉴定那些植物中相同的HSRP基因座来容易地进行。任意及所有由天然等位变异造成且不改变HSRP功能活性的此类HSRP的核酸变异及产生的氨基酸多态性或变异，均包括在本发明范围内。

此外，编码来自相同或其他物种HSRP的核酸分子如HSRP类似物、直系同源物和旁系同源物，均旨在包括在本发明范围内。本文所用的术语“类似物”，是指具有相同或相似功能，但在非相关生物中独立进化而来的两种核酸。本文所用的术语“直系同源物”是指来自不同物种，但根据物种形成由共同祖先基因进化而来的两种核酸。通常直系同源物编码具有相同或相似功能的多肽。也用于本文的术语“旁系同源物”是指通过基因组内复制而相关的两种核酸。旁系同源物通常具有不同的功能，但这些功能可能相关(Tatusov，R.L.等人，1997，Science 278(5338)：631-637)。天然存在的HSRP的类似物、直系同源物和旁系同源物可由于翻译后修饰、氨基酸序列差异或两者都有，而与天然存在的HSRP有所不同。翻译后修饰包括多肽的体内和体外化学衍生作用，如乙酰化、羧化、磷酸化或糖基化，且此类修饰发生于多肽合成或加工时或用分离的修饰酶处理之后。具体而言，本发明的直系同源物一般与天然存在的HSRP氨基酸序列的全部或部分序列表现出至少为80-85％、更优选85-90％或90-95％、最优选95％、96％、97％、98％，或甚至99％或100％的序列同一性，且表现出类似于HSRP的功能。优选本发明的HSRP直系同源物作为植物生长和/或环境胁迫应答调节物起作用，和/或作为囊泡运输蛋白质(vesicle traffickingprotein)起作用。更优选HSRP直系同源物增加了植物的生长和/或胁迫耐受性。在一个实施方案中，HSRP直系同源物起N-乙酰转移酶的作用。

除了群体中可能存在的天然存在的HSRP序列变体外，技术人员还知道可通过突变将改变导入如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的核苷酸序列中，从而改变所编码HSRP的氨基酸序列而不改变HSRP的功能活性。例如，可在如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的序列中进行在“非必需”氨基酸残基处的引起氨基酸取代的核苷酸取代。“非必需”氨基酸残基为可从HSRP的野生型序列中改变却不会影响所述HSRP活性的残基，而“必需”氨基酸残基为HSRP活性所必需的。然而，其他氨基酸残基(如在具有HSRP活性的结构域中非保守或仅半保守的氨基酸残基)可能对活性并非必需，因此可能可以改变而不影响HSRP活性。

因此，本发明的另一方面涉及编码HSRP的核酸分子，所述HSRP含有对HSRP活性非必需的氨基酸残基的改变。此类HSRP在氨基酸序列上不同于如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO所包含的序列，但仍保留了至少一种本文所述的HSRP活性。在一个实施方案中，分离的核酸分子包含编码多肽的核苷酸序列，其中该多肽中包含与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的序列具有至少约50-60％同一性的氨基酸序列，更优选与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的序列具有至少约60-70％的同一性，甚至更优选与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的序列具有至少约70-75％、75-80％、80-85％、85-90％或90-95％的同一性，且最优选与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的序列具有至少约96％、97％、98％或99％的同一性。本发明优选的HSRP同源物优选参与植物中植物的根生长和/或胁迫耐受性应答，或更具体而言，起N-乙酰转移酶的作用。

通过向如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的核苷酸序列引入一个或多个核苷酸取代、添加或缺失来产生分离的核酸分子，所述核酸分子编码与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的多肽序列具有序列同一性的HSRP，从而向所编码多肽中引入一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。可通过标准技术如定点诱变和PCR介导的诱变，向如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的序列引入突变。优选在一个或多个预测的非必需氨基酸残基处进行保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”即用具有相似侧链的氨基酸残基取代原氨基酸残基。

本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳香侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选以同一侧链家族中的另一个氨基酸残基取代HSRP中预测的非必需氨基酸残基。或者在另一实施方案中，可通过如饱和诱变沿着全长或部分的HSRP编码序列随机引入突变，并且筛选所产生突变体中本文所述的HSRP活性，以鉴定保留HSRP活性的突变体。诱变如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的序列后，可重组表达所编码多肽并通过至少如实施例5、6，以及17-19所述的分析表达该多肽植物的根生长和/或产量和/或胁迫耐受性来确定该多肽的活性。

此外可产生最优化的HSRP核酸。优选最优化的HSRP核酸编码HSRP，其调节植物的根生长和/或产量和/或对环境胁迫的耐受性，更优选当其在植物中超表达时增加植物的根生长和/或增加产量和/或增强对环境胁迫的耐受性。本文所用的“最优化的”是指经遗传改造以提高其在给定植物或动物中表达的核酸。为了给植物提供最优化的HSRP核酸，可修饰该基因的DNA序列以使其1)含有高表达的植物基因所优选的密码子；2)包含与植物中充分存在的那些一样的核苷酸碱基组成中A+T的含量；3)形成植物起始序列；或4)消除导致RNA去稳定、不恰当聚腺苷化、降解和终止的序列，或那些形成二级结构发卡或RNA剪接位点的序列。利用一般植物或特定植物中密码子选择的频率分布，可实现植物中HSRP核酸表达的增加。最优化植物中核酸表达的方法可见于EPA 0359472；EPA0385962；PCT申请号WO 91/16432；美国专利号5,380,831；美国专利号5,436,391；Perlack等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.美国88：3324-3328；以及Murray等人，1989，Nucleic Acids Res.17：477-498。

此处所用的“密码子优选使用频率”，是指特定宿主细胞在使用核苷酸密码子来指定给定氨基酸时所表现出来的偏好。为了确定基因中特定密码子的使用频率，可将基因中该密码子存在的数目除以基因中指定相同氨基酸的所有密码子的存在总数。与之类似，可通过计算在宿主细胞所表达的大量基因中密码子优选使用频率的平均值，来计算出宿主细胞中显示的密码子优选使用的频率。优选该分析限于宿主细胞高度表达的基因。合成基因中密码子优选使用频率与宿主细胞所用频率的百分比偏差计算如下：首先确定单个密码子使用频率与宿主细胞使用频率间的百分比偏差，随后获取所有密码子的平均偏差。如本文所定义，该计算包括独特密码子(即：ATG和TGG)。一般而言，通过使用以下等式计算最优化基因的密码子选择与宿主细胞的整体平均偏差：1A＝n＝1ZX_n-Y_n X_n乘以100Z，其中X_n＝宿主细胞中密码子n的使用频率；Y_n＝合成基因中密码子n的使用频率；n代表指定一种氨基酸的单个密码子；密码子总数为Z。密码子使用频率的总体偏差A，对所有氨基酸而言优选小于约25％，更优选小于约10％。

因此，可以最优化HSRP核酸使其密码子使用的分布频率相对于那些高度表达的植物基因的偏差优选不大于25％，更优选不大于10％。此外，应当考虑简并的第三碱基的G+C含量百分比(单子叶植物在这个位置上似乎更偏好G+C，而双子叶植物则不)。也发现XCG(其中X为A、T、C或G)核苷酸为双子叶植物最不优选的密码子，而单子叶和双子叶植物都不使用XTA密码子。本发明的最优化HSRP核酸也优选具有与所选宿主植物(例如拟南芥、稻等)非常接近的CG和TA双联体避免指数(doubletavoidance indices)。更优选这些指数与宿主指数间的偏差不大于约10-15％。

除了编码上述HSRP的核酸分子以外，本发明的另一方面涉及与其反义的分离的核酸分子。认为反义多核苷酸能通过特异性结合于靶多核苷酸并干扰靶多核苷酸的转录、剪接、转运、翻译和/或稳定性，抑制靶多核苷酸的基因表达。现有技术已描述了将反义多核苷酸靶定于染色体DNA、初级RNA转录物或加工后mRNA的方法。优选的靶区域包括剪接位点、翻译起始密码子、翻译终止密码子以及开放阅读框内的其他序列。

为了本发明的目的，术语“反义”，是指含有多核苷酸的核酸，所述多核苷酸与全部或部分基因、初级转录物或加工后mRNA充分互补，从而足以干涉内源基因的表达。“互补”多核苷酸为那些能根据标准Watson-Crick互补法则进行碱基配对的多核苷酸。具体而言，嘌呤与嘧啶进行碱基配对以形成鸟嘌呤配对胞嘧啶(G:C)和腺嘌呤配对胸腺嘧啶(A:T)(DNA情形中)或腺嘌呤配对尿嘧啶(A:U)(RNA情形中)的组合。应当理解两个多核苷酸即使彼此不完全互补也可相互杂交，只要彼此间有至少一个区域基本互补。术语“反义核酸”包括单链RNA以及能转录产生反义RNA的双链DNA表达盒。“活性”反义核酸为能与初级转录物或编码多肽的mRNA选择性杂交的反义RNA分子，所述多肽与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的多肽具有至少80％的序列同一性。

反义核酸可与整个HSRP编码链互补，或仅与其部分互补。在一个实施方案中，反义核酸分子与编码HSRP的核苷酸序列编码链的“编码区”反义。术语“编码区”指含有能翻译为氨基酸残基的密码子的核苷酸序列区域。在另一实施方案中，反义核酸分子与编码HSRP的核苷酸序列编码链的“非编码区”反义。术语“非编码区”指与编码区侧接而不会被翻译为氨基酸的5′和3′序列(即所谓的5′和3′非翻译区)。反义核酸分子可与HSRP mRNA的整个编码区互补，但更优选为仅与HSRP mRNA的编码或非编码区部分反义的寡核苷酸。例如，反义寡核苷酸可互补于HSRP mRNA翻译起始位点周围的区域。反义寡核苷酸的长度可为如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸。一般而言，本发明的反义分子含有RNA，其与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO或编码如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的多肽的多核苷酸的至少14个连续核苷酸具有60-100％的序列同一性。优选的序列同一性为至少70％，更优选至少75％、80％、85％、90％、95％或98％，最优选99％。

利用本领域已知的方法使用化学合成和酶连接反应可构建本发明的反义核酸。例如，可利用天然存在的核苷酸或经多种修饰的核苷酸化学合成反义核酸(例如：反义寡核苷酸)，设计所述修饰核苷酸以提高分子的生物稳定性或提高反义与有义核酸之间形成的双链体的物理稳定性，例如可使用硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸。可用于产生反义核酸的经修饰核苷酸的实例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖苷辫苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤，1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基辫苷(β-D-mannosylqueosine)、5′-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫代-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、辫苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2，6-二氨基嘌呤。或者可利用表达载体生物产生反义核酸，所述表达载体中以反义方向亚克隆核酸(即由插入核酸转录的RNA将与目的靶核酸间为反义方向，见下文进一步描述)。

在另一实施方案中，本发明的反义核酸分子为α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特定的双链杂化物，其中与通常β-单位不同的是链彼此平行(Gaultier等人，1987，Nucleic Acids.Res.15：6625-6641)。反义核酸分子也可含有2′-O-甲基核糖核苷酸(Inoue等人，1987，NucleicAcids Res.15：6131-6148)或嵌合RNA-DNA类似物(Inoue等人，1987，FEBS Lett.215：327-330)。

一般向细胞施用或原位产生本发明的反义核酸分子，以使其能杂交或结合于编码HSRP的细胞mRNA和/或基因组DNA，从而通过如抑制转录和/或翻译来抑制多肽的表达。杂交可为通过常规核苷酸互补形成稳定的双链体，或如当反义核酸分子结合于DNA双链体时，通过双螺旋大沟内的特异性相互作用而形成。可以通过如将反义核酸分子连接于结合细胞表面受体或抗原的肽或抗体来修饰反义分子，从而使其可特异性结合于所选择细胞表面表达的受体或抗原。也可利用本文所述的载体将反义核酸分子递送至细胞。为达到细胞内反义分子的足够浓度，优选反义核酸分子处于原核、病毒或真核(包括植物)强启动子控制下的载体构建体中。

作为反义多核苷酸的备选，核酶、有义多核苷酸或双链RNA(dsRNA)可用于减少HSRP多肽的表达。本文所用的术语“核酶”是指基于RNA的催化酶，其具有核酶活性，能切割含有与其互补的区域的单链核酸如mRNA。核酶(例如Haselhoff和Gerlach，1988，Nature 334：585-591描述的锤头核酶)可用于催化性切割HSRP mRNA转录物，从而抑制HSRPmRNA的翻译。可基于本文所公开的HSRP cDNA的核苷酸序列(即如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO)，或基于根据本发明教导方法分离的异源性序列，设计对该HSRP编码核酸具有特异性的核酶。例如，可构建四膜虫(Tetrahymena)L-19 IVS RNA的衍生物，其中活性位点的核苷酸序列与HSRP编码mRNA中待切割的核苷酸序列互补。参见，例如：Cech等人的美国专利号4,987,071和5,116,742。或者，可利用HSRP mRNA从RNA分子集合中选择具有特异性核酶活性的催化性RNA。参见，例如：Bartel，D.和Szostak，J.W.，1993，Science 261：1411-1418。在优选实施方案中，核酶含有具有至少7、8、9、10、12、14、16、18或20个核苷酸，更优选为7或8个核苷酸的部分，其与靶RNA的部分间互补性为100％。制备核酶的方法为本领域技术人员所公知。参见，例如：美国专利号6,025,167；5,773,260和5,496,698。

本文所用的术语“dsRNA”是指包含两条RNA链的RNA杂化物。dsRNA可为线性或环状结构。在优选实施方案中，dsRNA对于多核苷酸是特异性的，所述多核苷酸编码如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的多肽或与如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的多肽具有至少80％序列同一性的多肽。杂交RNA可基本上或完全互补。“基本互补”是指当如上述用BLAST程序最佳比对两个杂交RNA时，杂交部分至少95％互补。优选dsRNA长度至少为100个碱基对。一般而言，杂交RNA的长度相同且不具有突出的5′或3′末端且没有空位。然而，本发明方法可使用具有多达100个核苷酸的5′或3′突出端的dsRNA。

dsRNA可含有核糖核苷酸、核糖核苷酸类似物如2′-O-甲基核糖基残基或其组合。参见，例如美国专利号4,130,641和4,024,222。dsRNA多核糖肌苷酸：描述于美国专利号4,283,393中的多核糖胞苷酸。生产和使用dsDNA的方法为本领域公知。一种方法包括在体内或在体外单个反应混合物中同时转录两条互补DNA链。参见，例如美国专利号5,795,715。在一个实施方案中，可直接通过标准转化方法向植物或植物细胞中导入dsRNA。或者通过转录两条互补RNA在植物细胞中表达dsRNA。

抑制内源基因表达的其他方法如三螺旋形成(Moser等人，1987，Science 238：645-650，和Cooney等人，1988，Science 241：456-459)和共抑制(Napoli等人，1990，The Plant Cell 2：279-289)为本领域所公知。部分和全长cDNA已被用于内源植物基因的共抑制。参见，例如美国专利号4,801,340、5,034,323、5,231,020和5,283,184；Van der Kroll等人，1990，The Plant Cell 2：291-299；Smith等人，1990，Mol.Gen.Genetics224：477-481和Napoli等人，1990，The Plant Cell 2：279-289。

对于有义抑制而言，相信引入有义多核苷酸会阻断相应靶基因的转录。有义多核苷酸与靶植物基因或RNA间具有至少65％的序列同一性。优选同一性百分比为至少80％、90％、95％或更多。引入的有义多核苷酸相对于靶基因或转录物并不必为全长。优选有义多核苷酸与如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的至少100个连续核苷酸具有至少65％的序列同一性。同一性区域可包含内含子和/或外显子以及非翻译区。导入的有义多核苷酸可瞬时存在于植物细胞中，或稳定整合入植物染色体或染色体外复制子中。

或者通过靶定与HSRP核苷酸序列的调节区(如HSRP启动子和/或增强子)互补的核苷酸序列形成可阻断靶细胞中HSRP基因转录的三螺旋结构，来抑制HSRP基因的表达。主要参见Helene，C.，1991，AnticancerDrug Des.6(6)：569-84；Helene，C.等人，1992，Ann.N.Y.Acad.Sci.660：27-36；以及Maher，L.J.，1992，Bioassays 14(12)：807-15。

除上述HSRP核酸和多肽外，本发明还涉及连接于部分的这些核酸和多肽。这些部分包括但不仅限于，检测部分、杂交部分、纯化部分、递送部分、反应部分、结合部分等。与部分相连的一类典型核酸为探针和引物。探针和引物一般包括基本分离的寡核苷酸。该寡核苷酸一般包含可在严谨条件下与至少约12、优选约25、更优选约40、50或75个连续核苷酸杂交的核苷酸序列区；所述连续核苷酸来自如表1第3列中所提供的任意SEQID NO所示序列的有义链；如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO所示序列的反义序列；或其天然存在的突变体。基于如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO的核苷酸序列的引物可用于PCR反应以克隆HSRP同源物。基于HSRP核苷酸序列的探针可用于检测编码相同或基本相同多肽的转录物或基因组序列。在优选实施方案中，探针还包含连接于其上的标记基团，例如标记基团可为放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。此类探针可用作基因组标记检测试剂盒的一部分，通过如测量细胞样品中HSRP编码核酸的水平，例如检测HSRP mRNA水平或确定基因组HSRP基因是否已突变或缺失，来鉴定表达HSRP的细胞。

具体而言，确定基因转录水平(可用于翻译为基因产物的mRNA量的指标)的有用方法，是进行Northern印迹(参考见如Ausubel等人，1988，Current Protocols in Molecular Biology，Wiley：纽约)。来自Northern印迹的信息至少部分表明了转化基因的转录水平。可通过均为本领域公知的若干方法从细胞、组织或器官中制备总细胞RNA，如Bormann，E.R.等人，1992，Mol.Microbiol.6：317-326所述。为评估翻译自该mRNA的多肽的存在或其相对量，可使用标准技术如Western印迹。这些技术为本领域普通技术人员公知(参见，例如Ausubel等人，1988，Current Protocols inMolecular Biology，Wiley：纽约)。

本发明还提供了分离的含有HSRP核酸的重组表达载体，其中该载体在宿主细胞中的表达导致其与该宿主细胞的野生型品种相比，根生长增加和/或产量增加和/或对环境胁迫的耐受性增强。本文所用的术语“载体”，指能够转运另一种与之相连的核酸的核酸分子。一种载体类型为“质粒”，其是指可以连入另外DNA片段的环状双链DNA环。另一种载体类型为病毒载体，其中另外的DNA片段可连接入病毒基因组。某些载体能在其导入的宿主细胞中自主复制(例如：具有细菌复制原点的细菌载体以及游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如非游离型哺乳动物载体)在导入宿主细胞时整合入宿主细胞基因组，因而随宿主基因组复制。此外，某些载体能指导与其有效连接的基因的表达。本文称这种载体为“表达载体”。一般而言，可用于重组DNA技术的表达载体通常为质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括能发挥同等作用的此类其他形式的表达载体，如病毒载体(例如复制缺陷的逆转录病毒、腺病毒和腺病毒相关病毒)。

本发明的重组表达载体中含有以适于核酸在宿主细胞中表达的形式存在的本发明的核酸，即该重组表达载体包含一个或多个基于用于表达的宿主细胞选择的、与要表达的核酸序列有效连接的调控序列。本文所用的关于重组表达载体的“有效连接”，是指目的核苷酸序列以使该核苷酸序列得以表达(例如：在体外转录/翻译体系，或在载体被导入宿主细胞时的宿主细胞中)的方式连接于调控序列。术语“调控序列”包括启动子、增强子以及其他表达调控元件(例如多聚腺苷酸化信号)。此类调控序列描述于如Goeddel，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，圣地亚哥，加州(1990)，以及Gruber和Crosby述于Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology，Glick和Thompson编辑，第7章，89-108，CRC Press：Boca Raton，佛罗里达，包括其中的参考文献。调控序列包括指导核苷酸序列在多种宿主细胞内组成型表达的序列，以及仅在某些宿主细胞或某些条件下指导核苷酸序列表达的序列。本领域技术人员应当知道表达载体的设计取决于这样的因素，如待转化宿主细胞的选择、所需多肽的表达水平等。可将本发明的表达载体导入宿主细胞，从而产生由本文所述核酸编码的多肽或肽，包括融合多肽或肽(如HSRP、HSRP的突变型、融合多肽等)。

可设计本发明的重组表达载体用于在原核或真核细胞中HSRP的表达。例如，HSRP基因可表达于细菌细胞如谷氨酸棒状杆菌(C.glutamicum)、昆虫细胞(利用杆状病毒表达载体)、酵母以及其他真菌细胞(参见Romanos，M.A.等人，1992，Foreign gene expression inyeast：a review，Yeast 8：423-488；More Gene Manipulations in Fungi，J.W.Bennet和L.L.Lasure编辑，第396-428页：Academic Press：圣地亚哥中的van den Hondel，C.A.M.J.J.等人，1991，Heterologous gene expressionin filamentous fungl；以及Applied Molecular Genetics of Fungi，Peberdy，J.F.等人编辑，第1-28页，剑桥大学出版社：剑桥中的van den Hondel，C.A.M.J.J.和Punt，P.J.，1991，Gene transfer systems and vectordevelopment for filamentous fungi)、藻类(Falciatore等人，1999，MarineBiotechnology 1(3)：239-251)、以下类型的纤毛虫：全毛亚纲(Holotrichia)、缘毛亚纲(Peritrichia)、旋毛亚纲(Spirotrichia)、吸管亚纲(Suctoria)、四膜虫属(Tetrahymena)、草履虫属(Paramecium)、豆形虫属(Colpidium)、瞬目虫属(Glaucoma)、匙口虫属(Platyophrya)、Potomacus、假康纤虫属(Pseudocohnilembus)、游仆虫属(Euplotes)、Engelmaniella以及棘尾虫属(Stylonychia)，特别是用载体按照PCT申请号WO 98/01572所述的转化方法形成的属浮萍棘尾虫(Stylonychialemnae)，以及多细胞植物细胞(参见Schmidt，R.和Willmitzer，L.，1988，High efficiency Agrobacterium tumefaciens-mediated transformationof Arabidopsis thaliana leaf and cotyledon explants，Plant Cell Rep.583-586；Plant Molecular Biology and Biotechnology，C Press，Boca Raton，佛罗里达，第6/7章，S.71-119(1993)；Transgenic Plants，第1卷，Engineering and Utilization，Kung和R.Wu编辑，128-43，AcademicPress：1993中的F.F.White，B.Jenes等人，Techniques for Gene Transfer；Potrykus，1991，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Molec.Biol.42：205-225及其中引用的参考文献)，或哺乳动物细胞。适当的宿主细胞进一步论述于Goeddel的Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press：圣地亚哥，加州(1990)中。或者可在体外转录和翻译重组表达载体，例如使用T7启动子调控序列及T7聚合酶。

最常利用载体实现多肽在原核生物中的表达，所述载体含有能指导融合或非融合多肽表达的组成型或诱导型启动子。融合载体向其中编码的多肽添加了许多氨基酸，通常加在重组多肽的氨基末端，但也可加在C-末端或融合于多肽的适当区域。此类融合载体一般行使三个任务：1)增加重组多肽的表达；2)提高重组多肽的溶解性；以及3)作为亲和纯化的配体协助重组多肽的纯化。通常在融合表达载体中，向融合部分和重组多肽的连接处引入蛋白水解切割位点，以在纯化融合多肽后使重组多肽与融合部分能够分离。此类酶及其相关识别序列包括X_a因子、凝血酶和肠激酶。

典型的融合表达载体包括分别将谷胱甘肽S转移酶(GST)、麦芽糖E结合多肽或多肽A融合于目的重组多肽的pGEX(Pharmacia BiotechInc；Smith，D.B.和Johnson，K.S.，1988，Gene 67：31-40)、pMAL(NewEngland Biolabs，Beverly，MA)和pRIT5(Pharmacia，Piscataway，NJ)。在一个实施方案中，将HSRP的编码序列克隆入pGEX表达载体以产生编码融合多肽的载体，所述融合多肽从N-末端至C-末端包含GST-凝血酶切割位点-X多肽。可以利用谷胱甘肽-琼脂糖树脂，通过亲和层析纯化该融合多肽。可以通过用凝血酶切割融合多肽来回收未与GST融合的重组HSRP。

适当的诱导型非融合大肠杆菌(E.coli)表达载体的实例包括pTrc(Amann等人，1988，Gene 69：301-315)和pET 11d(Studier等人，GeneExpression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，圣地亚哥，加利福尼亚(1990)60-89)。pTrc载体上靶基因的表达取决于由杂合trp-lac融合启动子起始的宿主RNA聚合酶转录。pET 11d载体上靶基因的表达取决于由T7gn10-lac融合启动子起始的、共表达病毒RNA聚合酶(T7gn1)介导的转录。该病毒聚合酶由宿主株BL21(DE3)或HMS174(DE3)提供，来自含有lacUV 5启动子转录调控下的T7gn1基因的定居(resident)原噬菌体。

最大化重组多肽表达的策略之一是在蛋白水解切割重组多肽能力受损的宿主细菌中表达多肽(Gottesman，S.，Gene ExpressionTechnology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，圣地亚哥，加利福尼亚(1990)119-128)。另一策略在于改变待插入到表达载体中的核酸序列从而使每一氨基酸使用的单个密码子均为所选用于表达的细菌如谷氨酸棒状杆菌中优选使用的那些(Wada等人，1992，Nucleic AcidsRes.20：2111-2118)。可以通过标准DNA合成技术，进行本发明的核酸序列的改变。

在另一实施方案中，HSRP表达载体为酵母表达载体。在酿酒酵母(S.cerevisiae)中用于表达的载体实例包括pYepSec1(Baldari等人，1987，EMBO J.6：229-234)、pMFa(Kurjan和Herskowitz，1982，Cell30：933-943)、pJRY88(Schultz等人，1987，Gene 54：113-123)以及pYES2(Invitrogen Corporation，圣地亚哥，加州)。适用于其他真菌(如丝状真菌)的用于构建载体的载体及方法，包括详述于Applied MolecularGenetics of Fungi，J.F.Peberdy等人编辑，第1-28页，剑桥大学出版社：剑桥中的van den Hondel，C.A.M.J.J.&Punt，P.J.，1991，“Gene transfersystems and vector development for filamentous fungi”中的那些。

在本发明的优选实施方案中，HSRP表达于植物和植物细胞中如单细胞植物细胞(例如藻类)(参见Falciatore等人，1999，Marine Biotechnology1(3)：239-251及其参考文献)，以及高等植物(例如种子植物如作物)的植物细胞。可通过任意方法将HSRP“导入”植物细胞中，包括转染、转化或转导、电穿孔、粒子轰击、农杆菌感染法等。本领域技术人员已知的转化方法之一是将开花植物浸入土壤杆菌(Agrobacteria)溶液中，所述土壤杆菌含有HSRP核酸，然后培育转化的配子。

转化或转染宿主细胞(包括植物细胞)的其他适当方法可见于Sambrook等人(Molecular Cloning：A Laboratory Manual.，最新版，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY，1989)及其他实验室手册如Methods in MolecularBiology，1995，第44卷，Agrobacterium protocols，Gartland和Davey编辑，Humana Press，Totowa，新泽西。由于生长增加和生物和非生物胁迫耐受性增加是期望遗传到多种植物中的一般性状，所述植物如玉米、小麦、黑麦、燕麦、黑小麦、稻、大麦、高粱、粟、甘蔗、大豆、落花生、棉花、油菜籽和油菜、木薯、胡椒、向日葵和万寿菊、茄科(solanaceous)植物如马铃薯、烟草、茄子和番茄、野蚕豆属(Vicia)物种、豌豆、苜蓿、灌木植物(咖啡、可可、茶)、柳属(Salix)物种、树(油棕、椰子树)、多年生草本植物和饲料作物，这些作物也是本发明另一实施方案中优选的基因改造靶植物。饲料作物包括但不仅限于冰草属(Wheatgrass)、虉草属(Canarygrass)、雀麦属(Bromegrass)、披碱草属(Wildrye Grass)、蓝草(Bluegrass)，鸭茅属(Orchardgrass)、苜蓿、Salfoin、百脉根(BirdsfootTrefoil)、杂种车轴草(Alsike Clover)、红车轴草(Red Clover)和草木樨(Sweet Clover)。

在本发明的一个实施方案中，由土壤杆菌介导的基因转移将HSRP转染入植物。可利用如GV3101(pMP90)(Koncz和Schell，1986，Mol.Gen.Genet.204：383-396)或LBA4404(Clontech)根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株实施土壤杆菌介导的植物转化。可通过标准的转化和再生技术实施转化(Deblaere等人，1994，Nucl.Acids.Res.13：4777-4788；Gelvin，Stanton B.和Schilperoort，Robert A，PlantMolecular Biology Manual，第2版-Dordrecht：Kluwer Academic Publ.，1995.-in Sect.，Ringbuc Zentrale Signatur：BT11-P ISBN 0-7923-2731-4；Glick，Bernard R.；Thompson，John E.，Methods in Plant MolecularBiology and Biotechnology，Boca Raton：CRC Press，1993 360 S.，ISBN0-8493-5164-2)。例如通过子叶或下胚轴转化来转化油菜籽(Moloney等人，1989，Plant Cell Report 8：238-242；De Block等人，1989，PlantPhysiol.91：694-701)。土壤杆菌和植物选择中抗生素的应用取决于用于转化的二元载体和土壤杆菌菌株。通常利用卡那霉素作为可选择的植物标记来进行油菜籽选择。利用如Mlynarova等人，1994，Plant Cell Report13：282-285所述的技术可实施土壤杆菌介导的向亚麻的基因转移。此外，可利用如欧洲专利号0424 047、美国专利号5,322,783、欧洲专利号0397687、美国专利号5,376,543，或美国专利号5,169,770所述的技术进行大豆的转化。可通过粒子轰击、聚乙二醇介导的DNA摄取，或通过碳化硅纤维技术进行玉米的转化(参见，例如：Freeling和Walbot“The maizehandbook”Springer Verlag：纽约(1993)ISBN 3-540-97826-7)。玉米转化的具体实例见于美国专利号5,990,387，而小麦转化的具体实例见于PCT申请号WO 93/07256。

根据本发明，如果所导入的HSRP掺入到非染色体自发性复制子或整合入植物染色体中，则其可稳定保留在植物细胞中。或者所导入的HSRP可存在于染色体外非复制性载体上，可瞬时表达或具有瞬时活性。

在一个实施方案中，可产生HSRP整合入染色体的同源重组微生物，制备含有至少一部分HSRP基因的载体，所述HSRP基因被导入了缺失、添加或取代，从而改变(如功能性破坏)HSRP基因。优选HSRP基因为如表1所提供的任意HSRP基因，但也可为来自相关植物或酵母，或者甚至是来源于哺乳动物或昆虫来源的同源物。在一个实施方案中，设计载体以使在同源重组后内源HSRP基因受到功能性破坏(即不再编码功能性多肽；也称为敲除载体)。或者可设计载体以使同源重组后内源HSRP基因被突变或受到其他改变，但仍然编码功能性多肽(例如：改变上游调控区域从而改变内源HSRP的表达)。为通过同源重组产生点突变，可将DNA-RNA杂化物用于已知为嵌合修复术的技术(Cole-Strauss等人，1999，Nucleic Acids Research 27(5)：1323-1330，以及Kmiec，1999，Gene TherapyAmerican Scientist 87(3)：240-247)。例如，拟南芥的同源重组方法也为本领域公知并考虑用于本文。

而在同源重组载体中，HSRP基因的改变部分通过HSRP基因的另一核酸分子侧接在其5′和3′末端，从而使载体携带的外源HSRP基因与内源HSRP基因之间能在微生物或植物中发生同源重组。加入的侧翼HSRP核酸分子具有足以与内源基因进行成功的同源重组的长度。一般而言，载体中包括数百对碱基对甚至数千碱基的侧翼DNA(5′和3′末端均有)(参见，例如Thomas，K.R.和Capecchi，M.R.，1987，Cell 51：503中同源重组载体的描述)。将载体导入微生物或植物细胞中(例如：通过聚乙二醇介导的DNA)，使用本领域已知的技术选择其中所导入的HSRP基因与内源HSRP基因同源重组的细胞。

在另一实施方案中，可产生含有能调节导入基因表达的选择系统的重组微生物。例如，将HSRP基因掺入载体并置于lac操纵子的调控之下，能使该HSRP基因仅在IPTG存在的情况下进行表达。此类调控体系为本领域所公知。

不管是位于染色体外的非复制载体中，还是位于整合到染色体的载体中，HSRP多核苷酸都优选位于植物表达盒内。植物表达盒优选含有能驱动在植物细胞中基因表达的调控序列，该序列有效连接因而每一序列均可实现其功能，例如通过多聚腺苷酸化信号来终止转录。优选多聚腺苷酸化信号为那些来自根瘤土壤杆菌t-DNA的信号，如基因3(已知为Ti-质粒pTiACH5的章鱼碱合酶)(Gielen等人，1984，EMBO J.3：835)或其功能性等同物，但所有其他在植物中具有功能活性的终止子也适用。由于植物基因表达经常不仅限于转录水平，植物表达盒中优选含有其他有效性连接的序列如翻译增强子，如含有烟草花叶病毒中5′非翻译前导序列的能增强每一RNA的多肽比率的超驱动序列，(Gallie等人，1987，Nucl.AcidsResearch 15：8693-8711)。植物表达载体的实例包括描述于下列的那些：Becker，D.，Kemper，E.，Schell，J.和Masterson，R.，1992，New plant binaryvectors with selectable markers located proximal to the left border，PlantMol.Biol.20：1195-1197；以及Bevan，M.W.，1984，Binary Agrobacteriumvectors for plant transformation，Nucl.Acid.Res.12：8711-8721；在Transgenic Plants，第1卷，Engineering and Utilization，Kung和R.Wu编辑，Academic Press，1993，S.15-38中的Vectors for Gene Transfer inHigher Plants。

植物基因表达应当有效连接于适当的启动子，其使基因以时序性、细胞特异性或组织特异性方式表达。可用于本发明表达盒的启动子包括能够起始植物细胞转录的任意启动子。此类启动子包括但不仅限于，可获自植物、植物病毒以及含有能在植物中表达的基因的细菌(如土壤杆菌属和根瘤菌属(Rhizobium))的启动子。

启动子可为组成型启动子、诱导型启动子、发育阶段优选启动子、细胞类型优选启动子、组织优选启动子或器官优选启动子。组成型启动子在大部分情况下均有活性。组成型启动子的实例包括CaMV 19S和35S启动子(Odell等人，1985，Nature 313：810-812)、sX CaMV 35S启动子(Kay等人，1987，Science 236：1299-1302)、Sep1启动子、稻肌动蛋白启动子(McElroy等人，1990，Plant Cell 2：163-171)、拟南芥(肌动蛋白启动子、泛酰(ubiquitan)启动子(Christensen等人，1989，Plant Molec.Biol.18：675-689)、pEmu(Last等人，1991，Theor.Appl.Genet.81：581-588)、玄参花叶病毒35S启动子、Smas启动子(Velten等人，1984，EMBO J3：2723-2730)、GRP1-8启动子、肉桂醇脱氢酶启动子(美国专利号5,683,439)、超级启动子(美国专利号5,955,646)、土壤杆菌T-DNA启动子(如甘露碱合酶、胭脂碱合酶和章鱼碱合酶)、核酮糖二磷酸羧化酶小亚基(ssuRUBISCO)启动子等。

诱导型启动子优选在某些环境条件下具有活性，所述环境条件如有或无某一营养素或代谢物、热或冷、光、病原体攻击、缺氧条件等。例如，芸苔属的hsp80启动子由热激诱导；PPDK启动子由光诱导；烟草、拟南芥和玉米的PR-1启动子由病原体感染诱导；而Adh1启动子由低氧和冷胁迫诱导。诱导型启动子可有助于植物基因表达(综述参见Gatz，1997，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.48：89-108)。化学诱导型启动子尤其适用于需要以时间特异性方式进行基因表达时。此类启动子的实例为水杨酸诱导型启动子(PCT申请号WO 95/19443)、四环素诱导型启动子(Gatz等人，1992，Plant J.2：397-404)以及乙醇诱导型启动子(PCT申请号WO 93/21334)。

在本发明的一个优选实施方案中，诱导型启动子为胁迫诱导型启动子。就本发明的目的而言，胁迫诱导型启动子优选在下述一种或多种胁迫下具有活性：涉及盐、干旱、温度、金属、化学物质、病原体和氧化胁迫的次佳条件。胁迫诱导型启动子包括但不仅限于，Cor78(Chak等人，2000，Planta 210：875-883；Hovath等人，1993，Plant Physiol.103：1047-1053)、Cor15a(Artus等人，1996，PNAS 93(23)：13404-09)、Rci2A(Medina等人，2001，Plant Physiol.125：1655-66；Nylander等人，2001，Plant Mol.Biol.45：341-52；Navarre和Goffeau，2000，EMBO J.19：2515-24；Capel等人，1997，Plant Physiol.115：569-76)、Rd22(Xiong等人，2001，PlantCell 13：2063-83；Abe等人，1997，Plant Cell 9：1859-68；Iwasaki等人，1995，Mol.Gen.Genet.247：391-8)、cDet6(Lang和Palve，1992，PlantMol.Biol.20：951-62)、ADH1(Hoeren等人，1998，Genetics 149：479-90)、KAT1(Nakamura等人，1995，Plant Physiol.109：371-4)、KST1(

等人，1995，EMBO 14：2409-16)、Rha1(Terryn等人，1993，Plant Cell 5：1761-9；Terryn等人，1992，FEBS Lett.299(3)：287-90)、ARSK1(Atkinson等人，1997，GenBank登录号L22302，以及PCT申请号WO 97/20057)、PtxA(Plesch等人，GenBank登录号X67427)、SbHRGP3(Ahn等人，1996，Plant Cell 8：1477-90)、GH3(Liu等人，1994，Plant Cell 6：645-57)、病原体诱导型PRP1-基因启动子(Ward等人，1993，Plant.Mol.Biol.22：361-366)、番茄热诱导型hsp80-启动子(美国专利号5187267)、马铃薯冷诱导型α-淀粉酶启动子(PCT申请号WO96/12814)，或创伤诱导型pinII-启动子(欧洲专利号375091)。其他干旱、冷和盐诱导型启动子的实例，如RD29A启动子，参见Yamaguchi-Shinozalei等人，1993，Mol.Gen.Genet.236：331-340。

发育阶段优选的启动子优选表达于发育的某些阶段。组织和器官优选启动子包括那些优选在某些组织或器官中表达的启动子，如叶、根、种子或木质部。组织优选和器官优选型启动子的实例包括但不仅限于果实优选型、胚珠优选型、雄性组织优选型、种子优选型、珠被优选型、块茎优选型、柄优选型、果皮优选型、以及叶优选型、柱头优选型、花粉优选型、花药优选型、花瓣优选型、萼片优选型、花梗优选型、长角果优选型、茎优选型、根优选型启动子等。种子优选型启动子优选在种子发育和/或萌发时表达。例如，种子优选型启动子可为胚胎优选型、胚乳优选型以及种皮优选型。参见Thompson等人，1989，BioEssays 10：108。种子优选型启动子的实例包括但不仅限于纤维素合酶(celA)、Cim1、γ-玉米醇溶蛋白、球蛋白-1、玉米19kD玉米醇溶蛋白(cZ19B1)等。

其他适当的组织优选型或器官优选型启动子包括油菜籽的油菜籽蛋白基因启动子(美国专利号5,608,152)、蚕豆(Vicia faba)的USP启动子(Baeumlein等人，1991，Mol.Gen.Genet.225(3)：459-67)、拟南芥的油质蛋白启动子(PCT申请号WO 98/45461)，菜豆(Phaseolus vulgaris)的菜豆球蛋白启动子(美国专利号5,504,200)、芸苔属的Bce4启动子(PCT申请号WO 91/13980)，或豆球蛋白B4启动子(LeB4；Baeumlein等人，1992，Plant Journal，2(2)：233-9)，以及使得在单子叶植物如玉米、大麦、小麦、黑麦、稻等中进行种子特异性表达的启动子。已知的适当启动子为大麦的lpt2或lpt1-基因启动子(PCT申请号WO 95/15389和PCT申请号WO 95/23230)，或如PCT申请号WO 99/16890所述的启动子(大麦的大麦醇溶蛋白基因、稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的醇溶谷蛋白基因、小麦的麦醇溶蛋白基因、小麦的谷蛋白基因、燕麦的谷蛋白基因、高粱的kasirin-基因和黑麦的裸麦醇溶蛋白基因的启动子)。

其他可用于本发明表达盒的启动子包括但不仅限于，主要叶绿素a/b结合蛋白启动子、组蛋白启动子、Ap3启动子、β-大豆球蛋白(β-conglysin)启动子、油菜籽蛋白启动子、大豆凝集素启动子、玉米15kD玉米醇溶蛋白启动子、22kD玉米醇溶蛋白启动子、27kD玉米醇溶蛋白启动子、g-玉米醇溶蛋白启动子、蜡质、萎缩1、萎缩2和青铜色启动子、Zm13启动子(美国专利号5,086,169)、玉米多聚半乳糖醛酸酶启动子(PG)(美国专利号5,412,085和5,545,546)和SGB6启动子(美国专利号5,470,359)，以及合成的或其他天然启动子。

利用异源来源的DNA结合结构域及应答元件(即非植物来源的DNA结合结构域)，能实现更灵活地调控植物中异源基因表达。此类异源DNA结合结构域的实例为LexA DNA结合结构域(Brent和Ptashne，1985，Cell 43：729-736)。

本发明还提供了含有以反义方向克隆入表达载体的本发明HSRPDNA分子的重组表达载体。也就是说，DNA分子以这样的方式有效连接于调控序列，所述方式使与HSRP mRNA反义的RNA分子得以表达(通过DNA分子的转录)。可选择有效连接到以反义方向克隆入的核酸分子的调控序列，其指导多种细胞类型中反义RNA分子的持续表达。例如，可选择病毒启动子和/或增强子或调控序列，其指导反义RNA的组成型、组织特异性或细胞类型特异性表达。反义表达载体的形式可为重组质粒、噬菌粒或减毒病毒，其中反义核酸在高效调控区的调控下产生。通过导入载体的细胞类型能确定调控区的活性。有关利用反义基因调节基因表达的讨论，参见Weintraub，H.等人，1986，Antisense RNA as a molecular toolfor genetic analysis，Reviews-Trends in Genetics，第1卷(1)，和Mol等人，1990，FEBS Letters 268：427-430。

本发明的另一个方面涉及导入本发明重组表达载体的宿主细胞。本文中术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”可交互使用。应当理解此类术语不仅指特定的受试细胞，也指此类细胞的子代或潜在子代。由于突变或环境影响可导致连续传代中发生某些修饰，此类子代实际上可能与亲代细胞不同，但仍然包括在本文所用术语的范围内。宿主细胞可为任意原核或真核细胞。例如HSRP可在细菌细胞如谷氨酸棒状杆菌、昆虫细胞、真菌细胞或哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵母细胞(CHO)或COS细胞)、藻类、纤毛虫、植物细胞、真菌或其他微生物如谷氨酸棒杆菌中表达。其他合适的宿主细胞为本领域技术人员所已知。

本发明的宿主细胞如培养中的原核或真核细胞，可用于产生(即表达)HSRP。因此，本发明还提供利用本发明宿主细胞产生HSRP的方法。在一个实施方案中，该方法包括在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞(其中已经导入了编码HSRP的重组表达载体，或其中已经导入了编码野生型或改变的HSRP的基因)，直至产生HSRP为止。在另一实施方案中，该方法还包括从培养基或宿主细胞中分离HSRP。

本发明的另一方面涉及分离的HSRP及其生物活性部分。“分离的”或“纯化的”多肽或其生物活性部分中不含有某些细胞物质(当用重组DNA技术产生时)，或化学前体或其他化学物(当化学合成时)。表述“基本不含有细胞物质”包括HSRP的制备，其中多肽从其中天然或重组产生该多肽的细胞的某些细胞成分中分离出来。在一个实施方案中，表述“基本不含有细胞物质”包括含有少于约30％(干重)的非-HSRP物质(本文也称为“杂质多肽”)的HSRP制备物，更优选少于约20％的非-HSRP物质，更优选少于约10％的非-HSRP物质，最优选少于约5％的非-HSRP物质。

本文所述的核酸分子、多肽、多肽同源物、融合多肽、引物、载体以及宿主细胞可用于以下一种或多种方法：鉴定如表1第2列中所提供的任意生物及相关生物；对与如表1第2列中所提供的任意生物相关的生物进行基因组作图；鉴定和定位如表1第2列中所提供的任意生物的目的序列；进化研究；确定功能必需的HSRP区域；调节HSRP活性；调节一种或多种细胞功能的代谢；调节一种或多种化合物的跨膜转运；调节胁迫抗性；以及调节HSRP核酸的表达。在这些方法的一个实施方案中，HSRP作为N-乙酰转移酶。

本发明的HSRP核酸分子具有多种用途。最重要的是本发明的核酸和氨基酸序列可用于转化植物，尤其是作物，从而诱导出对胁迫如干旱、高盐和冷的耐受性。因而本发明提供了由HSRP核酸转化的转基因植物，其中该核酸序列在植物中的表达导致其相对该植物野生型品种而言，增加根生长和/或对于环境胁迫的耐受性。该转基因植物可为单子叶或双子叶植物。本发明还提供转基因植物，其可选自如玉米、小麦、黑麦、燕麦、黑小麦、稻、大麦、高粱、粟、甘蔗、大豆、落花生、棉花、油菜籽、油菜、木薯、胡椒、向日葵、万寿菊、茄科植物、马铃薯、烟草、茄子、番茄、野蚕豆属物种、豌豆、苜蓿、咖啡、可可、茶、柳属物种、油棕、椰子树、多年生草本植物和饲料作物。

具体而言，本发明描述了利用HSRP编码核酸的表达，来改造成根生长增加和/或产量增加，和/或耐旱、耐盐和/或耐冷的植物。本文证明该策略使用来自拟南芥的AtHLS1(SEQ ID NO：1)，但其应用不仅限于该基因或这一植物，并且令人惊讶的是已发现该分离的核酸增加作物的产量和其他所需的性状。因此，本发明提供了含有HSRP的转基因作物，所述HSRP如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO定义，其中该植物具有增加的根生长和/或增加的产量和/或对选自干旱、高盐或低温或高温中一种或多种的环境胁迫的耐受性增强。在优选的实施方案中，该增加的根生长为根长的增加，优选在水限制条件下。

本发明也提供了含有HSRP编码核酸的转基因作物的产生方法，其中核酸在该植物中表达导致其相对该植物野生型品种而言，根生长增加和/或产量增加和/或对于环境胁迫的耐受性增强，所述方法包括：(a)向植物细胞中导入含有HSRP核酸的表达载体，和(b)从植物细胞中产生相对于该植物野生型品种，具有根生长增加和/或产量增加和/或对环境胁迫耐受性增强的转基因植物。植物细胞包括但不仅限于，原生质体、产生配子的细胞以及能再生为整株植物的细胞。本文所用的术语“转基因的”，指含有至少一种重组多核苷酸的全部或部分的任意植物、植物细胞、愈伤组织、植物组织或植物部分。在许多情况下，全部或部分重组多核苷酸稳定整合于染色体或稳定的染色体外元件，因此可连续传代。在优选的实施方案中，HSRP核酸编码含有如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO的多肽的蛋白质。

本发明也提供了调控植物的根生长和/或产量和/或对环境胁迫耐受性的方法，包括调节HSRP编码核酸在植物中的表达。通过分别提高或减少HSRP的表达，能增加或降低植物的根生长和/或产量和/或对环境胁迫的耐受性。优选通过提高HSRP的表达增强植物的根生长和/或产量和/或对环境胁迫的耐受性。可通过本领域技术人员已知的任意方法修饰HSRP的表达。这些提高HSRP表达的方法可用于转基因或非转基因植物中。当植物为转基因时，可用含有任意上述HSRP编码核酸的载体转化该植物，或如可用指导植物中天然HSRP表达的启动子转化该植物。本发明提供此类启动子，其可为组织优选型、发育调节型、胁迫诱导型或其组合。或者非转基因植物中可具有由天然启动子诱导的修饰的天然HSRP表达。如表1第4列中所提供的任意SEQ ID NO定义的HSRP在靶植物中的表达可以但不仅限于通过以下实例之一实现：(a)组成型启动子、(b)胁迫诱导型启动子、(c)化学物诱导型启动子，以及(d)用如锌指来源的转录因子的改造的启动子超表达(Greisman和Pabo，1997，Science 275：657)。

在优选的实施方案中，利用如Greisman和Pabo，1997，Science 275：657所述、Sangamo Biosciences，Inc.生产的锌指来源的转录因子(ZFP)调节HSRP的转录。这些ZFP既含有DNA识别结构域，也含有能导致靶核酸如HSRP核酸活化或抑制的功能性结构域。因此，能产生特异性识别上述HSRP启动子的活化型或抑制型ZFP，并用于提高或降低HSRP在植物中的表达，从而调节植物的生长和/或胁迫耐受性。本发明也包括对靶植物中如表1第3列中所提供的任意SEQ ID NO定义的HSRP编码核酸的同源物的鉴定，以及对该同源物启动子的鉴定。本发明也提供了相对于宿主细胞野生型品种而言，提高目的基因在该宿主细胞中表达的方法，其中该目的基因在应答HSRP时转录，所述方法包括：(a)用含有HSRP编码核酸的表达载体转化宿主细胞，和(b)在宿主细胞中表达HSRP，从而相对于该宿主细胞野生型品种，提高应答HSRP中转录的基因的表达。

除了将HSRP核酸序列导入转基因植物外，这些序列也可用于鉴定作为如表1第2列中所提供的任意生物的生物，或其近亲植物。它们也可用于鉴定在生物混合种群中是否存在如表1第2列中所提供的任意生物，或其近亲植物。本发明涉及一些来自如表1第2列中所提供的任意生物的基因的核酸序列；通过在严谨条件下对单一或混合种群生物的基因组DNA提取物使用探针探测，可以确定是否存在该生物，所述探针跨越单独对应于表1生物的特定基因区域的探针。

此外，本发明的核酸和多肽分子可用作基因组特定区域的标记。这不仅可用于基因组作图，也可用于由该基因组编码的多肽的功能研究。例如，为鉴定基因组中与特定生物DNA结合多肽结合的区域，可以消化该生物的基因组，并将其片段与DNA结合多肽孵育。那些结合多肽的片段还可另外用本发明的核酸分子作探针检测，优选所述核酸分子带有容易检测的标记。此类核酸分子与基因组片段的结合使该片段得以在该生物的基因组图上定位，且使用不同的酶多次实施时，可利于快速确定与多肽结合的核酸序列。此外，本发明的核酸分子可能与相关物种序列充分相同，从而使得这些核酸分子足以作为构建相关植物基因组图的标记。

本发明的HSRP核酸分子也可用于进化和多肽结构研究。很多原核和真核细胞利用其中有本发明分子参与的囊泡转运过程；通过将本发明的核酸分子序列与其他生物中那些编码类似酶的核酸分子序列进行比较，可以评价这些生物的进化相关性。与之类似，此类对比能够评价序列中哪些区域为保守的而哪些区域不是，从而有助于确定多肽中那些对该酶行使功能极为关键的区域。此类确定对于多肽改造研究很有价值，可能提示在诱变中该多肽能够耐受什么而不丧失其功能。

对本发明的HSRP核酸分子操作可能会产生与野生型HSRP具有功能性差异的HSRP。这些多肽的有效性或活性可能有所提高，在细胞中的数量可能多于正常，或有效性或活性可能降低。

存在许多机制，通过它们本发明HSRP的改变可以直接影响根生长和/或产量和/或胁迫应答和/或胁迫耐受性。例如，就表达HSRP的植物而言，HSRP可以使植物变得对乙烯响应更多，因此增加细胞的延伸，导致根长增加和植物水利用率的改善。

通过将被修饰微生物或植物在次合适的条件下生长，然后分析植物的生长特征和/或代谢，能够评价植物、谷氨酸棒状杆菌、真菌、藻类或纤毛虫中遗传修饰对根生长和/或胁迫耐受性的影响。此类分析技术为本领域技术人员所公知，包括干重、鲜重、多肽合成、糖类合成、脂质合成、蒸发蒸腾作用速率、一般植物和/或作物产量、开花、繁殖、结实、根生长、呼吸速率、光合作用速率等(Laboratory Techniques in Biochemistry andMolecular Biology，第17卷中的Applications of HPLC in Biochemistry；Rehm等人，1993 Biotechnology，第3卷第III章：Product recovery andpurification，第469-714页，VCH：Weinheim；Belter，P.A.等人，1988，Bioseparations：downstream processing for biotechnology，John Wiley和Sons；Kennedy，J.F.和Cabral，J.M.S.，1992，Recovery processes forbiological materials，John Wiley和Sons；Ulmann’s Encyclopedia ofIndustrial Chemistry，第B3卷第11章，第1-27页，VCH：Weinheim中的Shaeiwitz，J.A.和Henry，J.D.，1988，Biochemical separations；以及Dechow，F.J.，1989，Separation and purification techniques inbiotechnology，Noyes Publications)。

例如，可以利用标准方法构建含有本文所公开的核酸或其片段的酵母表达载体，并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中。然后测定产生的转基因细胞增加的生长和/或对干旱、盐和温度胁迫的耐受性的失败或改变。与之类似，可以利用标准方法，构建含有本文所公开的核酸或其片段的植物表达载体，并将其转化入合适的植物细胞如拟南芥、大豆、油菜(rape)、玉米、小麦、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)等中。然后可检测产生的转基因细胞和/或由此衍生的植物的增加的根生长和/或对旱、盐和温度胁迫的耐受性的失败或改变。

此外，本文公开的序列或其片段可用于在多种生物的基因组中产生敲除突变，所述生物如细菌、哺乳动物细胞、酵母细胞和植物细胞(Girke，T.，1998，The Plant Journal 15：39-48)。然后评价产生的敲除细胞的耐受多种胁迫条件的能力、它们对多种胁迫条件的应答以及对突变表型和/或基因型的影响。其他基因灭活的方法，见美国专利号6,004,804“非嵌合突变载体”，以及Puttaraju等人，1999，Spliceosome-mediated RNA trans-splicingas a tool for gene therapy，Nature Biotechnology 17：246-252。

前述可导致根生长和/或产量和/或胁迫耐受性增加的对于HSRP的诱变策略并无限制性；对这些策略的改变对于本领域技术人员显而易见。利用此类策略，辅以本文所公开的机制，可利用本发明的核酸和多肽分子产生表达突变的HSRP核酸和多肽分子从而改善根生长和/或胁迫耐受性的藻类、纤毛虫、植物、真菌或其他微生物如谷氨酸棒状杆菌。

本发明也提供了能与本文所述核酸编码的HSRP或其部分特异性结合的抗体。抗体可由多种已知方法制备(参见，例如：Harlow和Lane，“Antibodies；A Laboratory Manual，”Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，纽约，(1988))。简言之，可将纯化抗原注射入动物体内，其注射量和间隔均足以引发免疫应答。可直接纯化抗体，或从动物中获取脾细胞。然后可将这些细胞与永生细胞系融合并筛选抗体分泌。该抗体可用于筛选核酸克隆文库以寻找分泌抗原的细胞。然后将那些阳性克隆测序(参见，例如：Kelly等人，1992，Bio/Technology 10：163-167；Bebbington等人，1992，Bio/Technology 10：169-175)。

对多肽的表述“选择性结合”和“特异性结合”是指结合反应，其能确定异源性多肽群体和其他生物制剂中是否存在多肽。因此在指定的免疫测定条件下，结合于特定多肽的特异性抗体不会以显著量与样品中存在的其他多肽结合。此种情况下抗体的选择性结合可能需要选择对特定多肽具有特异性的抗体。多种免疫测定形式可用于选择与特定多肽选择性结合的抗体。例如，常规使用固相ELISA免疫测定以选择与多肽发生选择性免疫反应的抗体。参见Harlow和Lane，“Antibodies，A Laboratory Manual”ColdSpring Harbor Publication，纽约，(1988)中对可用于确定选择性结合的免疫测定形式和条件的描述。

在某些情况下，需要制备来自多种宿主的单克隆抗体。对制备此类单克隆抗体的技术描述可见于Stites等人编辑，“Basic and ClinicalImmunology，”(Lange Medical Publications，Los Altos，加利福尼亚，第4版)及其中引用参考文献，以及Harlow和Lane“Antibodies，ALaboratory Manual”Cold Spring Harbor Publication，纽约，1988。

本申请中全文引用了多种出版物。所有这些出版物及其中引用参考文献的公开在此处全部引用入本申请作为参考，以期更全面地描述本发明涉及的领域的状态。

也应当理解前文涉及本发明优选实施方案，并且可不背离本发明范围而对其进行多种改动。以下实施例进一步说明了本发明，这些实施例不意图以任何方式对其范围进行限制。相反，应当清楚认识到可以采用多种其他实施例、修饰及其等效物，其在阅读本文描述后对于本领域技术人员而言是显而易见的，且不背离本发明的精神和/或所附权利要求的范围。

实施例

实施例1

从植物材料分离总DNA

分离总DNA的细节涉及操作鲜重1克的植物材料。使用的材料包括下列缓冲液：CTAB缓冲液：2％(w/v)N-十六烷基-N，N，N-三甲基溴化铵(CTAB)；100mM Tris HCl pH8.0；1.4M NaCl；20mM EDTA；N-十二烷基肌氨酸缓冲液：10％(w/v)N-十二烷基肌氨酸；100mM Tris HClpH 8.0和20mM EDTA。

液氮下于研钵中研磨植物材料，得到细粉并转入2ml的Eppendorf管中。然后用一层1ml的分解缓冲液(1ml的CTAB缓冲液、100μl的N-十二烷基肌氨酸缓冲液、20μl的β-巯基乙醇和10μl的蛋白酶K溶液，10mg/ml)覆盖冷冻的植物材料，并在60℃下持续振荡温育1小时。将得到的匀浆分入2个Eppendorf管(2ml)中，并用相同体积的氯仿/异戊醇(24∶1)振荡提取两次。为了相分离，均以8000xg在室温下离心15分钟。然后使用冰冷的异丙醇将DNA在-70℃下沉淀30分钟。在4℃以10,000g沉积沉淀的DNA 30分钟，并重悬浮于180μl的TE缓冲液中(Sambrook等人，1989，Cold Spring Harbor Laboratory Press：ISBN 0-87969-309-6)。为了进一步纯化，用NaCl(终浓度1.2M)处理DNA，并用两倍体积的无水乙醇在-70℃下再次沉淀30分钟。用70％乙醇洗涤之后，干燥DNA，随后以50μl水+RNA酶(终浓度50mg/ml)溶解之。在4℃下过夜溶解DNA，然后在37℃下用RNA酶消化1小时。在4℃下储存DNA。

实施例2

克隆AtHLS1基因

按照制造商的建议利用RNA小型分离试剂盒(Qiagen试剂盒)通过从拟南芥叶制备RNA来分离AtHLS1。如下所述进行cDNA的逆转录反应和扩增。

1、在Dnase反应物(10μl)中使用2μl的RNA(0.5-2.0μg)制剂，将试管移至37℃下15分钟，加入25mM EDTA(1μl)，然后将反应加热到65℃15分钟。

a.缓冲液(10X：200mM Tris，500mM KCl，20mM MgCl₂)-1μl

b.RNA-2μl

c.Dnase(10U/μl)-1μl

d.H₂O-6μl

2、在室温反应中使用1μl的上述反应物，然后加热到65℃5分钟。

a.Dnased RNA(0.025-0.1μg，取决于起始量)-1μl

b.10mM dNTP-1μl

c.引物(10μM)-1μl

d.H₂O-达到10μl

3、在分离的试管中制备与这些试剂的反应混合物

a.SuperScript II RT缓冲液(10X)-2μl

b.25mM MgCl₂-4μl

c.DTT(0.1M)-2μl

d.Rnase Out Rnase抑制剂(40U/μl)-1μl

4、将9μl反应混合物加入变性的RNA溶液中，然后在42℃下保持2分钟。

5、加入1μl SuperScriptII RT(50U/μl)，然后在42℃下培养50分钟。

6、在70℃下终止反应15分钟。

7、任选：将1μl RNA酶H加入反应物来除去RNA。

8、如你所需要地利用1-2μl的新cDNA来进行PCR。

收获组织、分离RNA以及构建cDNA文库

在各种条件下培养作物并处理，然后在不同的发育阶段收获不同的组织。以基本方式进行植物培养和收获，以便将在至少一个或多个产生的文库中获得全部可表达基因的机率最大化。如实施例3所述从每一个收集的样品中分离mRNA，然后构建cDNA文库。在文库产生过程中不使用扩增步骤，以便将样品内的基因冗余最小化，并且保留表达信息。全部文库是由在寡聚dT柱上纯化的mRNA产生的3’。从cDNA文库转化入大肠杆菌的菌落是随机选择的，并且将其置于微量滴定板上。

cDNA插入片段的PCR扩增和点样

将微量滴定板上每个克隆的cDNA插入片段进行PCR扩增。将质粒DNA与大肠杆菌菌落分离，然后在膜上点样。在将样品点样到尼龙膜之前，纯化步骤不是必需的。

实施例3

AtHLS1的克隆

将如实施例2所述的cDNA文库用于通过RT-PCR克隆AtHLS1基因。使用下列引物：正向引物是5′-GGGGTCGACCCAAAACATGACGGTGGTTAGAGA-3′(SEQ IDNO：25)。反向引物是5′-GGGTTAATTAAGTTTTAAAATTCTCTAGGGTCT ACA-3′(SEQ IDNO：26)。用于扩增的PCR反应物包括：1xPCR缓冲液，0.2mM dNTP，100ng拟南芥DNA，25pmol反向引物，2.5u Pfu或Herculase DNA聚合酶。

根据标准条件和制造商的方案(Sambrook等人，1989，MolecularCloning：A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY，Biometra T3 Thermocycler)进行PCR。反应参数是：在94℃下3分钟1个循环；随后在94℃下30秒，在55℃下30秒以及在72℃下1.5分钟的25个循环。

然后用QIAquick Gel Extraction试剂盒(Qiagen)将扩增片段从琼脂糖凝胶中提取出，之后按照制造商的说明将其连接入TOPO pCR 2.1载体(Invitrogen)中。使用标准条件(Sambrook等人，1989，MolecularCloning：A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY)将重组载体转化入Top10细胞(Invitrogen)中。在包含100μg/ml羧苄青霉素、0.8mg X-半乳糖(5-溴-4-氯-3-吲哚-b-D-半乳糖苷)和0.8mg IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)的LB琼脂上37℃培养过夜。选择白色菌落，然后用于接种到3ml的包含100μg/ml氨苄青霉素的液体LB，并在37℃下培养过夜。按照制造商的说明利用QIAprep Spin Miniprep试剂盒(Qiagen)提取质粒DNA。按照标准分子生物学技术(Sambrook等人，1989，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，NY)进行随后的克隆和限制图的分析。

将这些克隆测序，其证实该克隆基因的同一性与拟南芥数据库中存储的序列(SEQ ID NO：1)相同。推导出的AtHLS1的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示并与已知的N-乙酰转移酶具有同源性。

然后将AtHLS1基因克隆入二元载体中，并在超级启动子下表达(图3)。超级启动子是组成性的，但是是根优选的(美国专利号5,428,147和5,217,903)。

实施例4

拟南芥植物的转化

通过浸渍渗入法(dipping infiltration method)(Bechtold等人，1993，“In planta Agrobacterium-mediated gene transfer by infiltration of adultArabidopsis thaliana plants”，C.R.Acad.Sci.Paris Life Sci.316：1194-1199)产生转基因的拟南芥(Col)植物。利用电穿孔将二元载体转化入土壤杆菌菌株C58C1pMP90。培养转化的土壤杆菌菌种，并且将该细菌重悬于浸渍渗入介质(dipping infiltration media)(¹/₂MS，5％蔗糖，0.5mg/ml MES，pH 5.7并且加入200ppm Silwet L-77(Lehle Seeds))中。通过在重悬的土壤杆菌培养物中每个浸盆5分钟来使用每种培养物转化大约5周龄的Col0拟南芥植物3盆。然后在标准的拟南芥条件(23℃天/20℃黑暗，18小时白天和65％湿度)下培养植物至结籽。利用100nM Pursuit(BASF)在MS平板上筛选T1种子。

转化植物的筛选

按照标准方案(Xiong等人，1999，Plant Molecular Biology Reporter17：159-170)将T1种子灭菌。在补充有1％蔗糖和2μg/ml苯菌灵(Sigma-Aldrich)的1/2Murashige和Skoog培养基(MS)(Sigma-Aldrich)、0.6％琼脂上选择种子。在4℃下以人工方法纯化平板上的种子四天。在气温22℃和光强度40micromols^-1m2(白光；Philips TL 65W/25荧光灯管)和16小时灯光、8小时黑暗日长度循环的人工气候室内使种子萌发。在14天之后选择转化的幼苗，并且转入补充有0.6％琼脂、1％蔗糖的¹/₂MS培养基中，然后恢复五到七天。

T2代的种子用于在土壤中和体外的植物根分析。

实施例5

转化的拟南芥植物的体外根分析

为了转化植物的体外根分析，使用12cm×12cm的方形板。就每个平板而言，使用没有选择物的52ml MS培养基(0.5X MS盐，0.5％蔗糖，0.5g/L MES缓冲液，1％Phytagar)。可在消毒的通风橱中干燥平板一小时来减少将来的冷凝。

用乙醇在小玻璃管中将种子等分试样灭菌5分钟，除去乙醇，然后可在消毒的通风橱中干燥种子一小时。利用Vacuseed Device(Lehle)在平板上将种子点样。在试验设计中，每个平板包含野生型和AtHLS1转基因植物。因此，每个品系总是与在相同平板中生长的对照相比来说明微环境的变化。在将种子点样于平板上之后，用Ventwrap包裹平板，并且在黑暗中4℃下于支架上竖直放置四天来使种子分层。将平板转移到C5Percival Growth Chamber，并在萌发后竖直放置14天。生长室条件是23℃白天/21℃黑暗和16小时白天/8小时黑暗。

为了收集数据，使用高分辨率平台式扫描仪。使用WinRhizo软件包进行根的分析。

在体外分析中，在萌发之后14天测量根作为初生根的长度。这相当于在拟南芥生态型Columbia的4到6叶发育阶段。观察到的任意区别可以表明根生长生长速率的不同，但是还可以反映最终的根生长。

还在基因水平上分析了这些试验的结果。为了做这个分析，将全部转基因品系的所有植物的根长平均，并与野生型植物的平均值相比较。转基因的存在和事件的拷贝数由实时PCR中靶向终止子编号所决定。用于分析的引物编号是：正向引物5′-TCCCCGATCGTTCAAACATT-3′(SEQ IDNO：27)和反向引物5′-CCATCTCATAAATAACGTCATGCAT-3′(SEQID NO：28)。在96孔光学平板(Applied Biosystems，4314320)上进行反应，并且同时在相同的平板上进行内源对照和目的基因的反应。制备主要的混合物用于两个引物组。将用于试验的主要混合物和96孔平板保存在冰上。计算包括52个反应，其适合于使用多道移液器的半个平板。使用Eurogentec试剂盒(目录号RTSNRT032X-1)，并且利用制造商的建议来制备反应物。使用GeneAmp 5700来进行反应和收集数据。

结果

我们的结果表明在平板中鉴定的转基因AtHLS1植物具有较长的根表型。图4A显示在每一网线的竖直平板上生长的植物的结果。大部分的AtHLS1转基因品系与野生型对照植物根相比显示较长的根表型。在品系P4、P6、P7、P8、P9和P11中更清楚地观察到该表型。

AtHLS1转基因植物的基因水平分析如图4B所示，其证实AtHLS1植物显示增加的根长表型。根据该分析，HLS1转基因拟南芥植物在根长上显示了21％的增加。

实施例6

转化的拟南芥植物的土壤根分析

为了土壤根分析，将种子在4℃下水中吸涨2天，并且不加选择地直接种植在土壤中。将Deepots(Hummert D40)用于在底部的饱和泥炭小球(Jiffy 727)，并且用水饱和的Metromix充满。在播种后，将盆用塑料包装覆盖来防止脱水。仅仅使用存在于培养基制剂中的水来培养植物，因为在这些大盆土壤中的水足够3周的生长，并且促使根的迅速生长。在12天之后将盆的塑料包装除去，并且记录形态学数据。在第17天收获植物的地上部分，在65℃下脱水2天，然后测量干重。为了研究根，将泥炭小球推到盆的顶端，除去土壤和根来作为单位。然后在盘中将土壤与根分离并且测量最大根长。

为了测定转基因植物的上述地面组织中根表型的影响，测定丛生根(rosette)的干重并且与野生型植物相比较。

结果

如上所述还在土壤中鉴定了AtHLS1系的根。结果表明当植物在土壤中生长时，转基因植物显示较长的根表型(图5和6)。通常，研究的全部AtHLS1品系在基于土壤的试验中显示增加的生长。品系2、4、5、9和11显示根长的最大增加(图5)。图6显示AtHLS1基因的综合性能的二因素方差分析(ANOVA)，表明AtHLS1转基因植物与野生型对照相比明显表现得更好。

测定丛生根的干重，并且ANOVA分析的结果示于图7。在转基因植物和野生型对照之间没有观察到明显区别。因此丛生根的生物量好象不受AtHLS1基因超表达的影响。

实施例7

AtHLS1同源物的鉴定

用于本发明的算法包括：FASTA(具有统计显著性评测的很灵敏的序列数据库搜索；Pearson，1990，Rapid and sensitive sequence comparisonwith FASTP and FASTA，Methods Enzymol.183：63-98)；BLAST(具有统计显著性评测的很灵敏的序列数据库搜索；Altschul等人，Basic localalignment search tool，Journal of Molecular Biology 215：403-10)；PREDATOR(单序列和多序列的高精度二级结构预测；Frishman和Argos，1997，75％ accuracy in protein secondary structureprediction.Proteins 27：329-335)；CLUSTALW(多序列比对；Thompson等人，1994，CLUSTAL W(通过序列加权、位点特异性空位罚分和加权矩阵选择来提高渐进的多序列对比的灵敏度)，Nucleic Acids Research22：4673-4680)；TMAP(由多个比对序列来预测跨膜结构域；Persson和Argos，1994，Prediction of transmembrane segments in proteins utilizingmultiple sequence alignments，J.Mol.Biol.237：182-192)；ALOM2(单个序列的跨膜结构域预测；Klein等人，Prediction of protein function fromsequence properties：A discriminate analysis of adatabase.Biochim.Biophys.Acta 787：221-226(1984)第2版，K.Nakai博士)；PROSEARCH(PROSITE蛋白序列模式的检测；Kolakowski等人，1992，ProSearch：fast searching of protein sequences with regularexpression patterns related to protein structure and function.Biotechniques13，919-921)；BLIMPS(对于非空位区段的数据库的相似性搜索，Wallace和Henikoff，1992)；PATMAT(序列、模式和区段查询和数据库的搜索和提取程序，CABIOS 8：249-254.Bill Alford著)。

在公众和私人数据库中找到AtHLS1基因的同源物。鉴定这些同源物来确定与AtHLS1关联的水平。将来自算法的BLAST系列的tblastn程序用于比较AtHLS1蛋白质序列与在总共六个阅读框中翻译的私人作物数据库。在每个作物文库中找到具有显著同源性的序列。序列之间在氨基酸水平上的序列同一性百分比示于图8。

实施例8

通过超表达HLS1基因来改造大豆植物

将大豆种子用70％乙醇在室温下连续摇动4分钟来表面灭菌，随后用补充有0.05％(v/v)Tween的20％(v/v)Clorox连续摇动20分钟。然后，将种子用蒸馏水漂洗4次，然后在室温下置于培养皿中的湿消毒滤纸上6到39小时。将种皮剥离，然后从胚轴处分开子叶。检查胚轴以便确定没有损坏分生组织区。将切下的胚轴集中于半开口的消毒培养皿中，然后在封闭的培养皿中风干至含水量小于20％(鲜重)直到进一步使用。

由加有适当选择试剂的LB固体培养基中的单个菌落来制备根瘤土壤杆菌培养物，随后单个菌落在液体LB培养基中生长至600nm处光密度为0.8。然后，将细菌培养物在室温下以7000转/分钟沉淀7分钟，然后在补充有100μM乙酰丁香酮的MS(Murashige和Skoog，1962)培养基中重悬。使用之前在室温下在该前诱导培养基中培养细菌培养物2小时。在室温下用前诱导的土壤杆菌悬浮培养物将含水量大约15％的大豆种子合子胚轴吸涨2小时。从吸涨培养物中移出胚，然后将其转入包含补充有2％蔗糖的固体MS培养基的培养皿中，然后在室温下黑暗培养2天。备选地，将胚置于培养皿中润湿(液体MS培养基)消毒滤纸的上部，然后如上所述在相同的条件下培养。在该阶段之后，将胚转入补充有500mg/L羧苄青霉素或300mg/L氨噻肟头孢菌素的固体或液体MS培养基来杀灭土壤农杆菌(Agrobacteria)。将液体培养基用于润湿消毒的滤纸。在25℃、150μmol m^-2sec^-1和12小时光周期下培养胚4周。一旦幼苗产生根，则将其转入灭菌的metromix土壤中。在将植物转移到土壤之前洗掉植物的体外培养基。将植物置于塑料盖下1周来促成顺应过程。然后将植物转入生长室中，其中在25℃、150μmolm^-2sec^-1光强度和12小时光周期下培养大约80天。

对转基因植物就其改进的根生长和/或胁迫耐受性进行筛选，表明转基因表达赋予了增加的根生长、胁迫耐受性和/或增加的水利用效率。

实施例9

通过超表达HLS1基因来改造油菜籽/油菜植物

本文所述的植物转化方法适用于芸苔(Brassica)及其他作物。将油菜种子用70％乙醇在室温下连续摇动4分钟来表面灭菌，随后用补充有0.05％(v/v)Tween的20％(v/v)Clorox在室温下连续摇动20分钟。然后，将种子用蒸馏水漂洗4次，然后在室温下置于培养皿中的湿消毒滤纸上18小时。然后将种皮剥离，然后将种子在半开口的消毒培养皿中风干过夜。在这期间，种子失去其大约85％的含水量。然后将种子在室温下储存于封闭的培养皿中直到进一步使用。DNA构建和胚吸涨如实施例10所述。通过PCR分析初级转基因植物样品来证实T-DNA的存在。通过Southern杂交来证实这些结果，其中在1％琼脂糖凝胶上电泳DNA，并转入带正电荷的尼龙膜(Roche Diagnostics)上。将PCR DIG Probe Synthesis试剂盒(Roche Diagnostics)用于通过PCR制备洋地黄毒苷标记的探针，并且按照该制造商的建议来应用。

将转基因植物就其改进的根生长和/或胁迫耐受性进行筛选，表明转基因表达赋予了增加的根长度、胁迫耐受性和/或增加的水利用效率。

实施例10

通过超表达HLS1基因来改造玉米植物

用Ishida等人，1996，Nature Biotech.14745-50所述的方法进行具有目的基因的玉蜀黍(Zea Mays L.)的转化。将不成熟的胚与携带“超级二元(super binary)”载体的根瘤土壤杆菌共培养，然后通过器官发生回收转基因植物。该方法提供的转化效率在2.5％到20％之间。将转基因植物就其改进的根生长和/或胁迫耐受性进行筛选，表明转基因表达赋予了增加的根长度、胁迫耐受性和/或增加的水利用效率。

实施例11

通过超表达HLS1基因来改造稻植物

通过利用原生质体或粒子轰击的直接基因转移技术来进行具有目的基因的稻的转化。原生质体介导的转化已经描述为Japonica型和Indica型(Zhang等人，Plant Cell Rep 7：379-384(1988)；Shimamoto等人，Nature 338：274-277(1989)；Datta等人，Biotechnology 8：736-740(1990))。利用粒子轰击，两个类型通常均是可转化的(Christou等人，Biotechnology9：957-962(1991))。将转基因植物就其改进的根生长和/或胁迫耐受性进行筛选，表明转基因表达赋予了增加的根长度、胁迫耐受性和/或增加的水利用效率。

实施例12

同源和异源基因的鉴定

将基因序列用于鉴定来自cDNA文库或基因组文库的同源或异源基因。使用例如cDNA文库经由核酸杂交可以分离同源基因(例如：全长的cDNA克隆)。根据目的基因的丰度，将100,000直至1,000,000个重组噬菌体置于平板中，然后转至尼龙膜上。在用碱变性之后，通过例如紫外线杂交连接将DNA固定在膜上。在高严谨条件下进行杂交。在水溶液中，在1M NaCl的离子强度和68℃的温度下进行杂交和洗涤。通过例如放射性(32P)切口转录标记(High Prime，Roche，Mannhein，德国)产生杂交探针。用放射自显影法检测信号。

可以利用低严谨杂交和洗涤条件以类似于上述方法的方式来鉴定相关但不相同的部分同源或异源基因。就含水杂交而言，离子强度通常维持在1M NaCl，而温度从68℃逐渐下降到42℃。

可以通过利用合成的放射性标记寡聚核苷酸探针来进行仅仅在特定结构域(例如10-20个氨基酸)中具有同源性(或序列同一性/相似性)的基因序列的分离。通过用T4多核苷酸激酶磷酸化两个互补寡聚核苷酸的5-引物端来制备放射性标记的寡聚核苷酸。将互补的寡聚核苷酸退火，然后连接形成多联体(concatemer)。然后用例如切口转录来放射性标记双链多联体。通常利用高寡聚核苷酸浓度在低严谨条件下进行杂交。

寡聚核苷酸杂交液：

6xSSC

0.01M磷酸钠

1mM EDTA(pH8)

0.5％SDS

100μg/ml变性的鲑精DNA

0.1％脱脂乳粉

在杂交期间，将温度逐步降低到低于估计的寡聚核苷酸T_m5-10℃或降至室温，随后进行洗涤步骤然后放射自显影。在低严谨条件下进行洗涤，例如利用4xSSC的3个洗涤步骤。更多细节如Sambrook，J.等人，1989，“Molecular Cloning：A Laboratory Manual”，Cold Spring HarborLaboratory Press或Ausubel，F.M.等人，1994，“Current Protocols inMolecular Biology”，John Wiley&Sons所述。

实施例13

通过筛选抗体的表达文库鉴定同源基因

可将c-DNA克隆用于例如在大肠杆菌中产生重组蛋白(例如：QiagenQIAexpress pQE系统)。然后将重组蛋白经由Ni-NTA亲和层析法(Qiagen)正常地亲合性纯化。然后例如通过使用兔免疫的标准技术来将重组蛋白用于产生特异性抗体。利用如Gu等人，1994，BioTechniques17：257-262所述的重组抗原饱和的Ni-NTA柱来亲合性纯化抗体。抗体可用于筛选表达cDNA文库来经由免疫学筛选(Sambrook，J.等人，1989，“Molecular Cloning：A Laboratory Manual”，Cold Spring HarborLaboratory Press或Ausubel，F.M.等人，1944，“Current Protocols inMolecular Biology”John Wiley&Sons)鉴定同源或异源基因。

实施例14

体内诱变

可以通过使质粒(或其他载体)DNA经由大肠杆菌或其他微生物(例如：芽孢杆菌属物种或酵母如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))传代来进行微生物的体内诱变，所述大肠杆菌或其他微生物削弱了维持其遗传信息完整性的能力。一般的突变菌株具有用于DNA修复系统的基因(例如：mutHLS、mutD、mutT等；作为参考，参见：Rupp，W.D.，1996，DNA repair mechanisms，in：Escherichia coli and Salmonella，第2277-2294页，ASM：华盛顿)的突变。本领域技术人员熟知这类菌株。例如在Greener，A.和Callahan，M.，1994，Strategies 7：32-34中已经说明了这类菌株的应用。优选在微生物中选择和检测之后将突变DNA分子转入植物中。按照本说明书所示例的各种实施例来产生转基因植物。

实施例15

在转基因生物中拟南芥基因功能的体外分析

在本领域已经充分建立了酶活性和动力学参数的测定方法。测定任意给定修饰酶活性的试验必须适合于野生型酶的比活性，其在本领域技术人员的能力之内。关于酶的概述以及关于结构、动力学、原理、方法、应用和用于测定许多酶活性的实例可例如在以下参考文献中发现：Dixon，M.和Webb，E.C.，1979，Enzymes.Longmans：London；Fersht，1985，EnzymeStructure and Mechanism.Freeman：纽约；Walsh，1979，EnzymaticReaction Mechanisms.Freeman：旧金山；Price，N.C.，Stevens，L.，1982，Fundamentals of Enzymology.牛津大学出版社：牛津；Boyer博士编辑，1983，The Enzymes，第3版，学术出版社：纽约；Bisswanger，H.，1994，Enzymkinetik，第2版VCH：Weinheim(ISBN 3527300325)；Bergmeyer，H.U.，Bergmeyer，J.，Graβl，M.编辑，1983-1986，Methods of EnzymaticAnalysis，第3版，第I-XII卷，Verlag Chemie：Weinheim；and Ullmann’sEncyclopedia of Industrial Chemistry，1987，第A9卷，Enzymes.VCH：Weinheim，第352-363页。

可以用一些众所周知的方法来测定蛋白质结合DNA的活性，例如：DNA条带移位试验(也称为凝胶阻滞试验)。可以利用报告基因试验(例如在Kolmar，H.等人，1995，EMBO J.14：3895-3904和本文引用的参考文献所述)来测定该类蛋白质对于其他分子表达的影响。报告基因测试系统是众所周知的，并且利用酶例如β-半乳糖苷酶、绿色荧光蛋白和一些其他酶建立了在原核细胞和真核细胞中的应用。

根据如Gennis，R.B.，1989，Pores，Channels and Transporters，inBiomembranes，Molecular Structure and Function，第85-137页、第199-234页和第270-322页，Springer：Heidelberg所述的技术进行膜转运蛋白的活性测定。

实施例16

来自转化生物的所需产物的纯化

可以通过本领域各种已知的方法来进行从植物材料、真菌、藻类、纤毛虫、谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)细胞，或用本文所述的核酸序列转化的其他细菌细胞，或上述培养物的上清液回收所需产物。如果所需的产物不是从细胞分泌的，则可以通过低速离心从培养物中收获该细胞，然后可以用标准技术(如机械力或超声处理)来裂解该细胞。可以用机械方法从其他组织或器官分离植物的器官。在匀化之后，通过离心除去细胞碎片，然后保留包含可溶性蛋白质的上清液部分用于所需化合物的进一步纯化。如果产物分泌自需要的细胞，则通过低速离心从培养物中除去该细胞，然后保留上清液部分用于进一步的纯化。

用具有适当树脂的层析处理来自任意一种纯化方法的上清液部分，其中需要的分子或者保留在层析树脂上而在样品中的许多杂质不保留，或者杂质被树脂保留而样品不保留。根据需要可使用相同的或者不同的层析树脂来重复这类层析法步骤。本领域技术人员应当善于选择适当的层析树脂和其对于特定分子纯化的最有效应用。可用过滤或超滤将纯化产品浓缩，然后在该产物稳定性最大的温度下储存。

本领域已知大量的纯化方法，并且前述纯化方法并不意味着限定。例如在下列文献中描述了这类纯化技术：Bailey，J.E.&Ollis，1986，D.F.Biochemical Engineering Fundamentals，McGraw-Hill：纽约。另外，可用本领域中的标准技术来确定分离化合物的特征和纯度。这些技术包括高效液体色谱(HPLC)、光谱法、染色法、薄层层析法、NIRS、酶催化试验或微生物试验。在下列文献中综述了这类分析方法：Patek等人，1994，Appl.Environ.Microbiol.60：133-140；Malakhova等人，1996，Biotekhnologiya 11：27-32；以及Schmidt等人，1998，Bioprocess Engineer.19：67-70；Ulmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry，1996，第A27卷，VCH：Weinheim，第89-90页、第521-540页、第540-547页、第559-566页、第575-581页和第581-587页；Michal，G.，1999，Biochemical Pathways：An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology，John Wiley和Sons；Fallon，A.等人，1987，Applications of HPLC in Biochemistry in：Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology，第17卷。

实施例17

耐盐性筛选

在MS平板上进行盐测试

将幼苗转至浸有¹/₂MS的滤纸，然后在胁迫筛选的前夜将其放置于补充有2μg/ml苯菌灵的¹/₂MS 0.6％琼脂中。为了胁迫筛选，将具有幼苗的滤纸移到培养皿中一叠浸有50mM NaCl的消毒滤纸上。在两个小时之后，将具有幼苗的滤纸移到培养皿中一叠浸有200mM NaCl的消毒滤纸上。在两个小时之后，将具有幼苗的滤纸移到培养皿中一叠浸有600mM NaCl的消毒滤纸上。在10个小时之后，将幼苗移到包含补充有2μg/ml苯菌灵的¹/₂MS0.6％琼脂的培养皿中。在5天后评价幼苗，表明转基因表达赋予耐盐性。

耐盐性的土壤试验

将待测试的植物种子灭菌(100％漂白剂，0.1％TritonX，五分钟两次然后用双蒸H₂O漂洗五次)。将种子置于非选择培养基(¹/₂MS，0.6％植物琼脂，0.5g/L MES，1％蔗糖，2μg/ml苯菌灵)上。

种子可萌发大约十天。在4-5叶期，将转基因植物栽入装满用1g/L20-20-20肥料(Peters Professional，Scotts)润湿的松散堆积土(looselypacked soil，Metromix 360，Scotts)的5.5cm直径的盆中。

植物生长(22℃，连续光照)大约七天，根据需要来浇水。当准备筛选植物时，将水从盘中除去，然后开始试验。为了开始试验，将三升100mMNaCl和1/8MS加入盆下的盘中。将三升1/8MS加入包含对照植物的盘中。在10天之后，向NaCl处理的植物和对照植物浇水。十天后，为该植物拍照。

实施例18

干旱耐受性筛选

将T1和T2幼苗转至培养皿中的干燥、消毒的滤纸，然后可在SanyoGrowth Cabinet MLR-350H，micromols^-1m²(白光；Philips TL 65W/25荧光灯管)中以80％RH(相对湿度)干燥两个小时。然后将RH降低到60％，接着将幼苗进一步干燥八个小时。然后移出幼苗，并且置于补充有2μg/ml苯菌灵的¹/₂MS 0.6％琼脂平板上，然后在五天后评价。

将转基因植物就其改进的干旱耐受性进行筛选，表明转基因表达赋予干旱耐受性。

实施例19

冷冻耐受性筛选

将幼苗转入包含补充有2％蔗糖和2μg/ml苯菌灵的¹/₂MS 0.6％琼脂的培养皿中。在四天后，将幼苗在+4℃下培养1小时，然后用细碎冰块覆盖。然后将幼苗放入Environmental Specialist ES2000 EnvironmentalChamber中，然后从-1.0℃开始每小时降低-1℃来培养3.5小时。然后将幼苗在-5.0℃下培养24小时，然后可在+5℃下解冻12小时。将水倒出，然后在五天后评价幼苗。

将转基因植物就其改进的低温耐受性进行筛选，表明转基因表达赋予低温耐受性。

序列表

<110>巴斯福植物科学有限公司

<120>在超表达HSRP基因的植物中的产量增加

<130>PF2063015103

<150>US 60/699,729

<151>2005-07-15

<160>28

<170>PatentIn版本3.3

<210>1

<211>1703

<212>DNA

<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<220>

<221>CDS

<222>(321)..(1532)

<400>1

ctccaacttt taaaactcat cataaatagt aaaaaagtag ccggaaaaat aaaataaaaa    60

gtctatttct ctttccttta aaatccaaat cctataaact catagctttc tctgttcttt    120

acttatacct cacgttatac atatatatag agtttctata aatgcttctc tttcctctcg    180

aacaaatctt cctcacttct ctcatttcca cactcacctt cctctctata tattaaaccc    240

tatctactta actcttcttc taactctaat ctctctctct atttactctg cttctgttct    300

cactctgaaa gaaccaaaac atg acg gtg gtt aga gag tac gac ccg acc cga    353

                      Met Thr Val Val Arg Glu Tyr Asp Pro Thr Arg

                      1               5                   10

gac tta gtc ggc gtg gag gac gtg gaa cga cgg tgt gaa gtc gga cca      401

Asp Leu Val Gly Val Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro

            15                  20                  25

agc ggc aag ctt tct ctt ttc acc gac ctt ttg ggt gac ccg att tgt      449

Ser Gly Lys Leu Ser Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Cys

        30                  35                  40

aga atc cga cat tca cct tcc tat ctc atg ctg gtg gct gag atg ggt      497

Arg Ile Arg His Ser Pro Ser Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Met Gly

    45                  50                  55

acg gag aag aag gag ata gtg ggc atg att aga gga tgt atc aaa acc      545

Thr Glu Lys Lys Glu Ile Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr

60                  65                  70                  75

gtt aca tgt ggc caa aaa ctc gat tta aat cac aaa tct caa aac gat      593

Val Thr Cys Gly Gln Lys Leu Asp Leu Asn His Lys Ser Gln Asn Asp

                80                  85                  90

gtc gtt aag cct ctt tac act aaa ctc gct tac gtc ttg ggc ctt cgc    641

Val Val Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Val Leu Gly Leu Arg

            95                  100                 105

gtc tct cct ttt cac agg aga caa ggg att ggg ttt aag ctc gtg aag    689

Val Ser Pro Phe His Arg Arg Gln Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys

        110                 115                 120

atg atg gag gaa tgg ttt aga caa aac gga gct gag tat tcg tat att    737

Met Met Glu Glu Trp Phe Arg Gln Asn Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Ile

    125                 130                 135

gca act gag aac gat aat caa gct tct gtg aat ttg ttc acc ggg aaa    785

Ala Thr Glu Asn Asp Asn Gln Ala Ser Val Asn Leu Phe Thr Gly Lys

140                 145                 150                 155

tgt ggt tat tcg gag ttt cgt aca ccg tcg att ttg gtt aac ccg gtt    833

Cys Gly Tyr Ser Glu Phe Arg Thr Pro Ser Ile Leu Val Asn Pro Val

                160                 165                 170

tac gct cat cga gtt aat gtt tcg cgg cga gtc acg gtt atc aag tta    881

Tyr Ala His Arg Val Asn Val Ser Arg Arg Val Thr Val Ile Lys Leu

            175                 180                 185

gag ccg gtt gat gct gag acg ttg tac cga atc cgg ttt agc aca aca    929

Glu Pro Val Asp Ala Glu Thr Leu Tyr Arg Ile Arg Phe Ser Thr Thr

        190                 195                 200

gag ttt ttc ccg cgg gat att gat tcg gta ctt aat aac aaa ctc tcg    977

Glu Phe Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser

    205                 210                 215

ctt ggg act ttc gtc gcg gtg cca cgt gga agc tgt tat gga tcc ggg    1025

Leu Gly Thr Phe Val Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly

220                 225                 230                 235

tct gga tca tgg ccc ggt tcg gct aaa ttc ctc gaa tat cca ccc gag    1073

Ser Gly Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Pro Pro Glu

                240                 245                 250

tca tgg gcc gta tta agc gtg tgg aat tgt aaa gac tcg ttt ctg tta    1121

Ser Trp Ala Val Leu Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Leu Leu

            255                 260                 265

gaa gta cgt gga gcg tcg aga ttg aga cgt gtg gtg gct aaa acg acg    1169

Glu Val Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ala Lys Thr Thr

        270                 275                 280

cga gta gtt gat aaa acg ttg ccg ttt ctg aaa cta cct tcg ata ccg    1217

Arg Val Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe Leu Lys Leu Pro Ser Ile Pro

    285                 290                 295

tcc gtt ttc gaa cct ttt gga ctt cat ttt atg tat gga atc gga gga    1265

Ser Val Phe Glu Pro Phe Gly Leu His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly

300                 305                 310                 315

gaa ggt cca cgc gcg gtg aag atg gtg aaa tcc ttg tgt gct cac gcg    1313

Glu Gly Pro Arg Ala Val Lys Met Val Lys Ser Leu Cys Ala His Ala

                320                 325                 330

cat aac ttg gct aag gca ggt ggt tgt ggt gtc gtg gcg gcg gaa gtt    1361

His Asn Leu Ala Lys Ala Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val

            335                 340                 345

gcc gga gaa gac ccg ttg cgg cga gga ata cca cat tgg aaa gtg cta    1409

Ala Gly Glu Asp Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu

        350                 355                 360

tcg tgt gac gag gat ctt tgg tgt ata aag cgg ctt gga gat gac tat      1457

Ser Cys Asp Glu Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Asp Asp Tyr

    365                 370                 375

agt gat ggt gtt gtt ggt gat tgg act aaa tcg cca cct ggc gtt tcc      1505

Ser Asp Gly Val Val Gly Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Val Ser

380                 385                 390                 395

att ttt gta gac cct aga gaa ttt taa aacttttttt ttaactctat            1552

Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

                400

aatatatatt ctctattaac cacttgatgt taaattaggg gttttcttct aagtttatag    1612

attttcttgt tttagaatta atcttttttt ttaggtaact ttttttgctt tttgttttgt    1672

tttgttttgt ttttgtgggt gttataaatt a                                   1703

<210>2

<211>403

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>2

Met Thr Val Val Arg Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Asp Leu Val Gly Val

1               5                   10                  15

Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro Ser Gly Lys Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Cys Arg Ile Arg His Ser

        35                  40                  45

Pro Ser Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Met Gly Thr Glu Lys Lys Glu

    50                  55                  60

Ile Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val Thr Cys Gly Gln

65                  70                  75                  80

Lys Leu Asp Leu Ash His Lys Ser Gln Asn Asp Val Val Lys Pro Leu

                85                  90                  95

Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Val Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Phe His

            100                 105                 110

Arg Arg Gln Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys Met Met Glu Glu Trp

        115                 120                 125

Phe Arg Gln Asn Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Ile Ala Thr Glu Asn Asp

    130                 135                 140

Asn Gln Ala Ser Val Asn Leu Phe Thr Gly Lys Cys Gly Tyr Ser Glu

145                 150                 155                 160

Phe Arg Thr Pro Ser Ile Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala His Arg Val

                165                 170                 175

Asn Val Ser Arg Arg Val Thr Val Ile Lys Leu Glu Pro Val Asp Ala

            180                 185                 190

Glu Thr Leu Tyr Arg Ile Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Arg

        195                 200                 205

Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Phe Val

    210                 215                 220

Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Trp Pro

225                 230                 235                 240

Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Pro Pro Glu Ser Trp Ala Val Leu

                245                 250                 255

Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Leu Leu Glu Val Arg Gly Ala

            260                 265                 270

Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ala Lys Thr Thr Arg Val Val Asp Lys

        275                 280                 285

Thr Leu Pro Phe Leu Lys Leu Pro Ser Ile Pro Ser Val Phe Glu Pro

    290                 295                 300

Phe Gly Leu His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly Pro Arg Ala

305                 310                 315                 320

Val Lys Met Val Lys Ser Leu Cys Ala His Ala His Asn Leu Ala Lys

                325                 330                 335

Ala Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val Ala Gly Glu Asp Pro

            340                 345                 350

Leu Arg Arg Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu Ser Cys Asp Glu Asp

        355                 360                 365

Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Asp Asp Tyr Ser Asp Gly Val Val

    370                 375                 380

Gly Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Val Ser Ile Phe Val Asp Pro

385                 390                 395                 400

Arg Glu Phe

<210>3

<211>1319

<212>DNA

<213>稻(0ryza sativa)

<220>

<221>CDS

<222>(102)..(1319)

<400>3

gatcccccgg gctgcaggaa ttggcacgag ggagagagag agagagagag atcgatacgg  60

ttgcgagatt gatcgatcga tcgatcgatc ggatatatgc c atg atg aga gat gaa  116

                                              Met Met Arg Asp Glu

                                              1               5

gag gag gag gaa ggg gtg gtg atc atc atc cgg gag tac gac cca tcg    164

Glu Glu Glu Glu Gly Val Val Ile Ile Ile Arg Glu Tyr Asp Pro Ser

                10                  15                  20

aga gac cgc gcc ggc acg gag gcc gtc gac cgg gag tgc gac gtc ggc    212

Arg Asp Arg Ala Gly Thr Glu Ala Val Asp Arg Glu Cys Asp Val Gly

            25                  30                  35

ccg acc ggc ggc atg tcg ctc cac gcc gac ctg ctc ggc gac ccc gtc    260

Pro Thr Gly Gly Met Ser Leu His Ala Asp Leu Leu Gly Asp Pro Val

        40                  45                  50

gcc cgc att cgc cac tcc cct gac tac ctc atg ttg gta gct gag acg    308

Ala Arg Ile Arg His Ser Pro Asp Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Thr

    55                  60                  65

acg tcg ggc gcc acc ggc gga cgg atc atc gtc ggc atc atc aga ggc    356

Thr Ser Gly Ala Thr Gly Gly Arg Ile Ile Val Gly Ile Ile Arg Gly

70                  75                  80                  85

acc gtg aag tcg gtc gcc acc ggc aag agc tgc ccg ggc gcc ccc gcc    404

Thr Val Lys Ser Val Ala Thr Gly Lys Ser Cys Pro Gly Ala Pro Ala

                90                  95                  100

gtc gcc agc gtc ggc tac att ctc gga ctc cgc gtc gcg ccg agc cac    452

Val Ala Ser Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Arg Val Ala Pro Ser His

            105                 110                 115

agg agg atg ggg ttg gcg ctg cgg atg gtg cgg cgg atg gaa gcg tgg    500

Arg Arg Met Gly Leu Ala Leu Arg Met Val Arg Arg Met Glu Ala Trp

        120                 125                 130

ttc gag cgg atg gga gcc gag tac gcg tac atg gcc acc gac aag tcc    548

Phe Glu Arg Met Gly Ala Glu Tyr Ala Tyr Met Ala Thr Asp Lys Ser

    135                 140                 145

aac gag gcg tcg ctg cgg ctg ttc acg gtg cgg tgc ggc tac tcc aag    596

Asn Glu Ala Ser Leu Arg Leu Phe Thr Val Arg Cys Gly Tyr Ser Lys

150                 155                 160                 165

ttc cgg acg ccg tcg ctg ctg gtg cac ccc gtg cac gcg cac cgc cgc    644

Phe Arg Thr Pro Ser Leu Leu Val His Pro Val His Ala His Arg Arg

                170                 175                 180

cgc gtc ccg cgc cgc gcg gcc gtg ttc cgc ctc ggc gcc cgc gac gcc    692

Arg Val Pro Arg Arg Ala Ala Val Phe Arg Leu Gly Ala Arg Asp Ala

            185                 190                 195

gag cgg ctg tac gac ggc agg ttc gcg cac gtc gag ttc ttc ccc gcc    740

Glu Arg Leu Tyr Asp Gly Arg Phe Ala His Val Glu Phe Phe Pro Ala

        200                 205                 210

gac atc ggc gcc gtg ctg ggg aac cag ctc tcc atc ggc acg ttc ctc    788

Asp Ile Gly Ala Val Leu Gly Asn Gln Leu Ser Ile Gly Thr Phe Leu

    215                 220                 225

gcc gtc atc gac gac gac ggg agg tgg cgc cac ggc gag tgg cgc ggg    836

Ala Val Ile Asp Asp Asp Gly Arg Trp Arg His Gly Glu Trp Arg Gly

230                 235                 240                 245

gcc gag cgc ttc ctg gcg tcc ccg ccg gcg tcg tgg gcg ctg gcg agc    884

Ala Glu Arg Phe Leu Ala Ser Pro Pro Ala Ser Trp Ala Leu Ala Ser

                250                 255                 260

ctc tgg gac tgc ggg ggc gtg ttc cgc ctc gag ctg cgc ggc gcg tcg    932

Leu Trp Asp Cys Gly Gly Val Phe Arg Leu Glu Leu Arg Gly Ala Ser

            265                 270                 275

cgc ctt cgc cgc gcc gcg gcg gcc gcg acg cgc gcg ctg gac cgc gcg    980

Arg Leu Arg Arg Ala Ala Ala Ala Ala Thr Arg Ala Leu Asp Arg Ala

        280                 285                 290

gcg agg tgg atg cgc gtc ccg tcc gtg ccg gac ttc ttc cgc ccg ttc    1028

Ala Arg Trp Met Arg Val Pro Ser Val Pro Asp Phe Phe Arg Pro Phe

    295                 300                 305

tcc ggg tgg ttc gtg tac ggc ctc ggc ggc gac ggc ccc gac gcc gcg    1076

Ser Gly Trp Phe Val Tyr Gly Leu Gly Gly Asp Gly Pro Asp Ala Ala

310                 315                 320                 325

gtg gcc gcc gag gcg ctg ttc gcg acg ttc gtc aac atg gcg cgc ggc    1124

Val Ala Ala Glu Ala Leu Phe Ala Thr Phe Val Asn Met Ala Arg Gly

                330                 335                 340

agg gcg gcc gcc gtg gcc gtc gag gtg gcg gcc tgc gac ccg ctc cgc    1172

Arg Ala Ala Ala Val Ala Val Glu Val Ala Ala Cys Asp Pro Leu Arg

            345                 350                 355

cgc cgc atc ccg cac tgg cgc cgc ctc tcg tgc acc gag gac ctg tgg    1220

Arg Arg Ile Pro His Trp Arg Arg Leu Ser Cys Thr Glu Asp Leu Trp

        360                 365                 370

tgc atg aag cgg ctg ggc cgc gtc gga gaa tcg gac ggc tgg gat tgg    1268

Cys Met Lys Arg Leu Gly Arg Val Gly Glu Ser Asp Gly Trp Asp Trp

    375                 380                 385

gcc agg tca cct cct ggc ctc tcc atc ttc gtt gac ccc aga gaa gtg    1316

Ala Arg Ser Pro Pro Gly Leu Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Val

390                 395                 400                 405

tga                                                                1319

<210>4

<211>405

<212>PRT

<213>稻

<400>4

Met Met Arg Asp Glu Glu Glu Glu Glu Gly Val Val Ile Ile Ile Arg

1               5                   10                  15

Glu Tyr Asp Pro Ser Arg Asp Arg Ala Gly Thr Glu Ala Val Asp Arg

            20                  25                  30

Glu Cys Asp Val Gly Pro Thr Gly Gly Met Ser Leu His Ala Asp Leu

        35                  40                  45

Leu Gly Asp Pro Val Ala Arg Ile Arg His Ser Pro Asp Tyr Leu Met

    50                  55                  60

Leu Val Ala Glu Thr Thr Ser Gly Ala Thr Gly Gly Arg Ile Ile Val

65                  70                  75                  80

Gly Ile Ile Arg Gly Thr Val Lys Ser Val Ala Thr Gly Lys Ser Cys

                85                  90                  95

Pro Gly Ala Pro Ala Val Ala Ser Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Arg

            100                 105                 110

Val Ala Pro Ser His Arg Arg Met Gly Leu Ala Leu Arg Met Val Arg

        115                 120                 125

Arg Met Glu Ala Trp Phe Glu Arg Met Gly Ala Glu Tyr Ala Tyr Met

    130                 135                 140

Ala Thr Asp Lys Ser Asn Glu Ala Ser Leu Arg Leu Phe Thr Val Arg

145                 150                 155                 160

Cys Gly Tyr Ser Lys Phe Arg Thr Pro Ser Leu Leu Val His Pro Val

                165                 170                 175

His Ala His Arg Arg Arg Val Pro Arg Arg Ala Ala Val Phe Arg Leu

            180                 185                 190

Gly Ala Arg Asp Ala Glu Arg Leu Tyr Asp Gly Arg Phe Ala His Val

        195                 200                 205

Glu Phe Phe Pro Ala Asp Ile Gly Ala Val Leu Gly Asn Gln Leu Ser

    210                 215                 220

Ile Gly Thr Phe Leu Ala Val Ile Asp Asp Asp Gly Arg Trp Arg His

225                 230                 235                 240

Gly Glu Trp Arg Gly Ala Glu Arg Phe Leu Ala Ser Pro Pro Ala Ser

                245                 250                 255

Trp Ala Leu Ala Ser Leu Trp Asp Cys Gly Gly Val Phe Arg Leu Glu

            260                 265                 270

Leu Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Ala Ala Ala Ala Ala Thr Arg

        275                 280                 285

Ala Leu Asp Arg Ala Ala Arg Trp Met Arg Val Pro Ser Val Pro Asp

    290                 295                 300

Phe Phe Arg Pro Phe Ser Gly Trp Phe Val Tyr Gly Leu Gly Gly Asp

305                 310                 315                 320

Gly Pro Asp Ala Ala Val Ala Ala Glu Ala Leu Phe Ala Thr Phe Val

                325                 330                 335

Asn Met Ala Arg Gly Arg Ala Ala Ala Val Ala Val Glu Val Ala Ala

            340                 345                 350

Cys Asp Pro Leu Arg Arg Arg Ile Pro His Trp Arg Arg Leu Ser Cys

        355                 360                 365

Thr Glu Asp Leu Trp Cys Met Lys Arg Leu Gly Arg Val Gly Glu Ser

    370                 375                 380

Asp Gly Trp Asp Trp Ala Arg Ser Pro Pro Gly Leu Ser Ile Phe Val

385                 390                 395                 400

Asp Pro Arg Glu Val

                405

<210>5

<211>1702

<212>DNA

<213>拟南芥

<220>

<221>CDS

<222>(321)..(1532)

<400>5

ctccaacttt taaaactcat cataaatagt aaaaaagtag ccggaaaaat aaaataaaaa    60

gtctatttct ctttccttta aaatccaaat cctataaact catagctttc tctgttcttt    120

acttatacct cacgttatac atatatatag agtttctata aatgcttctc tttcctctcg    180

aacaaatctt cctcacttct ctcatttcca cactcacctt cctctctata tattaaaccc    240

tatctactta actcttcttc taactctaat ctctctctct atttactctg cttctgttct    300

cactctgaaa gaaccaaaac atg acg gtg gtt aga gag tac gac ccg acc cga    353

                      Met Thr Val Val Arg Glu Tyr Asp Pro Thr Arg

                      1               5                   10

gac tta gtc ggc gtg gag gac gtg gaa cga cgg tgt gaa gtc gga cca      401

Asp Leu Val Gly Val Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro

            15                  20                  25

agc ggc aag ctt tct ctt ttc acc gac ctt ttg ggt gac ccg att tgt      449

Ser Gly Lys Leu Ser Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Cys

        30                  35                  40

aga atc cga cat tca cct tcc tat ctc atg ctg gtg gct gag atg ggt      497

Arg Ile Arg His Ser Pro Ser Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Met Gly

    45                  50                  55

acg gag aag aag gag ata gtg ggc atg att aga gga tgt atc aaa acc    545

Thr Glu Lys Lys Glu Ile Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr

60                  65                  70                  75

gtt aca tgt ggc caa aaa ctc gat tta aat cac aaa tct caa aac gat    593

Val Thr Cys Gly Gln Lys Leu Asp Leu Asn His Lys Ser Gln Asn Asp

                80                  85                  90

gtc gtt aag cct ctt tac act aaa ctc gct tac gtc ttg ggc ctt cgc    641

Val Val Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Val Leu Gly Leu Arg

            95                  100                 105

gtc tct cct ttt cac agg aga caa ggg att ggg ttt aag ctc gtg aag    689

Val Ser Pro Phe His Arg Arg Gln Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys

        110                 115                 120

atg atg gag gaa tgg ttt aga caa aac gga gct gag tat tcg tat att    737

Met Met Glu Glu Trp Phe Arg Gln Asn Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Ile

    125                 130                 135

gca act gag aac gat aat caa gct tct gtg aat ttg ttc acc ggg aaa    785

Ala Thr Glu Asn Asp Asn Gln Ala Ser Val Asn Leu Phe Thr Gly Lys

140                 145                 150                 155

tgt ggt tat tcg gag ttt cgt aca ccg tcg att ttg gtt aac ccg gtt    833

Cys Gly Tyr Ser Glu Phe Arg Thr Pro Ser Ile Leu Val Asn Pro Val

                160                 165                 170

tac gct cat cga gtt aat gtt tcg cgg cga gtc acg gtt atc aag tta    881

Tyr Ala His Arg Val Asn Val Ser Arg Arg Val Thr Val Ile Lys Leu

            175                 180                 185

gag ccg gtt gat gct gag acg ttg tac cga atc cgg ttt agc aca aca    929

Glu Pro Val Asp Ala Glu Thr Leu Tyr Arg Ile Arg Phe Ser Thr Thr

        190                 195                 200

gag ttt ttc ccg cgg gat att gat tcg gta ctt aat aac aaa ctc tcg    977

Glu Phe Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser

    205                 210                 215

ctt ggg act ttc gtc gcg gtg cca cgt gga agc tgt tat gga tcc ggg    1025

Leu Gly Thr Phe Val Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly

220                 225                 230                 235

tct gga tca tgg ccc ggt tcg gct aaa ttc ctc gaa tat cca ccc gag    1073

Ser Gly Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Pro Pro Glu

                240                 245                 250

tca tgg gcc gta tta agc gtg tgg aat tgt aaa gac tcg ttt ctg tta    1121

Ser Trp Ala Val Leu Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Leu Leu

            255                 260                 265

gaa gta cgt gga gcg tcg aga ttg aga cgt gtg gtg gct aaa acg acg    1169

Glu Val Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ala Lys Thr Thr

        270                 275                 280

cga gta gtt gat aaa acg ttg ccg ttt ctg aaa cta cct tcg ata ccg    1217

Arg Val Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe Leu Lys Leu Pro Ser Ile Pro

    285                 290                 295

tcc gtt ttc gaa cct ttt gga ctt cat ttt atg tat gga atc gga gga    1265

Ser Val Phe Glu Pro Phe Gly Leu His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly

300                 305                 310                 315

gaa ggt cca cgc gcg gtg aag atg gtg aaa tcc ttg tgt gct cac gcg    1313

Glu Gly Pro Arg Ala Val Lys Met Val Lys Ser Leu Cys Ala His Ala

                320                 325                 330

cat aac ttg gct aag gca ggt ggt tgt ggt gtc gtg gcg gcg gaa gtt    1361

His Asn Leu Ala Lys Ala Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val

            335                 340                 345

gcc gga gaa gac ccg ttg cgg cga gga ata cca cat tgg aaa gtg cta    1409

Ala Gly Glu Asp Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu

        350                 355                 360

tcg tgt gac gag gat ctt tgg tgt ata aag cgg ctt gga gat gac tat    1457

Ser Cys Asp Glu Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Asp Asp Tyr

    365                 370                 375

agt gat ggt gtt gtt ggt gat tgg act aaa tcg cca cct ggc gtt tcc    1505

Ser Asp Gly Val Val Gly Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Val Ser

380                 385                 390                 395

att ttt gta gac cct aga gaa ttt taaaactttt tttttaactc tataatatat   1559

Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

                400

attctctatt aaccacttga tgttaaatta ggggttttct tctaagttta tagattttct  1619

tgttttagaa ttaatctttt ttttaggtaa ctttttttgc tttttgtttt gttttgtttt  1679

gtttttgtgg gtgttataaa tta                                          1702

<210>6

<211>403

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>6

Met Thr Val Val Arg Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Asp Leu Val Gly Val

1               5                   10                  15

Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro Ser Gly Lys Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Cys Arg Ile Arg His Ser

        35                  40                  45

Pro Ser Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Met Gly Thr Glu Lys Lys Glu

    50                  55                  60

Ile Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val Thr Cys Gly Gln

65                  70                  75                  80

Lys Leu Asp Leu Asn His Lys Ser Gln Asn Asp Val Val Lys Pro Leu

                85                  90                  95

Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Val Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Phe His

            100                 105                 110

Arg Arg Gln Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys Met Met Glu Glu Trp

        115                 120                 125

Phe Arg Gln Asn Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Ile Ala Thr Glu Asn Asp

    130                 135                 140

Asn Gln Ala Ser Val Asn Leu Phe Thr Gly Lys Cys Gly Tyr Ser Glu

145                 150                 155                 160

Phe Arg Thr Pro Ser Ile Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala His Arg Val

                165                 170                 175

Asn Val Ser Arg Arg Val Thr Val Ile Lys Leu Glu Pro Val Asp Ala

            180                 185                 190

Glu Thr Leu Tyr Arg Ile Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Arg

        195                 200                 205

Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Phe Val

    210                 215                 220

Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Trp Pro

225                 230                 235                 240

Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Pro Pro Glu Ser Trp Ala Val Leu

                245                 250                 255

Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Leu Leu Glu Val Arg Gly Ala

            260                 265                 270

Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ala Lys Thr Thr Arg Val Val Asp Lys

       275                 280                 285

Thr Leu Pro Phe Leu Lys Leu Pro Ser Ile Pro Ser Val Phe Glu Pro

    290                 295                 300

Phe Gly Leu His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly Pro Arg Ala

305                 310                 3153                 20

Val Lys Met Val Lys Ser Leu Cys Ala His Ala His Asn Leu Ala Lys

                325                 330                 335

Ala Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val Ala Gly Glu Asp Pro

            340                 345                 350

Leu Arg Arg Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu Ser Cys Asp Glu Asp

        355                 360                 365

Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Asp Asp Tyr Ser Asp Gly Val Val

    370                 375                 380

Gly Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Val Ser Ile Phe Val Asp Pro

385                 390                 395                 400

Arg Glu Phe

<210>7

<211>1077

<212>DNA

<213>拟南芥

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1077)

<400>7

atg ctg gtg gct gag att ggt ccg aaa gag aag aaa gag tta gtt gga   48

Met Leu Val Ala Glu Ile Gly Pro Lys Glu Lys Lys Glu Leu Val Gly

1               5                   10                  15

atg att cgg gga tgt atc aaa acc gtt aca tgt ggt atc acc acc aaa   96

Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val Thr Cys Gly Ile Thr Thr Lys

            20                  25                  30

aga ctt gat tta act cat aac aaa tcc caa aac gat gtc gtt att acc   144

Arg Leu Asp Leu Thr His Asn Lys Ser Gln Asn Asp Val Val Ile Thr

        35                  40                  45

aaa cca ctt tac act aaa ctc gct tac att ttg ggt ctc cgc gtt tct   192

Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Ile Leu Gly Leu Arg Val Ser

    50                  55                  60

cct aca cac cgg aga caa ggg ata ggg ttt aag ctc gtg aag gct atg    240

Pro Thr His Arg Arg Gln Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys Ala Met

65                  70                  75                  80

gaa gat tgg ttt agt caa aac ggg gct gaa tat tcc tat ttt gca act    288

Glu Asp Trp Phe Ser Gln Asn Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Phe Ala Thr

                85                  90                  95

gaa aac gac aat cac gct tcc gtc aat ctt ttc acc gga aaa tgt ggt    336

Glu Asn Asp Asn His Ala Ser Val Asn Leu Phe Thr Gly Lys Cys Gly

            100                 105                 110

tac gcc gag ttt cgt aca ccg tct att ttg gtt aac ccg gtt tac gca    384

Tyr Ala Glu Phe Arg Thr Pro Ser Ile Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala

        115                 120                 125

cac cgg gtc aac att tct cgt cgg gtt acc gta att aag ctt gaa ccg    432

His Arg Val Asn Ile Ser Arg Arg Val Thr Val Ile Lys Leu Glu Pro

    130                 135                 140

tct gat gct gag tta cta tac cgg ctt cgg ttt agc aca acc gag ttt    480

Ser Asp Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Leu Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe

145                 150                 155                 160

ttc cct cgc gac att gac tct gtt ttg aat aac aaa ctc tcg tta gga    528

Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly

                165                 170                 175

aca ttc gtc gcg gtt cca cgt ggc agt tgt tac gga tcc ggg tct agg    576

Thr Phe Val Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Arg

            180                 185                 190

tca tgg ccc ggt tcg gct aag ttc ttg gag tat cca ccg gac tcg tgg    624

Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Pro Pro Asp Ser Trp

        195                 200                 205

gcg gtt tta agc gtg tgg aat tgt aaa gac tcg ttt aga tta gaa gtt    672

Ala Val Leu Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Arg Leu Glu Val

    210                 215                 220

cgc ggc gcg tcg aga ttg agg cgc gtg gtt tca aaa gcg acg cgc atg    720

Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ser Lys Ala Thr Arg Met

225                 230                 235                 240

gtt gat aaa act cta ccg ttt ttg aaa ata ccg tcg atc ccg gcg gtt    768

Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe Leu Lys Ile Pro Ser Ile Pro Ala Val

                245                 250                 255

ttc cgg ccg ttt ggg ctg cat ttt atg tac gga atc ggc gga gaa gga    816

Phe Arg Pro Phe Gly Leu Hi s Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly

            260                  265                 270

cca cgc gcg gag aaa atg gtg aag gca ttg tgt gac cat gca cat aat    864

Pro Arg Ala Glu Lys Met Val Lys Ala Leu Cys Asp His Ala His Asn

        275                 280                 285

ttg gca aag gaa gga gga tgc ggc gtg gtg gcg gca gaa gtc gcc ggc    912

Leu Ala Lys Glu Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val Ala Gly

    290                 295                 300

gaa gag ccg ctc cgg cga ggg ata ccg cat tgg aaa gtg cta tcg tgc    960

Glu Glu Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu Ser Cys

305                 310                 315                 320

gct gag gat ttg tgg tgt att aaa cgg ctt gga gaa gat tat agt gat    1008

Ala Glu Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Glu Asp Tyr Ser Asp

                325                 330                 335

ggt tct gtt ggt gat tgg act aaa tcg cca cct ggc gat tct att ttt  1056

Gly Ser Val Gly Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Asp Ser Ile Phe

            340                 345                 350

gtt gac cct aga gaa ttt tag                                      1077

Val Asp Pro Arg Glu Phe

        355

<210>8

<211>358

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>8

Met Leu Val Ala Glu Ile Gly Pro Lys Glu Lys Lys Glu Leu Val Gly

1               5                   10                  15

Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val Thr Cys Gly Ile Thr Thr Lys

            20                  25                  30

Arg Leu Asp Leu Thr His Asn Lys Ser Gln Asn Asp Val Val Ile Thr

        35                  40                  45

Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Ile Leu Gly Leu Arg Val Ser

    50                  55                  60

Pro Thr His Arg Arg Gln Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys Ala Met

65                  70                  75                  80

Glu Asp Trp Phe Ser Gln Asn Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Phe Ala Thr

                85                  90                  95

Glu Asn Asp Asn His Ala Ser Val Asn Leu Phe Thr Gly Lys Cys Gly

            100                 105                 110

Tyr Ala Glu Phe Arg Thr Pro Ser Ile Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala

        115                 120                 125

His Arg Val Asn Ile Ser Arg Arg Val Thr Val Ile Lys Leu Glu Pro

    130                 135                 140

Ser Asp Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Leu Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe

145                 150                 155                 160

Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly

                165                 170                 175

Thr Phe Val Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Arg

            180                 185                 190

Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Pro Pro Asp Ser Trp

        195                 200                 205

Ala Val Leu Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Arg Leu Glu Val

    210                 215                 220

Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ser Lys Ala Thr Arg Met

225                 230                 235                 240

Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe Leu Lys Ile Pro Ser Ile Pro Ala Val

                245                 250                 255

Phe Arg Pro Phe Gly Leu His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly

            260                 265                 270

Pro Arg Ala Glu Lys Met Val Lys Ala Leu Cys Asp His Ala His Asn

        275                 280                 285

Leu Ala Lys Glu Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val Ala Gly

    290                 295                 300

Glu Glu Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu Ser Cys

305                 310                 315                 320

Ala Glu Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Glu Asp Tyr Ser Asp

                325                 330                 335

Gly Ser Val Gly Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Asp Ser Ile Phe

            340                 345                 350

Val Asp Pro Arg Glu Phe

        355

<210>9

<211>1242

<212>DNA

<213>拟南芥

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1242)

<400>9

atg acg gtg ctt gtg gag gtt aga gaa tac gac cca agt aaa gac tta    48

Met Thr Val Leu Val Glu Val Arg Glu Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu

1               5                   10                  15

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Ala Thr Val Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro Ala Gly

            20                  25                  30

aaa ctt tct ctc ttc acc gat ctc tta ggt gac cct att tgc cgt gtc    144

Lys Leu Ser Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Cys Arg Val

        35                  40                  45

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Arg His Ser Pro Ser Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Ile Gly Pro Lys

    50                  55                  60

gag aag aaa gag tta gtt gga atg att cgg gga tgt atc aaa acc gtt    240

Glu Lys Lys Glu Leu Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val

65                  70                  75                  80

aca tgt ggt atc acc acc aaa aga ctt gat tta act cat aac aaa tcc    288

Thr Cys Gly Ile Thr Thr Lys Arg Leu Asp Leu Thr His Asn Lys Ser

                85                  90                  95

caa aac gat gtc gtt att acc aaa cca ctt tac act aaa ctc gct tac    336

Gln Asn Asp Val Val Ile Thr Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr

            100                 105                 110

att ttg ggt ctc cgc gtt tct cct aca cac cgg aga caa ggg ata ggg    384

Ile Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Thr His Arg Arg Gln Gly Ile Gly

        115                 120                 125

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Phe Lys Leu Val Lys Ala Met Glu Asp Trp Phe Ser Gln Asn Gly Ala

    130                 135                 140

gaa tat tcc tat ttt gca act gaa aac gac aat cac gct tcc gtc aat    480

Glu Tyr Ser Tyr Phe Ala Thr Glu Ash Asp Asn His Ala Ser Val Asn

145                 150                 155                 160

ctt ttc acc gga aaa tgt ggt tac gcc gag ttt cgt aca ccg tct att    528

Leu Phe Thr Gly Lys Cys Gly Tyr Ala Glu Phe Arg Thr Pro Ser Ile

                165                 170                 175

ttg gtt aac ccg gtt tac gca cac cgg gtc aac att tct cgt cgg gtt    576

Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala His Arg Val Asn Ile Ser Arg Arg Val

            180                 185                 190

acc gta att aag ctt gaa ccg tct gat gct gag tta cta tac cgg ctt    624

Thr Val Ile Lys Leu Glu Pro Ser Asp Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Leu

        195                 200                 205

cgg ttt agc aca acc gag ttt ttc cct cgc gac att gac tct gtt ttg    672

Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser Val Leu

    210                 215                 220

aat aac aaa ctc tcg tta gga aca ttc gtc gcg gtt cca cgt ggc agt    720

Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Phe Val Ala Val Pro Arg Gly Ser

225                 230                 235                 240

tgt tac gga tcc ggg tct agg tca tgg ccc ggt tcg gct aag ttc ttg    768

Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Arg Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys Phe Leu

                245                 250                 255

gag tat cca ccg gac tcg tgg gcg gtt tta agc gtg tgg aat tgt aaa    816

Glu Tyr Pro Pro Asp Ser Trp Ala Val Leu Ser Val Trp Asn Cys Lys

            260                 265                 270

gac tcg ttt aga tta gaa gtt cgc ggc gcg tcg aga ttg agg cgc gtg    864

Asp Ser Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Val

        275                 280                 285

gtt tca aaa gcg acg cgc atg gtt gat aaa act cta ccg ttt ttg aaa    912

Val Ser Lys Ala Thr Arg Met Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe Leu Lys

    290                 295                 300

ata ccg tcg atc ccg gcg gtt ttc cgg ccg ttt ggg ctg cat ttt atg    960

Ile Pro Ser Ile Pro Ala Val Phe Arg Pro Phe Gly Leu His Phe Met

305                 310                 315                 320

tac gga atc ggc gga gaa gga cca cgc gcg gag aaa atg gtg aag gca    1008

Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly Pro Arg Ala Glu Lys Met Val Lys Ala

                325                 330                 335

ttg tgt gac cat gca cat aat ttg gca aag gaa gga gga tgc ggc gtg    1056

Leu Cys Asp His Ala His Asn Leu Ala Lys Glu Gly Gly Cys Gly Val

            340                 345                 350

gtg gcg gca gaa gtc gcc ggc gaa gag ccg ctc cgg cga ggg ata ccg    1104

Val Ala Ala Glu Val Ala Gly Glu Glu Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro

        355                 360                 365

cat tgg aaa gtg cta tcg tgc gct gag gat ttg tgg tgt att aaa cgg    1152

His Trp Lys Val Leu Ser Cys Ala Glu Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg

    370                 375                 380

ctt gga gaa gat tat agt gat ggt tct gtt ggt gat tgg act aaa tcg    1200

Leu Gly Glu Asp Tyr Ser Asp Gly Ser Val Gly Asp Trp Thr Lys Ser

385                 390                 395                 400

cca cct ggc gat tct att ttt gtt gac cct aga gaa ttt tag            1242

Pro Pro Gly Asp Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

                405                 410

<210>10

<211>413

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>10

Met Thr Val Leu Val Glu Val Arg Glu Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu

1               5                   10                  15

Ala Thr Val Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro Ala Gly

            20                  25                  30

Lys Leu Ser Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Cys Arg Val

        35                  40                  45

Arg His Ser Pro Ser Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Ile Gly Pro Lys

    50                  55                  60

Glu Lys Lys Glu Leu Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val

65                  70                  75                  80

Thr Cys Gly Ile Thr Thr Lys Arg Leu Asp Leu Thr His Asn Lys Ser

                85                  90                  95

Gln Asn Asp Val Val Ile Thr Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr

            100                 105                 110

Ile Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Thr His Arg Arg Gln Gly Ile Gly

        115                 120                 125

Phe Lys Leu Val Lys Ala Met Glu Asp Trp Phe Ser Gln Asn Gly Ala

    130                 135                 140

Glu Tyr Ser Tyr Phe Ala Thr Glu Asn Asp Asn His Ala Ser Val Asn

145                 150                 155                 160

Leu Phe Thr Gly Lys Cys Gly Tyr Ala Glu Phe Arg Thr Pro Ser Ile

                165                 170                 175

Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala His Arg Val Asn Ile Ser Arg Arg Val

            180                 185                 190

Thr Val Ile Lys Leu Glu Pro Ser Asp Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Leu

        195                 200                 205

Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser Val Leu

    210                 215                 220

Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Phe Val Ala Val Pro Arg Gly Ser

225                 230                 235                 240

Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Arg Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys Phe Leu

                245                 250                 255

Glu Tyr Pro Pro Asp Ser Trp Ala Val Leu Ser Val Trp Asn Cys Lys

            260                 265                 270

Asp Ser Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg Arg Val

        275                 280                 285

Val Ser Lys Ala Thr Arg Met Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe Leu Lys

    290                 295                 300

Ile Pro Ser Ile Pro Ala Val Phe Arg Pro Phe Gly Leu His Phe Met

305                 310                 315                 320

Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly Pro Arg Ala Glu Lys Met Val Lys Ala

                325                 330                 335

Leu Cys Asp His Ala His Asn Leu Ala Lys Glu Gly Gly Cys Gly Val

            340                 345                 350

Val Ala Ala Glu Val Ala Gly Glu Glu Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro

        355                 360                 365

His Trp Lys Val Leu Ser Cys Ala Glu Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg

    370                 375                 380

Leu Gly Glu Asp Tyr Ser Asp Gly Ser Val Gly Asp Trp Thr Lys Ser

385                 390                 395                 400

Pro Pro Gly Asp Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

                405                 410

<210>11

<211>1161

<212>DNA

<213>拟南芥

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1161)

<400>11

atg gtg ggg caa tgg gaa gaa gaa gtt gat gaa gag gtg gtg atc aga    48

Met Val Gly Gln Trp Glu Glu Glu Val Asp Glu Glu Val Val Ile Arg

1               5                   10                  15

tgc tac gat gat cgt agg gac aga att caa atg ggt cgt atg gag aag    96

Cys Tyr Asp Asp Arg Arg Asp Arg Ile Gln Met Gly Arg Met Glu Lys

            20                  25                  30

agt tgt gag att ggt cac gac cac caa act ctt ctc ttc act gac act    144

Ser Cys Glu Ile Gly His Asp His Gln Thr Leu Leu Phe Thr Asp Thr

        35                  40                  45

tta ggt gat ccc atc tgc aga atc cga aat agt cct ttc ttc att atg    192

Leu Gly Asp Pro Ile Cys Arg Ile Arg Asn Ser Pro Phe Phe Ile Met

    50                  55                  60

ctg gtg gca ggg gtt ggg aac aag ctg gta ggt tcc ata caa ggc tca    240

Leu Val Ala Gly Val Gly Asn Lys Leu Val Gly Ser Ile Gln Gly Ser

65                  70                  75                  80

gta aag cca gtg gag ttt cat gat aag tca gtg aga gtg ggt tat gtc    288

Val Lys Pro Val Glu Phe His Asp Lys Ser Val Arg Val Gly Tyr Val

                85                  90                  95

cta ggt ctc aga gtt gtg ccg tcg tat cga cgc cgt ggc att gga tcg    336

Leu Gly Leu Arg Val Val Pro Ser Tyr Arg Arg Arg Gly Ile Gly Ser

            100                 105                 110

att ctg gtg aga aaa ctt gag gaa tgg ttc gag tct cac aat gct gac    384

Ile Leu Val Arg Lys Leu Glu Glu Trp Phe Glu Ser His Asn Ala Asp

        115                 120                 125

tat gct tac atg gct act gaa aag gac aat gag gcc tct cac ggt ctc    432

Tyr Ala Tyr Met Ala Thr Glu Lys Asp Asn Glu Ala Ser His Gly Leu

    130                 135                 140

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Phe Ile Gly Arg Leu Gly Tyr Val Val Phe Arg Asn Pro Ala Ile Leu

145                 150                 155                 160

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Val Asn Pro Val Asn Pro Gly Arg Gly Leu Lys Leu Pro Ser Asp Ile

                165                 170                 175

gga ata agg aag cta aag gtg aaa gaa gcc gag tca ttg tac cgg aga    576

Gly Ile Arg Lys Leu Lys Val Lys Glu Ala Glu Ser Leu Tyr Arg Arg

                    180                 185                 190

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Asn Val Ala Ala Thr Thr Glu Phe Phe Pro Asp Asp Ile Asn Lys Ile

        195                 200                 205

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Leu Arg Asn Lys Leu Ser Ile Gly Thr Trp Val Ala Tyr Tyr Asn Asn

    210                 215                 220

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Val Asp Asn Thr Arg Ser Trp Ala Met Leu Ser Val Trp Asp Ser Ser

225                 230                 235                 240

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Lys Val Phe Lys Leu Arg Ile Glu Arg Ala Pro Leu Ser Tyr Leu Leu

                245                 250                 255

ctc act aaa gtt tcc aaa tta ttt ggt aat ttc ttg tca tta ttg gga    816

Leu Thr Lys Val Ser Lys Leu Phe Gly Asn Phe Leu Ser Leu Leu Gly

            260                 265                 270

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Leu Thr Val Leu Pro Asp Leu Phe Thr Pro Phe Gly Phe Tyr Phe Leu

        275                 280                 285

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Tyr Gly Val His Ser Glu Gly Pro His Cys Gly Lys Leu Val Arg Ala

    290                 295                 300

ttg tgt gag cac gtt cat aac atg gct gcg tta aat gat ggt tgc gca    960

Leu Cys Glu His Val His Asn Met Ala Ala Leu Asn Asp Gly Cys Ala

305                 310                 315                 320

tgt aaa gtc gtg gtg gtg gag gtc gac aaa gga agt aac ggc gat gat    1008

Cys Lys Val Val Val Val Glu Val Asp Lys Gly Ser Asn Gly Asp Asp

                325                 330                 335

tct ttg caa agg tgt att ccg cat tgg aaa atg ctt tcg tgt gac gat    1056

Ser Leu Gln Arg Cys Ile Pro His Trp Lys Met Leu Ser Cys Asp Asp

            340                 345                 350

gat atg tgg tgt atc aag ccg ttg aaa tgt gag aaa aat aag ttt gat    1104

Asp Met Trp Cys Ile Lys Pro Leu Lys Cys Glu Lys Asn Lys Phe Asp

        355                 360                 365

ttg agt gag aga tcg aaa tcg cgg tct tcg ctc ttt gtg gat cca aga    1152

Leu Ser Glu Arg Ser Lys Ser Arg Ser Ser Leu Phe Val Asp Pro Arg

    370                 375                 380

gaa gtgtag                                                         1161

Glu Val

385

<210>12

<211>386

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>12

Met Val Gly Gln Trp Glu Glu Glu Val Asp Glu Glu Val Val Ile Arg

1               5                   10                  15

Cys Tyr Asp Asp Arg Arg Asp Arg Ile Gln Met Gly Arg Met Glu Lys

            20                  25                  30

Ser Cys Glu Ile Gly His Asp His Gln Thr Leu Leu Phe Thr Asp Thr

        35                  40                  45

Leu Gly Asp Pro Ile Cys Arg Ile Arg Asn Ser Pro Phe Phe Ile Met

    50                  55                  60

Leu Val Ala Gly Val Gly Asn Lys Leu Val Gly Ser Ile Gln Gly Ser

65                  70                  75                  80

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                85                  90                  95

Leu Gly Leu Arg Val Val Pro Ser Tyr Arg Arg Arg Gly Ile Gly Ser

            100                 105                 110

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        115                 120                 125

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    130                 135                 140

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145                 150                 155                 160

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                165                 170                 175

Gly Ile Arg Lys Leu Lys Val Lys Glu Ala Glu Ser Leu Tyr Arg Arg

            180                 185                 190

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        195                 200                 205

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    210                 215                 220

Val Asp Asn Thr Arg Ser Trp Ala Met Leu Ser Val Trp Asp Ser Ser

225                 230                 235                 240

Lys Val Phe Lys Leu Arg Ile Glu Arg Ala Pro Leu Ser Tyr Leu Leu

                245                 250                 255

Leu Thr Lys Val Ser Lys Leu Phe Gly Asn Phe Leu Ser Leu Leu Gly

            260                 265                 270

Leu Thr Val Leu Pro Asp Leu Phe Thr Pro Phe Gly Phe Tyr Phe Leu

        275                 280                 285

Tyr Gly Val His Ser Glu Gly Pro His Cys Gly Lys Leu Val Arg Ala

    290                 295                 300

Leu Cys Glu His Val His Asn Met Ala Ala Leu Asn Asp Gly Cys Ala

305                 310                 315                 320

Cys Lys Val Val Val Val Glu Val Asp Lys Gly Ser Asn Gly Asp Asp

                325                 330                 335

Ser Leu Gln Arg Cys Ile Pro His Trp Lys Met Leu Ser Cys Asp Asp

            340                 345                 350

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        355                 360                 365

Leu Ser Glu Arg Ser Lys Ser Arg Ser Ser Leu Phe Val Asp Pro Arg

    370                 375                 380

Glu Val

385

<210>13

<211>1161

<212>DNA

<213>拟南芥

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1161)

<400>13

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1               5                   10                  15

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Arg Asp Leu Thr Ser Val Glu Glu Leu Glu Glu Ser Cys Glu Val Gly

            20                  25                  30

tct tta tta gtg gat ctc atg ggt gac cct ctt gcc cgg atc cga caa    144

Ser Leu Leu Val Asp Leu Met Gly Asp Pro Leu Ala Arg Ile Arg Gln

        35                  40                  45

tct cct tct ttc cac atg ctg gtg gca gag atc ggt aat gag ata gtc    192

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    50                  55                  60

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Gly Met Ile Arg Gly Thr Ile Lys Met Val Thr Arg Gly Val Asn Ala

65                  70                  75                  80

tta cgt caa gcc gac gac gtt tcg ccg gaa ata aac acc acc aaa ctt    288

Leu Arg Gln Ala Asp Asp Val Ser Pro Glu Ile Asn Thr Thr Lys Leu

                85                  90                  95

gcc ttc gtc tcc ggc ctt aga gtc tct ccg ttt tac agg agg atg gga    336

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            100                 105                 110

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Ile Gly Leu Lys Leu Val Gln Arg Leu Glu Glu Trp Phe Leu Arg Asn

        115                 120                 125

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    130                 135                 140

gtc aaa ctc ttc acc gag aaa agt ggt tac tcc aaa ttc cgt aca cca    480

Val Lys Leu Phe Thr Glu Lys Ser Gly Tyr Ser Lys Phe Arg Thr Pro

145                 150                 155                 160

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Thr Phe Leu Val Asn Pro Val Phe Asn His Arg Val Thr Val Ser Arg

                165                 170                 175

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Arg Val Lys Ile Ile Lys Leu Ala Pro Ser Asp Ala Glu Ser Leu Tyr

            180                 185                 190

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Arg Asn Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Ser Asp Ile Asn Ser

        195                 200                 205

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Ile Leu Thr Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Tyr Leu Ala Val Pro Arg

    210                 215                 220

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Gly Gly Asp Asn Val Ser Gly Ser Leu Pro Asp Gln Thr Gly Ser Trp

225                 230                 235                 240

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Ala Val Ile Ser Ile Trp Asn Ser Lys Asp Val Tyr Arg Leu Gln Val

                245                 250                 255

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Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Arg Met Leu Ala Lys Ser Thr Arg Val

            260                 265                 270

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Phe Asp Gly Ala Phe Pro Phe Leu Lys Ile Pro Ser Phe Pro Asn Leu

        275                 280                 285

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Phe Lys Ser Phe Ala Met His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly

    290                 295                 300

cca cga gcg gcg gag atg gtg gag gcg ctt tgc tca cac gca cat aac    960

Pro Arg Ala Ala Glu Met Val Glu Ala Leu Cys Ser His Ala His Asn

305                 310                 315                 320

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Leu Ala Arg Lys Ser Gly Cys Ala Val Val Ala Ala Glu Val Ala Ser

                325                 330                 335

tgt gag ccg ctc aga gtt ggg att cca cat tgg aag gtg ctc tcg ccg    1056

Cys Glu Pro Leu Arg Val Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu Ser Pro

            340                 345                 350

gag gat ttg tgg tgt ttg aaa cgt ctc cga tat gac gat gac ggc gta    1104

Glu Asp Leu Trp Cys Leu Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Asp Asp Gly Val

        355                 360                 365

gac tgg acc aag tca cca cct gga ttg tct att ttc gtt gac cct aga    1152

Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Leu Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg

    370                 375                 380

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Glu Ile

385

<210>14

<211>386

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>14

Met Gly Lys Gly Phe Asn Val Val Val Val Arg Glu Tyr Asp Pro Lys

151015

Arg Asp Leu Thr Ser Val Glu Glu Leu Glu Glu Ser Cys Glu Val Gly

            20                  25                  30

Ser Leu Leu Val Asp Leu Met Gly Asp Pro Leu Ala Arg Ile Arg Gln

        35                  40                  45

Ser Pro Ser Phe His Met Leu Val Ala Glu Ile Gly Asn Glu Ile Val

    50                  55                  60

Gly Met Ile Arg Gly Thr Ile Lys Met Val Thr Arg Gly Val Asn Ala

65                  70                  75                  80

Leu Arg Gln Ala Asp Asp Val Ser Pro Glu Ile Asn Thr Thr Lys Leu

                85                  90                  95

Ala Phe Val Ser Gly Leu Arg Val Ser Pro Phe Tyr Arg Arg Met Gly

            100                 105                 110

Ile Gly Leu Lys Leu Val Gln Arg Leu Glu Glu Trp Phe Leu Arg Asn

        115                 120                 125

Asp Ala Val Tyr Ser Tyr Val Gln Thr Glu Asn Asp Asn Ile Ala Ser

    130                 135                 140

Val Lys Leu Phe Thr Glu Lys Ser Gly Tyr Ser Lys Phe Arg Thr Pro

145                 150                 155                 160

Thr Phe Leu Val Asn Pro Val Phe Asn His Arg Val Thr Val Ser Arg

                165                 170                 175

Arg Val Lys Ile Ile Lys Leu Ala Pro Ser Asp Ala Glu Ser Leu Tyr

            180                 185                 190

Arg Asn Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Ser Asp Ile Asn Ser

        195                 200                 205

Ile Leu Thr Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Tyr Leu Ala Val Pro Arg

    210                 215                 220

Gly Gly Asp Asn Val Ser Gly Ser Leu Pro Asp Gln Thr Gly Ser Trp

225                 230                 235                 240

Ala Val Ile Ser Ile Trp Asn Ser Lys Asp Val Tyr Arg Leu Gln Val

                245                 250                 255

Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Arg Met Leu Ala Lys Ser Thr Arg Val

            260                 265                 270

Phe Asp Gly Ala Phe Pro Phe Leu Lys Ile Pro Ser Phe Pro Asn Leu

        275                 280                 285

Phe Lys Ser Phe Ala Met His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly

    290                 295                 300

Pro Arg Ala Ala Glu Met Val Glu Ala Leu Cys Ser His Ala His Asn

305                 310                 315                 320

Leu Ala Arg Lys Ser Gly Cys Ala Val Val Ala Ala Glu Val Ala Ser

                325                 330                 335

Cys Glu Pro Leu Arg Val Gly Ile Pro His Trp Lys Val Leu Ser Pro

            340                 345                 350

Glu Asp Leu Trp Cys Leu Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Asp Asp Gly Val

        355                 360                 365

Asp Trp Thr Lys Ser Pro Pro Gly Leu Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg

    370                 375                 380

Glu Ile

385

<210>15

<211>1194

<212>DNA

<213>稻(日本晴(japonica cultivar-group))

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1194)

<400>15

atg gcg gtg gct tgt ttg ccg gag gac ggc ggc gag gtg gtc ctg gtg    48

Met Ala Val Ala Cys Leu Pro Glu Asp Gly Gly Glu Val Val Leu Val

1               5                   10                  15

cgg gag ttc gac ggc ggc cgc gac cgt ccc ggc gtc gaa ctg gtt gag    96

Arg Glu Phe Asp Gly Gly Arg Asp Arg Pro Gly Val Glu Leu Val Glu

            20                  25                  30

cgc gcc tgc gag gtg ggt ccg agc ggc ggc aag ctc tgc ctc ttc acc    144

Arg Ala Cys Glu Val Gly Pro Ser Gly Gly Lys Leu Cys Leu Phe Thr

        35                  40                  45

gac ctc ctc ggc gac ccg ctc tgc cgc gtc cgc cac tcg ccg gcc tac    192

Asp Leu Leu Gly Asp Pro Leu Cys Arg Val Arg His Ser Pro Ala Tyr

    50                  55                  60

ctc atg ctc gtc gcg gag gct gtg ggt ggc ccg ctc ggc acg gag atc    240

Leu Met Leu Val Ala Glu Ala Val Gly Gly Pro Leu Gly Thr Glu Ile

65                  70                  75                  80

gtc ggc gtc gtg cgc ggc tgc gtc aag acc gtg gcg tgc ggg cgc agc    288

Val Gly Val Val Arg Gly Cys Val Lys Thr Val Ala Cys Gly Arg Ser

                85                  90                  95

cag ctc ttc tcc aag gtg gcg tac ctg ctc ggc ctc cgg gtc tcg ccg    336

Gln Leu Phe Ser Lys Val Ala Tyr Leu Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro

            100                 105                 110

cgc cac cgg cgg cga ggg atc ggg agg agg ctg gtg gag agg atg gag    384

Arg His Arg Arg Arg Gly Ile Gly Arg Arg Leu Val Glu Arg Met Glu

        115                 120                 125

gag tgg ttc cgg gag atg ggc gcc gag tac gcc tac gtc gcc acc gac    432

Glu Trp Phe Arg Glu Met Gly Ala Glu Tyr Ala Tyr Val Ala Thr Asp

    130                 135                 140

cgc gac aac gag ccc tcg gtg cgc ctc ttc acc ggc gcc tgc ggc tac    480

Arg Asp Asn Glu Pro Ser Val Arg Leu Phe Thr Gly Ala Cys Gly Tyr

145                 150                 155                 160

gcc aag ttc cgc acg ccg tcg gtg ctc gtg cac ccg gtg ttc ggc cac    528

Ala Lys Phe Arg Thr Pro Ser Val Leu Val His Pro Val Phe Gly His

                165                 170                 175

gac ctc gcg ccg tcg cgg cgc gcc gcc gtc gtc cgc ctc gac gcg cgc    576

Asp Leu Ala Pro Ser Arg Arg Ala Ala Val Val Arg Leu Asp Ala Arg

            180                 185                 190

gag gcc gag ctg ctg tac cgc cgc cgc ctc ggc tcc gtg gag ttc ttc    624

Glu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Arg Arg Leu Gly Ser Val Glu Phe Phe

195                 200                 205

ccg cgg gac atc gac gcc gtg ctc tcc aac gcc ctg tcg ctc ggc acg    672

Pro Arg Asp Ile Asp Ala Val Leu Ser Asn Ala Leu Ser Leu Gly Thr

                210                 215                 220

ttc ctg gcc gtg ccg cgc ggg acg cgg tgg cgc ggc gtg gag ggg ttc    720

Phe Leu Ala Val Pro Arg Gly Thr Arg Trp Arg Gly Val Glu Gly Phe

225                 230                 235                 240

ctg gcc tcg ccg ccg gcg tcg tgg gcg gtg gcc agc ctg tgg aac tgc    768

Leu Ala Ser Pro Pro Ala Ser Trp Ala Val Ala Ser Leu Trp Asn Cys

                245                 250                 255

aaa gac gcg ttc cgc ctc gag gtg cgc ggc gcg ccg cgg ctg tgg cgc    816

Lys Asp Ala Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Pro Arg Leu Trp Arg

            260                 265                 270

gcg gcc gcc cgc gcg acg cgc gcc gcc gac cgc gcc gcg ccg tgg ctg    864

Ala Ala Ala Arg Ala Thr Arg Ala Ala Asp Arg Ala Ala Pro Trp Leu

        275                 280                 285

ggc atc ccg tcc atc ccg aac ctg ttc gag ccg ttc ggc ctc cac ttc    912

Gly Ile Pro Ser Ile Pro Asn Leu Phe Glu Pro Phe Gly Leu His Phe

    290                 295                 300

gtc tac ggc ctc ggc ggc ggc ggc ccc gcg gcg gcg cgc atg gcg cgg    960

Val Tyr Gly Leu Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ala Ala Arg Met Ala Arg

305                 310                 315                 320

gcg ctg ttc cgg cac gcc cac aac gtg gcg cgg cgc ggc ggg gcg cgc    1008

Ala Leu Phe Arg His Ala His Asn Val Ala Arg Arg Gly Gly Ala Arg

                325                 330                 335

gtg gtg gcc acc gag gtg ggc gcg tgc gag ccg ctc cgc gcc ggc gtg    1056

Val Val Ala Thr Glu Val Gly Ala Cys Glu Pro Leu Arg Ala Gly Val

            340                 345                 350

ccg cac tgg ccg cgc ctc ggc gcc gac gac ctc tgg tgc atc aag cgg    1104

Pro His Trp Pro Arg Leu Gly Ala Asp Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg

        355                 360                 365

ctg gcc gac ggc tac ggc gac ggc gcg ctc ggc gac tgg agc aag gcg    1152

Leu Ala Asp Gly Tyr Gly Asp Gly Ala Leu Gly Asp Trp Ser Lys Ala

    370                 375                 380

ccg ccg gga acc tcc atc ttc gta gac cca agg gag ttt tag            1194

Pro Pro Gly Thr Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

385                 390                 395

<210>16

<211>397

<212>PRT

<213>稻(日本晴)

<400>16

Met Ala Val Ala Cys Leu Pro Glu Asp Gly Gly Glu Val Val Leu Val

1               5                   10                  15

Arg Glu Phe Asp Gly Gly Arg Asp Arg Pro Gly Val Glu Leu Val Glu

            20                  25                  30

Arg Ala Cys Glu Val Gly Pro Ser Gly Gly Lys Leu Cys Leu Phe Thr

        35                  40                  45

Asp Leu Leu Gly Asp Pro Leu Cys Arg Val Arg His Ser Pro Ala Tyr

    50                  55                  60

Leu Met Leu Val Ala Glu Ala Val Gly Gly Pro Leu Gly Thr Glu Ile

65                  70                  75                  80

Val Gly Val Val Arg Gly Cys Val Lys Thr Val Ala Cys Gly Arg Ser

                85                  90                  95

Gln Leu Phe Ser Lys Val Ala Tyr Leu Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro

            100                 105                 110

Arg His Arg Arg Arg Gly Ile Gly Arg Arg Leu Val Glu Arg Met Glu

        115                 120                 125

Glu Trp Phe Arg Glu Met Gly Ala Glu Tyr Ala Tyr Val Ala Thr Asp

    130                 135                 140

Arg Asp Asn Glu Pro Ser Val Arg Leu Phe Thr Gly Ala Cys Gly Tyr

145                 150                 155                 160

Ala Lys Phe Arg Thr Pro Ser Val Leu Val His Pro Val Phe Gly His

                165                 170                 175

Asp Leu Ala Pro Ser Arg Arg Ala Ala Val Val Arg Leu Asp Ala Arg

            180                 185                 190

Glu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Arg Arg Leu Gly Ser Val Glu Phe Phe

        195                 200                 205

Pro Arg Asp Ile Asp Ala Val Leu Ser Asn Ala Leu Ser Leu Gly Thr

    210                 215                 220

Phe Leu Ala Val Pro Arg Gly Thr Arg Trp Arg Gly Val Glu Gly Phe

225                 230                 235                 240

Leu Ala Ser Pro Pro Ala Ser Trp Ala Val Ala Ser Leu Trp Asn Cys

                245                 250                 255

Lys Asp Ala Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Pro Arg Leu Trp Arg

            260                 265                 270

Ala Ala Ala Arg Ala Thr Arg Ala Ala Asp Arg Ala Ala Pro Trp Leu

        275                 280                 285

Gly Ile Pro Ser Ile Pro Asn Leu Phe Glu Pro Phe Gly Leu His Phe

    290                 295                 300

Val Tyr Gly Leu Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ala Ala Arg Met Ala Arg

305                 310                 315                 320

Ala Leu Phe Arg His Ala His Asn Val Ala Arg Arg Gly Gly Ala Arg

                325                 330                 335

Val Val Ala Thr Glu Val Gly Ala Cys Glu Pro Leu Arg Ala Gly Val

            340                 345                 350

Pro His Trp Pro Arg Leu Gly Ala Asp Asp Leu Trp Cys Ile Lys Arg

        355                 360                 365

Leu Ala Asp Gly Tyr Gly Asp Gly Ala Leu Gly Asp Trp Ser Lys Ala

    370                 375                 380

Pro Pro Gly Thr Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

385                 390                 395

<210>17

<211>1266

<212>DNA

<213>稻(日本晴)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1266)

<400>17

atg ggt gag gag gag aag atc atg gca gct ggg aag aag atg gtg aga    48

Met Gly Glu Glu Glu Lys Ile Met Ala Ala Gly Lys Lys Met Val Arg

1               5                   10                  15

gtg agg gag ttc atc atg gag aag gac tta ccg gcg gtg gag gag ctc    96

Val Arg Glu Phe Ile Met Glu Lys Asp Leu Pro Ala Val Glu Glu Leu

            20                  25                  30

gag cgc ctc tgc cag gcc ggc ctc tcc ggc gac aac ggc gcc ggc ggc    144

Glu Arg Leu Cys Gln Ala Gly Leu Ser Gly Asp Asn Gly Ala Gly Gly

        35                  40                  45

ggc ggc ggc aag aag aag aag aga ggc atg tcg ctc tac gcc gag cag    192

Gly Gly Gly Lys Lys Lys Lys Arg Gly Met Ser Leu Tyr Ala Glu Gln

    50                  55                  60

atc ggc gac ccg ttc gcc cgg gtt cgc cat gct ccg gac cac gtc atc    240

Ile Gly Asp Pro Phe Ala Arg Val Arg His Ala Pro Asp His Val Ile

65                  70                  75                  80

ctg gtc gct gag tgt gga gac gag gtc gtg gga gtg atc aag gcg tgt    288

Leu Val Ala Glu Cys Gly Asp Glu Val Val Gly Val Ile Lys Ala Cys

                85                  90                  95

gtc agg atg gtg acc aga ggc agc agc agc agc ttg agg aag acg aag    336

Val Arg Met Val Thr Arg Gly Ser Ser Ser Ser Leu Arg Lys Thr Lys

            100                 105                 110

acg aag acg aac aag ttt gtc aag gcg gcg tgt ctt ctt ggc ctc agg    384

Thr Lys Thr Asn Lys Phe Val Lys Ala Ala Cys Leu Leu Gly Leu Arg

        115                 120                 125

gtg tcg ccg tct cac agg agg ctc ggg atc gcg acg gag ctg gtg cgg    432

Val Ser Pro Ser His Arg Arg Leu Gly Ile Ala Thr Glu Leu Val Arg

    130                 135                 140

aga gcg gag gag tgg tgc gcg gcg agg ggc gcg gcg tac gcg acc atg    480

Arg Ala Glu Glu Trp Cys Ala Ala Arg Gly Ala Ala Tyr Ala Thr Met

145                 150                 155                 160

gcg acg acg gcg tcg aac gcg gcg tcg ctc gcg ctg ttc cag ggc cgg    528

Ala Thr Thr Ala Ser Asn Ala Ala Ser Leu Ala Leu Phe Gln Gly Arg

                165                 170                 175

ttc aag tac gcg ctg ttc cgg aag ccg cgg ttc ctc ggc cac ccc gtg    576

Phe Lys Tyr Ala Leu Phe Arg Lys Pro Arg Phe Leu Gly His Pro Val

            180                 185                 190

cac cgg cac cgg gcg cgc gtc ccg cgc gcg cac cgc gtg ctg cag ctg    624

His Arg His Arg Ala Arg Val Pro Arg Ala His Arg Val Leu Gln Leu

        195                 200                 205

ccg ccg ccg ctc gcc gcg gcg gcc tac gcc gcg ctg ctc ccc gcg gcg    672

Pro Pro Pro Leu Ala Ala Ala Ala Tyr Ala Ala Leu Leu Pro Ala Ala

    210                 215                 220

gcg gcg gcg ccc gag ttc gtc ccc gcc gac ctc ccg gcg ctc ctc gcg    720

Ala Ala Ala Pro Glu Phe Val Pro Ala Asp Leu Pro Ala Leu Leu Ala

225                 230                 235                 240

cac aag ctc acc cgc ggc acg tac ctc gcc gtc gag cgg agc ccc ggc    768

His Lys Leu Thr Arg Gly Thr Tyr Leu Ala Val Glu Arg Ser Pro Gly

                245                 250                 255

gcc ggc gcg ccg tcg tcg ttt gcg gtg ctc agc gtg tac gac gcc acg    816

Ala Gly Ala Pro Ser Ser Phe Ala Val Leu Ser Val Tyr Asp Ala Thr

            260                 265                 270

cgc tcc ctc agc ttc cgc gtc ggc ggc gcg ccg ccg ctg ctc cgc gcg    864

Arg Ser Leu Ser Phe Arg Val Gly Gly Ala Pro Pro Leu Leu Arg Ala

        275                 280                 285

tcg ctc gcc gcg gcg cgc gcg ctc gac cgc cgc gcg ccg tgg ctg cgc    912

Ser Leu Ala Ala Ala Arg Ala Leu Asp Arg Arg Ala Pro Trp Leu Arg

    290                 295                 300

gtc cct tcc gtc ccc gac gtc ttc cgc ccc ttc ggc gcc tac ctc ctc    960

Val Pro Ser Val Pro Asp Val Phe Arg Pro Phe Gly Ala Tyr Leu Leu

305                 310                 315                 320

tac ggc ctc cac atg tcc ggc ccg gcg ggc gcc gcg ctc ctc cgc acg    1008

Tyr Gly Leu His Met Ser Gly Pro Ala Gly Ala Ala Leu Leu Arg Thr

                325                 330                 335

ctc tgc cgc cac gcc cac aac gtg gcg cgc aac aac ccg gcg tgc gcc    1056

Leu Cys Arg His Ala His Asn Val Ala Arg Asn Asn Pro Ala Cys Ala

            340                 345                 350

gtc gtc gcc gcc gac gtc gcg ccc gac gac ccg gcc gcc gcc gcc gtg    1104

Val Val Ala Ala Asp Val Ala Pro Asp Asp Pro Ala Ala Ala Ala Val

        355                 360                 365

ccg cac tgg cga cgc ttc tca tgc gac gag gac gtc tgg tgc atc aag    1152

Pro His Trp Arg Arg Phe Ser Cys Asp Glu Asp Val Trp Cys Ile Lys

    370                 375                 380

aaa atc acg tcc gtc gcc gcc aac ggc aat gcc gcc ccc gcc gcc ggc    1200

Lys Ile Thr Ser Val Ala Ala Asn Gly Asn Ala Ala Pro Ala Ala Gly

385                 390                 395                 400

gac gac gac gac tgg acg acg gcg ccg ccg tcg tcc gtc ctg ttc gtg    1248

Asp Asp Asp Asp Trp Thr Thr Ala Pro Pro Ser Ser Val Leu Phe Val

                405                 410                 415

gac cct cgg gaa ttc tga                                               1266

Asp Pro Arg Glu Phe

            420

<210>18

<211>421

<212>PRT

<213>稻(日本晴)

<400>18

Met Gly Glu Glu Glu Lys Ile Met Ala Ala Gly Lys Lys Met Val Arg

1               5                   10                  15

Val Arg Glu Phe Ile Met Glu Lys Asp Leu Pro Ala Val Glu Glu Leu

            20                  25                  30

Glu Arg Leu Cys Gln Ala Gly Leu Ser Gly Asp Asn Gly Ala Gly Gly

        35                  40                  45

Gly Gly Gly Lys Lys Lys Lys Arg Gly Met Ser Leu Tyr Ala Glu Gln

    50                  55                  60

Ile Gly Asp Pro Phe Ala Arg Val Arg His Ala Pro Asp His Val Ile

65                  70                  75                  80

Leu Val Ala Glu Cys Gly Asp Glu Val Val Gly Val Ile Lys Ala Cys

                85                  90                  95

Val Arg Met Val Thr Arg Gly Ser Ser Ser Ser Leu Arg Lys Thr Lys

            100                 105                 110

Thr Lys Thr Asn Lys Phe Val Lys Ala Ala Cys Leu Leu Gly Leu Arg

        115                 120                 125

Val Ser Pro Ser His Arg Arg Leu Gly Ile Ala Thr Glu Leu Val Arg

    130                 135                 140

Arg Ala Glu Glu Trp Cys Ala Ala Arg Gly Ala Ala Tyr Ala Thr Met

145                 150                 155                 160

Ala Thr Thr Ala Ser Asn Ala Ala Ser Leu Ala Leu Phe Gln Gly Arg

                165                 170                 175

Phe Lys Tyr Ala Leu Phe Arg Lys Pro Arg Phe Leu Gly His Pro Val

            180                 185                 190

His Arg His Arg Ala Arg Val Pro Arg Ala His Arg Val Leu Gln Leu

        195                 200                 205

Pro Pro Pro Leu Ala Ala Ala Ala Tyr Ala Ala Leu Leu Pro Ala Ala

    210                 215                 220

Ala Ala Ala Pro Glu Phe Val Pro Ala Asp Leu Pro Ala Leu Leu Ala

225                 230                 235                 240

His Lys Leu Thr Arg Gly Thr Tyr Leu Ala Val Glu Arg Ser Pro Gly

                245                 250                 255

Ala Gly Ala Pro Ser Ser Phe Ala Val Leu Ser Val Tyr Asp Ala Thr

            260                 265                 270

Arg Ser Leu Ser Phe Arg Val Gly Gly Ala Pro Pro Leu Leu Arg Ala

        275                 280                 285

Ser Leu Ala Ala Ala Arg Ala Leu Asp Arg Arg Ala Pro Trp Leu Arg

    290                 295                 300

Val Pro Ser Val Pro Asp Val Phe Arg Pro Phe Gly Ala Tyr Leu Leu

305                 310                 315                 320

Tyr Gly Leu His Met Ser Gly Pro Ala Gly Ala Ala Leu Leu Arg Thr

                325                 330                 335

Leu Cys Arg His Ala His Asn Val Ala Arg Asn Asn Pro Ala Cys Ala

            340                 345                 350

Val Val Ala Ala Asp Val Ala Pro Asp Asp Pro Ala Ala Ala Ala Val

        355                 360                 365

Pro His Trp Arg Arg Phe Ser Cys Asp Glu Asp Val Trp Cys Ile Lys

    370                 375                 380

Lys Ile Thr Ser Val Ala Ala Asn Gly Asn Ala Ala Pro Ala Ala Gly

385                 390                 395                 400

Asp Asp Asp Asp Trp Thr Thr Ala Pro Pro Ser Ser Val Leu Phe Val

                405                 410                 415

Asp Pro Arg Glu Phe

            420

<210>19

<211>1200

<212>DNA

<213>稻(日本晴)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1200)

<400>19

atg gag gtg gtg gag gtg cgt gag tac agg gag gac cgg gac cgc gcc    48

Met Glu Val Val Glu Val Arg Glu Tyr Arg Glu Asp Arg Asp Arg Ala

1               5                   10                  15

gcc gtc gag gag gtg gag cgg gag tgc gag gtg ggc tcc tcc ggc ggc    96

Ala Val Glu Glu Val Glu Arg Glu Cys Glu Val Gly Ser Ser Gly Gly

            20                  25                  30

ggc gaa gcc aag atg tgc ctg ttc acg gat ctc ctc ggc gac ccg ctc    144

Gly Glu Ala Lys Met Cys Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Leu

        35                  40                  45

tgc cgc att cgc aac tcg ccg gcc tac ctc atg ctg gta gcg gag aca    192

Cys Arg Ile Arg Asn Ser Pro Ala Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Thr

    50                  55                  60

gcg aac ggc ggc ggc ggc ggc aat ggc agg gag atc atc ggc ctc atc    240

Ala Asn Gly Gly Gly Gly Gly Asn Gly Arg Glu Ile Ile Gly Leu Ile

65                  70                  75                  80

cgc ggt tgc gtc aag acc gtc gtc tcc ggc ggc agc gtc cag gcc ggc    288

Arg Gly Cys Val Lys Thr Val Val Ser Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly

                85                  90                  95

aag gac ccc atc tac tcc aag gtc gcc tac atc ctc ggc ctt cgc gtc    336

Lys Asp Pro Ile Tyr Ser Lys Val Ala Tyr Ile Leu Gly Leu Arg Val

            100                 105                 110

tcg cct cgt tac cgg agg aag ggg gtg ggg aag aag ctg gtg ggc agg    384

Ser Pro Arg Tyr Arg Arg Lys Gly Val Gly Lys Lys Leu Val Gly Arg

        115                 120                 125

atg gag gag tgg ttc cgg cag agc ggg gcg gag tac tcg tac atg gcg    432

Met Glu Glu Trp Phe Arg Gln Ser Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Met Ala

    130                 135                 140

acg gag cag gac aac gag gcg tcg gtg cgc ctc ttc acc ggc cgc tgc    480

Thr Glu Gln Asp Asn Glu Ala Ser Val Arg Leu Phe Thr Gly Arg Cys

145                 150                 155                 160

ggc tac tcc aag ttc cgg acg ccg tcg gtg ctc gtg cac ccg gtg ttc    528

Gly Tyr Ser Lys Phe Arg Thr Pro Ser Val Leu Val His Pro Val Phe

                165                 170                 175

ggc cac gcg ctc cag ccc tcg cgc aac gcc gcc atc agg aag ctc gag    576

Gly His Ala Leu Gln Pro Ser Arg Asn Ala Ala Ile Arg Lys Leu Glu

            180                 185                 190

ccg cgc gag gcc gag ctg ctg tac cgg tgg cac ttc gcc gcc gtc gag    624

Pro Arg Glu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Trp His Phe Ala Ala Val Glu

        195                 200                 205

ttc ttc ccc gcc gac atc gac gcc gtg ctg tcc aag gag ctc tcg ctc    672

Phe Phe Pro Ala Asp Ile Asp Ala Val Leu Ser Lys Glu Leu Ser Leu

    210                 215                 220

ggg acg ttc ctg gcc gtg ccg gcc ggg acg cgg tgg gag agc gtc gag    720

Gly Thr Phe Leu Ala Val Pro Ala Gly Thr Arg Trp Glu Ser Val Glu

225                 230                 235                 240

gcg ttc atg gac gcg cca ccg gcg tcg tgg gca gtg atg agc gtg tgg    768

Ala Phe Met Asp Ala Pro Pro Ala Ser Trp Ala Val Met Ser Val Trp

                245                 250                 255

aac tgc atg gac gcc ttc cgc ctc gag gtg cgg ggc gcc ccg cgc ctg    816

Asn Cys Met Asp Ala Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Pro Arg Leu

            260                 265                 270

atg cgc gcc gcg gcg gtc gcg acg cgg ctg gtg gac cgc gcg gcg ccg    864

Met Arg Ala Ala Ala Val Ala Thr Arg Leu Val Asp Arg Ala Ala Pro

        275                 280                 285

tgg ctc aag atc ccg tcc atc ccg aac ctc ttc gcg ccc ttc ggc ctc    912

Trp Leu Lys Ile Pro Ser Ile Pro Asn Leu Phe Ala Pro Phe Gly Leu

    290                 295                 300

tac ttc ctc tac ggc gtc ggc ggc gcc ggc ccg gcc tcc ccg cgg ctc    960

Tyr Phe Leu Tyr Gly Val Gly Gly Ala Gly Pro Ala Ser Pro Arg Leu

305                 310                 315                 320

gtc cgc gcg ctg tgc cgc cac gcc cac aac atg gcc cgc aag ggc ggc    1008

Val Arg Ala Leu Cys Arg His Ala His Asn Met Ala Arg Lys Gly Gly

                325                 330                 335

tgc ggc gtg gtc gcc acc gag gtc tcc gcc tgc gag ccc gtc cgc gcc    1056

Cys Gly Val Val Ala Thr Glu Val Ser Ala Cys Glu Pro Val Arg Ala

            340                 345                 350

ggc gtg ccg cac tgg gcg cgc ctc ggc gcc gag gac ctc tgg tgc atc    1104

Gly Val Pro His Trp Ala Arg Leu Gly Ala Glu Asp Leu Trp Cys Ile

        355                 360                 365

aag cgt ctc gcc gac ggc tac aac cac ggc ccg ctc ggc gac tgg acc    1152

Lys Arg Leu Ala Asp Gly Tyr Asn His Gly Pro Leu Gly Asp Trp Thr

    370                 375                 380

aag gcg ccg ccg ggc cgc tcc atc ttc gtc gac cca aga gag ttt        1197

Lys Ala Pro Pro Gly Arg Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

385                 390                 395

tag                                                                1200

<210>20

<211>399

<212>PRT

<213>稻(日本晴)

<400>20

Met Glu Val Val Glu Val Arg Glu Tyr Arg Glu Asp Arg Asp Arg Ala

1               5                   10                  15

Ala Val Glu Glu Val Glu Arg Glu Cys Glu Val Gly Ser Ser Gly Gly

            20                  25                  30

Gly Glu Ala Lys Met Cys Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Leu

        35                  40                  45

Cys Arg Ile Arg Asn Ser Pro Ala Tyr Leu Met Leu Val Ala Glu Thr

    50                  55                  60

Ala Asn Gly Gly Gly Gly Gly Asn Gly Arg Glu Ile Ile Gly Leu Ile

65                  70                  75                  80

Arg Gly Cys Val Lys Thr Val Val Ser Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly

                85                  90                  95

Lys Asp Pro Ile Tyr Ser Lys Val Ala Tyr Ile Leu Gly Leu Arg Val

            100                 105                 110

Ser Pro Arg Tyr Arg Arg Lys Gly Val Gly Lys Lys Leu Val Gly Arg

        115                 120                 125

Met Glu Glu Trp Phe Arg Gln Ser Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Met Ala

    130                 135                 140

Thr Glu Gln Asp Asn Glu Ala Ser Val Arg Leu Phe Thr Gly Arg Cys

145                 150                 155                 160

Gly Tyr Ser Lys Phe Arg Thr Pro Ser Val Leu Val His Pro Val Phe

                165                 170                 175

Gly His Ala Leu Gln Pro Ser Arg Asn Ala Ala Ile Arg Lys Leu Glu

            180                 185                 190

Pro Arg Glu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Trp His Phe Ala Ala Val Glu

        195                 200                 205

Phe Phe Pro Ala Asp Ile Asp Ala Val Leu Ser Lys Glu Leu Ser Leu

    210                 215                 220

Gly Thr Phe Leu Ala Val Pro Ala Gly Thr Arg Trp Glu Ser Val Glu

225                 230                 235                 240

Ala Phe Met Asp Ala Pro Pro Ala Ser Trp Ala Val Met Ser Val Trp

                245                 250                 255

Asn Cys Met Asp Ala Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Pro Arg Leu

            260                 265                 270

Met Arg Ala Ala Ala Val Ala Thr Arg Leu Val Asp Arg Ala Ala Pro

        275                 280                 285

Trp Leu Lys Ile Pro Ser Ile Pro Asn Leu Phe Ala Pro Phe Gly Leu

    290                 295                 300

Tyr Phe Leu Tyr Gly Val Gly Gly Ala Gly Pro Ala Ser Pro Arg Leu

305                 310                 315                 320

Val Arg Ala Leu Cys Arg His Ala His Asn Met Ala Arg Lys Gly Gly

                325                 330                 335

Cys Gly Val Val Ala Thr Glu Val Ser Ala Cys Glu Pro Val Arg Ala

            340                 345                 350

Gly Val Pro His Trp Ala Arg Leu Gly Ala Glu Asp Leu Trp Cys Ile

        355                 360                 365

Lys Arg Leu Ala Asp Gly Tyr Asn His Gly Pro Leu Gly Asp Trp Thr

    370                 375                 380

Lys Ala Pro Pro Gly Arg Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

385                 390                 395

<210>21

<211>1260

<212>DNA

<213>稻

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1260)

<400>21

atg gtg gag acg acg acg atg atg aag gtg ttg gtg agg gtg agg gag    48

Met Val Glu Thr Thr Thr Met Met Lys Val Leu Val Arg Val Arg Glu

1               5                   10                  15

ttc gac gtg gag aag gac ttg ccg gcg gtg gag gag ctg gag cgg cgg    96

Phe Asp Val Glu Lys Asp Leu Pro Ala Val Glu Glu Leu Glu Arg Arg

            20                  25                  30

tgc cag gtc ggc ctg tcc ggc gac atg gcc gcg gtt cac gac cac gcc    144

Cys Gln Val Gly Leu Ser Gly Asp Met Ala Ala Val His Asp His Ala

        35                  40                  45

gac gac ggc gac ggc gcc gcc gcc aag gag aag aag aag acc aag acg    192

Asp Asp Gly Asp Gly Ala Ala Ala Lys Glu Lys Lys Lys Thr Lys Thr

    50                  55                  60

aag acg aag aag aag aag gcg agc atg tct ctc tgc gtc gag cag atc    240

Lys Thr Lys Lys Lys Lys Ala Ser Met Ser Leu Cys Val Glu Gln Ile

65                  70                  75                  80

ggc gac ccg ctc gcc aga gtc cgc cac gcc ccg gaa cac gtc atg ctg    288

Gly Asp Pro Leu Ala Arg Val Arg His Ala Pro Glu His Val Met Leu

                85                  90                  95

gtg gcg gag tac ggc gag gag gag gag aag aag aag gtg gtg ggt gtg    336

Val Ala Glu Tyr Gly Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Val Val Gly Val

            100                 105                 110

atc aag gcg tgc gtg aag acg gtg agc cgt ggc ggg aag cag gag aag    384

Ile Lys Ala Cys Val Lys Thr Val Ser Arg Gly Gly Lys Gln Glu Lys

        115                 120                 125

cca ttc gtg aag gtc gcc aac ctc ctc ggc ctc agg gtg tcg cca tct    432

Pro Phe Val Lys Val Ala Asn Leu Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Ser

    130                 135                 140

cac agg cgg ctg ggg atc ggg acg gcg ctg gtg agg cgg gcg gag gag    480

His Arg Arg Leu Gly Ile Gly Thr Ala Leu Val Arg Arg Ala Glu Glu

145                 150                 155                 160

tgg tgc gtg gcg agg gga gcg gag cac gcg acg atg gcg acg acg gag    528

Trp Cys Val Ala Arg Gly Ala Glu His Ala Thr Met Ala Thr Thr Glu

                165                 170                 175

tcg aac gcg gcg tcg ctg gcg ctg ttc acg ggg agg ttc ggg tac gcg    576

Ser Asn Ala Ala Ser Leu Ala Leu Phe Thr Gly Arg Phe Gly Tyr Ala

            180                 185                 190

ccg ttc agg cgg ccg gag ttc atc ggc cac ccg gtg cac gcg cac cgg    624

Pro Phe Arg Arg Pro Glu Phe Ile Gly His Pro Val His Ala His Arg

        195                 200                 205

ctg ccg gtg gcg agg ggg cac cgc gtg ttc cag ctg ccc ccc gag gtc    672

Leu Pro Val Ala Arg Gly His Arg Val Phe Gln Leu Pro Pro Glu Val

    210                 215                 220

gcc gcg gcg gcg tac gcg cgg ctg ctc ccg ccg cag gac gcc gag ttc    720

Ala Ala Ala Ala Tyr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Glu Phe

225                 230                 235                 240

ctc ccc gcc gac atg ccc gcg ctg ctc gca cac aag ctc acc ctc ggc    768

Leu Pro Ala Asp Met Pro Ala Leu Leu Ala His Lys Leu Thr Leu Gly

                245                 250                 255

acc ttc gtc gcc gtc gcc gct gac ggc gcg tcg ttc gcc gtg ctc agc    816

Thr Phe Val Ala Val Ala Ala Asp Gly Ala Ser Phe Ala Val Leu Ser

            260                 265                 270

gtc tgg gac tcc aca cgc tcg ctc agc ctc cgc gtg agc ggc gcc ccg    864

Val Trp Asp Ser Thr Arg Ser Leu Ser Leu Arg Val Ser Gly Ala Pro

        275                 280                 285

gcg ctg ctc cgc gcg tcg ctc gcc gcg ctc cgg gcg ctc gac cgc ggt    912

Ala Leu Leu Arg Ala Ser Leu Ala Ala Leu Arg Ala Leu Asp Arg Gly

    290                 295                 300

gcg ccg tgg ctg cac ctc ccc tcc atc ccg gac atc ttc cgc ccc ttc    960

Ala Pro Trp Leu His Leu Pro Ser Ile Pro Asp Ile Phe Arg Pro Phe

305                 310                 315                 320

ggc gcc tac ctc ctc tac ggc ctc cgc atg tcc ggc ccg gac ggc ccg    1008

Gly Ala Tyr Leu Leu Tyr Gly Leu Arg Met Ser Gly Pro Asp Gly Pro

                325                 330                 335

gcg ctg ctc cgg tcg ctc tgc cac cac gcc cac aac gtc gcc cgc aag    1056

Ala Leu Leu Arg Ser Leu Cys His His Ala His Asn Val Ala Arg Lys

            340                 345                 350

aac ccg gcg tgc gcc gtc gtc gcc gcc gac atc tcc ccc gac gac ccg    1104

Asn Pro Ala Cys Ala Val Val Ala Ala Asp Ile Ser Pro Asp Asp Pro

        355                 360                 365

gcc gcc gcc gcc gtc ccg cgg tgg cgc cgc ttc tgc tgc gac gag gac    1152

Ala Ala Ala Ala Val Pro Arg Trp Arg Arg Phe Cys Cys Asp Glu Asp

    370                 375                 380

gtc tgg tgc atc aag aac ctc aac ccg gac gaa cac gac gcc gac gac    1200

Val Trp Cys Ile Lys Asn Leu Asn Pro Asp Glu His Asp Ala Asp Asp

385                 390                 395                 400

tgg gcg gcg ccg ccg ccg ccg ccg gga cgc cac ctc ttc gtc gac ccc    1248

Trp Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Gly Arg His Leu Phe Val Asp Pro

                405                 410                 415

cgc gag ttc taa                                                    1260

Arg Glu Phe

<210>22

<211>419

<212>PRT

<213>稻

<400>22

Met Val Glu Thr Thr Thr Met Met Lys Val Leu Val Arg Val Arg Glu

1               5                   10                  15

Phe Asp Val Glu Lys Asp Leu Pro Ala Val Glu Glu Leu Glu Arg Arg

            20                  25                  30

Cys Gln Val Gly Leu Ser Gly Asp Met Ala Ala Val His Asp His Ala

        35                  40                  45

Asp Asp Gly Asp Gly Ala Ala Ala Lys Glu Lys Lys Lys Thr Lys Thr

    50                  55                  60

Lys Thr Lys Lys Lys Lys Ala Ser Met Ser Leu Cys Val Glu Gln Ile

65                  70                  75                  80

Gly Asp Pro Leu Ala Arg Val Arg His Ala Pro Glu His Val Met Leu

                85                  90                  95

Val Ala Glu Tyr Gly Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Val Val Gly Val

            100                 105                 110

Ile Lys Ala Cys Val Lys Thr Val Ser Arg Gly Gly Lys Gln Glu Lys

        115                 120                 125

Pro Phe Val Lys Val Ala Asn Leu Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Ser

    130                 135                 140

His Arg Arg Leu Gly Ile Gly Thr Ala Leu Val Arg Arg Ala Glu Glu

145                 150                 155                 160

Trp Cys Val Ala Arg Gly Ala Glu His Ala Thr Met Ala Thr Thr Glu

                165                 170                 175

Ser Asn Ala Ala Ser Leu Ala Leu Phe Thr Gly Arg Phe Gly Tyr Ala

            180                 185                 190

Pro Phe Arg Arg Pro Glu Phe Ile Gly His Pro Val His Ala His Arg

        195                 200                 205

Leu Pro Val Ala Arg Gly His Arg Val Phe Gln Leu Pro Pro Glu Val

    210                 215                 220

Ala Ala Ala Ala Tyr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Glu Phe

225                 230                 235                 240

Leu Pro Ala Asp Met Pro Ala Leu Leu Ala His Lys Leu Thr Leu Gly

                245                 250                 255

Thr Phe Val Ala Val Ala Ala Asp Gly Ala Ser Phe Ala Val Leu Ser

            260                 265                 270

Val Trp Asp Ser Thr Arg Ser Leu Ser Leu Arg Val Ser Gly Ala Pro

        275                 280                 285

Ala Leu Leu Arg Ala Ser Leu Ala Ala Leu Arg Ala Leu Asp Arg Gly

    290                 295                 300

Ala Pro Trp Leu His Leu Pro Ser Ile Pro Asp Ile Phe Arg Pro Phe

305                 310                 315                 320

Gly Ala Tyr Leu Leu Tyr Gly Leu Arg Met Ser Gly Pro Asp Gly Pro

                325                 330                 335

Ala Leu Leu Arg Ser Leu Cys His His Ala His Asn Val Ala Arg Lys

            340                 345                 350

Asn Pro Ala Cys Ala Val Val Ala Ala Asp Ile Ser Pro Asp Asp Pro

        355                 360                 365

Ala Ala Ala Ala Val Pro Arg Trp Arg Arg Phe Cys Cys Asp Glu Asp

    370                 375                 380

Val Trp Cys Ile Lys Asn Leu Asn Pro Asp Glu His Asp Ala Asp Asp

385                 390                 395                 400

Trp Ala Ala Pro Pro Pro Pro Pro Gly Arg His Leu Phe Val Asp Pro

                405                 410                 415

Arg Glu Phe

<210>23

<211>1563

<212>DNA

<213>欧洲油菜(Brassica napus)

<220>

<221>CDS

<222>(106)..(1317)

<400>23

accttcctac ctatataaaa ccctatctac ttcactcttc ctctcaactc tctcttcttc  60

tccttgctct gttctttctt ccctctctct ctctagaaag caact atg ata gtg gtt  117

                                                  Met Ile Val Val

                                                  1

aga gaa tac gac cct agc aga gac tta gcc ggt gtg gag gat gta gaa    165

Arg Glu Tyr Asp Pro Ser Arg Asp Leu Ala Gly Val Glu Asp Val Glu

5                   10                  15                  20

cga cgg tgc gag gtc gga cca agc ggc aag ctt tct ctc ttc acc gac    213

Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro Ser Gly Lys Leu Ser Leu Phe Thr Asp

                25                  30                  35

ctt ttg ggt gac ccg ctt tgt agg atc cga cat tca cct tct ttt ctt    261

Leu Leu Gly Asp Pro Leu Cys Arg Ile Arg His Ser Pro Ser Phe Leu

            40                  45                  50

atg ctg gtg gct gag atg ggt acg gag aag aag gag atc gtg ggc atg    309

Met Leu Val Ala Glu Met Gly Thr Glu Lys Lys Glu Ile Val Gly Met

        55                  60                  65

att aga ggt tgc atc aaa acc gtt aca tgt ggc ata aaa ctc gat tta    357

Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val Thr Cys Gly Ile Lys Leu Asp Leu

    70                  75                  80

aat cat aaa tcc caa acc gac acc gtt aaa cct ctt tac act aaa ctc    405

Asn His Lys Ser Gln Thr Asp Thr Val Lys Pro Leu Tyr Thr Lys Leu

85                  90                  95                  100

gcc tac gtt ttg ggc ctc cgt gtc tct cct tct cat agg agg gaa gga    453

Ala Tyr Val Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Ser His Arg Arg Glu Gly

                105                 110                 115

ata ggg ttt aag ctc gtg aag atg atg gaa gaa tgg ttt acg caa acc    501

Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys Met Met Glu Glu Trp Phe Thr Gln Thr

            120                 125                 130

ggc gca gaa tat tcg tat att gca act gaa aac gat aac caa gct tcc    549

Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Ile Ala Thr Glu Asn Asp Asn Gln Ala Ser

        135                 140                 145

att aat ctt ttc acg gga aag tac ggt tac agc aag ttc cgt aaa ccg    597

Ile Asn Leu Phe Thr Gly Lys Tyr Gly Tyr Ser Lys Phe Arg Lys Pro

   150                 155                 160

ccc att ttg gtt aat ccg gtt tac gcc cac cgg gtt aac gtc tca cgt    645

Pro Ile Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala His Arg Val Asn Val Ser Arg

165                 170                 175                 180

caa gta acc atc atc aaa ctg gac ccg gtt gac gca gaa tct ctg tac    693

Gln Val Thr Ile Ile Lys Leu Asp Pro Val Asp Ala Glu Ser Leu Tyr

                185                 190                 195

cgg ctc cgg ttc agt aca aca gag ttt ttc ccg cgg gat att gat tcg    741

Arg Leu Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Arg Asp Ile Asp Ser

            200                 205                 210

gtg ttg aac aac aaa ctg tct ctc gga act ttt gtc gcg gtg cca cgt    789

Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Phe Val Ala Val Pro Arg

        215                 220                 225

ggc agc tgt tat ggg tcc ggg tca gga tca tgg ccc ggt tcg gca aag    837

Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Trp Pro Gly Ser Ala Lys

    230                 235                 240

ttt ctg gag tat aca ccc gag tca tgg gct gtg ttg agc gtt tgg aac    885

Phe Leu Glu Tyr Thr Pro Glu Ser Trp Ala Val Leu Ser Val Trp Asn

245                 250                 255                 260

tgc aaa gac tcg ttt cgg ttg gag gtt cgt ggc gcg tcg agg ttg aga    933

Cys Lys Asp Ser Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala Ser Arg Leu Arg

                265                 270                 275

cgt gta gtg gct acg acg act cgt gtc gtt gat aaa acg ctg ccg ttt    981

Arg Val Val Ala Thr Thr Thr Arg Val Val Asp Lys Thr Leu Pro Phe

            280                 285                 290

ttg aaa ctt cct tcg ata ccg tcg gtg ttt aaa ccg ttt ggt ctt cac    1029

Leu Lys Leu Pro Ser Ile Pro Ser Val Phe Lys Pro Phe Gly Leu His

        295                 300                 305

ttt atg tac ggt atc ggc gga gaa ggc cca cgt gca aca aag atg gtg    1077

Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly Pro Arg Ala Thr Lys Met Val

    310                 315                 320

aag tca ttg tgt ggt cat gca cat aac atg gcg aag aaa gga ggt tgt    1125

Lys Ser Leu Cys Gly His Ala His Asn Met Ala Lys Lys Gly Gly Cys

325                 330                 335                 340

ggt gtt gtt gcg gca gaa gtt gcc gga gca gag ccg tta cgg caa ggg    1173

Gly Val Val Ala Ala Glu Val Ala Gly Ala Glu Pro Leu Arg Gln Gly

                345                 350                 355

ata cct cac tgg aaa gca cta tcg tgt gac gaa gat cta tgg tgc att    1221

Ile Pro His Trp Lys Ala Leu Ser Cys Asp Glu Asp Leu Trp Cys Ile

            360                 365                 370

aaa cgg ctt gga gaa gag tat agt gac ggt gtt gtt ggt gac tgg act    1269

Lys Arg Leu Gly Glu Glu Tyr Ser Asp Gly Val Val Gly Asp Trp Thr

        375                 380                 385

aag tca cta cct ggc act tca atc ttt gtg gat cct aga gaa ttt taa    1317

Lys Ser Leu Pro Gly Thr Ser Ile Phe Val Asp Pro Arg Glu Phe

    390                 395                 400

agttaaaact tattacaacc ttcatgtcat atatatatta ggggggtttc ttgtaagctc  1377

gtgttttgtt ctttttcttg atgggttcag ttttaggaag taatcttttt ttcttctaat  1437

taatcttttt ttttggtgtg ggtgttaata acttagtggt aaggcaaaat ctcctacttt  1497

tggggtttgt gttttcttgt ctgtaaatgg aactagcttt ttaagatcaa aaaaaaaaaa  1557

aaaaaa                                                             1563

<210>24

<211>403

<212>PRT

<213>欧洲油菜

<400>24

Met Ile Val Val Arg Glu Tyr Asp Pro Ser Arg Asp Leu Ala Gly Val

1               5                   10                  15

Glu Asp Val Glu Arg Arg Cys Glu Val Gly Pro Ser Gly Lys Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Phe Thr Asp Leu Leu Gly Asp Pro Leu Cys Arg Ile Arg His Ser

        35                  40                  45

Pro Ser Phe Leu Met Leu Val Ala Glu Met Gly Thr Glu Lys Lys Glu

    50                  55                  60

Ile Val Gly Met Ile Arg Gly Cys Ile Lys Thr Val Thr Cys Gly Ile

65                  70                  75                  80

Lys Leu Asp Leu Asn His Lys Ser Gln Thr Asp Thr Val Lys Pro Leu

                85                  90                  95

Tyr Thr Lys Leu Ala Tyr Val Leu Gly Leu Arg Val Ser Pro Ser His

            100                 105                 110

Arg Arg Glu Gly Ile Gly Phe Lys Leu Val Lys Met Met Glu Glu Trp

        115                 120                 125

Phe Thr Gln Thr Gly Ala Glu Tyr Ser Tyr Ile Ala Thr Glu Asn Asp

    130                 135                 140

Asn Gln Ala Ser Ile Asn Leu Phe Thr Gly Lys Tyr Gly Tyr Ser Lys

145                 150                 155                 160

Phe Arg Lys Pro Pro Ile Leu Val Asn Pro Val Tyr Ala His Arg Val

                165                 170                 175

Asn Val Ser Arg Gln Val Thr Ile Ile Lys Leu Asp Pro Val Asp Ala

            180                 185                 190

Glu Ser Leu Tyr Arg Leu Arg Phe Ser Thr Thr Glu Phe Phe Pro Arg

        195                 200                 205

Asp Ile Asp Ser Val Leu Asn Asn Lys Leu Ser Leu Gly Thr Phe Val

    210                 215                 220

Ala Val Pro Arg Gly Ser Cys Tyr Gly Ser Gly Ser Gly Ser Trp Pro

225                 230                 235                 240

Gly Ser Ala Lys Phe Leu Glu Tyr Thr Pro Glu Ser Trp Ala Val Leu

                245                 250                 255

Ser Val Trp Asn Cys Lys Asp Ser Phe Arg Leu Glu Val Arg Gly Ala

            260                 265                 270

Ser Arg Leu Arg Arg Val Val Ala Thr Thr Thr Arg Val Val Asp Lys

        275                 280                 285

Thr Leu Pro Phe Leu Lys Leu Pro Ser Ile Pro Ser Val Phe Lys Pro

    290                 295                 300

Phe Gly Leu His Phe Met Tyr Gly Ile Gly Gly Glu Gly Pro Arg Ala

305                 310                 315                 320

Thr Lys Met Val Lys Ser Leu Cys Gly His Ala His Asn Met Ala Lys

                325                 330                 335

Lys Gly Gly Cys Gly Val Val Ala Ala Glu Val Ala Gly Ala Glu Pro

            340                 345                 350

Leu Arg Gln Gly Ile Pro His Trp Lys Ala Leu Ser Cys Asp Glu Asp

        355                 360                 365

Leu Trp Cys Ile Lys Arg Leu Gly Glu Glu Tyr Ser Asp Gly Val Val

    370                 375                 380

Gly Asp Trp Thr Lys Ser Leu Pro Gly Thr Ser Ile Phe Val Asp Pro

385                 390                 395                 400

Arg Glu Phe

<210>25

<211>33

<212>DNA

<213>未知的

<220>

<223>AtHLS1正向引物

<400>25

ggggtcgacc caaaacatga cggtggttag aga            33

<210>26

<211>36

<212>DNA

<213>未知的

<220>

<223>AtHLS1反向引物

<400>26

gggttaatta agttttaaaa ttctctaggg tctaca         36

<210>27

<211>20

<212>DNA

<213>未知的

<220>

<223>NOS终止子正向引物

<400>27

tccccgatcg ttcaaacatt                           20

<210>28

<211>25

<212>DNA

<213>未知的

<220>

<223>NOS终止子反向引物

<400>28

ccatctcata aataacgtca tgcat                     25

Claims (48)

1.由分离的核酸转化的转基因作物，其中所述核酸包含选自以下的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸具有至少70％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽具有至少70％序列同一性；以及

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸。

2.权利要求1的转基因作物，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下产量增加。

3.权利要求1的转基因作物，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比对环境胁迫的胁迫耐受性增强。

4.权利要求1的转基因作物，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下根生长增加。

5.权利要求1的转基因作物，其中所述植物是单子叶植物。

6.权利要求1的转基因作物，其中所述植物是双子叶植物。

7.权利要求1的转基因作物，其中所述植物选自以下：玉米、小麦、黑麦、燕麦、黑小麦、稻、大麦、高粱、粟、甘蔗、大豆、花生、棉花、油菜籽、油菜、木薯、胡椒、向日葵、万寿菊、茄科植物、马铃薯、烟草、茄子、番茄、野蚕豆属、豌豆、苜蓿、咖啡、可可、茶、柳属、油椰、椰子、多年生草本植物和牧草作物。

8.权利要求1的转基因作物，其中所述植物是整株植物、植物细胞、植物部分或植物种子。

9.由权利要求1的转基因作物产生的作物种子，其中所述种子包含所述分离的核酸。

10.权利要求9的种子，其中所述种子相对于所述种子的野生型品种在正常或胁迫条件下增加的产量真实遗传。

11.权利要求9的种子，其中所述种子相对于所述种子的野生型品种对于环境胁迫增加的胁迫耐受性真实遗传。

12.权利要求9的种子，其中所述种子相对于所述种子的野生型品种在正常或胁迫条件下增加的根生长真实遗传。

13.产生包含编码多肽的分离的核酸的转基因作物的方法，其中所述方法包含以下步骤：用包含所述核酸的表达载体转化植物细胞；由所述植物细胞产生表达所述多肽的转基因植物，其中所述核酸包含选自以下的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸具有至少70％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽具有至少70％序列同一性；以及

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸。

14.权利要求13的方法，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下产量增加。

15.权利要求13的方法，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比对环境胁迫的胁迫耐受性增强。

16.权利要求13的方法，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下根生长增加。

17.权利要求13的方法，其中所述作物是单子叶植物。

18.权利要求13的方法，其中所述作物是双子叶植物。

19.权利要求13的方法，其中所述作物选自以下：玉米、小麦、黑麦、燕麦、黑小麦、稻、大麦、高粱、粟、甘蔗、大豆、花生、棉花、油菜籽、油菜、木薯、胡椒、向日葵、万寿菊、茄科植物、马铃薯、烟草、茄子、番茄、野蚕豆属、豌豆、苜蓿、咖啡、可可、茶、柳属、油椰、椰子、多年生草本植物和牧草作物。

20.权利要求13的方法，其中所述核酸包含具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸。

21.权利要求13的方法，其中所述核酸包含与具有SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸具有至少70％序列同一性的多核苷酸。

22.权利要求13的方法，其中所述核酸包含编码具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽的多核苷酸。

23.权利要求13的方法，其中所述核酸包含编码与具有SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽具有至少70％序列同一性的多肽的多核苷酸。

24.权利要求13的方法，其中所述核酸与一个或多个调节序列有效连接。

25.权利要求24的方法，其中所述调节序列是启动子。

26.权利要求25的方法，其中所述启动子是组织特异性启动子。

27.权利要求25的方法，其中所述启动子是发育调节性启动子。

28.分离的核酸，其中所述核酸包含选自以下的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：24所示序列的多肽具有至少91％序列同一性；

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸；以及

f)与以上a)到d)的任意多核苷酸互补的多核苷酸。

29.权利要求28的分离的核酸，其中所述核酸包含具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸。

30.权利要求28的分离的核酸，其中所述核酸包含与具有SEQ IDNO：23所示序列的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸。

31.权利要求28的分离的核酸，其中所述核酸包含编码具有SEQ IDNO：24所示序列的多肽的多核苷酸。

32.权利要求28的分离的核酸，其中所述核酸包含编码与具有SEQ IDNO：24所示序列的多肽具有至少91％序列同一性的多肽的多核苷酸。

33.由分离的核酸转化的转基因植物，其中所述核酸包含选自以下的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：23所示序列的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：24所示序列的多肽具有至少91％序列同一性；

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸。

34.权利要求33的转基因植物，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下产量增加。

35.权利要求33的转基因植物，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比对环境胁迫的胁迫耐受性增强。

36.权利要求33的转基因植物，其中在植物中所述多核苷酸的表达导致与所述植物的野生型品种相比在正常或胁迫条件下根生长增加。

37.权利要求33的转基因植物，其中所述植物是整株植物、植物细胞、植物部分或植物种子。

38.由权利要求33的转基因植物产生的植物种子，其中所述种子包含所述分离的核酸。

39.权利要求38的种子，其中所述种子相对于所述种子的野生型品种在正常或胁迫条件下增加的产量真实遗传。

40.权利要求38的种子，其中所述种子相对于所述种子的野生型品种对于环境胁迫增加的胁迫耐受性真实遗传。

41.权利要求38的种子，其中所述种子相对于所述种子的野生型品种在正常或胁迫条件下增加的根生长真实遗传。

42.权利要求33的转基因植物，其中所述植物是单子叶植物。

43.权利要求33的转基因植物，其中所述植物是双子叶植物。

44.包含分离的核酸的重组表达载体，其中所述核酸包含选自以下的多核苷酸：

a)具有SEQ ID NO：3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸；

b)编码具有SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽的多核苷酸；

c)与具有SEQ ID NO：3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23所示序列的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸；

d)编码多肽的多核苷酸，所述多肽与具有SEQ ID NO：4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24所示序列的多肽具有至少91％序列同一性；

e)在严谨条件下与以上a)到d)的任意多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸；以及

f)与以上a)到d)的任意多核苷酸互补的多核苷酸。

45.权利要求44的重组表达载体，其中所述载体进一步包含一个或多个调节序列。

46.权利要求45的重组表达载体，其中所述调节序列是启动子。

47.权利要求46的重组表达载体，其中启动子是组织特异性启动子。

48.权利要求46的重组表达载体，其中启动子是发育调节性启动子。

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