CN101068835A

CN101068835A - 可溶性ZcytoR21、抗ZcytoR21抗体和结合伴侣以及在炎症中的使用方法

Info

Publication number: CN101068835A
Application number: CN 200580041049
Authority: CN
Inventors: Z·高; R·E·库斯特纳; M·W·爱普拜; K·E·勒维斯; P·A·麦克南; S·L·奥卡达; D·W·塔福特; J·L·奎吉珀; S·R·贾斯珀斯; S·D·莱文
Original assignee: Zymogenetics Inc
Current assignee: Zymogenetics Inc
Priority date: 2004-10-18
Filing date: 2005-10-18
Publication date: 2007-11-07
Also published as: ZA200704022B

Abstract

本发明涉及ZcytoR21拮抗剂，例如可溶性受体和抗－ZcytoR21抗体，它们在阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL－17C活性方面是有用的。IL－17C是参与炎症过程和人疾病的细胞因子。ZcytoR21是IL－17C的受体。本发明包含可溶性ZcytoR21、抗ZcytoR21抗体和结合伴侣，以及使用这些可溶性受体、抗体和结合伴侣拮抗IL－17C的方法。

Description

可溶性ZcytoR21、抗ZcytoR21抗体和结合伴侣以及在炎症中的使用方法

技术领域

本发明涉及ZcytoR21拮抗剂，特别是ZcytoR21可溶性受体、抗ZcytoR21抗体和结合伴侣，以及这些可溶性受体、抗体和结合伴侣在炎症中的使用方法。

背景技术

细胞因子是介导各种生物学效应的可溶性小蛋白，所述效应包含生长的调节和许多细胞类型的分化(参见，例如，Arai等人，Annu.Rev.Biochem.59：783(1990)；Mosmann，Curr.Opin.Immunol.3：311(1991)；Paul和Seder，Cell 76：241(1994))。构成细胞因子群体的蛋白质包含白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子和其他调节分子。例如，人白细胞介素-17是刺激白细胞介素-6、细胞内粘着分子1、白细胞介素-8、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和前列腺素E2表达的细胞因子，并且在CD34+造血前体优先地成熟为嗜中性粒细胞中起着重要作用(Yao等人，J.Immunol.155：5483(1995)；Fossiez等人，J.Exp.Med.183：2593(1996))。

结合细胞因子的受体一般由这样的一种或多种整联膜蛋白组成，所述膜蛋白高度亲和性地结合细胞因子并将该结合事件通过某些受体亚基的细胞质部分传导给细胞。基于细胞因子受体的细胞外配体结合结构域的相似性已将其分成几类。

经证明的细胞因子及其受体的体内活性说明其他细胞因子、细胞因子受体、细胞因子激动剂和细胞因子拮抗剂的临床潜能和对其的需要。例如，已证明的促炎细胞因子家族的体内活性说明促炎分子的拮抗剂的巨大临床潜能和对其的需要。

发明内容

广泛的基因组同源性比较导致在IL-17/IL-17R家族内鉴别出5种配体和4种受体平行进化同源物(paralog)。这些中的大多数仍为未配对的孤儿。这个家族中受体-配体对的建立是复杂的，因为几乎所有的IL-17R同系物都由多个剪接变体所表，导致可选择的细胞外结构域。出现的数据提示IL-17C，与IL-17、IL-17A和IL-17F一样，当通过鼻内施用和在小鼠肺中的腺病毒感染表达时，是导致中性白细胞增多症的促炎细胞因子。特别地，促炎细胞因子IL-17C与IL-17具有高度的序列相似性。IL-17是来源于T细胞的细胞因子，它在促炎应答开始时或维持时起重要作用。尽管IL-17的表达限于活化的T细胞，但发现IL-17受体(IL-17R)表达广泛，这个发现与IL-17的多效活性相一致。IL-17C与IL-17相关，具有大约27％的氨基酸同一性。参见，例如，LiH等人，“Cloning and characterization of IL-17B and IL-17C，two newmembers of the IL-17 cytokine family”PNAS 97(2)：773-8(2000)。尽管在细胞因子诱导调查中在活化的T细胞中发现没有IL-17C mRNA的表达，但IL-17C的确刺激肿瘤坏死因子α和IL-1b从单核细胞系THP-1中释放，而IL-17在这个系统中只有微弱的效应。此外，荧光活化细胞分类分析显示IL-17C与THP-1细胞结合。IL-17C在IL-17测定中是无活性的，它也不刺激IL-6从人成纤维细胞中释放，也不与人IL-17受体细胞外结构域结合。这个数据显示存在着在表达和促炎应答模式方面不同的IL-17相关细胞因子家族，所述促炎应答可以通过一组关联的细胞表面受体进行传导。IL-17家族的成员已被牵涉作为促进各种自身免疫疾病和炎性疾病包含类风湿性关节炎和哮喘进程的因子。

已研究了IL-17C与IL-17R家族成员结合的能力。已发现IL-17C与ZcytoR21(也称之为IL-17RE)特异性结合。因此，现在我们报导我们已鉴定了ZcytoR21作为IL-17C的受体。因为其他IL-17家族成员的干涉已被认为是几种自身免疫疾病的有效疗法，因此使用本发明的可溶性受体和抗体作为免疫调节剂例如激动剂和拮抗剂以增强、刺激、促进、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C或ZcytoR21，可能是有利的。本发明通过提供促炎细胞因子IL-17C的拮抗剂来解决这些需要。本发明进一步提供了其在炎性疾病中的用途以及相关的组合物和方法。

A)综述

免疫相关疾病和炎性疾病是非常复杂的、通常为多条相互关联的生物学途径的表现或结果，所述途径在正常生理学中对于对创伤或损伤的应答、启动对创伤或损伤的修复、以及启动组织对抗外来生物的先天性或获得性防御是至关重要的。当这些正常的生理学途径直接由于应答强度的原因、作为不正常的调控或过度刺激、作为对自身反应或作为这些因素的组合的结果而造成另外的创伤或损伤时，疾病或病理状态就发生了。

尽管这些疾病的发生通常包含多步骤途径和通常多个不同的生物学系统/途径，但在这些途径的一个或多个途径的关键点上进行干预可以具有改善或治疗效果。可通过有害过程/途径的拮抗作用或有益过程/途径的刺激作用来进行治疗性干预。

许多免疫相关疾病是已知的并且已被详尽地研究。这些疾病包含免疫介导的炎性疾病(例如类风湿性关节炎、免疫介导的肾病、肝胆管病(hepatobiliary diseases)、炎性肠病(IBD)、牛皮癣和哮喘)、非免疫介导的炎性疾病、传染病、免疫缺陷病、瘤形成等。

T淋巴细胞(T细胞)是哺乳动物免疫应答的重要组成部分。T细胞识别这样的抗原，该抗原和主要组织相容性复合物(MHC)内的基因编码的自体分子关联。可以将所述抗原和MHC分子一起在抗原呈递细胞、病毒感染的细胞、癌细胞、移植物等的表面上展示。T细胞系统消除这些对宿主哺乳动物施以健康威胁的改变的细胞。T细胞包含辅助T细胞和细胞毒性T细胞。辅助T细胞在识别抗原呈递细胞上的抗原-MHC复合物后大量增殖。辅助T细胞也分泌各种细胞因子，即，在B细胞、细胞毒性T细胞和参与免疫应答的各种其他细胞的活化中发挥中心作用的淋巴因子。

体液和细胞介导的免疫应答中的中心事件是辅助T细胞的激活和克隆扩增。通过T细胞受体(TCR)--CD3复合物和抗原呈递细胞的表面上的抗原-MHC的相互作用来启动辅助T细胞的激活。该相互作用介导这样的生物化学事件的级联反应，即其诱导静息辅助T细胞进入细胞周期(G0至G1的转换)和导致IL-2和有时IL-4的高亲和力受体的表达。激活的T细胞继续通过细胞周期进行增殖并分化成记忆细胞或效应细胞。

除了通过TCR介导的信号以外，T细胞的激活还包含通过抗原呈递细胞释放的细胞因子诱导的、或通过抗原呈递细胞和T细胞上的膜结合分子之间的相互作用诱导的另外的共刺激作用。已显示细胞因子IL-1和IL-6提供共刺激信号。在抗原呈递细胞的表面表达的B7分子以及在T细胞表面表达的CD28和CTLA-4分子之间的相互作用影响T细胞的激活。激活的T细胞表达增加数目的细胞粘附分子，例如ICAM-1、整联蛋白integrins、VLA-4、LFA-1、CD56等。

混合淋巴细胞培养物或混合淋巴反应物(MLR)中的T细胞增殖是化合物刺激免疫系统的能力已建立的指征。在许多免疫应答中，炎症细胞浸润损伤或感染的位置。迁移细胞可以是嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞或淋巴细胞，这可通过受影响的组织的组织学检查确定。Current Protocols in Immunology，ed.John E.Coligan，1994，JohnWiley & Sons，Inc.

可通过抑制免疫应答来治疗免疫相关疾病。使用可溶性受体和/或中和抗体在免疫介导的疾病和炎性疾病的治疗上是有益的，所述受体和/或抗体抑制具有免疫刺激活性的分子。可使用(直接地使用蛋白或通过使用抗体激动剂)抑制免疫应答的分子抑制免疫应答，从而改善免疫相关疾病。

IL-17细胞因子/受体家族似乎在细胞因子网络中代表独特的信号转导系统，其为控制免疫和炎症应答提供了创新的方法。因此，本发明基于IL-17C与其孤儿受体ZcytoR21的配对。

这样，IL-17C活性的拮抗剂例如ZcytoR21可溶性受体和针对其的抗体在炎性疾病的治疗中是有用的，特别是在哮喘或牛皮癣的治疗中用作IL-17C的拮抗剂。此外，IL-17C活性的拮抗剂，例如ZcytoR21可溶性受体和针对其的抗体(包含本发明的抗人ZcytoR21单克隆和中和抗体)用于其他炎性疾病的治疗，例如在这样的疾病的治疗中结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C，所述疾病是特应性和接触性皮炎、IBD、结肠炎、内毒素血症、关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、成人呼吸系统疾病(adult respiratory disease，ARD)、脓毒性休克、多器官衰竭、炎性肺损伤例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、气道高反应性(airway hyper-responsiveness)、慢性支气管炎、过敏性哮喘、细菌性肺炎、牛皮癣、湿疹和炎性肠病例如溃疡性结肠炎和克罗恩病、幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori)感染、由于腹膜炎症(即由于感染、损伤等造成的)造成的腹内粘连(intraabdominal adhesions)和/或脓肿、全身性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化症、全身性硬化症、肾病综合征、器官同种异体移植排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、肾、肺、心脏等移植排斥、链球菌细胞壁(SCW)诱导的关节炎、骨关节炎、牙龈炎/牙周炎、疱疹间质角膜炎(herpetic stromal keratitis)、癌症包含前列腺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病、血管生成、再狭窄和川畸病。

细胞因子受体亚基的特征在于包含配体结合结构域和一般参与信号转导的效应结构域的多结构域结构。多聚体细胞因子受体包含单体、同型二聚体(例如，PDGF受体αα和ββ同种型、促红细胞生成素受体、MPL[血小板生成素受体]和G-CSF受体)、其亚基分别具有配体结合和效应结构域的异二聚体(例如，PDGF受体αβ同种型)和具有功能不同的组成亚基的多聚体(例如，IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7和GM-CSF受体)。一些受体亚基对于许多受体是共同的。例如，AIC2B亚基，其不能独自地结合配体但包含细胞内信号转导结构域，其是IL-3和GM-CSF受体的组分。基于其结构和功能，许多细胞因子可被分至4个相关家族中的一个家族。例如，I类造血受体的特征在于存在包含保守的半胱氨酸残基和WSXWS基元的结构域。特征在于二硫键形成的环的其他结构域，包含蛋白激酶结构域、III型纤连蛋白结构域和免疫球蛋白结构域，存在于某些造血受体中。Urdal， Ann.Reports Med.Chem. 26：221-228，1991和Cosman， Cytokine 5：95-106，1993已综述了细胞因子受体的结构。一般认为在使生物获得新的生物学功能的选择压力下，新的受体家族成员从已存在的受体基因的重复产生，从而导致多基因家族的存在。因此家族成员包含祖先基因的残迹，并且可在分离和鉴定其他家族成员中利用这些特征性质。

在其他发明中，本发明提供了可溶性受体(称为“ZcytoR21”或“可溶性ZcytoR21”或“sZcytoR21”，其所有名称在此可互换使用)和ZcytoR21细胞因子受体的中和抗体的新的用途。本发明也提供了用于人炎性和自身免疫疾病的可溶性ZcytoR21多肽片段和融合蛋白。可使用本发明的抗ZcytoR21抗体和可溶性ZcytoR21受体(包含中和性抗ZcytoR21抗体)在炎症和炎性疾病治疗中阻断、抑制、降低、拮抗或中和IL-17C的活性，所述疾病例如牛皮癣、牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎、内毒素血症、炎性肠病(IBD)、结肠炎、哮喘、同种异体移植排斥、免疫介导的肾病、肝胆管病、多发性硬化症、动脉粥样硬化、肿瘤生长的促进或退行性关节病和此处公开的其他炎性病状。

SEQ ID NO：1提供了编码人ZcytoR21×1的说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：2。SEQ ID NO：4提供了编码人ZcytoR21×2的另一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ IDNO：5。SEQ ID NO：7提供了编码人ZcytoR21×3的另一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：8。SEQ ID NO：10提供了编码人ZcytoR21×4的另一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQID NO：11。SEQ ID NO：20提供了编码人Zcyt oR21×6的另一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：21。SEQ ID NO：106提供了编码人ZcytoR21×13的再一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：107。SEQ ID NO：108提供了编码人ZcytoR21×14的再一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：109。SEQID NO：112提供了编码变体ZcytoR21s2的再一说明性核苷酸序列；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：113。

ZcytoR21用作IL-17C(SEQ ID NOs：16 & 17)的受体。ZcytoR21可充当单体、同型二聚体或异二聚体。优选地，ZcytoR21充当IL-17C的同型二聚体受体。ZcytoR21也可充当IL-17相关细胞因子的异二聚体受体的亚基。包含IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F。ZcytoR21公开于共同拥有的美国专利申请号10/192,434和共同拥有的WIPO公开号WO 03/006,609，二者以其全文在此引用作为参考。编码ZcytoR21×1的人cDNA克隆的分析显示这样的编码667个氨基酸(SEQ ID NO：1)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列、大约431个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基24至454；SEQ ID NO：3)的细胞外配体结合结构域、大约23个氨基酸残基(SEQ ID NO：2的氨基酸残基455至477)的跨膜结构域和大约190个氨基酸残基(SEQID NO：2的氨基酸残基478至667)的细胞内结构域。

由SEQ ID NO：4提供编码变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×2”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：5。编码ZcytoR21×2的人cDNA克隆的分析显示这样的编码589个氨基酸(SEQID NO：5)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQ ID NO：5的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列、大约353个氨基酸残基(SEQ ID NO：5的氨基酸残基24至376；SEQ ID NO：6)的细胞外配体结合结构域、大约23个氨基酸残基(SEQ ID NO：5的氨基酸残基377至399)的跨膜结构域和大约190个氨基酸残基(SEQ ID NO：5的氨基酸残基400至589)的细胞内结构域。

由SEQ ID NO：7提供编码变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×3”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：8。编码ZcytoR21×3的人cDNA克隆的分析显示这样的编码609个氨基酸(SEQID NO：8)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQ ID NO：8的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列、大约373个氨基酸残基(SEQ ID NO：8的氨基酸残基24至396；SEQ ID NO：9)的细胞外配体结合结构域、大约23个氨基酸残基(SEQ ID NO：8的氨基酸残基397至419)的跨膜结构域和大约190个氨基酸残基(SEQ ID NO：8的氨基酸残基420至609)的细胞内结构域。

由SEQ ID NO：10提供编码变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×4”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：11。编码ZcytoR21×4的人cDNA克隆的分析显示这样的编码533个氨基酸(SEQ ID NO：11)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQID NO：11的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列和大约510个氨基酸残基(SEQ ID NO：11的氨基酸残基24至533；SEQ ID NO：12)的细胞外配体结合结构域。

由SEQ ID NO：20提供编码变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×6”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：21。编码ZcytoR21×6的cDNA克隆的分析显示这样的编码627个氨基酸(SEQ ID NO：21)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQID NO：21的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列、大约192个氨基酸残基(SEQ ID NO：21的氨基酸残基436至627)的细胞质结构域、大约21个氨基酸残基(SEQ ID NO：21的氨基酸残基415至435)的跨膜结构域和大约391个氨基酸残基(SEQ ID NO：21的氨基酸残基24至414)的细胞外配体-结合结构域。IL-17C结合结构域(或配体结合结构域)包含大约279个氨基酸残基(SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414)。

由SEQ ID NO：22提供编码可能是天然出现的可溶性受体的变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×7”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：23。

由SEQ ID NO：106提供编码变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×13”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：107。编码ZcytoR21×13的人cDNA克隆的分析显示这样的编码650个氨基酸(SEQ ID NO：107)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQID NO：107的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列、大约192个氨基酸残基(SEQ ID NO：107的氨基酸残基459至650)的细胞质结构域、大约27个氨基酸残基(SEQ ID NO：107的氨基酸残基459至458)的跨膜结构域和大约414个氨基酸残基(SEQ ID NO：107的氨基酸残基24至437；SEQ ID NO：122)的细胞外配体-结合结构域。IL-17C结合结构域(或配体结合结构域)包含大约279个氨基酸残基(SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437)。

由SEQ ID NO：108提供编码变体人ZcytoR21(称为“ZcytoR21×14”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：109。编码ZcytoR21×14的人cDNA克隆的分析显示这样的编码414个氨基酸(SEQ ID NO：109)的开放阅读框架，其包含大约23个氨基酸残基(SEQID NO：109的氨基酸残基1至23)的假定的信号序列、大约391个氨基酸残基(SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414)的细胞外配体结合结构域。IL-17C结合结构域(或配体结合结构域)包含大约279个氨基酸残基(SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414)。

由SEQ ID NO：112提供编码改造的可溶性人ZcytoR21(称为“ZcytoR21s2”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQID NO：113。

本发明还包含优选的IL-17C结合区域。由SEQ ID NO：114提供优选的结合区域的说明性例子；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：115。

由SEQ ID NO：116提供优选的结合区域的另一说明性例子；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：117。

由SEQ ID NO：118提供优选的结合区域的另一说明性例子；被编码的多肽显示于SEQ ID NO：119。

由SEQ ID NO：13提供编码变体人ZcytoR21的说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：14。鼠类ZcytoR21的分析显示了大约638个氨基酸残基(SEQ ID NO：14的氨基酸残基26至663；SEQ IDNO：15)的细胞外配体结合结构域。鼠类ZcytoR21用作鼠类IL-17C(SEQ ID NOs：18&19)的受体。

由SEQ ID NO：160提供编码鼠类ZcytoR21变体的说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：161。鼠类ZcytoR21的分析显示了大约568个氨基酸残基(SEQ ID NO：161的氨基酸残基24至591)的细胞外配体结合结构域。

由SEQ ID NO：110提供编码鼠类ZcytoR21的说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQ ID NO：111。鼠类ZcytoR21的分析显示了大约201个氨基酸残基(SEQ ID NO：111的氨基酸残基461至661)的细胞质结构域、大约22个氨基酸残基(SEQ ID NO：111的氨基酸残基439至460)的跨膜结构域和大约415个氨基酸残基(SEQ ID NO：111的氨基酸残基24至438)的细胞外配体-结合结构域。鼠类IL-17C结合结构域(或配体结合结构域)包含大约275个氨基酸残基(SEQ IDNO：111的氨基酸残基136至410)。

由SEQ ID NO：120提供改造的可溶性鼠类人ZcytoR21(称为“mZcytoR21s2”)的再一说明性核苷酸序列，被编码的多肽显示于SEQID NO：121。

ZcytoR21基因位于染色体3p25.3上。

如下所述，本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，所述参照氨基酸序列为SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111或113中任何一个，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列的多肽。本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列SEQ ID NO：5的24至589具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的多肽。本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列SEQ ID NO：8的24至609具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的多肽。本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列SEQ ID NO：11的24至533具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的多肽。本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，所述参照氨基酸序列为SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列的多肽。本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，所述参照氨基酸序列为SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列的多肽。本发明提供了包含这样的氨基酸序列的分离的多肽，该氨基酸序列与参照氨基酸序列SEQ ID NO：17的26至663具有至少70％、至少80％或至少90％、或大于95％例如96％、97％、98％，或大于99％或更大的同一性，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的多肽。

本发明也提供了包含细胞外结构域的分离的多肽，其中所述细胞外结构域包含选自下列的氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：2的氨基酸残基24至454，(b)SEQ ID NO：3；(c)SEQ ID NO：5的氨基酸残基24至376；(d)SEQ ID NO：6；(e)SEQ ID NO：8的氨基酸残基24至396；(f)SEQ ID NO：9；(g)SEQ ID NO：11的氨基酸残基24至533；(h)SEQ ID NO：12；(i)SEQ ID NOs：14的氨基酸残基26至663；或(j)SEQ ID NO：15，其中所述分离的多肽特异性地结合这样的抗体，该抗体特异性地结合由SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列组成的多肽。这样的多肽可以进一步包含相对于细胞外结构域位于羧基端位置的跨膜结构域，其中该跨膜结构域包含选自下列的氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：2的氨基酸残基455至477；(b)SEQ ID NO：5的氨基酸残基377至399；或(c)SEQ ID NO：8的氨基酸残基397至419。这些多肽还可包含相对于跨膜结构域位于羧基端位置的细胞内结构域，和任选地，相对于细胞外结构域位于氨基端位置的信号分泌序列。

本发明也包含变体ZcytoR21多肽，其中变体多肽的氨基酸序列和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的氨基酸序列具有至少70％的同一性、至少80％的同一性、至少90％的同一性、至少95％的同一性或大于95％的同一性，并且其中变体多肽的氨基酸序列和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的氨基酸序列之间的任何差异是由于一个或多个保守性氨基酸替代造成的。

此外，本发明也提供了如上文公开的结合IL-17C的分离的多肽(例如SEQ ID NO：17所示的人IL-17C多肽序列)。人IL-17C多核苷酸序列显示于SEQ ID NO：16。小鼠IL-17C多核苷酸序列显示于SEQ ID NO：18，并且对应的多肽显示于SEQ ID NO：19。

本发明也提供了包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的氨基酸序列的至少15个连续氨基酸残基的分离的多肽和表位。说明性多肽包含含有或由SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119、其抗原表位或其功能性IL-17C结合片段组成的多肽。此外，本发明也提供了如上文公开的结合、阻断、抑制、降低、拮抗或中和IL-17C的活性的分离的多肽。

本发明也包含变体ZcytoR21多肽，其中变体多肽的氨基酸序列和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的氨基酸残基具有至少70％的同一性、至少80％的同一性、至少90％的同一性、至少95％的同一性或大于95％的同一性，例如96％、97％、98％、或大于99％或更大的同一性，并且其中变体多肽的氨基酸序列和对应的氨基酸序列之间的任何差异都是由一个或多个保守性氨基酸替代造成的。此处描述了这样的保守性氨基酸替代。此外，本发明也提供了如上文公开的结合、阻断、抑制、降低、拮抗或中和IL-17C的活性的分离的多肽。

本发明进一步提供了特异性结合这些多肽的抗体和抗体片段。示例性抗体包含中和抗体、多克隆抗体、鼠类单克隆抗体、衍生自鼠类单克隆抗体的人源化抗体和人单克隆抗体。说明性的抗体片段包含F(ab′)₂、F(ab)₂、Fab′、Fab、Fv、scFv和最小识别单位。中和抗体优先结合ZcytoR21，从而阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C与ZcytoR21的相互作用；结合抗-ZcytoR21中和抗体，从而使得IL-17C与ZcytoR21结合的阻断、抑制、减少、拮抗或中和也是本发明所涵盖的。即，本发明的抗ZcytoR21中和抗体可单独地结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C，或结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C和另一种细胞因子，例如一起。本发明进一步包含含有此处描述的载体和肽、多肽或抗体的组合物。

此外，本发明提供了这样的药物组合物，其包含药学可接受的载体和这样的表达载体或包含这样的表达载体的重组病毒中的至少一种。本发明进一步包含含有药学可接受的载体和此处描述的多肽或抗体的药物组合物。

本发明也涉及这样的抗独特型抗体、或抗独特型抗体片段，所述抗体或抗体片段与特异性结合包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的氨基酸序列的多肽或其片段的抗体或抗体片段特异性结合。示例性抗独特型抗体与特异性结合SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个组成的多肽的抗体特异性结合。

本发明也提供了包含ZcytoR21多肽和免疫球蛋白部分的融合蛋白。在这些融合蛋白中，免疫球蛋白部分可以是免疫球蛋白重链恒定区，例如人Fc片段。本发明进一步包含分离的编码这些融合蛋白的核酸分子(例如SEQ ID NO：123)。

本发明也提供了结合这样的多肽的多克隆和单克隆抗体，所述多肽包含ZcytoR21细胞外结构域，例如单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体受体，包含可溶性受体。此外，可使用这些抗体拮抗ZcytoR21配体例如IL-17C(SEQ ID NO：17)与ZcytoR21受体的结合。

通过参考下面的详细描述，本发明的这些方面和其他方面将变得明了。此外，下文给出了各种参考资料并以其全文在此引用作为参考。

B)定义

在下面的描述中，广泛地使用了许多术语。提供下列定义以帮助理解本发明。

如此处所使用的，“核酸”或“核酸分子”是指多核苷酸，例如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、由聚合酶链式反应(PCR)产生的片段以及通过连接作用、剪断作用(scission)、内切核酸酶作用和外切核酸酶作用中的任一种产生的片段。核酸分子可由天然发生的核苷酸(例如DNA和RNA)的单体构成、或天然发生的核苷酸的类似物(例如，天然发生的核苷酸的α-对映体形式)的单体构成、或这两种单体的组合构成。修饰的核苷酸可在糖部分和/或嘧啶或嘌呤碱基部分具有变化。糖修饰作用包含，例如，用卤素、烷基、胺基和叠氮基替换一个或多个羟基，或可将糖官能化为醚或酯类的形式。此外，可用立体化学和电子相似的结构例如氮杂-糖和碳环糖类似物替代整个糖部分。碱基部分中修饰的示例包含烷基化的嘌呤和嘧啶、酰化的嘌呤或嘧啶、或其他熟知的杂环取代。可通过磷酸二酯键或这些键的类似键来连接核酸单体。磷酸二酯键的类似物包含硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、phosphoroanilothioate、phosphoranilidate、氨基磷酸酯(phosphoramidate)等。术语“核酸分子”也包含所谓的“肽核酸”，其包含附着在聚酰胺主链上的天然发生的或修饰的核酸碱基。核酸可以是单链的或双链的。

术语“核酸分子的互补链”是指和参照核苷酸序列相比，具有互补的核苷酸序列和相反的方向的核酸分子。例如，序列5′ATGCACGGG 3′与5′CCCGTGCAT 3′互补。

术语“简并核苷酸序列”是指和编码多肽的参照核酸分子相比，包含一个或多个简并密码子的核苷酸序列。简并密码子包含不同的核苷酸三联体，但编码相同的氨基酸残基(即，GAU和GAC三联体各自编码Asp)。

术语“结构基因”是指转录成信使RNA(mRNA)的核酸分子，然后该RNA被翻译成特定多肽特有的氨基酸序列。

“分离的核酸分子”是未整合到生物体的基因组DNA中的核酸分子。例如，已从细胞的基因组DNA中分离的编码生长因子的DNA分子是分离的DNA分子。分离的核酸分子的另一个示例是未整合到生物体的基因组中的化学合成的核酸分子。已从特定的物种分离的核酸分子小于来自该物种的染色体的完全DNA分子。

“核酸分子构建体”是这样的单链或双链的核酸分子，即其通过人工干预被修饰，从而包含以自然界中不存在的排列方式组合和并列的核酸的片段。

“线性DNA”是指具有游离5′和3′末端的非环状DNA分子。可通过酶促降解或物理破坏从封闭的环状DNA分子例如质粒制备线性DNA。

“互补DNA(cDNA)”是通过逆转录酶从mRNA模板形成的单链DNA分子。一般地，使用和mRNA的部分互补的引物起始反转录。本领域技术人员也使用术语“cDNA”表示由这样的单链DNA分子和其互补DNA链组成的双链DNA分子。术语“cDNA”也指从RNA模板合成的cDNA分子的克隆。

“启动子”是指导结构基因转录的核苷酸序列。一般地，启动子位于基因的5′非编码区，邻近结构基因的转录起始位点。在转录的起始中发挥作用的启动子内的序列元件的特征通常在于一致的核苷酸序列。这些启动子元件包含RNA聚合酶结合位点、TATA序列、CAAT序列、分化特异性元件(differentiation-specific elements)(DSEs；McGehee等人，Mol.Endocrinol.7：551(1993))、环AMP应答元件(CREs)、血清应答元件(serum response elements)(SREs；Treisman，Seminars in Cancer Biol.1：47(1990))、糖皮质类固醇应答元件(GREs)和其他转录因子的结合位点，所述其他转录因子例如CRE/ATF(O′Reilly等人，J.Biol.Chem.267：19938(1992))、AP2(Ye等人，J.Biol.Chem.269：25728(1994))、SP1、cAMP应答元件结合蛋白(CREB；Loeken，Gene Expr.3：253(1993))和八聚体因子(octamer factors)(一般参见，Watson等人，eds.，Molecular Biology of the Gene，第4版.(The Benjamin/CummingsPublishing Company，Inc.1987)，和Lemaigre和Rousseau，Biochem.J.303：1(1994))。如果启动子是诱导型启动子，那么转录速率响应诱导剂而增加。相反地，如果启动子是组成型启动子，则不能通过诱导剂调控转录速率。阻抑型启动子也是已知的。

“核心启动子”包含启动子发挥作用所必需的核苷酸序列，包含TATA盒和转录起始位点。根据该定义，核心启动子在可增强活性或提供组织特异性活性的特异性序列不存在的情况下可以具有或可以不具有可检测的活性。

“调控元件”是调节核心启动子的活性的核苷酸序列。例如，调控元件可包含这样的核苷酸序列，该序列结合使转录专门地或优先地在特定的细胞、组织或器官中进行的细胞因子。这些类型的调控元件一般和以“细胞特异性”、“组织特异性”或“器官特异性”的方式表达的基因关联。

“增强子”是这种类型的调控元件，无论增强子相对于转录起始位点的距离或排列方向如何，其都可增加转录的功效。

“异源DNA”是指在给定的宿主细胞内非天然存在的DNA分子或DNA分子的群体。对于特定的宿主细胞异源的DNA分子可包含来源于宿主细胞物种的DNA(即，内源DNA)，前提是将该宿主DNA和非宿主DNA(即，外源DNA)组合。例如，包含这样的编码多肽的非宿主DNA片段的DNA分子被认为是异源DNA分子，所述非宿主DNA片段可操作地连接至包含转录启动子的宿主DNA片段。相反地，异源DNA分子可包含和外源启动子可操作地连接的内源基因。作为另一个说明性示例，如果包含来源于野生型细胞的基因的DNA分子被导入缺少该野生型基因的突变细胞，则该DNA分子被认为是异源DNA。

“多肽”是无论是天然产生的还是通过合成产生的、由肽键连接的氨基酸残基的多聚体。少于大约10个氨基酸残基的多肽通常称为“肽”。

“蛋白质”是包含一个或多个多肽链的大分子。蛋白质也可包含非肽组分，例如糖类。可通过产生该蛋白质的细胞给蛋白质加上糖和其他非肽取代基，并且所述糖和其他非肽取代基将随细胞类型的变化而变化。此处以其氨基酸主链的结构定义蛋白质；取代基例如糖基一般不指明，虽然如此，但其仍可以存在。

由非宿主DNA分子编码的肽或多肽是“异源”肽或多肽。

“克隆载体”是能够在宿主细胞中自主复制的核酸分子例如质粒、粘粒或噬菌体。克隆载体一般包含一个或少数这样的限制性内切核酸酶识别位点和编码这样的标记基因的核苷酸序列，所述识别位点允许以可确定的方式插入核酸分子而不丧失载体的基本生物学功能，所述标记基因适合用于鉴定和选择用该克隆载体转化的细胞。标记基因一般包含提供四环素抗性或氨苄青霉素抗性的基因。

“表达载体”是编码在宿主细胞中表达的基因的核酸分子。一般地，表达载体包含转录启动子、基因和转录终止子。基因表达一般置于启动子的控制之下，并且这样的基因被认为与启动子“可操作地连接”。类似地，如果调控元件调节核心启动子的活性，那么该调控元件和核心启动子是可操作地连接的。

“重组宿主”是包含异源核酸分子例如克隆载体或表达载体的细胞。在本说明书中，重组宿主的示例是从表达载体产生ZcytoR21的细胞。相反地，可通过是ZcytoR21的“天然来源”且缺少表达载体的细胞产生ZcytoR21。

“整合转化子”是其中异源DNA已被整合到该细胞的基因组DNA中的重组宿主细胞。

“融合蛋白”是通过包含至少2个基因的核苷酸序列的核酸分子表达的杂合蛋白。例如，融合蛋白可包含与结合亲和基质的多肽融合的ZcytoR21多肽的至少部分。这样的融合蛋白提供了使用亲和层析法分离大量ZcytoR21的手段。

术语“受体”是指结合被称为“配体”的生物活性分子的细胞关联性蛋白。该相互作用介导细胞上的配体的效应。受体可以是膜结合受体、细胞溶胶或细胞核受体；单体(例如，促甲状腺激素受体、β-肾上腺素能受体)或多聚体(例如，PDGF受体、生长激素受体、IL-3受体、GM-CSF受体、G-CSF受体、促红细胞生成素受体和IL-6受体)。膜结合受体的特征在于包含细胞外配体结合结构域和细胞内效应结构域(通常参与信号转导)的多结构域结构。在某些膜结合受体中，细胞外配体结合结构域和细胞内效应结构域位于分开的、包含完整功能性受体的多肽中。

一般地，配体和受体的结合导致受体的构象变化，这使效应结构域和细胞内其他分子之间产生相互作用，该相互作用依次导致细胞代谢作用中的改变。通常和受体-配体相互作用关联的代谢事件包含基因转录、磷酸化作用、去磷酸化作用、环AMP产物的增加、细胞钙的动员、膜脂质的动员、细胞粘着、肌醇脂质的水解和磷脂的水解。

“可溶性受体”是不与细胞膜结合的受体多肽。可溶性受体是最普遍的配体结合性受体，其缺少跨膜和细胞质结构域、以及和细胞膜的其他连接例如通过糖基磷酸肌醇(gpi)的连接。可溶性受体可包含额外的氨基酸残基，例如提供多肽的纯化或提供多肽与基质的附着位点的亲和标签、或免疫球蛋白恒定区序列。许多细胞表面受体具有天然发生的可溶性对应物(counterpart)，该对应物通过蛋白水解作用产生或通过可变剪接的mRNA翻译产生。可溶性受体可以是单体、同二聚体、异二聚体或多聚体，多聚体受体一般包含不超过9个亚基，优选包含不超过6个亚基和最优选包含不超过3个亚基。当受体多肽缺乏充分的跨膜和细胞内多肽片段以至不能分别提供膜锚定或信号转导时，认为其基本上不含有这些片段。细胞因子受体的可溶性受体一般包含无跨膜结构域和细胞内结构域的细胞外细胞因子结合结构域。例如，代表性可溶性受体包含如SEQ ID NOs：3或113中所示的IL-17R的可溶性受体。描述已知的细胞因子受体序列中的哪些序列包含不含跨膜结构域和细胞内结构域的细胞外细胞因子结合结构域，这完全在本领域技术人员的水平之内。此外，本领域技术人员使用遗传密码可以容易地确定编码这些可溶性受体多肽的多核苷酸。

术语“分泌信号序列”是指编码这样的肽(“分泌肽”)的DNA序列，该肽作为更大的多肽的组成部分，指导该更大的多肽通过合成其的细胞的分泌途径。在通过分泌途径的运输过程中，一般切断更大的肽以除去分泌肽。

“分离的多肽”是这样的多肽，其基本上不含在天然状态下和该多肽结合的污染性细胞组分，例如糖、脂质或其他蛋白性质的杂质。一般地，分离的多肽的制剂包含高度纯化形式即至少大约80％的纯度、至少大约90％的纯度、至少大约95％的纯度、高于95％的纯度例如96％、97％或98％或更高的纯度或高于99％的纯度的该多肽。显示特定蛋白制剂包含分离的多肽的一种方法是通过蛋白制剂的十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶的考马斯亮蓝染色后，显现出的单一条带来进行显示。然而，术语“分离的”不排除相同的多肽以可选择的物理形式例如二聚体或可选择地糖基化或衍生形式存在。

此处使用术语“氨基端”和“羧基端”表示在多肽中的位置。在上下文允许的情况下，使用这些关于多肽的特定序列或部分的术语表示临近或相对的位置。例如，多肽内位于参照序列的羧基端的某些序列位于临近参照序列的羧基末端，但不必在全长多肽的羧基末端。

术语“表达”是指基因产物的生物合成。例如，在结构基因的情况下，表达包含将结构基因转录成mRNA并将mRNA翻译成一种或多种多肽。

此处使用术语“剪接变体”表示从基因转录的RNA的可变形式。剪接变异通过使用转录的RNA分子内的可变剪接位点天然地产生，或其较不普遍地产生于分开转录的RNA分子之间，并且可产生转录自相同基因的几种mRNA。剪接变体可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。此处也使用术语剪接变体表示由转录自基因的mRNA的剪接变体编码的多肽。

如此处所使用的，术语“免疫调节剂”包含细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、共刺激分子、造血因子等、以及这些分子的合成类似物。

术语“互补/反互补对(complement/anti-complement pair)”是指在合适的条件下形成非共价结合的稳定配对的不相同的部分。例如，生物素和抗生物素蛋白(或链霉抗生物素蛋白)是互补/反互补对的原型成员。其他互补/反互补对包含受体/配体对、抗体/抗原(或半抗原或表位)对、有义/反义多核苷酸对等。在希望随后分离互补/反互补对的情况下，互补/反互补对优选具有低于10⁹M^-1的结合亲和力。

“抗独特型抗体”是和免疫球蛋白的可变区结构域结合的抗体。在本说明书中，抗独特型抗体和抗ZcytoR21抗体的可变区结合，并且从而，抗独特型抗体模拟了ZcytoR21的表位。

“抗体片段”是抗体的部分例如F(ab′)₂、F(ab)₂、Fab′、Fab等。无论怎样的结构，抗体片段结合被该完整的抗体识别的相同抗原。例如，抗ZcytoR21单克隆抗体片段结合ZcytoR21的表位。

术语“抗体片段”也包含结合特定抗原的合成的或经基因工程改造的多肽，例如由轻链可变区组成的多肽、由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段、其中轻链和重链可变区通过肽连接体连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白质”)和由模拟高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位。

“嵌合抗体”是这样的重组蛋白，该重组蛋白包含来自啮齿类抗体的可变结构域和互补决定区，同时抗体的其余部分来源于人抗体。

“人源化抗体”是这样的重组蛋白，在该重组蛋白中，单克隆抗体的鼠类互补决定区已从鼠类免疫球蛋白的重链和轻链可变区转移到人可变结构域中。在人中用于治疗用途这样的人源化抗体的构建在本领域技术人员的技术范围之内，所述人源化抗体衍生自鼠类抗体，例如结合或中和人蛋白的抗体。

如此处所使用的，“治疗剂”是与抗体部分缀合以产生用于治疗的缀合物的分子或原子。治疗剂的示例包含药物、毒素、免疫调节剂、螯合剂、硼化合物、光活化剂或染料以及放射性同位素。

“可检测的标记物”是可与抗体部分缀合以产生用于诊断分子的分子或原子。可检测的标记物的示例包含螯合剂、光活化剂、放射性同位素、荧光剂、顺磁性离子或其他标志物部分。

术语“亲和标签”此处用于表示可附着至第二多肽，以提供第二多肽的纯化或检测、或提供第二多肽附着至基质的位点的多肽片段。原则上，可将可获得其抗体或其他特异性结合剂的任何多肽或蛋白质用作亲和标签。亲和标签包含多组氨酸片段、A蛋白(Nilsson等人，EMBO J.4：1075(1985)；Nilsson等人，Methods Enzymol.198：3(1991))、谷胱苷肽S转移酶(Smith和Johnson，Gene 67：31(1988))、Glu-Glu亲和标签(Grussenmeyer等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82：7952(1985))、P物质、FLAG肽(Hopp等人，Biotechnology 6：1204(1988))、链霉抗生物素结合肽或其他抗原表位或结合结构域。一般参见，Ford等人，Protein Expression and Purification 2：95(1991)。可从供应商(例如，Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)商购获得编码亲和标签的DNA分子。

“裸露抗体”是完整的抗体，和抗体片段相反，其不与治疗剂缀合。裸露抗体包含多克隆抗体和单克隆抗体，以及某些重组抗体例如嵌合抗体和人源化抗体。

如此处所使用的，术语“抗体组分”包含完整的抗体和抗体片段。

“免疫缀合物”是抗体组分和治疗剂或可检测标记物的缀合物。

如此处所使用的，术语“抗体融合蛋白”是指包含抗体组分和ZcytoR21多肽组分的重组分子。抗体融合蛋白的示例包含含有ZcytoR21细胞外结构域和Fc结构域或抗原结合区(例如，SEQ ID NO：123)的蛋白。

“靶多肽”或“靶肽”是这样的氨基酸序列，其包含至少一个表位并表达于靶细胞，例如肿瘤细胞或携带感染剂抗原的细胞。T细胞识别由主要组织相容性复合物分子呈递给靶多肽或靶肽的肽表位，并且一般裂解靶细胞或将其他免疫细胞招募至靶细胞的位置，从而杀死靶细胞。

“抗原表位”是这样的肽，其结合主要组织相容性复合物分子以形成被T细胞识别的MHC-肽复合物，从而在呈递给T细胞后诱导细胞毒性淋巴细胞应答。因此，抗原肽能够结合合适的主要组织相容性复合物分子并诱导细胞毒性T细胞应答，例如细胞裂解或释放针对靶细胞(其结合或表达该抗原)的特异性细胞因子。可将抗原肽结合在抗原呈递细胞或靶细胞上的I类或II类主要组织相容性复合物分子背景中。

在真核生物中，RNA聚合酶II催化结构基因的转录，以产生mRNA。可设计核酸分子使之包含这样的RNA聚合酶II的模板，在该模板中RNA转录物具有和特定的mRNA的序列互补的序列。所述RNA转录本被称为“反义RNA”，并且编码反义RNA的核酸分子被称为“反义基因”。反义RNA分子能够结合mRNA分子，导致mRNA翻译的抑制。

“对ZcytoR21特异的反义寡核苷酸”或“ZcytoR21反义寡核苷酸”是这样的寡核苷酸，其具有(a)能够和ZcytoR21基因的部分形成稳定的三链体的序列，或(b)能够和ZcytoR21基因的mRNA转录物的部分形成稳定的双链体的序列。

“核酶”是包含催化中心的核酸分子。该术语包含RNA酶、自我剪接RNAs、自我切割RNA和执行这些催化功能的核酸分子。编码核酶的核酸分子被称为“核酶基因”。

“外在引导序列(external guide sequence)”是这样的核酸分子，其指导内源性核酶，RNA酶P至特定种类的细胞内mRNA，导致通过RNA酶P产生的mRNA的切割。编码外在引导序列的核酸分子被称为“外在引导序列基因”。

术语“变体ZcytoR21基因”是指编码具有这样的氨基酸序列的多肽的核酸分子，该序列是SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的变体。这些变体包含天然发生的ZcytoR21基因的多态性，以及包含SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119的氨基酸序列的保守性氨基酸替代的合成基因。ZcytoR21基因的其他变体形式是包含此处描述的核苷酸序列的插入或缺失的核酸分子。通过例如在严谨条件下，确定该基因是否与具有SEQ ID NO：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112的核苷酸序列，或其任何互补序列的核酸分子杂交，可以鉴定变体ZcytoR21基因。

可选择地，可通过序列比较来鉴定变体ZcytoR21基因。当就最大对应性进行比对时，如果两个氨基酸序列的氨基酸残基相同，那么这两个氨基酸序列具有“100％氨基酸序列同一性”。类似地，当就最大对应性进行比对时，如果两个核苷酸序列的核苷酸残基相同，那么这两个核苷酸序列具有“100％的核苷酸序列同一性”。可使用标准软件程序，例如由DNASTAR(Madison，Wisconsin)生产的LASERGENE生物信息学计算套件中包含的程序，进行序列比较。用于通过确定最优比对来比较两个核苷酸或氨基酸序列的其他方法对于本领域技术人员来说是熟悉的(参见，例如，Peruski和Peruski，The Internet and theNew Biology：Tools for Genomic and Molecular Research(ASM Press，Inc.1997)，Wu等人(eds.)，“Information Superhighway andComputer Databases of Nucleic Acids and Proteins，”Methods inGene Biotechnology，第123-151页(CRC Press，Inc.1997)，和Bishop(ed.)，Guide to Human Genome Computing，第2版(AcademicPress，Inc.1998))。下文描述用于确定序列同一性的特定方法。

不管用于鉴定变体ZcytoR21基因或变体ZcytoR21多肽的特定方法如何，可功能性地表征变体基因或由变体基因编码的多肽特异性结合抗ZcytoR21抗体的能力。也可通过使用此处描述的生物学或生物化学测定法功能性地表征变体ZcytoR21基因或变体ZcytoR21多肽结合其配体例如IL-17C的能力。

此处所使用的术语“等位变体”是指占据相同染色体基因座的基因的两种或更多种可选择形式中的任何一种。等位变异天然地通过突变产生，并可导致群体内的表型多态性。基因突变可以是沉默的(在编码的多肽中无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。此处也使用术语等位变体表示由基因的等位变体编码的蛋白质。

术语“直向同源物”是指从一个物种获得的这样的多肽或蛋白质，所述多肽或蛋白质是来自不同物种的多肽或蛋白质的功能性对应物。直向同源物中的序列差异是物种形成的结果。

“平行进化同源物”是由生物产生的不同的但结构相关的蛋白。平行进化同源物被认为通过基因重复产生。例如，α-球蛋白、β-球蛋白和肌红蛋白是相互的平行进化同源物。

本发明包含ZcytoR21基因的功能性片段。在本发明的上下文中，ZcytoR21基因的“功能性片段”是指编码ZcytoR21多肽的部分的核酸分子，该多肽的部分是此处描述的结构域或至少特异性地结合抗ZcytoR21抗体。

由于标准分析方法的不精确性，多聚体的分子量和长度理解为近似值。当这样的值表达为“大约”X或“近似”X时，所述的X的值应理解为精确值±10％。

C)ZcytoR21多核苷酸或基因的产生

可通过使用基于SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108或112中任何一个的多核苷酸探针筛选人cDNA或基因组文库来获得编码人ZcytoR21基因的核酸分子。这些技术是标准的和已建立好的，可使用购自供应商的克隆试剂盒实现这些技术。参见，例如，Ausubel等人(eds.)，Short Protocols in Molecular Biology，第3版，John Wiley和Sons 1995；Wu等人，Methods in Gene Biotechnology，CRC Press，Inc.1997；Aviv和Leder，Proc.Nat’l Acad. Sci.USA69：1408(1972)；Huynh等人，“Constructing and Screening cDNALibraries in λgt10 and λgt11，”DNA Cloning：A PracticalApproach第I卷，Glover(ed.)，第49页(IRL Press，1985)；Wu(1997)第47-52页。

也可使用聚合酶链式反应(PCR)和这样的寡核苷酸引物获得编码人ZcytoR21基因的核酸分子，所述寡核苷酸引物具有的核苷酸序列基于ZcytoR21基因或cDNA的核苷酸序列。由例如，Yu等人，“Useof thePolymerase Chain Reaction to Screen Phage Libraries，”Methodsin Molecular Biology，第15卷：PCR Protocols：Current Methodsand Applications，White(ed.)，Humana Press，Inc.，1993提供关于使用PCR筛选文库的一般方法。此外，由例如，Preston，“Use ofDegenerate Oligonucleotide Primers and the Polymerase ChainReaction to Clone Gene Family Members，”Methods in MolecularBiology，第15卷：PCR Protocols：Current Methods andApplica tions，White(ed.)，Humana Press，Inc.1993描述了使用PCR分离相关基因的技术。作为另一选择，可通过使用此处描述的(参见，例如Ausubel(1995))相互启动(mutually priming)的长寡核苷酸和核苷酸序列合成核酸分子来获得ZcytoR21基因。使用聚合酶链式反应的已建立的技术提供了合成长度为至少2千碱基的DNA分子的能力(Adang等人，Plant Molec.Biol.21：1131(1993)，Bambot等人，PCR Methods and Applications 2：266(1993)，Dillon等人，“Use of the Polymerase Chain Reaction for the RapidConstruction of Synthetic Genes，”Methods in MolecularBiology，第15卷：PCR Protocols：Current Methods andApplications，White(ed.)，第263-268页，(Humana Press，Inc.1993)，和Holowachuk等人，PCR Methods Appl.4：299(1995))。关于多核苷酸合成的综述，参见，例如，Glick和Pasternak，Molecular Biotechnology，Principles and Applications ofRecombinant DNA(ASM Press 1994)，Itakura等人，Annu.Rev.Biochem.53：323(1984)，和Climie等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 87：633(1990)。

D)ZcytoR21基因变体的产生

本发明提供了编码此处公开的ZcytoR21多肽的各种核酸分子，包含DNA和RNA分子。本领域技术人员将容易地认识到，考虑到遗传密码的简并性，在这些多核苷酸分子中可能存在相当多的序列变化。此外，本发明也提供了分离的可溶性单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体受体多肽，所述受体多肽包含至少一个和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的受体多肽基本上同源的ZcytoR21受体亚基。因此，本发明涉及包含SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112的简并核苷酸的ZcytoR21多肽编码性核酸分子及其RNA等同物。

本领域技术人员将容易地认识到，考虑到遗传密码的简并性，在这些多核苷酸分子中可能存在相当多的序列变化。SEQ ID NO：7是包含编码SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的ZcytoR21多肽的所有核酸分子的简并核苷酸序列。本领域技术人员将认识到，通过用U替代T，SEQ ID NO：7的简并序列也提供了编码SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的所有RNA序列。因此，本发明涉及这样的编码ZcytoR21多肽的核酸分子，该分子包含SEQ ID NO：1的核苷酸154至核苷酸2229，及其RNA等同物。类似地，通过用U替代T，SEQ ID NO：6的ZcytoR21简并序列也提供了编码SEQ ID NO：5的所有RNA序列。

表1列出了单字母密码以表示简并核苷酸的位置。“方案”是由密码字母表示的核苷酸。“互补物”表示互补核苷酸的密码。例如，密码Y表示C或T，并且其互补物R表示A或G，A与T互补，并且G与C互补。

表1

核苷酸	方案	互补物	方案
核苷酸	方案	互补物	方案	A	A	T	T
C	C	G	G	A	A	T	T
C	C	G	G	G	G	C	C
T	T	A	A	G	G	C	C
T	T	A	A	R	A\|G	Y	C\|T
Y	C\|T	R	A\|G	R	A\|G	Y	C\|T
Y	C\|T	R	A\|G	M	A\|C	K	G\|T
K	G\|T	M	A\|C	M	A\|C	K	G\|T
K	G\|T	M	A\|C	S	C\|G	S	C\|G
W	A\|T	W	A\|T	S	C\|G	S	C\|G
W	A\|T	W	A\|T	H	A\|C\|T	D	A\|G\|T
B	C\|G\|T	V	A\|C\|G	H	A\|C\|T	D	A\|G\|T
B	C\|G\|T	V	A\|C\|G	V	A\|C\|G	B	C\|G\|T
D	A\|G\|T	H	A\|C\|T	V	A\|C\|G	B	C\|G\|T
D	A\|G\|T	H	A\|C\|T	N	A\|C\|G\|T	N	A\|C\|G\|T

表2列出了简并密码子，包含给定的氨基酸的所有可能的密码子。

表2

氨基酸	单字母密码	密码子	简并密码子
氨基酸	单字母密码	密码子	简并密码子	Cys	C	TGC TGT	TGY
Ser	S	AGC AGT TCA TCC TCG TCT	WSN	Cys	C	TGC TGT	TGY
Ser	S	AGC AGT TCA TCC TCG TCT	WSN	Thr	T	ACA ACC ACG ACT	ACN
Pro	P	CCA CCC CCG CCT	CCN	Thr	T	ACA ACC ACG ACT	ACN
Pro	P	CCA CCC CCG CCT	CCN	Ala	A	GCA GCC GCG GCT	GCN
Gly	G	GGA GGC GGG GGT	GGN	Ala	A	GCA GCC GCG GCT	GCN
Gly	G	GGA GGC GGG GGT	GGN	Asn	N	AAC AAT	AAY
Asp	D	GAC GAT	GAY	Asn	N	AAC AAT	AAY
Asp	D	GAC GAT	GAY	Glu	E	GAA GAG	GAR
Gln	Q	CAA CAG	CAR	Glu	E	GAA GAG	GAR
Gln	Q	CAA CAG	CAR	His	H	CAC CAT	CAY
Arg	R	AGA AGG CGA CGC CGG CGT	MGN	His	H	CAC CAT	CAY
Arg	R	AGA AGG CGA CGC CGG CGT	MGN	Lys	K	AAA AAG	AAR
Met	M	ATG	ATG	Lys	K	AAA AAG	AAR
Met	M	ATG	ATG	Ile	I	ATA ATC ATT	ATH
Leu	L	CTA CTC CTG CTT TTA TTG	YTN	Ile	I	ATA ATC ATT	ATH
Leu	L	CTA CTC CTG CTT TTA TTG	YTN	Val	V	GTA GTC GTG GTT	GTN
Phe	F	TTC TTT	TTY	Val	V	GTA GTC GTG GTT	GTN
Phe	F	TTC TTT	TTY	Tyr	Y	TAC TAT	TAY
Trp	W	TGG	TGG	Tyr	Y	TAC TAT	TAY
Trp	W	TGG	TGG	Ter	.	TAA TAG TGA	TRR
Asn\|Asp	B		RAY	Ter	.	TAA TAG TGA	TRR
Asn\|Asp	B		RAY	Glu\|Gln	Z		SAR
Any	X		NNN	Glu\|Gln	Z		SAR

本领域技术人员将认识到，在确定简并密码子(其代表了编码氨基酸的所有可能的密码子)中引入了不确定性。例如，丝氨酸的简并密码子(WSN)在一些情况下可编码精氨酸(AGR)，并且精氨酸的简并密码子(MGN)在一些情况下可编码丝氨酸(AGY)。类似的关系存在于编码苯丙氨酸和亮氨酸的密码子之间。因此，由简并序列包含的一些多核苷酸可编码变体氨基酸序列，但本领域技术人员通过参考SEQID NO：3的氨基酸序列可容易地鉴定这些变体序列。就此处描述的功能性可以容易地对变体序列进行检测。

不同的物种可展示“偏爱密码子作用(preferential codonusage)”。一般参见，Grantham等人，Nucl.Acids Res.8：1893(1980)，Haas等人Curr.Biol.6：315(1996)，Wain-Hobson等人，Gene 13：355(1981)，Grosjean和Fiers，Gene 18：199(1982)，Holm，Nuc.Acids Res.14：3075(1986)，Ikemura，J.Mol.Biol.158：573(1982)，Sharp和Matassi，Curr.Opin.Genet.Dev.4：851(1994)，Kane，Curr.Opin.Biotechnol.6：494(1995)，和Makrides，Microbiol.Rev.60：512(1996)。如此处所使用的，术语“偏爱密码子作用”或“偏爱密码子”是本领域的术语，其是指在某些物种的细胞中最频繁使用的蛋白质翻译密码子，从而偏向使用编码各氨基酸的可能密码子(参见表2)中的一个或少数几个代表。例如，氨基酸苏氨酸(Thr)可由ACA、ACC、ACG或ACT编码，但在哺乳动物细胞中ACC是最常使用的密码子；在其他物种中，例如，昆虫细胞、酵母、病毒或细菌中，不同的Thr密码子可能是优先的。可通过本领域中已知的各种方法将特定物种的偏爱密码子导入本发明的多核苷酸中。将偏爱密码子序列导入重组DNA可以，例如，通过使蛋白质在特定的细胞类型或物种中更有效地翻译来增加蛋白质的生产。因此，此处公开的简并密码子序列充当模板用于在本领域内普遍使用的和此处公开的各种细胞类型和物种中最优化表达多核苷酸。就各个物种中的表达检验和最优化包含偏爱密码子的序列，并就此处公开的功能性对其进行检验。

可通过各种方法，例如通过使用完整的或部分的人cDNA或使用基于公开的序列的一组或多组简并探针进行探测来分离编码ZcytoR21的cDNA。也可使用聚合酶链式反应通过根据此处公开的代表性人ZcytoR21序列设计的引物来克隆cDNA。此外，可使用cDNA文库转化或转染宿主细胞，并可用抗ZcytoR21多肽的抗体检测目的cDNA的表达。

本领域技术人员将认识到，SEQ ID NO：1中公开的序列代表人ZcytoR21的单个等位基因，并且预期发生其等位变异和可变剪接。可按照标准方法通过探测来自不同的个体的cDNA或基因组文库来克隆该序列的等位基因变体。此处公开的核苷酸序列的等位变体，包含含有沉默突变的变体和其中突变导致氨基酸序列改变的变体，在本发明的范围之内，此处公开的氨基酸序列的等位变体的蛋白质也在本发明的范围之内。从可变剪接的mRNA产生的、保留ZcytoR21多肽的性质的cDNA分子包含在本发明的范围之内，由这样的cDNA和mRNA编码的多肽也在本发明的范围之内。按照本领域已知的标准方法，通过探测来自不同个体或组织的cDNA或基因组文库可克隆这些序列的等位变体和剪接变体。

通过使用上述方法，本领域技术人员可制备各种包含可溶性ZcytoR21受体亚基的多肽，所述多肽与SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112中任何一个基本上同源，或编码SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸或其等位变体，并保留野生型ZcytoR21受体的配体结合特性。这些多肽也可以包含此处一般公开的其他的多肽区段。

在本发明的某些实施方案中，分离的核酸分子可在严谨条件下与包含此处公开的核苷酸序列的核酸分子杂交。例如，这些核酸分子可在严谨条件下与包含SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112中任何一个的核苷酸序列的核酸分子杂交，或与包含与SEQ IDNOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112中任何一个互补的核苷酸序列的核酸分子或其片段杂交。

一般地，选择严谨条件，使其在确定的离子强度和pH下比特定序列的热解链点(thermal melting point)(T_m)低大约5℃。T_m是其中50％的靶序列与完全匹配的探针杂交温度(在确定的离子强度和pH下)。杂交后，可在严谨条件下或在高度严谨条件下洗涤核酸分子以除去非杂交核酸分子。参见，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版(Cold Spring Harbor Press 1989)；Ausubel等人，(eds.)，Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley and Sons，Inc.1987)；Berger和Kimmel(eds.)，Guide to Molecular Cloning Techniques，(Academic Press，Inc.1987)；和Wetmur，Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.26：227(1990))。序列分析软件例如OLIGO 6.0(LSR；Long Lake，MN)和Primer Premier4.0(Premier Biosoft International；Palo Alto，CA)，以及存在于因特网上的软件，都是可获得的用于基于用户限定的标准分析给定的序列和计算T_m的工具。改变杂交和洗涤条件以使之适合用于特定多核苷酸的杂交在本领域技术人员的能力范围之内。

本发明也提供了这样的分离的ZcytoR21多肽，该肽和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的多肽或其直向同源物具有基本上相似的序列同一性。此处使用的术语“基本上相似的序列同一性”是指多肽和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个所示的序列或其直向同源物具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％例如96％、97％、98％或高于95％的序列同一性。例如，可使用变体和直向同源ZcytoR21受体产生针对人ZcytoR21的免疫应答和产生针对人ZcytoR21的交叉反应性抗体。这些抗体可如此处所描述进行人源化和修饰，并治疗性地用于治疗牛皮癣、牛皮癣性关节炎、IBD、结肠炎、内毒素血症以及用于此处描述的其他治疗性应用。

本发明也涉及可使用2种标准来鉴定的ZcytoR21变体核酸分子：编码的多肽和SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列之间的相似性的确定，和杂交测定法。这些ZcytoR21变体包含下列核酸分子：(1)在这样的严谨洗涤条件下仍与具有SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112中任何一个的核苷酸序列(或其互补链)的核酸分子杂交的核酸分子，在所述严谨洗涤条件下，洗涤严谨性相当于在55-65℃下含0.1％SDS的0.5×-2×SSC，和(2)编码与SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或高于95％例如96％、97％、98％或99％的序列同一性的核酸分子。可选择地，可将ZcytoR21变体表征为下列核酸：(1)在这样的高度严谨洗涤条件下仍与具有SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112中任何一个的核苷酸序列(或其互补链)的核酸分子杂交的核酸分子，在所述高度严谨洗涤条件中，洗涤严谨度相当于在50-65℃下含0.1％SDS的0.1×-0.2×SSC，和(2)编码与SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或高于95％例如96％、97％、98％或99％或更高的序列同一性的多肽。

通过常规方法确定百分比序列同一性。参见，例如，Altschul等人，Bull.Math.Bio.48：603(1986)，和Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915(1992)。简而言之，通过使用值为10的缺口开放罚分、值为1的缺口延伸罚分和表3(氨基酸以标准的单字母代码表示)中所示的Henikoff和Henikoff(同上)“BLOSUM62”评分矩阵，比对2个氨基酸序列以最优化比对评分。然后将百分比同一性计算为：([相同匹配的总数目]/[较长序列的长度加上引入至较长序列以比对2个序列的缺口的数目])(100)。

表3

A R N D C Q E G H I L K M F P S TW Y V

A 4

R-1 5

N-2 0 6

D-2 -2 1 6

C 0 -3 -3 -3 9

Q-1 1 0 0 -3 5

E-1 0 0 2 -4 2 5

G 0 -2 0 -1 -3 -2 -2 6

H-2 0 1 -1 -3 0 0 -2 8

I-1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3 4

L-1 -2 -3 -4 -1 -2 -3 -4 -3 2 4

K-1 2 0 -1 -3 1 1 -2 -1 -3 -2 5

M-1 -1 -2 -3 -1 0 -2 -3 -2 1 2 -1 5

F-2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1 0 0 -3 0 6

P-1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4 7

S 1 -1 1 0 -1 0 0 0 -1 -2 -2 0 -1 -2 -1 4

T 0 -1 0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1 1 5

W-3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1 1 -4 -3 -2 11

Y-2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3 2 -1 -1 -2 -1 3 -3 -2 -2 2 7

V 0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3 3 1 -2 1 -1 -2 -2 0 -3 -14

本领域技术人员知道存在许多可获得的用于比对两个氨基酸序列的已建立的算法。Pearson和Lipman的“FASTA”相似性搜索算法是用于检查此处公开的氨基酸序列和假定的ZcytoR21变体的氨基酸序列所共有的相似性水平的合适的蛋白质比对方法。FASTA算法由Pearson和Lipman，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 85：2444(1988)，和Pearson，Meth.Enzymol.183：63(1990)进行描述。简而言之，FASTA首先在不考虑保守性氨基酸替代、插入或缺失的情况下，通过鉴定查询序列(例如，SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个)和测试序列共有的具有最高一致性密度(如果ktup变量＝1)或成对一致性(如果ktup＝2)的区域来表征序列相似性。然后通过使用氨基酸替代矩阵比较所有成对氨基酸的相似性来给具有最高密度的一致性的10个区域重新评分，“修剪”所述区域的末端使之只包含对最高分值有贡献的残基。如果存在几个具有高于“截止”值的评分(基于序列长度和ktup值通过预设的公式计算的)的区域，那么检查经修剪的起始区域以确定是否可连接该区域以形成具有缺口的近似比对。最后，使用考虑氨基酸插入和缺失的Needleman-Wunsch-Sellers算法的修改方案(Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：444(1970)；Sellers，SIAM J.Appl.Math.26：787(1974))对两个氨基酸序列的最高评分区域进行比对。FASTA分析的说明性参数是：ktup＝1、缺口开放罚分＝10、缺口延伸罚分＝1、和取代矩阵＝BLOSUM62。如在Pearson，Meth.Enzymol.183：63(1990)的附录2中所解释的，可通过修改评分矩阵文件(“SMATRIX”)将这些参数引入FASTA程序中。

也可利用如上文公开的比率，使用FASTA确定核酸分子的序列同一性。对于核苷酸序列的比较，ktup值可在1至6之间，优选地从3至6的范围内变化，最优选3，其他参数设定如上。

本发明包含编码这样的多肽的核酸分子，该多肽和此处公开的氨基酸序列相比具有保守性氨基酸改变。例如，可获得包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的一个或多个氨基酸替代的变体，其中烷基氨基酸在ZcytoR21氨基酸序列中替代烷基氨基酸，芳香族氨基酸在ZcytoR21氨基酸序列中替代芳香族氨基酸，含硫氨基酸在ZcytoR21氨基酸序列中替代含硫氨基酸，包含羟基的氨基酸在ZcytoR21氨基酸序列中替代包含羟基的氨基酸，酸性氨基酸在ZcytoR21氨基酸序列中替代酸性氨基酸，碱性氨基酸在ZcytoR21氨基酸序列中替代碱性氨基酸，二碱式一羧基氨基酸(dibasic monocarboxylic amino acid)在ZcytoR21氨基酸序列中替代二碱式一羧基氨基酸氨基酸。在普通氨基酸中，例如，通过下列组中的各组内的氨基酸之间的替代来举例说明“保守性氨基酸替代”：(1)甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，(2)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，(3)丝氨酸和苏氨酸，(4)天冬氨酸和谷氨酸，(5)谷氨酰胺和天冬酰胺，和(6)赖氨酸、精氨酸和组氨酸。BLOSUM62表是氨基酸取代矩阵，其来源于代表超过500组关联蛋白的高度保守区域的蛋白质序列区段的大约2,000个局部多重比对(Henikoff和Henikoff，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 89：10915(1992))。因此，可使用BLOSUM62取代频率来限定可被引入本发明的氨基酸序列的保守性氨基酸替代。尽管可能只基于化学性质(如上所述的性质)设计氨基酸替代，但术语“保守性氨基酸替代”优选指由大于-1的BLOSUM62值代表的替代。例如，如果替代的特征在于BLOSUM62值为0、1、2或3，那么该氨基酸替代是保守的。根据该系统，优选的保守性氨基酸替代的特征在于BLOSUM62值至少为1(例如，1、2或3)，而更优选的保守性氨基酸替代的特征在于BLOSUM62值至少为2(例如2或3)。ZcytoR21的特定变体的特征在于其与对应的氨基酸序列(例如，SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个)具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或高于95％例如96％、97％、98％或99％或更高的序列同一性，其中氨基酸序列中的变异是由于一个或多个保守性氨基酸替代造成的。

可通过例如用核苷酸替代SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112中列举的核苷酸来在ZcytoR21基因中引入保守性氨基酸改变。可通过寡核苷酸指导的诱变、接头分区诱变、使用聚合酶链式反应的诱变等(参见Ausubel(1995)；和McPherson(ed.)，Directed Mutagenesis：A Practical Approach(IRL Press 1991))来获得这些“保守性氨基酸”变体。通过特异性地结合抗ZcytoR21抗体的能力可以鉴定变体ZcytoR21多肽。

本发明的蛋白质也可包含非天然存在的氨基酸残基。非天然存在的氨基酸残基包含，但不限于，反式-3-甲基脯氨酸、2，4-甲醇基脯氨酸、顺式-4-羟脯氨酸、反式-4-羟脯氨酸、N-甲基甘氨酸、别苏氨酸、甲基苏氨酸、羟乙基半胱氨酸、羟乙基高半胱氨酸、硝基谷氨酰胺、高谷氨酰胺(homoglutamine)、哌可酸、噻唑烷羧酸、脱氢脯氨酸、3-和4-甲基脯氨酸、3，3-二甲脯氨酸、叔-亮氨酸、正缬氨酸、2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸和4-氟苯丙氨酸。用于将非天然发生的氨基酸残基整合到蛋白质中的几种方法在本领域是已知的。例如，可使用其中使用经化学方法氨基酰化的抑制型tRNA抑制无义突变的体外系统。用于合成氨基酸和氨基酰化的tRNA的方法在本领域是已知的。包含无义突变的质粒的转录和翻译一般在包含大肠杆菌(E.coli)S30提取物和可商购获得的酶和其他试剂的无细胞系统中进行。通过层析纯化蛋白质。参见，例如Robertson等人，J.Am.Chem.Soc.113：2722(1991)，Ellman等人，Methods Enzymol.202：301(1991)，Chung等人，Science 259：806(1993)，和Chung等人，Proc.Nat’l Acad. Sci.USA 90：10145(1993)。

在第二种方法中，通过显微注射突变的mRNA和化学氨基酰化的抑制型tRNA来在爪蟾卵中进行翻译(Turcatti等人，J.Biol.Chem.271：19991(1996))。在第三种方法中，在待替代的天然氨基酸(例如，苯丙氨酸)不存在的情况下和在希望的非天然发生的氨基酸(例如，2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸或4-氟苯丙氨酸)存在的情况下培养大肠杆菌细胞。将非天然发生的氨基酸整合到蛋白质中以替代其天然的对应物。参见，Koide等人，Biochem.33：7470(1994)。通过体外化学修饰可将天然发生的氨基酸残基转化成非天然发生的种类。可将化学修饰和定点诱变组合以进一步扩展替代的范围(Wynn和Richards，Protein Sci.2：395(1993))。

可使用有限数目的非保守性氨基酸、不由遗传密码编码的氨基酸、非天然发生的氨基酸和非天然氨基酸替代ZcytoR21的氨基酸残基。

根据本领域已知的方法，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells，Science 244：1081(1989)，Bass等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 88：4498(1991)，Coombs和Corey，“Site-Directed Mutagenesis and Protein Engineering，”Proteins：Analysis and Design，Angeletti(ed.)，第259-311页(Academic Press，Inc.1998))，可以鉴定本发明的多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每一个残基上引入单个丙氨酸突变，并且检测所得的突变分子的生物学活性以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。也参见，Hilton等人，J.Biol.Chem.271：4699(1996)。

尽管可使用序列分析进一步限定ZcytoR21的配体结合区域，但也可根据例如通过这些技术如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记连同假定的接触位点氨基酸的突变一起确定的结构的物理分析来确定在ZcytoR21的结合活性(例如ZcytoR21与IL-17C的结合，或与抗ZcytoR21抗体的结合)中起作用的氨基酸。参见，例如，de Vos等人，Science 255：306(1992)，Smith等人，J.Mol.Biol.224：899(1992)，和Wlodaver等人，FEBS Lett.309：59(1992)。

可使用已知的诱变和筛选的方法，例如由Reidhaar-Olson和Sauer(Science 241：53(1988))或Bowie和Sauer(Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：2152(1989))公开的方法，产生并检测多个氨基酸替代。简而言之，这些作者公开了这样的方法，该方法用于同时随机化多肽中的两个或更多个位点，选择功能性多肽，然后测定诱变处理的多肽的序列以确定各位点上可允许的替代的范围。可使用的其他方法包含噬菌体展示法(例如，Lowman等人，Biochem.30：10832(1991)，Ladner等人，美国专利号5,223,409，Huse，国际公开号WO 92/06204)，和局部定点诱变(Derbyshire等人，Gene 46：145(1986)，和Ner等人，DNA 7：127，(1988))。此外，可将生物素或FITC标记的ZcytoR21用于ZcytoR21配体的表达克隆。

也可通过如Stemmer，Nature 370：389(1994)，Stemmer，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 91：10747(1994)，和国际公开号WO 97/20078公开的DNA改组产生公开的ZcytoR21核苷酸和多肽序列的变体。简而言之，通过亲本DNA的随机片段的体外同源重组，然后使用PCR进行重新装配，产生随机引入的点突变来产生变体DNA分子。使用亲本DNA分子的家族例如来自不同物种的等位变体或DNA分子可以修饰这种技术，从而将其他的可变性引入该方法。选择或筛选所需活性，随后再进行另外重复的诱变和测定，通过选择所需突变同时选择对抗有害变化，提供了序列的快速“进化”。

可将如此处所公开的诱变方法和高通量、自动化的筛选方法组合，以在宿主细胞中检测克隆的、诱变处理的多肽的活性。可使用现代化设备从宿主细胞回收这样的诱变处理的DNA分子并对其进行快速测序，所述DNA分子编码生物学活性多肽或结合抗ZcytoR21抗体的多肽。这些方法使得能够快速确定目的多肽中的单个氨基酸残基的重要性，并可应用于未知结构的多肽。

本发明也包含ZcytoR21多肽的“功能性片段”和编码这些功能性片段的核酸分子。可进行核酸分子的常规删除分析以获得编码ZcytoR21多肽的核酸分子的功能性片段。作为说明，可用Bal31核酸酶降解具有SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112的核苷酸序列的DNA分子以获得一系列嵌套缺失片段。然后将所述片段以正确的读框方式插入表达载体，并分离表达的多肽和检测其结合抗ZcytoR21抗体的活性。外切核酸酶降解的一个替代方案是使用寡核苷酸定位诱变以引入缺失或终止密码子，从而确定所需片段的产生。可选择地，可使用聚合酶链式反应合成ZcytoR21基因的特定片段。

通过已由Horisberger和Di Marco，Pharmac.Ther.66：507(1995)概述的关于在干扰素的任一末端或两个末端截断的研究来举例说明这个一般性方法。此外，由例如Treuter等人，Molec.Gen.Genet.240：113(1993)，Content等人，“Expression and preliminary deletionanalysis of the 42 kDa 2-5A synthetase induced by humaninterferon，”Biological Interferon Systems，Proceedings ofISIR-TNOMeeting on Interferon Systems，Cantell(ed.)，第65-72页(Nijhoff 1987)，Herschman，“The EGF Receptor，”Controlof Animal Cell Proliferation，第1卷，Boynton等人，(eds.)第169-199页(Academic Press 1985)，Coumailleau等人，J.Biol.Chem.270：29270(1995)；Fukunaga等人，J.Biol.Chem.270：25291(1995)；Yamaguchi等人，Biochem.Pharmacol.50：1295(1995)，和Meisel等人，Plant Molec.Biol.30：1(1996)描述用于蛋白质的功能性分析的标准技术。

本发明也涉及和此处公开的氨基酸序列相比具有氨基酸改变的ZcytoR21基因的功能性片段。如上所述，可通过确定所公开的核苷酸和氨基酸序列的同一性的水平，基于结构来鉴定变体ZcytoR21基因。基于结构鉴定变体基因的可选择的方法是确定编码潜在的变体ZcytoR21基因的核酸分子是否可与包含核苷酸序列例如SEQ ID NOs：1、4、7、10、13、20、22、106、108、110或112的核酸分子杂交。

本发明也包含使用ZcytoR21多肽的功能性片段、抗原表位、ZcytoR21多肽的具有表位的部分、和编码这些功能性片段、抗原表位、ZcytoR21多肽的具有表位的部分的核酸分子。例如，这样的ZcytoR21片段包含由SEQ ID NOs：115、117或119编码的多肽。这些片段编码ZcytoR21的结合结构域并用于产生在这样的抗体和结合伴侣生产中使用的多肽，所述抗体和结合伴侣结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的活性。如此处定义的“功能性”ZcytoR21多肽或其片段的特征在于其阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的炎症性、增殖性或分化性活性的能力，在于其诱导或抑制特化的细胞功能的能力，或在于其特异性结合抗ZcytoR21抗体、细胞、IL-17C的能力。如此处前文所描述的，ZcytoR21的特征在于如此处所描述的独特的细胞因子受体结构和结构域。因此，本发明还涉及使用这样的融合蛋白，其包含：(a)包含一个或多个上述结构域的多肽分子；和(b)包含一个或多个这样的结构域的功能性片段。融合蛋白的其他多肽部分可由另一种细胞因子受体例如IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RE提供，或由促进融合蛋白分泌的非天然的和/或非关联的分泌信号肽提供。

本发明也提供包含此处描述的ZcytoR21多肽的具有表位的部分的多肽片段或肽。这些片段或肽可包含“免疫原表位”，这是当将整个蛋白质用作免疫原时引起抗体反应的蛋白质部分。可使用标准方法鉴定具有免疫原表位的肽(参见，例如Geysen等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 81：3998(1983))。

相反地，多肽片段或肽可包含“抗原表位”，这是抗体可特异性结合蛋白质分子的区域。某些表位由氨基酸的线性或连续片段组成，并且这样的表位的抗原性不会被变性剂破坏。在本领域已知，可使用能模拟蛋白质表位的相对短的合成肽刺激产生针对该蛋白质的抗体(参见，例如，Sutcliffe等人，Science 219：660(1983))。因此，本发明的具有抗原表位的肽、抗原性肽、表位和多肽用于产生与此处描述的多肽结合的抗体，以及鉴定和筛选这样的中和性的抗ZcytoR21单克隆抗体，该单克隆抗体可结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的活性。本发明的这些中和单克隆抗体可结合ZcytoR21抗原表位。可使用Hopp/Woods亲水性分布图确定SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个中的最具抗原性潜能的区域(Hopp等人， Proc.Natl.Acad.Sci.78：3824-3828，1981；Hopp， J.Immun.Meth. 88：1-18，1986和Triquier等人， Protein Engineering 11：153-169，1998)。该图基于滑动六残基窗口(sliding six-residue window)。忽略埋藏的G、S和T残基以及暴露的H、Y和W残基。在ZcytoR21中，可通过本领域技术人员确定这些区域。此外，如使用例如DNASTAR Protean程序(DNASTAR，Inc.，Madison，WI)通过Jameson-Wolf作图预测的SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个中的ZcytoR21抗原表位，用作优选的抗原表位，并可通过本领域技术人员进行确定。该分析的结果表明SEQ ID NO：115(“抗原性肽1”)、117(“抗原性肽2”)、119(“抗原性肽3”)以及下列SEQ ID NO：6的氨基酸序列可提供合适的抗原性肽：氨基酸51至59(“抗原性肽4”)、氨基酸72至83(“抗原性肽5”)、氨基酸91至97(“抗原性肽6”)、氨基酸174至180(“抗原性肽7”)、和氨基酸242至246(“抗原性肽8”)。本发明涉及使用抗原性肽1至8中的任一种肽、或任何其亚组合来产生抗ZcytoR21的抗体。本发明也涉及包含抗原性肽1至8中的至少一种的多肽。例如，抗原性肽1和2可以组合以产生在本发明的抗体拮抗剂生产中有用的多肽。

在优选的实施方案中，与本发明的中和抗体结合的抗原表位可包含SEQ ID NOs：2、3、5、6、8、9、11、12、14、15、21、23、107、109、111、113、115、117或119中任何一个的残基，所述残基对于配体受体结合，例如和ZcytoR21与IL-17C的结合非常重要。最优选地，与本发明的中和抗体结合的抗原表位可包含SEQ ID NOs：115、117或119中任何一个的残基。

具有抗原表位的肽和多肽可包含此处公开的氨基酸序列的至少4至10个氨基酸、至少10至15个氨基酸、或大约15至大约30个氨基酸。如此处所描述的，可通过使ZcytoR21多肽片段化或通过化学肽合成产生这些具有表位的肽和多肽。此外，可通过随机肽文库的噬菌体展示选择表位(参见，例如，Lane和Stephen，Curr.Opin.Immunol.5：268(1993)，和Cortese等人，Curr.Opin.Biotechnol.7：616(1996))。由例如，Mole，“Epitope Mapping，”Methods in MolecularBiology，第10卷，Manson(ed.)，第105-116页(The Humana Press，Inc.1992)，Price，“Production and Characterization of SyntheticPeptide-Derived Antibodies，”Monoclonal Antibodies：Production，Engineering，and Clinical Application，Ritter和Ladyman(eds.)，第60-84页(Cambridge University Press 1995)，和Coligan等人(eds.)，Current Protocols in Immunology，第9.3.1-9.3.5页和第9.4.1-9.4.11页(John Wiley & Sons 1997)描述用于鉴定表位和从包含表位的小肽产生抗体的标准方法。

对于任何ZcytoR21多肽，包含变体和融合蛋白，使用上面的表1和表2中所示的信息，本领域技术人员可容易地产生编码该变体的完全简并多核苷酸序列。此外，本领域技术人员可使用标准软件，基于此处描述的核苷酸和氨基酸序列设计ZcytoR21变体。

E)ZcytoR21多肽的产生

在进行常规技术之后，在重组宿主细胞中可产生本发明的多肽，包含全长多肽；可溶性单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体受体；全长受体；受体片段(例如，配体结合片段和抗原表位)、功能性片段和融合蛋白。为表达ZcytoR21基因，必须将编码多肽的核酸分子可操作地连接至在表达载体中控制转录表达的调控序列，然后将其导入宿主细胞。除了转录调控序列例如启动子和增强子外，表达载体可包含翻译调控序列和适合用于筛选携带表达载体的细胞的标记基因。

适合用于在真核细胞中生产外源蛋白的表达载体一般包含(1)原核DNA元件，所述元件编码细菌复制起点和抗生素抗性标记物，从而为表达载体在细菌宿主中的生长和选择作准备；(2)控制转录起始的真核DNA元件，例如启动子；和(3)控制转录物的加工的DNA元件，例如转录终止/聚腺苷酰化序列。如上所述，表达载体也可包含编码这样的分泌序列的核苷酸序列，所述分泌序列指导异源多肽进入宿主细胞的分泌途径。例如，ZcytoR21表达载体可包含ZcytoR21基因和来源于任何分泌基因的分泌序列。

本发明的ZcytoR21蛋白可在哺乳动物细胞中表达。合适的哺乳动物宿主细胞的示例包含非洲绿猴肾细胞(Vero；ATCC CRL 1587)、人胚胎肾细胞(293-HEK；ATCC CRL 1573)、幼仓鼠肾细胞(BHK-21、BHK-570；ATCC CRL 8544、ATCC CRL 10314)、犬肾细胞(MDCK、ATCCCCL 34)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1、ATCC CCL61、CHO DG44(Chasin等人，Som.Cell.Molec.Genet.12：555，1986))、大鼠垂体细胞(GH1；ATCC CCL82)、HeLa S3细胞(ATCC CCL2.2)、大鼠肝细胞瘤细胞(H-4-II-E；ATCC CRL 1548)、SV40转化的猴肾细胞(COS-1；ATCC CRL 1650)和鼠类胚胎细胞(NIH-3T3；ATCC CRL 1658)。

对于哺乳动物宿主，转录和翻译调控信号可来自哺乳动物病毒来源，例如，腺病毒、牛乳头状瘤病毒、猿猴病毒等，其中调控信号和具有高水平的表达的特定基因关联。也可从哺乳动物基因例如肌动蛋白、胶原蛋白、肌球蛋白和金属硫蛋白的基因获得合适的转录和翻译调控序列。

转录调控序列包含足以指导RNA合成起始的启动子区域。合适的真核启动子包含小鼠金属硫蛋白I基因的启动子(Hamer等人，J.Molec.Appl.Genet.1：273(1982))、疱疹病毒的TK启动子(McKnight，Cell 31：355(1982))、SV40早期启动子(Benoist等人，Nature 290：304(1981))、劳斯肉瘤病毒启动子(Gorman等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 79：6777(1982))、细胞巨化病毒启动子(Foecking等人，Gene 45：101(1980))和小鼠乳腺瘤病毒启动子(一般参见，Etcheverry，“Expression of Engineered Proteins in MammalianCell Culture，”Protein Engineering：Principles andPractice，Cleland等人(eds.)，第163-181页(John Wiley & Sons，Inc.1996))。

可选择地，如果原核启动子受真核启动子调控，那么该原核启动子，例如噬菌体T3 RNA聚合酶启动子，可用于控制ZcytoR21基因在哺乳动物细胞中的表达(Zhou等人，Mol.Cell.Biol.10：4529(1990)，和Kaufman等人，Nucl.Acids Res.19：4485(1991))。

在某些实施方案中，将编码ZcytoR21可溶性受体多肽、或ZcytoR21多肽片段的DNA序列可操作地连接至其表达所必需的表达载体内的其他基因元件，通常包含转录启动子和终止子。所述载体一般也包含一种或多种选择标记物和一个或多个复制起始位点，尽管本领域技术人员将认识到，在某些系统内，可在分开的载体上提供选择标志物，和通过将外源DNA整合入宿主细胞基因组中来提供其的复制。启动子、终止子、选择标志物、载体和其他元件的选择在本领域技术人员的水平之内的常规设计范围之内。在文献中描述了许多这样的元件，并且其也可从供应商商购获得。可溶性受体复合物的多个组分可以在分开的表达载体上共转染，或可以包含在单个表达载体内。表达蛋白质复合物的多个组分的这些技术在本领域是熟知的。

可使用各种标准方法(包含磷酸钙转染法、脂质体介导的转染、显微注射介导的递送、电穿孔等)将表达载体导入宿主细胞。可选择和繁殖转染细胞以提供这样的重组宿主细胞，其包含稳定整合到宿主细胞基因组中的表达载体。由例如，Ausubel(1995)和Murray(ed.)，Gene Transfer and Expression Protocols(Humana Press 1991)描述用于将载体导入真核细胞的技术和使用显性选择标记物选择这些稳定转化子的技术。

例如，一种合适的选择性标记物是提供针对抗生素新霉素的抗性的基因。在这种情况下，在新霉素类型药物例如G-418等的存在下进行选择。也可使用选择系统增加目的基因的表达水平，即被称为“扩增”的方法。通过在低水平选择剂的存在下培养转染子，并随后增加选择剂的量以筛选产生高水平的被导入基因的产物的细胞来进行扩增。合适的可扩增的选择标记物是二氢叶酸还原酶(DHFR)，其给予针对氨甲蝶呤的抗性。也可使用其他抗药性基因(例如，潮霉素抗性基因、广谱抗药基因、嘌呤霉素乙酰转移酶基因)。可选择地，通过这些方法例如FACS分选法或磁珠分离技术，使用引入改变的表型的标记物，例如绿色荧光蛋白或细胞表面蛋白例如CD4、CD8、I类MHC、胎盘碱性磷酸酶，可以从未转染的细胞中分选出转染的细胞。

也可通过使用病毒递送系统培养的哺乳动物细胞来生产ZcytoR21多肽。用于此目的的示例性病毒包含腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒、痘苗病毒和腺伴随病毒(AAV)。双链DNA病毒腺病毒是目前研究最透彻的用于递送异源核酸的基因转移载体(关于综述，参见Becker等人，Meth.Cell Biol.43：161(1994)，以及Douglas和Curiel，Science& Medicine 4：44(1997))。腺病毒系统的优点包含容纳相对大的DNA插入物、培养至高滴度的能力、感染广泛的哺乳动物细胞类型的能力以及允许与大量可获得的包含不同启动子的载体一起使用的灵活性。

通过删除腺病毒基因组的部分，可容纳更大的异源DNA的插入物(高达7kb)。可通过直接连接或通过与共转染的质粒的同源重组将这些插入物整合到病毒DNA中。一个选择是从病毒载体中删除必需的El基因，这导致不能复制，除非由宿主细胞提供El基因才能进行复制。例如，腺病毒转染的人293细胞(ATCC号CRL-1573、45504、45505)，可以作为贴壁细胞生长或以相对高的细胞密度在悬浮培养中生长以产生大量的蛋白(参见，Garnier等人，Cytotechnol.15：145(1994))。

ZcytoR21也可在其他高等真核细胞例如鸟类、真菌、昆虫、酵母或植物细胞中表达。杆状病毒系统提供了将克隆的ZcytoR21基因导入昆虫细胞的有效方法。合适的表达载体基于苜蓿银纹夜蛾(Autographacalifornica)多核型多角体病毒(AcMNPV)，且包含熟知的启动子例如果蝇热休克蛋白(hsp)70启动子、苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒立早基因启动子(ie-1)和晚早期39K启动子、杆状病毒p10启动子和果蝇金属硫蛋白启动子。制备重组杆状病毒的第二种方法使用由Luckow(Luckow，等人，J.Virol.67：4566(1993))描述的基于转座子的系统。使用转移载体的这种系统以BAC-to-BAC试剂盒(LifeTechnologies，Rockville，MD)的形式出售。该系统使用转移载体，即包含Tn7转座子的PFASTBAC(Life Technologies)，以将编码ZcytoR21多肽的DNA转移到杆状病毒基因组中，该病毒基因组以称为“杆粒”的大质粒形式保持在大肠杆菌中。参见，Hill-Perkins和Possee，J.Gen.Virol.71：971(1990)，Bonning，等人，J.Gen.Virol.75：1551(1994)，和Chazenbalk，和Rapoport，J.Biol.Chem.270：1543(1995)。此外，转移载体可包含与这样的DNA的框内融合，所述DNA在表达的ZcytoR21多肽的C或N末端编码表位标签，例如Glu-Glu表位标签(Grussenmeyer等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.82：7952(1985))。通过使用本领域已知的技术，将包含ZcytoR21基因的转移载体转化到大肠杆菌中，并筛选包含指示重组杆状病毒的间断lacZ基因的杆粒。然后使用常用技术分离包含重组杆状病毒基因组的杆粒DNA。

可将说明性PFASTBAC载体修饰至变化相当大的程度。例如，可除去多角体蛋白启动子并用杆状病毒碱性蛋白启动子(也称作Pcor、p6.9或MP启动子)替代，该碱性蛋白启动子在杆状病毒感染早期表达，并且已显示有利于表达分泌蛋白(参见，例如，Hill-Perkins和Possee，J.Gen.Virol.71：971(1990)，Bonning，等人，J.Gen.Virol.75：1551(1994)，和Chazenbalk和Rapoport，J.Biol.Chem.270：1543(1995)。在这些转移载体构建体中，可使用短或长形式的碱性蛋白启动子。此外，可构建其中用来源于昆虫蛋白的分泌信号序列替代天然的ZcytoR21分泌信号序列的转移载体。例如，可在构建体中使用来自蜕皮甾类葡糖基转移酶(EGT)，蜜蜂的蜂毒素Melittin(Invitrogen Corporation；Carlsbad，CA)或杆状病毒gp67(PharMingen：San Diego，CA)的分泌信号序列替代天然的ZcytoR21分泌信号序列。

使用重组病毒或杆粒转染宿主细胞。合适的昆虫宿主细胞包含来源于IPLB-Sf-21(草地夜蛾蛹卵巢细胞系)的细胞系，例如Sf9(ATCCCRL 1711)、Sf21AE和Sf21(Invitrogen Corporation；San Diego，CA)，和果蝇Schneider-2细胞以及来源于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)(美国专利号，5,300,435)的HIGH FIVEO细胞系(Invitrogen)。可使用可商购获得的无血清培养基培养和维持细胞。对于Sf9细胞合适的培养基是Sf900 II^TM(Life Technologies)或ESF 921^TM(ExpressionSystems)；和对于粉纹夜蛾细胞使用的培养基是Ex-cell0405^TM(JRHBiosciences，Lenexa，KS)或Express FiveO^TM(Life Technologies)。当使用重组病毒时，一般将细胞从大约2-5×10⁵个细胞的接种密度培养至1-2×10⁶个细胞的密度，此时以0.1至10、更一般地接近3的感染复数(MOI)加入重组病毒贮存物。

由Bailey等人，“Manipulation of Baculovirus Vectors，”Methods in Molecular Biology，第7卷：Gene Transfer andExpression Protocols，Murray(ed.)，第147-168页(The HumanaPress，Inc.1991)，Patel等人，“The baculovirus expressionsystem，”DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover等人(eds.)，第205-244页(Oxford University Press 1995)，Ausubel(1995)第16-37至16-57页，Richardson(ed.)，BaculovirusExpression Protocols(The Humana Press，Inc.1995)，和Lucknow，“Insect Cell Expression Technology，”ProteinEngineering：Principles and Practice，Cleland等人(eds.)，第183-218页(John Wiley & Sons，Inc.1996)提供用于在杆状病毒系统中生产重组蛋白的已建立的技术。

也可使用真菌细胞，包含酵母细胞，表达此处描述的基因。在这点上特别有益的酵母种类包含酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)和甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)。用于在酵母中表达的合适的启动子包含来自GAL1(半乳糖)、PGK(磷酸甘油激酶)、ADH(醇脱氢酶)、AOX1(醇氧化酶)、HIS4(组氨醇脱氢酶)等的启动子。已设计了许多酵母克隆载体并且可容易地获得。这些载体包含基于YIp的载体，例如YIp5，YRp载体，例如YRp17，YEp载体例如YEp13和YCp载体，例如YCp19。由例如，Kawasaki，美国专利号4,599,311，Kawasaki等人，美国专利号4,931,373，Brake，美国专利号4,870,008，Welch等人，美国专利号5,037,743，和Murray等人，美国专利号4,845,075公开了用外源DNA转化酿酒酵母细胞和由此生产重组多肽的方法。通过由选择标记物确定的表型，通常为抗药性或在特定营养物(例如，亮氨酸)不存在的情况下的生长能力，选择转化的细胞。在酿酒酵母使用的合适的载体系统是由Kawasaki等人(美国专利号4,931,373)公开的POT1载体系统，该系统使得能够通过将细胞培养在含有葡萄糖的培养基上来选择转化的细胞。在酵母中使用的其他合适的启动子和终止子包含来自糖酵解酶基因(参见，例如，Kawasaki，美国专利号4,599,311，Kingsman等人，美国专利号4,615,974，和Bitter，美国专利号4,977,092)和醇脱氢酶基因的启动子和终止子。也参见美国专利号4,990,446、5,063,154、5,139,936和4,661,454。

适合于其他酵母，包含多形汉逊氏酵母(Hansenula polymorpha)、粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、乳酸克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)、脆壁克鲁维氏酵母(Kluyveromycesfragilis)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、巴斯德毕赤氏酵母、甲醇毕赤酵母、季也蒙氏毕赤氏酵母(Pichia guillermondii)和麦芽糖假丝酵母(Candida maltosa)的转化系统在本领域是已知的。参见，例如，Gleeson等人，J.Gen.Microbiol.132：3459(1986)，和Cregg，美国专利号4,882,279。根据McKnight等人，美国专利号4,935,349的方法可使用曲霉(Aspergillus)细胞。Sumino等人，美国专利号5,162,228公开了转化产黄顶头孢霉菌(Acremoniumchrysogenum)的方法。Lambowitz，美国专利号4,486,533公开了转化脉孢菌(Neurospora)的方法。

例如，由Raymond，美国专利号5,716,808，Raymond，美国专利号5,736,383，Raymond等人，Yeast 14：11-23(1998)，和国际公开号WO 97/17450、WO 97/17451、WO 98/02536和WO 98/02565中公开了使用甲醇毕赤酵母作为宿主用于生产重组蛋白的用途。通常以双链环状质粒的方式制备用于转化甲醇毕赤酵母的DNA分子，在转化前优选将该质粒线性化。为了在甲醇毕赤酵母中生产多肽，质粒中的启动子和终止子可以是甲醇毕赤酵母基因例如甲醇毕赤酵母醇利用基因(AUG1或AUG2)的启动子和终止子。其他有用的启动子包含二羟基丙酮合酶(DHAS)、甲酸脱氢酶(FMD)和过氧化氢酶(CAT)基因的启动子。为了帮助将DNA整合到宿主染色体中，优选地使质粒的整个表达片段在两个末端侧翼连接宿主的DNA序列。用于甲醇毕赤酵母的合适的选择标记物是甲醇毕赤酵母ADE2基因，该基因编码磷酸核糖5-氨基咪唑羧化酶(AIRC；EC 4.1.1.21)，且允许ade2宿主细胞在缺少腺嘌呤的情况下生长。为了进行其中希望将甲醇使用最小化的大规模的、工业化的生产方法，可使用其中删除了2种甲醇利用基因(AUG1和AUG2)的宿主细胞。为了生产分泌蛋白，宿主细胞可以缺失液泡蛋白酶基因(PEP4和PRB1)。使用电穿孔帮助将包含编码目的多肽的DNA的质粒导入甲醇毕赤酵母细胞。可使用呈指数式衰减、场强为2.5至4.5kV/cm(优选大约3.75kV/cm)的脉冲电场和1至40毫秒(最优选大约20毫秒)的时间常数(t)进行电穿孔来转化甲醇毕赤酵母细胞。

也可将表达载体导入植物原生质体、完整的植物组织或分离的植物细胞。用于将表达载体导入植物组织的方法包含用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)、显微注射介导的递送、DNA注射、电穿孔等直接感染或共培养植物组织。参见，例如，Horsch等人，Science 227：1229(1985)，Klein等人，Biotechnology 10：268(1992)，和Miki等人，“Procedures for Introducing Foreign DNAinto Plants，”Methods in Plant Molecular Biology andBiotechnology，Glick等人(eds.)，第67-88页(CRC Press，1993)。

可选择地，可在原核宿主细胞中表达ZcytoR21基因。可用于在原核宿主中表达ZcytoR21多肽的合适的启动子对于本领域技术人员来说是熟知的，并包含能够识别T4、T3、Sp6和T7聚合酶的启动子、λ噬菌体的PR和PL启动子、大肠杆菌的trp、recA、热休克、lacUV5、tac、lpp-lacSpr、phoA和lacZ启动子、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的启动子、芽孢杆菌(Bacillus)的噬菌体的启动子、链霉菌(Streptomyces)的启动子、λ噬菌体的int启动子、pBR322的bla启动子和氯霉素乙酰转移酶基因的CAT启动子。已由Glick，J.Ind.Microbiol.1：277(1987)，Watson等人，Molecular Biology of theGene，4th Ed.(Benjamin Cummins 1987)，和Ausubel等人(1995)对原核启动子进行了综述。

合适的原核宿主包含大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。大肠杆菌的合适的株系包含BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE、DH1、DH4I、DH5、DH5I、DH5IF′、DH5IMCR、DH10B、DH10B/p3、DH11S、C600、HB101、JM101、JM105、JM109、JM110、K38、RR1、Y1088、Y1089、CSH18、ER2151和ER1647(参见，例如，Brown(ed.)，Molecular BiologyLabfax(Academic Press 1991))。枯草芽孢杆菌的合适的株系包含BR151、YB886、MI119、MI120和B170(参见，例如，Hardy，“BacillusCloning Methods，”DNA Cloning：A Practical Approach，Glover(ed.)(IRL Press 1985))。

当在细菌例如大肠杆菌中表达ZcytoR21多肽时，多肽可保留在细胞质中，通常以不溶性颗粒的形式保留，或可通过细菌分泌序列导向周质间隙。在前一种情况下，裂解细胞，回收所述颗粒并使用例如异硫氰酸胍或尿素使之变性。然后通过稀释变性剂(例如通过对尿素溶液以及还原型和氧化型谷胱甘肽的组合透析来进行稀释)，之后对缓冲盐溶液进行透析使变性的多肽重折叠和二聚化。在后一种情况下，通过下述方法可从周质间隙以可溶性和功能性的形式回收多肽：破裂细胞(通过，例如，超声处理或渗透休克)以释放周质间隙的内容物并回收蛋白质，从而避免了对变性和重折叠的需要。

用于在原核宿主中表达蛋白质的方法对于本领域技术人员来说是熟知的(参见，例如，Williams等人，“Expression of foreignproteins in E.coli using plasmid vectors and purification ofspecific polyclonal antibodies，”in DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover等人(eds.)，第15页(OxfordUniversity Press 1995)，Ward等人，“Genetic Manipulation andExpression of Antibodies，”Monoclonal Antibodies：Principlesand Applications，第137页(Wiley-Liss，Inc.1995)，和Georgiou，“Expression of Proteins in Bacteria，”ProteinEngineering：Principles and Practice，Cleland等人(eds.)，第101页(John Wiley & Sons，Inc.1996))。

用于将表达载体导入细菌、酵母、昆虫和植物细胞的标准方法由例如Ausubel(1995)提供。

用于表达和回收由哺乳动物细胞系统产生的外源蛋白的一般方法由例如Etcheverry，“Expression of Engineered Proteins inMammalian Cell Culture，”Protein Engineering：Principles andPractice，Cleland等人(eds.)，第163页(Wiley-Liss，Inc.1996)提供。用于回收由细菌系统产生的蛋白质的标准技术由例如Grisshammer等人，“Purification of over-produced proteins fromE.coli cells，”DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover等人(eds.)，第59-92页(Oxford University Press 1995)提供。由Richardson(ed.)，Baculovirus Expression Protocols(The Humana Press，Inc.1995)描述了用于从杆状病毒系统分离重组蛋白的已建立的方法。

作为选择，可通过完全的固相合成、部分固相方法、片段缩合或经典的溶液合成来合成本发明的多肽。这些合成方法对于本领域技术人员来说是熟知的(参见，例如，Merrifield，J.Am.Chem.Soc.85：2149(1963)，Stewart等人，“Solid Phase Peptide Synthesis”(第2版)，(Pierce Chemical Co.1984)，Bayer和Rapp，Chem.Pept.Prot.3：3(1986)，Atherton等人，Solid Phase PeptideSynthesis：A Practical Approach(IRL Press 1989)，Fields和Colowick，“Solid-Phase Peptide Synthesis，”Methods inEnzymology Volume 289(Academic Press 1997)，和Lloyd-Williams等人，Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides andProteins(CRC Press，Inc.1997))。总的化学合成策略上的变化，例如“天然的化学连接”和“表达的蛋白质的连接”也是标准的(参见，例如，Dawson等人，Science 266：776(1994)，Hackeng等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 94：7845(1997)，Dawson，MethodsEnzymol.287：34(1997)，Muir等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA95：6705(1998)，和Severinov和Muir，J.Biol.Chem.273：16205(1998))。

本发明的肽和多肽包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、113、115、117或119中任何一个的至少6个、至少9个或至少15个连续氨基酸残基。作为说明示例，多肽可包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、113、115、117或119中任何一个的至少6个、至少9个或至少15个连续氨基酸残基。在本发明的某些实施方案中，多肽包含这些氨基酸序列的20、30、40、50、100或更多个连续残基。编码这些肽和多肽的核酸分子可用作聚合酶链式反应的引物和探针。

此外，ZcytoR21多肽及其片段在高等真核细胞中可表达为单体、同型二聚体、异二聚体或多聚体。可使用这些细胞产生包含至少一种ZcytoR21多肽(“包含ZcytoR21的受体”或“包含ZcytoR14受体的多肽”)的ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体受体多肽，或可在筛选系统中将这些细胞用作测定细胞。在本发明的一个方面中，通过培养的细胞产生包含ZcytoR21细胞外结构域的本发明的多肽，并使用该细胞筛选受体的配体，包含天然配体IL-17C，或甚至天然配体的激动剂和拮抗剂。该方法概述如下，将编码受体的cDNA或基因与其表达所必需的其他基因元件(例如，转录启动子)组合在一起，并将所得到的表达载体插入宿主细胞中。在各种筛选系统中选择和使用表达DNA和产生功能性受体的细胞。可在相同细胞中表达单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体受体复合物的各个组分。此外，也可将单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体受体复合物的组分融合至跨膜结构域或其他膜融合部分，以允许装配复合物并筛选如上所述的转染子。

为了测定本发明的IL-17C的拮抗剂多肽和抗体，适合用于表达包含ZcytoR21的受体或已知结合IL-17C的其他受体、以及转导受体介导的信号的哺乳动物细胞包含表达可与ZcytoR21一起形成功能性复合物的其他受体亚基的细胞。优选使用来自与待表达的受体相同的物种的细胞。在优选的实施方案中，所述细胞依赖于外源提供的用于其扩增的造血生长因子。这种类型的优选细胞系是人TF-1细胞系(ATCC编号CRL-2003)和AML-193细胞系(ATCC编号CRL-9589)，所述细胞系是GM-CSF依赖性人白血病细胞系和BaF3(Palacios和Steinmetz，Cell41：727-734，(1985))，所述BaF3是IL-3依赖性鼠类前-B细胞系。其他细胞系包含BHK、COS-1和CHO细胞。可将适合的宿主细胞进行改造以产生必需的受体亚基或进行所需细胞应答所必需的其他细胞组分。该方法是有利的，因为可将细胞系进行改造以表达来自任何物种的受体亚基，从而克服由于物种特异性产生的潜在限制。可在来自相同的物种的细胞系中克隆和使用人受体cDNA的物种直向同源物，例如BaF3细胞系中的小鼠cDNA。因此可将依赖于一种造血生长因子例如GM-CSF或IL-3的细胞系改造为依赖于通过ZcytoR21受体起作用的另一种细胞因子，例如IL-17C。

在筛选测定法中使用表达功能性受体的细胞。各种合适的测定法在本领域中是已知的。这些测定法基于靶细胞中的生物学应答的检测。一种这样的测定法是细胞增殖测定法。在测试化合物存在或不存在的情况下培养细胞，并通过例如测量氚标记的胸苷的整合或通过基于3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑(MTT)(Mosman，J.Immunol.Meth.65：55-63，(1983))的代谢分解的比色测定法来检测细胞的增殖。可选择的测定形式使用进一步改造为表达报告基因的细胞。将报告基因连接至对受体关联途径作出应答的启动子元件，并且该测定法检测报告基因的转录的激活。在这点上优选的启动子元件是NfKB应答启动子。此外，可以使用血清应答元件，或SRE。参见，例如，Shaw等人，Cell 56：563-572，(1989)。优选的这样的报告基因是萤光素酶基因(de Wet等人，Mol.Cell.Biol.7：725，(1987))。通过使用本领域已知的方法(例如，Baumgartner等人，J.Biol.Chem.269：29094-29101，(1994)；Schenborn和Goiffin，Promega_Notes41：11，1993)检测发光来检测萤光素酶基因的表达。萤光素酶活性测定试剂盒可从例如Promega Corp.，Madison，WI商购获得。这种类型的靶细胞系可用于筛选化学试剂文库、细胞条件化的培养基、真菌液体培养基、土壤样品、水样品等。例如，可对靶细胞测定细胞条件化的培养基样品的文库以鉴定产生配体的细胞。然后使用阳性细胞在哺乳动物表达载体中产生cDNA文库，将该文库分为亚文库、转染到宿主细胞中并进行表达。然后测定来自转染的细胞的培养基样品，随后对亚文库再细分，再转染、传代培养，并再次测定阳性细胞以分离编码配体的克隆的cDNA。

由本发明提供的其他筛选方法包含杂合受体多肽的使用。这些杂合多肽大体分为2类。在第1类中，ZcytoR21的细胞内结构域连接至第二种受体的配体结合结构域。第2类杂合受体多肽包含ZcytoR21的细胞外(配体结合)结构域(SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：5的氨基酸残基24至376，SEQ ID NO：8的氨基酸残基24至396，SEQ ID NO：12，SEQ IDNO：21的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：122，SEQID NO：109的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：113，SEQ ID NO：115，SEQ ID NO：117或SEQ ID NO：119)以及第二种受体(优选造血细胞因子受体)的细胞内结构域和跨膜结构域。本发明的该第2类受体的杂合ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体在已知能够对第二种受体转导的信号作出应答的细胞中表达。这2类杂合受体一起使得能够鉴定用于开发检测IL-17C的测定法的应答性细胞类型。此外，可在IL-17C的存在下使用这些细胞，以在竞争型测定法中测定本发明的可溶性受体拮抗剂。在这样的测定法中，在本发明的可溶性受体的存在下，增殖或IL-17C的信号转导活性的降低证实了拮抗活性。此外，也ZcytoR21可溶性受体结合测定法和基于细胞的测定法也可用于确定可溶性受体是否结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的活性。

F)ZcytoR21融合蛋白和缀合物的产生

ZcytoR21类似物的一个大类是具有这样的氨基酸序列的变体，该序列是此处公开的氨基酸序列的突变。如下面所描述的，由抗独特型抗体及其片段提供另一大类ZcytoR21类似物。此外，可将包含抗独特型可变结构域的重组抗体用作类似物(参见，例如，Monfardini等人，Proc.Assoc.Am.Physicians 108：420(1996))。因为抗独特型ZcytoR21抗体的可变结构域模拟ZcytoR21，因此这些结构域可提供ZcytoR21结合活性。产生抗独特型催化抗体的方法对于本领域技术人员来说是已知的(参见，例如，Joron等人，Ann.N Y Acad.Sci.672：216(1992)，Friboulet等人，Appl.Biochem.Biotechnol.47：229(1994)，和Avalle等人，Ann.N Y Acad.Sci.864：118(1998))。

通过使用组合文库提供鉴定ZcytoR21类似物的另一种方法。由例如Kay等人，Phage Display of Peptides and Proteins(AcademicPress 1996)，Verdine，美国专利号5,783,384，Kay，等人，美国专利号5,747,334，和Kauffman等人，美国专利号5,723,323提供用于构建和筛选噬菌体展示和其他组合文库的方法。

ZcytoR21多肽具有体内和体外用途。作为说明性示例，可向细胞培养基中加入可溶性形式的ZcytoR21以抑制由培养细胞产生的ZcytoR21配体(即IL-17C)的作用。

可使用ZcytoR21的融合蛋白在重组宿主中表达ZcytoR21，并分离产生的ZcytoR21。如下所述，特定的ZcytoR21融合蛋白也在诊断和治疗中具有用途。一类融合蛋白包含引导来自重组宿主细胞的ZcytoR21多肽的肽。为指导ZcytoR21多肽进入真核宿主细胞的分泌途径，在ZcytoR21表达载体中提供分泌信号序列(也称为信号肽，前导序列，前原(prepro)序列或前序列(pre sequence))。尽管分泌信号序列可来源于ZcytoR21，但合适的信号序列也可以来自另一种分泌蛋白或从新合成。以这样的方式将分泌信号序列可操作地连接至编码ZcytoR21的序列，即，使得两个序列以正确的符合读框的方式连接和定位，从而指导新合成的多肽进入宿主细胞的分泌途径。分泌信号通常位于编码目的多肽的核苷酸序列的5’，尽管某些分泌信号序列可位于目的核苷酸序列的其他位置(参见，例如，Welch等人，美国专利号5,037,743；Holland等人，美国专利号5,143,830)。

尽管可将哺乳动物细胞产生的ZcytoR21或另一种蛋白质的分泌信号序列(例如，组织型纤溶酶原激活物信号序列，如在例如美国专利号5,641,655中所描述的)用于在重组哺乳动物宿主表达ZcytoR21，但在酵母细胞中表达时优选地使用酵母的信号序列。合适的酵母信号序列的示例是来源于酵母接合信息素α因子(由MFα1基因编码)、转化酶(由SUC2基因编码)、或酸性磷酸酶(由PHO5基因编码)的信号序列。参见，例如，Romanos等人，“Expression of Cloned Genes inYeast，”DNA Cloning 2：A Practical Approach，第2版，Glover andHames(eds.)，第123-167页(Oxford University Press 1995)。

可通过表达编码细胞外结构域，例如包含SEQ ID NO：6的多肽，或非人受体的对应区域的截断的DNA来制备ZcytoR21可溶性受体多肽。优选地可以制备基本上不含跨膜和细胞内多肽区段形式的细胞外结构域多肽。为指导受体结构域通过宿主细胞外运，将受体DNA连接至编码分泌肽例如t-PA分泌肽的第二个DNA片段。为促进分泌受体结构域的纯化，可将这样的C末端延伸物融合至受体多肽，所述C末端延伸物是例如多组氨酸标签、P物质、Flag^TM肽(Hopp等人，Biotechnology 6：1204-1210，(1988)；可从Eastman Kodak Co.，New Haven，CT获得)或可获得其抗体或其他特异性结合剂的另外的多肽或蛋白质。此外，也如上所述制备来自细胞外细胞因子结合结构域的ZcytoR21抗原表位。

在可选择的方法中，可以和免疫球蛋白重链恒定区(一般为Fc片段)的融合物的方式表达ZcytoR21的受体细胞外结构域或其他细胞因子受体组分，所述恒定区包含2个恒定区结构域和铰链区，但缺少可变区(参见，Sledziewski，AZ等人，美国专利号6,018,026和5,750,375)。本发明的可溶性ZcytoR21多肽包含这样的融合物。一种这样的融合物显示于SEQ ID NOs：100和102；以及123和124。这些融合物一般以多聚体分子的形式分泌，其中Fc部分通过二硫键相互连接，并且两个受体多肽相互紧密靠近地排列。这种类型的融合物可用于从溶液中亲和纯化关联配体，作为体外测定工具，用于通过特异性地滴定完配体来阻断、抑制或减少体外信号，以及作为体内拮抗剂，通过肠胃外途径施用以结合循环配体或将其从循环中清除。为纯化配体，在有助于受体-配体结合的条件(一般接近生理学温度、pH和离子强度)下，向包含配体的样品(例如，细胞条件化的培养基或组织提取物)加入ZcytoR21-Ig嵌合体。然后通过使用固定在固体支持物(例如不溶性树脂小珠)的A蛋白进行混合来分离嵌合体-配体复合物。然后使用常规化学技术例如使用盐或pH梯度洗脱配体。在可选择的方法中，可将嵌合体自身结合至固体支持物，如上进行结合和洗脱。可在体内使用嵌合体以调节炎症反应，包含急性期反应例如血清淀粉样蛋白A(SAA)、C-反应性蛋白(CRP)等。可经肠胃外途径(例如，通过肌内、皮下或静脉内注射)施用具有高结合亲和力的嵌合体。循环分子结合配体并通过正常的生理学过程将其从循环中清除。为了用于测定法，经由Fc区域将嵌合体结合至支持物并在ELISA形式中使用。

为帮助分离本发明的抗ZcytoR21和结合伴侣，可有利地使用这样的测定系统，该测定系统使用配体结合受体(或抗体，互补/反互补对的一个成员)或其结合片段以及商购可获得的生物传感装置(BIAcore，Pharmacia Biosensor，Piscataway，NJ)。将这些受体、抗体、互补/反互补对的成员或片段固定在受体芯片的表面。由Karlsson， J. Immunol.Methods 145：229-40，1991和Cunningham和Wells， J.Mol. Biol. 234：554-63，1993公开了这种装置的用途。使用胺或巯基化学试剂将受体、抗体、成员或片段共价地附着至葡聚糖纤维(其附着至流体小室内的金膜)。使受试样品经过所述小室。如果配体、表位或互补/反互补对的相对成员存在于样品中，其将分别和固定的受体、抗体或成员结合，从而导致介质的折射率发生变化，将该变化通过金膜的表面等离子体共振的变化来进行检测。该系统允许确定这样的结合和解离率，根据所述结合和解离率可计算结合亲和力并评估结合的化学计量学。可选择地，可使用SELDI(TM)技术(Ciphergen，Inc.，Palo Alto，CA)分析配体/受体结合。此外，上述BIACorE技术通常可用于竞争性实验以确定不同的单克隆抗体是否结合ZcytoR21多肽上的相同或不同的表位，这样，其可用于帮助本发明的中和抗体的表位作图，所述中和抗体结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C。

配体结合性受体多肽也可在本领域已知的其他测定系统中使用。这些系统包含用于确定结合亲和力的Scatchard分析法(参见Scatchard， Ann.NY Acad.Sci. 51：660-72，1949)和量热测定法(calorimetric assays)(Cunningham等人， Science 253：545-48，1991；Cunningham等人， Science 245：821-25，1991)。

本发明还提供了各种其他多肽融合物和包含一个或多个多肽融合物的相关多聚体蛋白质。例如，可溶性ZcytoR21受体可以作为融合物制备为如美国专利号5,155,027和5,567,584中公开的二聚化蛋白质。在这点上优选的二聚化蛋白质包含免疫球蛋白恒定区结构域，例如，IgGγ1，和人κ轻链。免疫球蛋白-可溶性ZcytoR21融合物可在基因工程改造的细胞中表达，从而产生各种多聚的ZcytoR21受体类似物。可将辅助结构域融合至可溶性ZcytoR21受体，从而将其靶向特定细胞、组织或大分子(例如，胶原、或表达ZcytoR21配体IL-17C的细胞)。可将ZcytoR21多肽融合至2个或多个部分，例如用于纯化的亲和标签和靶向性结构域。多肽融合物也可包含1个或多个切割位点，特别是在结构域之间。参见，Tuan等人， Connective Tissue Research 34：1-9，1996。

在细菌细胞中，通常希望以融合蛋白的形式表达异源蛋白以减少所表达的蛋白的毒性、增加其稳定性和提高其回收。例如，ZcytoR21可以表达为包含谷胱甘肽S-转移酶多肽的融合蛋白。谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白通常是可溶性的，并且可容易地在固定的谷胱甘肽柱子上从大肠杆菌裂解物中进行纯化。在相似的方法中，可用直链淀粉树脂柱分离包含结合麦芽糖的蛋白质多肽的ZcytoR21融合蛋白，同时可使用IgG-Sepharose纯化包含截断的A蛋白基因的C末端的融合蛋白。例如由Williams等人，“Expression of Foreign Proteins in E.coliUsing Plasmid Vectors and Purification of Specific PolyclonalAntibodies，”DNA Cloning 2：A Practical Approach，第2版，Gloverand Hames(Eds.)，第15-58页(Oxford University Press 1995)描述了用于在细菌细胞中以融合蛋白的形式表达异源多肽的已建立的技术。此外，可商购获得表达系统。例如，PINPOINT Xa蛋白质纯化系统(Promega Corporation；Madison，WI)提供了用于分离包含这样的多肽的融合蛋白的方法，所述多肽在与包含抗生物素蛋白的树脂一起表达的过程中变得生物素化。

用于分离由原核或真核细胞表达的异源多肽的肽标签包含多组氨酸标签(其具有对镍螯合型树脂的亲和力)、c-myc签、钙调蛋白结合蛋白(用钙调蛋白亲和层析分离)、P物质、RYIRS标签(其结合抗RYIRS抗体)、Glu-Glu标签和FLAG标签(其结合抗FLAG抗体)。参见，例如，Luo等人，Arch.Biochem.Biophys.329：215(1996)，Morganti等人，Biotechnol.Appl.Biochem.23：67(1996)，和Zheng等人，Gene 186：55(1997)。可从例如Sigma-Aldrich Corporation(St.Louis，MO)商购获得编码这些肽标签的核酸分子。

另一种形式的融合蛋白包含ZcytoR21多肽和免疫球蛋白重链恒定区(通常是Fc片段)，所述恒定区包含2个或3个恒定区结构域和铰链区但缺少可变区。作为说明性示例，Chang等人，美国专利号5,723,125描述了包含人干扰素和人免疫球蛋白Fc片段的融合蛋白。通过肽连接体部分将干扰素的C端连接至Fc片段的N端。肽连接体的示例是主要包含T细胞惰性序列(其在免疫学上是惰性的)的肽。示例性肽连接体具有氨基酸序列：GGSGG SGGGG SGGGG S(SEQ ID NO：25)。在该融合蛋白中，示例性Fc部分是在溶液中稳定并具有极少或没有补体激活活性的人γ4链。因此，本发明涉及包含ZcytoR21部分和人Fc片段的ZcytoR21融合蛋白，其中ZcytoR21部分的c端通过肽连接体附着至Fc片段的N端，所述肽连接体例如包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、113、115、117、119或122的氨基酸序列的肽。ZcytoR21部分可以是ZcytoR21分子或其片段。例如，融合蛋白可包含SEQ ID NO：3的氨基酸和Fc片段(例如，人Fc片段)(SEQ ID NO：100)、SEQ IDNO：6和Fc片段(SEQ ID NO：102)、SEQ ID NO：122和Fc片段(例如，人Fc片段)、SEQ ID NO：109和Fc片段(例如，人Fc片段)、SEQID NO：113和Fc片段(例如，人Fc片段)(SEQ ID NO：124)、SEQ IDNO：115和Fc片段(例如，人Fc片段)、SEQ ID NO：117和Fc片段(例如，人Fc片段)、以及SEQ ID NO：119和Fc片段(例如，人Fc片段)。

在本发明的一个优选实施方案中，在可溶性ZcytoR21和Fc结构域之间可以包含氨基酸连接体。此外，可以使用可选择的分泌向导代替天然的ZcytoR21向导。

本领域技术人员还将认识到此处所公开的ZcytoR21多肽可以与众多不同的Fc结构域(例如Fc4、Fc5、Fc10或其任何其他变体)融合。

在另一个变化方案中，ZcytoR21融合蛋白包含IgG序列、共价连接至IgG序列的氨基末端的ZcytoR21部分和共价地连接至ZcytoR21部分的氨基末端的信号肽，其中所述IgG序列以下列顺序由下列元件构成：铰链区、CH2结构域和CH3结构域。因此，IgG序列缺少CH1结构域。ZcytoR21部分显示此处描述的ZcytoR21活性，例如与ZcytoR21的配体结合的能力。已由LaRochelle等人，EP 742830(WO 95/21258)描述了产生包含抗体和非抗体部分的融合蛋白的这种一般方法。

可将包含ZcytoR21部分和Fc部分的融合蛋白用作，例如，体外测定工具。例如，可使用ZcytoR21-免疫球蛋白融合蛋白检测在生物学样品中ZcytoR21配体的存在，其中ZcytoR21部分用于结合配体，和大分子例如A蛋白或抗Fc抗体，用于将融合蛋白结合至固体支持物。可使用这些系统鉴定干扰ZcytoR21配体，例如IL-17C与其受体结合的激动剂和拮抗剂。

抗体融合蛋白的其他示例包含含有抗原结合结构域的多肽和包含ZcytoR21细胞外结构域的ZcytoR21片段。可使用这些分子靶向特定的组织以使之获得ZcytoR21结合活性的益处。

本发明进一步提供了各种其他的多肽融合物。例如，可在本发明的ZcytoR21和来自细胞因子受体家族的另一个成员的功能性等同结构域之间交换赋予生物学功能的结构域的部分或全部。可在重组宿主细胞中表达多肽融合物以产生各种ZcytoR21融合类似物。可将ZcytoR21多肽融合至2个或多个部分或结构域，例如用于纯化的亲和标签和靶向性结构域。多肽融合物也可包含一个或多个切割位点，特别是在结构域之间。参见，例如，Tuan等人，Connective Tissue Research 34：1(1996)。

可通过本领域技术人员已知的方法，通过制备融合蛋白的各组分并通过化学方法将其缀合来制备融合蛋白。可选择地，可使用已知的技术产生按正确读框的方式编码融合蛋白的两种成分的多核苷酸，并通过此处描述的方法进行表达。由例如Ausubel(1995)第16-19至16-25页描述用于酶促和化学切割融合蛋白的一般方法。

可通过由这些技术如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记确定的结构的物理分析连同ZcytoR21配体激动剂的假定的接触位点氨基酸的突变一起进一步表征ZcytoR21结合结构域。参见，例如，de Vos等人，Science 255：306(1992)，Smith等人，J.Mol.Biol.224：899(1992)，和Wlodaver等人，FEBS Lett.309：59(1992).

本发明也涉及经化学修饰的ZcytoR21组合物，其中将ZcytoR21多肽和聚合物连接。说明性ZcytoR21多肽是缺少功能性跨膜结构域的可溶性多肽，例如包含SEQ ID NOs：2、5、8、11、14、21、23、107、109、113、115、117、119或122中任何一个的多肽。一般地，聚合物是水溶性的，从而使得ZcytoR21缀合物不会在水环境例如生理学环境中沉淀。合适的聚合物的示例是已被修饰从而具有单一反应性基团的聚合物，例如用于酰化作用的活性酯或用于烷基化的醛。这样，可控制聚合的程度。反应性醛的示例是聚乙二醇丙醛、单-(C1-C10)烷氧基、或其芳氧基衍生物(参见，例如，Harris，等人，美国专利号5,252,714)。聚合物可以是分枝的或不分枝的。此外，可使用聚合物的混合物产生ZcytoR21缀合物。

用于治疗的ZcytoR21缀合物可包含药学可接受的水溶性聚合物部分。适合的水溶性聚合物包含聚乙二醇(PEG)、单甲氧基-PEG、单-(C1-C10)烷氧基-PEG、芳氧基-PEG、聚-(N-乙烯基吡咯烷酮)PEG、2，2，2-三氟乙磺酰基单甲氧基PEG、PEG丙醛、二-琥珀酰亚胺碳酸酯PEG、丙二醇同聚物、聚氧化丙稀/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如，丙三醇)、聚乙烯醇、葡聚糖、纤维素或其他基于糖类的聚合物。合适的PEG可具有从大约600至大约60,000，包含，例如5,000、12,000、20,000和25,000的分子量。ZcytoR21缀合物也可包含这些水溶性聚合物的混合物。

ZcytoR21缀合物的一个示例包含ZcytoR21部分和附着至ZcytoR21部分的N端的聚烷基氧化物部分。PEG是合适的聚烷基氧化物。作为说明性示例，可用PEG修饰ZcytoR21，该方法称为“PEG化”。可通过本领域已知的PEG化反应的任一种进行ZcytoR21的PEG化(参见，例如，EP 0 154 316，Delgado等人，Critical Reviews in Therapeutic DrugCarrier Systems 9：249(1992)，Duncan和Spreafico，Clin.Pharmacokinet.27：290(1994)，和Francis等人，Int J Hematol68：1(1998))。例如，可通过和反应性聚乙二醇分子的酰化反应或烷基化反应进行PEG化。在可选择的方法中，通过缩合活化的PEG形成ZcytoR21缀合物，其中PEG的末端羟基或氨基已被活化的连接体取代(参见，例如，Karasiewicz等人，美国专利号5,382,657)。

通过酰化作用进行的PEG化一般要求PEG的活性酯衍生物与ZcytoR21多肽反应。活化的PEG酯的示例是被酯化至N-羟基琥珀酰亚胺的PEG。如此处所用的，术语“酰化作用”包含下列类型的ZcytoR21和水溶性聚合物之间的连接：酰胺、氨基甲酸、尿烷等连接。用于通过酰化作用制备PEG化的ZcytoR21的方法一般包含下列步骤：(a)在由此一个或多个PEG基团附着至ZcytoR21的条件下，使ZcytoR21多肽和PEG(例如PEG的醛衍生物的反应性酯)反应，和(b)获得反应产物。一般地，基于已知的参数和所需结果确定酰化作用的最佳反应条件。例如，PEG：ZcytoR21的比率越大，多PEG化的ZcytoR21产物的百分比越高。

通过酰化作用获得的PEG化产物一般是多PEG化ZcytoR21产物，其中通过酰基连接性基团PEG化赖氨酸ε-氨基。连接键的示例是酰胺。一般地，所得到的ZcytoR21被至少95％单、二或三PEG化，尽管依赖于反应条件，可形成一些具有更高程度的PEG化的种类。可使用标准的纯化方法例如透析、超滤、离子交换层析、亲和层析等将PEG化种类与未缀合的ZcytoR21多肽分离。

通过烷化作用进行的PEG化一般包含在还原剂的存在下使PEG的末端醛衍生物与ZcytoR21反应。通过-CH₂-NH基团可将PEG基附着至多肽。

此外，可使用本领域已知的和此处描述的方法PEG化本发明的抗ZcytoR21抗体或抗体片段。

通过还原性烷化作用产生单PEG化的产物的衍生作用利用可获得的不同类型的伯氨基的不同反应性进行衍生作用。一般地，在允许利用赖氨酸残基的ε-氨基和蛋白质N端残基的α-氨基之间的pKa差异的pH下进行反应。通过这样的选择性衍生作用，控制包含反应性基团例如醛的水溶性聚合物附着至蛋白质。与聚合物的缀和反应主要在蛋白质的N端发生，而无其他反应性基团例如赖氨酸侧链氨基的显著修饰。本发明提供了基本上均一的ZcytoR21单聚合物缀合物制剂。

产生单聚合物ZcytoR21缀合分子的基本上均一的群体的还原性烷化作用可包含下列步骤：(a)在还原性烷化作用的条件下，在适合于允许ZcytoR21的氨基端上的α氨基进行选择性修饰的pH下，使ZcytoR21多肽和反应性PEG反应，和(b)获得反应产物。用于还原性烷化作用的还原剂在水溶液中应当是稳定的并且只能够还原在还原性烷化作用的最初过程中形成的希夫碱。说明性还原剂包含硼氢化钠、氰基硼氢化钠、二甲胺硼烷(dimethylamine borane)、三甲胺硼烷和吡啶硼烷(pyridine borane)。

对于单聚合物ZcytoR21缀合物的基本上均一的群体，还原性烷化反应条件是允许水溶性聚合物部分选择性地附着至ZcytoR21的N端的条件。这些反应条件一般提供了赖氨酸氨基和N末端α氨基之间的pKa的差异。pH也影响所用的聚合物对蛋白质的比例。一般地，如果pH较低，聚合物对蛋白质的较大的过量将是希望的，因为N端α基的反应性越小，就需要越多聚合物来达到最佳条件。如果pH较高，聚合物：ZcytoR21不必更大，因为可获得更多的反应性基团。一般地，pH将在3至9、或3至6的范围之内。可使用该方法制备包含ZcytoR21的同型二聚体、异二聚体或多聚体可溶性受体缀合物。

另一个要考虑的因素是水溶性聚合物的分子量。一般地，聚合物的分子量越高，可附着至蛋白质的聚合物分子的数目越少。对于PEG化反应，一般的分子量是大约2kDa至大约100kDa、大约5kDa至大约50kDa、或大约12kDa至大约25kDa。水溶性聚合物对ZcytoR21的摩尔比一般将在1∶1至100∶1的范围之内。一般地，对于多PEG化，水溶性聚合物对ZcytoR21的摩尔比将是1∶1至20∶1，并且对于单PEG化将是1∶1至5∶1。

用于产生包含多肽和水溶性聚合物部分的缀合物的一般方法在本领域是已知的。参见，例如，Karasiewicz等人，美国专利号5,382,657，Greenwald等人，美国专利号5,738,846，Nieforth等人，Clin.Pharmacol.Ther.59：636(1996)，Monkarsh等人，Anal.Biochem.247：434(1997))。可使用该方法制备包含ZcytoR21的同型二聚体、异二聚体或多聚体可溶性受体缀合物。

本发明涉及包含肽或多肽例如此处描述的可溶性受体或抗体的组合物。这样的组合物可进一步包含载体。载体可以是常规的有机或无机载体。载体的示例包含水、缓冲液、醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油等。

G)ZcytoR21多肽的分离

可将本发明的多肽纯化至，相对于污染性大分子(特别是其他蛋白质和核酸)，至少大约80％的纯度、至少大约90％的纯度、至少大约95％的纯度、或大于95％的纯度例如96％、97％、98％或大于99％的纯度，并且不含感染性因子和致热性因子。也可将本发明的多肽纯化至药物纯度状态，该纯度超过99.9％的纯度。在某些制剂中，纯化的多肽基本上不含其他多肽，特别是动物来源的其他多肽。

可使用分级分离和/或常规的纯化方法获得从天然来源(例如，人组织来源)纯化的ZcytoR21、合成的ZcytoR21多肽以及从重组宿主细胞纯化的重组ZcytoR21多肽和融合ZcytoR21多肽的制剂。一般地，可使用硫酸铵沉淀法和酸或离液剂提取法进行样品的分级分离。示例性纯化步骤可包含羟基磷灰石、大小排阻、FPLC和反相高效液相层析。合适的层析介质包含衍生化的葡聚糖、琼脂糖、纤维素、聚丙烯酰胺、特种硅土(specialty silicas)等。PEI、DEAE、QAE和Q衍生物是合适的。示例性层析介质包含由苯基、丁基或辛基衍生的介质，例如苯基-Sepharose FF(Pharmacia)、Toyopearl丁基650(Toso Haas，Montgomeryville，PA)、辛基-Sepharose(Pharmacia)等；或聚丙烯酸树脂，例如Amberchrom CG 71(Toso Haas)等。合适的固体支持物包含玻璃小珠、基于二氧化硅的树脂、纤维素树脂、琼脂糖小珠、交联的琼脂糖小珠、聚苯乙烯小珠、交联的聚丙烯酰胺树脂等，所述支持物在其被使用的条件下是不溶性的。利用允许蛋白质通过氨基、羧基、巯基、羟基和/或糖部分附着的反应性基团修饰这些支持物。

偶联化学试剂的示例包含溴化氰活化、N-羟基琥珀酰亚胺活化、环氧化物活化、巯基活化、酰肼活化和用于碳二亚胺偶联化学试剂的羧基和氨基衍生物。这些试剂及其他固体介质是本领域内熟知的和广泛使用的，并且可从供应商商购获得。用于多肽分离和纯化的特定方法的选择在常规技术范围之内并且可部分地由选择的支持物的特性进行确定。参见，例如，Affinity Chromatography：Principles & Methods(Pharmacia LKB Biotechnology 1988)，和Doonan，ProteinPurification Protocols(The Humana Press 1996)。

本领域技术人员可设计ZcytoR21分离和纯化上的另外的变化方案。例如，可使用如下所述获得的抗ZcytoR21抗体通过免疫亲和纯化分离大量蛋白质。

也可通过利用特定性质分离本发明的多肽。例如，可使用固定化的金属离子吸附(IMAC)层析纯化富含组氨酸的蛋白质，包含含有多组氨酸标签的蛋白质。简而言之，首先用二价金属离子加载凝胶以形成螯合物(Sulkowski，Trends in Biocbem.3：1(1985))。依赖于所用的金属离子，可将富含组氨酸的蛋白质吸附至具有不同亲和力的这种基质，并将通过竞争性洗脱、降低pH、或使用强螯合剂洗脱所述蛋白。纯化的其他方法包含通过凝集素亲和层析和离子交换层析纯化糖基化蛋白(M.Deutscher，(ed.)，Meth.Enzymol.182：529(1990))。在本发明的其他实施方案中，可构建目的多肽和亲和标签(例如，麦芽糖-结合蛋白质，免疫球蛋白的结构域)的融合物以促进纯化。此外，可使用ZcytoR21细胞外结构域的配体-结合特性，通过例如使用亲和层析纯化例如包含ZcytoR21的可溶性受体，在所述亲和层析中，将IL-17C配体结合至柱，使用标准层析方法结合并随后洗脱包含ZcytoR21的受体。

也可通过如上所述的化学合成制备ZcytoR21多肽或其片段。ZcytoR21多肽可以是单体或多聚体；糖基化或非糖基化的；PEG化或非PEG化的；和可以包含或可以不包含起始甲硫氨酸残基。

H)针对ZcytoR21蛋白质的抗体的产生

可通过例如使用ZcytoR21表达载体的产物或从天然来源分离的ZcytoR21作为抗原来获得针对ZcytoR21的抗体。特别有用的抗ZcytoR21抗体“特异性地结合”ZcytoR21。如果抗体表现下列两种特性中的至少一种，则该抗体被认为是特异性结合的：(1)抗体以阈值水平的结合活性结合ZcytoR21，和(2)抗体与ZcytoR21关联的多肽不发生显著的交叉反应。

关于第1种特性，如果抗体以10⁶M^-1或更大的、优选10⁷M^-1或更大的、更优选10⁸M^-1或更大的、最优选10⁹M^-1或更大的结合亲和力(Ka)结合ZcytoR21多肽、肽或表位，则其是特异性地结合。本领域技术人员通过例如Scatchard分析法(Scatchard，Ann.NY Acad.Sci.51：660(1949))可容易地确定抗体的结合亲和力。关于第2种特性，例如，如果通过使用标准的蛋白质印迹分析法，抗体检测ZcytoR21，但不检测目前已知的多肽，那么抗体不与关联多肽发生显著的交叉反应。已知的关联多肽的示例包含已知的细胞因子受体。

可使用具有抗原性ZcytoR21表位的肽和多肽产生抗ZcytoR21抗体。本发明的具有抗原性表位的肽和多肽包含SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、113、115、117、119和122中任何一个，或此处公开的另一种氨基酸序列中包含的至少9个、或15至大约30个氨基酸的序列。然而，包含本发明的氨基酸序列的更大部分的肽或多肽，包含30至50个氨基酸或任何长度(包含长达和包含本发明的多肽的整个氨基酸序列的长度)，也用于诱导结合ZcytoR21的抗体产生。选择在水溶剂中提供充分溶解性的具有表位的肽的氨基酸序列(即，所述序列包含相对亲水的残基，同时一般避免疏水性残基)是希望的。此外，对于抗体生产，包含脯氨酸残基的氨基酸序列也是希望的。

作为说明性示例，根据通过LASERGENE(DNASTAR；Madison，WI)的PROTEAN程序(版本3.14)进行的Jameson-Wolf方法，Jameson和Wolf，CABIOS 4：181，(1988)鉴定了ZcytoR21中的潜在的抗原性位点。在该分析中使用缺省参数。

Jameson-Wolf法通过组合用于蛋白质结构预测的6个主要子程序来预测潜在的抗原决定簇。简而言之，首先使用Hopp-Woods方法(Hopp等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 78：3824(1981))鉴定代表最大局部亲水性区域的氨基酸序列(参数：平均为7个残基)。在第2个步骤中，使用Emini法(Emini等人，J.Virology 55：836(1985))计算表面或然率(surface probabilities)(参数：表面决定阈值(0.6)＝1)。第3步，使用Karplus-Schultz法(Karplus和Schultz，Naturwissenschaften 72：212(1985))预测主链柔度(backbone chainflexibility)(参数：柔度阈值(0.2)＝1)。在分析的第4和第5个步骤中，使用Chou-Fasman(Chou，“Prediction of Protein StructuralClasses from Amino Acid Composition，”in Prediction of ProteinStructure and the Principles of Protein Conformation，Fasman(ed.)，第549-586页(Plenum Press 1990))，和Garnier-Robson(Garnier等人，J.Mol.Biol.120：97(1978))的方法对数据进行二级结构预测(Chou-Fasman参数：构象表＝64种蛋白质；α区域阈值＝103；β区域阈值＝105；Garnier-Robson参数：α和β决定常数＝0)。在第6个子程序中，使用柔度参数和亲水性/溶剂可接触性因子的组合来确定称为“抗原性指数”的表面等值(surface contour value)。最后，将峰加宽函数用于抗原性指数，该函数通过加上分别峰值的20、40、60或80％来加宽主要表面峰以补偿由表面区域相对于内部区域的移动所产生的额外的自由能。然而，不将该计算用于存在于螺旋区域的任何主峰，因为螺旋区域倾向于较低的柔性。可使用Hopp/Woods亲水性分布图确定在SEQ ID NO：6内最具抗原性潜力的区域(Hopp等人，Proc.Natl.Acad.Sci.78：3824-3828，1981；Hopp， J.Immun. Meth. 88：1-18，1986和Triquier等人， Protein Engineering 11：153-169，1998)。所述分布图基于滑动6残基窗口。忽略埋藏的G、S和T残基和暴露的H、Y和W残基。此外，将例如使用DNASTAR Protean程序(DNASTAR，Inc.，Madison，WI)通过Jameson-Wolf作图预测的SEQ ID NO：6中的ZcytoR21抗原表位用作优选的抗原表位，并可通过本领域技术人员来确定。这些抗原表位包含SEQ ID NO：115(“抗原性肽1”)、117(“抗原性肽2”)、119(“抗原性肽3”)、和下列SEQ ID NO：6的氨基酸序列将提供合适的抗原性肽：氨基酸51至59(“抗原性肽4”)、氨基酸72至83(“抗原性肽5”)、氨基酸91至97(“抗原性肽6”)、氨基酸174至180(“抗原性肽7”)、和氨基酸242至246(“抗原性肽8”)。本发明也涉及使用抗原表位X至Y中的任一表位产生抗ZcytoR21抗体，或将其用作筛选或鉴定本发明的中和单克隆抗体的工具。本发明也涉及包含抗原肽1至5中至少一个的多肽。本发明使用此处描述的任何抗原性肽或表位产生抗ZcytoR21抗体以及鉴定和筛选这样的抗ZcytoR21单克隆抗体，所述单克隆抗体是中和抗体，并可结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的活性。

此外，合适的抗原也包含这样的ZcytoR21多肽，例如可形成可溶性ZcytoR21异二聚体或多聚体多肽等的多肽，该多肽包含与另一种细胞因子细胞外结构域(例如I或II类细胞因子受体结构域)组合的上文公开的ZcytoR21细胞因子结合结构域、或细胞外结构域。

可使用本领域技术人员熟知的方法制备抗重组ZcytoR21蛋白或从天然来源分离的ZcytoR21的多克隆抗体。参见，例如，Green等人，“Production of Polyclonal Antisera，”ImmunochemicalProtocols(Manson，ed.)，第1-5页(Humana Press 1992)，和Williams等人，“Expression of foreign proteins in E.coli using plasmidvectors and purification of specific polyclonal antibodies，”DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover等人(eds.)，第15页(Oxford University Press 1995)。通过使用佐剂例如明矾(氢氧化铝)或弗氏完全或不完全佐剂可增加ZcytoR21多肽的免疫原性。用于免疫的多肽也包含融合多肽，例如ZcytoR21或其部分与免疫球蛋白多肽或麦芽糖结合蛋白的融合物。多肽免疫原可以是全长分子或其部分。如果多肽部分是“半抗原样的”，可将该部分有利地结合至或连接至用于免疫的大分子载体(例如钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或破伤风类毒素)。

尽管一般在动物例如马、牛、狗、鸡、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、山羊或绵羊中生产多克隆抗体，但也可从类人灵长类动物的抗体衍生出本发明的抗ZcytoR21抗体。可在例如Goldenberg等人，国际专利公开号WO 91/11465，和Losman等人，Int.J.Cancer 46：310(1990)中查找到用于在狒狒中产生诊断和治疗用途的抗体的一般技术。

可选择地，可产生单克隆抗ZcytoR21抗体。可通过本领域技术人员已知的方法(参见，例如，Kohler等人，Nature 256：495(1975)，Coligan等人(eds.)，Current Protocols in Immunology，第1卷，第2.5.1-2.6.7页(John Wiley & Sons 1991)[“Coligan”]，Picksley等人，“Production of monoclonal antibodies against proteinsexpres sed in E.coli，”DNA Cloning 2：Expression Systems，第2版，Glover等人(eds.)，第93页(Oxford University Press 1995))获得针对特定抗原的啮齿动物单克隆抗体。

简而言之，可通过下列步骤获得单克隆抗体：用包含ZcytoR21基因产物的组合物注射小鼠，通过取出血清样品验证抗体产物的存在，取出脾脏以获得B淋巴细胞，将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤，克隆杂交瘤，选择产生针对所述抗原的抗体的阳性克隆，培养产生针对所述抗原的抗体的克隆，并从杂交瘤培养物中分离抗体。

此外，可从人单克隆抗体产生本发明的抗ZcytoR21抗体。从已通过基因工程改造产生响应抗原攻击的特异性人抗体的转基因小鼠获得人单克隆抗体。在该技术中，将人重链和轻链基因座的元件导入来源于胚胎干细胞系的小鼠品系，所述小鼠品系包含内源重链和轻链基因座的靶定断裂。转基因小鼠可合成对人抗原特异的人抗体，并可使用所述小鼠产生分泌人抗体的杂交瘤。由例如，Green等人，NatureGenet.7：13(1994)，Lonberg等人，Nature 368：856(1994)，和Taylor等人，Int.Immun.6：579(1994)描述用于从转基因小鼠获得人抗体的方法。

可通过各种已良好建立的技术从杂交瘤培养物中分离和纯化单克隆抗体。这些分离技术包含使用A蛋白Sepharose的亲和层析、大小排阻层析和离子交换层析(参见，例如，Coligan at第2.7.1-2.7.12页和第2.9.1-2.9.3页；Baines等人，“Purification ofImmunoglobulin G(IgG)，”Methods in Molecular Biology，第10卷，第79-104页(The Humana Press，Inc.1992))。

对于特定的用途，可能希望制备抗ZcytoR21抗体的片段。可通过抗体的蛋白水解作用获得这些抗体片段。可通过常规的方法，用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶降解完整的抗体来获得抗体片段。作为说明性示例，可通过使用胃蛋白酶酶促切割抗体以提供称为F(ab′)₂的5S片段来产生抗体片段。可用巯基还原剂进一步切割该片段以产生3.5S Fab′单价片段。任选地，可使用由二硫链切割产生的巯基的封闭基团进行该切割反应。作为另一种选择，使用胃蛋白酶的酶促切割产生2个单价Fab片段和Fc片段。由例如，Goldenberg，美国专利号4,331,647，Nisonoff等人，Arch Biochem.Biophys.89：230(1960)，Porter，Biochem.J.73：119(1959)，Edelman等人，in Methods in Enzymology第1卷，第422页(Academic Press 1967)，以及Coligan第2.8.1-2.8.10和2.10.-2.10.4页描述了这些方法。

也可使用切割抗体的其他方法，例如形成单价轻-重链片段的重链的分离、片段的进一步切割，或其他酶促、化学或遗传技术，前提是所述片段结合由该完整抗体识别的抗原。

例如，Fv片段包含结合的V_H和V_L链。该结合可以是非共价的，如由Inbar等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 69：2659(1972)所描述的。可选择地，可通过分子间二硫键连接或通过化学试剂例如戊二醛(参见，例如，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437(1992))交联可变链。

Fv片段可包含通过肽连接体连接的V_H和V_L链。通过构建包含编码V_H和V_L结构域的DNA序列的结构基因(所述V_H和V_L结构域通过寡核苷酸连接)制备这些单链抗原结合蛋白(scFv)。将结构基因插入随后被导入宿主细胞例如大肠杆菌的表达载体。重组宿主细胞合成具有跨接2个V结构域的连接体肽的单个多肽链。由Whitlow等人，Methods：ACompanion to Methods in Enzymology 2：97(1991)(也参见，Bird等人，Science 242：423(1988)，Ladner等人，美国专利号4,946,778，Pack等人，Bio/Technology 11：1271(1993)，和Sandhu，同上)描述用于产生scFvs的方法。

作为说明性示例，可这样获得scFV，在体外将淋巴细胞暴露于ZcytoR21多肽，并选择噬菌体或相似的载体中的抗体展示文库(例如，通过使用固定的或标记的ZcytoR21蛋白或肽)来获得scFV。可通过在噬菌体(噬菌体展示)或在细菌例如大肠杆菌上展示的随机肽文库来获得编码具有潜在的ZcytoR21多肽结合结构域的多肽的基因。可通过许多方法例如通过随机诱变和随机多核苷酸合成来获得编码所述多肽的核苷酸序列。可使用这些随机肽展示文库筛选与这样的已知靶相互作用的肽，该靶可以是蛋白质或多肽，例如配体或受体、生物大分子或合成的大分子、或有机物或无机物。用于制备和筛选这些随机肽展示文库的技术在本领域是已知的(Ladner等人，美国专利号5,223,409，Ladner等人，美国专利号4,946,778，Ladner等人，美国专利号5,403,484，Ladner等人，美国专利号5,571,698，和Kay等人，PhageDisplay of Peptides and Proteins(Academic Press，Inc.1996))，并且可以从例如CLONTECH Laboratories，Inc.(Palo Alto，CA)、Invitrogen Inc.(San Diego，CA)、New England Biolabs，Inc.(Beverly，MA)和Pharmacia LKB Biotechnology Inc.(Piscataway，NJ)商购获得用于筛选这些文库的随机肽展示文库和试剂盒。可使用此处公开的ZcytoR21序列筛选随机肽展示文库以鉴定结合ZcytoR21的蛋白质。

另一种形式的抗体片段是编码单个互补决定区(CDR)的肽。可通过构建编码目的抗体的CDR的基因来获得CDR肽(“最小识别单位”)。通过例如使用聚合酶链式反应合成来自产生抗体的细胞的RNA的可变区来制备这些基因(参见，例如，Larrick等人，Methods：A Companionto Methods in Enzymology 2：106(1991)，Courtenay-Luck，“GeneticManipulation of Monoclonal Antibodies，”Monoclonal Antibodies：Production，Engineering and Clinical Application，Ritter等人(eds.)，第166页(Cambridge University Press 1995)，和Ward等人，“Genetic Manipulation and Expression of Antibodies，”Monoclonal Antibodies：Principles and Applications，Birch等人，(eds.)，第137页(Wiley-Liss，Inc.1995))。

可选择地，可从“人源化的”单克隆抗体衍生出抗ZcytoR21抗体。通过将来自小鼠免疫球蛋白的重链和轻链可变区的小鼠互补决定区转移至人可变结构域来产生人源化的单克隆抗体。然后在鼠类对应物的构架区内用人抗体的特有的残基进行取代。使用来自人源化单克隆抗体的抗体组分避免了与鼠类恒定区的免疫原性关联的潜在问题。用于克隆鼠类免疫球蛋白可变结构域的一般方法描述于例如Orlandi等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 86：3833(1989)。由例如Jones等人，Nature 321：522(1986)，Carter等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA89：4285(1992)，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437(1992)，Singer等人，J.Immun.150：2844(1993)，Sudhir(ed.)，AntibodyEngineering Protocols(Humana Press，Inc.1995)，Kelley，“Engineering Therapeutic Antibodies，”Protein Engineering：Principles and Practice，Cleland等人(eds.)，第399-434页(JohnWiley & Sons，Inc.1996)，和Queen等人，美国专利号5,693,762(1997)描述用于产生人源化单克隆抗体的技术。

此外，可使用本领域内和此处描述的方法PEG化本发明的抗ZcytoR21抗体或抗体片段。

使用标准技术，用抗ZcytoR21抗体或抗体片段免疫动物来制备多克隆抗独特型抗体。参见，例如，Green等人，“Production ofPolyclonal Antisera，”Methods In Molecular Biology：Immunochemical Protocols，Manson(ed.)，第1-12页(Humana Press1992)。也参见，Coligan第2.4.1-2.4.7页。可选择地，使用上述技术，用抗ZcytoR21抗体或抗体片段作为免疫原来制备单克隆抗独特型抗体。作为另一种选择，可使用上述技术制备人源化抗独特型抗体或类人灵长类动物抗独特型抗体。由例如Irie，美国专利号5,208,146，Greene，等人，美国专利号5,637,677，和Varthakavi和Minocha，J.Gen.Virol.77：1875(1996)描述用于产生抗独特型抗体的方法。

抗ZcytoR21抗体可以与可检测的标记物缀合以形成抗ZcytoR21免疫缀合物。合适的可检测的标记物包含，例如，放射性同位素、荧光标记物、化学发光标记物、酶标记物、生物发光标记物或胶体金。制备和检测这些可检测标记的免疫缀合物的方法对于本领域技术人员来说是熟知的，并在下面进行更详细的描述。

可检测的标记物可以是通过放射自显影法检测的放射性同位素。对于本发明的目的特别有用的同位素是³H、¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S和¹⁴C。

也可用荧光化合物标记抗ZcytoR21免疫缀合物。通过将免疫缀合物暴露于合适波长的光并检测所得的荧光来确定荧光标记的抗体的存在。荧光标记化合物包含异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二醛和荧光胺。

可选择地，可通过将抗体组分偶联至化学发光化合物来可检测地标记抗ZcytoR21免疫缀合物。通过检测在化学反应过程产生的发光的存在来确定化学发光标记的免疫缀合物的存在。化学发光标记化合物的示例包含鲁米诺、4-氨基邻苯二甲酰肼、芳香族吖啶酯、咪唑、吖啶盐和草酸酯。

类似地，可使用生物发光化合物标记本发明的抗ZcytoR21免疫缀合物。生物发光是在这样的生物系统中发现的化学发光类型，在所述生物系统中，催化蛋白增加了化学发光反应的效率。通过检测发光的存在来确定生物发光蛋白的存在。用于标记的生物发光化合物包含萤光素、萤光素酶和水母发光蛋白。

可选择地，可通过将抗ZcytoR21抗体组分与酶连接来可检测地标记抗ZcytoR21免疫缀合物。当在合适的底物的存在下温育抗ZcytoR21抗体-酶缀合物时，酶部分和底物反应以产生可通过例如分光光度计、荧光计或可视方法检测的化学部分。可用于可检测地标记多特异性的免疫缀合物的酶的示例包含β-半乳糖苷酶、葡糖氧化酶、过氧化物酶和碱性磷酸酶。

本领域技术人员知道可根据本发明使用的其他合适的标记物。可使用本领域已知的标准技术来完成标记物部分和抗ZcytoR21抗体结合。由Kennedy等人，Clin.Chim.Acta70：1(1976)，Schurs等人，Clin.Chim.Acta 81：1(1977)，Shih等人，Int′l J.Cancer46：1101(1990)，Stein等人，Cancer Res.50：1330(1990)，和Coligan，同上，描述这方面的典型方法。

此外，可使用已与抗生物素蛋白、链霉抗生物素和生物素缀合的抗ZcytoR21抗体增加免疫化学检测的方便性和通用性(参见，例如，Wilchek等人(eds.)，“Avidin-Biotin Technology，”Methods InEnzymology，第184卷.(Academic Press 1990)，和Bayer等人，“Immunochemical Applications of Avidin-Biotin Technology，”in Methods In Molecular Biology，第10卷，Manson(ed.)，第149-162页(The Humana Press，Inc.1992)。

用于执行免疫测定法的方法已良好建立。参见，例如，Cook和Self，“Monoclonal Antibodies in Diagnostic Immunoassays，”Monoclonal Antibodies：Production，Engineering，and ClinicalApplication，Ritter and Ladyman(eds.)，第180-208页，(CambridgeUniversity Press，1995)，Perry，“The Role of MonoclonalAntibodies in the Advancement of Immunoassay Technology，”Monoclonal Antibodies：Principles and Applications，Birch和Lennox(eds.)，第107-120页(Wiley-Liss，Inc.1995)，和Diamandis，Immunoassay(Academic Press，Inc.1996)。

本发明也涉及用于执行ZcytoR21基因表达测定的免疫学诊断测定法的试剂盒。这些试剂盒包含至少一个装有抗ZcytoR21抗体或抗体片段的容器。试剂盒也可包含装有一种或多种能够指示ZcytoR21抗体或抗体片段存在的试剂的第二种容器。这些指示剂的示例包含可检测的标记物例如放射性标记物、荧光标记物、化学发光标记物、酶标记物、生物发光标记物、胶体金等。试剂盒也可以包含递送给用户的使用ZcytoR21抗体或抗体片段检测ZcytoR21蛋白的手段。例如，书面说明书可声明，可使用包装的抗体或抗体片段检测ZcytoR21。可将书面材料直接用于容器，或可以包装说明书的形式提供书面材料。

I)抗ZcytoR21抗体拮抗ZcytoR21结合IL-17C的用途

用于产生或选择此处有用的抗体的可选择的技术包含在体外将淋巴细胞暴露于可溶性ZcytoR21受体多肽或其片段(例如抗原表位)，并选择噬菌体或相似的载体中的抗体展示文库(例如，通过使用固定的或标记的可溶性ZcytoR21受体多肽或其片段例如抗原表位进行筛选)。可通过筛选在噬菌体中展示(噬菌体展示)的或在细菌例如大肠杆菌中展示的随机肽文库来获得编码具有潜在的结合结构域的多肽的基因，所述多肽是例如可溶性ZcytoR21受体多肽或其片段例如抗原表位。可通过许多方法例如通过随机诱变和随机多核苷酸合成法获得编码所述多肽的核苷酸序列。这些随机肽展示文库可用于筛选与已知的靶相互作用的肽，所述靶可以是蛋白质或多肽，例如配体或受体、生物大分子或合成的大分子、或有机物或无机物。用于制备和筛选这些随机肽展示文库的技术在本领域是已知的(Ladner等人，美国专利号5,223,409；Ladner等人，美国专利号4,946,778；Ladner等人，美国专利号5,403,484和Ladner等人，美国专利号5,571,698)，并且可以从例如Clontech(Palo Alto，CA)、Invitrogen Inc.(San Diego，CA)、New England Biolabs、Inc.(Beverly，MA)和Pharmacia LKBBiotechnology Inc.(Piscataway，NJ)商购获得用于筛选这些文库的随机肽展示文库和试剂盒。可使用可溶性ZcytoR21受体多肽或其片段(例如此处公开的抗原表位多肽序列)筛选随机肽展示文库来鉴定结合包含ZcytoR21的受体多肽的蛋白质。与包含可溶性ZcytoR21的受体多肽相互作用的这些“结合多肽”可用于标记细胞；用于通过亲和纯化分离同源多肽；可将其直接或间接地缀合至药物、毒素、放射性核素等。也可将这些结合多肽用于这样的分析方法，所述方法用于例如筛选表达文库和中和活性，例如用于结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C与ZcytoR21之间的相互作用或病毒与受体的结合。也可将结合多肽用于这样的诊断测定法，该诊断测定法用于确定可溶性包含ZcytoR21的受体多肽的循环水平；用于检测或定量作为潜在的病理状态或疾病的标志物的可溶性或非可溶性包含ZcytoR21的受体。这些结合多肽也可充当在体外和体内阻断或抑制可溶性或膜结合的ZcytoR21单体受体或ZcytoR21同型二聚体、异二聚体或多聚体多肽结合(例如与配体的结合)和信号转导的“拮抗剂”。此外，这些结合多肽用作抗ZcytoR21单体受体或抗ZcytoR21同型二聚体、异二聚体或多聚体多肽，并用于抑制IL-17C的活性以及受体活性或蛋白质结合。针对本发明的天然受体复合物产生的抗体、和ZcytoR21-表位-结合抗体、以及抗ZcytoR21中和性单克隆抗体可以是优选的实施方案，因为其可更特异性地抗ZcytoR21并可抑制IL-17C。此外，可在IL-17C和包含ZcytoR21的可溶性受体的存在下，在IL-17C扩增、信号捕获、萤光素酶或结合测定法中以及在此处描述的其他生物学或生物化学测定法中检测本发明的抗体的拮抗和结合活性。

针对可溶性ZcytoR21受体多肽的抗体(例如针对SEQ ID NO：2、5、8、11、14、21、23、107、109、113、115、117、119或122的抗体)或其片段例如抗原表位可用于在体内抑制IL-17C的炎症效应，用于抵抗炎症和炎性疾病例如牛皮癣、牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎、内毒素血症、炎性肠病(IBD)、结肠炎、哮喘、同种异体移植排斥、免疫介导的肾病、肝胆管病、多发性硬化症、动脉粥样硬化、肿瘤生长的促进或退行性关节病和此处公开的其他炎性病症的治疗用途；用于标记表达ZcytoR21受体的细胞；用于通过亲和层析分离可溶性包含ZcytoR21的受体多肽；用于确定可溶性包含ZcytoR21的受体多肽的循环水平的诊断测定法；用于检测或定量作为潜在的病理状态或疾病的标志物的可溶性的包含ZcytoR21的受体；用于使用FACS的分析方法；用于筛选表达文库；用于产生可充当IL-17C激动剂的抗独特型抗体；和用作在体外和体内结合、阻断、抑制、减少或拮抗ZcytoR21受体功能，或结合、阻断、抑制、减少或拮抗或中和IL-17C活性的中和抗体或拮抗剂。合适的直接标签或标记物包含放射性核素、酶、底物、辅助因子、生物素、抑制剂、荧光标记物、化学发光标记物、磁颗粒等；间接标签或标记物可表征作为中间物的生物素-抗生物素蛋白或其他互补/反互补对的用途。此处的抗体也可直接或间接地缀合至药物、毒素、放射性核素等，和这些缀合物用于体内诊断或治疗用途。此外，可在体外使用抗可溶性的包含ZcytoR21的受体多肽或其片段的抗体，以在测定法例如蛋白质印迹法或本领域已知的其他测定法中检测变性的或非变性的包含ZcytoR21的受体多肽或其片段。

针对可溶性ZcytoR21受体或可溶性ZcytoR21同型二聚体、异二聚体或多聚体受体多肽的抗体用于标记表达对应的受体的细胞并测定其表达水平，用于亲和纯化，在诊断测定法中用于确定受体多肽的循环水平，用于使用荧光激活的细胞分选的分析方法。此外，二价抗体和抗同种型抗体可用作模拟ZcytoR21配体，IL-17C的效应的激动剂。

也可将此处的抗体直接或间接地缀合至药物、毒素、放射性核素等，和这些缀合物用于体内诊断或治疗用途。例如，识别可溶性ZcytoR21受体或可溶性ZcytoR21同型二聚体、异二聚体或多聚体受体多肽的抗体或结合多肽可用于鉴定或处理这样的组织或器官，所述组织或器官表达对应的反互补分子(即，包含ZcytoR21的可溶性或膜结合受体)。更明确地，可将针对可溶性的包含ZcytoR21的受体多肽的抗体或其生物活性片段或部分偶联至可检测的或细胞毒性分子，并递送至具有表达包含ZcytoR21的受体的细胞、组织或器官的哺乳动物，例如表达ZcytoR21的癌。

合适的可检测的分子可直接或间接地附着至结合包含ZcytoR21的受体多肽的多肽例如“结合多肽”(包含上述的结合肽)、抗体或其生物活性片段或部分。合适的可检测的分子包含放射性核素、酶、底物、辅助因子、抑制剂、荧光标记物、化学发光标记物、磁性颗粒等。合适的细胞毒性分子可直接或间接地附着至所述多肽或抗体，并包含细菌或植物毒素(例如，白喉毒素、假单胞菌(Pseudomonas)外毒素、篦麻蛋白、相思豆毒蛋白等)，以及治疗性放射性核素，例如碘-131、铼-188或钇-90(直接地附着至多肽或抗体，或通过例如螯合部分间接地附着)。也可将结合性多肽或抗体缀合至细胞毒性药物，例如阿霉素。为了间接附着可检测的或细胞毒性分子，可将可检测的或细胞毒性分子和互补/反互补对的成员缀合，而将另一个成员与结合性多肽或抗体部分结合。对于这些目的，生物素/链霉抗生物素是示例性互补/反互补对。

在另一个实施方案中，可将结合性多肽-毒素融合蛋白或抗体-毒素融合蛋白用于被靶定的细胞或组织的抑制或切除(例如，以治疗癌细胞或组织)。可选择地，如果结合性多肽具有多个功能结构域(即，激活结构域或配体结合结构域和靶向性结构域)，只包含靶向性结构域的融合蛋白可适合用于将可检测的分子、细胞毒性分子或互补分子导向目的细胞或组织类型。在其中只包含单个结构域的融合蛋白包含互补分子的情况下，可将反互补分子缀合至可检测的或细胞毒性分子。因此这些结构域-互补分子融合蛋白代表了用于一般反互补-可检测的/细胞毒性分子缀合物的细胞/组织特异性递送的一般靶向性载体。

在另一个实施方案中，ZcytoR21结合性多肽-细胞因子或抗体-细胞因子融合蛋白可用于在体内增强杀伤靶组织(例如，脾、胰、血液、淋巴、结肠和骨髓癌)，如果结合性多肽-细胞因子或抗ZcytoR21受体抗体靶向过度增殖的细胞(一般参见，Hornick等人，Blood 89：4437-47，1997)。所述融合蛋白可使细胞因子靶向希望的作用位点，从而提供了升高的细胞因子的局部浓度。合适的抗ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体或多聚体抗体靶向不希望有的细胞或组织(即，肿瘤或白血病)，并且融合的细胞因子通过效应细胞介导提高的靶细胞裂解。例如，用于该目的合适的细胞因子包含白细胞介素2和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。

可选择地，此处描述的结合ZcytoR21受体的多肽或抗体融合蛋白可用于在体内通过直接刺激ZcytoR21受体调控的细胞凋亡途径来增强杀伤靶组织，导致表达包含ZcytoR21的受体的过度增殖的细胞的细胞死亡。

J)具有ZcvtoR21活性的多肽或针对ZcytoR21的抗体的治疗性用途

可使用具有可溶性ZcytoR21活性的氨基酸序列，通过结合ZcytoR21配体IL-17C并从而阻断ZcytoR21配体与内源性ZcytoR21受体的结合来调节免疫系统。也可使用ZcytoR21拮抗剂，例如可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体，通过抑制ZcytoR21配体和内源性ZcytoR21受体的结合来调节免疫系统。因此，本发明包含对这样的受试者使用具有ZcytoR21活性的蛋白质、多肽和肽(例如可溶性ZcytoR21多肽、ZcytoR21多肽片段、ZcytoR21类似物(例如，抗ZcytoR21抗同种型抗体)、和ZcytoR21融合蛋白)，所述受试者缺乏足够量的该多肽，或产生过量的ZcytoR21配体。也可使用ZcytoR21拮抗剂(例如，抗ZcytoR21抗体)治疗产生过量ZcytoR21配体或ZcytoR21的受试者。合适的受试者包含哺乳动物，例如人。例如，这些ZcytoR21多肽和抗ZcytoR21抗体用于结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C，用于治疗炎症和炎性疾病，所述疾病是例如牛皮癣、牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎、内毒素血症、炎性肠病(IBD)、结肠炎、哮喘、同种异体移植排斥、免疫介导的肾病、肝胆管病、多发性硬化症、动脉粥样硬化、肿瘤生长的促进、或退行性关节病和此处公开的其他炎性病症。

在优选的实施方案中，可溶性受体形式的ZcytoR21(SEQ ID NO：3、6、9、12、15、21、23、109、113、115、117、119或122)是在体内结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的单体、同型二聚体、异二聚体或多聚体。针对这些ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体或多聚体的抗体和结合性多肽也用作ZcytoR21活性的拮抗剂，和用作IL-17C，如此处所描述的。

因此，本发明的具体实施方案指向在炎症和免疫疾病或病状中作为拮抗剂的可溶性ZcytoR21和抗ZcytoR21抗体的用途，所述疾病或病状是例如牛皮癣、牛皮癣性关节炎、特应性皮炎、炎性皮肤病症、类风湿性关节炎、炎性肠病(IBD)、克罗恩病、憩室病、哮喘、胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、胰腺癌、胰腺炎、格雷夫斯病、结肠癌和肠癌、自身免疫疾病、脓毒症、器官或骨髓移植；由于内毒素血症、创伤、手术或感染引起的炎症；淀粉样变性病；脾大；移植物抗宿主病；以及其中炎症的抑制、免疫抑制、造血性细胞、免疫细胞、炎症细胞或淋巴细胞、巨噬细胞、T细胞(包含Th1和Th2细胞)的增殖的减少、对病原体或抗原的免疫应答的抑制、或其中IL-17C或另一种IL-17家族成员受到抑制的其他状况是希望的。

此外，抗体或结合性多肽例如结合此处描述的ZcytoR21多肽的可溶性受体、和ZcytoR21多肽自身可用于：

1)在急性炎症、由这样的疾病造成的炎症的治疗中以及淀粉样变性病、和动脉粥样硬化、卡斯尔曼病、哮喘以及与急性期应答的诱导关联的其他疾病的治疗中，阻断、抑制、减少、拮抗或中和经由IL-17C或IL-17C受体(例如ZcytoR21)的信号转导，所述疾病是创伤、组织损伤、手术、脓毒症或感染以及慢性炎性疾病例如哮喘、炎性肠病(IBD)、慢性结肠炎、脾大、类风湿性关节炎、复发性急性炎症发作(recurrent acute inflammatory episodes)(例如，结核病)。

2)在自身免疫疾病的治疗中阻断、抑制、减少、拮抗或中和经由IL-17C或IL-17C受体(例如ZcytoR21)的信号转导，以在免疫细胞(例如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞)中阻止或抑制信号转导，所述自身免疫疾病是例如IDDM、多发性硬化症(MS)、全身性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力、类风湿性关节炎和IBD。可选择地，抗体，例如针对包含ZcytoR21的受体的单克隆抗体(MAb)，也可用作拮抗剂以清除不需要的免疫细胞，从而治疗自身免疫疾病。可用抗例如ZcytoR21结合结构域(如SEQ ID NO：115、117或119中任何一个所述的)的本发明的MAb抑制免疫应答或清除侵入细胞来治疗哮喘、过敏症和其他特应性疾病。使用本发明的可溶性受体、多肽和抗体阻断、抑制、减少或拮抗经由ZcytoR21的信号转导也可有益于胰腺、肾、垂体和神经元细胞的疾病。可有益于IDDM、NIDDM、胰腺炎和胰腺癌。

ZcytoR21可用作癌症的MAb疗法的靶，其中拮抗性MAb抑制癌症生长并靶向免疫介导的杀伤。(Holliger P，和Hoogenboom，H：NatureBiotech.16：1015-1016，1998)。针对可溶性ZcytoR21的Mab也可用于治疗肾病例如肾小球肾炎(glomerulosclerosis)、膜神经病(membranous neuropathy)、淀粉样变性病(其在其他组织中也影响肾脏)、肾动脉硬化症、各种来源的肾小球肾炎、肾的纤维化增殖(fibroproliferative)疾病以及和SLE、IDDM、II型糖尿病(NIDDM)关联的肾功能障碍、肾肿瘤和其他疾病。

3)在自身免疫疾病例如IDDM、MS、SLE、重症肌无力、类风湿性关节炎和IBD的治疗中促进、增强、增加或启动经由IL-17C受体(例如，ZcytoR21)的信号转导。抗ZcytoR21中和抗体和单克隆抗体可为淋巴细胞或其他免疫细胞提供信号以进行分化、改变增殖、或改变改善自身免疫性的细胞因子或细胞表面蛋白的产生。具体地，针对细胞因子分泌的其他模式的T辅助细胞应答的调控可脱离自身免疫应答从而改善疾病(Smith JA等人，J.Immunol.160：4841-4849，1998)。类似地，可使用激动性的抗可溶性ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体和多聚体的单克隆抗体进行信号转导、消除和脱离参与哮喘、过敏和特应性疾病的免疫细胞。经由ZcytoR21的信号转导也可有益于胰腺、肾脏、垂体和神经元细胞的疾病。可有益于IDDM、NIDDM、胰腺炎和胰腺癌。ZcytoR21可作为胰腺癌的MAb疗法的靶，其中发信号的MAb抑制癌的生长和靶向免疫介导的杀伤(Tutt，AL等人，J Immunol.161：3175-3185，1998)。类似地可用抗本发明的针对包含ZcytoR21的可溶性受体的单克隆抗体治疗肾细胞癌。

可使用此处描述的可溶性ZcytoR21多肽在上述的自身免疫疾病、特应性疾病、NIDDM、胰腺炎和肾功能障碍的治疗中结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的活性。可使用可溶性形式的ZcytoR21例如ZcytoR21s2(SEQ ID NO：113)提高由Th细胞介导的抗体应答和/或提高由淋巴细胞或其他免疫细胞产生的IL-4或其他细胞因子。

本发明的可溶性的包含ZcytoR21的受体用作IL-17C的拮抗剂。可通过IL-17C的直接中和或结合获得这样的拮抗效果。除了拮抗性用途外，本发明的可溶性受体可结合IL-17C并用作IL-17C细胞因子的载体蛋白以将所述配体转运至身体内的不同组织、器官和细胞。这样，可将本发明的可溶性受体融合或偶联至这样的分子、多肽或化学部分，所述分子、多肽或化学部分指导可溶性受体-配体复合物至特定的位置，例如组织、特定的免疫细胞或肿瘤。例如，在急性感染或一些癌症中，通过IL-17C的作用诱导的炎症和局部急性期应答蛋白可以产生受益。因此，本发明的可溶性受体可用于特异性地指导IL-17C的作用。参见，Cosman，D. Cytokine 5：95-106，1993；和Fernandez-Botran，R. Exp.Opin. Invest.Drugs 9：497-513，2000。

此外，本发明的可溶性受体可用于稳定IL-17C，从而通过稳定配体免受降解或清除或通过将配体靶向体内的作用位点来增加生物利用率、治疗期限和/或配体的功效。例如天然发生的IL-6/可溶性IL-6R复合物稳定IL-6并可通过gp130受体进行信号转导。参见，Cosman，D.同上，和Fernandez-Botran，R. 同上。此外，可将ZcytoR21和关联配体例如IL-17C组合以包含配体/可溶性受体复合物。这些复合物可用于刺激来自呈递伴侣受体亚基的细胞的应答。ZcytoR21/配体复合物的细胞特异性可能不同于所看到的单独施用的配体的特异性。此外，复合物可具有不同的药物代谢动力学特性例如作用半衰期、剂量/应答和器官或组织特异性。因此ZcytoR21/IL-17C复合物可具有增强免疫应答或刺激肾小球膜细胞或刺激肝细胞的激动剂活性。可选择地，只有表达和复合物二聚化的信号转导的亚基的组织可受到与对IL6/IL6R复合物的应答相似的影响(Hirota H.等人， Proc.Nat’l.Acad.Sci. 92：4862-4866，1995；Hirano，T.in Thomason，A.(Ed.)”TheCytokine Handbook”，第3版，第208-209页).IL-12和CNTF的可溶性受体/细胞因子复合物展示了相似的活性。

此外，炎症是生物抵抗侵入物的保护性应答。炎症是涉及许多细胞和体液介质的级联反应事件。一方面，炎症应答的抑制可造成宿主免疫受损；然而，如果对其不加以抑制，炎症可导致严重的并发症，包含慢性炎性疾病(例如，牛皮癣、关节炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、炎性肠病等)、脓毒性休克和多器官衰竭。重要的是，这些不同的疾病状态具有共同的炎症介质。特征在于炎症的共同疾病对人的发病率和死亡率具有极大的影响。因此很清楚，消炎蛋白，例如ZcytoR21和抗ZcytoR21抗体，对大量的人和动物疾病(从哮喘和过敏至自身免疫性和脓毒性休克)可能具有至关重要的治疗潜能。

1.关节炎

关节炎，包含骨关节炎、类风湿性关节炎、损伤引起的关节炎关节等，是可从消炎蛋白例如本发明的ZcytoR21多肽和MAb的治疗性使用受益的常见炎性病状。例如，类风湿性关节炎(RA)是影响整个身体的全身性疾病，并且是最普遍的关节炎形式之一。其特征在于关节滑膜的炎症，该炎症导致疼痛、强直、温热、发红和肿胀。炎症细胞释放可降解骨和软骨的酶。作为类风湿性关节炎的结果，发炎的关节衬里(joint lining)，滑膜，可侵入和破坏骨和软骨，导致关节损坏、严重疼痛和其他生理学效应。被影响的关节可丧失其形状和排列，导致疼痛和丧失活动能力。

类风湿性关节炎(RA)是免疫介导的疾病，其特征明确地在于导致重度残疾和死亡率增加的炎症和随后的组织破坏。各种细胞因子局部地产生于患风湿症的关节。大量研究已证明IL-1和TNF-α，两种原型促炎细胞因子，在参与滑液炎症和渐进性关节损毁的机制中起着重要作用。事实上，在患有RA的患者中施用TNF-α和IL-1抑制剂已导致炎症的临床和生物学体征的显著提高，以及骨质侵蚀和软骨破坏的放射学体征的减少。然而，尽管存在这些鼓舞人心的结果，但显著百分比的患者对这些试剂没有应答，暗示着其他介质也参与关节炎的病理生理学(Gabay， Expert.Opin.Biol.Ther. 2(2)：135-149，2002)。这些介质中的一种可以是IL-17C，并且这样，结合或抑制IL-17C活性的分子，例如可溶性ZcytoR21、ZcytoR21多肽、或抗ZcytoR21抗体或结合伴侣，可在类风湿性关节炎和其他关节炎疾病中用作减少炎症的有价值的治疗剂。

存在本领域内已知的类风湿关节炎的几种动物模型。例如，在胶原诱导的关节炎(CIA)模型中，小鼠发展和人类类风湿性关节炎非常相似的慢性炎性关节炎。因为CIA和RA共有相似的免疫学和病理学特征，所以这使其成为筛选潜在的人消炎化合物的理想模型。CIA模型在小鼠中是个熟知的模型，其发生依赖于免疫应答和炎症应答。所述免疫应答包含响应作为抗原提供的胶原的B细胞和CD4+T细胞之间的相互作用，并导致抗胶原抗体的产生。炎症相是组织对炎症介质应答的结果，是这些抗体中的一些抗体和小鼠的天然胶原发生交叉反应并激活补体级联反应的结果。使用CIA模型的优点是发病机理的基本机制是已知的。已鉴定了II型胶原上的相关T细胞和B细胞表位，并且已确定了和免疫介导的关节炎相关的各种免疫学参数(例如，延迟型超敏和抗胶原抗体)和炎症参数(例如，细胞因子、趋化因子和降解基质的酶)，并且因此可用于在CIA模型中评价受试化合物的功效(Wooley，Curr.Opin.Rheum. 3：407-20，1999；Williams等人， Immunol.89：9784-788，1992；Myers等人， Life Sci. 61：1861-78，1997；和Wang等人， Immunol. 92：8955-959，1995)。

给这些CIA模型小鼠施用可溶性的包含ZcytoRR21的多肽(ZcytoR21)，例如ZcytoR21-Fc4或其他ZcytoR21可溶性和融合蛋白，被用于评估可溶性ZcytoRR21作为用于减少症状和改变疾病病程的针对IL-17C的拮抗剂的用途。此外，显示IL-17C被本发明的可溶性ZcytoR21多肽或抗ZcytoR21抗体抑制的结果可提供这样的概念的证据，所述概念是，其他IL-17C拮抗剂，例如可溶性ZcytoR21或针对其的中和抗体，也可用于改善疾病的症状和改变疾病的病程。此外，可溶性的包含ZcytoR21的多肽，例如ZcytoR21-Fc4或其他IL-17C可溶性受体(例如，ZcytoR21；SEQ ID NO：3、6、9、12、15、21、23、109、113、115、117、119或122)和抗ZcytoR21抗体以及融合蛋白的系统或局部施用可潜在地抑制RA中的炎症应答。通过示例但非限制性示例说明，每只小鼠10-100ug可溶性ZcytoR21-Fc的注射(通过皮下、腹膜内、或肌内给药途径每周进行1至7次注射，长达4周，但不限于4周)可显著地降低疾病评分(爪评分、发炎率或发病率)。依赖于ZcytoR21-Fc施用的启动(例如在胶原免疫之前或之时，或在第二次胶原免疫之后的任何时间点上，包含疾病已经发展的那些时间点)，ZcytoR21在预防类风湿性关节炎以及阻断其进程上可以是有效的。其他潜在的治疗剂包含ZcytoR21多肽、抗ZcytoR21抗体或抗IL-17C抗体或结合伴侣等。

2.内毒素血症

内毒素血症是通常由传染因子例如细菌和其他传染性疾病因子、脓毒症、中毒性休克综合征造成的严重病状，或是遭受机会感染等的免疫受损患者中的严重病状。消炎蛋白例如本发明的ZcytoR21多肽和抗体的治疗性用途可有助于预防和治疗人和动物中的内毒素血症。ZcytoR21多肽或抗ZcytoR21抗体或结合伴侣，可用作在内毒素血症中减少炎症和病理效应的有价值的治疗剂。

脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症涉及许多在传染性疾病中产生病理效应的促炎介质的参与，并且在啮齿类动物中LPS诱导的内毒素血症是被广泛使用和接受的用于研究潜在的促炎因子或免疫调节剂的药理学效应的模型。革兰氏阴性细菌产生的LPS在脓毒性休克的发病机理中是主要的致病因子(Glausner等人， Lancet 338：732，1991)。事实上可通过给动物单次注射LPS实验式地诱导休克样状态。由对LPS应答的细胞产生的分子可直接或间接地靶向病原体。尽管这些生物学应答保护宿主免受侵入性病原体，但其也可能导致伤害。因此，作为重度革兰氏阴性细菌感染的结果发生的先天免疫的巨大刺激，导致细胞因子和其他分子的过量产生，并导致致命综合症、脓毒性休克综合症的发生，所述疾病的特征在于发烧、低血压、弥散性血管内凝血和多器官衰竭(Dumitru等人 Cell 103：1071-1083，2000)。

LPS的这些毒性效应主要和导致多炎症介质的释放的巨噬细胞活化相关。在这些介质中，如通过中和抗TNF抗体的施用(Beutler等人，Science 229：869，1985)阻止LPS毒性所表明的，TNF似乎起着至关重要的作用。已很好地确定，给C57B1/6小鼠注射1ug大肠杆菌LPS，将在大约注射后2小时导致循环IL-6、TNF-α、IL-1和急性期蛋白(例如，SAA)的显著增加。LPS的毒性似乎由这些细胞因子介导，因为抗这些介质的被动免疫可导致死亡率降低(Beutler等人， Science 229：869，1985)。用于预防和/或治疗脓毒性休克的有效的免疫干预策略包含抗TNF mAb、IL-1受体拮抗剂、LIF、IL-10和G-CSF。

给这些LPS诱导的模型施用可溶性的包含ZcytoR21的多肽，例如ZcytoR21-Fc5、ZcytoR21-Fc10或其他ZcytoR21可溶性和融合蛋白，可用于评价ZcytoR21改善LPS诱导的疾病的症状和改变其病程的用途。此外，显示IL-17C被ZcytoR21抑制的结果提供了这样的概念的证据，所述概念是，其他IL-17C拮抗剂，例如可溶性ZcytoR21或针对其的抗体，也可用于在LPS诱导的模型中改善症状和改变疾病的病程。所述模型将显示通过LPS注射产生的IL-17C的诱导和通过ZcytoR21多肽进行的疾病的有效治疗。因为LPS诱导产生的促炎因子可能促进内毒素血症的病理学，因此可使用拮抗剂ZcytoR21多肽中和IL-17C活性或其他促炎因子以减少内毒素血症的症状，例如在内毒素性休克中看到的症状。其他潜在的治疗剂包含ZcytoR21多肽、抗ZcytoR21抗体或结合伴侣等。

3.炎性肠病IBD

在美国大约有500,000人遭受可影响结肠或直肠(溃疡性结肠炎)或两者、小肠和大肠(克罗恩病)的炎性肠病(IBD)。这些疾病的发病机理不明，但其涉及受影响的组织的慢性炎症。ZcytoR21多肽、抗ZcytoR21抗体或结合伴侣可在IBD和相关疾病中用作减少炎症和病理学效应的有价值的治疗剂。

溃疡性结肠炎(UC)是大肠(通常称为结肠)的炎性疾病，其特征在于结肠的粘膜或最内层衬里(innermost lining)的炎症和溃疡。该炎症经常使结肠排空，导致腹泻。症状包含粪便稀松和关联的腹部绞痛、发烧和体重减少。尽管UC的确切原因不明，但最近的研究表明机体的天然防御系统针对体内被机体当作外来物的蛋白质起作用(“自身免疫反应”)。可能因为其和消化道内的细菌蛋白相似，这些蛋白可激起或刺激开始破坏结肠衬里的过程。当结肠的衬里被破坏时，溃疡形成释放粘液、脓和血液。该疾病通常在直肠区域开始，并且最终可扩展至整个大肠。炎症的重复发作导致肠壁的加厚和具有瘢痕组织的直肠。结肠组织的死亡或脓毒症可伴随严重的疾病发生。溃疡性结肠炎的症状在严重度上不同，并且其发作可以是渐进的或是突然的。可通过许多因素包含呼吸道感染或应激引起发作。

尽管目前不能获得治愈UC的方法，但治疗集中在抑制结肠衬里中的异常炎症过程。可获得包含皮质类固醇免疫抑制剂(例如，硫唑嘌呤、巯嘌呤和氨甲蝶呤)和氨基水杨酸的疗法来治疗疾病。然而，长期使用免疫抑制剂例如皮质类固醇和硫唑嘌呤可导致严重的副作用，包含骨萎缩、白内障、感染以及肝脏和骨髓效应。在其中当前疗法不成功的患者中，手术是种选择。手术包含切除完整的结肠和直肠。

存在可部分模拟慢性溃疡性结肠炎的几种动物模型。某些最广泛使用的模型是唑酮和2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇(TNBS)诱导的结肠炎模型，其诱导结肠中的慢性炎症和溃疡。当通过直肠内滴注法将TNBS导入易感小鼠的结肠后，其在结肠粘膜中诱导T细胞介导的免疫应答，在这种情况下，导致大片的粘膜炎症，其特征在于T细胞和巨噬细胞通过大肠的整个壁的密集渗透。此外，该组织病理学还伴随着渐进性的体重减少(消瘦)、血性腹泻、直肠脱垂和大肠壁加厚(Neurath等人Intern.Rev.Immunol. 19：51-62，2000)。

另一种结肠炎模型使用葡聚糖硫酸钠(DSS)，该葡聚糖硫酸钠诱导急性结肠炎，其表现为血性腹泻、体重减少、结肠缩短和伴有嗜中性粒细胞渗透的粘膜溃疡。DSS诱导的结肠炎的组织学特征在于炎症细胞渗透入粘膜固有层(lamina propria)，淋巴样增生、灶性隐窝损伤(focal crypt damage)和上皮溃疡形成。据认为这些变化是由于DSS对上皮的毒性作用和粘膜固有层细胞的吞噬作用以及TNF-α和IFN-γ的产生而出现的。尽管其常用，但关于DSS和人疾病的关联性的机制的几个问题仍未解决。DSS被视为不依赖于T细胞的模型，因为在T细胞缺陷型动物例如SCID小鼠中观察到其效应。

给这些TNBS或DSS模型施用可溶性的ZcytoR21，或其他ZcytoR21可溶性和融合蛋白，可用于评价可溶性ZcytoR21改善胃肠疾病的症状和改变其病程的用途。此外，显示IL-17C被ZcytoR21抑制的结果提供了这样的概念的证据，所述概念是，其他IL-17C拮抗剂，例如可溶性ZcytoR21或针对其的抗体，也可用于改善结肠炎/IBD模型中的症状和改变疾病的病程。

4.牛皮癣

牛皮癣是影响超过七百万美国人的慢性皮肤病。当新的皮肤细胞生长异常，导致发炎的、肿胀的和鳞状斑的皮肤(其中老皮肤未足够快地脱落)时，牛皮癣发生。斑块状银屑病(plaque psoriasis)(最普遍的形式)的特征在于上面覆盖银白色鳞屑的皮肤炎症斑(“损伤”)。牛皮癣可限制在少数斑中或影响中等至大面积的皮肤，最普遍地出现在头皮、膝盖、肘和躯干。尽管其是高度可见的，但牛皮癣不是接触性传染病。该病的发病机理涉及受影响的组织的慢性炎症。ZcytoR21多肽、抗ZcytoR21抗体或结合伴侣可用作减少牛皮癣、其他炎性皮肤病、皮肤和粘膜过敏以及相关疾病中的炎症和病理效应的有价值的治疗剂。

牛皮癣是T细胞介导的皮肤炎性病症，其可产生极大的不适。它是无法治愈和影响所有年龄的人的疾病。牛皮癣影响大约百分之二的欧洲和北美人口。尽管具有轻微牛皮癣的个体通常可用局部药剂控制其疾病，但世界范围内超过一百万患者需要紫外或全身性免疫抑制剂治疗。不幸的是，紫外照射的不方便性和危险性以及许多疗法的毒性限制了其长期使用。此外，患者通常具有牛皮癣的复发，并且在一些情况下，在停止免疫抑制剂治疗后立刻出现反弹。

也可在检测IL-17C配体的循环水平的诊断系统内和在急性期炎症应答相关的IL-17C的检测中使用ZcytoR21可溶性受体多肽和针对其的抗体。在相关的实施方案中，特异性结合本发明的ZcytoR21可溶性受体的抗体或其他试剂可用于检测循环受体多肽；反过来，ZcytoR21可溶性受体自身可用于检测循环或局部作用的IL-17C多肽。提高或降低水平的配体或受体多肽可以指示病理状况，包含炎症或癌症。此外，急性期蛋白质或分子例如IL-17C的检测可在某些疾病状态中指示慢性炎性病状(例如，哮喘、牛皮癣、类风湿性关节炎、结肠炎、IBD)。这些病状的检测用于帮助疾病的诊断以及帮助医师选择恰当的疗法。

除了此处描述的其他疾病模型以外，可使用重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型体内测量可溶性ZcytoR21和/或抗ZcytoR21抗体对来源于人牛皮癣病灶的炎症组织的活性。已开发了几种小鼠模型，在所述模型中将人细胞移植入免疫缺陷小鼠(统称为异种移植物模型)；参见，例如，Cattan AR，Douglas E， Leuk.Res. 18：513-22，1994和Flavell，DJ， Hematological Oncology 14：67-82，1996。作为牛皮癣的体内异种移植物模型，将人牛皮癣皮肤组织移植到SCID小鼠模型中，并用合适的拮抗剂进行攻击。此外，可使用本领域内的其他牛皮癣动物模型评价IL-17C拮抗剂，例如将人牛皮癣皮肤移植物移植入AGR129小鼠模型，并用合适的拮抗剂攻击(例如，参见，Boyman，O.等人， J.Exp.Med.Online publication # 20031482，2004，此处引用作为参考)。结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C的活性的可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体是优选的拮抗剂，然而，可在该模型中使用抗IL-17C、可溶性ZcytoR21以及其他IL-17C的拮抗剂。类似地，可在SCID模型中使用来源于人结肠炎、IBD、关节炎、或其他炎性损伤的组织或细胞来评估此处描述的IL-17C的拮抗剂的消炎性质。

可通过对具有人炎症组织(例如，牛皮癣损伤等)的SCID小鼠或此处描述的其他模型施用抗ZcytoR21抗体或可溶性ZcytoR21化合物来检验这样的疗法，该疗法经设计使用可溶性ZcytoR21、抗ZcytoR21抗体或其衍生物、激动剂、缀合物或变体来消除、延迟或减少炎症。使用本领域熟知的方法，根据受治疗的群体内随着时间过去增加的消炎效果来测量和通过统计学的方法评价治疗的功效。一些示例性方法包含，但不限于，在牛皮癣模型中测量例如表皮厚度、上层真皮中的炎症细胞的数目和角化不全的程度。这些方法在本领域是已知的并且在此处得到描述。例如，参见，Zeigler，M.等人 Lab Invest 81：1253，2001；Zollner，T.M.等人 J.Clin.Invest. 109：671，2002；Yamanaka，N.等人Microbio.1 Immunol. 45：507，2001；Raychaudhuri，S.P.等人 Br.J. Dermatol. 144：931，2001；Boehncke，W.H等人 Arch.Dermatol.Res. 291：104，1999；Boehncke，W.H等人. J.Invest.Dermatol. 116：596，2001；Nickoloff，B.J.等人 Am.J.Pathol. 146：580，1995；Boehncke，W.H等人 J.Cutan.Pathol. 24：1，1997；Sugai，J.，M.等人 J.Dermatol.Sci. 17：85，1998；和Villadsen L.S.等人 J. Clin.Invest. 112：1571，2003。也要使用熟知的方法例如流式细胞仪(或PCR)随着时间过去监控炎症以量化存在于样品中的炎症或损伤细胞数目、IBD的评分(体重减少、腹泻、直肠出血、结肠长度)、CIARA模型的爪疾病评分和炎症评分。例如，适合在该模型中测试的治疗策略包含使用可溶性ZcytoR21、抗ZcytoR21抗体、其他IL-17C拮抗剂、或相关缀合物或基于破坏可溶性ZcytoR21与其配体IL-17C的相互作用的拮抗剂的直接治疗，或使用可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体或其衍生物、激动剂、缀合物或变体的基于细胞的疗法。

此外，牛皮癣是与增生性表皮角质细胞和浸润性单核细胞(包含CD4+记忆T细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)相关的慢性炎性皮肤病(Christophers， Int.Arch.Allergy Immunol.， 110：199，1996)。目前认为，环境抗原在启动和促进该疾病的病理学中起着重要作用。然而，据认为，对自身抗原的耐受性的丧失介导了牛皮癣的病理状态。据认为树突细胞和CD4⁺T细胞在介导导致病理状态的免疫应答的抗原呈递和识别中起着重要作用。我们最近已经开发了基于CD4+CD45RB转移模型的牛皮癣模型(Davenport等人， Internat.Immunopharmacol.，2：653-672)。给小鼠施用本发明的可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体。疾病评分(皮肤损伤、炎症细胞因子)的抑制表明IL-17C的拮抗剂(例如抗ZcytoR21抗体或ZcytoR21可溶性受体)在牛皮癣中的功效。

5.特应性皮炎

AD是常见的慢性炎性疾病，其特征在于辅助T细胞亚型2(Th2)的过度活化的细胞因子。尽管AD的确切病因不明，但已涉及多种因素，包含极度活跃的Th2免疫应答、自身免疫性、感染、变应原和遗传倾向。疾病的关键特性包含干燥病(皮肤的干燥)、瘙痒症(皮肤的瘙痒)、结膜炎、炎性皮肤损伤、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)感染、提高的血液嗜酸性粒细胞增多症、血清IgE和IgG1的升高、和伴随T细胞、肥大细胞、巨噬细胞和嗜酸性粒细胞浸润的慢性皮炎。已公认金黄色葡萄球菌的建群或感染使AD恶化并使该皮肤病慢性永生。

在患有哮喘和过敏性鼻炎的患者中常发现AD，并且其通常是过敏性疾病的初始表现。西方国家中大约20％的人口遭受这些过敏性疾病，并且由于未知原因，发展中国家的AD发病率正在上升。AD通常始于儿童时期，其通常可从青春期持续至成人期。目前对于AD的治疗包含局部施用皮质类固醇、口服环孢菌素A、非皮质类固醇免疫抑制剂例如他克莫司(软膏形式的FK506)和干扰素-γ。尽管存在各种AD的治疗法，但许多患者的症状并未改善，或他们对药物治疗具有不利反应，需要寻找其他更有效的治疗剂。本发明的可溶性ZcytoR21多肽和抗ZcytoR21抗体，包含本发明的中和性抗人ZcytoR21抗体，可在特定的人疾病例如特应性皮炎、炎性皮肤病和此处公开的其他炎性病症的治疗中用于中和IL-17C。

K)ZcytoR21的药物用途

对于药物用途，本发明的可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体被配制用于根据常规方法肠胃外，特别是静脉内或皮下递送的。通过例如使用微型泵(mini-pumps)或其他合适的技术进行推注、受控释放，或通过在通常1至数小时的时间内的输注进行静脉内给药。一般地，药物制剂将包含造血蛋白和药学可接受的载体例如盐水、缓冲盐水、5％的葡萄糖水溶液等的组合。制剂可进一步包含一种或多种赋形剂、防腐剂、增溶剂、缓冲剂、白蛋白以防止在瓶子表面上的蛋白质损失，等等。当使用这样的组合治疗时，可将细胞因子组合在单一制剂中或以分开的制剂施用。配制的方法在本领域是已知的，并公开于例如 Remington′s Pharmaceutical Sciences，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，EastonPA，1990中，其在此引用作为参考。治疗剂量通常将在每天0.1至100mg/kg患者体重、优选在每天0.5-20mg/kg的范围内，由临床医师根据已接受的标准，考虑要治疗的病状的性质和严重度、患者体质等确定确切的剂量。剂量的确定在本领域技术人员的水平之内。通常在化学疗法后或骨髓移植后在长达28天的一段时间内施用蛋白质或施用至达到＞20,000/mm³、优选地＞50,000/mm³的血小板计数。更一般地，将在一周或更短的时间内，通常在1至3天的时间段内施用蛋白质。一般地，本发明的可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体的治疗有效量是这样的量，该量在淋巴样或骨髓祖细胞的增殖和/或分化上足以产生临床上显著的增加，该增加表现为成熟细胞(例如血小板或嗜中性粒细胞)的循环水平增加。因此血小板病症的治疗将持续直至达到至少20,000/mm3、优选50,000/mm³的血小板计数。本发明的可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体也可以和其他细胞因子例如IL-3、-6和-11；干细胞因子；促红细胞生成素；G-CSF和GM-CSF组合施用。在组合治疗的方案中，其他细胞因子的日剂量一般将是：EPO，150U/kg；GM-CSF，5-151g/kg；IL-3，1-51g/kg；和G-CSF，1-251g/kg。使用EPO的组合治疗特别适合例如具有低EPO水平的贫血患者。

一般地，可溶性ZcytoR21(或ZcytoR21类似物或融合蛋白)或抗ZcytoR21抗体的施用剂量将依这些因素如患者的年龄、体重、身高、性别、总体医学状况和以前的医疗史的变化而变化。一般地，希望给受体提供这样剂量的可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体，该剂量在从大约1pg/kg至10mg/kg(药剂量/患者体重)的范围之内，尽管也可依照情况施用更低或更高的剂量。

可通过局部导管输注或通过直接的损伤区注射经静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、胸膜内、鞘内途径给受试者施用可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体。当通过注射施用治疗性蛋白时，可通过连续输注或通过一次或多次推注进行施用。

给药的其他途径包含经口、经粘膜、经肺和经皮肤施用。经口给药适合聚酯微球体、玉米醇溶蛋白微球体、类蛋白微球体、聚氰基丙烯酸酯微球体和基于脂质的系统(参见，例如，DiBase和Morrel，“OralDelivery of Microencapsulated Proteins，”Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第255-288页(P1enumPress 1997))。通过这样的胰岛素施用模式(参见，例如，Hinchcliffe和Illum，Adv. Drug Deliv.Rev.35：199(1999))举例说明鼻内给药的可行性。可制备包含可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体的水或液体颗粒，并借助于干粉分配器、液体气雾发生器或喷雾器吸入(例如，Pettit and Gombotz，TIBTECH 16：343(1998)；Patton等人，Adv.Drug Deliv.Rev.35：235(1999))。通过AERX糖尿病治疗系统举例说明该方法，该系统是将雾化的胰岛素递送入肺的手工操纵的电子吸入器。研究已显示借助于低频超声已将大如48,000kDa的蛋白质以治疗性浓度递送穿过皮肤，这说明了透皮给药的可行性(Mitragotri等人，Science 269：850(1995))。使用电穿孔的透皮给药提供了施用具有ZcytoR21结合活性的分子的另一种方法(Potts等人，Pharm.Biotechnol.10：213(1997))。

可根据已知的方法配制包含可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体的药物组合物以制备药物用途的组合物，由此将治疗性蛋白质与药学可接受载体混合组合。如果组合物的施用可被受体患者耐受，则认为其是“药学可接受的载体”。无菌磷酸缓冲盐水是药学可接受载体的一个示例。其他合适的载体对于本领域技术人员来说是熟知的。参见，例如，Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第19版(MackPublishing Company 1995)。

为了治疗目的，以治疗有效量给患者施用可溶性ZcytoR21或抗ZcytoR21抗体分子和药学可接受的载体。如果施用量是生理学显著的，那么本发明的治疗分子和药学可接受的载体的组合被认为以“治疗有效量”施用。如果药剂的存在导致受体患者在生理学上产生可检测的变化，那么其是生理学上显著的。例如，如果用于治疗炎症的药剂的存在减缓炎症应答，那么其是生理学显著的。

可以液体剂型、气溶胶、或固体剂型提供包含可溶性ZcytoR21(或ZcytoR21类似物或融合蛋白)或中和性抗ZcytoR21抗体的药物组合物。以可注射的溶液和口服混悬剂来举例说明液体剂型。示例性固体剂型包含胶囊、片剂和控释剂型。后一种剂型通过微型渗透泵和植入体举例说明(Bremer等人，Pharm.Biotechnol.10：239(1997)；Ranade，“Implantsin Drug Delivery，”Drug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(eds.)，第95-123页(CRC Press 1995)；Bremer等人，“ProteinDelivery with Infusion Pumps，”Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第239-254页(Plenum Press 1997)；Yewey等人，“Delivery of Proteins from a Controlled Release InjectableImplant，”Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第93-117页(Plenum Press 1997))。

脂质体提供了将治疗性多肽经静脉内、腹膜内、鞘内、肌内、皮下、或通过口服给药、吸入、或鼻内给药递送至受试者的一种方法。脂质体是由包围水性区室的一层或多层脂双层组成的微小囊泡(一般参见，Bakker-Woudenberg等人，Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.12(Suppl.1)：S61(1993)，Kim，Drugs 46：618(1993)，和Ranade，“Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes as Carriers，”inDrug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(eds.)，第3-24页(CRCPress 1995))。脂质体在组成上类似于细胞膜，因此，脂质体可安全地施用，并可被生物降解。依赖于制备的方法，脂质体可以是单层或多层的，并且脂质体可在大小为0.02μm至大于10μm的直径范围内变化。可将各种药剂封装到脂质体中：疏水性试剂被分配到双层种而亲水性试剂被分配到内部水性空间中(参见，例如，Machy等人，Liposomes In CellBiology And Pharmacology(John Libbey 1987)，和Ostro等人，AmericanJ.Hosp.Pharm.46：1576(1989))。此外，可以通过改变脂质体大小、双层的数目、脂质组成以及脂质体的电荷和表面特征来控制被封装的药剂的治疗利用度。

脂质体几乎可吸附至任何类型的细胞，并随后缓慢地释放被封装的药剂。可选择地，被吸收的脂质体可被吞噬细胞内吞。内吞作用后，脂质体内降解脂质体脂质，并释放被封装的药剂(Scherphof等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.446：368(1985))。在经静脉内施用后，小脂质体(0.1至1.0μm)通常被主要位于肝脏和脾脏的网状内皮系统的细胞吸收，而大于3.0μm的脂质体则沉积在肺中。较小脂质体通过网状内皮系统的细胞优先吸收已用于将化学治疗剂递送至巨噬细胞和肝脏的肿瘤。

可通过几种方法包含使用大剂量的脂质体颗粒饱和或通过药理学方法选择性地使巨噬细胞失活来避开网状内皮系统(Claassen等人，Biochim.Biophys.Acta 802：428(1984))。此外，已显示将糖脂衍生的或聚乙二醇衍生的磷脂整合到脂质体膜中导致网状内皮系统的吸收显著减少(Allen等人，Biochim.Biophys.Acta 1068：133(1991)；Allen等人，Biochim.Biophys.Acta 1150：9(1993))。

也可通过改变磷脂的组成或通过向脂质体中插入受体或配体来制备靶向特定细胞或器官的脂质体。例如，由高含量的非离子表面活性剂制备的脂质体已用于靶向肝脏(Hayakawa等人，Japanese Patent04-244，018；Kato等人，Biol.Pharm.Bull.16：960(1993))。通过在甲醇中混合大豆磷脂酰胆碱、α-生育酚和乙氧基化氢化蓖麻油(HCO-60)，在真空下浓缩该混合物，并随后用水重构该混合物来制备这些制剂。也已显示二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和由大豆衍生的豆甾醇糖苷(sterylglucoside)混合物(SG)和胆固醇(Ch)的脂质体制剂靶向肝脏(Shimizu等人，Biol.Pharm.Bull.20：881(1997))。

可选择地，可将各种靶向性配体结合在脂质体的表面，所述配体例如抗体、抗体片段、糖类、维生素和转运蛋白。例如，可用分枝型半乳糖脂质衍生物修饰脂质体以使其靶向无唾液酸糖蛋白(半乳糖)受体，该受体只在肝细胞的表面表达(Kato和Sugiyama，Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.14：287(1997)；Murahashi等人，Biol.Pharm.Bull.20：259(1997))。类似地，Wu等人，Hepatology27：772(1998)，已显示用无唾液酸基胎球蛋白标记脂质体导致缩短的血浆半衰期并极大地增加了肝细胞对无唾液酸基胎球蛋白标记的脂质体的摄取。另一方面，预先注射无唾液酸基胎球蛋白可抑制包含分枝型半乳糖脂质衍生物的脂质体在肝中积累(Murahashi等人，Biol.Pharm.Bull.20：259(1997))。多乌头酸化的人血清白蛋白脂质体提供了用于将脂质体靶向肝细胞的另一种方法(Kamps等人，Poc.Nat’l Acadd.Sci.USA 94：11681(1997))。此外，Geho等人美国专利号4,603,044，描述了导向肝细胞的脂质体囊泡递送系统，其具有对于和肝脏的特化的代谢细胞关联的肝胆管受体的特异性。

在组织寻靶的更普遍的方法中，用对靶细胞表达的配体特异的生物素化的抗体预标记该靶细胞(Harasym等人，Adv.Drug Deliv.Rev.32：99(1998))。在游离抗体的血浆清除之后，施用链霉抗生物素缀合的脂质体。在另一方法中，将靶向性抗体直接附着至脂质体(Harasym等人，Adv.Drug Deliv.Rev.32：99(1998))。

可使用蛋白质微胶囊化的标准技术将多肽和抗体封装在脂质体中(参见例如，Anderson等人，Infect.Immun.31：1099(1981)，Anderson等人，Cancer Res.50：1853(1990)，和Cohen等人，Biochim.Biophys.Acta 1063：95(1991)，Alving等人“Preparation and Use of Liposomesin Immunological Studies，” Liposome Technology，第2版，第III卷，Gregoriadis(ed.)，第317页(CRC Press 1993)，Wassef等人，Meth.Enzymol.149：124(1987))。如上面所指出的，治疗上有用的脂质体可包含各种组分。例如，脂质体可包含聚(乙二醇)的脂质衍生物(Allen等人，Biochim.Biophys.Acta 1150：9(1993))。

已设计了可降解的聚合物微球体以维持治疗性蛋白的高系统水平。用可降解的聚合物例如聚(丙交酯共乙交酯)(PLG)、聚酐、聚(原酸酯)、非生物可降解的乙基乙酸乙烯酯聚合物制备微球体，其中将蛋白质捕获到聚合物中(Gombotz和Pettit，Bioconjugate Chem.6：332(1995)；Ranade，“Role of Polymers in Drug Delivery，” Drug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(eds.)，第51-93页(CRC Press 1995)；Roskos和Maskiewicz，“Degradable Controlled Release SystemsUseful for Protein Delivery，” Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第45-92页(Plenum Press 1997)；Bartus等人，Science 281：1161(1998)；Putney和Burke，Nature Biotechnology16：153(1998)；Putney， Curr.Opin.Chem.Biol.2：548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的纳米球也可提供用于治疗性蛋白质的静脉内施用的载体(参见，例如，Gref等人，Pharm.Biotechnol.10：167(1997))。

本发明也涉及经化学修饰的具有结合ZcytoR21的活性的多肽，例如ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体或多聚体可溶性受体、和ZcytoR21拮抗剂，例如抗ZcytoR21抗体或结合多肽、或中和性抗ZcytoR21抗体，所述多肽和如上所述的聚合物连接。

本领域技术人员可设计其他剂型，例如由Ansel和Popovich，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第5版(Lea& Febiger 1990)，Gennaro(ed.)， Remington′s Pharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Company 1995)，和Ranade和Hollinger， Drug Delivery Systems(CRC Press 1996)所显示的。

作为说明性示例，可以包含这样的容器的试剂盒提供药物组合物，该容器包含具有ZcytoR21的细胞外结构域的多肽，例如ZcytoR21单体、同型二聚体、异二聚体或多聚体可溶性受体、或ZcytoR21的拮抗剂(例如，结合ZcytoR21多肽的抗体或抗体片段，或中和性抗ZcytoR21抗体)。可以用于单剂或多剂的可注射溶液的剂型提供治疗性多肽，或以将在注射前进行重构的无菌粉末的形式提供。可选择地，这样的试剂盒可包含干粉分配器、液体气雾发生器或用于施用治疗性多肽的喷雾器。这样的试剂盒可进一步包含关于药物组合物的适应症和应用的书面资料。此外，这些资料可包含这样的声明，即在具有已知的对ZcytoR21有过敏反应的患者中禁用ZcytoR21组合物。

可以液体剂型、气溶胶或固体剂型提供这样的药物组合物，该药物组合物包含抗ZcytoR21抗体或结合伴侣(或抗ZcytoR21抗体片段、抗体融合物、人源化抗体等)、或ZcytoR21可溶性受体。通过可注射的溶液、气溶胶、微滴(droplets)、拓扑(topological)溶液和口服悬混剂举例说明液体剂型。示例性固体剂型包含胶囊、片剂和控释剂型。通过微型渗透泵和植入体(Bremer等人， Pharm.Biotechnol.10：239(1997)；Ranade，“Implants in Drug Delivery”，in Drug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(eds.)，第95-123页(CRC Press 1995)；Bremer等人，“Protein Delivery with Infusion Pumps，”Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第239-254页(PlenumPress 1997)；Yewey等人，“Delivery of Proteins from a ControlledRelease Injectable Implant，”Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第93-117页(Plenum Press 1997))举例说明后一种剂型。其他固体剂型包含乳膏、糊剂、其他局部应用的等。

脂质体提供了将治疗性多肽经静脉内、腹膜内、鞘内、肌内、皮下、或通过口服给药、吸入、或鼻内给药递送至受试者的一种方法。脂质体是由包围水性区室的一层或多层脂质双层构成的微小囊泡(一般参见，Bakker-Woudenberg等人，Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.12(Suppl.1)：S61(1993)，Kim，Drugs 46：618(1993)，和Ranade，“Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes as Carriers，”inDrug Delivery Systems，Ranade和Hollinger(eds.)，第3-24页(CRCPress 1995))。脂质体在组成上类似于细胞膜，并且因此，脂质体可安全地施用，并可被生物降解。依赖于制备的方法，脂质体可以是单层或多层的，脂质体可在大小为0.02μm至大于10μm的直径范围内变化。可将各种药剂封装到脂质体中：疏水性试剂被分配到双层中而亲水性试剂被分配到内部水性空间中(参见，例如，Machy等人，Liposomes In CellBiology And Pharmacology(John Libbey 1987)，和Ostro等人，AmericanJ.Hosp.Pharm.46：1576(1989))。此外，可以通过改变脂质体大小、脂双层的数目、脂质组成以及脂质体的电荷和表面特征来控制被封装的药剂的治疗利用度。

脂质体几乎可吸附至任何类型的细胞，并随后缓慢地释放被封装的药剂。可选择地，被吸收的脂质体可被吞噬细胞内吞。内吞作用后，脂质体内降解脂质体脂质，并释放被封装的药剂(Scherphof等人，Ann.N.Y.Acad. Sci.446：368(1985))。在经静脉内给药后，小脂质体(0.1至1.0μm)通常被主要位于肝脏和脾脏的网状内皮系统的细胞吸收，而大于3.0μm的脂质体则沉积在肺中。较小脂质体通过网状内皮系统的细胞的优先吸收已用于将化学治疗剂递送至巨噬细胞和肝脏的肿瘤。

也可通过改变磷脂的组成或通过向脂质体中插入受体或配体来制备靶向特定细胞或器官的脂质体。例如，由高含量的非离子表面活性剂制备的脂质体已用于靶向肝脏(Hayakawa等人，Japanese Patent04-244，018；Kato等人，Biol.Pharm.Bull.16：960(1993))。通过在甲醇中混合大豆磷脂酰胆碱、α-生育酚和乙氧基化氢化蓖麻油(HCO-60)，在真空下浓缩该混合物，并随后用水重构该混合物来制备这些制剂。也已显示二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和由大豆衍生的豆甾醇糖苷混合物(SG)和胆固醇(Ch)的脂质体将制剂靶向肝脏(Shimizu等人，Biol.Pharm.Bull.20：881(1997))。

可选择地，可将各种靶向性配体结合在脂质体的表面，所述配体例如抗体、抗体片段、糖类、维生素和转运蛋白。例如，可用分枝型半乳糖脂质衍生物修饰脂质体以使其靶向无唾液酸糖蛋白(半乳糖)受体，该受体只在肝细胞的表面表达(Kato和Sugiyama，Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.14：287(1997)；Murahashi等人，Biol.Pharm.Bull.20：259(1997))。类似地，Wu等人，Hepa tology 27：772(1998)，已显示用无唾液酸基胎球蛋白标记脂质体导致缩短的血浆半衰期并极大地增加了肝细胞对无唾液酸基胎球蛋白标记的脂质体的吸收。另一方面，预先注射无唾液酸基胎球蛋白可抑制包含分枝型的半乳糖脂质衍生物的脂质体在肝中积累(Murahashi等人，Biol.Pharm.Bull.20：259(1997))。多乌头酸化的人血清白蛋白脂质体提供了用于将脂质体靶向肝细胞的另一种方法(Kamps等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 94：11681(1997))。此外，Geho等人美国专利号4,603,044，描述了指向肝细胞的脂质体小囊泡递送系统，其具有对于和特化肝代谢细胞结合的肝胆管受体的特异性。

在组织寻靶的更普遍的方法中，用对由靶细胞表达的配体特异的生物素化的抗体预标记该靶细胞(Harasym等人， Adv.Drug Deliv.Rev. 32：99(1998))。在游离抗体的血浆清除之后，施用经链霉抗生物素缀合的脂质体。在另一方法中，将靶向性抗体直接附着至脂质体(Harasym等人， Adv.Drug Deliv.Rev. 32：99(1998))。

可使用蛋白质微胶囊化的标准技术将抗ZcytoR21中和抗体和具有IL-17C结合活性的结合伴侣、或ZcytoR21可溶性受体封装在脂质体中(参见例如，Anderson等人， Infect.Immun. 31：1099(1981)，Anderson等人，Cancer Res.50：1853(1990)，和Cohen等人， Biochim.Biophys. Acta 1063：95(1991)，Alving等人“Preparation and Use of Liposomesin Immunological Studies，”Liposome Technology，第2版，第III卷，Gregoriadis(ed.)，第317页(CRC Press 1993)，Wassef等人，Meth.Enzymol.149：124(1987))。如上面所指出的，治疗上有用的脂质体可包含各种组分。例如，脂质体可包含聚(乙二醇)的脂质衍生物(Allen等人， Biochim.Biophys.Acta 1150：9(1993))。

已设计了可维持治疗性蛋白的高系统水平的可降解的聚合物微球体。用可降解的聚合物例如聚(丙交酯共乙交酯)(PLG)、聚酐、聚(原酸酯)、非生物可降解的乙基乙酸乙烯酯聚合物制备微球体，其中蛋白被捕获入聚合物中(Gombotz和Pettit， Bioconjugate Chem. 6：332(1995)；Ranade，“Role of Polymers in Drug Delivery，”in DrugDelivery Systems，Ranade和Hollinger(eds.)，第51-93页(CRC Press1995)；Roskos和Maskiewicz，“Degradable Controlled Release SystemsUseful for Protein Delivery，” Protein Delivery：Physical Systems，Sanders和Hendren(eds.)，第45-92页(Plenum Press 1997)；Bartus等人， Science 281：1161(1998)；Putney和Burke， Nature Biotechnology16：153(1998)；Putney， Curr.Opin.Chem.Biol. 2：548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的纳米球也可提供用于治疗性蛋白的静脉内给药的载体(参见，例如，Gref等人， Pharm.Biotechnol. 10：167(1997))。

本发明也涉及经化学修饰的和如上所述的聚合物连接的抗ZcytoR21抗体或结合伴侣，例如抗ZcytoR21抗体或ZcytoR21可溶性受体。

本领域技术人员可设计其他剂型，例如由Ansel和Popovich，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第5版(Lea& Febiger 1990)，Gennaro(ed.)，Remington′s PharmaceuticalSciences，第19版(Mack Publishing Company 1995)，和Ranade和Hollinger，Drug Delivery Systems(CRC Press 1996)所显示的。

本发明也涉及抗IL-17C抗体的组合物，以及包含此处描述的抗体、肽或多肽的方法和治疗性用途。这些组合物可进一步包含载体。所述载体可以是常规的有机或无机载体。载体的示例包含水、缓冲液、醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油等。

J)转基因小鼠的产生

可将转基因小鼠经基因工程改造以在所有组织中或在组织特异性或组织优选的调控元件的控制下过量表达IL-17C或ZcytoR21基因。可使用这些过量生产者表征由过量表达产生的表型，并且所述转基因动物可用作由过量IL-17C或ZcytoR21导致的人疾病的模型。过量表达这些基因中的任一基因的转基因小鼠也提供了在更大的动物的乳或血液中生产ZcytoR21例如可溶性ZcytoR21的模型生物反应器。用于产生转基因小鼠的方法对于本领域技术人员来说是熟知的(参见，例如，Jacob，“Expression and Knockout of Interferons in Transgenic Mice，”Overexpression and Knockout of Cytokines in Transgenic Mice，Jacob(ed.)，第111-124页(Academic Press，Ltd.1994)，Monastersky和Robl(eds.)，Strategies in Transgenic Animal Science(ASM Press1995)，和Abbud和Nilson，“Recombinant Protein Expression inTransgenic Mice，”Gene Expression Systems：Using Nature for theArt of Expression，Fernandez and Hoeffler(eds.)，第367-397页(Academic Press，Inc.1999))。

例如，用于产生表达ZcytoR21基因的转基因小鼠的方法可始于成年的、可育的雄性(studs)(B6C3f1，2-8个月大小(Taconic Farms，Germantown，NY))、切除输精管的雄性(duds)(B6D2f1，2-8个月，(Taconic Farms))、青春期前的可育雌性(供体)(B6C3f1，4-5周，(Taconic Farms))和成年可育雌性(受体)(B6D2f1，2-4个月，(TaconicFarms))。使供体适应一周，并随后用大约8IU/小鼠的孕马血清促性腺激素(Pregnant Mare’s Serum gonadotrophin)(Sigma ChemicalCompany；St.Louis，MO)经腹膜内注射供体，并在46-47小时后，经腹膜内途径注射8IU/小鼠的人体绒毛膜促性腺激素(hCG(Sigma))以诱导超数排卵。在注射激素后将供体与studs交配。通常在hCG注射后13小时内发生排卵。交配后的上午通过阴道塞的存在确认交配。

在手术镜下收集受精卵。收集输卵管，将卵释放到含有透明质酸酶(Sigma)的尿分析载片中。在透明质酸酶中洗涤卵一次，并在已和5％CO₂、5％O₂和90％N₂一起在37℃下温育的Whitten’s W640介质中洗涤二次(由例如Menino和O’Claray，Biol.Reprod.77：159(1986)，和Dienhart和Downs，Zygote 4：129(1996)所描述的)。然后将卵贮存在37℃/5％CO₂下的孵箱中直至显微注射。

将10至20微克的包含ZcytoR21编码序列的质粒DNA线性化、凝胶纯化并以每微升5-10纳克的终浓度悬浮于10mM Tris-HCl(pH7.4)、0.25mM EDTA(pH8.0)中以用于显微注射。例如，ZcytoR21编码序列可编码包含SEQ ID NOs：3、6、9、12、15、21、23、109、113、115、117、119或122中任何一个的多肽。

将质粒DNA显微注射到包含在由温暖的、CO₂平衡的石蜡油覆盖的W640介质的液滴中的收集的卵中。将DNA吸入注射器针头(通过0.75mmID、1mm OD硼硅玻璃毛细管虹吸)，并注射到单个卵中。用注射针头穿透各个卵，注入一种或两种单倍体前核。

将皮升(picoliter)的DNA注射到前核中，并抽出注射针头而不接触核仁。重复该操作直至所有卵被注射。将成功地显微注射的卵转移至具有预排气的W640介质的器官组织培养皿中以在37℃/5％CO₂的孵箱中贮存过夜。

第2天，将2细胞胚胎转移至假孕受体。在和切除输精管的dud交配后，通过交配塞的存在鉴定所述受体。麻醉受体，并对背部左侧进行修剃，并随后转移至手术解剖用显微镜。在这样的皮肤上产生小切口并穿透整个肌壁，所述皮肤和肌壁位于由肋架、后背部和后腿、膝和脾之间的中间位置勾勒的腹部区域的中间。将生殖器官由腹中取出并置于小手术单上。将脂肪垫伸展在手术单上，将婴儿小弹簧镊(Roboz，Rockville，MD)系在脂肪垫上并悬挂在小鼠的背部，防止器官滑回体内。

使用装有石蜡油之后是交替的W640和气泡的精细移液管，将来自前一天注射的12-17个健康的2细胞胚胎转移至受体。隆起的壶腹(ampulla)位于和占据壶腹和粘液囊(bursa)之间的输卵管，并用28g针在输卵管中靠近粘液囊处产生切口，确保不撕裂壶腹或粘液囊。

将移液管移至输卵管中的切口，并将胚胎吹入其中，使第1个气泡脱离移液管。轻轻地将脂肪垫推入腹膜，并让生殖器官滑入。用一缝线缝合腹膜壁，并用缝合夹闭合皮肤。将小鼠在37℃载物片加温器上恢复最少4小时。

将受者成对地送回笼中，进行19-21天的怀孕。生产后，允许在产后19-21天断奶。区分刚断奶的动物的性别并将其按性别分开放入笼中，并用干净的剪刀从尾部剪下0.5cm的活组织检查样品(用于基因分型)。

使用，例如，QIAGEN DNEASY试剂盒按照厂商说明书从尾部剪出物中制备基因组DNA。使用设计用来扩增ZcytoR21基因或被导入相同质粒的选择标记基因的引物通过PCR分析基因组DNA。在确定动物是转基因动物后，通过将转基因雌性和野生型雄性、或转基因雄性和一只或两只野生型雌性放在一起使其回交产生近交系。在幼崽出生和断奶后，分开性别，并剪下少许尾巴用于基因分型。

为检测转基因在活动物中的表达，进行部分肝切除。手术制备物(surgical prep)由正好在剑突下方的上腹部组成。使用无菌技术，在胸骨下方产生小的1.5-2cm的切口，并将肝脏的左侧叶从腹部取出。使用4-0丝线，围绕下叶打结以确保其在体腔外面。使用无创伤夹夹住结，同时将可吸收的Dexon(American Cyanamid；Wayne，N.J.)的第2个环置于靠近第1个结。在Dexon结的远端进行切割，并将大约100mg切割的肝组织置于无菌培养皿中。将切下的肝切片转移至14ml聚丙烯圆底管中，并在液氮中快速冷冻，并随后在干冰中保存。用缝合线和创伤夹将手术位置封闭，并在手术后将动物的笼子在37℃的加热垫上放置24小时。手术后每天检查动物，并在术后7至10天取下创伤夹。使用RNA溶液杂交测定法或聚合酶链式反应检查各转基因小鼠的ZcytoR21mRNA的表达水平。

除了产生过量表达IL-17C或ZcytoR21的转基因小鼠外，通过基因工程改造产生异常低地表达的或不表达这些基因中的任一基因的转基因小鼠是有用的。这些转基因小鼠提供了与IL-17C或ZcytoR21缺乏关联的疾病的有用模型。如上所述，可使用反义基因、核酶基因或外在引导序列基因抑制ZcytoR21基因的表达。为产生ZcytoR21基因表达不足的转基因小鼠，将这些抑制序列靶向ZcytoR21mRNA。用于产生具有异常低表达的特定基因的转基因小鼠的方法对本领域技术人员来说是已知的(参见，例如，Wu等人，“Gene Underexpression in Cultured Cellsand Animals by Antisense DNA and RNA Strategies，”Methods in GeneBiotechnology，第205-224页(CRC Press 1997))。

产生具有极低或无ZcytoR21基因表达的转基因小鼠的另一可选择的方法是产生这样的小鼠，该小鼠中至少一个正常的ZcytoR21等位基因被无功能的ZcytoR21基因取代。设计无功能ZcytoR21基因的一种方法是在编码ZcytoR21的核酸分子中插入另一个基因，例如选择标记基因。用于产生这些所谓的“基因敲除小鼠”的标准方法对于本领域技术人员来说是已知的(参见，例如，Jacob，“Expression and Knockoutof Interferons in Transgenic Mice，”Overexpression and Knockoutof Cytokines in Transgenic Mice，Jacob(ed.)，第111-124页(Academic Press，Ltd.1994)，和Wu等人，“New Strategies forGene Knockout，”Methods in Gene Biotechnology，第339-365页(CRCPress 1997))。

通过下面的非限制性实施例进一步说明本发明。

实施例

实施例1

利用PCR确定组织组中的人ZcytoR21的组织分布

人快速扫描cDNA组(Human Rapid-Scan cDNA panel)提供24种成人组织并且以称为1×、10×、100×和1000×的4种不同浓度(Origen，Rockville，MD.)排列。使用PCR在“1000×和100×”水平筛选ZcytoR21转录物。有义引物为位于对应5′非翻译区的cDNA区域的zc39334，(5′AGGCCCTGCCACCCACCTTC 3′)(SEQ ID NO：26)。反义引物为位于对应3′非翻译区的cDNA 区域的zc39333，(5′-CGAGGCACCCCAAGGATTTCAG-3′)(SEQ ID NO：27)。根据制造商的建议，使用pfu turbo聚合酶(Stratagene，La Jolla，CA)应用PCR反应，不包括使用rediload染料(Research Genetics，Inc.，Huntsville，AL)、蜡热启动(Molecular Bioproducts Inc.San Diego，CA)和10％(终浓度)DMSO。扩增执行如下：单个循环的94℃4分钟，40个循环的94℃：30秒、51℃：30秒和72℃：3分钟，随后为单个循环的72℃7分钟。使用1％的琼脂糖凝胶对约10μl的PCR反应产物实施标准琼脂糖凝胶电泳。电泳后，对凝胶进行Southern印迹分析并通过标准方法利用³²P同位素标记的寡核苷酸zc40458(5’TCTCTGACTCTGCTGGGATTGG-3′)(SEQ ID NO：28)杂交膜，所述zc40458对翻译区中正好在起始密码子下游的cDNA区域进行绘图。X光片放射自显影法显示ZcytoR21特异性扩增子只在结肠、肺、胃、胎盘和骨骼中。

实施例2

人ZcytoR21×1的克隆

根据制造商的建议，通过利用10ng人hacat细胞系(来源于皮肤)扩增的质粒cDNA文库模板、以及引物5′CGAGGCACCCCAAGGATTTCAG 3′(SEQ ID NO：179)和5′AGGCCCTGCCACCCACCTTC 3′(SEQ ID NO：180)和pfu ultra聚合酶进行PCR来克隆人ZcytoR21×1(SEQ ID NO：1)。这些引物对应于人ZcytoR21cDNA的5′和3′非翻译区(utr region)。对所得到的产物实施制备型低熔点琼脂糖TAE凝胶电泳和大约1.3-2.5KB区域大小选择性纯化并随后利用琼脂酶法进行液化。(Epicenter)这个模板随后在无菌水中1∶50稀释，并取出1uL，利用pfu ultra聚合酶、利用包含FseI限制性位点5′CGTACGGGCCGGCCACCATGGGGAGCTCCAGACTGGCA 3′(SEQ ID NO：181)和包含AscI限制性位点的5′TGACGAGGCGCGCCTCAACCTAGGTCTGCAAGT 3′(SEQID NO：182)通过嵌套PCR进行扩增。这些引物只扩增人ZcytoR21的翻译区。所得到的产物被去盐，并使用chromaspin 100柱(Clontech)去除引物，并随后用FseI和AscI限制性内切酶进行消化，在低熔点琼脂糖凝胶上进行大约1.3-2.5KB片段的大小选择。片段被连接至pZMP11表达载体的FseI/AscI限制性位点。对克隆的DNA插入物实施测序分析，得到命名为ZcytoR21×1(SEQ ID NO：1)的克隆d2。

实施例3

人ZcytoR21×2、ZcytoR21×3和ZcytoR21×4的克隆

根据制造商的建议通过PCR使用1ul的人成人皮肤cDNA(clontech)模板、以及下列引物：5′CGAGGCACCCCAAGGATTTCAG3′(SEQ ID NO：162)和5′AGGCCCTGCCACCCACCTTC3′(SEQ ID NO：163)和pfu ultra聚合酶来克隆人ZcytoR21×2(SEQ ID NO：4)、ZcytoR21×3(SEQ ID NO：7)和ZcytoR21×4(SEQ ID NO：10)。这些引物对应于人ZcytoR21cDNA的5′和3′非翻译区。对所得到的产物实施制备型低熔点琼脂糖TAE凝胶电泳和大约1.3-2.5KB区域大小选择性纯化并随后利用琼脂酶法进行液化。(Epicenter)这个模板随后在无菌水中1∶50稀释，取1uL，利用pfuultra 聚合酶、利用包含FseI限制性位点5′CGTACGGGCCGGCCACCATGGGGAGCTCCAGACTGGCA3′(SEQ ID NO：164)和包含AscI限制性位点的5′TGACGAGGCGCGCCTCAACCTAGGTCTGCAAGT 3′(SEQID NO：165)通过嵌套PCR进行扩增。这些引物只扩增人ZcytoR21的翻译区。所得到的产物被除盐，并使用chromaspin 100柱(Clontech)去除引物，并随后用FseI和AscI限制性内切酶进行消化，在低熔点琼脂糖凝胶上进行大约1.3-2.5KB片段的大小选择。片段被连接至pZMP11表达载体的FseI/AscI限制性位点。对克隆的DNA插入物实施测序分析，得到分别命名为ZcytoR21×2(SEQ ID NO：4)、ZcytoR21×3(SEQ ID NO：7)和ZcytoR21×4(SEQ ID NO：10)的克隆F1、F5和F6。

实施例4

人ZcytoR21×6和ZcytoR21×13的克隆

简而言之，使用从患有活性克罗恩病的患者结肠获得的cDNA作为模板。根据制造商的建议，利用引物393335′CGAGGCACCCCAAGGATTTCAG 3′(SEQ ID NO：53)和39334，5’AGGCCCTGCCACCCACCTTC 3′(SEQ ID NO：54)以及pfu ultra聚合酶通过PCR扩增1微升上述模板。这些引物对应于人ZcytoR21cDNA的5′和3′非翻译区。对所得到的产物实施制备型低熔点琼脂糖TAE凝胶电泳和～1.3-2.5KB区域大小选择性纯化并随后利用琼脂酶法进行液化。(Epicenter)利用pfu ultra聚合酶、利用包含FseI限制性位点ZC 394295′CGTACGGGCCGGCCACCATGGGGAGCTCCAGACTGGCA3′(SEQID NO：65)和包含AscI限制性位点的zc 39433，5′TGACGAGGCGCGCCTCAACCTAGGTCTGCAAGT 3′(SEQ ID NO：66)通过嵌套PCR扩增2微升的纯化片段。这些引物只扩增人ZcytoR21的翻译区。所得到的产物随后用FseI和AscI限制性酶进行消化、在低熔点琼脂糖凝胶上进行～1.3-2.5KB片段的大小选择，并克隆到表达载体pZMP11中。通过将得到的克隆的菌落转移以及与放射标记的寡聚物zc 39948，5′TTTCGCCACCTGCCCCACTGGAACACCCGCTGTCC3′(SEQ ID NO：67)进行杂交鉴别出ZcytoR21阳性克隆。取100个人ZcytoR21阳性克隆用于DNA序列测定，得到不同的ZcytoR21cDNA，包含人ZcytoR21×6(SEQ ID NO：20和21)和人ZcytoR21×13(SEQ ID NO：106和107)。

实施例5

鼠类ZcytoR21的克隆

通过计算和生物信息法利用与人ZcytoR21(SEQ ID NO：6)序列的同源性鉴定出ZcytoR21的假定全长小鼠cDNA序列。使用这个序列进行Blast查询以鉴别潜在的全长小鼠克隆，通过IMAGE克隆协会(consortium clone)的销售商进行购买。这样，购买了对应IMAGE ID编号5319489、4457159、6311568和4482367的克隆(American TypeCulture Collection，Manassas，VA)，并进行整体测序。这些序列的分析导致鉴别出这种基因的2种亚型，命名为鼠类ZcytoR21×5(SEQ IDNO：68和69)和鼠类ZcytoR21×6(SEQ ID NO：13和14)。

实施例6

鼠类ZcytoR21×15的克隆

为了克隆鼠类ZcytoR21×15(SEQ ID NO：110和111)，从人为诱导结肠炎(在下文实施例42中进行描述)的小鼠结肠中提取总RNA。利用标准方法将这种RNA逆转录为第一条链cDNA。根据制造商的建议，利用引物513885′CCTGCCCCTGCCTGCGGAGTT 3′(SEQ ID NO：70)和513875′GTTGCTACACAGGCTGAGGCTACA 3′(SEQ ID NO：71)以及pfu ultra聚合酶通过PCR对大约50ng的cDNA进行扩增。对所得到的产物实施制备型低熔点琼脂糖TAE凝胶电泳和～1.3-2.5KB区域大小选择性纯化并随后利用琼脂酶法进行液化。(Epicenter)对于大约5uL的纯化片段，利用pfu ultra聚合酶、使用上述相同的引物和添加5′T突出的Advantage22聚合酶(Clontech)通过嵌套PCR进行扩增，所述5′T突出使得它们能够在pCR4TOPO(Invitrogen)中进行亚克隆。在亚克隆之前，对扩增子再次进行如上所述的大小选择。利用菌落转移并与放射性标记的寡聚物51602.5′CTACCAAGGCTCAACCAATAGTCCCTGTGGTTTC 3′(SEQ IDNO：72)进行杂交鉴别出阳性扩增子。取出100个小鼠ZcytoR21阳性克隆用于DNA序列测定，得到不同的ZcytoR21cDNA，包含鼠类ZcytoR21×15(SEQ ID NO：110和111)。

实施例7

人IL-17C的克隆

通过计算方法鉴别出假定的IL-17C cDNA片段，并合成PCR引物zc18634(5′atgaggaccgctatccacagaagc 3′)(SEQ ID NO：29)和zc18635(5′ggacgtggatgaactcggtgtgg 3′)(SEQ ID NO：30)，之后用于通过PCR检查关于IL-17C的许多潜在的克隆来源。PCR条件如下：根据制造商的建议使用Marathon cDNA Amplification Kit(Clontech，Palo Alto，CA)，在50ul PCR反应中使用Takara ExTaq聚合酶和缓冲液(Takara，Otsu，Shiga，Japan)以及由来自唾液腺、脊髓、MCF-7细胞系、CaCo2细胞系、T47D细胞系、Molt-4细胞系和前列腺的RNA制备的5ul marathoncDNA模板。同样，每个反应包含2.5ul 10X PCR缓冲液、2.5ul Redi-Load(Invitrogen，Carlsbad，CA)、2ul 2.5mM GeneAmp dNTPs(AppliedBiosystems，Foster City，CA)、0.5ul ExTaq、0.5ul 20pm/ul zc18634和zc18635，并加水至50ul。循环条件如下：94℃，1分钟，30个循环的94℃，20秒、68℃，1分钟，随后为单个循环的72℃，7分钟。

对PCR产物实施琼脂糖凝胶电泳，并从凝胶上切下～200bp的片段，并根据制造商的说明利用Qiaquick Gel提取离心柱(Qiagen，Valencia，CA)进行纯化。随后对这个片段进行测序以证实其为IL-17C。随后对来自扩增的内部胎肺文库(in-house fetal lung library)的DNA进行标准的5′和3′嵌套RACE反应以产生这样的重叠的PCR片段，所述重叠的PCR片段的序列使得能够阐明完整的开放阅读框架外加IL-17的某些5′和3′非翻译序列。

最后，使用zc21607(5′gcacacctggcggcaccatgac3′)(SEQ ID NO：31)和zc21597(5′ctgtcctccagacacggggaatg3′)(SEQ ID NO：32)以通过PCR由扩增的内部胎肺文库的DNA产生包含的完整的开放阅读框架外加IL-17C的某些3′非翻译序列的cDNA。PCR条件如下：在50ul PCR反应中使用Advantage 2PCR试剂(Clontech，Palo Alto，CA)以及5ul模板、5ul 10×PCR缓冲液、5ul Redi-Load(Invitrogen，Carlsbad，CA)、4ul 2.5mM GeneAmp dNTPs(Applied Biosystems，Foster City，CA)、lul Advantage 2聚合酶混合物、5ul GC-melt(Clontech，Palo Alto，CA)、2.5ul DMSO、1ul 20pm/ul zc21607和zc21597，并加水至50ul。循环条件如下：94℃，1分钟；25个循环的94℃，20秒、68℃，1分30秒，随后为单个循环的72℃，5分钟。对PCR产物实施琼脂糖凝胶电泳，并从凝胶上切下～770bp的片段，并根据制造商的说明利用Qiaquick Gel提取离心柱(Qiagen，Valencia，CA)进行纯化。

根据制造商的说明将片段亚克隆到TA克隆载体中PCR2.1(Invitrogen，Carlsbad，CA)中，测序、并与重叠的RACE产物的序列和现有的公开的人基因组序列进行比较以鉴别出可能的PCR错误。正确的克隆被存档并用于另外的研究应用。

实施例8

鼠类IL-17C的鉴别和克隆

基于NCBI小鼠(Mus musculus)mRNA登录号#XM_146558和内部计算的基因预测模型，通过来自鼠类基因组DNA的预测的外显子(Clonetech目录号(Cat.)#6650-1，批号(lot)#0050310)PCR生成小鼠IL-17C的cDNA。使用引物49910：5′TCACTGTGATGAGTCTCCTGCTTCTAG3′(SEQ BD NO：73)和44991：5′GTGTCGATGCGATATCTCCATGGTGAGA3′(SEQ ID NO：74)产生外显子2PCR产物。使用引物49912：5′GAGATATCGCATCGACACAGATGAGAACC3′(SEQ IDNO：75)和49913：5′TCACTGTGTAGACCTGGGAAGA3′(SEQ ID NO：76)产生外显子3PCR产物。随后在交叉(cross-over)PCR反应中使用关于外显子2和3的PCR 产物连同引物49959：5′GCCACCATGGCCACCGTCACCGTCACTGTGATGAGTCTCCTGCTT 3′(SEQ ID NO：77)一起扩增外显子1和完整的cDNA。将所得到的编码鼠类IL-17C(SEQID NO：19)的PCR产物克隆到PCR II Blunt TOPO载体中用于序列确认。

实施例9

使用腺病毒构建体表达IL-17C

无标记的重组腺病毒的产生

利用在5′和3′末端分别添加FseI和AscI限制性位点的引物通过PCR扩增人IL-17C(SEQ ID NO：16)的蛋白质编码区。在这样的PCR反应中使用PCR引物ZC21925(5′cacacaggccggccaccatgacgctcctccccggcctcc3′)(SEQ ID NO：37)和ZC21922(5′cacacaggcgcgccttcacactgaacggggcagcacgc3′)(SEQ ID NO：38)以及包含全长的鼠类IL-17C cDNA的pCR2.1ta质粒，所述PCR反应如下：单个循环的95℃，5分钟，随后为18个循环的95℃，0.5分钟、58℃，0.5分钟和72℃，0.5分钟，随后为72℃，7分钟，随后为4℃保温。将PCR反应产物上样到在TAE缓冲液中的1.2％(低熔点)SEAPLAQUE GTG(FMC BioProducts；Rockland，ME)凝胶中。从凝胶上切下IL-17C PCR产物，在65℃使之融化，苯酚提取2次并随后进行乙醇沉淀。PCR产物随后用FseI-AscI消化、苯酚/氯仿提取、乙醇沉淀并再次溶液化(Tris/EDTA，pH 8)。

随后将IL-17C片段连接到修饰的pAdTrack CMV(He等人，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 95：2509(1998))的FseI-AscI位点。这个构建体也包含绿色荧光蛋白(GFP)标记基因。用SV40启动子替代驱动GFP表达的CMV启动子，并用人生长激素多腺苷酸化信号替代SV40多腺苷酸化信号。此外，用FseI、EcoRV和AscI位点替代天然的多聚接头。将这种修饰形式的pAdTrack CMV命名为pZyTrack。利用FAST-LINK DNA连接和筛选试剂盒(EPICENTRE TECHNOLOGIES；Madison，WI)进行连接。通过标准微量提取(mini prep)法鉴别出包含IL-17C cDNA的克隆。为了使质粒线性化，用PmeI消化大约5μg pZyTrack IL-17C质粒。大约1μg的线性化质粒与200ng超螺旋pAdEasy(He等人Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 95：2509(1998))一起共转化到BJ5183细胞中。利用BIO-RADGENE PULSER(BIO-RAD laboratories，Inc.；Hercules，CA)在2.5kV、200ohms和25mFa下进行共转化。将完整的共转化物涂板在包含25μg/ml卡那霉素的4个LB平板上。挑取最小的克隆，并在LB/卡那霉素中扩增，并通过标准DNA微量提取法鉴别重组腺病毒DNA。用FseI-AscI消化重组腺病毒DNA证实IL-17C的存在。将重组腺病毒微量提取的DNA转化到DH10B感受态细胞中，并根据试剂盒说明书使用QIAGEN大量提取(maxi prep)试剂盒制备DNA。

用重组DNA转染293A细胞

在37℃在包含20-30U PacI的100μl反应体积中用PacI酶将大约5μg重组腺病毒DNA消化3小时。用等体积的苯酚/氯仿将消化的DNA提取2次并用乙醇进行沉淀。将DNA团块重悬浮于5μl蒸馏水中。用PacI消化的DNA转染在前一天接种并生长至60-70％融合的T25烧瓶的QBI-293A细胞(Quantum Biotechnologies，Inc.；Montreal，Quebec，Canada)。用无菌HBS(150mM NaCl，20mM HEPES)将PacI消化的DNA稀释至50μl的总体积。在分开的试管中，用HBS将25μl DOTAP(1mg/ml；Roche Molecular Biochemicals；Indianapolis，IN)稀释至100μl的总体积。将DNA加入DOTAP，通过移液管上下吹打来轻轻混匀，并在室温下放置15分钟。从293A细胞中去除培养基并用包含1mM丙酮酸钠(LIFE TECHNOLOGIES，Inc)、0.1mM MEM非必需氨基酸(LIFETECHNOLOGIES，Inc)和25mM HEPES缓冲液(LIFE TECHNOLOGIES，Inc)的5ml无血清的MEMalpha(LIFE TECHNOLOGIES，Inc；Rockville，MD)进行洗涤。将5毫升无血清的MEM加入293A细胞中，并维持在37℃。将DNA/脂质混合物逐滴加入T25烧瓶的293A细胞中，轻轻混合并在37℃温育4小时。4小时后，吸出包含DNA/脂质混合物的培养基，并更换5ml含有5％胎牛血清的完全MEM。监测转染细胞的绿色荧光蛋白(GFP)表达和病灶(foci)的形成。

用重组腺病毒DNA转染293A细胞后7天，细胞表达GFP蛋白并开始形成病灶。这些病灶是病毒“斑”，并通过细胞刮棒收集所有的293A细胞以收集粗病毒裂解物。将裂解物转移到50ml圆锥管中。为了释放来自细胞的大多数病毒颗粒，在干冰/乙醇浴和37℃水浴中进行3次冻结/融化循环。

重组腺病毒(rAdV)的扩增

扩增粗裂解物(“初次扩增”)以获得IL-17C rAdV裂解物的工作贮存液。将200毫升粗rAdV裂解物加入含有几乎融合(80-90％)的293A细胞、各为10cm的10个平板中，所述细胞在20小时前已建立。在白光显微镜下对平板监测细胞病变效应48-72小时并在荧光显微镜下监测GFP的表达。当所有的293A细胞都显示细胞病变效应时，收集这种初次扩增的贮存裂解物，并如上所述进行冻结/融化循环。

如下获得IL-17C rAdV的二次扩增。准备含有293A细胞的20个15cm的组织培养皿，从而使得细胞为80-90％融合。去除几乎所有20毫升5％的MEM培养基，并用300-500ml初次扩增的rAdV裂解物接种每个培养皿。48小时后，由于病毒产生导致293A细胞裂解，然后将这种裂解物收集到250ml聚丙烯离心瓶中并纯化rAdV。

AdV/cDNA纯化

将终浓度为0.5％的NP-40去污剂加入粗裂解物瓶中以裂解所有细胞。将瓶子置于转动平台10分钟，无需更换瓶子尽可能快地摇动。碎片通过在20,000×g离心15分钟进行沉淀。将上清液转移至250ml聚碳酸酯离心瓶中，并加入0.5体积的20％PEG8000/2.5M NaCl溶液。瓶子在冰上振荡过夜。瓶子在20,000×g离心15分钟，并将上清液弃于漂白溶液(bleach solution)中。沉淀的病毒/PEG看起来是位于沿着瓶壁在旋转标记的任何一侧上的2条垂直线的白色沉淀物。利用无菌的细胞刮棒，将来自2个瓶子的沉淀物重悬浮于2.5mlPBS中。将病毒溶液置于2ml微量离心管中，并在微量离心机中14,000×g下离心10分钟，以去除任何其他的细胞碎片。将来自2ml微量离心管的上清液转移至15ml聚丙烯snapcap试管中，并用氯化铯(CsCl)调整至1.34g/ml的密度。估计病毒溶液的体积并加入0.55g/ml CsCl。CsCl溶解并且1ml这种溶液称重为1.34g。将3.2ml该溶液转移至聚碳酸酯厚壁离心管中，并于25℃在Beckman Optima TLX微量超速离心机中用TLA-100.4转头在80,000rpm(348,000×g)下旋转3-4小时。病毒形成白色条带。使用大口径吸头(wide-bore pipette tip)收集病毒条带。

来自梯度的病毒含有大量CsCl，在病毒可以用于细胞之前必需去除所述CsCl。由SEPHADEX G-25M预包装的Pharmacia PD-10柱(AmershamPharmacia Biotech，Inc；Piscataway，NJ)用于去除病毒制剂中的盐分。柱用20ml PBS平衡。将病毒上样并允许进入柱中。将5毫升PBS加入柱中并收集8-10滴级分。在分光光度计上260nm处测定每种级分1：50稀释的光密度。在级分7-12之间存在清晰的吸光值峰。汇集这些级分，并测定1∶10稀释的光密度(OD)。下式用于将OD转换为病毒浓度：(260nm处的OD)(10)(1.1×10¹²)＝病毒粒子/ml。1∶10稀释的IL-17CrAdV的OD为0.27，给出病毒浓度为2.8×10¹²病毒粒子/ml。

为了贮存病毒，将甘油加到纯化病毒中至终浓度为15％，轻柔但有效地混合，并等分贮存至-80℃。

在50％CPE(TCID 50)病毒滴定测定中的组织培养感染剂量

根据由Quantum Biotechno logies，Inc.(Montreal，Quebec，Canada)开发的规程测量重组病毒感染力。简而言之，对于每种被测定的重组病毒在包含2％胎牛血清的MEM中用1×10⁴293A细胞/孔种植2个96孔组织培养板。24小时后，在包含2％胎牛血清的MEM中进行每种病毒的1×10^-2至1×10^-14的10倍稀释。将100毫升每种稀释物各置于20个孔中。37℃5天后，关于细胞病变效应孔读为阳性或阴性，并且计算出关于“斑形成单位/ml(PFU)值。

按照上述Quantum Biotechnologies，Inc.生产TCID₅₀制剂。从其中使用的病毒1×10^-2至1×10^-14稀释的板中测定滴定度，并在感染后5天读取。在每个稀释度上测定细胞病变效应/孔总数目的阳性孔比率(R)。

为了计算未稀释的病毒样品的滴定度，首先根据1+d(S-0.5)计算因子“F”，其中“S”是比率(R)的总数，和“d”是稀释系列的log10(例如，对于10倍稀释系列“d”等于1)。未稀释的样品的滴定度计算为：10^(1+F)＝TCID₅₀/ml。为了将TCID₅₀/ml转换为pfu/ml，将滴定度(T)计算中的指数减去0.7。

使用这种方法，IL-17C腺病毒的滴定度为1.3×10¹⁰pfu/ml。

实施例10

表达人ZcytoR21的哺乳动物表达载体的构建

制备表达载体用于表达人ZcytoR21多肽的可溶性细胞外结构域ZcytoR21CHIS，其中的构建体被设计为表达包含推测的起始甲硫氨酸和邻近于推测的跨膜结构域截短的、并具有C-末端HIS标签：5′GGCTCAGGATCTGGTGGCGGCCATCACCACCATCATCACTAAATCTAGA 3′(SEQ IDNO：78)的ZcytoR21多肽。

利用ZC50282：5′GAAGAACGTCTCTCATGGGGAGCTCCAGACTGGCAGC3′(SEQ ID NO：79)和ZC50283：5′GAAGAACGTCTCTAGCCGTGTCTGTAAGAGACATCCGGAC3′(SEQ ID NO：80)作添加Esp3I限制性位点的PCR引物以及Tgo试剂(Roche，Applied Sciences，Indianapolis，IN)制备1160bp PCR产生的ZcytoR21 DNA片段。使用含有ZcytoR21cDNA的质粒(Clonetrack ID#100989)作为模板。ZcytoR21片段的PCR扩增执行如下：单个循环的94℃，2分；随后为15个循环的94℃，30秒、65℃，30秒、72℃，1分，随后为单个循环的72℃，5分，并随后维持在4℃。根据制造商的方案利用QIAquick PCR纯化试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)纯化反应物并用Esp3I(Fermentas，Hanover，MD)进行消化。

将被切割的DNA亚克隆到已用Eco31I(Fermentas，Hanover，MD)切开的质粒pExpress47中。pExpress47载体使用天然的ZcytoR21信号肽并将HIS标签：5′GGCTCAGGATCTGGTGGCGGCCATCACCACCATCATCACTAAATCTAGA3′(SEQ ID NO：125)附加至编码ZcytoR21多肽的多核苷酸序列的细胞外部分的C末端。质粒pExpress47是包含pDONR221主链、Kozak、用于ORF克隆、用于与3′组氨酸标签无缝连接的Eco31I位点和克隆位点之间的Cassette A(Invitrogen)的入门载体(entry vector)。该质粒也具有pUC复制起点、哺乳动物选择标记表达单位。

利用Fast接合连接试剂盒(link ligation kit)(EPICENTREtechnologies(Madison，WI)连接约10μl限制性酶切消化的ZcytoR21插入物和约75ng消化的载体。根据制造商的说明将2微升的连接反应物转化到One shot MAX efficiency DH10B-T1感受态细胞(Invitrogen，Carlsbad，California)中，并在包含25μg/ml卡那霉素的LB平板上涂板且过夜温育。取菌落用于在单菌落的5ml液体培养中测序。通过序列分析证实克隆的插入序列。

使用LR反应试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，California)、约300ng pExpress 4表达载体和约100-300ng ZcytoR21/pexpress47入门克隆建立LR反应。质粒pExpress4是将入口(Gateway)转变盒A克隆到pEXPRESS-01的Nru I位点制备而成的表达载体；标准载体；模块设计(modular design)；启动子(Kpn I/Mfe)；多聚腺苷酸(Xba I/HindIII)；Zeo选择标记(Hind III/Bgl II)；大肠杆菌Ori(Bgl II/KpnI)；基因Amp盒(Sfi I/Sap I)。反应包含4μl 5×LR反应缓冲液、1μl拓扑异构酶、4μl LR Clonase酶混合物和TE缓冲液，终体积为20。25℃温育1小时，随后加入2μl蛋白酶K，并在37℃温育10分。根据制造商的说明将1微升LR反应物转化到One shot MAX efficiencyDH10B-T1感受态细胞(Invitrogen，Carlsbad，California)中，并在包含50μg/ml卡那霉素的LB平板上涂板且过夜温育。通过PCR筛选菌落并同时接种100μl LB肉汤。

利用下列条件建立PCR：Advantage 2试剂(BD BiosciencesClontech，Palo Alto，CA)以及ZC5020：5′CACTGGAGTGGCAACTTCCAG3′(SEQ ID NO：126)和ZC14063：5′CACCAGACATAATAGCTGACAGACT3’(SEQID NO：127)作为PCR引物。ZcytoR21的PCR扩增执行如下：单个循环的94℃，2分钟；随后为35个循环的94℃，30秒、62℃，30秒、72℃，2分钟，随后为单个循环的72℃，5分钟，并随后维持在4℃。通过4％琼脂糖凝胶电泳显现出预测大小为1468bp的条带。用100μl LB克隆混合物接种5ml液体培养物，并在37℃振荡放置过夜。

根据制造商的指导利用QIAprep离心Miniprep试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)进行微量制备。

实施例11

表达人IL-17C的哺乳动物表达载体的构建

制备表达载体用于表达人IL-17C多肽IL-17CCHIS，其中的构建体被设计为表达包含去除终止密码子的预测的起始甲硫氨酸至最后一个氨基酸、并具有C末端组氨酸标签5′GGCTCAGGATCTGGTGGCGGCCATCACCACCATCATCACTAAATCTAGA3’(SEQ ID NO：128)的IL-17C多核苷酸。

利用ZC80204″5′GAAGAACGTCTCTCATGACGCTCCTCCCCGGCCTCC3′(SEQ ID NO：129)和ZC80300：5′GAAGAACGTCTCTAGCCCACTGAACGGGGCAGCACGCAGGTG3′(SEQ ID NO：130)作为添加Esp3I限制性位点的PCR引物以及Tgo试剂(Roche，Applied Sciences，Indianapolis，IN)连同DMSO(Sigma，ST.Louis，MO)或不连同DMSO一起制备594bp PCR产生的IL-17C DNA片段。使用包含IL-17C cDNA的质粒(Clonetrack ID#100527)作为模板。IL-17C片段的PCR扩增执行如下：IL-17C片段的PCR扩增执行如下：单个循环的94℃，2分；随后为3个循环的94℃，15秒、45℃，30秒、72℃，2.5分，随后为9个循环的94℃，15秒、63℃，30秒、72℃，2.5分；随后为单个循环的72℃，5分，并随后维持在4℃。根据制造商的方案利用QIAquickPCR纯化试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)纯化反应物并用Esp3I(Fermentas，Hanover，MD)进行消化。根据制造商的说明利用QIAquickPCR纯化试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)纯化反应物。

将被切割的DNA 克隆到已用Eco31I(Fermentas，Hanover，MD)切开的pExpress47质粒中。pExpress47载体使用天然的IL-17C信号肽并将组氨酸标签：5′GGCTCAGGATCTGGTGGCGGCCATCACCACCATCATCACTAAATCTAGA3′(SEQ ID NO：131)附着至编码IL-17C多肽的多核苷酸序列。质粒pExpress47是包含pDONR221主链、Kozak、用于ORF克隆、用于与3′组氨酸标签无缝连接的Eco31I位点和克隆位点之间的Cassette A(Invitrogen)的入门载体。该质粒也具有pUC复制起点、哺乳动物选择标记表达单位。

利用Fast接合连接试剂盒(EPICENTRE technologies(Madison，WI)连接约10μl限制性酶切消化的IL-17C插入物和约75ng消化的载体。根据制造商的说明将2微升的连接反应物转化到One shot MAXefficiency DH10B-T1感受态细胞(Invitrogen，Carlsbad，California)中，并在包含25μg/ml卡那霉素的LB平板上涂板且过夜温育。取菌落用于在单菌落的5ml液体培养中测序。通过序列分析证实克隆的插入序列。

使用LR反应试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，California)、约300ng pExpress 4表达载体和约100-300ng IL-17C/pexpress47入门克隆建立LR反应。质粒pExpress4是将入口转变盒A克隆到pEXPRESS-01的Nru I位点制备的表达载体；标准载体；模块设计；启动子(Kpn I/Mfe)；多聚腺苷酸(Xba I/Hind III)；Zeo选择标记(Hind III/Bgl II)；大肠杆菌Ori(Bgl II/Kpn I)；基因Amp盒(Sfi I/Sap I)。反应包含4μl 5×LR反应缓冲液、1μl拓扑异构酶、4μl LR Clonase酶混合物和TE缓冲液，终体积为20μl。25℃温育1小时，随后加入2μl蛋白酶K，并在37℃温育10分钟。根据制造商的说明将1微升LR反应物转化到One shot MAX efficiency DH10B-T1感受态细胞(Invitrogen，Carlsbad，California)中，并在包含50μg/ml卡那霉素的LB平板上涂板且过夜温育。通过PCR筛选菌落并同时接种100μl LB肉汤。

利用下列条件建立PCR：Advantage 2试剂(BD BiosciencesClontech，Palo Alto，CA)以及ZC5020：5′CACTGGAGTGGCAACTTCCAG3′(SEQ ID NO：132)和ZC14063：5′CACCAGACATAATAGCTGACAGACT3’(SEQID NO：133)作为PCR引物。IL-17C的PCR扩增执行如下：单个循环的94℃，2分；随后为35个循环的94℃，30秒、62℃，30秒、72℃，2分，随后为单个循环的72℃，5分，并随后维持在4℃。通过琼脂糖凝胶电泳显现出预测大小为942bp的条带。用100μl LB克隆混合物接种5ml液体培养物，并在37℃振荡放置过夜。甘油贮存液保存(archieved)在-80℃。板与甘油贮存液接触并在37℃放置过夜。用克隆接种5ml液体培养物，并在37℃振荡放置过夜。使用5ml ON培养物接种500ml液体培养物，在37℃振荡放置过夜。

根据基于制造商的指导的最优化方案利用QIAfilter质粒mega试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)进行mega制备。

实施例12

鼠类IL-17C的哺乳动物表达载体的构建

制备表达载体用于表达鼠类IL-17C多肽IL-17CCHIS，其中的构建体被设计为表达包含去除终止密码子的预测的起始甲硫氨酸至最后一个氨基酸、并具有C末端组氨酸标签5′GGCTCAGGATCTGGTGGCGGCCATCACCACCATCATCACTAAATCTAGA3′(SEQ ID NO：134)的IL-17C多核苷酸。

利用ZC50745：5′GAAGCCGAAGACTTCATGGCCACCGTCACCGTCACT3′(SEQID NO：135)和ZC50743：5′GAAGCCGAAGACTTAGCCCTGTGTAGACCTGGGAAGAA3′(SEQ ID NO：136)作为添加BbsI3限制性位点的PCR引物以及Tgo试剂(Roche，Applied Sciences，Indianapolis，IN)外加10％DMSO(Sigma，ST.Louis，MO)制备620bp PCR产生的IL-17C DNA片段。使用包含IL-17C cDNA的质粒(Clonetrack ID#101619)作为模板。IL-17C片段的PCR扩增执行如下：单个循环的94℃，2分；随后为3个循环的94℃，15秒、45℃，30秒、72℃，2.5分，随后为9个循环的94℃，15秒、63℃，30秒、72℃，2.5分；随后为单个循环的72℃，5分，并随后维持在4℃。根据制造商的方案利用QIAquick PCR纯化试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)纯化反应并用BbsI(Fermentas，Hanover，MD)进行消化。根据制造商的说明使用QIAquick凝胶提取试剂盒(Qiagen，Santa Clarita，Ca.)对反应物进行凝胶提取。

将被切割的DNA亚克隆到已用Eco31I(Fermentas，Hanover，MD)切开的pExpress47质粒中。pExpres s47载体使用天然的IL-17C信号肽并将组氨酸标签：5′GGCTCAGGATCTGGTGGCGGCCATCACCACCATCATCACTAAATCTAGA3′(SEQ ID NO：137)附着至编码IL-17C多肽的多核苷酸序列的C末端。质粒pExpress47是包含pDONR221主链、Kozak、用于ORF克隆、用于与3′组氨酸标签无缝连接的Eco31I位点和克隆位点之间的Cassette A(Invitrogen)的入门载体。该质粒也具有pUC复制起点、哺乳动物选择标记表达单位。

利用Fast接合连接试剂盒(EPICENTRE technologies(Madison，WI)连接约10μl限制性酶切消化的IL-17C插入物和约75ng消化的载体。根据制造商的说明将2微升的连接反应物转化到One shot MAXefficiency DH10B-T1感受态细胞(Invitrogen，Carlsbad，California)中，并在包含25μg/ml卡那霉素的LB平板上涂板且过夜温育。送交菌落用于在单菌落的5ml液体培养中测序。通过序列分析证实克隆的插入序列。

使用LR反应试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，California)、约300ng pExpress 4表达载体和约100-300ng IL-17C/pexpress47入门克隆建立LR反应。质粒pExpress4是将入口(Gateway)转变盒A克隆到pEXPRESS-01的Nru I位点制备的表达载体；标准载体；模块设计；启动子(Kpn I/Mfe)；多聚腺苷酸(Xba I/Hind III)；Zeo选择标记(Hind III/Bgl II)；大肠杆菌Ori(Bgl II/Kpn I)；基因Amp盒(Sfi I/Sap I)。反应包含4μl 5×LR反应缓冲液、1μl拓扑异构酶、4μl LR Clonase酶混合物和TE缓冲液，终体积为20。25℃温育1小时，随后加入2μl蛋白酶K，并在37℃温育10分。根据制造商的说明将1微升LR反应物转化到One shot MAX efficiency DH10B-T1感受态细胞(Invitrogen，Carlsbad，California)中，并在包含50μg/ml卡那霉素的LB平板上涂板且过夜温育。通过PCR筛选菌落并同时接种100μl LB肉汤。

利用下列条件建立PCR：Advantage 2试剂(BD BiosciencesClontech，Palo Alto，CA)以及ZC5020：5′CACTGGAGTGGCAACTTCCAG 3’(SEQ ID NO：138)和ZC14063：5′CACCAGACATAATAGCTGACAGACT3’(SEQID NO：139)作为PCR引物。IL-17C的PCR扩增执行如下：单个循环的94℃2分；随后为35个循环的94℃30秒、62℃30秒、72℃2分，随后为单个循环的72℃5分，并随后维持在4℃。通过琼脂糖凝胶电泳显现出预测大小为934bp的条带。用100μl LB克隆混合物接种5ml液体培养物，并在37℃振荡放置过夜。

实施例13

可溶性人IL-17C的转染和表达

在第1天，5L摇瓶培养的293f细胞(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat#R790-07)，传至第5代在2.4e6c/ml解冻，接种在Wave Biotech反应器(Wave Biotech，Cat#细胞袋(cell bag)20L/O)中的4.5L Freestyle293表达培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat # 12338-026)。在这个时候同时添加25ml青霉素-链霉素(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat#1507-063)混合物。在37℃下伴随周围气流补充有6％CO2的2LPM下培养细胞。反应器每分钟摇动25次，角度设置为9.5。这些设置用于培养的整个过程。

在第4天，随后将4.7L新鲜的Freestyle 293培养基w/5ml/L青霉素-链霉素混合物加入反应器中，终体积为9.7L。细胞随后如下进行感染：如上文实施例中所述获得8mg/ml mega制备的质粒DNA(MPET构建体#889，IL-17CcH6)。将2份120ml Optimem培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat#31985-070)的等分预热至37℃。在1份Optimem等分中加入10ml DNA制备物并混合。在另1份Optimem等分中加入10.5mlLipofectimine 2000(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat#11668-019)并混合。将2份等分混合物加在一起、混合并在室温下温育30分钟，并不时混合。随后将Lipofectimine 2000/DNA混合物加到反应器中。

转染后96小时后，收集培养物，在Beckman Coulter Avanti J-HC离心机中在4000G′s下10分钟将细胞转出培养基。条件培养基随后连续通过1.2和.2um Millipore Opticap过滤器装置(Millipore BedfordMA.Cat#s KW1904HB3，KWSSL4HB3)。经过滤的培养基随后通过已知方法进行纯化。

实施例14

可溶性鼠类IL-17C的转染和表达

在第1天，1.25L摇瓶培养的293f细胞(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat # R790-07)，传至第22代在2e6c/ml解冻，接种在Wave Biotech反应器(Wave Biotech，Cat#细胞袋20L/O)中的8.15L Freestyle 293表达培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat # 12338-026)。在37℃下伴随周围气流补充有6％CO₂的2LPM下培养细胞。反应器每分钟摇动25次，角度设置为9.5。这些设置用于培养的整个过程。在第4天，取出700ml培养物并弃去。随后加入1.4L新鲜的Freestyle 293培养基，终体积为10L。在第5天，取出2.6L培养基并弃去。加入1.4L新鲜的Freestyle 293培养基，终体积为8.8L，达到2×10⁶个细胞/ml，并且细胞如下进行转染：如上文所述获得1.88mg/ml的mega制备的质粒DNA(MPET 构建体#1280，IL-17CmcH6)。将2份150ml DMEM培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat#119092)的等分预热至37℃。在1份DMEM等分中加入9.4ml DNA制备物并混合。在另1份DMEM等分中加入17.6ml 1mg/ml PEI溶液(聚乙烯亚胺，线性25kDa.Cat#23966.Polysciences，Inc.Warrington PA.)并混合。将2种混合物在室温下分开温育5分钟，随后加到一起，混合并在室温下温育20分钟，并不时混合。随后将PEI/DNA混合物加到反应器中。在这个时候同时添加50ml青霉素-链霉素(Invitrogen，Carlsbad，CA Cat#1507-063)混合物。

转染后96小时后，收集培养物，在Beckman Coulter Avanti J-HC离心机中在4000g下10分钟将细胞转出培养基。条件培养基随后连续通过1.2和.2um Millipore Opticap过滤器装置(Millipore Bedford MA.Cat#s KW1904HB3，KWSSL4HB3)。经过滤的培养基随后通过已知方法进行纯化。

实施例15

ZcytoR21 Luminex测定

对ZcytoR21剪接变体独特的内含子/外显子接头特异的寡核苷酸可以设计用于基于Luminex微球的测定法中以测量剪接变体特异的mRNA的水平。然而，无法设计对ZcytoR21×1特异的寡核苷酸，因为它不包含其他剪接变体缺乏的独特的内含子/外显子接头。例如合成具有5′胺Uni-Link基团的ZcytoR21×2(SEQ ID NO：4)，zc49789(5′gcctcccacacgaggaagctgctgc 3′)(SEQ ID NO：39)，并合成具有5′生物素基团的其互补反义寡核苷酸zc49890(5′gcagcagcttcctcgtgtgggaggc3′)(SEQ ID NO：40)，所述生物素基团随后在方案中用于监测偶联效率。ZcytoR21×3(SEQ ID NO：7)相对于其他ZcytoR21剪接变体具有3个独特的内含子/外显子接头，因此必需设计3种各自具有5′胺Uni-Link基团的有义寡核苷酸zc49790(5′tggactcacaaaggacccgagttct3′)(SEQ ID NO：41)、zc49891(5′gcctctgttattccagtctggtggg3′)(SEQ ID NO：42)和zc49892(5′ccccgttgaagaccgtgtgggaggc3′)(SEQ ID NO：43)，及其互补的反义5′生物素标记的对照寡核苷酸zc49791(5′cccaccagactggaataacagaggc3′)(SEQ ID NO：44)、zc49792(5′gcctcccacacggtcttcaacgggg3′)(SEQ ID NO：45)和zc49724(5′agaactcgggtcctttgtgagtcca3′)(SEQ ID NO：46)。合成具有5′胺Uni-Link基团的ZcytoR21×4(SEQ ID NO：10)特异的有义寡核苷酸zc49793(5′tgctgtgtcctgctccatgcttcac3′)(SEQ ID NO：47)，并且也合成了其5′生物素标记的反义互补物zc49729，(5′gtgaagcatggagcaggacacagca3′)(SEQ ID NO：48)。为了评估在扩增长mRNA中的RNA扩增步骤的有效性，设计针对ZcytoR21的第1个和最后1个外显子的寡核苷酸，所述外显子是所有已知剪接变体共有的。对于ZcytoR21的第1个外显子，合成具有5′胺Uni-Link基团的zc49794(5′tctgactctgctgggattggctttc3′)(SEQ ID NO：49)，并合成具有5′生物素基团的其互补反义寡核苷酸zc49893(5′gaaagccaatcccagcagagtcaga3′)(SEQ ID NO：50)。对于ZcytoR21的最后1个外显子，合成具有5′胺Uni-Link基团的zc49795(5′tgctgctgctgtggagcggcgccga3′)( SEQ ID NO：51)及其互补物zc49894(5′tcggcgccgctccacagcagcagca3′)(SEQ ID NO：52)。测得的第1个和最后1个外显子的比率可以用于定性评估测量的序列靶水平的影响，所述序列靶不接近mRNA的3′末端，例如对ZcytoR21×2特异的独特的内含子/外显子接头。

每种有义寡核苷酸与特异性的xMAP^TM多分析的羧酸化微球(LuminexCorporation，Austin，TX)如下进行偶联：贮存微球通过涡旋振荡和超声波破碎大约20秒进行重悬浮，将200μl(2.5×106微球)转移至微量离心管中，并通过在＞8000×g下微量离心1至2分钟进行沉淀。去除上清液，并将微球沉淀物通过涡旋振荡和超声波破碎重悬浮于50ul 0.1MMES(2(N-吗啉代)甲磺酸，Sigma，St.Louis，MO)，pH4.5。在dH₂O中制备10mg/ml EDC碳二亚胺HCL(1-乙基-3-(3-二甲胺基丙胺)碳二亚胺HCl，Pierce，Rockford，IL)的新鲜溶液，并将2.5ul这种溶液加到微球中，涡旋振荡并在室温下在黑暗中温育30分钟。制备第二种新鲜的10mg/ml EDC溶液，向微球中加入2.5ul，并再次在黑暗中温育30分钟。EDC添加和温育的第3次重复是任选的。向偶联的微球中加入1ml0.02％Tween20(聚氧乙烯山梨糖单油酸酯，Sigma，St.Louis，MO)，并通过涡旋振荡混合，并通过微量离心进行沉淀。去除上清液，并将微球沉淀物通过涡旋振荡重悬浮于1ml 0.1％SDS(Lauryl Sulfate，Sigma，St.Louis，MO)，并通过离心进行沉淀。去除上清液，并将沉淀物通过涡旋振荡和超声波破碎约20秒重悬浮于100μl TE，pH8.0。微球通过使用血球计数器进行计数并在4℃贮存于黑暗中直至使用。

通过将偶联的微球与生物素标记的互补寡核苷酸如下混合来评估微球的偶联和杂交有效性：偶联的微球通过涡旋振荡和超声波破碎约20秒进行重悬浮，并通过将偶联的微球贮存液在1.5×TMAC杂交缓冲液(4.5MTMAC(Sigma，St.Louis，MO)0.15％肌氨酰、0.75mM Tris-HCl，pH8(Sigma，St.Louis，MO)，6mM EDTA，pH8.0(Gibco，Grand Island，NY)中稀释至150微球/ul来制备工作混合物。向在MicroAmp光学96孔反应平板(Applied Biosystems，Foster City，CA)的每个样品或背景孔中加入33.3ul偶联的微球，并向每个背景孔中加入16.67ul TE，pH8.0。将在5至200飞克摩尔(femtomole)范围内合适的生物素化的互补寡核苷酸调整至终体积为16.7ul，加入每个样品孔中，将板密封，并且使用板振荡器在400rpm下混合反应物。板在94℃温育3分钟，并在55℃温育15分钟。使用多头抽真空装置(Millipore Corporation，Billerica，MA)去除未结合的寡核苷酸，并用100ul/孔洗涤缓冲液(1mMPBS，0.01％Tween_20)将板洗涤3次，每次通过真空过滤去除缓冲液。通过将链霉抗生物素蛋白-R-藻红蛋白缀合物(Molecular Probes，Eugene，OR)在洗涤缓冲液中稀释至4ug/ml来制备新鲜报告物混合物，向每个孔中加入75ul，用箔包被测定板并在板振荡器上1100rpm下混合30秒，随后在室温下在400rpm下温育15分钟。随后将板洗涤3次以去除未结合的链霉抗生物素蛋白-PE，并将样品重悬浮于终体积为75u l的洗涤缓冲液。50ul随后在Bio-Plex阵列阅读仪(Array Reader)(BioRadLaboratories，Inc，Hercules，CA)上进行分析。

大约2×10⁶个U937细胞被涂板并用20ng/ml PMA和20ng/ml PMA+0.5ug/ml离子霉素(ionomycin)刺激6、11和24小时。～2×10⁶个THP1细胞用100ng/ml PMA刺激12、24和48小时。收集细胞并利用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy试剂盒根据制造商的说明伴随任选的整合到方案中的DNAse步骤纯化总RNA。RNA根据制造商的说明使用不含DNA的试剂(Ambion，Inc，Austin，TX)进行DNA酶解。通过在Agilent Bioanalyzer上运行等分来评估RNA的质量。如果RNA显著降解，则不将其用于随后的ZcytoR21mRNA测定。通过使用zc37263(5′gaattacaccctctggagagtgg3′)和zc37264(5′gaatttcggacaatccagtactc 3′)对等分的RNA进行PCR测定来评估污染性基因组DNA的存在，所述zc37263和zc37264是扩增基因组DNA中组织蛋白酶Z基因座上的内含子内的单位点引物。关于污染性基因组DNA测定的PCR条件如下：2.5ul 10×缓冲液和0.5ulAdvantage 2cDNA聚合酶混合物(BD Biosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(Applied Biosystems，Foster City，CA)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)、以及0.5ul20uM zc37263和zc37264，终体积为25ul。循环参数为94℃20秒，40个循环的94℃20秒、62℃20秒、72℃1分钟，以及单个循环的72℃7分钟。对10ul每种反应物实施琼脂糖凝胶电泳，并检查凝胶中来自污染性基因组DNA的PCR产物的存在。只有表现不含污染性基因组DNA的RNA才可用于后续ZcytoR21剪接变体mRNA测定中。

使用偶联的Luminex微球、用于测定ZcytoR21剪接变体的5μg每种RNA首先使用Ambion MessageAmp^TMaRNA试剂盒(AmbionIncorporated，Austin，TX)根据制造商的说明进行扩增，但修饰体外转录步骤合成的反义RNA，从而使得使用标记的dNTP(生物素-16-UTP和生物素-11-CTP，Perkin-Elmer Life Sciences，Boston，MA)替代试剂盒中提供的dNTP。在每种扩增的RNA样品中如下测定ZcytoR21剪接变体mRNA的水平：通过将偶联的微球贮存液在1.5X TMAC杂交缓冲液中稀释至5000/33.3ul，使用合适的看家基因对照寡核苷酸偶联的微球和ZcytoR21剪接变体特异性寡核苷酸偶联的微球制备工作微球混合物；总体积为33.3ul乘以待测的样品和背景孔的数目。通过涡旋振荡和超声波破裂大约20秒混合这种工作微球溶液。向每个背景孔中加入16.7ul TE，pH8.0，并向每个样品孔中加入5ug扩增的生物素化的RNA，所述RNA首先加热至94℃35分钟并在16.7ul TE，pH8.0体积中冰冻。向每个样品和背景孔中加入33.3ul工作微球混合物，并通过吹管上下吹打，并在板振荡器上轻微振荡来混合孔。将板密封并在94℃温育10分钟以使扩增的生物素化RNA变性，随后在60℃在振荡温箱中伴随轻微摇动温育5小时。将反应物转移至微量滴定板，使用多头抽真空装置分离未结合的核苷酸并洗涤板，并将报告混合物与样品一起如上所述进行温育。随后洗涤板并在如上所述的Bio-Plex阵列阅读仪中计数。

结果可以证实与THP1比较，不管PMA存在与否，U937细胞中的ZcytoR21转录物在高得多的水平上表达。此外，观察到每种剪接变体ZcytoR21×2、×3和×4的显著表达。通过推断，相对于THP1，因为最后1个外显子的高水平表达，所以变体ZcytoR21×1和/或仍未描述的可能的剪接变体在U937中也高度表达。

实施例16

ZcytoR21的Northern印迹和斑点印迹分析

利用人多组织印迹I、II和III以及人RNA Master印迹(CLONTECHLaboratories，Inc.，Palo Alt0，CA)进行RNA和斑点印迹分析。通过用EcoR1和Not消化ZcytoR21×1(SEQ ID NO：1)cDNA的DNA，随后使用Qiaquick凝胶提取试剂和方案(Qiagen，Valencia，CA)通过凝胶电泳和片段纯化来产生1.4kb DNA片段。DNA片段包含编码SEQ ID NO：2氨基酸#257-690的序列，并预期与所有已知的ZcytoR21剪接变体杂交。根据制造商的方案使用Redi-Prime II试剂盒(Stratagene，La Jolla，CA)放射性标记片段。根据制造商的说明使用MicroSpin S-200HR旋转柱(Amersham，Arlington Heights，IL)纯化探针。将鲑精DNA(Stratagene，La Jolla，CA)和Cot-1DNA(Invitrogen，Carlsbad，CA)煮沸5分钟，在冰上迅速冷却(snap-chilled)，分别加入100μg/ml和6μg/ml ExpressHyb(CLONTECH)，并用作印迹的预杂交和杂交溶液。预杂交在55℃发生3小时。将放射性标记的DNA片段煮沸5分钟，在冰上迅速冷却并向印迹中加入1×10⁶cpm/ml的杂交溶液。杂交在55℃过夜发生。杂交后，如下洗涤印迹：在室温下在2×SSC、0.1％SDS中2次，在65℃在2×SSC、0.1％SDS中1次，随后在65℃在0.1×SSC、0.1％SDS中洗涤1次20分钟。将印迹暴露于胶片过夜。结果显示于下图中，并证实ZcytoR21 mRNA广泛表达，在胃、胰腺中表达最强烈，并在前列腺、甲状腺、气管、唾液腺、肝、肾、小肠、肺、胎肺、胎胸腺、胎盘、乳腺、心脏、小脑、尾状核和结肠中表达程度较少。相反，在全脑、骨骼肌、脾脏、胸腺、睾丸、卵巢、外周血白细胞、脊髓、淋巴结、肾上腺、子宫、膀胱、胎全脑、胎心、胎肝、胎脾脏和骨髓中很少或没有表达。

实施例17

IL-17C的Northern印迹、斑点印迹和疾病阵列分析

使用Human Multiple Tissue Blot I和III、人胎多组织印迹II、人RNA Master印迹、癌症表达谱阵列II、血液病表达谱阵列、自身免疫病表达谱阵列、和癌细胞系表达谱阵列(CLONTECH Laboratories，Inc.，Palo Alto，CA)进行Northern印迹、斑点印迹和疾病阵列分析。通过用EcoR1消化IL-17C cDNA，随后使用Qiaquick凝胶提取试剂和方案(Qiagen，Valencia，CA)通过凝胶电泳和片段纯化来产生～770bp DNA片段。DNA片段包含编码IL-17C完整开放阅读框架的序列。根据制造商的方案使用Redi-Prime II试剂盒(Stratagene，La Jolla，CA)放射性标记片段。根据制造商的说明使用MicroSpin S-200 HR旋转柱(Amersham，Arlington Heights，IL)纯化探针。将鲑精DNA(Stratagene，La Jolla，CA)和Cot-1DNA(Invitrogen，Carlsbad，CA)煮沸5分钟，在冰上迅速冷却(snap-chilled)，分别加入100μg/ml和6μg/ml ExpressHyb(CLONTECH)，并用作印迹的预杂交和杂交溶液。预杂交在55℃过夜发生。将放射性标记的DNA片段煮沸5分钟，在冰上迅速冷却并向印迹中加入1×10⁶cpm/ml的杂交溶液。杂交在55℃过夜发生。杂交后，如下洗涤印迹：在室温下在2×SSC、0.1％SDS中2次，在65℃在2×SSC、0.1％SDS中1次，随后在65℃在0.1×SSC、0.1％SDS中1次20分钟。印迹用增感屏(intensifying screen)暴露于胶片6天。

结果一般证实IL-17C mRNA不是广泛或高度表达。在胎肺中可见～1.4kb的转录物，但在胎脑、胎肝或胎肾中不存在IL-17C转录物。在成人组织中，在心脏中可见～4.8kb的转录物，并且在骨骼肌中可见～5kb和3kb的2种转录物。相反，在脑、胎盘、肺、肝、肾、胰腺、胃、甲状腺、脊髓、淋巴结、气管、肾上腺或骨髓中没有观察到IL-17C转录物。在癌症表达谱阵列中，在来自患有下列癌症的多数患者的正常和肿瘤cDNA中，IL-17C相对缺乏：乳癌、卵巢癌、结肠癌、胃癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、外阴癌、前列腺癌、气管癌、子宫癌、宫颈癌、直肠癌、甲状腺癌、睾丸癌、皮肤癌和胰腺癌。然而，在来自患有那些相同组织癌症的几个患者的正常肝和小肠中观察到略微更高的IL-17C杂交。在自身免疫和血液病表达谱阵列中，相对于CD14(原始单核细胞，原文为monocye，疑为monocyte)、CD3(原始T细胞)、单核细胞和多形核细胞中的IL-17CmRNA水平，可以看到在经过正常和患病患者的板的血液的CD19(原始B细胞)级分中IL-17C mRNA略微增加。有趣的是，相对于正常患者CD19血液级分的IL-17C水平，在患有下列疾病的患者的CD19血液级分中IL-17C mRNA水平表现为进一步升高：多发性硬化症、冯维勒布兰德氏病、Lupus Anticoagulans、高安氏关节炎(Takayasu′s Arthritis)、特发性血小板减少性紫癜、何杰金氏病和慢性髓细胞性白血病。在癌症细胞系表达谱阵列中，IL-17C再次没有高度或广泛表达，但在特定条件下它在分散的少数细胞系中可见。用Cytochalasine D刺激的MDA-MB-435S以及用地美可辛、Miomycine、放线菌素D和环己酰胺刺激的U-87MG全都表现为表达低水平的IL-17C mRNA，而用刺激条件组合的其他24种细胞系表达很少的IL-17C mRNA或不表达IL-17C mRNA。

实施例18

ZcytoR21的瞬时表达

将人ZcytoR21×1(SEQ ID NO：1)和×2(SEQ ID NO：4)cDNA置于双顺反子表达载体pzmp11中。将cDNA插入cmv启动子的下游，随后为IRBS位点和细胞表面标记的cDNA，人CD8。CD8表达与插入的cDNA的转录相互关联，并可用于CD8细胞的facs分选，并询问与非CD8群体相对比，CD8群体是否与结合事件相关。

将293FB悬浮细胞以在10ml新鲜Freestyle 293表达培养基(Invitrogen)中10⁶细胞/ml的密度接种在125ml组织培养erlenmeyer发酵烧瓶中。使用lipofectamine 2000(Invitrogen)将10μgZcytoR21×1-pzmp11、ZcytoR21×2-pzmp11和空的pzmp11载体转染到这些细胞中。转染后24至78小时，细胞用于如此处提供的结合实验中。

实施例19

稳定的nih3t3测定克隆表达ap/nfkb转录因子的制备

用包含新霉素选择标记的kz142apl/nfkb萤光素酶报告物构建体稳定转染鼠类nih3t3细胞。Neo抗性转染库以克隆密度进行涂板。使用克隆环分离克隆并通过萤光素酶测定使用人IL-17C配体作为诱导物进行筛选。选择具有最高平均荧光强度(MFI)(经由apl/NfkB萤光素酶)和最低背景的克隆。选择稳定转染子细胞系并命名为nih3t3/kz142.8。

实施例20

表达ZcytoR21的鼠类nih3t3细胞

nih3t3RNA的2步PCR分析证实这些细胞是ZcytoR21转录阳性的，与它们对通过这种受体介导的IL-17C的信号应答一致。由使用标准方法从nih3t3细胞分离的总RNA制备第一链cDNA。使用热星(hot star)聚合酶并根据制造商的建议(Qiagen，Valencia，CA)应用PCR，除了使用10％的DMSO终浓度。使用的引物包含有义引物zc40413(5′tgcgcccggatcctacagaagc 3′)(SEQ ID NO：55)和反义引物zc 40412(5′gcacctcgggcagcaaatcaaag 3′)(SEQ ID NO：56)。琼脂糖凝胶电泳显示了单个的具有预期大小的强扩增子。

实施例21

具有重组过度表达ZcytoR21剪接变体的细胞系的制备

稳定的重组过度表达的人ZcytoR21通过增加靶细胞的敏化作用以激活和结合其配体来促进其配体的鉴别。对于ZcytoR21的同系物已观察到这种现象。配体激活伴随比相同细胞中所见低得多的浓度发生，所述相同细胞缺乏过度表达的重组受体。在鼠类nih3t3/kz142.8细胞系中观察到这种激活现象，所述细胞系显示内源性地表达这些受体。在重组ZcytoR21过度表达的幼地鼠肾细胞(BHK570)中进行配体结合研究。

人和小鼠ZcytoR21在鼠类测定细胞系nih3t3/kz142.8中的稳定过度表达

鼠类nih3t3/kz142.8(实施例17)显示通过PCR(实施例18)生产内源性ZcytoR21mRNA。用在pZMP11中的人ZcytoR21×1(SEQ ID NO：1)、ZcytoR21×2(SEQ ID NO：4)ZcytoR21×3(SEQ ID NO：7)、ZcytoR21×6(SEQ ID NO：20)、ZcytoR21X13(SEQ ID NO：106)和小鼠ZcytoR21×6(SEQ ID NO：13)的cDNA转染这些细胞，所述pZMP11是双顺反子表达载体，其含有驱动插入的cDNA转录的CMV启动子、随后为IRES、随后为人CD8的cDNA。CD8表达细胞可以根据插入的cDNA的表达进行选择并与之相关。Pzmp11具有甲氨蝶呤抗性基因(二氢叶酸还原酶)。使用可商购获得的试剂盒(Mirus，Madison，WI.Cat.#MIR218)和制造商的建议进行转染。将细胞置于1μM mtx改良生长培养基中以选择包含人和小鼠ZcytoR21转基因的表达构建体。选择后，产生转染库，并命名为nih3t3/kz142.8/hcytor21×1、 nih3t3/kz142.8/hcytor21×2、nih3t3/kz142.8/hcytor21×3、nih3t3/kz142.8/hcytor21×6、nih3t3/kz142.8/hcytor21×13和nih3t3/kz142.8/mcytor21×6。

人和小鼠ZcytoR21在幼地鼠肾细胞(BHK570)中的稳定过度表达

选择幼地鼠肾细胞(BHK570)用于ZcytoR21重组过度表达的结合研究。用在pZMP11中的人ZcytoR21×1(SEQ ID NO：1)、ZcytoR21×2(SEQID NO：4)、ZcytoR21×3(SEQ ID NO：7)、ZcytoR21×6(SEQ ID NO：20)、ZcytoR21X13(SEQ ID NO：106)和小鼠ZcytoR21×6(SEQ ID NO：13)的cDNA转染这些细胞，所述pZMP11是双顺反子表达载体，其含有驱动插入的cDNA转录的CMV启动子、随后为IRES、随后为人CD8的cDNA。CD8表达细胞可以根据插入的cDNA的表达进行选择并与之相关。Pzmp11具有甲氨蝶呤抗性基因(二氢叶酸还原酶)。使用可商购获得的试剂盒(Mirus，Madison，WI.Cat.#MIR218)和制造商的建议进行转染。将细胞置于1μM mtx改良生长培养基中以选择包含人和小鼠ZcytoR21转基因的表达构建体。选择后，产生转染库，并命名为BHK/hcytor21×1、BHK/hcytor21×2、BHK/hcytor21×3、BHK/hcytor21×6、BHK/hcytor21×13和BHK/mcytor21×6。

实施例22

使用PCR确定ZcytoR21mRNA在细胞系组中的分布

从室内培养的静息和经刺激的细胞系纯化总RNA，并使用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy试剂盒根据制造商的说明进行纯化，或使用酸-酚纯化方案(Chomczynski和Sacchi，Analytical Biochemistry，162：156-9，1987)进行纯化。通过在Agilent Bioanalyzer上分析RNA的等分来评估RNA的质量。如果RNA显著降解，则不将其用于随后的第一链cDNA的生成。通过使用zc41011(5′ctctccatccttatctttcatcaac3′)(SEQID NO：57)和zc41012(5′ctctctgctggctaaacaaaacac3′)(SEQ ID NO：58)，即扩增基因间基因组DNA的单位点引物，对RNA的等分进行PCR测定来评估污染性基因组DNA的存在。用于污染性基因组DNA测定的PCR条件如下：2.5ul 10×缓冲液和0.5ul Advantage 2 cDNA聚合酶混合物(BD Biosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(Applied Biosystems，Foster City，CA)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)、以及0.5ul 20uM zc41011和zc41012，终体积为25ul。循环参数为94℃20秒，40个循环的94℃20秒、60℃1分20秒，以及单个循环的72℃7分。对10ul每种反应物实施琼脂糖凝胶电泳，并检查凝胶中来自污染性基因组DNA的PCR产物的存在。如果观察到污染性基因组DNA，那么使用不含DNA的试剂(Ambion，Inc，Austin，TX)按照制造商的说明对总RNA进行DNA酶解，然后如上所述重新检测。只有表现不含污染性基因组DNA的RNA才可用于随后的第一链cDNA的生成。

来自82种人细胞系的20ug总RNA各自和水生成98ul的体积，然后分成各包含10ug总RNA的2个49ul的等分，并置于2块96孔PCR板中。向各等分加入用于第一链cDNA合成的试剂(Invitrogen FirstStrand cDNA Synthesis System，Carlsbad，CA)：20ul 25mM MgCl₂、10ul 10×RT缓冲液、10ul 0.1M DTT、2ul寡核苷酸dT、2ul RNAseOut。然后，向来自各细胞系的一个等分加入2ul Superscript II逆转录酶，并向对应的细胞系等分加入2ul H2O制成缺少逆转录酶的阴性对照。如下温育所有样品：25℃10分、42℃50分、70℃15分。将样品分配在深孔板中并用水稀释至1.7ml。使用Multipette(Saigan)设备向96孔PCR板的各孔中多次加入16.5ul等分，产生大量细胞系的一次性使用的PCR组，然后将所述组密封并贮存于-20℃。这些组中的各孔代表来自在大约100ng总RNA的第一链cDNA。将82个细胞系涂布在2组中，阵列#118A和#118B。

通过使用针对两个广泛表达但只有中等丰度的基因CLTC(网格蛋白)和TFRC(转铁蛋白受体C)的引物对一组实验对象进行多重PCR测定来评估组中的第一链cDNA的质量。将0.5ul各网格蛋白引物zc42901(5′ctcatattgctcaactgtgtgaaaag3′)(SEQ ID NO：59)，zc42902(5′tagaagccacctgaacacaaatctg3′)(SEQ ID NO：60)和TFRC引物zc42599(5’atcttgcgttgtatgttgaaaatcaatt3’)(SEQ ID NO：61)，zc42600(5′ttctccaccaggtaaacaagtctac3′)(SHQ ID NO：62)与2.5ul10×缓冲液和0.5ul Advantage 2 cDNA聚合酶混合物(BD BiosciencesClontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(Applied Biosystems，Foster City，CA)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)混合，并将其加入至阵列#118A和阵列#118B组的各孔中。循环参数如下：94℃20秒，35个循环的94℃20秒、67℃80秒，以及单个循环的72℃7分。将10ul各反应物实施琼脂糖凝胶电泳，并根据强PCR产物的存在对凝胶评分，所述PCR产物对各细胞系的+RT孔特异的各基因的PCR产物。

通过在这些针对每种样品的PCR条件下使用有义寡核苷酸zc40450(5′tcctgcctctcctcctcatagtca3′)(SEQ ID NO：63)和反义寡核苷酸zc40454(5′ccaggatcaagagccccaggtgtc3′)(SEQ ID NO：64)进行PCR来测定人第一链cDNA组中的ZcytoR21mRNA的表达，所述PCR条件是：2.5ul 10×缓冲液和0.5ul advantage 2 cDNA聚合酶混合物(BDBiosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(AppliedBiosystems，)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)和0.5ul 20uM各有义和反义引物。引物预期挑选出所有已知的ZcytoR21剪接变体，但它们无需区分每种变体。循环条件是94℃20秒、35个循环的94℃20秒、69℃2分30秒、和单个循环的72℃7分。对10μl各反应物实施琼脂糖凝胶电泳，根据ZcytoR21的阳性或阴性表达对凝胶评分。经由这个测定结果显示ZcytoR21mRNA普遍表达于细胞系中。ZcytoR21在U-937(未用PMA或PMA/离子激素刺激和刺激的)、B-淋巴瘤(DOHH-2Ramos、Granta-519和RL)、以及来自消化系统的几种细胞系(CaCO2、分化的CaCO2、HCT-15和HCT-116)中持续为阳性且通常是强阳性。总的来说，对ZcytoR21阳性的样品是：L363、A375、CTB-1+PMA/离子霉素、TF1、ARH77、G-361、MacLLC+PMA/离子霉素、DOHH-2、REH、HaCat、Ramos、Granta-519、RL、Hs294T、HL60+丁酸、AsPC-1、A-172.Hep G2、U937+PMA/离子激素、TrBMEC、HepG2+IL6、U937+PMA、ME180、ARPE、A-549、U937、CaCO2、MRC-5、PC-3、分化的CaCO2、DLD-1、SKLU-1、Int407、HCT116和HCT15。

实施例23

使用PCR确定鼠类细胞系组中鼠类ZcytoR21mRNA的分布

从室内培养的60种静息和受刺激的细胞系纯化总RNA，并使用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy试剂盒按照制造商的说明进行纯化，或使用酸-酚纯化方案(Chomczynski和Sacchi，Analytical Biochemistry，162：156-9，1987)或Trizol试剂方案(Invitrogen，Carlsbad，CA)进行纯化。将来自各细胞系的5ug总RNA分配在深孔96孔板中，向各小孔中加入125ul 3M NaOAc和100ul Pellet Paint(Novagen，Madison，WI))，然后用水将终体积调整至1.25ml。使用Multipette(Saigan)设备向96孔PCR板的各孔中多次加入25ul等分的RNA混合物，随后向各孔加入75ul EtOH，产生大量细胞系的一次性使用的RT PCR组，每孔具有在EtOH中的100ng总RNA。然后将所述组密封并贮存于-20℃。这次测定中的样品的排列和内容物在下表1中详细说明。通过在Qiagen(Valencia，CA)96-孔离心机中在6000RPM下首先离心一个组10分钟来进行RT PCR筛选。通过将板倒置在吸水纸上去除上清液。用100ul70％EtOH洗涤RNA沉淀物，然后在6000RPM下离心5分钟。再次去除上清液，并使板风干直至剩余的EtOH蒸发。

通过RT PCR使用有义寡核苷酸ZC40403(5′ctgtgaggcgcaaaaagtgtc3′)(SEQ ID NO：81)和反义寡核苷酸ZC48516(5′gcaagtccacattctccaggat3′)(SEQ ID NO：82)，使用Superscript One-Step RT PCR试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)来测定小鼠细胞系RNA组中ZcytoR21m mRNA的表达。RNA沉淀物重悬浮于总体积为25ul/孔反应混合物中，所述反应混合物包含2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)、12.5ul 2×反应混合物、0.5ul20pmol/ul有义寡核苷酸、0.5ul 20pmol/ul反义寡核苷酸、0.5ulRT/Platinum Taq和8.5ul无菌水。循环条件如下：1个循环的52℃30分钟，1个循环的94℃2分钟，35个循环的94℃30秒、55℃30秒和72℃1分钟，随后为最后1个循环的72℃7分钟。对10ul各反应物实施琼脂糖凝胶电泳，并根据ZcytoR21m的阳性或阴性表达对凝胶进行评分。引物预期挑选出所有已知的剪接变体，并且不产生关于污染性基因组DNA的产物。结果表明ZcytoR21mRNA存在于14种细胞系中，大多数是代表胰腺来源的系：pik10、pik15、pik18、pik34、pid14、pid205FU-17和5FU-19。ZcytoR21mRNA也存在于骨骼肌肌原细胞系C2C12、单核细胞系RAW 264.7、唾液腺细胞系SAG-5/22-6和肝细胞系AML中。相反，在T或B淋巴细胞细胞系、胚细胞系、脂肪细胞细胞系、成骨细胞和破骨细胞细胞系、以及下丘脑细胞系中不表达ZcytoR21m RNA。还有10种胰腺细胞系和4种唾液腺细胞系不表达ZcytoR21。

实施例24

表达ZcytoR21×1CEE、ZcytoR21×1CHIS和ZcytoR21×1CFLAG标记蛋白质的哺乳动物可溶性ZcytoR21×1表达构建体的构建

经由PCR和同源重组使用编码ZcytoR21×1(SEQ ID NO：83)的DNA片段和表达载体pZMP20构建包含具有C末端标签Glu-Glu(CEE)、6组氨酸(CHIS)或FLAG(CFLAG)的人ZcytoR21×1细胞外结构域的表达构建体。

编码ZcytoR21×1CEE的PCR片段包含在最优化的组织纤溶酶原激活物前原分泌前导序列编码区中与pZMP20载体序列的5′重叠区、ZcytoR21×1细胞外结构域编码区(SEQ ID NO：84)、Glu-Glu标签(GluGlu Tyr Met Pro Met Glu)编码序列、以及在脊髓灰质炎病毒内核糖体进入位点区域中与pZMP20载体序列的3′重叠区。PCR扩增反应使用下列5′寡核苷酸(GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGAGCTGGGATTGGCTTTCGCCAC)(SEQ ID NO：85)、下列3′寡核苷酸(CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTCCATGGGCATGTATTCTTCGTAAGAGACATCTGGACACA)(SEQ ID NO：86)，以及先前产生的ZcytoR21×1DNA克隆作为模板(SEQ ID NO：83)。

PCR扩增反应条件如下：1个循环，94℃5分钟；35个循环，94℃1分钟，随后为55℃2分钟，随后为72℃3分钟；1个循环，72℃10分钟。PCR反应混合物在1％琼脂糖凝胶上电泳并使用QIAquick^TM凝胶提取试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)从凝胶中提取对应预期大小的DNA片段。

质粒pZMP20是包含这样的表达盒、大肠杆菌的复制起始位点、哺乳动物选择标记物表达单位和在酿酒酵母(S.cerevisiae.)中进行选择和复制所需的URA3和CEN-ARS序列的哺乳动物表达载体，所述表达盒具有嵌合型CMV增强子/MPSV启动子、用于在酵母重组之前线性化的BglII位点、otPA信号肽序列、来自脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入元件、在跨膜结构域的C末端截短的CD8的细胞外结构域，所述哺乳动物选择标记物表达单位包含SV40启动子、增强子和复制起始位点、DHFR基因以及SV40终止子。

在酵母中与凝胶提取的ZcytoR21×1CEE PCR片段重组之前用BglII消化质粒pZMP20。将100μl感受态酵母(酿酒酵母)细胞和10μlZcytoR21×1CEE插入物DNA以及100ng BglII消化的pZMP20载体组合，并将混合物转移至0.2cm电穿孔小杯中。使用设置为0.75kV(5kV/cm)、∞欧姆和25μF的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)对酵母/DNA混合物进行电脉冲。向小杯中加入600μl的1.2M的山梨醇，并以100μl和300μl的等分将酵母涂板在2块URA-D板上并在30℃下温育。大约72小时后，将来自单块板的Ura⁺酵母转化子重悬浮在1ml H₂O中，并短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀重悬浮于0.5ml裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH8.0、1mM EDTA)。将500μl裂解混合物加至包含250μl用酸洗涤的玻璃珠和300μl酚氯仿的Eppendorf管中，涡旋振荡3分钟，以最大速度在Eppendorf离心机中离心5分钟。将300μl的水相转移至新管，并使用600μl乙醇，然后以最大速度离心30分钟来沉淀DNA。将管中溶液轻轻倒出，用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀。将管中溶液轻轻倒出，将DNA沉淀重悬浮于30μl 10mM Tris，pH8.0，1mM EDTA。

使用5μl酵母DNA制剂和50μl大肠杆菌细胞进行电转感受态大肠杆菌细胞(DH12S)的转化。在2.0kV、25μF和400欧姆下对细胞进行电脉冲。电穿孔后，加入1ml SOC(2％Bacto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl₂、10mM MgSO₄、20mM葡萄糖)，然后以50μl和200μl等分将细胞涂板在2块LB AMP板(LB肉汤(Lennox)，1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)，100mg/L氨苄青霉素)上。

对构建体的3种DNA克隆的插入物实施序列分析，并选择包含正确序列的1种克隆。按照制造商的说明，使用可商购获得的试剂盒(QIAGENPlasmid Mega Kit，Qiagen，Valencia，CA)分离大规模的质粒DNA。

使用相同方法制备具有C末端组氨酸标签或C末端FLAG标签的ZcytoR21×1，所述组氨酸标签由Gly Ser Gly Gly His His His His HisHis(SEQ ID NO：87)(ZcytoR21×1CHIS)组成，所述FLAG标签由GlySer Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys(SEQ ID NO：88)(ZcytoR21×1CFLAG)组成。为了制备这些构建体，使用下列3′寡核苷酸(CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTAGTGATGGTGATGGTGATGTCCACCAGATCCGTAAGAGAATCTGGACACA)(SEQ ID NO：89)产生ZcytoR21×1CHIS，或3′寡核苷酸(CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTACTATCATCATCATCCTTATAATCGGATCCGTAAGAGACATCTGGACACA)(SEQ ID NO：90)产生ZcytoR21×1CFLAG。

实施例25

表达ZcytoR21×1CEE、ZcytoR21×1CHIS和ZcytoR21×1CFLAG C末端

标记蛋白质的可溶性ZcytoR21×1受体表达构建体的转染和表达

在37℃下用200单位PvuI分别消化如实施例22中所述的3组200μg的各可溶性ZcytoR21经标记的表达构建体3小时，用异丙醇沉淀，并在1.5mL微量离心管中离心。将上清液轻轻倒离沉淀物，并用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀物，并将其在室温下温育5分钟。小管在14,000RPM下在微量离心机中离心10分钟，并将上清液轻轻倒离沉淀物。然后在无菌环境中将沉淀物重悬浮于750μl CHO细胞组织培养基，将其在60℃下温育30分钟，并使其冷却至室温。大约5×10⁶个CHO细胞沉淀在三只管中的每一只管中，并使用DNA介质溶液重悬浮所述细胞。将DNA/细胞混合物置于0.4cm小杯中，并使用下列参数(950μF、高电容、300V)进行电穿孔。然后取出小杯中的内容物，混合，并用CHO细胞组织培养基稀释至25mL，并放入125mL摇瓶中。将摇瓶在37℃、6％CO₂下置于振荡器上的培养箱中，在120RPM下进行振荡。

对CHO细胞实施营养选择，然后转入200nM氨甲蝶呤(MTX)进行扩增，并随后转入1μMMTX进行扩增。通过蛋白质印迹法确认标记蛋白质的表达，并扩大CHO细胞库的生产以收获细胞进行蛋白质纯化。

实施例26

表达ZcytoR21×2CEE、ZcytoR21×2CHIS和ZcytoR21×2CFLAG标记蛋

白质的哺乳动物可溶性ZcytoR21×2表达构建体的构建

使用编码ZcytoR21×2(SEQ ID NO：91)的DNA片段和表达载体pZMP20经由PCR和同源重组构建包含具有C末端标签Glu-Glu(CEE)、6组氨酸(CHIS)或FLAG(CFLAG)(实施例22)的人ZcytoR21×2细胞外结构域的表达构建体。

编码ZcytoR21×2CEE的PCR片段含有：在最优化的组织纤溶酶原激活物前原分泌前导序列编码区中的与pZMP20载体序列的5′重叠区、ZcytoR21×2细胞外结构域编码区(SEQ ID NO：92)、Glu-Glu标签(GluGlu Tyr Met Pro Met Glu)编码序列、以及在脊髓灰质炎病毒内核糖体进入位点区域中的与pZMP20载体的3′重叠区。PCR扩增反应使用5′寡核苷酸(GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGAGCTGGGATTGGCTTTCGCCAC)(SEQ ID NO：93)、3′寡核苷酸(CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTCCATGGGCATGTATTCTTCGTAAGAGACATCTGGACACA)(SEQ ID NO：94)，以及先前产生的ZcytoR21×2DNA克隆作为模板(SEQ ID NO：91)。

质粒pZMP20是包含这样的表达盒、大肠杆菌的复制起始位点、哺乳动物选择标记物表达单位和在酿酒酵母中进行选择和复制所需的URA3和CEN-ARS序列的哺乳动物表达载体，所述表达盒具有嵌合型CMV增强子/MPSV启动子、用于在酵母重组之前线性化的BglII位点、otPA信号肽序列、来自脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入元件、在跨膜结构域的C末端截短的CD8的细胞外结构域，所述哺乳动物选择标记物表达单位包含SV40启动子、增强子和复制起始位点、DHFR基因以及SV40终止子。

质粒pZMP20在酵母中与凝胶提取的ZcytoR21×2CEE PCR片段重组之前用BglII消化。将100μl感受态酵母(酿酒酵母)细胞和10μlZcytoR21×2CEE插入物DNA以及100ng BglII消化的pZMP20载体组合，并将混合物转移至0.2cm电穿孔小杯中。使用设置为0.75kV(5kV/cm)、∞欧姆和25μF的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)对酵母/DNA混合物进行电脉冲。向小杯中加入600μl的1.2M的山梨醇，并以100μl和300μl的等分将酵母涂板在2块URA-D板上并在30℃下温育。大约72小时后，将来自单块板的Ura⁺酵母转化子重悬浮在1ml H₂O中，并短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀物重悬浮于0.5ml裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH8.0、1mM EDTA)。将500μl裂解混合物加至包含250μl用酸洗涤的玻璃珠和300μl酚氯仿的Eppendorf管中，涡旋振荡3分钟，并以最大速度在Eppendorf离心机中离心5分钟。将300μl的水相转移至新管，并使用600μl乙醇，然后以最大速度离心30分钟来沉淀DNA。将管中溶液轻轻倒出，用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀物。将管中溶液轻轻倒出，并将DNA沉淀物重悬浮于30μl 10mM Tris，pH8.0，1mM EDTA。

使用5μl酵母DNA制剂和50μl大肠杆菌细胞进行电转感受态大肠杆菌宿主细胞(DH12S)的转化。在2.0kV、25μF和400欧姆下对细胞进行电脉冲。电穿孔后，加入1ml SOC(2％Bacto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl₂、10mM MgSO₄、20mM葡萄糖)，并随后以50μl和200μl等分将细胞涂板在2块LB AMP板(LB肉汤(Lennox)，1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)，100mg/L氨苄青霉素)上。

使用相同方法制备具有C末端组氨酸标签(SEQ ID NO：95)(ZcytoR21×2CHIS)或C末端FLAG标签(SEQ ID NO：96)(ZcytoR21×2CFLAG)的ZcytoR21×2，所述在组氨酸标签由Gly Ser Gly Gly His HisHis His His His组成，所述FLAG标签由Gly Ser Asp Tyr Lys Asp AspAsp Asp Lys组成。为了制备这些构建体，使用3′寡核苷酸(CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTAGTGATGGTGATGGTGATGTCCACCAGATCCGTAAGAGACATCTGGACACA)(SEQ ID NO：97)产生ZcytoR21×2CHIS，或3′寡核苷酸(CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTACTTATCATCATCATCCTTATAATCGGATCCGTAAGAGACATCTGGACACA)(SEQ ID NO：98)产生ZcytoR21×2CFLAG。

实施例27

表达ZcytoR21×2CEE、ZcytoR21×2CHIS和ZcytoR21×2CFLAG C末端

标记蛋白质的可溶性ZcytoR21×2受体表达构建体的转染和表达

在37℃下用200单位PvuI分别消化如实施例24中所述的3组200μg的各可溶性ZcytoR21×2经标记的表达构建体3小时，用异丙醇沉淀，并在1.5mL微量离心管中离心。将上清液轻轻倒离沉淀物，并用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀物，并将其在室温下温育5分钟。小管在14,000RPM下在微量离心机中离心10分钟，并将上清液轻轻倒离沉淀物。然后在无菌环境中将沉淀物重悬浮于750μl CHO细胞组织培养基，将其在60℃下温育30分钟，并使其冷却至室温。大约5×10⁶个CHO细胞沉淀在三只管中的每一只管中，并使用DNA介质溶液重悬浮所述细胞。将DNA/细胞混合物置于0.4cm小杯中，并使用下列参数(950μF、高电容、300V)进行电穿孔。然后取出小杯中的内容物，混合，并用CHO细胞组织培养基稀释至25mL，并放入125mL摇瓶中。将摇瓶在37℃、6％CO₂下置于振荡器上的培养箱中，在120RPM下进行振荡。

对CHO细胞实施营养选择，然后转入200nM氨甲蝶呤(MTX)进行扩增，并随后转入1μM MTX进行扩增。通过蛋白质印迹法确认标记蛋白质的表达，并扩大CHO细胞库的生产以收获细胞进行蛋白质纯化。

实施例28

表达IL-17C-CEE、IL-17C-CHIS和IL-17C-CFLAG C末端标记蛋白质的可溶性IL-17C表达构建体的转染和表达

通过lipofectamine法使用IL-17C融合蛋白的表达构建体或标记构建体转染幼地鼠肾细胞(BHK)。具体地，将1×10⁶BHK细胞接种在包含10％胎牛血清、10mM Hepes，pH7.2的Dul beccos Modified Eagle Media(DMEM)中的100mm培养皿中，并在37℃温育过夜。附着细胞用10ml不含血清的培养基(SFM)：DMEM/F12(Ham)培养基(1∶1)漂洗，所述DMEM/F12(Ham)培养基还包含10mM Hepes、1ug/ml胰岛素、4ng/ml二氧化硒、25uM柠檬酸铁。包含IL-17C-CEE cDNA的表达构建体的16ug等分与在1.2ml SFM中的35ul lipofectamine(Gibco)复合20分钟，并随后用SFM稀释，应用于涂板的BHK细胞。在37℃温育5小时后，加入6.5ml包含10％胎牛血清的DMEM。细胞在增湿型组织培养箱中在37℃培养过夜。转染后大约24小时，用包含10％胎牛血清并还包含1uM甲氨蝶呤(MTX)的新鲜DMEM更换细胞培养基。在1uM MTX中7天后，MTX浓度增至10uM，并允许细胞再额外培养7至10天。将细胞维持培养以回收MTX抗性克隆，并通过聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGGE)和蛋白质印迹法使用抗EE肽抗体(EE肽＝Glu-Glu标签(Glu Glu Tyr Met ProMet Glu)评估培养基的IL-17C-CEE表达。随后扩大产生IL-17C-CEE细胞的生产用于生产重组蛋白。这在本领域是熟知的，对于这种方法，包含可选择的融合蛋白例如Fc序列或其他标签序列(组氨酸、Flag等)的表达构建体可以替代此处所述的EE肽序列。

实施例29

来自BHK细胞的IL-17C-CEE的纯化

来自表达IL-17C-CEE(实施例26)的BHK细胞的条件培养基进行0.2um无菌过滤并通过在4℃装载随后装载到抗EE肽(EE肽＝Glu-Glu标签(Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu)抗体亲和柱上。在装载之前，将条件培养基和抗EE抗体柱的pH调整至pH7.4。

将培养基装载到柱上之后，用10柱体积的20mM Tris、500mM NaCl，pH7.4洗涤柱。随后用3柱体积的包含0.5mg/mlEE肽(Glu Glu Tyr MetPro Met Glu)的磷酸盐缓冲盐水洗脱结合的蛋白质。收集级分并经由SDS-PAGE考马斯染色进行分析。汇集包含IL-17C-CEE的级分，并使用10kD分子量截止Ultrafree-15膜浓缩器(Millipore，Bedford，MA)根据制造商的说明浓缩大约10倍。

随后在用10mM磷酸钠、150mM NaCl，pH7.2平衡的Sephacry1-S100柱(16/60)(Pharmacia，Piscataway，NJ)上对浓缩的样品实施大小排阻层析。将洗脱的蛋白质收集在3ml级分中，经由SDS-PAGE考马斯染色分析所述级分。汇集包含纯化的IL-17C-CEE的级分并进行0.22um无菌过滤，蛋白质被等分并贮存于-80℃直至使用。纯化蛋白质的N末端测序证实了其与IL-17C的同一性。该重组蛋白质的分析显示缺少信号序列的成熟蛋白质的N末端序列在组氨酸19处开始，并具有20663的分子量，所述分子量包含C末端EE标签。

实施例30

来自293F过渡细胞(Transient Cell)的组氨酸标记的IL-17C的纯化

使用下列方法纯化在其羧基末端融合有多组氨酸的人和鼠类形式的IL-17C。纯化在4℃进行。使用Pellicon 25k过滤器(Millipore，Bedford，MA)将来自用组氨酸标记的IL-17C转染的293F细胞的约10L条件培养基浓缩至1.6L。向1.6L培养基加入咪唑和NaCl分别至15mM和0.5M的终浓度。填充具有5mL柱床体积的Talon(BD Biosciences)柱，并用20mM NaPi、15mM咪唑、0.5M NaCl、pH7.5平衡。以1.7mL/分钟的流速将培养基装载到柱中，随后用10CV平衡缓冲液进行洗涤。用20mMNaPi、0.5M NaCl、0.5M咪唑、pH7.4以1mL/分钟的流速洗脱组氨酸标记的IL-17C。收集2mL级分并通过考马斯染色的SDS-PAGE分析组氨酸标记的IL-17C的存在。

使用Amicon Ultra 5k离心式过滤器(Millipore，Bedford，MA)将Talon柱洗脱库从12mL浓缩至1mL。具有121mL柱床体积的Superdex75柱用50mM NaPi、109mM NaCl、pH7.3平衡，并以0.5mL/分钟的流速将1mL样品注入柱中。收集2mL级分并通过考马斯染色的SDS-PAGE分析组氨酸标记的IL-17C的存在。汇集包含纯化的组氨酸标记的IL-17C的级分并浓缩至2mL，通过2μm Acrodisc过滤器(PallCorporation)进行无菌过滤，并贮存于-80℃。通过BCA(Pierce，Rockford，IL)确定最终样品的浓度。

实施例31

ZcytoR21 Fc10融合蛋白表达构建体

经由同源重组使用编码目的基因的DNA片段和表达载体pZMP40构建包含ZcytoR21×1-C(Fc10)(SEQ ID NO：99；SEQ ID NO：100)或ZcytoR21×2-C(Fc10)(SEQ ID NO：101；SEQ ID NO：102)的2种表达质粒。通过PCR扩增使用引物zc48706(SEQ ID NO：103)、zc48707(SEQ ID NO：104)和zc48708(SEQ ID NO：105)产生ZcytoR21×1(SEQID NO：1)和ZcytoR21×2(SEQ ID NO：4)的多核苷酸序列片段。

ZcytoR21×2和ZcytoR21×2的两种片段包含其分别的编码区的细胞外结构域，所述细胞外结构域使用先前产生的ZcytoR21×1或ZcytoR21×2克隆作为模板制备而成。该片段包含与部分pZMP40载体序列的5′重叠区、ZcytoR21×1或ZcytoR21×2区段、连接体序列、细胞凋亡蛋白酶3切割位点和编码Fc10前5个氨基酸的连接体区域，随后为包含部分pZMP40载体序列的3′重叠区。PCR条件：1个循环，94℃5分钟；35个循环，94℃1分钟、随后为55℃2分钟、随后为72℃3分钟；1个循环，72℃10分钟。

PCR反应混合物在1％琼脂糖凝胶上电泳，并且使用QIAquickTM凝胶提取试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)凝胶提取对应插入物大小的条带。

由BglII切开的质粒pZMP40用于使用一个或另一个PCR插入片段的重组反应中。质粒pZMP40是这样的哺乳动物表达载体，其包含这样的表达盒、大肠杆菌复制起始位点、这样的哺乳动物选择标记表达单位和在酿酒酵母中进行选择和复制所必需的URA3和CEN-ARS序列，所述表达盒具有MPSV启动子、用于插入编码序列的多个限制位点和Fc9编码区，所述哺乳动物选择标记表达单位包含SV40启动子、增强子和复制起始位点、DHFR基因以及SV40终止子。pZMP40构建自pZP9(保藏于美国典型培养物保藏中心，10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，保藏号为98668)，所述pZP9具有取自pRS316(保藏于美国典型培养物保藏中心，10801 UniversityBoulevard，Manassas，VA 20110-2209，保藏号为77145)的酵母基因元件、来自脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点(IRES)元件、以及在跨膜结构域的C末端截短的CD8的细胞外结构域。

将100μl感受态酵母(酿酒酵母)细胞和10μl插入物DNA以及100ng切开的pZMP40载体独立地组合，并将混合物转移至0.2cm电穿孔小杯中。使用设置为0.75kV(5kV/cm)、∞欧姆和25μF的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)对酵母/DNA混合物进行电脉冲。向小杯中加入600μl的1.2M的山梨醇，以100μl和300μl的等分将酵母涂板在2块URA-D板上并在30℃下温育。大约72小时后，将来自单块板的Ura+酵母转化子重悬浮于1ml H2O中，并短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀物重悬浮于0.5ml裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH8.0、1mMEDTA)。将500μl裂解混合物加至包含250μl用酸洗涤的玻璃珠和300μl酚-氯仿的Eppendorf管中，涡旋振荡3分钟，并以最大速度在Eppendorf离心机中离心5分钟。将300μl的水相转移至新管，并使用600μl乙醇(EtOH)和30μl 3M乙酸钠，然后以最大速度离心30分钟沉淀DNA。将管中溶液轻轻倒出，并用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀。将管中溶液轻轻倒出，并将DNA沉淀物重悬浮于30μl TE中。

使用5μl酵母DNA制剂和50μl细胞进行电转感受态大肠杆菌宿主细胞(DH12S)的转化。在2.0kV、25μF和400欧姆下对细胞进行电脉冲。电穿孔后，加入1ml SOC(2％Bacto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl₂、10mM MgSO₄、20mM葡萄糖)，并随后以50μl和200μl的等分将细胞涂板在2块LB AMP板(LB肉汤(Lennox)，1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)，100mg/L氨苄青霉素)上。

对构建体的3种克隆的插入物实施序列分析，并对于每种构建体，选择包含正确序列的一种克隆。按照制造商的说明，使用可商购获得的试剂盒(QIAGEN Plasmid Mega Kit，Qiagen，Valencia，CA)分离大规模的质粒DNA。

在37℃下用200单位PvuI分别降解3组200μg的ZcytoR21×1-C(Fc10)构建体(SEQ ID NO：99)3小时，并随后用IPA沉淀，并在1.5mL微量离心管中离心。将上清液轻轻倒离沉淀物，并用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀物，并将其在室温下温育5分钟。在14,000RPM下在微量离心机中离心小管10分钟，并将上清液轻轻倒离沉淀物。然后在无菌环境中将沉淀物重悬浮于750μl的PF-CHO培养基，并将其在60℃下温育30分钟，并使其冷却至室温。大约5E6个APFDXB11细胞在三只管中的每一只管中被离心沉淀，并使用DNA介质溶液重悬浮所述细胞。将DNA/细胞混合物置于0.4cm小杯中，并使用下列参数(950μF、高电容、和300V)进行电穿孔。然后取出小杯中的内容物，混合，并用PF-CHO培养基稀释至25mL，并放入125mL摇瓶中。将瓶子在37℃、6％CO₂下置于振荡器上的培养箱中，在120RPM下进行振荡。经由蛋白质印迹法证实蛋白质表达。

对细胞系实施营养物选择，然后转入100nM氨甲蝶呤(MTX)中进行扩增，之后转入500nM MTX中进行扩增。分步扩增后为CD8细胞分选。通过获取稳定的500nM MTX扩增的库并用单克隆FITC抗CD8抗体(BDPharMingen，cat#30324X)使用制造商推荐的浓度对大约5E6个细胞进行染色来完成CD8细胞分选。染色的细胞被加工处理并在FACS Aria(BD)流式细胞仪上进行分选。收集最顶端的5％的细胞并使其过度生长。

实施例32

用于检测受体配体相互作用的磷蛋白测定法

特异性的受体配体结合导致细胞内信号途径的激活，这可以几种不同的方法进行检测。在特异性的受体配体结合的数分钟内，信号途径中的激酶和转录因子的磷酸化状态发生改变，这导致下游细胞应答激活或失活，所述下游细胞应答包含增殖、凋亡、细胞粘着、炎症应答等。这些信号途径的激活可以通过使用特异性识别磷酸化形式的激酶或转录因子的抗体进行检测。磷蛋白水平的改变可以通过蛋白质印迹法、通过标准ELISA法、或在多重免疫测定法中使用基于Luminex检测技术的商品化试剂盒，例如BioRad Bio-Plex悬浮阵列系统进行检测和定量。

BioRad Bio-Plex测定系统是类似于捕获夹心免疫测定法的基于小珠的测定系统。针对所需靶蛋白(总转录因子或激酶)的抗体与内部染色的荧光珠共价偶联。允许偶联珠与包含靶蛋白的裂解物反应。在系列洗涤去除未结合的蛋白质后，加入针对磷酸化形式的靶蛋白(磷酸化的转录因子或激酶)、对不同表位特异的生物素化检测抗体。这导致围绕靶蛋白的夹心的形成。加入链霉抗生物素蛋白-藻红蛋白以结合生物素化的检测抗体。与含有不同荧光染料的小珠偶联的抗体可以分开或组合进行，从而使得在与BioRad Bio-Plex Manager^TM3.0软件组合的BioRadBio-Plex悬浮阵列系统上可以同时测量多种靶蛋白。以这种方式可以同时测定高达100种不同的靶蛋白。多重测定形式的示例是磷酸化形式的ERK1/2、JNK、p38Map激酶、Akt、ATF-2、STAT-3和Iκβα的同时测量。

通过IL-17C或其他特异性配体的ZcytoR21结合和激活可以通过使用内源性表达受体的细胞系(如RT-PCR所确定的)进行检测。可选择地，可以使用过度表达转染的ZcytoR21受体的细胞(如实施例17中，过度表达转染的ZcytoR21受体的NIH3T3/KZ142.8细胞)。

细胞处理

表达内源性或转染的ZcytoR21的细胞系在96孔组织培养板上以5000个细胞/孔进行涂板，并在完全生长培养基上生长过夜。细胞在无血清的生长培养基上额外培养24小时并随后用高达300ng/ml的不同浓度的IL-17C处理7和15分钟。此外，可以在已知的细胞因子或生长因子与ZcytoR21配体(IL-17C)组合的存在下温育细胞以察看ZcytoR21配体增强或抑制已知因子信号转导的能力。

裂解物制备

温育后，细胞用100uL/孔冰冷的洗涤缓冲液进行洗涤，置于冰上，并加入50uL/孔裂解缓冲液(BioPlex细胞裂解试剂盒，目录号171-304012)。当裂解物在冰上时，用移液管上下吹打5次，并在微量培养板平台振荡器上在300rpm下在4℃摇动20分钟。板在4℃在4500rpm下离心20分钟。收集上清液并转移至新微量滴定板中，贮存于-20℃直至磷蛋白测定时。使用BioRad′s DC蛋白质测定法或确定总蛋白浓度的任何标准方法确定裂解物中的蛋白质浓度。必要时通过加入裂解缓冲液将样品调整至200-900ug/mL总蛋白。

Bio-Plex(Luminex)磷蛋白测定法

将捕获珠(50uL/孔)(与目的转录因子的初级抗体偶联的小珠)加入在微量滴定板中的50uL裂解物中。铝箔包被的板在室温下伴随300rpm的振荡过夜温育。该板是转至微量滴定真空装置的板并用测定缓冲液洗涤3次。加入25uL/孔检测抗体后，铝箔包被的板在室温下在300rpm下温育30分钟。板进行过滤并用测定缓冲液洗涤3次。加入链霉抗生物素蛋白-PE(50uL/孔)并将铝箔包被的板在室温下伴随300rpm的振荡温育15分钟。板进行过滤并用珠重悬浮缓冲液洗涤2次。最后1次洗涤后，小珠重悬浮于125uL/孔珠悬浮缓冲液中，振荡30秒，并在Bio-Plex悬浮阵列系统上根据制造商的说明进行阅读。使用Bio-Plex Manager软件分析数据。裂解物中存在的任何一种磷酸化转录因子的水平的改变都指示特异性的受体配体相互作用。

磷蛋白的蛋白质分析

如上所述制备的裂解物也可利用标准蛋白质印迹方案进行分析并使用磷酸化状态的特异性抗体进行探测。通过凝胶上存在的磷酸化的转录因子条带的密度的改变可以证实ZcytoR21和IL-17C(或其他配体)之间的受体配体相互作用。

实施例33

人IL-17C与人ZcytoR21×1和ZcytoR21×2、以及人IL-17R的结合

测定已用编码人ZcytoR21×1和ZcytoR21×2的表达载体转染的293fb细胞结合生物素化的人IL-17C的能力。对照转染包含1)没有转染DNA，2)只有载体(pzmp11)，和3)人IL-17R。在第1、2、3和5天从转染的悬浮培养物中取出106细胞。将细胞沉淀并重悬浮于100ul染色培养基(SM)中，所述染色培养基是HBSS外加1mg/ml牛血清白蛋白(BSA)、10mM Hepes和0.1％叠氮化钠(w/v)。生物素化的人IL-17C与细胞以1ug/ml的浓度在冰上温育45分钟。同时加入1∶25稀释的APC缀合的抗人CD8抗体(BD Pharmingen；cat.#555369)。30分钟后，用SM洗去过量的细胞因子和抗体，并将细胞与1∶100稀释的缀合了藻红蛋白的链霉抗生物素蛋白(SA-PE；BD Pharmingen；cat#554061)一起在冰上温育30分钟。洗去过量的SA-PE，并通过流式细胞法分析细胞。

从染色的细胞因子的平均荧光强度相对于阴性对照1)没有转染DNA和2)只有载体的改变检测结合的细胞因子的量。由这个分析，我们发现人IL-17C结合人ZcytoR21×1和ZcytoR21×2，尽管与ZcytoR21×2的结合明显更大。还可看到与人IL-17R的结合。

随后用如上所述的表达载体转染幼地鼠肾细胞，除了随后对细胞实施甲氨蝶呤药物选择以只选择培养已被转染的细胞。建立稳定的细胞系并如上测定它们的CD8表达以及与生物素化的IL-17C的结合。与瞬时转染分析得到的结果一致，只有表达ZcytoR21×2和×1形式的那些BHK细胞系与IL-17C结合，并且×2比×1形式与IL-17C的结合更好。

实施例34

IL-17C与ZcytoR21变体的结合

用人和小鼠ZcytoR21剪接变体稳定转染的BHK细胞被涂板并在T-75烧瓶中生长至融合。使用非蛋白酶试剂例如Versene(Invitrogen15040-066)转移出细胞、沉淀并在着色试剂(HBSS+1％BSA+0.1％Na叠氮化物+10mM HEPES)中以2×10e7细胞/ml重悬浮，并等分至96孔Costar板。将已用生物素标记的IL-17C以1ug/ml的浓度独立地加到细胞中。细胞/配体混合物可以在4℃温育1小时。细胞在着色试剂中洗涤1次，并在包含着色试剂外加链霉抗生物素蛋白-PE(BD Pharmingen554061)的第二种试剂中以1∶100的比率温育。孔于4℃在黑暗中温育1小时，随后在染色培养基中洗涤2次。细胞随后在染色培养基和Cytofix(BD Bioscience 554655)的1∶1混合物中重悬浮并在室温下温育10分钟。通过流式细胞法并通过对结合IL-17C的细胞的PE阳性事件的开放来分析细胞。

结果如下：结合人IL-17C的ZcytoR21剪接变体是ZcytoR21×1、ZcytoR21×2、ZcytoR21×6、ZcytoR21×13和鼠类ZcytoR21×6。结合鼠类IL-17C的ZcytoR21剪接变体如下：ZcytoR21×1、ZcytoR21×2、ZcytoR21×4、ZcytoR21-S2、ZcytoR21×6、ZcytoR21×13和鼠类ZcytoR21×6。鼠类IL-17C也结合鼠类IL17-RA。此外，ZcytoR21×1、ZcytoR21×2和ZcytoR21×3不结合下列任何一个：IL-17A、IL-17B、IL-17D和IL-17F(所有均为生物素化的人形式)。

使用Lipofectamine2000(Invitrogen 11668-027)经由ZcytoR21剪接变体瞬间转染的293F细胞如上所述进行染色。ZcytoR21剪接变体经基因工程改造为细胞外结构域C末端连接Flag标签和GPI连接结构域，如实施例22和24中所述。根据上述染色指导方针使用1∶100的抗Flag-FITC抗体(Sigma F-4049)检测Flag标签。

结果如下：结合人IL-17C的ZcytoR21剪接变体是ZcytoR21×1、ZcytoR21×2、ZcytoR21-S2、ZcytoR21×4、ZcytoR21×6、ZcytoR21×13和鼠类ZcytoR21×6。在较低的程度上，ZcytoR21×3也结合人IL-17C。

实施例35

使用PCR确定细胞系组中mRNA的分布

人细胞系在室内培养，其中一些用各种试剂如下进行处理：10ng/mlPMA(佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸盐)外加0.5ug/ml离子霉素4小时(这些细胞系被标记为“激活的”)，10ng/ml TNF α48小时、100ng/ml LPS(脂多糖)24小时、1ug/ml SEB(金黄色葡萄球菌肠毒素B)24小时、以及50nM CTX(霍乱毒素)24小时。使用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy试剂盒，根据制造商的说明进行纯化，或使用酸-酚纯化方案(Chomczynski和Sacchi，Analytical Biochemistry，162：156-9，1987)纯化RNA。通过在Agilent Bioanalyzer上分析RNA的等分来评估RNA的质量。如果RNA显著降解，则不将其用于随后的第一链cDNA的生成。通过使用zc41011：5′CTCTCCATCCTTATCTTTCATCAAC3′(SEQ ID NO：140)和zc41012：5′CTCTCTGCTGGCTAAACAAAACAC3′(SEQ ID NO：141)，即扩增基因间基因组DNA的单位点引物，对RNA的等分进行PCR分析来评估污染性基因组DNA的存在。用于污染性基因组DNA测定的PCR条件如下：2.5ul 10×缓冲液和0.5ul Advantage 2cDNA聚合酶混合物(BDBiosciences Clontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(AppliedBiosystems，Foster City，CA)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)以及0.5ul 20uM zc41011和zc41012，终体积为25ul。循环参数是94℃20秒，40个循环的94℃20秒、60℃1分20秒，以及单个循环的72℃7分钟。对10ul各反应物实施琼脂糖凝胶电脉，并检查凝胶中来自污染性基因组DNA的PCR产物的存在。如果观察到污染性基因组DNA，则使用不含DNA的试剂(Ambion，Inc，Austin，TX)根据制造商的说明对总RNA进行DNA酶解，然后如上所述重新检测。只有表现不含污染性基因组DNA的RNA才可用于随后的第一链cDNA的生成。

来自90种细胞系的20ug总RNA各自和水生成98ul的体积，然后分成各包含10ug总RNA的2个49ul的等分，并置于2块96孔PCR板中。向各等分加入用于第一链cDNA合成的试剂(Invitrogen First StrandcDNA Synthesis System，Carlsbad，CA)：20ul 25mM MgCl₂、10ul 10×RT缓冲液、10ul 0.1M DTT、2ul寡核苷酸dT、2ul RNAseOut。然后，向来自各细胞系的一个等分加入2ul Superscript II逆转录酶，并向对应的细胞系等分加入2ul H₂O制成缺少逆转录酶的阴性对照。如下温育所有样品：25℃10分、42℃50分、70℃15分。将样品分配在深孔板中并用水稀释至1.7ml。使用Multipette(Saigan)向96孔PCR板的各孔中多次加入16.5ul等分，产生大量细胞系的一次性使用的PCR组，然后将所述组密封并贮存于-20℃。这些组中的各孔代表来自在大约100ng总RNA的第一链cDNA。将180种样品涂布在2块96孔板上，阵列#119.01和#119.02。通过使用针对两个广泛表达但只有中等丰度的基因CLTC(网格蛋白)和TFRC(转铁蛋白受体C)的引物对一组实验对象进行多重PCR测定来确定组中的第一链cDNA的质量。将0.5ul各网格蛋白引物zc42901：5′CTCATATTGCTCAACTGTGTGAAAAG3′(SEQ ID NO：142)，zc42902：5′TAGAAGCCACCTGAACACAAATCTG3′(SEQ ID NO：143)和TFRC引物zc42599：5′ATCTTGCGTTGTATGTTGAAAATCAATT3′(SEQ ID NO：144)，zc42600：5′TTCTCCACCAGGTAAACAAGTCTAC3′(SEQ ID NO：145)与2.5ul10×缓冲液和0.5ul Advantage 2cDNA聚合酶混合物(BD BiosciencesClontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(Applied Biosystems，Foster City，CA)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)混合，并将其加入至阵列#119.01和阵列#119.02组的各孔中。循环参数如下：94℃20秒，35个循环的94℃20秒、67℃80秒，以及单个循环的72℃7分钟。对10ul各反应物实施琼脂糖凝胶电泳，并根据强PCR产物的存在对凝胶评分，所述PCR产物对各细胞系的+RT孔特异的各基因的PCR产物。

通过在这些针对每个样品的PCR条件下使用有义寡核苷酸zc26004：5′cactgctactcggctgaggaactgc3′(SEQ ID NO：146)和反义寡核苷酸zc20996：5′ttctgtggatagcggtcctcatc3′(SEQ ID NO：147)进行PCR来测定人第一链cDNA组中的IL-17C mRNA的表达，所述PCR条件是：2.5ul10×缓冲液和0.5ul advantage 2cDNA聚合酶混合物(BD BiosciencesClontech，Palo Alto，CA)、2ul 2.5mM dNTP混合物(Applied Biosystems)、2.5ul 10×Rediload(Invitrogen，Carlsbad，CA)和0.5ul 20uM各有义和反义引物。循环条件是94℃2分、35个循环的94℃30秒、68℃30秒、72℃1分、以及单个循环的72℃7分。对10ul各反应物实施琼脂糖凝胶电泳，并根据IL17-C的阳性或阴性表达对凝胶评分。

结果显示某些细胞系取决于其是否用试剂处理而差异表达IL-17C。对于IL-17C在静息状态下为阴性和在激活或处理状态下为阳性的细胞系是：骨髓AML细胞系KG-1，用TNFα、LPS或SEB处理的NHBE(正常人支气管上皮原始细胞)细胞系，以及U-937单核细胞细胞系。相反，Tanoue ALL B-细胞系和何杰金氏淋巴瘤细胞系KM-H2在静息状态下表现为阳性，而在激活的细胞系中RNA对IL-17C为阴性。

在激活和静息状态下对于IL-17C都是阳性的细胞系是：DU-4475、U698、MN60、AML-193、DB、NK-92、Molt-4、UT-7、WeRI-Rb.1、CCRF-HSB2和NCI-H929。最后，只在静息状态检测为IL-17C mRNA阳性的细胞系是：NCI-H716、NCI-H295R、MDA-MB-468、JAR、NIH：OVCAR-3、Sup-B15、NCI-H69、HEL-299、IMR-90、NIC-H292、BEAS2B、U2OS、HFLS-OA、MG-63、5637、HK-2、Daudi和Hut 78。

总体结果显示IL-17C在许多细胞系中基本表达，包含几种免疫系统相关的细胞系，但有少数细胞系响应各种试剂的激活开始表达IL-17CmRNA。特别有趣的是，当用TNFα、LPS或SEB处理支气管原始上皮细胞系NHBE时应答产生IL-17C mRNA，所述TNFα、LPS或SEB均被视为促炎化合物。这表明IL-17C在炎症建立中起作用。

实施例36

与非细胞组织相比，鼠类疾病模型选择组织中鼠类ZcytoR21 mRNA是被调控的

实验方案

从下列鼠类疾病模型中获得组织：结肠炎、哮喘、实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)、牛皮癣和胶原诱导的关节炎(CIA)。动物模型根据标准程序产生并包含合适的非患病的对照。通过在饮用水中的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎，并且从模型分离的组织包含末端结肠、近侧结肠和肠系膜淋巴结。通过抗原卵白蛋白的敏化作用和鼻内攻击诱导哮喘。分离的组织包含肺、脾脏和淋巴结。通过使用在RIBI佐剂中的MOG35-55肽免疫诱导EAE。分离的组织包含脑、颈、淋巴结和脊髓。通过将未致敏T细胞过继性转移至较少组织相容性错配或同系基因型免疫妥协小鼠来诱导牛皮癣。分离的组织包含病变的皮肤和邻近的皮肤。通过胶原注射诱导CIA，并且分离的组织包含脚和腿弯部的淋巴结。使用标准操作从所有组织中分离RNA。简而言之，收集组织并立即在液氮中冰冻并随后转移至-80℃直至加工处理。

关于加工处理，将组织置于Qiazol试剂(Qiagen，Valencia，CA)中，并使用Qiagen RNAeasy试剂盒根据制造商的说明分离RNA。使用多重实时定量RT-PCR法(TaqMan)和ABI PRISM 7900序列检测系统(PEApplied Biosystems)测量鼠类ZcytoR21mRNA的表达。ZcytoR21mRNA水平对鼠类次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶mRNA的表达进行标准化，并通过比较阈值循环法(comparative threshold cycle method)(UserBulletin 2；PE Applied Biosystems)进行确定。关于鼠类ZcytoR21的引物和探针包含正向引物5′CCACTCACACCCTGCGAAA(SEQ ID NO：148)、反向引物5′GCAAGTCCACATTCTCCAGGAT(SEQ ID NO：149)和探针ACCATCCTTCTGACTCCTGTGCTGTGG(SEQ ID NO：150)。

结果

在所有被测组织中都检测到了鼠类ZcytoR21mRNA的表达。在结肠、皮肤、肺和脚组织中观察到最高水平的表达。在脑、脊髓、淋巴结和脾脏组织中发现较低水平的表达。与非患病的对照相比，在来自EAE模型动物的脊髓组织中ZcytoR21 mRNA增加。在疾病评分较低的动物中ZcytoR21mRNA增加了大约3.75倍，而在疾病评分较高的动物中增加了大约2.8倍。与来自非患病的对照的组织相比，在来自急性DSS结肠炎模型的组织中鼠类ZcytoR21 mRNA下降。与非患病的对照相比，在末端结肠ZcytoR21mRNA下降了大约2.2倍，而在近侧结肠中下降了大约2.8倍。

因此，本领域技术人员将认识到，因为ZcytoR21表达在这些疾病中是增加的，所以ZcytoR21拮抗剂例如本发明的可溶性受体和MAb在这些疾病的治疗中将是有用的。

实施例37

在溃疡性结肠炎和克罗恩病患者发炎的大肠区段中ZcytoR21是被调控的

与来自正常对照患者的大肠区段相比，在溃疡性结肠炎和克罗恩病患者发炎的大肠区段中人ZcytoR21 mRNA是被调控的。

实验方案

从克罗恩病、溃疡性结肠炎患者或正常对照患者的发炎和未发炎大肠区段获得组织。使用标准操作分离RNA。使用多重实时定量RT-PCR法(TaqMan)和ABI PRISM 7900序列检测系统(PE Applied Biosystems)测量人ZcytoR21 mRNA的表达。ZcytoR21 mRNA水平对人次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶mRNA的表达进行标准化，并通过比较阈值循环法(User Bulletin 2；PE Applied Biosystems)进行确定。关于人ZcytoR21的引物和探针包含正向引物5′TCAGCGTGCGTCTTTGTCA(SEQ ID NO：151)、反向引物5′GGCCCCCAGACACAATTTT(SEQ ID NO：152)和探针CATAGGGACTGCTCAGCTCTTCACACTCCA(SEQ ID NO：153)。

结果

在所有被测的大肠样品中都检测到了人ZcytoR21 mRNA的表达。与来自正常患者的大肠相比，在溃疡性结肠炎患者的大肠中ZcytoR21 mRNA下降了2.1倍。在来自克罗恩病患者的大肠样品中ZcytoR21 mRNA下降。与没有疾病的正常患者相比，ZcytoR21 mRNA下降了1.5倍。

通过来自粘膜上皮的ZcytoR21表达细胞的丧失可以解释ZcytoR21表达的下降。例如，包含葡聚糖硫酸钠(DSS)施用的大鼠结肠炎模型(参照Scand J Gastroenterol.2000 Oct；35(10)：1053-9。)支持这个假设，证实了减少的上皮细胞在DSS施用后存活60分钟并在施用后2天上皮脱落。

实施例38

与非患病组织相比，鼠类疾病模型选择组织中鼠类IL-17C mRNA是被调控的

与非患病组织相比，鼠类疾病模型选择组织中鼠类IL-17C mRNA是被调控的。

实验方案

从下列鼠类疾病模型中获得组织：结肠炎、哮喘、实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)、牛皮癣和胶原诱导的关节炎(CIA)。动物模型根据标准程序产生并包含合适的非患病的对照。通过在饮用水中的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎，并且从模型分离的组织包含末端结肠、近侧结肠和肠系膜淋巴结。通过抗原卵白蛋白的敏化作用和鼻内攻击诱导哮喘。分离的组织包含肺、脾脏和淋巴结。通过使用在RIBI佐剂中的MOG35-55肽免疫诱导EAE。分离的组织包含脑、颈、淋巴结和脊髓。通过将未致敏T细胞过继性转移至较少组织相容性错配或同系基因型免疫妥协小鼠来诱导牛皮癣。分离的组织包含病变的皮肤和邻近的皮肤。通过胶原注射诱导CIA，并且分离的组织包含脚和腿弯部的淋巴结。使用标准操作从所有组织中分离RNA。简而言之，收集组织并立即在液氮中冰冻并随后转移至-80℃直至加工处理。关于加工处理，将组织置于Qiazol试剂(Qiagen，Valencia，CA)中，并使用Qiagen RNAeasy试剂盒根据制造商的建议分离RNA。使用多重实时定量RT-PCR法(TaqMan)和ABI PRISM 7900序列检测系统(PE Applied Biosystems)测量鼠类IL-17C mRNA的表达。IL-17C mRNA的水平对鼠类次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶mRNA的表达进行标准化，并通过比较阈值循环法(UserBulletin 2；PE Applied Biosystems)进行确定。关于鼠类IL-17C的引物和探针包含正向引物5′TGGAGATATCGCATCGACACA(SEQ ID NO：154)、反向引物5′GCATCCACGACACAAGCATT(SEQ ID NO：155)和探针CCGCTACCCACAGAAGCTGGCG(SEQ ID NO：156)。

结果

在所有被测组织中都检测到了鼠类IL-17C mRNA的表达。在淋巴结、结肠、皮肤、肺、脚和脾脏组织中观察到最高水平的表达。在脑和脊髓组织中发现较低水平的表达。与来自非患病对照的脚组织相比，在来自CIA关节炎模型小鼠的整个脚组织中IL-17C mRNA增加。在评为轻微疾病的动物中IL-17C mRNA增加了大约6.6倍，在评为中等水平疾病的动物中增加了大约9.1倍，而在疾病严重的动物中增加了大约5倍。与非患病的对照相比，在来自EAE模型动物的脊髓组织中IL-17C mRNA增加。在疾病评分较低的动物中IL-17C mRNA增加了大约2.05倍，而在疾病评分较高的动物中增加了大约2.9倍。与来自非患病的对照的组织相比，在来自急性DSS结肠炎模型的组织中鼠类IL-17C mRNA增加。与非患病的对照相比，在末端结肠IL-17C mRNA增加了大约2.8倍而在近侧结肠中增加了大约1.9倍。

实施例39

在溃疡性结肠炎和克罗恩病患者发炎的大肠区段中IL-17C是被调控的

在克罗恩病患者发炎的大肠区段中人IL-17C mRNA是被调控的。

实验方案

从克罗恩病、溃疡性结肠炎患者或正常对照患者的发炎和未发炎大肠区段获得组织。使用标准操作分离RNA。使用多重实时定量RT-PCR法(TaqMan)和ABI PRISM 7900序列检测系统(PE Applied Biosystems)测量人IL-17C mRNA的表达。IL-17C mRNA的水平对鼠类次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶mRNA的表达进行标准化，并通过比较阈值循环法(User Bulletin 2；PE Applied Biosystems)进行确定。关于人IL-17C的引物和探针包含正向引物：5′atg agg acc gct atc cac aga 3′(SEQID NO：157)、反向引物：5′ccc gtc cgt gca tcg a3′(SEQ ID NO：158)和探针：tgg cct tcg ccg agt gcc tg(SEQ ID NO：159)。

结果

在所有被测大肠样品中都检测到了人IL-17C mRNA的表达。在来自克罗恩病患者的大肠样品中IL-17C mRNA增加。与没有疾病的正常患者相比，IL-17C mRNA增加了大约7.7倍。与来自正常患者的大肠相比，在某些但不是所有溃疡性结肠炎患者的大肠中IL-17C mRNA增加。

实施例4O

关于ZcytoR21转染子的IL-17C功能性应答

用如实施例19中所述的人ZcytoR21×1、人ZcytoR21×2和人ZcytoR21×6受体剪接变体稳定转染NIH-3T3/KZ142细胞。如实施例32中所述，用剂量响应的人IL-17C(SEQ ID NO：17)、小鼠IL-17C(SEQID NO：19)和合适的对照处理每种细胞系7和15分钟。只用人IL-17C分析人ZcytoR21×1转染子。人和小鼠IL-17C在过度表达人ZcytoR21×1(n ＝3)、人ZcytoR21×2(n＝3)和人ZcytoR21×6(n＝2)剪接变体的系中诱导磷酸化的IκB-α的剂量依赖性应答，并且在未转染的NIH-3T3/KZ142细胞中(n＝3)没有产生应答。在7分钟的时间点上，对于NIH-3T3/人ZcytoR21×2系，人IL-17C在300ng/mL时给出了4.68倍的最大应答，而小鼠IL-17C在300ng/mL时给出了5.22倍的最大应答。类似地，对于NIH-3T3/人ZcytoR21×6系，人IL-17C给出了3.04倍的最大应答，而小鼠IL-17C给出了2.92倍的最大应答。在15分钟的时间点上，对于NIH-3T3/人ZcytoR21×1系，人IL-17C(A903G)在100ng/mL时给出了2.54倍的最大应答。因此，本领域技术人员将认识到，由IL-17C产生的结合和细胞信号，只在其中ZcytoR21受体剪接变体过度表达的细胞中发生，是IL-17C和ZcytoR21之间特异性的受体配体相互作用的证据。

实施例41

确定关于NIH3T3/KZ142.8细胞和用人ZcytoRR21×1ZcytoRR21×2剪接变体转染的NIH3T3/KZ142.8的IL-17C活性的萤光素酶报告物测定法

第1天：NIH3T3/KZ142.8(用可诱导的NFkB/AP1萤光素酶报告物稳定转染的NIH3T3细胞)、以及另外用ZcytoR21受体剪接变体人ZcytoR21×1、ZcytoR21×2或ZcytoR21×6稳定转染的这些相同的细胞以5000个细胞/孔涂板在高糖DMEM、5％FBS、1mM丙酮酸钠、1×G418和1uMMTX中的固体白色组织培养96孔板(Cat.#3917.Costar)上(在NIH3T3/KZ142.8亲代细胞系生长培养基中省去MTX)。板在37℃和5％CO₂下培养过夜。

第2天：用高糖DMEM、1mM丙酮酸钠、0.1％BSA和25mM Hepes(测定培养基)替代生长培养基，并在37℃和5％CO₂下将板培养过夜。

第3天：人IL-17C、小鼠IL-17C和合适的对照蛋白质在测定培养基中进行系列稀释。只用人IL-17C分析人ZcytoR21×1转染子。从细胞中去除耗尽的培养基，并向三份重复孔中加入每种浓度的测试配体或对照蛋白质，最终测定浓度为0、0.1、1、10和100ng/ml。在37℃和5％CO₂温育4小时后，去除测定培养基并加入25ul/孔的1×裂解缓冲液(Promega cat #E1531)。板在室温下温育10分钟，随后使用3秒整合和40ul萤光素酶底物(Promega cat #E4550)在Berthold微板光度计上阅读。

人和小鼠IL-17C诱导萤光素酶报告物基因在过度表达ZcytoR21×2和ZcytoR21×6剪接变体的细胞中2倍或更多地表达。在亲代NIH3T3/KZ142.8细胞中没有观察到诱导。因此，本领域技术人员将认识到，由IL-17C产生的结合和细胞信号，只在其中ZcytoR21受体剪接变体过度表达的细胞中发生，是IL-17C和ZcytoR21之间特异性的受体配体相互作用的证据。

实施例42

可溶性ZcytoR21在疾病模型中的有效性

基于IL-17C和ZcytoR21的表达模式，本领域技术人员将认识到这两种分子之间的相互作用的调节将在下列疾病中具有生物学活性。使用含有此处所公开的ZcytoR21多肽的Fc融合蛋白(例如SEQ ID NO：100、102或124中任何一个)可以促进此类调节。

可溶性ZcytoR21在鼠类哮喘模型中的有效性

通过DerP1抗原或卵白蛋白的致敏作用和攻击诱导鼠类哮喘模型。通过腹膜内注射在铝中的抗原可以使小鼠致敏，并随后通过鼻内施用抗原进行攻击。

为了证实可溶性ZcytoR21的有效性，可以用重组ZcytoR21攻击处理小鼠。通过确定灌洗液中炎症细胞的数量，通过测量气道的高应答性和通过病理学分析，在攻击后的不同时间点上评估肺炎症。ZcytoR21的体内有效性将通过移动到肺的炎症细胞的减少并通过肺病理学和气道高应答性的改变来证实。

可溶性ZcytoR21在胶原诱导的关节炎鼠类模型中的有效性

该模型可以用于研究类风湿性关节炎的疾病机制和潜在疗法。在第-21天使用在弗氏完全佐剂中的鸡II型胶原，并在第0天使用在弗氏不完全佐剂中的鸡II型胶原在尾根部免疫小鼠。在第2次免疫后每天对疾病进程评分并通过收集爪厚度的定性临床得分(数值范围0至3)和卡尺测量进行评估。临床得分评估如下：

0-正常脚趾和爪

0.5-单个脚趾发炎

1-2个或更多个脚趾发炎或脚顶端发炎

2-脚顶端和弓状物(直至踝)发炎(除踝外)

3-整只脚包含踝发炎

为了证实可溶性ZcytoR21的有效性，可以在免疫之前或在疾病进展过程中通过腹膜内、肌内、皮下或静脉内注射重组ZcytoR21来处理小鼠。ZcytoR21的体内有效性可以通过如临床症状减少判断的疾病进程的减少，爪肿胀的减少，如组织病理学测量的炎性浸润的减少，和/或如组织病理学测量的腿中骨/软骨降解的减少来证实。

可溶性ZcytoR21在鼠类EAE模型中的有效性

EAE用于研究在动物模型中的多发性硬化症的疾病机制和潜在疗法。在C57BL/6小鼠中使用rMOG蛋白质或MOG35-55肽、或用蛋白脂质蛋白质肽处理SJL小鼠可以诱导EAE。为了诱导EAE，在第0天用rMOG/弗氏完全佐剂(CFA)、MOG35-55肽/RIBI、或PLP/CFA乳剂皮下免疫小鼠，随后在第0天和/或第2天静脉内注射百日咳毒素进行处理。通过临床得分和通过在百日咳毒素注射后开始的体重减少来监控疾病进程。临床得分基于如下的动物尾状况、姿势和步态：0-健康，1-尾虚弱(尾尖不卷曲)，2-尾瘫痪(不能保持尾直立)，3-尾瘫痪和轻微蹒跚，4-尾瘫痪和严重蹒跚，5-尾瘫痪和单肢瘫痪，6-尾瘫痪和任何两肢瘫痪，7-四肢瘫痪(所有4肢瘫痪)，8-垂死或死亡。

为了证实可溶性ZcytoR21的有效性，可以在免疫之前或在疾病进展过程中用重组ZcytoR21处理小鼠。ZcytoR21的体内有效性可以通过如临床症状减少判断的疾病进程的减少、通过体重减少的改善和通过如组织病理学测量的脑炎性浸润的减少来证实。

可溶性ZcytoR21在实验性结肠炎鼠类模型中的有效性

结肠炎模型可以在小鼠中进行诱导，并用于评估人疾病中疗法的有效机制。

小鼠可以用在饮用水中随意施用的葡聚糖硫酸钠(DSS)进行处理。DSS可以以这样的方式施用从而诱导急性或慢性疾病。可以通过体重减少和通过疾病活动指数(DAI)得分监控疾病进程，所述DAI得分包含体重减少百分比、粪便的一致性(其中0＝正常，2＝柔软粪便，4＝腹泻)和hemocult(其中0＝正常，2＝在肛门或粪便中看不到血液，但在Hemocult载玻片上为蓝色，4＝在肛门或粪便中可见血液)。在这种模型的慢性形式中，可以使用这些标准测量疾病进程和消退。ZcytoR21的体内有效性可以通过使用上述标准在疾病进程中的减少和通过如病理学所测量的在肠中炎性浸润的减少进行证实。

半抗原诱导的结肠炎模型可以用于研究Th2介导的结肠炎。在这种模型中，通过在第0天局部施用唑酮(原文为oxazalone，疑为oxazolone)或TNBS使小鼠致敏，并通过在第6天直肠内施用唑酮或TNBS进行攻击。可以通过体重减少和通过疾病活动指数(DAI)得分监控疾病进程，所述DAI得分包含体重减少百分比、粪便的一致性(其中0＝正常，2＝柔软粪便，4＝腹泻)和hemocult(其中0＝正常，2＝在肛门或粪便中看不到血液，但在Hemocult载玻片上为蓝色，4＝在肛门或粪便中可见血液)。ZcytoR21的体内有效性可以通过使用上述标准在疾病进程中的减少和通过如病理学所测量的在肠中炎性浸润的减少进行证实。

实施例43

ZcytoR21变体细胞外结构域在允许羧基末端表位标签表达和GPI介导的质膜锚定的载体中的构建

与羧基末端的FLAG表位标签融合并经由GPI连接体与细胞质膜锚定的ZcytoR21细胞外结构域(ECD)的表达允许将配体结合研究标准化至蛋白质表达水平。商品化的哺乳动物表达载体pVAC2(Invivogen，SanDiego，CA)允许ECD与人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的32个氨基酸的羧基末端结构域融合。在前肽经过高尔基体的加工过程中，转氨酶切割这个PLAP结构域并同时添加GPI尾部，从而为ECD在细胞膜中提供了疏水性锚。下列ZcytoR21ECD剪接变体中的每一种都使用载体的BamH1和EcoR1位点克隆到商品化的哺乳动物表达载体pVAC2中，从而使得PLAP片段保留在框内。通常使用FLAG表位序列并且存在可商购获得的单克隆抗体。表位序列编码在产生ECD的PCR反应中使用的每种反义寡核苷酸。通过PCR使用先前产生的克隆作为模板产生人ZcytoR21×1、人ZcytoR21×2、人ZcytoR21×3、人ZcytoR21×6、人ZcytoR21×13和鼠类ZcytoR21×6的片段。这些克隆之间的差异区域存在于寡核苷酸的内部，因此所有PCR反应使用与SEQ ID NO：166和SEQ ID NO：167中显示的相同寡核苷酸对。使用人ZcytoR21×2作为模板以及与SEQ ID NO：168中显示的不同有义寡核苷酸但相同的反义引物来产生人ZcytoR21-S2克隆。使用先前克隆的模板以及如SEQ ID NO：169和SEQ ID NO：170中显示的引物产生鼠类形式的ZcytoR21×6。由于内部EcoR1位点的存在，使用限制性内切酶Esp3I消化PCR产物，留下匹配EcoR1和BamH1的粘性末端。消化并纯化的产物成功地连接到pVAC2中并测序产生：pVAC2-人ZcytoR21×1、(SEQ ID NO：171)，pVAC2-ZcytoR21×2、(SEQ ID NO：172)，pVAC2-hZcytoR21×3、(SEQ ID NO：173)，pVAC2-hZcytoR21×6、(SEQ ID NO：174)，pVAC2-hZcytoR21×13、(SEQ ID NO：175)，pVAC2-mZcytoR21×6、(SEQ ID NO：176)，pVAC2-hcytor21-S2、(SEQID NO：177)。

实施例44

ZcytoR21 Fc10融合蛋白表达构建体

由先前描述的、最优化的TPA前导形式(实施例29；SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102)构建包含具有天然向导的ZcytoR21×2-C(Fc10)的表达质粒。这通过用来自TPA前导形式的大约530bp EcoRI片段交换来自实施例16所描述的全长人ZcytoR21×2pzmp11双顺反子表达构建体的大约480bp EcoR1片段来完成。所讨论的2种表达构建体一方面共享紧在插入物上游的载体起源的EcoRI位点，另一方面共享ZcytoR21插入物起源的EcoRI位点。由这个基因改造事件产生的几种克隆被测序并选择具有正确定向的EcoRI片段的克隆用于表达。这种天然前导形式的ZcytoR21×2-C(Fc10)被称为mpet 1330(SEQ ID NO：178)。

实施例45

GPI锚定、ZcytoR21变体细胞外结构域在哺乳动物细胞中的表达

通过经由GPI连接体束缚在细胞表面的其细胞外结构域的表达可以促进细胞因子受体的配体结合特性的评估。先前在实施例41中描述的下列构建体在293f细胞(Invitrogen，Carlsbad，CA)中暂时表达48至96小时，通过离心进行收集并用于通过FACS的配体结合分析：pVAC2-hZcytoR21×1、pVAC2-hZcytoR21×2、pVAC2-hZcytoR21×3、pVAC2-hZcytoR21×6、pVAC2-hZcytoR21×13、pVAC2-hZcytoR21-S2和pVAC2-mZcytoR21×6。

在第1天，培养25ml摇瓶，以大约0.7e6细胞/ml的密度将低传代的293f细胞接种在500ml Erlenmeyer，聚碳酸酯TC烧瓶(Corning，Corning NY)中的100ml Freestye表达培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中。细胞在37℃下伴随周围气流补充有6％CO₂的2LPM下培养，附着至在90rpm下摇动的定轨振荡器。这些设置用于培养的整个过程。在第2天，使用血球计数器对细胞进行计数，在800g下离心，在新鲜的Freestyle培养基中重悬浮至1.0e6细胞/ml，并以10ml/烧瓶分为20个125ml Erlenmeyer聚碳酸酯TC烧瓶(Corning，Corning NY)，并如下进行转染。使用miniprep或maxiprep Qiagen试剂盒(Valencia.CA)根据制造商建议的操作制备的10ug质粒DNA稀释为200微升Optimem培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)。同时，12.5微升Lipofectamine2000转染试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)与200微升Optimem混合。在两种混合物已在室温下温育5分钟后，通过移液将其混合并在室温下再温育30分钟。随后将每种DNA脂质混合物加到125ml烧瓶细胞中。将因此被转染的细胞温育48至96小时，收集并通过离心在PBS+叠氮化物/BSA中洗涤并用于基于FACS的结合研究。与用未修饰的pVAC2“空”载体转染的细胞中看见的非特异性结合相比，通过测量FLAG表位特异性抗体和生物素化的IL-17C结合来评估报告物的表达水平。

实施例46

人ZcytoR21多克隆抗体

通过用由293细胞(ZytoR1-293)产生的纯化的成熟的重组人ZcytoR21多肽、纯化的重组人ZcytoR21s2，或其亚结构域，包含含有C末端标签融合以促进纯化(例如组氨酸、FLAG、EE、Fc)的SEQ ID NO：113、115、117或119，免疫2只雌性新西兰白兔来制备抗ZcytoR21多克隆抗体。

可选择地，在大肠杆菌中产生ZcytoR21-MBP融合蛋白，它利用与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合的ZcytoR21的细胞外结构域序列，或包含在人ZcytoR21细胞外结构域中发现的肽序列部分的合成肽，在所述人ZcytoR21细胞外结构域的N末端或C末端添加有Cys以促进缀合。肽和融合蛋白通过本领域已知方法(例如马来酰亚胺激活的超载体系统，No77656或Pharmalink试剂盒No 77158，Pierce Biotechnology，RocklandIL)缀合至载体蛋白例如BSA和KLH，以增加肽或融合蛋白的抗原性。对每只兔子给予初始腹膜内(ip)注射200μg在弗氏完全佐剂中的纯化的蛋白质，随后为每三周加强剂量的腹膜内注射100μg在弗氏完全佐剂中的肽。在第2次加强注射(总共3次注射)施用后7至10天，给动物放血并收集血清。随后每三周对动物追加剂量并放血。

使用CNBr-SEPHAROSE 4B蛋白质柱(Pharmacia LKB)从免疫的兔血清中亲和纯化人ZcytoR21特异性的多克隆抗体，所述柱使用10mg特异性抗原纯化的重组蛋白质人ZcytoR21-293或肽/克CNBr-SEPHAROSE，随后通过在PBS中20×透析过夜来制备。通过ELISA使用500ng/ml纯化的重组蛋白质人ZcytoR21-293作为抗体靶来表征人ZcytoR21特异性抗体。对于其特异性纯化的重组抗原人ZcytoR21-293，兔抗人ZcytoR21亲和纯化的抗体的检测极限(LLD)通常为10-500pg/ml。可选择地，可以加工处理血清以通过蛋白质亲和层析或其他本领域已知的方法分离IgG级分。

人ZcytoR21特异性多克隆抗体根据其结合ELISA形式的ZcytoR21-Fc蛋白质的能力，或特异性结合ZcytoR21转染的NIH3T3、293或BHK细胞的能力，或阻断IL-17C处理的NIH3T3细胞中萤光素酶诱导的能力来表征，所述NIH3T3细胞包含NFkB-敏感性萤光素酶报告物构建体并已用ZcytoR21进行转染。ZcytoR21指导的多克隆抗体抑制纯化的重组人IL-17C与ZcytoR21-Fc蛋白质或ZcytoR21转染的NIH3T3、293或BHK细胞结合的能力，或抑制NIH3T3/ZcytoR21/NFkB-萤光素酶生物测定中的IL-17C的生物活性的能力将是ZcytoR21特异性抗体拮抗人IL-17C生物活性的证据。

实施例47

鼠类抗人ZcytoR21单克隆抗体的产生

A.用于产生抗ZcytoR21抗体的免疫

1.可溶性ZcytoR21-Fc

按照2周的给药时间表，通过腹膜内注射与Ribi佐剂(Sigma)1∶1(v∶v)混合的50-100ug可溶性人ZcytoR21-mFc蛋白质来免疫6至12周大的未处理的或敲除了ZcytoR21的小鼠。第3次免疫后7至10天，经由眶后放血获取血样，收集血清并在中和测定中评估其抑制IL-17C与ZcytoR21结合的能力，并在FACS染色测定中或在FMAT系统上评估其使转染的ZcytoR21染色相对于使转染的P815或NIH3T3细胞染色的能力。继续免疫小鼠并获取血样，并如上所述进行评估直至中和滴定度达到平台。此时，对具有最高中和滴定度的小鼠静脉内注射在PBS中的25-50ug可溶性ZcytoR21-Fc蛋白质。3天后，收集来自这些小鼠的脾脏和淋巴结并用于产生杂交瘤，例如通过使用本领域已知的标准方法(例如，参见Kearney，J.F.等人J Immunol.123：1548-50，1979；和Lane，R.D.J Immunol Methods 81：223-8.1985)经由小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或本领域其他合适的细胞系产生杂交瘤。

2.可溶性ZcytoR21、ZcytoR21-CEE、ZcytoR21-组氨酸、ZcytoR21-FLAG

按照2周的给药时间表，通过腹膜内注射与Ribi佐剂(Sigma)1∶1(v∶v)混合的50-100ug可溶性人ZcytoR21、ZcytoR21-CEE、ZcytoR21-组氨酸、ZcytoR21-FLAG蛋白质来免疫6至12周大的未处理的或敲除了ZcytoR21的小鼠。第3次免疫后7至10天，经由眶后放血获取血样，收集血清并在中和测定中评估其抑制IL-17C与ZcytoR21-Fc、ZcytoR21、ZcytoR21-CEE、ZcytoR21-组氨酸或ZcytoR21-FLAG结合的能力，并在FACS染色测定中或在FMAT系统上评估其使转染的ZcytoR21染色相对于使转染的P815或NIH3T3细胞染色的能力。继续免疫小鼠并获取血样，并如上所述进行评估直至中和滴定度达到平台。此时，对具有最高中和滴定度的小鼠静脉内注射在PBS中的25-50ug可溶性ZcytoR21-Fc蛋白质。3天后，收集来自这些小鼠的脾脏和淋巴结并用于产生杂交瘤，例如通过使用本领域已知的标准方法(例如，参见Kearney，J.F.等人J Immunol.123：1548-50，1979；和Lane，R.D.J ImmunolMethods 81：223-8.1985)经由小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或本领域其他合适的细胞系产生杂交瘤。

3.可溶性ZcytoR21结构域

通过腹膜内注射50-100ug可溶性纯化的重组人ZcytoR21结构域HUZCYTOR21s 2(SEQ ID NO：113)、或其亚结构域(例如SEQ ID NO：115、117或119)来免疫6至12周大的未处理的或敲除了ZcytoR21的小鼠，所述亚结构域包含促进纯化的C末端标签融合物(例如组氨酸、FLAG、EE、Fc)，所述C末端标签融合物通过本领域已知方法(例如Pharmalink免疫原试剂盒No 77158，Pierce Biotechnology，RocklandIL)与载体蛋白例如BSA和KLH缀合以增加抗原性。按照2周的给药时间表将纯化的蛋白质与Ribi佐剂(Sigma)1∶1(v∶v)混合。第3次免疫后7至10天，经由眶后放血获取血样，收集血清并在中和测定中评估其抑制IL-17C与ZcytoR21-Fc、人可溶性ZcytoR21、ZcytoR21-CEE、ZcytoR21-组氨酸或ZcytoR21-FLAG结合的能力，并在FACS染色测定中或在FMAT系统上评估其使转染的ZcytoR21染色相对于使转染的P815或293细胞染色的能力。继续免疫小鼠并取得血样，并如上所述进行评估直至中和滴定度达到平台。此时，对具有最高中和滴定度的小鼠静脉内注射在PBS中的25-50ug可溶性ZcytoR21蛋白质。3天后，收集来自这些小鼠的脾脏和淋巴结并用于产生杂交瘤，例如通过使用本领域已知的标准方法(例如，参见Kearney，J.F.等人J Immunol.123：1548-50，1979；和Lane，R.D.J Immunol Methods 81：223-8.1985)经由小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或本领域其他合适的细胞系产生杂交瘤。

4.表达ZcytoR21的P815转染子

通过每2至3周腹膜内注射1-5×10⁶经照射的、转染的细胞来免疫6至10周大的雌性DBA/2小鼠。在这种方法中，没有动物产生并死于腹水瘤。相反，如上所述从第2次免疫放血开始监控动物在其血清中对ZcytoR21的中和性免疫应答。一旦中和滴定度已达到最大水平，就对具有最高滴定度的小鼠给予5×10⁶经照射的细胞的融合前腹膜内注射，并且4天后收集来自这些小鼠的脾脏和淋巴结并用于产生杂交瘤，例如通过使用本领域已知的标准方法(例如，参见Kearney，J.F.等人JImmunol.123：1548-50，1979；和Lane，R.D.J Immunol Methods 81：223-8.1985)经由小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)细胞或本领域其他合适的细胞系产生杂交瘤。

B.在杂交瘤融合物中筛选结合ZcytoR21并抑制IL-17C与ZcytoR21结合的抗体

在融合后8至10天对杂交瘤上清液进行4种不同的初步筛选。对于第1种测定，通过ELISA使用HRP缀合的山羊抗小鼠κ链和抗入轻链第二步骤试剂以鉴别结合的小鼠抗体，检测上清液中的抗体结合板结合的可溶性ZcytoR21-Fc、人可溶性ZcytoR21、ZcytoR21-CEE、ZcytoR21-组氨酸或ZcytoR21-FLAG蛋白质的能力。为了证实ZcytoR21融合蛋白的ZcytoR21部分的特异性，针对与相同的鼠类Fc区域(mG2a)、EE序列、组氨酸序列或FLAG序列融合的无关蛋白评估在初始测定中的阳性上清液。这些上清液中结合ZcytoR21融合蛋白但不结合包含无关的muFc或其他蛋白质的融合蛋白序列的抗体被视为对ZcytoR21特异。对于第2种测定，通过ELISA评估所有杂交瘤上清液中的抗体抑制生物素化的人IL-17C与板结合的ZcytoR21-Fc或其他ZcytoR21融合蛋白结合的能力。

随后测试包含特异性结合ZcytoR21的抗体的所有上清液抑制IL-17C与ZcytoR21转染的NIH3T3、293或BHK细胞或正常人上皮细胞结合的能力，无论所述上清液在ELISA测定中是否抑制IL-17C与ZcytoR21的结合。随后评估在IL-17C中和测定中为中和阳性的所有上清液通过FACS分析使ZcytoR21转染的NIH3T3、293或BHK细胞染色的能力。设计这个分析以确认IL-17C与ZcytoR21结合的抑制的确是由于特异性结合ZcytoR21受体的抗体造成的。此外，因为FACS分析与抗IgG第二步骤试剂一起执行，所以特异性的FACS阳性结果表明中和抗体可能属于IgG类。通过这些方法，鉴别出标准(master)孔，它分别结合在板结合ELISA中的ZcytoR21、在基于ELISA的抑制测定中抑制IL-17C与ZcytoR21结合、阻断IL-17C与ZcytoR21转染的NIH3T3、293或BHK细胞的相互作用，并且对于使用抗小鼠IgG第二步骤试剂进行的ZcytoR21转染的NIH3T3、293或BHK细胞染色是阳性的。

第3种测定由包含NFkB敏感性萤光素酶报告物构建体的NIH/3T3细胞组成，并且它已用ZcytoR21进行转染，并且可以因此对IL-17C处理产生应答。这些细胞通过增加萤光素酶表达对IL-17C处理产生应答，所述萤光素酶表达的增加随后可以通过本领域已知的标准方法进行测定。通过例如其抑制这些细胞在IL-17C刺激下产生萤光素酶的能力来测定针对ZcytoR21的特异性单克隆抗体。

第4种测定由原始人上皮细胞或人起源的细胞系例如U937、HCT15、DLD-1或Caco2细胞组成，所述细胞表达ZcytoR21并对IL-17C处理产生应答。通过例如其抑制通过这些细胞在IL-17C刺激产生趋化因子或细胞因子的能力来测定特异性单克隆抗体。使用可商购获得的ELISA测定试剂盒(例如，R&D Systems，Minneapolis，MN)测定响应IL-17C产生的趋化因子或细胞因子。可选择地，使用为了这个目的得到的磷酸化特异性抗体(BioRad，Richmond，CA)可以监控在IL-17C应答性细胞中的磷-IkB水平。IL-17C介导的磷-IkB产生的抑制可以测量单克隆抗体的ZcytoR21拮抗剂活性。

C.克隆产生抗ZcytoR21特异性抗体的杂交瘤

通过标准的低密度稀释(少于1细胞/孔)法克隆产生特异性抗ZcytoR21mAb的杂交瘤细胞系，所述抗体中和IL-17C与适当转染的BaF3或BHK细胞的结合。在涂板后大约5至7天，通过例如对板结合的人ZcytoR21-Fc进行ELISA，随后通过对如上所述的包含无关Fc的融合蛋白进行ELISA重新检验阳性孔来筛选克隆。通过重复中和测定以及FACS分析进一步确认选择的克隆的特异性抗体活性，所述克隆的上清液结合ZcytoR21-Fc而不结合包含无关Fc的融合蛋白。将所有选择的ZcytoR21抗体阳性的克隆最少克隆2次以帮助确保克隆形成能力并且评估抗体生产的稳定性。如所述的进行进一步的克隆循环和筛选，直至优选地至少95％的所得到的克隆对于中和抗ZcytoR21抗体的产生呈阳性。

D.由抗ZcytoR21 mAb识别的分子的生物化学特征

通过标准的免疫沉淀法，随后为SDS-PAGE分析或蛋白质斑点法，(两者都采用来自经ZcytoR21转染的相对于未转染的Baf3或BHK细胞的可溶性膜制剂)，进行这样的生物化学确认，即由假定的抗ZcytoR21-mAb识别的靶分子ZcytoR21的确是ZcytoR21。此外，表达ZcytoR21的未转染细胞系的可溶性膜制剂用于显示mAb识别天然的受体链以及转染的受体链。可选择地，检测mAb特异性免疫沉淀或蛋白质印迹杂交可溶性ZcytoR21-Fc蛋白质的能力。

实施例48

通过来自注射了用人ZcytoR21转染的P815细胞的小鼠血清中和人

ZcytoR21

使用基于细胞的中和测定，以1％、0.5％、0.25％、0.13％、0.06％、0.03％、0.02％和0％的系列稀释加入如此处所述来自注射了用人ZcytoR21转染的P815细胞的小鼠的血清。测定板在37℃，5％CO₂下温育4天，在第4天加入20μl/孔的Alamar Blue(Accumed，Chicago，IL)。板再次在37℃，5％CO₂下温育4至16小时。Alamar Blue转换中的差异显示来自动物的血清可以中和通过人ZcytoR21进行的IL-17C信号转导。

这个测定的结果可以提供另外证据，例如经由本发明的针对ZcytoR21的中和单克隆抗体有效阻断ZcytoR21结合、阻断、抑制、减少、拮抗或中和IL-17C活性，在减少IL-17C体内效应方面可以是有利的，并且可以减少IL-17C相关的炎症，例如在牛皮癣、IBD、结肠炎、慢性梗阻性肺部疾病、囊性纤维化、关节炎、哮喘、牛皮癣性关节炎、特应性皮炎或其他炎性疾病中可见的。

肽合成

使用Fmoc化学在模型433A肽合成仪(Applied Biosystems)上合成肽ZcytoR21-1.1[CIEASYLQEDTVRRKK-酰胺]和ZcytoR21-2.1[ISHKGLRSKRTQPSDPETWESC]。Fmoc-酰胺或Fmoc-Cys(Trt)-Wang树脂(AnaSpec)(0.25mmol)分别用作起始支持树脂。2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸酯(HBTU)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷(AppliedBiosystems and Piperidine(Aldrich Chemical Co.)的混合物用作合成试剂。从固体支持物wit 95％三氟乙酸(TFA)切割下肽。通过RP-HBLC使用Vydac C18，10-15微米，50×250mm制备柱用水/乙腈/TFA梯度进行肽的纯化。收集从柱洗脱的级分并通过分析性RP-HPLC分析纯度。将汇集的级分低压冻干并重悬浮于10％乙腈、1％乙酸中，随后在已知重量的Falcon管中再次低压冻干。在最后1次干燥前进行分析性HPLC和质谱测定法(MS)。总合成得率为30-33％。

实施例49

哺乳动物可溶性ZcytoR21-S2表达构建体的构建

诱变、蛋白质工程和结合研究已表明称为ZcytoR21-S2(SEQ ID NO：113)、不含SEQ ID NO：5的氨基酸24至96的ZcytoR21×2细胞外结构域具有高配体结合亲和力。使用PCR和如下的酵母同源重组构建包含具有羧基末端Fc型标签的人或小鼠ZcytoR21-S2的细胞外结构域、置于哺乳动物表达载体pZMP40中的表达构建体(SEQ ID NO：183)。为了构建人pZMP40-hZcytoR21-S2-FC10(SEQ ID NO：184)，通过在PCR反应中组合有义寡核苷酸5′CATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGAGGACCCGAGTTCTCCTTTGATTT3′(SEQ ID NO：185)和反义寡核苷酸5′ctctgatccatcaacttcatcagatccGTGTCTGTAAGAGACATCCGGACA3′(SEQ IDNO：186)使用先前产生的人ZcytoR21×2(SEQ ID NO：91)质粒作为模板获得PCR产物。简而言之，使用Expand^TM DNA聚合酶(Roche AppliedScience，Indianapolis，IN)根据制造商建议的试剂浓度使用下列循环参数进行PCR反应：1个循环，94℃5分钟；30个循环，94℃30秒，随后为大约62℃30秒，随后为72℃1分钟；1个循环，72℃10分钟。PCR反应混合物在1％琼脂糖凝胶上电泳并且使用QIAquick^TM凝胶提取试剂盒(Qiagen，Cat.No.28704)从凝胶上提取对应预期大小的DNA片段，产生纯化的DNA片段。

这种PCR片段包含在最优化的组织纤溶酶原激活物前原分泌前导序列编码区中与MPET 1122载体序列(SEQ ID NO：187)的5′重叠区、包含在pZMP40-hZcytoR21-S2-Fc10(SEQ ID NO：184)内的ZcytoR21-S2细胞外结构域编码区、以及在Fc10羧基末端标签中与MPET 1122载体的3′重叠区。

质粒pZMP20是包含这样的表达盒、大肠杆菌的复制起始位点、哺乳动物选择标记物表达单位和在酿酒酵母中进行选择和复制所需的URA3和CEN-ARS序列的哺乳动物表达载体，并且是MPET 1122构建体的支架，所述表达盒具有嵌合型CMV增强子/MPSV启动子、用于在酵母重组之前线性化的BglII位点、otPA信号肽序列、来自脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入元件、在跨膜结构域的C末端截短的CD8的细胞外结构域，所述哺乳动物选择标记物表达单位包含SV40启动子、增强子和复制起始位点、DHFR基因以及SV40终止子。

质粒MPET 1122在酵母中与凝胶提取的ZcytoR21-S2PCR片段重组之前用Srfl消化。将100μl感受态酵母(酿酒酵母)细胞和10μlZcytoR21-S2插入物DNA以及100ng BglII消化的pZMP20载体组合，并将混合物转移至0.2cm电穿孔小杯中。使用设置为0.75kV(5kV/cm)、∞欧姆和25μF的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)对酵母/DNA混合物进行电脉冲。向小杯中加入600μl的1.2M的山梨醇，并以100μl和300μl的等分将酵母涂板在2块URA-D板上并在30℃下温育。大约72小时后，将来自单块板的Ura⁺酵母转化子重悬浮在1ml H₂O中，并短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀物重悬浮于0.5ml裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mMNaCl、10mM Tris、pH8.0、1mM EDTA)。将500μl裂解混合物加至包含250μl用酸洗涤的玻璃珠和300μl酚氯仿的Eppendorf管中，涡旋振荡1分钟，以最大速度在Eppendorf离心机中离心5分钟。将300μl的水相转移至新管，并使用600μl乙醇，然后以最大速度离心30分钟来沉淀DNA。将管中溶液轻轻倒出，并用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀物。将管中溶液轻轻倒出，并将DNA沉淀重悬浮于30μl 10mM Tris，pH8.0，1mM EDTA。

使用5μl酵母DNA制剂和50μl大肠杆菌细胞进行电转感受态大肠杆菌细胞(DH10B，Invitrogen，Carlsbad，CA)的转化。在2.0kV、25μF和400欧姆下对细胞进行电脉冲。电穿孔后，加入1ml SOC(2％Bacto^TM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl₂、10mM MgSO₄、20mM葡萄糖)，并随后以50μl和200μl等分将细胞涂板在2块LB AMP板(LB肉汤(Lennox)，1.8％Bacto^TM琼脂(Difco)，100mg/L氨苄青霉素)上。

对构建体的3种DNA克隆的插入物实施序列分析，并选择包含正确序列的1种克隆。按照制造商的说明，使用可商购获得的试剂盒(QIAGENPlasmid Mega Kit，Qiagen，Valencia，CA)分离大规模的质粒DNA。通过普通的哺乳动物生产细胞例如CHO或BHK根据如实施例25和26中先前所述的标准转染方法来产生可溶性蛋白质。

使用对可溶性蛋白质赋予不同有用特性的其他分泌向导、表位标签或融合伴侣，或置于在促进蛋白质表达中有用的不同表达载体中可以构建这种ZcytoR21-S2构建体的变体。

根据上述内容，应当理解，尽管此处已描述了用于说明目的的本发明的具体实施方案，但无需背离本发明的精神和范围即可进行各种修改。因此，本发明除了受所附的权利要求限定外不受其他限定。

序列表

<110>ZymoGenetics公司

<120>可溶性ZcytoR21、抗ZcytoR21抗体和结合伴侣以及在炎症中的使用方法

<130>04-13PC

<150>US 60/619,651

<151>2004-10-18

<150>US 60/622,207

<151>2004-10-25

<160>186

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>2172

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(66)...(2069)

<400>1

aggccctgcc acccaccttc aggccatgca gccatgttcc gggagcccta attgcacaga 60

agccc atg ggg agc tcc aga ctg gca gcc ctg ctc ctg cct ctc ctc ctc 110

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu

1 5 10 15

ata gtc atc gac ctc tct gac tct gct ggg att ggc ttt cgc cac ctg 158

Ile Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu

20 25 30

ccc cac tgg aac acc cgc tgt cct ctg gcc tcc cac acg gat gac agt 206

Pro His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser

35 40 45

ttc act gga agt tct gcc tat atc cct tgc cgc acc tgg tgg gcc ctc 254

Phe Thr Gly Ser Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu

50 55 60

ttc tcc aca aag cct tgg tgt gtg cga gtc tgg cac tgt tcc cgc tgt 302

Phe Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys

65 70 75

ttg tgc cag cat ctg ctg tca ggt ggc tca ggt ctt caa cgg ggc ctc 350

Leu Cys Gln His Leu Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu

80 85 90 95

ttc cac ctc ctg gtg cag aaa tcc aaa aag tct tcc aca ttc aag ttc 398

Phe His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe

100 105 110

tat agg aga cac aag atg cca gca cct gct cag agg aag ctg ctg cct 446

Tyr Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro

115 120 125

cgt cgt cac ctg tct gag aag agc cat cac att tcc atc ccc tcc cca 494

Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro

130 135 140

gac atc tcc cac aag gga ctt cgc tct aaa agg acc caa cct tcg gat 542

Asp Ile Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp

145 150 155

cca gag aca tgg gaa agt ctt ccc aga ttg gac tca caa agg cat gga 590

Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly

160 165 170 175

gga ccc gag ttc tcc ttt gat ttg ctg cct gag gcc cgg gct att cgg 638

Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg

180 185 190

gtg acc ata tct tca ggc cct gag gtc agc gtg cgt ctt tgt cac cag 686

Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln

195 200 205

tgg gca ctg gag tgt gaa gag ctg agc agt ccc tat gat gtc cag aaa 734

Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys

210 215 220

att gtg tct ggg ggc cac act gta gag ctg cct tat gaa ttc ctt ctg 782

Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu

225 230 235

ccc tgt ctg tgc ata gag gca tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg 830

Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg

240 245 250 255

cgc aaa aaa tgt ccc ttc cag agc tgg cca gaa gcc tat ggc tcg gac 878

Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp

260 265 270

ttc tgg aag tca gtg cac ttc act gac tac agc cag cac act cag atg 926

Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met

275 280 285

gtc atg gcc ctg aca ctc cgc tgc cca ctg aag ctg gaa gct gcc ctc 974

Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu

290 295 300

tgc cag agg cac gac tgg cat acc ctt tgc aaa gac ctc ccg aat gcc 1022

Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala

305 310 315

acg gct cga gag tca gat ggg tgg tat gtt ttg gag aag gtg gac ctg 1070

Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu

320 325 330 335

cac ccc cag ctc tgc ttc aag ttc tct ttt gga aac agc agc cat gtt 1118

His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val

340 345 350

gaa tgc ccc cac cag act ggg tct ctc aca tcc tgg aat gta agc atg 1166

Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met

355 360 365

gat acc caa gcc cag cag ctg att ctt cac ttc tcc tca aga atg cat 1214

Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His

370 375 380

gcc acc ttc agt gct gcc tgg agc ctc cca ggc ttg ggg cag gac act 1262

Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr

385 390 395

ttg gtg ccc ccc gtg tac act gtc agc cag gcc cgg ggc tca agc cca 1310

Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro

400 405 410 415

gtg tca cta gac ctc atc att ccc ttc ctg agg cca ggg tgc tgt gtc 1358

Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val

420 425 430

ctg gtg tgg cgg tca gat gtc cag ttt gcc tgg aag cac ctc ttg tgt 1406

Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys

435 440 445

cca gat gtc tct tac aga cac ctg ggg ctc ttg atc ctg gca ctg ctg 1454

Pro Asp Val Ser Tyr Arg His Leu Gly Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu

450 455 460

gcc ctc ctc acc cta ctg ggt gtt gtt ctg gcc ctc acc tgc cgg cgc 1502

Ala Leu Leu Thr Leu Leu Gly Val Val Leu Ala Leu Thr Cys Arg Arg

465 470 475

cca cag tca ggc ccg ggc cca gcg cgg cca gtg ctc ctc ctg cac gcg 1550

Pro Gln Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg Pro Val Leu Leu Leu His Ala

480 485 490 495

gcg gac tcg gag gcg cag cgg cgc ctg gtg gga gcg ctg gct gaa ctg 1598

Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu

500 505 510

cta cgg gca gcg ctg ggc ggc ggg cgc gac gtg atc gtg gac ctg tgg 1646

Leu Arg Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp

515 520 525

gag ggg agg cac gtg gcg cgc gtg ggc ccg ctg ccg tgg ctc tgg gcg 1694

Glu Gly Arg His Val Ala Arg Val Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala

530 535 540

gcg cgg acg cgc gta gcg cgg gag cag ggc act gtg ctg ctg ctg tgg 1742

Ala Arg Thr Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp

545 550 555

agc ggc gcc gac ctt cgc ccg gtc agc ggc ccc gac ccc cgc gcc gcg 1790

Ser Gly Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ala Ala

560 565 570 575

ccc ctg ctc gcc ctg ctc cac gct gcc ccg cgc ccg ctg ctg ctg ctc 1838

Pro Leu Leu Ala Leu Leu His Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Leu

580 585 590

gct tac ttc agt cgc ctc tgc gcc aag ggc gac atc ccc ccg ccg ctg 1886

Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Pro Pro Leu

595 600 605

cgc gcc ctg ccg cgc tac cgc ctg ctg cgc gac ctg ccg cgt ctg ctg 1934

Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu

610 615 620

cgg gcg ctg gac gcg cgg cct ttc gca gag gcc acc agc tgg ggc cgc 1982

Arg Ala Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala Glu Ala Thr Ser Trp Gly Arg

625 630 635

ctt ggg gcg cgg cag cgc agg cag agc cgc cta gag ctg tgc agc cgg 2030

Leu Gly Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser Arg Leu Glu Leu Cys Ser Arg

640 645 650 655

ctt gaa cga gag gcc gcc cga ctt gca gac cta ggt tga gcagagctcc 2079

Leu Glu Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala Asp Leu Gly *

660 665

accgcagtcc cgggtgtctg cggccgcaac gcaacggaca ctggctggaa ccccggaatg 2139

agccttcgac cctgaaatcc ttggggtgcc tcg 2172

<210>2

<211>667

<212>PRT

<213>智人

<400>2

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe

35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile

210 215 220

Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

225 230 235 240

Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

245 250 255

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

260 265 270

Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val

275 280 285

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys

290 295 300

Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr

305 310 315 320

Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His

325 330 335

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu

340 345 350

Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp

355 360 365

Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala

370 375 380

Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu

385 390 395 400

Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val

405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

Asp Val Ser Tyr Arg His Leu Gly Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala

450 455 460

Leu Leu Thr Leu Leu Gly Val Val Leu Ala Leu Thr Cys Arg Arg Pro

465 470 475 480

Gln Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala

485 490 495

Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu

500 505 510

Arg Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu

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Gly Arg His Val Ala Arg Val Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala

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Arg Thr Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Ser

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Gly Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ala Ala Pro

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Leu Leu Ala Leu Leu His Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Leu Ala

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Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Pro Pro Leu Arg

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Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg

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Ala Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala Glu Ala Thr Ser Trp Gly Arg Leu

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Gly Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser Arg Leu Glu Leu Cys Ser Arg Leu

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Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu

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515 520 525

cgc ccg ctg ctg ctg ctc gct tac ttc agt cgc ctc tgc gcc aag ggc 1694

Arg Pro Leu Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly

530 535 540

gac atc ccc ccg ccg ctg cgc gcc ctg ccg cgc tac cgc ctg ctg cgc 1742

Asp Ile Pro Pro Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg

545 550 555

gac ctg ccg cgt ctg ctg cgg gcg ctg gac gcg cgg cct ttc gca gag 1790

Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala Glu

560 565 570 575

gcc acc agc tgg ggc cgc ctt ggg gcg cgg cag cgc agg cag agc cgc 1838

Ala Thr Ser Trp Gly Arg Leu Gly Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser Arg

580 585 590

cta gag ctg tgc agc cgg ctc gaa cga gag gcc gcc cga ctt gca gac 1886

Leu Glu Leu Cys Ser Arg Leu Glu Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala Asp

595 600 605

cta ggt tgagcagagc tccaccgcag tcccgggtgt ctgcggccgc aacgcaacgg 1942

Leu Gly

acactggctg gaaccccgga atgagccttc gaccctgaaa tccttggggt gcctcg 1998

<210>8

<211>609

<212>PRT

<213>智人

<400>8

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Val Phe Asn Gly

35 40 45

Ala Ser Ser Thr Ser Trp Cys Arg Asn Pro Lys Ser Leu Pro His Ser

50 55 60

Ser Ser Ile Gly Asp Thr Arg Cys Gln His Leu Leu Arg Gly Ser Cys

65 70 75 80

Cys Leu Val Val Thr Cys Leu Arg Arg Ala Ile Thr Phe Pro Ser Pro

85 90 95

Pro Gln Thr Ser Pro Thr Arg Asp Phe Ala Leu Lys Gly Pro Asn Leu

100 105 110

Arg Ile Gln Arg His Gly Lys Val Phe Pro Asp Trp Thr His Lys Gly

115 120 125

Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val

130 135 140

Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp

145 150 155 160

Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile

165 170 175

Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

180 185 190

Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

195 200 205

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

210 215 220

Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val

225 230 235 240

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys

245 250 255

Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr

260 265 270

Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His

275 280 285

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu

290 295 300

Cys Pro His Gln Thr Gly Ile Thr Glu Ala Arg Asp Trp Pro Ser His

305 310 315 320

Ile Gln Val Ser Cys Ser Pro Gly Val Pro Ile Arg Glu Pro Gln Thr

325 330 335

Ser Asn Cys Leu Trp Phe Val Arg Asn Glu Ala Thr Gln Gln Glu Ala

340 345 350

Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg

355 360 365

Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp

370 375 380

Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr Arg His Leu Gly Leu Leu

385 390 395 400

Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu Leu Thr Leu Leu Gly Val Val Leu Ala

405 410 415

Leu Thr Cys Arg Arg Pro Gln Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg Pro Val

420 425 430

Leu Leu Leu His Ala Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly

435 440 445

Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val

450 455 460

Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Arg His Val Ala Arg Val Gly Pro Leu

465 470 475 480

Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Thr Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr

485 490 495

Val Leu Leu Leu Trp Ser Gly Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser Gly Pro

500 505 510

Asp Pro Arg Ala Ala Pro Leu Leu Ala Leu Leu His Ala Ala Pro Arg

515 520 525

Pro Leu Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp

530 535 540

Ile Pro Pro Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp

545 550 555 560

Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala Glu Ala

565 570 575

Thr Ser Trp Gly Arg Leu Gly Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser Arg Leu

580 585 590

Glu Leu Cys Ser Arg Leu Glu Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala Asp Leu

595 600 605

Gly

<210>9

<211>373

<212>PRT

<213>智人

<400>9

Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro His Trp Asn Thr Arg Cys Pro

1 5 10 15

Leu Ala Ser His Thr Val Phe Asn Gly Ala Ser Ser Thr Ser Trp Cys

20 25 30

Arg Asn Pro Lys Ser Leu Pro His Ser Ser Ser Ile Gly Asp Thr Arg

35 40 45

Cys Gln His Leu Leu Arg Gly Ser Cys Cys Leu Val Val Thr Cys Leu

50 55 60

Arg Arg Ala Ile Thr Phe Pro Ser Pro Pro Gln Thr Ser Pro Thr Arg

65 70 75 80

Asp Phe Ala Leu Lys Gly Pro Asn Leu Arg Ile Gln Arg His Gly Lys

85 90 95

Val Phe Pro Asp Trp Thr His Lys Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu

100 105 110

Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu

115 120 125

Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu

130 135 140

Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val

145 150 155 160

Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser

165 170 175

Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser

180 185 190

Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr

195 200 205

Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys

210 215 220

Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr

225 230 235 240

Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp

245 250 255

Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe

260 265 270

Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ile

275 280 285

Thr Glu Ala Arg Asp Trp Pro Ser His Ile Gln Val Ser Cys Ser Pro

290 295 300

Gly Val Pro Ile Arg Glu Pro Gln Thr Ser Asn Cys Leu Trp Phe Val

305 310 315 320

Arg Asn Glu Ala Thr Gln Gln Glu Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser

325 330 335

Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val

340 345 350

Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp

355 360 365

Val Ser Tyr Arg His

370

<210>10

<211>2245

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(66)...(1664)

<400>10

aggccctgcc acccaccttc aggccatgca gccatgttcc gggagcccta attgcacaga 60

agccc atg ggg agc tcc aga ctg gca gcc ctg ctc ctg cct crc ctc ctc 110

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu

1 5 10 15

ata gtc atc gac ctc tct gac tct gct ggg att ggc ttt cgc cac ctg 158

Ile Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu

20 25 30

ccc cac tgg aac acc cgc tgt cct ctg gcc tcc cac acg gat gac agt 206

Pro His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser

35 40 45

ttc act gga agt tct gcc tat atc cct tgc cgc acc tgg tgg gcc ctc 254

Phe Thr Gly Ser Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu

50 55 60

ttc tcc aca aag cct tgg tgt gtg cga gtc tgg cac tgt tcc cgc tgt 302

Phe Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys

65 70 75

ttg tgc cag cat ctg ctg tca ggt ggc tca ggt ctt caa cgg ggc ctc 350

Leu Cys Gln His Leu Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu

80 85 90 95

ttc cac ctc ctg gtg cag aaa tcc aaa aag tct tcc aca ttc aag ttc 398

Phe His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe

100 105 110

tat agg aga cac aag atg cca gca cct gct cag agg aag ctg ctg cct 446

Tyr Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro

115 120 125

cgt cgt cac ctg tct gag aag agc cat cac att tcc atc ccc tcc cca 494

Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro

130 135 140

gac atc tcc cac aag gga ctt cgc tct aaa agg acc caa cct tcg gat 542

Asp Ile Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp

145 150 155

cca gag aca tgg gaa agt ctt ccc aga ttg gac tca caa agg cat gga 590

Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly

160 165 170 175

gga ccc gag ttc tcc ttt gat ttg ctg cct gag gcc cgg gct att cgg 638

Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg

180 185 190

gtg acc ata tct tca ggc cct gag gtc agc gtg cgt ctt tgt cac cag 686

Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln

195 200 205

tgg gca ctg gag tgt gaa gag ctg agc agt ccc tat gat gtc cag aaa 734

Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys

210 215 220

att gtg tct ggg ggc cac act gta gag ctg cct tat gaa ttc ctt ctg 782

Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu

225 230 235

ccc tgt ctg tgc ata gag gca tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg 830

Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg

240 245 250 255

cgc aaa aaa tgt ccc ttc cag agc tgg cca gaa gcc tat ggc tcg gac 878

Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp

260 265 270

ttc tgg aag tca gtg cac ttc act gac tac agc cag cac act cag atg 926

Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met

275 280 285

gtc atg gcc ctg aca ctc cgc tgc cca ctg aag ctg gaa gct gcc ctc 974

Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu

290 295 300

tgc cag agg cac gac tgg cat acc ctt tgc aaa gac ctc ccg aat gcc 1022

Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala

305 310 315

aca gct cga gag tca gat ggg tgg tat gtt ttg gag aag gtg gac ctg 1070

Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu

320 325 330 335

cac ccc cag ctc tgc ttc aag ttc tct ttt gga aac agc agc cat gtt 1118

His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val

340 345 350

gaa tgc ccc cac cag act ggg tct ctc aca tcc tgg aat gta agc atg 1166

Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met

355 360 365

gat acc caa gcc cag cag ctg att ctt cac ttc tcc tca aga atg cat 1214

Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His

370 375 380

gcc acc ttc agt gct gcc tgg agc ctc cca ggc ttg ggg cag gac act 1262

Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr

385 390 395

ttg gtg ccc ccc gtg tac act gtc agc cag gcc cgg ggc tca agc cca 1310

Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro

400 405 410 415

gtg tca cta gac ctc atc att ccc ttc ctg agg cca ggg tgc tgt gtc 1358

Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val

420 425 430

ctg ctc cat gct tca ctc agc tcc ccg gga gga gaa gat gcc tgg ctc 1406

Leu Leu His Ala Ser Leu Ser Ser Pro Gly Gly Glu Asp Ala Trp Leu

435 440 445

ata ggg gtg ggg ggc tct gtg ccc tca ggt gtg gcg gtc aga tgt cca 1454

Ile Gly Val Gly Gly Ser Val Pro Ser Gly Val Ala Val Arg Cys Pro

450 455 460

gtt tgc ctg gaa gca cct ctt gtg tcc gga tgt ctc tta cag aca cct 1502

Val Cys Leu Glu Ala Pro Leu Val Ser Gly Cys Leu Leu Gln Thr Pro

465 470 475

ggg gct ctt gat cct ggc act gct ggc cct cct cac cct act ggg tgt 1550

Gly Ala Leu Asp Pro Gly Thr Ala Gly Pro Pro His Pro Thr Gly Cys

480 485 490 495

tgt tct ggc cct cac ctg ccg gcg ccc aca gtc agg ccc ggg ccc agc 1598

Cys Ser Gly Pro His Leu Pro Ala Pro Thr Val Arg Pro Gly Pro Ser

500 505 510

gcg gcc agt gct cct cct gca cgc ggc gga ctc gga ggc gca gcg gcg 1646

Ala Ala Ser Ala Pro Pro Ala Arg Gly Gly Leu Gly Gly Ala Ala Ala

515 520 525

cct ggt ggg agc gct ggc tgaactgcta cgggcagcgc tgggcggcgg 1694

Pro Gly Gly Ser Ala Gly

530

gcgcgacgtg atcgtggacc tgtgggaggg gaggcacgtg gcgcgcgtgg gcccgctgcc 1754

gtggctctgg gcggcgcgga cgcgcgtagc gcgggagcag ggcactgtgc tgctgctgtg 1814

gagcggcgcc gaccttcgcc cggtcagcgg ccccgacccc cgcgccgcgc ccctgctcgc 1874

cctgctccac gctgccccgc gcccgctgct gctgctcgct tacttcagtc gcctctgcgc 1934

caagggcgac atccccccgc cgctgcgcgc cctgccgcgc taccgcctgc tgcgcgacct 1994

gccgcgtctg ctgcgggcgc tggacgcgcg gcctttcgca gaggccacca gctggggccg 2054

ccttggggcg cggcagcgca ggcagagccg cctagagctg tgcagccggc tcgaacgaga 2114

ggccgcccga cttgcagacc taggttgagc agagctccac cgcagtcccg ggtgtctgcg 2174

gccgcaacgc aacggacact ggctggaacc ccggaatgag ccttcgaccc tgaaatcctt 2234

ggggtgcctc g 2245

<210>11

<211>533

<212>PRT

<213>智人

<400>11

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe

35 40 45

Thr Gly Ser Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu Phe

50 55 60

Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys Leu

65 70 75 80

Cys Gln His Leu Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe

85 90 95

His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr

100 105 110

Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg

115 120 125

Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp

130 135 140

Ile Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro

145 150 155 160

Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly

165 170 175

Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val

180 185 190

Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp

195 200 205

Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile

210 215 220

Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

225 230 235 240

Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

245 250 255

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

260 265 270

Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val

275 280 285

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys

290 295 300

Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr

305 310 315 320

Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His

325 330 335

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu

340 345 350

Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp

355 360 365

Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala

370 375 380

Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu

385 390 395 400

Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val

405 410 415

Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu

420 425 430

Leu His Ala Ser Leu Ser Ser Pro Gly Gly Glu Asp Ala Trp Leu Ile

435 440 445

Gly Val Gly Gly Ser Val Pro Ser Gly Val Ala Val Arg Cys Pro Val

450 455 460

Cys Leu Glu Ala Pro Leu Val Ser Gly Cys Leu Leu Gln Thr Pro Gly

465 470 475 480

Ala Leu Asp Pro Gly Thr Ala Gly Pro Pro His Pro Thr Gly Cys Cys

485 490 495

Ser Gly Pro His Leu Pro Ala Pro Thr Val Arg Pro Gly Pro Ser Ala

500 505 510

Ala Ser Ala Pro Pro Ala Arg Gly Gly Leu Gly Gly Ala Ala Ala Pro

515 520 525

Gly Gly Ser Ala Gly

530

<210>12

<211>510

<212>PRT

<213>智人

<400>12

Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro His Trp Asn Thr Arg Cys Pro

1 5 10 15

Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe Thr Gly Ser Ser Ala Tyr Ile

20 25 30

Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu Phe Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val

35 40 45

Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys Leu Cys Gln His Leu Leu Ser Gly

50 55 60

Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe His Leu Leu Val Gln Lys Ser

65 70 75 80

Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr Arg Arg His Lys Met Pro Ala

85 90 95

Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser

100 105 110

His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser His Lys Gly Leu Arg

115 120 125

Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro

130 135 140

Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu

145 150 155 160

Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu

165 170 175

Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu

180 185 190

Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val

195 200 205

Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser

210 215 220

Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser

225 230 235 240

Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr

245 250 255

Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys

260 265 270

Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr

275 280 285

Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp

290 295 300

Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe

305 310 315 320

Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser

325 330 335

Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile

340 345 350

Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser

355 360 365

Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val

370 375 380

Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro

385 390 395 400

Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Leu His Ala Ser Leu Ser Ser

405 410 415

Pro Gly Gly Glu Asp Ala Trp Leu Ile Gly Val Gly Gly Ser Val Pro

420 425 430

Ser Gly Val Ala Val Arg Cys Pro Val Cys Leu Glu Ala Pro Leu Val

435 440 445

Ser Gly Cys Leu Leu Gln Thr Pro Gly Ala Leu Asp Pro Gly Thr Ala

450 455 460

Gly Pro Pro His Pro Thr Gly Cys Cys Ser Gly Pro His Leu Pro Ala

465 470 475 480

Pro Thr Val Arg Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ser Ala Pro Pro Ala Arg

485 490 495

Gly Gly Leu Gly Gly Ala Ala Ala Pro Gly Gly Ser Ala Gly

500 505 510

<210>13

<211>2221

<212>DNA

<213>小鼠(MuS musculus)

<220>

<221>CDS

<222>(76)...(1989)

<400>13

ctccagggcc aggccctgct gccctcttgc agacaggaaa gacatggtct ctgcgcccgg 60

atcctacaga agctc atg ggg agc ccc aga ctg gca gcc ttg ctc ctg tct 111

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ser

1 5 10

ctc ccg cta ctg ctc atc ggc ctc gct gtg tct gct cgg gtt gcc tgc 159

Leu Pro Leu Leu Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala Arg Val Ala Cys

15 20 25

ccc tgc ctg cgg agt tgg acc agc cac tgt ctc ctg gcc tac cgt gtg 207

Pro Cys Leu Arg Ser Trp Thr Ser His Cys Leu Leu Ala Tyr Arg Val

30 35 40

gat aaa cgt ttt gct ggc ctt cag tgg ggc tgg ttc cct ctc ttg gtg 255

Asp Lys Arg Phe Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe Pro Leu Leu Val

45 50 55 60

agg aaa tct aaa agt cct cct aaa ttt gaa gac tat tgg agg cac agg 303

Arg Lys Ser Lys Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr Trp Arg His Arg

65 70 75

aca cca gca tcc ttc cag agg aag ctg cta ggc agc cct tcc ctg tct 351

Thr Pro Ala Ser Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser Pro Ser Leu Ser

80 85 90

gag gaa agc cat cga att tcc atc ccc tcc tca gcc atc tcc cac aga 399

Glu Glu Ser His Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala Ile Ser His Arg

95 100 105

ggc caa cgc acc aaa agg gcc cag cct tca gct gca gaa gga aga gaa 447

Gly Gln Arg Thr Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala Glu Gly Arg Glu

110 115 120

cat ctc cct gaa gca ggg tca caa aag tgt gga gga cct gaa ttc tcc 495

His Leu Pro Glu Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly Pro Glu Phe Ser

125 130 135 140

ttt gat ttg ctg ccc gag gtg cag gct gtt cgg gtg act att cct gca 543

Phe Asp Leu Leu Pro Glu Val Gln Ala Val Arg Val Thr Ile Pro Ala

145 150 155

ggc ccc aag gcc agt gtg cgc ctt tgt tat cag tgg gca ctg gaa tgt 59l

Gly Pro Lys Ala Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp Ala Leu Glu Cys

160 165 170

gaa gac ttg agt agc cct ttt gat acc cag aaa att gtg tct gga ggc 639

Glu Asp Leu Ser Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly

175 180 185

cac act gta gac ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc tgc atg tgc ata 687

His Thr Val Asp Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Met Cys Ile

190 195 200

gag gcc tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg cgc aaa aag tgt ccc 735

Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro

205 210 215 220

ttc cag agc tgg cct gaa gct tat ggc tca gac ttc tgg cag tca ata 783

Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Gln Ser Ile

225 230 235

cgc ttc act gac tac agc cag cac aat cag atg gtc atg gct ctg aca 831

Arg Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Asn Gln Met Val Met Ala Leu Thr

240 245 250

ctc cgc tgc cca ctg aaa ctg gag gcc tcc ctc tgc tgg agg cag gac 879

Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys Trp Arg Gln Asp

255 260 265

cca ctc aca ccc tgc gaa acc ctt ccc aac gcc aca gca cag gag tca 927

Pro Leu Thr Pro Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala Thr Ala Gln Glu Ser

270 275 280

gaa gga tgg tat atc ctg gag aat gtg gac ttg cac ccc cag ctc tgc 975

Glu Gly Trp Tyr Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys

285 290 295 300

ttt aag ttc tca ttt gaa aac agc agc cac gtt gaa tgt ccc cac cag 1023

Phe Lys Phe Ser Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln

305 310 315

agt ggc tct ctc cca tcc tgg act gtg agc atg gat acc cag gcc cag 1071

Ser Gly Ser Leu Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln

320 325 330

cag ctg acg ctt cac ttt tct tcg agg aca tat gcc acc ttc agt gct 1119

Gln Leu Thr Leu His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr Ala Thr Phe Ser Ala

335 340 345

gcc tgg agt gac cca ggt ttg ggg ccg gat acc ccc atg cct cct gtg 1167

Ala Trp Ser Asp Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr Pro Met Pro Pro Val

350 355 360

tac agc atc agc cag acc cag ggc tca gtc cca gtg acg cta gac ctc 1215

Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro Val Thr Leu Asp Leu

365 370 375 380

atc atc ccc ttc ctg agg cag gag aat tgc atc ctg gtg tgg agg tca 1263

Ile Ile Pro Phe Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu Val Trp Arg Ser

385 390 395

gat gtc cat ttt gcc tgg aag cac gtc ttg tgt cct gat gtc tcc cat 1311

Asp Val His Phe Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro Asp Val Ser His

400 405 410

aga cac ctc ggg ctc ttg atc ctg gca ctg ctg gct ctc acc gct cta 1359

Arg His Leu Gly Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu Thr Ala Leu

415 420 425

gtg ggt gta gtt ctg gtc ctc ctc ggc cgg cgc cta ctg cca ggc tcc 1407

Val Gly Val Val Leu Val Leu Leu Gly Arg Arg Leu Leu Pro Gly Ser

430 435 440

ggt cga aca agg cca gtt tta ctc cta cat gca gcg gac tca gag gca 1455

Gly Arg Thr Arg Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp Ser Glu Ala

445 450 455 460

cag cga cgc ctg gtg gga gct ttg gcc gaa ctg ctg cgg acg gcg ctg 1503

Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Thr Ala Leu

465 470 475

gga ggt gga cgc gac gtg atc gtg gat ctc tgg gaa ggg acg cac gta 1551

Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Thr His Val

480 485 490

gca cgc att gga cca ctg ccg tgg ctt tgg gca gcg cgg gag cgc gtg 1599

Ala Arg Ile Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Glu Arg Val

495 500 505

gcg cgg gag cag ggc aca gtg ctg ctc ctg tgg aac tgt gcg ggt ccc 1647

Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Asn Cys Ala Gly Pro

510 515 520

agc acc gcc tgc agc ggt gac ccg cag gct gcg tcc ctt cgc acc ttg 1695

Ser Thr Ala Cys Ser Gly Asp Pro Gln Ala Ala Ser Leu Arg Thr Leu

525 530 535 540

ttg tgc gct gct cca cgt ccg ctg ctg ctc gcc tac ttc agt cgc ctc 1743

Leu Cys Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu

545 550 555

tgc gcc aaa ggt gac atc ccc cgg ccg ctg cgc gct ctg cca cgc tac 1791

Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Arg Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr

560 565 570

cgc ctg ctt cgt gac ctg ccg cgc ctg ctg aga gca ctg gat gct cag 1839

Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Gln

575 580 585

cct gcc acc cta gcc tcc agc tgg agt cac ctt ggg gct aag cgg tgc 1887

Pro Ala Thr Leu Ala Ser Ser Trp Ser His Leu Gly Ala Lys Arg Cys

590 595 600

ttg aaa aac cgt ctg gag cag tgt cac ctg ctg gaa ctt gag gct gcc 1935

Leu Lys Asn Arg Leu Glu Gln Cys His Leu Leu Glu Leu Glu Ala Ala

605 610 615 620

aaa gat gac tac caa ggc tca acc aat agt ccc tgt ggt ttc agc tgt 1983

Lys Asp Asp Tyr Gln Gly Ser Thr Asn Ser Pro Cys Gly Phe Ser Cys

625 630 635

ctg tag cctcagcctg tgtagcaaca gcaggaactc cagaatgagg cctcacacat 2039

Leu *

gtactctttg ggggtgcttc ttgtccccca aaccgtaaga ctcaccttaa gtcccacact 2099

tgaccaacct ccctcacatt tgctccctct tagagttcct gagaggaact tgggctttcc 2159

tgataggtcc tcagcccttt ctgagaagga gggacgattt ttccatttct tttcaaaact 2219

ga 2221

<210>14

<211>637

<212>PRT

<213>小鼠

<400>14

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg

20 25 30

Ser Trp Thr Ser His Cys Leu Leu Ala Tyr Arg Val Asp Lys Arg Phe

35 40 45

Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys

50 55 60

Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser

65 70 75 80

Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His

85 90 95

Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr

100 105 110

Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu

115 120 125

Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

Pro Glu Val Gln Ala Val Arg Val Thr Ile Pro Ala Gly Pro Lys Ala

145 150 155 160

Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser

165 170 175

Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp

180 185 190

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

195 200 205

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

210 215 220

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Gln Ser Ile Arg Phe Thr Asp

225 230 235 240

Tyr Ser Gln His Asn Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

245 250 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro

260 265 270

Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala Thr Ala Gln Glu Ser Glu Gly Trp Tyr

275 280 285

Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu

305 310 315 320

Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu

325 330 335

His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Asp

340 345 350

Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr Pro Met Pro Pro Val Tyr Ser Ile Ser

355 360 365

Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro Val Thr Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe

385 390 395 400

Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro Asp Val Ser His Arg His Leu Gly

405 410 415

Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu Thr Ala Leu Val Gly Val Val

420 425 430

Leu Val Leu Leu Gly Arg Arg Leu Leu Pro Gly Ser Gly Arg Thr Arg

435 440 445

Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu

450 455 460

Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Thr Ala Leu Gly Gly Gly Arg

465 470 475 480

Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Thr His Val Ala Arg Ile Gly

485 490 495

Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Glu Arg Val Ala Arg Glu Gln

500 505 510

Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Asn Cys Ala Gly Pro Ser Thr Ala Cys

515 520 525

Ser Gly Asp Pro Gln Ala Ala Ser Leu Arg Thr Leu Leu Cys Ala Ala

530 535 540

Pro Arg Pro Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly

545 550 555 560

Asp Ile Pro Arg Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg

565 570 575

Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Gln Pro Ala Thr Leu

580 585 590

Ala Ser Ser Trp Ser His Leu Gly Ala Lys Arg Cys Leu Lys Asn Arg

595 600 605

Leu Glu Gln Cys His Leu Leu Glu Leu Glu Ala Ala Lys Asp Asp Tyr

610 615 620

Gln Gly Ser Thr Asn Ser Pro Cys Gly Phe Ser Cys Leu

625 630 635

<210>15

<211>391

<212>PRT

<213>小鼠

<400>15

Ala Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg Ser Trp Thr Ser His Cys Leu

1 5 10 15

Leu Ala Tyr Arg Val Asp Lys Arg Phe Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp

20 25 30

Phe Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp

35 40 45

Tyr Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly

50 55 60

Ser Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser

65 70 75 80

Ala Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala

85 90 95

Ala Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly

100 105 110

Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Val Gln Ala Val Arg

115 120 125

Val Thr Ile Pro Ala Gly Pro Lys Ala Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln

130 135 140

Trp Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys

145 150 155 160

Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu

165 170 175

Pro Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg

180 185 190

Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp

195 200 205

Phe Trp Gln Ser Ile Arg Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Asn Gln Met

210 215 220

Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu

225 230 235 240

Cys Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala

245 250 255

Thr Ala Gln Glu Ser Glu Gly Trp Tyr Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu

260 265 270

His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Glu Asn Ser Ser His Val

275 280 285

Glu Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu Pro Ser Trp Thr Val Ser Met

290 295 300

Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr

305 310 315 320

Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Asp Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr

325 330 335

Pro Met Pro Pro Val Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro

340 345 350

Val Thr Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile

355 360 365

Leu Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe Ala Trp Lys His Val Leu Cys

370 375 380

Pro Asp Val Ser His Arg His

385 390

<210>16

<211>1048

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(50)...(643)

<400>16

gccaggtgtg caggccgctc caagcccagc ctgccccgct gccgccacc atg acg ctc 58

Met Thr Leu

1

ctc ccc ggc ctc ctg ttt ctg acc tgg ctg cac aca tgc ctg gcc cac 106

Leu Pro Gly Leu Leu Phe Leu Thr Trp Leu His Thr Cys Leu Ala His

5 10 15

cat gac ccc tcc ctc agg ggg cac ccc cac agt cac ggt acc cca cac 154

His Asp Pro Ser Leu Arg Gly His Pro His Ser His Gly Thr Pro His

20 25 30 35

tgc tac tcg gct gag gaa ctg ccc ctc ggc cag gcc ccc cca cac ctg 202

Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Pro Leu Gly Gln Ala Pro Pro His Leu

40 45 50

ctg gct cga ggt gcc aag tgg ggg cag gct ttg cct gta gcc ctg gtg 250

Leu Ala Arg Gly Ala Lys Trp Gly Gln Ala Leu Pro Val Ala Leu Val

55 60 65

tcc agc ctg gag gca gca agc cac agg ggg agg cac gag agg ccc tca 298

Ser Ser Leu Glu Ala Ala Ser His Arg Gly Arg His Glu Arg Pro Ser

70 75 80

gct acg acc cag tgc ccg gtg ctg cgg ccg gag gag gtg ttg gag gca 346

Ala Thr Thr Gln Cys Pro Val Leu Arg Pro Glu Glu Val Leu Glu Ala

85 90 95

gac acc cac cag cgc tcc atc tca ccc tgg aga tac cgt gtg gac acg 394

Asp Thr His Gln Arg Ser Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Arg Val Asp Thr

100 105 110 115

gat gag gac cgc tat cca cag aag ctg gcc ttc gcc gag tgc ctg tgc 442

Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu Cys Leu Cys

120 125 130

aga ggc tgt atc gat gca cgg acg ggc cgc gag aca gct gcg ctc aac 490

Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala Ala Leu Asn

135 140 145

tcc gtg cgg ctg ctc cag agc ctg ctg gtg ctg cgc cgc cgg ccc tgc 538

Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg Arg Pro Cys

150 155 160

tcc cgc gac ggc tcg ggg ctc ccc aca cct ggg gcc ttt gcc ttc cac 586

Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe Ala Phe His

165 170 175

acc gag ttc atc cac gtc ccc gtc ggc tgc acc tgc gtg ctg ccc cgt 634

Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Leu Pro Arg

180 185 190 195

tca gtg tga ccgccgaggc cgtggggccc ctagactgga cacgtgtgct 683

Ser Val *

ccccagaggg caccccctat ttatgtgtat ttattgttat ttatatgcct cccccaacac 743

tacccttggg gtctgggcat tccccgtgtc tggaggacag ccccccactg ttctcctcat 803

ctccagcctc agtagttggg ggtagaagga gctcagcacc tcttccagcc cttaaagctg 863

cagaaaaggt gtcacacggc tgcctgtacc ttggctccct gtcctgctcc cggcttccct 923

taccctatca ctggcctcag gcccccgcag gctgcctctt cccaacctcc ttggaagtac 983

ccctgtttct taaacaatta tttaagtgta cgtgtattat taaactgatg aacacatccc 1043

caaaa 1048

<210>17

<211>197

<212>PRT

<213>智人

<400>17

Met Thr Leu Leu Pro Gly Leu Leu Phe Leu Thr Trp Leu His Thr Cys

1 5 10 15

Leu Ala His His Asp Pro Ser Leu Arg Gly His Pro His Ser His Gly

20 25 30

Thr Pro His Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Pro Leu Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Pro His Leu Leu Ala Arg Gly Ala Lys Trp Gly Gln Ala Leu Pro Val

50 55 60

Ala Leu Val Ser Ser Leu Glu Ala Ala Ser His Arg Gly Arg His Glu

65 70 75 80

Arg Pro Ser Ala Thr Thr Gln Cys Pro Val Leu Arg Pro Glu Glu Val

85 90 95

Leu Glu Ala Asp Thr His Gln Arg Ser Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Arg

100 105 110

Val Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro Gln Lys Leu Ala Phe Ala Glu

115 120 125

Cys Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asp Ala Arg Thr Gly Arg Glu Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gln Ser Leu Leu Val Leu Arg Arg

145 150 155 160

Arg Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly Leu Pro Thr Pro Gly Ala Phe

165 170 175

Ala Phe His Thr Glu Phe Ile His Val Pro Val Gly Cys Thr Cys Val

180 185 190

Leu Pro Arg Ser Val

195

<210>18

<211>609

<212>DNA

<213>小鼠

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(609)

<400>18

atg gcc acc gtc acc gtc act gtg atg agt ctc ctg ctt cta ggc tgg 48

Met Ala Thr Val Thr Val Thr Val Met Ser Leu Leu Leu Leu Gly Trp

1 5 10 15

ttg cct act ggg atg acc cac caa gat ccc ccg tcc tgg ggg aaa ccc 96

Leu Pro Thr Gly Met Thr His Gln Asp Pro Pro Ser Trp Gly Lys Pro

20 25 30

cga agc cat agg acc ctg cgg tgc tac tct gct gag gaa tta tct cac 144

Arg Ser His Arg Thr Leu Arg Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Ser His

35 40 45

ggc cag gct cct cca cac ctg cta act cga agt gcc agg tgg gag cag 192

Gly Gln Ala Pro Pro His Leu Leu Thr Arg Ser Ala Arg Trp Glu Gln

50 55 60

gcc ctc cct gtg gcc ctg gtg gcc agt ttg gag gcc acg ggc cac agg 240

Ala Leu Pro Val Ala Leu Val Ala Ser Leu Glu Ala Thr Gly His Arg

65 70 75 80

aga cag cat gaa gga cct cta gct gga aca cag tgc ccc gtg ctg cgg 288

Arg Gln His Glu Gly Pro Leu Ala Gly Thr Gln Cys Pro Val Leu Arg

85 90 95

ccg gag gag gtg ctg gaa gct gac act cac gag cgc tcc atc tca cca 336

Pro Glu Glu Val Leu Glu Ala Asp Thr His Glu Arg Ser Ile Ser Pro

100 105 110

tgg aga tat cgc atc gac aca gat gag aac cgc tac cca cag aag ctg 384

Trp Arg Tyr Arg Ile Asp Thr Asp Glu Asn Arg Tyr Pro Gln Lys Leu

115 120 125

gcg gtg gca gaa tgc ttg tgt cgt gga tgc atc aac gcc aag aca ggc 432

Ala Val Ala Glu Cys Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asn Ala Lys Thr Gly

130 135 140

cgt gag aca gct gcc ctg aac tcg gtg cag ctg ctg cag agc ctg ctg 480

Arg Glu Thr Ala Ala Leu Asn Ser Val Gln Leu Leu Gln Ser Leu Leu

145 150 155 160

gta cta cgg cga cag ccc tgc tcc cga gac ggc acg gcg gac cct aca 528

Val Leu Arg Arg Gln Pro Cys Ser Arg Asp Gly Thr Ala Asp Pro Thr

165 170 175

cca gga tcc ttc gcc ttc cac acc gag ttc atc cgc gtg cct gtc ggc 576

Pro Gly Ser Phe Ala Phe His Thr Glu Phe Ile Arg Val Pro Val Gly

180 185 190

tgc acc tgc gtt ctt cec agg tct aca cag tga 609

Cys Thr Cys Val Leu Pro Arg Ser Thr Gln *

195 200

<210>19

<211>202

<212>PRT

<213>小鼠

<400>19

Met Ala Thr Val Thr Val Thr Val Met Ser Leu Leu Leu Leu Gly Trp

1 5 10 15

Leu Pro Thr Gly Met Thr His Gln Asp Pro Pro Ser Trp Gly Lys Pro

20 25 30

Arg Ser His Arg Thr Leu Arg Cys Tyr Ser Ala Glu Glu Leu Ser His

35 40 45

Gly Gln Ala Pro Pro His Leu Leu Thr Arg Ser Ala Arg Trp Glu Gln

50 55 60

Ala Leu Pro Val Ala Leu Val Ala Ser Leu Glu Ala Thr Gly His Arg

65 70 75 80

Arg Gln His Glu Gly Pro Leu Ala Gly Thr Gln Cys Pro Val Leu Arg

85 90 95

Pro Glu Glu Val Leu Glu Ala Asp Thr His Glu Arg Ser Ile Ser Pro

100 105 110

Trp Arg Tyr Arg Ile Asp Thr Asp Glu Asn Arg Tyr Pro Gln Lys Leu

115 120 125

Ala Val Ala Glu Cys Leu Cys Arg Gly Cys Ile Asn Ala Lys Thr Gly

130 135 140

Arg Glu Thr Ala Ala Leu Asn Ser Val Gln Leu Leu Gln Ser Leu Leu

145 150 155 160

Val Leu Arg Arg Gln Pro Cys Ser Arg Asp Gly Thr Ala Asp Pro Thr

165 170 175

Pro Gly Ser Phe Ala Phe His Thr Glu Phe Ile Arg Val Pro Val Gly

180 185 190

Cys Thr Cys Val Leu Pro Arg Ser Thr Gln

195 200

<210>20

<211>1884

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1884)

<400>20

atg ggg agc tcc aga ctg gca gcc ctg ctc ctg cct ctc ctc ctc ata 48

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

gtc atc gac ctc tct gac tct gct ggg att ggc ttt cgc cac ctg ccc 96

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

cac tgg aac acc cgc tgt cct ctg gcc tcc cac acg gat gac agt ttc 144

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe

35 40 45

act ggt ctt caa cgg ggc crc ttc cac ctc ctg gtg cag aaa tcc aaa 192

Thr Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys

50 55 60

aag tct tcc aca ttc aag ttc tat agg aga cac aag atg cca gca cct 240

Lys Ser Set Thr Phe Lys Phe Tyr Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro

65 70 75 80

gct cag agg aag ctg ctg cct cgt cgt cac ctg tct gag aag agc cat 288

Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His

85 90 95

cac att tcc atc ccc tcc cca gac atc tcc cac aag gga ctt cgc tct 336

His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser His Lys 6ly Leu Arg Ser

100 105 110

aaa agg acc caa cct tcg gat cca gag aca tgg gaa agt ctt ccc aga 384

Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg

115 120 125

ttg gac tca caa agg cat gga gga ccc gag ttc tcc ttt gat ttg ctg 432

Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

cct gag gcc cgg gct att cgg gtg acc ata tct tca ggc cct gag gtc 480

Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val

145 150 155 160

agc gtg cgt ctt tgt cac cag tgg gca ctg gag tgt gaa gag ctg agc 528

Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser

165 170 175

agt ccc tat gat gtc cag aaa att gtg tct ggg ggc cac act gta gag 576

Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu

180 185 190

ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc tgt ctg tgc ata gag gca tcc tac 624

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

195 200 205

ctg caa gag gac act gtg agg cgc aaa aaa tgt ccc ttc cag agc tgg 672

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

210 215 220

cca gaa gcc tat ggc tcg gac ttc tgg aag tca gtg cac ttc act gac 720

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

225 230 235 240

tac agc cag cac act cag atg gtc atg gcc ctg aca ctc cgc tgc cca 768

Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

245 250 255

ctg aag ctg gaa gct gcc ctc tgc cag agg cac gac tgg cat acc ctt 816

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

260 265 270

tgc aaa gac ctc ccg aat gcc acg gct cga gag tca gat ggg tgg tat 864

Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

275 280 285

gtt ttg gag aag gtg gac ctg cac ccc cag ctc tgc ttc aag ttc tct 912

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

ttt gga aac agc agc cat gtt gaa tgc ccc cac cag act ggg tct ctc 960

Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

305 310 315 320

aca tcc tgg aat gta agc atg gat acc caa gcc cag cag ctg att ctt 1008

Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu

325 330 335

cac ttc tcc tca aga atg cat gcc acc ttc agt gct gcc tgg agc ctc 1056

His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu

340 345 350

cca ggc ttg ggg cag gac act ttg gtg ccc ccc gtg tac act gtc agc 1104

Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

355 360 365

cag gcc cgg ggc tca agc cca gtg tca cta gac ctc atc att ccc ttc 1152

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

ctg agg cca ggg tgc tgt gtc ctg gtg tgg cgg tca gat gtc cag ttt 1200

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

385 390 395 400

gcc tgg aag cac ctc ttg tgt cca gat gtc tct tac aga cac ctg ggg 1248

Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr Arg His Leu Gly

405 410 415

ctc ttg atc ctg gca ctg ctg gcc ctc ctc acc cta ctg ggt gtt gtt 1296

Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu Leu Thr Leu Leu Gly Val Val

420 425 430

ctg gcc ctc acc tgc cgg cgc cca cag tca ggc ccg ggc cca gcg cgg 1344

Leu Ala Leu Thr Cys Arg Arg Pro Gln Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg

435 440 445

cca gtg ctc ctc ctg cac gcg gcg gac tcg gag gcg cag cgg cgc ctg 1392

Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu

450 455 460

gtg gga gcg ctg gct gaa ctg cta cgg gca gcg ctg ggc ggc ggg cgc 1440

Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg

465 470 475 480

gac gtg atc gtg gac ctg tgg gag ggg agg cac gtg gcg cgc gtg ggc 1488

Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Arg His Val Ala Arg Val Gly

485 490 495

ccg ctg ccg tgg ctc tgg gcg gcg cgg acg cgc gta gcg cgg gag cag 1536

Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Thr Arg Val Ala Arg Glu Gln

500 505 510

ggc act gtg ctg ctg ctg tgg agc ggc gcc gac ctt cgc ccg gtc agc 1584

Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Ser Gly Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser

515 520 525

ggc ccc gac ccc cgc gcc gcg ccc ctg ctc gcc ctg ctc cac gct gcc 1632

Gly Pro Asp Pro Arg Ala Ala Pro Leu Leu Ala Leu Leu His Ala Ala

530 535 540

ccg cgc ccg ctg ctg ctg ctc gct tac ttc agt cgc ctc tgc gcc aag 1680

Pro Arg Pro Leu Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys

545 550 555 560

ggc gac atc ccc ccg ccg ctg cgc gcc ctg ccg cgc tac cgc ctg ctg 1728

Gly Asp Ile Pro Pro Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu

565 570 575

cgc gac ctg ccg cgt ctg ctg cgg gcg ctg gac gcg cgg cct ttc gca 1776

Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala

580 585 590

gag gcc acc agc tgg ggc cgc ctt ggg gcg cgg cag cgc agg cag agc 1824

Glu Ala Thr Ser Trp Gly Arg Leu Gly Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser

595 600 605

cgc cta gag ctg tgc agc cgg ctt gaa cga gag gcc gcc cga ctt gca 1872

Arg Leu Glu Leu Cys Ser Arg Leu Glu Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala

610 615 620

gac cta ggt tga 1884

Asp Leu Gly *

625

<210>21

<211>627

<212>PRT

<213>智人

<400>21

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

His Trp Ash Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe

35 40 45

Thr Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys

50 55 60

Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro

65 70 75 80

Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His

85 90 95

His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser His Lys Gly Leu Arg Ser

100 105 110

Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg

115 120 125

Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val

145 150 155 160

Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser

165 170 175

Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu

180 185 190

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

195 200 205

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

210 215 220

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

225 230 235 240

Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

245 250 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

260 265 270

Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

275 280 285

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

305 310 315 320

Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu

325 330 335

His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu

340 345 350

Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

355 360 365

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

385 390 395 400

Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr Arg His Leu Gly

405 410 415

Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu Leu Thr Leu Leu Gly Val Val

420 425 430

Leu Ala Leu Thr Cys Arg Arg Pro Gln Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg

435 440 445

Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu

450 455 460

Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg

465 470 475 480

Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Arg His Val Ala Arg Val Gly

485 490 495

Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Thr Arg Val Ala Arg Glu Gln

500 505 510

Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Ser Gly Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser

515 520 525

Gly Pro Asp Pro Arg Ala Ala Pro Leu Leu Ala Leu Leu His Ala Ala

530 535 540

Pro Arg Pro Leu Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys

545 550 555 560

Gly Asp Ile Pro Pro Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu

565 570 575

Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala

580 585 590

Glu Ala Thr Ser Trp Gly Arg Leu Gly Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser

595 600 605

Arg Leu Glu Leu Cys Ser Arg Leu Glu Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala

610 615 620

Asp Leu Gly

625

<210>22

<211>1650

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1266)

<400>22

atg ggg agc tcc aga ctg gca gcc ctg ctc ctg cct ctc ctc ctc ata 48

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

gtc atc gac ctc tct gac tct gct ggg att ggc ttt cgc cac ctg ccc 96

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

cac tgg aac acc cgc tgt cct ctg gcc tcc cac acg gat gac agt ttc 144

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe

35 40 45

act gga agt tct gcc tat atc cct tgc cgc acc tgg tgg gcc ctc ttc 192

Thr Gly Ser Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu Phe

50 55 60

tcc aca aag cct tgg tgt gtg cga gtc tgg cac tgt tcc cgc tgt ttg 240

Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys Leu

65 70 75 80

tgc cag cat ctg ctg tca ggt ggc tca ggt ctt cas cgg ggc ctc ttc 288

Cys Gln His Leu Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe

85 90 95

cac ctc ctg gtg cag aaa tcc aaa aag tct tcc aca ttc aag ttc tat 336

His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr

100 105 110

agg aga cac aag atg cca gca cct gct cag agg aag ctg ctg cct cgt 384

Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg

115 120 125

cgt cac ctg tct gag aag agc cat cac att tcc atc ccc tcc cca gac 432

Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp

130 135 140

atc tcc cac aag gga ctt cgc tct aaa agg acc caa cct tcg gat cca 480

Ile Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro

145 150 155 160

gag aca tgg gaa agt ctt ccc aga ttg gac tca caa agg cat gga gga 528

Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly

165 170 175

ccc gag ttc tcc ttt gat ttg ctg cct gag gcc cgg gct att cgg gtg 576

Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val

180 185 190

acc ata tct tca ggc cct gag gtc agc gtg cgt ctt tgt cac cag tgg 624

Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp

195 200 205

gca ctg gag tgt gaa gag ctg agc agt ccc tat gat gtc cag aaa att 672

Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile

210 215 220

gtg tct ggg ggc cac act gta gag ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc 720

Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

225 230 235 240

tgt ctg tgc ata gag gca tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg cgc 768

Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

245 250 255

aaa aaa tgt ccc ttc cag agc tgg cca gaa gcc tat ggc tcg gac ttc 816

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

260 265 270

tgg aag tca gtg cac ttc act gac tac agc cag cac act cag atg gtc 864

Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val

275 280 285

atg gcc ctg aca ctc cgc tgc cca ctg aag ctg gaa gct gcc ctc tgc 912

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys

290 295 300

cag agg cac gac tgg cat acc ctt tgc aaa gac ctc ccg aat gcc acg 960

Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr

305 310 315 320

gct cga gag tca gat ggg tgg tat gtt ttg gag aag gtg gac ctg cac 1008

Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His

325 330 335

ccc cag ctc tgc ttc aag ttc tct ttt gga aac agc agc cat gtt gaa 1056

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu

340 345 350

tgc ccc cac cag act ggg tct ctc aca tcc tgg aat gta agc atg gat 1104

Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp

355 360 365

acc caa gcc cag cag ctg att ctt cac ttc tcc tca aga atg cat gcc 1152

Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala

370 375 380

acc ttc agt gct gcc tgg agc ctc cca ggc ttg ggg cag gac act ttg 1200

Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu

385 390 395 400

gtg ccc ccc gtg tac act gtc agc cag ggc ttg gca cag agg aca cac 1248

Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Gly Leu Ala Gln Arg Thr His

405 410 415

tca gag tct gtc tgt tga caaatacctg actgcagcag gagctgagct 1296

Ser Glu Ser Val Cys *

420

ctgggaaaga tcagtgggag ccggagtgac tggggaagcc ttcttgtcag aggcccgggg 1356

ctcaagccca gtgtcactag acctcatcat tcccttcctg aggccagggt gctgtgtcct 1416

ggtgtggcgg tcagatgtcc agtttgcctg gaagcacctc ttgtgtccag atgtctctta 1476

cagacacctg gggctcttga tcctggcact gctggccctc ctcaccctac tgggtgttgt 1536

tctggccctc acctgccggc gcccacagtc aggcccgggc ccagcgcggc cagtgctcct 1596

cctgcacgcg gcggactcgg aggcgcagcg gcgcctggtg ggagcgctgg ctga 1650

<210>23

<211>421

<212>PRT

<213>智人

<400>23

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe

35 40 45

Thr Gly Ser Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu Phe

50 55 60

Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys Leu

65 70 75 80

Cys Gln His Leu Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe

85 90 95

His Leu Leu Val Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr

100 105 110

Arg Arg His Lys Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg

115 120 125

Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp

130 135 140

Ile Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro

145 150 155 160

Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly

165 170 175

Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val

180 185 190

Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp

195 200 205

Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile

210 215 220

Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

225 230 235 240

Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

245 250 255

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

260 265 270

Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val

275 280 285

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys

290 295 300

Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr

305 310 315 320

Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His

325 330 335

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu

340 345 350

Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp

355 360 365

Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala

370 375 380

Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu

385 390 395 400

Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Gly Leu Ala Gln Arg Thr His

405 410 415

Ser Glu Ser Val Cys

420

<210>24

<211>320

<212>PRT

<213>智人

<400>24

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu

1 5 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser

20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu

35 40 45

Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His

50 55 60

Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu

65 70 75 80

His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile

85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala

100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg

115 120 125

Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe

130 135 140

Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr

145 150 155 160

Val His His Leu Pro Lys Pro IIe Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln

165 170 175

Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val

180 185 190

Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr

195 200 205

Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp

210 215 220

Asn Glu Ser Thr His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro His Met

225 230 235 240

Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala Pro Arg

245 250 255

Pro Glu Glu Phe His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn

260 265 270

Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe Ser

275 280 285

Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro

290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp

305 310 315 320

<210>25

<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>肽连接子

<400>25

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210>26

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>26

aggccctgcc acccaccttc 20

<210>27

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>27

cgaggcaccc caaggatttc ag 22

<210>28

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>28

tctctgactc tgctgggatt gg 22

<210>29

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>29

atgaggaccg ctatccacag aagc 24

<210>30

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>30

ggacgtggat gaactcggtg tgg 23

<210>31

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>31

gcacacctgg cggcaccatg ac 22

<210>32

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>32

ctgtcctcca gacacgggga atg 23

<210>33

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>33

cagccagaat tcacctgtta cagcactg 28

<210>34

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>34

tacacagaat tcgaaggtgt cctcctctg 29

<210>35

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>35

cacacaggcc ggccaccatg acgctcctcc ccggcctcc 39

<210>36

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>36

cacacaggcg cgccttcaca ctgaacgggg cagcacgc 38

<210>37

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>37

cacacaggcc ggccaccatg acgctcctcc ccggcctcc 39

<210>38

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>38

cacacaggcg cgccttcaca ctgaacgggg cagcacgc 38

<210>39

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>39

gcctcccaca cgaggaagct gctgc 25

<210>40

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>40

gcagcagctt cctcgtgtgg gaggc 25

<210>41

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>41

tggactcaca aaggacccga gttct 25

<210>42

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>42

gcctctgtta ttccagtctg gtggg 25

<210>43

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>43

ccccgttgaa gaccgtgtgg gaggc 25

<210>44

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>44

cccaccagac tggaataaca gaggc 25

<210>45

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>45

gcctcccaca cggtcttcaa cgggg 25

<210>46

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>46

agaactcggg tcctttgtga gtcca 25

<210>47

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>47

tgctgtgtcc tgctccatgc ttcac 25

<210>48

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>48

gtgaagcatg gagcaggaca cagca 25

<210>49

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>49

tctgactctg ctgggattgg ctttc 25

<210>50

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>50

gaaagccaat cccagcagag tcaga 25

<210>51

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>51

tgctgctgct gtggagcggc gccga 25

<210>52

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>52

tcggcgccgc tccacagcag cagca 25

<210>53

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>53

cgaggcaccc caaggatttc ag 22

<210>54

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>54

aggccctgcc acccaccttc 20

<210>55

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>55

tgcgcccgga tcctacagaa gc 22

<210>56

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>56

gcacctcggg cagcaaatca aag 23

<210>57

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>57

ctctccatcc ttatctttca tcaac 25

<210>58

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>58

ctctctgctg gctaaacaaa acac 24

<210>59

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>59

ctcatattgc tcaactgtgt gaaaag 26

<210>60

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>60

tagaagccac ctgaacacaa atctg 25

<210>61

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>61

atcttgcgtt gtatgttgaa aatcaatt 28

<210>62

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>62

ttctccacca ggtaaacaag tctac 25

<210>63

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>63

tcctgcctct cctcctcata gtca 24

<210>64

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>64

ccaggatcaa gagccccagg tgtc 24

<210>65

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>65

cgtacgggcc ggccaccatg gggagctcca gactggca 38

<210>66

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>66

tgacgaggcg cgcctcaacc taggtctgca agt 33

<210>67

<211>35

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>67

tttcgccacc tgccccactg gaacacccgc tgtcc 35

<210>68

<211>2095

<212>DNA

<213>小鼠

<220>

<221>CDS

<222>(89)...(1864)

<400>68

gtgcttctca cagctccagg gccaggccct gctgccctct tgcagacagg aaagacatgg 60

tctctgcgcc cggatcctac agaagctc atg ggg agc ccc aga crg gca gcc 112

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala

1 5

ttg ctc ctg tct ctc ccg cta ctg ctc atc ggc ctc gct gtg tct gct 160

Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala

10 15 20

cgg gtt gcc tgc ccc tgc ctg cgg agt tgg acc agc cac tgt ctc ctg 208

Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg Ser Trp Thr Ser His Cys Leu Leu

25 30 35 40

gcc tac cgt gtg gat aaa cgt ttt gct ggc ctt cag tgg ggc tgg ttc 256

Ala Tyr Arg Val Asp Lys Arg Phe Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe

45 50 55

cct ctc ttg gtg agg aaa tct aaa agt cct cct aaa ttt gaa gac tat 304

Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr

60 65 70

tgg agg cac agg aca cca gca tcc ttc cag agg aag ctg cta ggc agc 352

Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser

75 80 85

cct tcc ctg tct gag gaa agc cat cga att tcc atc ccc tcc tca gcc 400

Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala

90 95 100

atc tcc cac aga ggc caa cgc acc aaa agg gcc cag cct tca gct gca 448

Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala

105 110 115 120

gaa gga aga gaa cat ctc cct gaa gca ggg tca caa aag tgt gga gga 496

Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly

125 130 135

cct gaa ttc tcc ttt gat ttg ctg ccc gag gtg cag gct gtt cgg gtg 544

Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Val Gln Ala Val Arg Val

140 145 150

act att cct gca ggc ccc aag gcc agt gtg cgc ctt tgt tat cag tgg 592

Thr Ile Pro Ala Gly Pro Lys Ala Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp

155 160 165

gca ctg gaa tgt gaa gac ttg agt agc cct ttt gat acc cag aaa att 640

Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile

170 175 180

gtg tct gga ggc cac act gta gac ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc 688

Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

185 190 195 200

tgc atg tgc ata gag gcc tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg cgc 736

Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

205 210 215

aaa aag tgt ccc ttc cag agc tgg cct gaa gct tat ggc tca gac ttc 784

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

220 225 230

tgg cag tca ata cgc ttc act gac tac agc cag cac aat cag atg gtc 832

Trp Gln Ser Ile Arg Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Asn Gln Met Val

235 240 245

atg gct ctg aca ctc cgc tgc cca ctg aaa ctg gag gcc tcc ctc tgc 880

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys

250 255 260

tgg agg cag gac cca ctc aca ccc tgc gaa acc ctt ccc aac gcc aca 928

Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala Thr

265 270 275 280

gca cag gag tca gaa gga tgg tat atc ctg gag aat gtg gac ttg cac 976

Ala Gln Glu Ser Glu Gly Trp Tyr Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His

285 290 295

ccc cag ctc tgc ttt aag ttc tca ttt gaa aac agc agc cac gtt gaa 1024

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu

300 305 310

tgt ccc cac cag agt ggc tct ctc cca tcc tgg act gtg agc atg gat 1072

Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp

315 320 325

acc cag gcc cag cag ctg acg ctt cac ttt tct tcg agg aca tat gcc 1120

Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr Ala

330 335 340

acc ttc agt gct gcc tgg agt gac cca ggt ttg ggg ccg gat acc ccc 1168

Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Asp Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr Pro

345 350 355 360

atg cct cct gtg tac agc atc agc cag acc cag ggc tca gtc cca gtg 1216

Met Pro Pro Val Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro Val

365 370 375

acg cta gac ctc atc atc ccc ttc ctg agg cag gag aat tgc atc ctg 1264

Thr Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu

380 385 390

gtg tgg agg tca gat gtc cat ttt gcc tgg aag cac gtc ttg tgt cct 1312

Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro

395 400 405

gat gcg gac tca gag gca cag cga cgc ctg gtg gga gct ttg gcc gaa 1360

Asp Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu

410 415 420

ctg ctg cgg acg gcg ctg gga ggt gga cgc gac gtg atc gtg gat ctc 1408

Leu Leu Arg Thr Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu

425 430 435 440

tgg gaa ggg acg cac gta gca cgc att gga cca ctg ccg tgg ctt tgg 1456

Trp Glu Gly Thr His Val Ala Arg Ile Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp

445 450 455

gca gcg cgg gag cgc gtg gcg cgg gag cag ggc aca gtg ctg ctc ctg 1504

Ala Ala Arg Glu Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu

460 465 470

tgg aac tgt gcg ggt ccc agc acc gcc tgc agc ggt gac ccg cag gct 1552

Trp Asn Cys Ala Gly Pro Ser Thr Ala Cys Ser Gly Asp Pro Gln Ala

475 480 485

gcg tcc ctt cgc acc ttg ttg tgc gct gct cca cgt ccg ctg ctg ctc 1600

Ala Ser Leu Arg Thr Leu Leu Cys Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu

490 495 500

gcc tac ttc agt cgc ctc tgc gcc aaa ggt gac atc ccc cgg ccg ctg 1648

Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Arg Pro Leu

505 510 515 520

cgc gct ctg cca cgc tac cgc ctg ctt cgt gac ctg ccg cgc ctg ctg 1696

Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu

525 530 535

aga gca ctg gat gct cag cct gcc acc cta gcc tcc agc tgg agt cac 1744

Arg Ala Leu Asp Ala Gln Pro Ala Thr Leu Ala Ser Ser Trp Ser His

540 545 550

ctt ggg gct aag cgg tgc ttg aaa aac cgt ctg gag cag tgt cac ctg 1792

Leu Gly Ala Lys Arg Cys Leu Lys Asn Arg Leu Glu Gln Cys His Leu

555 560 565

ctg gaa ctt gag gct gcc aaa gat gac tac caa ggc tca acc aat agt 1840

Leu Glu Leu Glu Ala Ala Lys Asp Asp Tyr Gln Gly Ser Thr Asn Ser

570 575 580

ccc tgt ggt ttc agc tgt ctg tag cctcagcctg tgtagcaaca gcaggaactc 1894

Pro Cys Gly Phe Ser Cys Leu *

585 590

cagaatgagg cctcacacat gtactctttg ggggtgcttc ttgtccccca aaccgtaaga 1954

ctcaccttaa gtcccacact tgaccaacct ccctcacatt tgctccctct tagagttcct 2014

gagaggaact tgggctttcc tgataggtcc tcagcccttt ctgagaagga gggacgattt 2074

ttccatttct tttcaaaact g 2095

<210>69

<211>21

<212>PRT

<213>小鼠

<400>69

Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly

1 5 10 15

Gly Ala Gly Thr Thr

20

<210>70

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>70

cctgcccctg cctgcggagt t 21

<210>71

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>71

gttgctacac aggctgaggc taca 24

<210>72

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>72

ctaccaaggc tcaaccaata gtccctgtgg tttc 34

<210>73

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>73

tcactgtgat gagtctcctg cttctag 27

<210>74

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>74

gtgtcgatgc gatatctcca tggtgaga 28

<210>75

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>75

gagatatcgc atcgacacag atgagaacc 29

<210>76

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>76

tcactgtgta gacctgggaa ga 22

<210>77

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>77

gccaccatgg ccaccgtcac cgtcactgtg atgagtctcc tgctt 45

<210>78

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的HIS tag

<400>78

ggctcaggat ctggtggcgg ccatcaccac catcatcact aaatctaga 49

<210>79

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>79

gaagaacgtc tctcatgggg agctccagac tggcagc 37

<210>80

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>80

gaagaacgtc tctagccgtg tctgtaagag acatccggac 40

<210>81

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>81

ctgtgaggcg caaaaagtgt c 21

<210>82

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>82

gcaagtccacat tctccagg at 22

<210>83

<211>1287

<212>DNA

<213>智人

<400>83

gctgggattg gctttcgcca cctgccccac tggaacaccc gctgtcctct ggcctcccac 60

acggatgaca gtttcactgg aagttctgcc tatatccctt gccgcacctg gtgggccctc 120

ttctccacaa agccttggtg tgtgcgagtc tggcactgtt cccgctgttt gtgccagcat 180

ctgctgtcag gtggctcagg tcttcaacgg ggcctcttcc acctcctggt gcagaaatcc 240

aaaaagtctt ccacattcaa gttctatagg agacacaaga tgccagcacc tgctcagagg 300

aagctgctgc ctcgtcgtca cctgtctgag aagagccatc acatttccat cccctcccca 360

gacatctccc acaagggact tcgctctaaa aggacccaac cttcggatcc agagacatgg 420

gaaagtcttc ccagattgga ctcacaaagg catggaggac ccgagttctc ctttgatttg 480

ctgcctgagg cccgggctat tcgggtgacc atatcttcag gccctgaggt cagcgtgcgt 540

ctttgtcacc agtgggcact ggagtgtgaa gagctgagca gtccctatga tgtccagaaa 600

attgtgtctg ggggccacac tgtagagctg ccttatgaat tccttctgcc ctgtctgtgc 660

atagaggcat cctacctgca agaggacact gtgaggcgca aaaaatgtcc cttccagagc 720

tggccagaag cctatggctc ggacttctgg aagtcagtgc acttcactga ctacagccag 780

cacactcaga tggtcatggc cctgacactc cgctgcccac tgaagctgga agctgccctc 840

tgccagaggc acgactggca taccctttgc aaagacctcc cgaatgccac ggctcgagag 900

tcagatgggt ggtatgtttt ggagaaggtg gacctgcacc cccagctctg cttcaagttc 960

tcttttggaa acagcagcca tgttgaatgc ccccaccaga ctgggtctct cacatcctgg 1020

aatgtaagca tggataccca agcccagcag ctgattcttc acttctcctc aagaatgcat 1080

gccaccttca gtgctgcctg gagcctccca ggcttggggc aggacacttt ggtgcccccc 1140

gtgtacactg tcagccaggc ccggggctca agcccagtgt cactagacct catcattccc 1200

ttcctgaggc cagggtgctg tgtcctggtg tggcggtcag atgtccagtt tgcctggaag 1260

cacctcttgt gtccagatgt ctcttac 1287

<210>84

<211>429

<212>PRT

<213>智人

<400>84

Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro His Trp Ash Thr Arg Cys Pro

1 5 10 15

Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe Thr Gly Set Ser Ala Tyr Ile

20 25 30

Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu Phe Ser Thr Lys Pro Trp Cys Val

35 40 45

Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys Leu Cys Gln His Leu Leu Ser Gly

50 55 60

Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe His Leu Leu Val Gln Lys Ser

65 70 75 80

Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr Arg Arg His Lys Met Pro Ala

85 90 95

Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser

100 105 110

His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser His Lys Gly Leu Arg

115 120 125

Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro

130 135 140

Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu

145 150 155 160

Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu

165 170 175

Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu

180 185 190

Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val

195 200 205

Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser

210 215 220

Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser

225 230 235 240

Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr

245 250 255

Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys

260 265 270

Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr

275 280 285

Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp

290 295 300

Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe

305 310 315 320

Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser

325 330 335

Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile

340 345 350

Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser

355 360 365

Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val

370 375 380

Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro

385 390 395 400

Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln

405 410 415

Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr

420 425

<210>85

<211>69

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>85

gtttcgctca gccaggaaat ccatgccgag ttgagacgct tccgtagagc tgggattggc 60

tttcgccac 69

<210>86

<211>78

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>86

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattattc catgggcatg tattcttcgt 60

aagagacatc tggacaca 78

<210>87

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的HIS tag

<400>87

Gly Ser Gly Gly His His His His His His

1 5 10

<210>88

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的FLAG tag

<400>88

Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5 10

<210>89

<211>87

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>89

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattagtg atggtgatgg tgatgtccac 60

cagatccgta agagacatct ggacaca 87

<210>90

<211>86

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>90

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattacta tcatcatcat ccttataatc 60

ggatccgtaa gagacatctg gacaca 86

<210>91

<211>1053

<212>DNA

<213>智人

<400>91

gctgggattg gctttcgcca cctgccccac tggaacaccc gctgtcctct ggcctcccac 60

acgaggaagc tgctgcctcg tcgtcacctg tctgagaaga gccatcacat ttccatcccc 120

tccccagaca tctcccacaa gggacttcgc tctaaaagga cccaaccttc ggatccagag 180

acatgggaaa gtcttcccag attggactca caaaggcatg gaggacccga gttctccttt 240

gatttgctgc ctgaggcccg ggctattcgg gtgaccatat cttcaggccc tgaggtcagc 300

gtgcgtcttt gtcaccagtg ggcactggag tgtgaagagc tgagcagtcc ctatgatgtc 360

cagaaaattg tgtctggggg ccacactgta gagctgcctt atgaattcct tctgccctgt 420

ctgtgcatag aggcatccta cctgcaagag gacactgtga ggcgcaaaaa atgtcccttc 480

cagagctggc cagaagccta tggctcggac ttctggaagt cagtgcactt cactgactac 540

agccagcaca ctcagatggt catggccctg acactccgct gcccactgaa gctggaagct 600

gccctctgcc agaggcacga ctggcatacc ctttgcaaag acctcccgaa tgccacagct 660

cgagagtcag atgggtggta tgttttggag aaggtggacc tgcaccccca gctctgcttc 720

aagttctctt ttggaaacag cagccatgtt gaatgccccc accagactgg gtctctcaca 780

tcctggaatg taagcatgga tacccaagcc cagcagctga ttcttcactt ctcctcaaga 840

atgcatgcca ccttcagtgc tgcctggagc ctcccaggct tggggcagga cactttggtg 900

ccccccgtgt acactgtcag ccaggcccgg ggctcaagcc cagtgtcact agacctcatc 960

attcccttcc tgaggccagg gtgctgtgtc ctggtgtggc ggtcagatgt ccagtttgcc 1020

tggaagcacc tcttgtgtcc agatgtctct tac 1053

<210>92

<211>351

<212>PRT

<213>智人

<400>92

Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro His Trp Asn Thr Arg Cys Pro

1 5 10 15

Leu Ala Ser His Thr Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser Glu

20 25 30

Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser His Lys Gly

35 40 45

Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu Ser

50 55 60

Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe

65 70 75 80

Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly

85 90 95

Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu

100 105 110

Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His

115 120 125

Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu

130 135 140

Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe

145 150 155 160

Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His

165 170 175

Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu

180 185 190

Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp

195 200 205

His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp

210 215 220

Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe

225 230 235 240

Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr

245 250 255

Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln

260 265 270

Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala

275 280 285

Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr

290 295 300

Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile

305 310 315 320

Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp

325 330 335

Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr

340 345 350

<210>93

<211>69

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>93

gtttcgctca gccaggaaat ccatgccgag ttgagacgct tccgtagagc tgggattggc 60

tttcgccac 69

<210>94

<211>78

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>94

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattattc catgggcatg tattcttcgt 60

aagagacatc tggacaca 78

<210>95

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的His tag

<400>95

Gly Ser Gly Gly His His His His His His

1 5 10

<210>96

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的FLAG tag

<400>96

Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5 10

<210>97

<211>87

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>97

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattagtg atggtgatgg tgatgtccac 60

cagatccgta agagacatct ggacaca 87

<210>98

<211>87

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>98

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattactt atcatcatca tccttataat 60

cggatccgta agagacatct ggacaca 87

<210>99

<211>2145

<212>DNA

<213>智人

<400>99

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60

tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagctgg gattggcttt 120

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tggtgtgtgc gagtctggca ctgttcccgc tgtttgtgcc agcatctgct gtcaggtggc 300

tcaggtcttc aacggggcct cttccacctc ctggtgcaga aatccaaaaa gtcttccaca 360

ttcaagttct ataggagaca caagatgcca gcacctgctc agaggaagct gctgcctcgt 420

cgtcacctgt ctgagaagag ccatcacatt tccatcccct ccccagacat ctcccacaag 480

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ttggactcac aaaggcatgg aggacccgag ttctcctttg atttgctgcc tgaggcccgg 600

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cacactgtag agctgcctta tgaattcctt ctgccctgtc tgtgcataga ggcatcctac 780

ctgcaagagg acactgtgag gcgcaaaaaa tgtcccttcc agagctggcc agaagcctat 840

ggctcggact tctggaagtc agtgcacttc actgactaca gccagcacac tcagatggtc 900

atggccctga cactccgctg cccactgaag ctggaagctg ccctctgcca gaggcacgac 960

tggcataccc tttgcaaaga cctcccgaat gccacggctc gagagtcaga tgggtggtat 1020

gttttggaga aggtggacct gcacccccag ctctgcttca agttctcttt tggaaacagc 1080

agccatgttg aatgccccca ccagactggg tctctcacat cctggaatgt aagcatggat 1140

acccaagccc agcagctgat tcttcacttc tcctcaagaa tgcatgccac cttcagtgct 1200

gcctggagcc tcccaggctt ggggcaggac actttggtgc cccccgtgta cactgtcagc 1260

caggcccggg gctcaagccc agtgtcacta gacctcatca ttcccttcct gaggccaggg 1320

tgctgtgtcc tggtgtggcg gtcagatgtc cagtttgcct ggaagcacct cttgtgtcca 1380

gatgtctctt acgggggttc gggtggctca ggcggaggat ccggatctga tgaagttgat 1440

ggatcagagc ccaaatcttc agacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 1500

ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 1560

tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 1620

aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 1680

gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1740

ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1800

aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1860

tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1920

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1980

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 2040

aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 2100

aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aataa 2145

<210>100

<211>714

<212>PRT

<213>智人

<400>100

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro His Trp Asn Thr

35 40 45

Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Asp Asp Ser Phe Thr Gly Ser Ser

50 55 60

Ala Tyr Ile Pro Cys Arg Thr Trp Trp Ala Leu Phe Ser Thr Lys Pro

65 70 75 80

Trp Cys Val Arg Val Trp His Cys Ser Arg Cys Leu Cys Gln His Leu

85 90 95

Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gln Arg Gly Leu Phe His Leu Leu Val

100 105 110

Gln Lts Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr Arg Arg His Lys

115 120 125

Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser

130 135 140

Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser His Lys

145 150 155 160

Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu

165 170 175

Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser

180 185 190

Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser

195 200 205

Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys

210 215 220

Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly

225 230 235 240

His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile

245 250 255

Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro

260 265 270

Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val

275 280 285

His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr

290 295 300

Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp

305 310 315 320

Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser

325 330 335

Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys

340 345 350

Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln

355 360 365

Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln

370 375 380

Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala

385 390 395 400

Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val

405 410 415

Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu

420 425 430

Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser

435 440 445

Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr

450 455 460

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Asp Glu Val Asp

465 470 475 480

Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

485 490 495

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

500 505 510

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

515 520 525

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

530 535 540

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

545 550 555 560

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

565 570 575

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

580 585 590

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

595 600 605

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

610 615 620

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

625 630 635 640

Pro Ser Asp IIe Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

645 650 655

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

660 665 670

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

675 680 685

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ash His Tyr Thr

690 695 700

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

705 710

<210>101

<211>1911

<212>DNA

<213>智人

<400>101

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60

tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagctgg gattggcttt 120

cgccacctgc cccactggaa cacccgctgt cctctggcct cccacacgag gaagctgctg 180

cctcgtcgtc acctgtctga gaagagccat cacatttcca tcccctcccc agacatctcc 240

cacaagggac ttcgctctaa aaggacccaa ccttcggatc cagagacatg ggaaagtctt 300

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gcccgggcta ttcgggtgac catatcttca ggccctgagg tcagcgtgcg tctttgtcac 420

cagtgggcac tggagtgtga agagctgagc agtccctatg atgtccagaa aattgtgtct 480

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tcctacctgc aagaggacac tgtgaggcgc aaaaaatgtc ccttccagag ctggccagaa 600

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atggtcatgg ccctgacact ccgctgccca ctgaagctgg aagctgccct ctgccagagg 720

cacgactggc ataccctttg caaagacctc ccgaatgcca cagctcgaga gtcagatggg 780

tggtatgttt tggagaaggt ggacctgcac ccccagctct gcttcaagtt ctcttttgga 840

aacagcagcc atgttgaatg cccccaccag actgggtctc tcacatcctg gaatgtaagc 900

atggataccc aagcccagca gctgattctt cacttctcct caagaatgca tgccaccttc 960

agtgctgcct ggagcctccc aggcttgggg caggacactt tggtgccccc cgtgtacact 1020

gtcagccagg cccggggctc aagcccagtg tcactagacc tcatcattcc cttcctgagg 1080

ccagggtgct gtgtcctggt gtggcggtca gatgtccagt ttgcctggaa gcacctcttg 1140

tgtccagatg tctcttacgg gggttcgggt ggctcaggcg gaggatccgg atctgatgaa 1200

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gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 1440

cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1500

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ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1740

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gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1860

ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaata a 1911

<210>102

<211>636

<212>PRT

<213>智人

<400>102

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro His Trp Asn Thr

35 40 45

Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His

50 55 60

Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile Ser

65 70 75 80

His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr

85 90 95

Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile

115 120 125

Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu

130 135 140

Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser

145 150 155 160

Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu

165 170 175

Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys

180 185 190

Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys

195 200 205

Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala

210 215 220

Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg

225 230 235 240

His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg

245 250 255

Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln

260 265 270

Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro

275 280 285

His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln

290 295 300

Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe

305 310 315 320

Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro

325 330 335

Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu

340 345 350

Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp

355 360 365

Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val

370 375 380

Ser Tyr Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Asp Glu

385 390 395 400

Val Asp Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

405 410 415

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

420 425 430

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

435 440 445

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

450 455 460

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

465 470 475 480

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

485 490 495

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

500 505 510

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

515 520 525

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

530 535 540

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

545 550 555 560

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

565 570 575

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

580 585 590

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

595 600 605

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

610 615 620

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

625 630 635

<210>103

<211>63

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>103

agccaggaaa tccatgccga gttgagacgc ttccgtagag ctgggattgg ctttcgccac 60

ctg 63

<210>104

<211>68

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>104

acttcatcag atccggatcc tccgcctgag ccacccgaac ccccgtaaga gacatctgga 60

cacaagag 68

<210>105

<211>86

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>105

tcaggtgctg ggcacggtgg gcatgtgtga gttttgtctg aagatttggg ctctgatcca 60

tcaacttcat cagatccgga tcctcc 86

<210>106

<211>1953

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1953)

<400>106

atg ggg agc tcc aga ctg gca gcc ctg ctc ctg cct ctc ctc ctc ata 48

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

gtc atc gac ctc tct gac tct gct ggg att ggc ttt cgc cac ctg ccc 96

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

cac tgg aac acc cgc tgt cct ctg gcc tcc cac acg gaa gtt ctg cct 144

His Trp Asn Thr Arg Cys Pro Leu Ala Ser His Thr Glu Val Leu Pro

35 40 45

ata tcc ctt gcc gca cct ggt ggg ccc tct tct cca caa agc ctt ggt 192

Ile Ser Leu Ala Ala Pro Gly Gly Pro Ser Ser Pro Gln Ser Leu Gly

50 55 60

gtg tgc gag tct ggc act gtt ccc gct gtt tgt gcc agc atc tgc tgt 240

Val Cys Glu Ser Gly Thr Val Pro Ala Val Cys Ala Ser Ile Cys Cys

65 70 75 80

cag gtg gct cag aaa tcc aaa aag tct tcc aca ttc aag ttc tat agg 288

Gln Val Ala Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr Arg

85 90 95

aga cac aag atg cca gca cct gct cag agg aag ctg ctg cct cgt cgt 336

Arg His Lys Met Pro Ala Pro Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg

100 105 110

cac ctg tct gag aag agc cat cac att tcc atc ccc tcc cca gac atc 384

His Leu Ser Glu Lys Ser His His Ile Ser Ile Pro Ser Pro Asp Ile

115 120 125

tcc cac aag gga ctt cgc tct aaa agg acc caa cct tcg gat cca gag 432

Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu

130 135 140

aca tgg gaa agt ctt ccc aga ttg gac tca caa agg cat gga gga ccc 480

Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro

145 150 155 160

gag ttc tcc ttt gat ttg ctg cct gag gcc cgg gct att cgg gtg acc 528

Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr

165 170 175

ata tct tca ggc cct gag gtc agc gtg cgt ctt tgt cac cag tgg gca 576

Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala

180 185 190

ctg gag tgt gaa gag ctg agc agt ccc tat gat gtc cag aaa att gtg 624

Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val

195 200 205

tct ggg ggc cac act gta gag ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc tgt 672

Ser Gly Gly His Thr Val Glu Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys

210 215 220

ctg tgc ata gag gca tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg cgc aaa 720

Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys

225 230 235 240

aaa tgt ccc ttc cag agc tgg cca gaa gcc tat ggc tcg gac ttc tgg 768

Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp

245 250 255

aag tca gtg cac ttc act gac tac agc cag cac act cag atg gtc atg 816

Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met

260 265 270

gcc ctg aca ctc cgc tgc cca ctg aag ctg gaa gct gcc ctc tgc cag 864

Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln

275 280 285

agg cac gac tgg cat acc ctt tgc aaa gac ctc ccg aat gcc acg gct 912

Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala

290 295 300

cga gag tca gat ggg tgg tat gtt ttg gag aag gtg gac ctg cac ccc 960

Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro

305 310 315 320

cag ctc tgc ttc aag ttc tct ttt gga aac agc agc cat gtt gaa tgc 1008

Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys

325 330 335

ccc cac cag act ggg tct ctc aca tcc tgg aat gta agc atg gat acc 1056

Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr

340 345 350

caa gcc cag cag ctg att ctt cac ttc tcc tca aga atg cat gcc acc 1104

Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr

355 360 365

ttc agt gct gcc tgg agc ctc cca ggc ttg ggg cag gac act ttg gtg 1152

Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val

370 375 380

ccc ccc gtg tac act gtc agc cag gcc cgg ggc tca agc cca gtg tca 1200

Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser

385 390 395 400

cta gac ctc atc att ccc ttc ctg agg cca ggg tgc tgt gtc ctg gtg 1248

Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val

405 410 415

tgg cgg tca gat gtc cag ttt gcc tgg aag cac ctc ttg tgt cca gat 1296

Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp

420 425 430

gtc tct tac aga cac ctg ggg ctc ttg atc ctg gca ctg ctg gcc ctc 1344

Val Ser Tyr Arg His Leu Gly Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu

435 440 445

ctc acc cta ctg ggt gtt gtt ctg gcc ctc acc tgc cgg cgc cca cag 1392

Leu Thr Leu Leu Gly Val Val Leu Ala Leu Thr Cys Arg Arg Pro Gln

450 455 460

tca ggc ccg ggc cca gcg cgg cca gtg ctc ctc ctg cac gcg gcg gac 1440

Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp

465 470 475 480

tcg gag gcg cag cgg cgc ctg gtg gga gcg ctg gct gaa ctg cta cgg 1488

Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg

485 490 495

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Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly

500 505 510

agg cac gtg gcg cgc gtg ggc ccg ctg ccg tgg ctc tgg gcg gcg cgg 1584

Arg His Val Ala Arg Val Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg

515 520 525

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Thr Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Ser Gly

530 535 540

gcc gac ctt cgc ccg gtc agc ggc ccc gac ccc cgc gcc gcg ccc ctg 1680

Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ala Ala Pro Leu

545 550 555 560

ctc gcc ctg ctc cac gct gcc ccg cgc ccg ctg ctg ctg ctc gct tac 1728

Leu Ala Leu Leu His Ala Ala Pro Arg Pr0 Leu Leu Leu Leu Ala Tyr

565 570 575

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Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Pro Pro Leu Arg Ala

580 585 590

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Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala

595 600 605

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Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala Glu Ala Thr Ser Trp Gly Arg Leu Gly

610 615 620

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Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser Arg Leu Glu Leu Cys Ser Arg Leu Glu

625 630 635 640

cga gag gcc gcc cga ctt gca gac cta ggt tga 1953

Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala Asp Leu Gly *

645 650

<210>107

<211>650

<212>PRT

<213>智人

<400>107

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Ala Gly Ile Gly Phe Arg His Leu Pro

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

Gln Val Ala Gln Lys Ser Lys Lys Ser Ser Thr Phe Lys Phe Tyr Arg

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Ser His Lys Gly Leu Arg Ser Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu

130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala

180 185 190

Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val

195 200 205

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210 215 220

Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys

225 230 235 240

Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp

245 250 255

Lys Ser Val His Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met

260 265 270

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275 280 285

Arg His Asp Trp His Thr Leu Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala

290 295 300

Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro

305 310 315 320

Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys

325 330 335

Pro His Gln Thr Gly Ser Leu Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr

340 345 350

Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr

355 360 365

Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val

370 375 380

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385 390 395 400

Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val

405 410 415

Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp

420 425 430

Val Ser Tyr Arg His Leu Gly Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Leu

435 440 445

Leu Thr Leu Leu Gly Val Val Leu Ala Leu Thr Cys Arg Arg Pro Gln

450 455 460

Ser Gly Pro Gly Pro Ala Arg Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp

465 470 475 480

Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg

485 490 495

Ala Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly

500 505 510

Arg His Val Ala Arg Val Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg

515 520 525

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530 535 540

Ala Asp Leu Arg Pro Val Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ala Ala Pro Leu

545 550 555 560

Leu Ala Leu Leu His Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Leu Ala Tyr

565 570 575

Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Pro Pro Leu Arg Ala

580 585 590

Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala

595 600 605

Leu Asp Ala Arg Pro Phe Ala Glu Ala Thr Ser Trp Gly Arg Leu Gly

610 615 620

Ala Arg Gln Arg Arg Gln Ser Arg Leu Glu Leu Cys Ser Arg Leu Glu

625 630 635 640

Arg Glu Ala Ala Arg Leu Ala Asp Leu Gly

645 650

<210>108

<211>1977

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1245)

<400>108

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

225 230 235 240

tac agc cag cac act cag atg gtc atg gcc ctg aca ctc cgc tgc cca 768

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245 250 255

ctg aag ctg gaa gct gcc ctc tgc cag agg cac gac tgg cat acc ctt 816

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

260 265 270

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Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

275 280 285

gtt ttg gag aag gtg gac ctg cac ccc cag ctc tgc ttc aag ttc tct 912

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

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Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

305 310 315 320

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325 330 335

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340 345 350

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Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

355 360 365

cag gcc cgg ggc tca agc cca gtg tca cta gac ctc atc att ccc ttc 1152

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

ctg agg cca ggg Lgc tgt gtc ctg gtg tgg cgg tca gat gtc cag ttt 1200

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

385 390 395 400

gcc tgg aag cac ctc ttg tgt cca gat gac acc tgg ggc tct tga 1245

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405 410

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tgccgcgtct gctgcgggcg ctggacgcgc ggcctttcgc agaggccacc agctggggcc 1785

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ggccgcaacg caacggacac tggctggaac cccggaatga gccttcgacc ctgaaatcct 1965

tggggtgcct cg 1977

<210>109

<211>414

<212>PRT

<213>智人

<400>109

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

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20 25 30

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50 55 60

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65 70 75 80

Ala Gln Arg Lys Leu Leu Pro Arg Arg His Leu Ser Glu Lys Ser His

85 90 95

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100 105 110

Lys Arg Thr Gln Pro Ser Asp Pro Glu Thr Trp Glu Ser Leu Pro Arg

115 120 125

Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val

145 150 155 160

Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser

165 170 175

Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu

180 185 190

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

195 200 205

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

210 215 220

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

225 230 235 240

Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

245 250 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

260 265 270

Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

275 280 285

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

305 310 315 320

Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu

325 330 335

His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu

340 345 350

Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

355 360 365

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

385 390 395 400

Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Asp Thr Trp Gly Ser

405 410

<210>110

<211>1986

<212>DNA

<213>小鼠

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1986)

<400>110

atg ggg agc ccc aga ctg gca gcc ttg ctc ctg tct ctc ccg cta ctg 48

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

ctc atc ggc ctc gct gtg tct gct cgg gtt gcc tgc ccc tgc ctg cgg 96

Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr

100 105 110

aaa agg gcc cag cct tca gct gca gaa gga aga gaa cat ctc cct gaa 384

Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu

115 120 125

gca ggg tca caa aag tgt gga gga cct gaa ttc tcc ttt gat ttg ctg 432

Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

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145 150 155 160

agt gtg cgc ctt tgt tat cag tgg gca ctg gaa tgt gaa gac ttg agt 528

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165 170 175

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180 185 190

ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc tgc atg tgc ata gag gcc tcc tac 624

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195 200 205

ctg caa gag gac act gtg agg cgc aaa aag tgt ccc ttc cag agc tgg 672

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro

260 265 270

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275 280 285

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Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

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Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu

305 310 315 320

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Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu

325 330 335

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340 345 350

cca ggt ttg ggg ccg gat acc ccc atg cct cct gtg tac agc atc agc 1104

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355 360 365

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370 375 380

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Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe

385 390 395 400

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Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro Asp Gly Glu Phe Leu Ser Glu Glu

405 410 415

ggg ggg agc atg ggc act cga gag atg gct cgc ctt tac ctg ctt gat 1296

Gly Gly Ser Met Gly Thr Arg Glu Met Ala Arg Leu Tyr Leu Leu Asp

420 425 430

tca gtc tcc cat aga cac ctc ggg ctc ttg atc ctg gca ctg ctg gct 1344

Ser Val Ser His Arg His Leu Gly Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala

435 440 445

ctc acc gct cta gtg ggt gta gtt ctg gtc ctc ctc ggc cgg cgc cta 1392

Leu Thr Ala Leu Val Gly Val Val Leu Val Leu Leu Gly Arg Arg Leu

450 455 460

ctg cca ggc tcc ggt cga aca agg cca gtt tta ctc cta cat gca gcg 1440

Leu Pro Gly Ser Gly Arg Thr Arg Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala

465 470 475 480

gac tca gag gca cag cga cgc ctg gtg gga gct ttg gcc gaa ctg ctg 1488

Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu

485 490 495

cgg acg gcg ctg gga ggt gga cgc gac gtg atc gtg gat ctc tgg gaa 1536

Arg Thr Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu

500 505 510

ggg acg cac gta gca cgc att gga cca ctg ccg tgg ctt tgg gca gcg 1584

Gly Thr His Val Ala Arg Ile Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala

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cgg gag cgc gtg gcg cgg gag cag ggc aca gtg ctg ctc ctg tgg gac 1632

Arg Glu Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Asn

530 535 540

tgt gcg ggt ccc agc acc gcc tgc agc ggt gac ccg cag gct gcg tcc 1680

Cys Ala Gly Pro Ser Thr Ala Cys Ser Gly Asp Pro Gln Ala Ala Ser

545 550 555 560

ctt cgc acc ttg ttg tgc gct gct cca cgt ccg ctg ctg ctc gcc tac 1728

Leu Arg Thr Leu Leu Cys Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Ala Tyr

565 570 575

ttc agt cgc ctc tgc gcc aaa ggt gac atc ccc cgg ccg ctg cgc gct 1776

Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Arg Pro Leu Arg Ala

580 585 590

ctg cca cgc tac cgc ctg ctt cgt gac ctg ccg cgc ctg ctg aga gca 1824

Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala

595 600 605

ctg gat gct cag cct gcc acc cta gcc tcc agc tgg agt cac ctt ggg 1872

Leu Asp Ala Gln Pro Ala Thr Leu Ala Ser Ser Trp Ser His Leu Gly

610 615 620

gct gag cgg tgc ttg aaa aac cgt ctg gag cag tgt cac ctg ctg gaa 1920

Ala Lys Arg Cys Leu Lys Asn Arg Leu Glu Gln Cys His Leu Leu Glu

625 630 635 640

ctt gag gct gcc aaa gat gac tac caa ggc tca acc aat agt ccc tgt 1968

Leu Glu Ala Ala Lys Asp Asp Tyr Gln Gly Ser Thr Asn Ser Pro Cys

645 650 655

ggt ttc agc tgt ctg tag 1986

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660

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<212>PRT

<213>小鼠

<400>111

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu

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Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg

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Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys

50 55 60

Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser

65 70 75 80

Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His

85 90 95

Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr

100 105 110

Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu

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Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

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Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser

165 170 175

Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp

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Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

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245 250 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro

260 265 270

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485 490 495

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530 535 540

Cys Ala Gly Pro Ser Thr Ala Cys Ser Gly Asp Pro Gln Ala Ala Ser

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Leu Arg Thr Leu Leu Cys Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Ala Tyr

565 570 575

Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Arg Pro Leu Arg Ala

580 585 590

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595 600 605

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165 170 175

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Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe Ala Trp Lys His Leu Leu Cys

260 265 270

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<212>DNA

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<220>

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<211>90

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1 5 10 15

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20 25 30

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His

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<212>DNA

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<221>CDS

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<400>120

gga cct gaa ttc tcc ttt gat ttg ctg ccc gag gtg cag gct gtt cgg 48

Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Val Gln Ala Val Arg

1 5 10 15

gtg act att cct gca ggc ccc aag gcc agt gtg cgc ctt tgt tat cag 96

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20 25 30

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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<210>121

<211>279

<212>PRT

<213>小鼠

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Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp

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165 170 175

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180 185 190

Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr

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Pro Asp Val Ser His Arg His

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<212>PRT

<213>智人

<400>122

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Leu Asp Ser Gln Arg His Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

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145 150 155 160

Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser

165 170 175

Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu

180 185 190

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

195 200 205

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

210 215 220

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

225 230 235 240

Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

245 250 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

260 265 270

Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

275 280 285

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

305 310 315 320

Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu

325 330 335

His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu

340 345 350

Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

355 360 365

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

385 390 395 400

Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr Arg His

405 410

<210>123

<211>1605

<212>DNA

<213>智人

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1602)

<400>123

atg ggg agc tcc aga ctg gca gcc ctg ctc ctg cct ctc ctc ctc ata 48

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

gtc atc gac ctc tct gac tct gga ccc gag ttc tcc ttt gat ttg ctg 96

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

20 25 30

cct gag gcc cgg gct att cgg gtg acc ata tct tca ggc cct gag gtc 144

Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val

35 40 45

agc gtg cgt ctt tgt cac cag tgg gca ctg gag tgt gaa gag ctg agc 192

Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser

50 55 60

agt ccc tat gat gtc cag aaa att gtg tct ggg ggc cac act gta gag 240

Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu

65 70 75 80

ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc tgt ctg tgc ata gag gca tcc tac 288

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

85 90 95

ctg caa gag gac act gtg agg cgc aaa aaa tgt ccc ttc cag agc tgg 336

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

100 105 110

cca gaa gcc tat ggc tcg gac ttc tgg aag tca gtg cac ttc act gac 384

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

115 120 125

tac agc cag cac act cag atg gtc atg gcc ctg aca ctc cgc tgc cca 432

Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

130 135 140

ctg aag ctg gaa gct gcc ctc tgc cag agg cac gac tgg cat ace ctt 480

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

145 150 155 160

tgc aaa gac ctc ccg aat gcc aca gct cga gag tca gat ggg tgg tat 528

Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

165 170 175

gtt ttg gag aag gtg gac ctg cac ccc cag ctc tgc ttc aag ttc tct 576

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

180 185 190

ttt gga aac agc agc cat gtt gaa tgc ccc cac cag act ggg tct ctc 624

Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

195 200 205

aca tcc tgg aat gta agc atg gat acc caa gcc cag cag ctg att ctt 672

Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu

210 215 220

cac ttc tcc tca aga atg cat gcc acc ttc agt gct gcc tgg agc ctc 720

His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu

225 230 235 240

cca ggc ttg ggg cag gac act ttg gtg ccc ccc gtg tac act gtc agc 768

Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

245 250 255

cag gcc cgg ggc tca agc cca gtg tca cta gac ctc atc att ccc ttc 816

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

260 265 270

ctg agg cca ggg tgc tgt gtc ctg gtg tgg cgg tca gat gtc cag ttt 864

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

275 280 285

gcc tgg aag cac ctc ttg tgt ccg gat gtc tct tac aga cac gag ccc 912

Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr Arg His Glu Pro

290 295 300

aaa tct tca gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa 960

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

305 310 315 320

ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 1008

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

325 330 335

acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 1056

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

340 345 350

gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 1104

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

355 360 365

gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac 1152

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

370 375 380

agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 1200

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

385 390 395 400

ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 1248

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

405 410 415

gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa 1296

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

420 425 430

cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac 1344

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

435 440 445

cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 1392

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

450 455 460

gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc 1440

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

465 470 475 480

acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1488

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

485 490 495

ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc 1536

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

500 505 510

tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc 1584

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

515 520 525

tcc ctg tct ccg ggt aaa taa 1605

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

530

<210>124

<211>534

<212>PRT

<213>智人

<400>124

Met Gly Ser Ser Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ile

1 5 10 15

Val Ile Asp Leu Ser Asp Ser Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

20 25 30

Pro Glu Ala Arg Ala Ile Arg Val Thr Ile Ser Ser Gly Pro Glu Val

35 40 45

Ser Val Arg Leu Cys His Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Glu Leu Ser

50 55 60

Ser Pro Tyr Asp Val Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Glu

65 70 75 80

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Leu Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

85 90 95

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

100 105 110

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Lys Ser Val His Phe Thr Asp

115 120 125

Tyr Ser Gln His Thr Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

130 135 140

Leu Lys Leu Glu Ala Ala Leu Cys Gln Arg His Asp Trp His Thr Leu

145 150 155 160

Cys Lys Asp Leu Pro Asn Ala Thr Ala Arg Glu Ser Asp Gly Trp Tyr

165 170 175

Val Leu Glu Lys Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

180 185 190

Phe Gly Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Thr Gly Ser Leu

195 200 205

Thr Ser Trp Asn Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Ile Leu

210 215 220

His Phe Ser Ser Arg Met His Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Leu

225 230 235 240

Pro Gly Leu Gly Gln Asp Thr Leu Val Pro Pro Val Tyr Thr Val Ser

245 250 255

Gln Ala Arg Gly Ser Ser Pro Val Ser Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

260 265 270

Leu Arg Pro Gly Cys Cys Val Leu Val Trp Arg Ser Asp Val Gln Phe

275 280 285

Ala Trp Lys His Leu Leu Cys Pro Asp Val Ser Tyr Arg His Glu Pro

290 295 300

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

305 310 315 320

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

325 330 335

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

340 345 350

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

355 360 365

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

370 375 380

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

385 390 395 400

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

405 410 415

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

420 425 430

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

435 440 445

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

450 455 460

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

465 470 475 480

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

485 490 495

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

500 505 510

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

515 520 525

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

530

<210>125

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的HIS tag

<400>125

ggctcaggat ctggtggcgg ccatcaccac catcatcact aaatctaga 49

<210>126

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>126

cactggagtg gcaacttcca g 21

<210>127

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>127

caccagacat aatagctgac agact 25

<210>128

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的HIS tag

<400>128

ggctcaggat ctggtggcgg ccatcaccac catcatcact aaatctaga 49

<210>129

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>129

gaagaacgtc tctcatgacg ctcctccccg gcctcc 36

<210>130

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>130

gaagaacgtc tctagcccac tgaacggggc agcacgcagg tg 42

<210>131

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>C末端的HIS tag

<400>131

ggctcaggat ctggtggcgg ccatcaccac catcatcact aaatctaga 49

<210>132

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>132

cactggagtg gcaacttcca g 21

<210>133

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>133

caccagacat aatagctgac agact 25

<210>134

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>134

ggctcaggat ctggtggcgg ccatcaccac catcatcact aaatctaga 49

<210>135

<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>135

gaagccgaag acttcatggc caccgtcacc gtcact 36

<210>136

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>136

gaagccgaag acttagccct gtgtagacct gggaagaa 38

<210>137

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>137

ggctcaggat ctggtggcgg ccatcaccac catcatcact aaatctaga 49

<210>138

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>138

cactggagtg gcaacttcca g 21

<210>139

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>139

caccagacat aatagctgac agact 25

<210>140

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>140

ctctccatcc ttatctttca tcaac 25

<210>141

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>141

ctctctgctg gctaaacaaa acac 24

<210>142

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>142

ctcatattgc tcaactgtgt gaaaag 26

<210>143

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>143

tagaagccac ctgaacacaa atctg 25

<210>144

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>144

atcttgcgtt gtatgttgaa aatcaatt 28

<210>145

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>145

ttctccacca ggtaaacaag tctac 25

<210>146

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>146

cactgctact cggctgagga actgc 25

<210>147

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>147

ttctgtggat agcggtcctc atc 23

<210>148

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>148

ccactcacac cctgcgaaa 19

<210>149

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>149

gcaagtccac attctccagg at 22

<210>150

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>150

accatccttc tgactcctgt gctgtgg 27

<210>151

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>151

tcagcgtgcg tctttgtca 19

<210>152

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>152

ggcccccaga cacaatttt 19

<210>153

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>153

catagggact gctcagctct tcacactcca 30

<210>154

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>154

tggagatatc gcatcgacac a 21

<210>155

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>155

gcatccacga cacaagcatt 20

<210>156

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>156

ccgctaccca cagaagctgg cg 22

<210>157

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>157

atgaggaccg ctatccacag a 21

<210>158

<211>16

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>158

cccgtccgtg catcga 16

<210>159

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>159

tggccttcgc cgagtgcctg 20

<210>160

<211>2095

<212>DNA

<213>小鼠

<220>

<221>CDS

<222>(89)...(1864)

<400>160

gtgcttctca cagctccagg gccaggccct gctgccctct tgcagacagg aaagacatgg 60

tctctgcgcc cggatcctac agaagctc atg ggg agc ccc aga ctg gca gcc 112

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala

1 5

ttg ctc ctg tct ctc ccg cta ctg ctc atc ggc ctc gct gtg tct gct 160

Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala

10 15 20

cgg gtt gcc tgc ccc tgc ctg cgg agt tgg acc agc cac tgt ctc ctg 208

Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg Ser Trp Thr Ser His Cys Leu Leu

25 30 35 40

gcc tac cgt gtg gat aaa cgt ttt gct ggc ctt cag tgg ggc tgg ttc 256

Ala Tyr Arg Val Asp Lys Arg Phe Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe

45 50 55

cct ctc ttg gtg agg aaa tct aaa agt cct cct aaa ttt gaa gac tat 304

Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr

60 65 70

tgg agg cac agg aca cca gca tcc ttc cag agg aag ctg cta ggc agc 352

Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser

75 80 85

cct tcc ctg tct gag gaa agc cat cga att tcc atc ccc tcc tca gcc 400

Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala

90 95 100

atc tcc cac aga ggc caa cgc acc aaa agg gcc cag cct tca gct gca 448

Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala

105 110 115 120

gaa gga aga gaa cat ctc cct gaa gca ggg tca caa aag tgt gga gga 496

Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly

125 130 135

cct gaa ttc tcc ttt gat ttg ctg ccc gag gtg cag gct gtt cgg gtg 544

Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu Pro Glu Val Gln Ala Val Arg Val

140 145 150

act att cct gca ggc ccc aag gcc agt gtg cgc ctt tgt tat cag tgg 592

Thr Ile Pro Ala Gly Pro Lys Ala Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp

155 160 165

gca ctg gaa tgt gaa gac ttg agt agc cct ttt gat acc cag aaa att 640

Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile

170 175 180

gtg tct gga ggc cac act gta gac ctg cct tat gaa ttc ctt ctg ccc 688

Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro

185 190 195 200

tgc atg tgc ata gag gcc tcc tac ctg caa gag gac act gtg agg cgc 736

Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg

205 210 215

aaa aag tgt ccc ttc cag agc tgg cct gaa gct tat ggc tca gac ttc 784

Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe

220 225 230

tgg cag tca ata cgc ttc act gac tac agc cag cac aat cag atg gtc 832

Trp Gln Ser Ile Arg Phe Thr Asp Tyr Ser Gln His Asn Gln Met Val

235 240 245

atg gct ctg aca ctc cgc tgc cca ctg aaa ctg gag gcc tcc ctc tgc 880

Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys

250 255 260

tgg agg cag gac cca ctc aca ccc tgc gaa acc ctt ccc aac gcc aca 928

Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala Thr

265 270 275 280

gca cag gag tca gaa gga tgg tat atc ctg gag aat gtg gac ttg cac 976

Ala Gln Glu Ser Glu Gly Trp Tyr Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His

285 290 295

ccc cag ctc tgc ttt aag ttc tca ttt gaa aac agc agc cac gtt gaa 1024

Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu

300 305 310

tgt ccc cac cag agt ggc tct ctc cca tcc tgg act gtg agc atg gat 1072

Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp

315 320 325

acc cag gcc cag cag ctg acg ctt cac ttt tct tcg agg aca tat gcc 1120

Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr Ala

330 335 340

acc ttc agt gct gcc tgg agt gac cca ggt ttg ggg ccg gat acc ccc 1168

Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Asp Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr Pro

345 350 355 360

atg cct cct gtg tac agc atc agc cag acc cag ggc tca gtc cca gtg 1216

Met Pro Pro Val Tyr Ser Ile Ser Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro Val

365 370 375

acg cta gac ctc atc atc ccc ttc ctg agg cag gag aat tgc atc ctg 1264

Thr Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu

380 385 390

gtg tgg agg tca gat gtc cat ttt gcc tgg aag cac gtc ttg tgt cct 1312

Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro

395 400 405

gat gcg gac tca gag gca cag cga cgc ctg gtg gga gct ttg gcc gaa 1360

Asp Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu

410 415 420

ctg ctg cgg acg gcg ctg gga ggt gga cgc gac gtg atc gtg gat ctc 1408

Leu Leu Arg Thr Ala Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu

425 430 435 440

tgg gaa ggg acg cac gta gca cgc att gga cca ctg ccg tgg ctt tgg 1456

Trp Glu Gly Thr His Val Ala Arg Ile Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp

445 450 455

gca gcg cgg gag cgc gtg gcg cgg gag cag ggc aca gtg ctg ctc ctg 1504

Ala Ala Arg Glu Arg Val Ala Arg Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu

460 465 470

tgg aac tgt gcg ggt ccc agc acc gcc tgc agc ggt gac ccg cag gct 1552

Trp Asn Cys Ala Gly Pro Ser Thr Ala Cys Ser Gly Asp Pro Gln Ala

475 480 485

gcg tcc ctt cgc acc ttg ttg tgc gct gct cca cgt ccg ctg ctg ctc 1600

Ala Ser Leu Arg Thr Leu Leu Cys Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu

490 495 500

gcc tac ttc agt cgc ctc tgc gcc aaa ggt gac atc ccc cgg ccg ctg 1648

Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly Asp Ile Pro Arg Pro Leu

505 510 515 520

cgc gct ctg cca cgc tac cgc ctg ctt cgt gac ctg ccg cgc ctg ctg 1696

Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu

525 530 535

aga gca ctg gat gct cag cct gcc acc cta gcc tcc agc tgg agt cac 1744

Arg Ala Leu Asp Ala Gln Pro Ala Thr Leu Ala Ser Ser Trp Ser His

540 545 550

ctt ggg gct aag cgg tgc ttg aaa aac cgt ctg gag cag tgt cac ctg 1792

Leu Gly Ala Lys Arg Cys Leu Lys Asn Arg Leu Glu Gln Cys His Leu

555 560 565

ctg gaa ctt gag gct gcc aaa gat gac tac caa ggc tca acc aat agt 1840

Leu Glu Leu Glu Ala Ala Lys Asp Asp Tyr Gln Gly Ser Thr Asn Ser

570 575 580

ccc tgt ggt ttc agc tgt ctg tag cctcagcctg tgtagcaaca gcaggaactc 1894

Pro Cys Gly Phe Ser Cys Leu *

585 590

cagaatgagg cctcacacat gtactctttg ggggtgcttc ttgtccccca aaccgtaaga 1954

ctcaccttaa gtcccacact tgaccaacct ccctcacatt tgctccctct tagagttcct 2014

gagaggaact tgggctttcc tgataggtcc tcagcccttt ctgagaagga gggacgattt 2074

ttccatttct tttcaaaact g 2095

<210>161

<211>591

<212>PRT

<213>小鼠

<400>161

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg

20 25 30

Ser Trp Thr Ser His Cys Leu Leu Ala Tyr Arg Val Asp Lys Arg Phe

35 40 45

Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys

50 55 60

Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser

65 70 75 80

Phe Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His

85 90 95

Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr

100 105 110

Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu

115 120 125

Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

130 135 140

Pro Glu Val Gln Ala Val Arg Val Thr Ile Pro Ala Gly Pro Lys Ala

145 150 155 160

Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser

165 170 175

Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp

180 185 190

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

195 200 205

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

210 215 220

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Gln Ser Ile Arg Phe Thr Asp

225 230 235 240

Tyr Ser Gln His Asn Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

245 250 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro

260 265 270

Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala Thr Ala Gln Glu Ser Glu Gly Trp Tyr

275 280 285

Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

290 295 300

Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu

305 310 315 320

Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu

325 330 335

His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Asp

340 345 350

Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr Pro Met Pro Pro Val Tyr Ser Ile Ser

355 360 365

Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro Val Thr Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

370 375 380

Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe

385 390 395 400

Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro Asp Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg

405 410 415

Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Thr Ala Leu Gly Gly

420 425 430

Gly Arg Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Thr His Val Ala Arg

435 440 445

Ile Gly Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Glu Arg Val Ala Arg

450 455 460

Glu Gln Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Asn Cys Ala Gly Pro Ser Thr

465 470 475 480

Ala Cys Ser Gly Asp Pro Gln Ala Ala Ser Leu Arg Thr Leu Leu Cys

485 490 495

Ala Ala Pro Arg Pro Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala

500 505 510

Lys Gly Asp Ile Pro Arg Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu

515 520 525

Leu Arg Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Gln Pro Ala

530 535 540

Thr Leu Ala Ser Ser Trp Ser His Leu Gly Ala Lys Arg Cys Leu Lys

545 550 555 560

Asn Arg Leu Glu Gln Cys His Leu Leu Glu Leu Glu Ala Ala Lys Asp

565 570 575

Asp Tyr Gln Gly Ser Thr Asn Ser Pro Cys Gly Phe Ser Cys Leu

580 585 590

<210>162

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>162

cgaggcaccc caaggatttc ag 22

<210>163

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>163

aggccctgcc acccaccttc 20

<210>164

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>164

cgtacgggcc ggccaccatg gggagctcca gactggca 38

<210>165

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>165

tgacgaggcg cgcctcaacc taggtctgca agt 33

<210>166

<211>43

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>166

ttttcgtctc agatccgcca ccatggggag ctccagactg gca 43

<210>167

<211>75

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>167

tttcgtctca aattcggatc ccttatcatc atcatcctta taatctccgg agtgtctgta 60

agagacatcc ggaca 75

<210>168

<211>116

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>168

ttttcgtctc agatccgcca ccatggggag ctccagactg gcagccctgc tcctgcctct 60

cctcctcata gtcatcgacc tctctgactc tggacccgag ttctcctttg atttgc 116

<210>169

<211>43

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>169

aaaacgtctc agatccgcca ccatggggag ccccagactg gca 43

<210>170

<211>73

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>170

aaacgtctca aattcggatc ccttatcatc atcatcctta taatctccgg agtgtctatg 60

ggagacatca gga 73

<210>171

<211>5055

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pVAC表达结构体

<400>171

cctgcagggc ctgaaataac ctctgaaaga ggaacttggt taggtacctt ctgaggcgga 60

aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 120

ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca 180

ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc 240

ccactagtgg agccgagagt aattcataca aaaggactcg cccctgcctt ggggaatccc 300

agggaccgtc gttaaactcc cactaaccta gaacccagag atcgctgcgt tcccgccccc 360

tcacacgccc gctctcgtca tcaccaaggt ggagaagagc atgcgtgagg ctccggtgcc 420

cgtcagtggg cagagcgcac atcgcccaca gtccccgaga agttgggggg aggggtcggc 480

aattgaaccg gtgcctagag aaggtggcgc ggggtaaact gggaaagtga tgtcgtgtac 540

tggctccgcc cttttcccga gggtggggga gaaccgtata taagtgcagt agtcgctgtg 600

aacgttcttt ttcgcaacgg gtttgccgcc agaacacagg taagtactgt gtgtggctcc 660

tgcgggcctg gcctctttac gggctatggc cctcgcgtgc cttttattac ttacacgccc 720

atggccgctg tacgtgattc ttgatcccga gcttcgggtt ggaagtgggt gggagaggtc 780

gaggccttgc acttaaggag tcccttcgcc tcgtgcttga gtcgaggcct ggcttgggct 840

ctggggctgc cgcgtgcgaa tctggtagca ccttcgcgcc tgccccgctg ctttcactaa 900

gtttctagcc atttaaaatt tttgatgacc agctgcaacg ccttttttct ggcgagataa 960

tcttataaat gcggaccagg atctgcacac tgatattggg gttttggggg ccgcgggctg 1020

cgacggggct cgtgcgtccc agcgcacatg ttcggcgagg cggggcctgc gagcgcggcc 1080

accgagagtc ggacgggggg agtctcaagc tggccgtcct gctctggtgc cgggcctcgc 1140

gccgcggtgt gtcgccccgc cctggtcggc aagcctggcc cggtcggcac cagttgcgtg 1200

agcggaaaga tggccgcttc ccggccctgc cgcagggagc tcaaaatgga ggacgcggcg 1260

cccgggagag cgggcgggtg agtcacccac acaaaggaaa agggcctttc cctcctcggt 1320

cgccgcttca tgtgacccca cggagtaccg ggcgccgtcc aggcacctcg attagttctc 1380

cgagcttttg gagtacgtct tccttaggtt tgggggaggg gttttgtgcg gtggagtttc 1440

cccacacttg gtgggtggag actgaagagt taggccagct tggcgctcga tgtaattctc 1500

cttggaattt gcccttttcg aatttggatc ttggcttatt ctcaagcttc agacagtggt 1560

tcaaagtttt ttttctccca tttcaggtgt cgtgaaaact acccctaaaa gccatcggat 1620

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tcgacctctc tgactctgct gggattggct ttcgccacct gccccactgg aacacccgct 1740

gtcctctggc ctcccacacg gatgacagtt tcactggaag ttctgcctat atcccttgcc 1800

gcacctggtg ggccctcttc tccacaaagc cttggtgtgt gcgagtctgg cactgttccc 1860

gctgtttgtg ccagcatctg ctgtcaggtg gctcaggtct tcaacggggc ctcttccacc 1920

tcctggtgca gaaatccaaa aagtcttcca cattcaagtt ctataggaga cacaagatgc 1980

cagcacctgc tcagaggaag ctgctgcctc gtcgtcacct gtctgagaag agccatcaca 2040

tttccatccc ctccccagac atctcccaca agggacttcg ctctaaaagg acccaacctt 2100

cggatccaga gacatgggaa agtcttccca gattggactc acaaaggcat ggaggacccg 2160

agttctcctt tgatttgctg cctgaggccc gggctattcg ggtgaccata tcttcaggcc 2220

ctgaggtcag cgtgcgtctt tgtcaccagt gggcactgga gtgtgaagag ctgagcagtc 2280

cctatgatgt ccagaaaatt gtgtctgggg gccacactgt agagctgcct tatgaattcc 2340

ttctgccctg tctgtgcata gaggcatcct acctgcaaga ggacactgtg aggcgcaaaa 2400

aatgtccctt ccagagctgg ccagaagcct atggctcgga cttctggaag tcagtgcact 2460

tcactgacta cagccagcac actcagatgg tcatggccct gacactccgc tgcccactga 2520

agctggaagc tgccctctgc cagaggcacg actggcatac cctttgcaaa gacctcccga 2580

atgccacggc tcgagagtca gatgggtggt atgttttgga gaaggtggac ctgcaccccc 2640

agctctgctt caagttctct tttggaaaca gcagccatgt tgaatgcccc caccagactg 2700

ggtctctcac atcctggaat gtaagcatgg atacccaagc ccagcagctg attcttcact 2760

tctcctcaag aatgcatgcc accttcagtg ctgcctggag cctcccaggc ttggggcagg 2820

acactttggt gccccccgtg tacactgtca gccaggcccg gggctcaagc ccagtgtcac 2880

tagacctcat cattcccttc ctgaggccag ggtgctgtgt cctggtgtgg cggtcagatg 2940

tccagtttgc ctggaagcac ctcttgtgtc cggatgtctc ttacagacac tccggagatt 3000

ataaggatga tgatgataag ggatccgaat tcaccactga tgctgcccat cctggaaggt 3060

ctgtggtgcc tgccttgctg cctctgctgg ctggcactct gctgctgctg gagactgcca 3120

ctgctcccta aacctgagct agcattatcc ctaatacctg ccaccccact cttaatcagt 3180

ggtggaagaa cggtctcaga actgtttgtt tcaattggcc atttaagttt agtagtaaaa 3240

gactggttaa tgataacaat gcatcgtaaa accttcagaa ggaaaggaga atgttttgtg 3300

gaccactttg gttttctttt ttgcgtgtgg cagttttaag ttattagttt ttaaaatcag 3360

tactttttaa tggaaacaac ttgaccaaaa atttgtcaca gaattttgag acccattaaa 3420

aaagttaaat gagaaacctg tgtgttcctt tggtcaacac cgagacattt aggtgaaaga 3480

catctaattc tggttttacg aatctggaaa cttcttgaaa atgtaattct tgagttaaca 3540

cttctgggtg gagaataggg ttgttttccc cccacataat tggaagggga aggaatatca 3600

tttaaagcta tgggagggtt tctttgatta caacactgga gagaaatgca gcatgttgct 3660

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tgcatgttga aacgtgggtt aattaactag ccatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt 3840

cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 3900

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tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 4020

taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 4080

caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 4140

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gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 4260

gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 4320

ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 4380

acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 4440

tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 4500

ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt aattaaattt ttcaaaagta 4560

gttgacaatt aatcatcggc atagtatatc ggcatagtat aatacgactc actataggag 4620

ggccatcatg gccaagttga ccagtgctgt cccagtgctc acagccaggg atgtggctgg 4680

agctgttgag ttctggactg acaggttggg gttctccaga gattttgtgg aggatgactt 4740

tgcaggtgtg gtcagagatg atgtcaccct gttcatctca gcagtccagg accaggtggt 4800

gcctgacaac accctggctt gggtgtgggt gagaggactg gatgagctgt atgctgagtg 4860

gagtgaggtg gtctccacca acttcaggga tgccagtggc cctgccatga cagagattgg 4920

agagcagccc tgggggagag agtttgccct gagagaccca gcaggcaact gtgtgcactt 4980

tgtggcagag gagcaggact gaggataaga attgtaacaa aaaaccccgc cccggcgggg 5040

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<210>172

<211>4821

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pVAC表达结构体

<400>172

cctgcagggc ctgaaataac ctctgaaaga ggaacttggt taggtacctt ctgaggcgga 60

aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 120

ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca 180

ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc 240

ccactagtgg agccgagagt aattcataca aaaggactcg cccctgcctt ggggaatccc 300

agggaccgtc gttaaactcc cactaaccta gaacccagag atcgctgcgt tcccgccccc 360

tcacacgccc gctctcgtca tcaccaaggt ggagaagagc atgcgtgagg ctccggtgcc 420

cgtcagtggg cagagcgcac atcgcccaca gtccccgaga agttgggggg aggggtcggc 480

aattgaaccg gtgcctagag aaggtggcgc ggggtaaact gggaaagtga tgtcgtgtac 540

tggctccgcc cttttcccga gggtggggga gaaccgtata taagtgcagt agtcgctgtg 600

aacgttcttt ttcgcaacgg gtttgccgcc agaacacagg taagtactgt gtgtggctcc 660

tgcgggcctg gcctctttac gggctatggc cctcgcgtgc cttttattac ttacacgccc 720

atggccgctg tacgtgattc ttgatcccga gcttcgggtt ggaagtgggt gggagaggtc 780

gaggccttgc acttaaggag tcccttcgcc tcgtgcttga gtcgaggcct ggcttgggct 840

ctggggctgc cgcgtgcgaa tctggtagca ccttcgcgcc tgccccgctg ctttcactaa 900

gtttctagcc atttaaaatt tttgatgacc agctgcaacg ccttttttct ggcgagataa 960

tcttataaat gcggaccagg atctgcacac tgatattggg gttttggggg ccgcgggctg 1020

cgacggggct cgtgcgtccc agcgcacatg ttcggcgagg cggggcctgc gagcgcggcc 1080

accgagagtc ggacgggggg agtctcaagc tggccgtcct gctctggtgc cgggcctcgc 1140

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cgagcttttg gagtacgtct tccttaggtt tgggggaggg gttttgtgcg gtggagtttc 1440

cccacacttg gtgggtggag actgaagagt taggccagct tggcgctcga tgtaattctc 1500

cttggaattt gcccttttcg aatttggatc ttggcttatt ctcaagcttc agacagtggt 1560

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ctgccactgc tccctaaacc tgagctagca ttatccctaa tacctgccac cccactctta 2940

atcagtggtg gaagaacggt ctcagaactg tttgtttcaa ttggccattt aagtttagta 3000

gtaaaagact ggttaatgat aacaatgcat cgtaaaacct tcagaaggaa aggagaatgt 3060

tttgtggacc actttggttt tcttttttgc gtgtggcagt tttaagttat tagtttttaa 3120

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gaaagacatc taattctggt tttacgaatc tggaaacttc ttgaaaatgt aattcttgag 3300

ttaacacttc tgggtggaga atagggttgt tttcccccca cataattgga aggggaagga 3360

atatcattta aagctatggg agggtttctt tgattacaac actggagaga aatgcagcat 3420

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<212>DNA

<213>人工序列

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aaagtagttg acaattaatc atcggcatag tatatcggca tagtataata cgactcacta 4440

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ggctggagct gttgagttct ggactgacag gttggggttc tccagagatt ttgtggagga 4560

tgactttgca ggtgtggtca gagatgatgt caccctgttc atctcagcag tccaggacca 4620

ggtggtgcct gacaacaccc tggcttgggt gtgggtgaga ggactggatg agctgtatgc 4680

tgagtggagt gaggtggtct ccaccaactt cagggatgcc agtggccctg ccatgacaga 4740

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<210>174

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>pVAC表达结构体

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taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 3960

caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 4020

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gttgacaatt aatcatcggc atagtatatc ggcatagtat aatacgactc actataggag 4500

ggccatcatg gccaagttga ccagtgctgt cccagtgctc acagccaggg atgtggctgg 4560

agctgttgag ttctggactg acaggttggg gttctccaga gattttgtgg aggatgactt 4620

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<220>

<223>pVAC表达结构体

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aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 120

ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca 180

ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc 240

ccactagtgg agccgagagt aattcataca aaaggactcg cccctgcctt ggggaatccc 300

agggaccgtc gttaaactcc cactaaccta gaacccagag atcgctgcgt tcccgccccc 360

tcacacgccc gctctcgtca tcaccaaggt ggagaagagc atgcgtgagg ctccggtgcc 420

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atggccgctg tacgtgattc ttgatcccga gcttcgggtt ggaagtgggt gggagaggtc 780

gaggccttgc acttaaggag tcccttcgcc tcgtgcttga gtcgaggcct ggcttgggct 840

ctggggctgc cgcgtgcgaa tctggtagca ccttcgcgcc tgccccgctg ctttcactaa 900

gtttctagcc atttaaaatt tttgatgacc agctgcaacg ccttttttct ggcgagataa 960

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cagccaggcc cggggctcaa gcccagtgtc actagacctc atcattccct tcctgaggcc 2040

agggtgctgt gtcctggtgt ggcggtcaga tgtccagttt gcctggaagc acctcttgtg 2100

tccagatgtc tcttacgggg gttcgggtgg ctcaggcgga ggatccggat ctgatgaagt 2160

tgatggatca gagcccaaat cttcagacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc 2220

tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat 2280

gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga 2340

ggtcaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg 2400

ggaggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga 2460

ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat 2520

cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc 2580

cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt 2640

ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa 2700

gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt 2760

ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct 2820

gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaataaa aataatctag 2880

aggcgcgcct taaaacagct ctggggttgt acccacccca gaggcccacg tggcggctag 2940

tactccggta ttgcggtacc cttgtacgcc tgttttatac tcccttcccg taacttagac 3000

gcacaaaacc aagttcaata gaagggggta caaaccagta ccaccacgaa caagcacttc 3060

tgtttccccg gtgatgtcgt atagactgct tgcgtggttg aaagcgacgg atccgttatc 3120

cgcttatgta cttcgagaag cccagtacca cctcggaatc ttcgatgcgt tgcgctcagc 3180

actcaacccc agagtgtagc ttaggctgat gagtctggac atccctcacc ggtgacggtg 3240

gtccaggctg cgttggcggc ctacctatgg ctaacgccat gggacgctag ttgtgaacaa 3300

ggtgtgaaga gcctattgag ctacataaga atcctccggc ccctgaatgc ggctaatccc 3360

aacctcggag caggtggtca caaaccagtg attggcctgt cgtaacgcgc aagtccgtgg 3420

cggaaccgac tactttgggt gtccgtgttt ccttttattt tattgtggct gcttatggtg 3480

acaatcacag attgttatca taaagcgaat tggattgcgg ccgcccaagc ttgggcggcc 3540

gcccattatg tgatcagggg agcgcgtcat ggccttacca gtgaccgcct tgctcctgcc 3600

gctggccttg ctgctccacg ccgccaggcc gagccagttc cgggtgtcgc cgctggatcg 3660

gacctggaac ctgggcgaga cagtggagct gaagtgccag gtgctgctgt ccaacccgac 3720

gtcgggctgc tcgtggctct tccagccgcg cggcgccgcc gccagtccca ccttcctcct 3780

atacctctcc caaaacaagc ccaaggcggc cgaggggctg gacacccagc ggttctcggg 3840

caagaggttg ggggacacct tcgtcctcac cctgagcgac ttccgccgag agaacgaggg 3900

ctactatttc tgctcggccc tgagcaactc catcatgtac ttcagccact tcgtgccggt 3960

cttcctgcca gcgaagccca ccacgacgcc agcgccgcga ccaccaacac cggcgcccac 4020

catcgcgtcg cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc cggccagcgg cggggggcgc 4080

agtgcacacg agggggctgg acttcgcctg tgatatctac atctgggcgc ccctggccgg 4140

gacttgtggg gtccttctcc tgtcactggt tatcaccctt tactgcaacc acaggtaagg 4200

atctggggtg gcatccctgt gacccctccc cagtgcctct cctggccctg gaagttgcca 4260

ctccagtgcc caccagcctt gtcctaataa aattaagttg catcattttg tctgactagg 4320

tgtccttcta taatattatg gggtggaggg gggtggtatg gagcaagggg caagttggga 4380

agacaacctg tagggcctgc ggggtctatt gggaaccaag ctggagtgca gtggcacaat 4440

cttggctcac tgcaatctcc gcctcctggg ttcaagcgat tctcctgcct cagcctcccg 4500

agttgttggg attccaggca tgcatgacca ggctcagcta atttttgttt ttttggtaga 4560

gacggggttt caccatattg gccaggctgg tctccaactc ctaatctcag gtgatctacc 4620

caccttggcc tcccaaattg ctgggattac aggcgtgaac cactgctccc ttccctgtcc 4680

ttctgatttt aaaataacta taccagcagg aggacgtcca gacacagcat aggctacctg 4740

gccatgccca accggtggga catttgagtt gcttgcttgg cactgtcctc tcatgcgttg 4800

ggtccactca gtagatgcct gttaagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt 4860

ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca 4920

ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt 4980

agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt 5040

ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg 5100

cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt 5160

gcaaaaacgt tctgcagacg agccgtcgag atccgtgcca tcatggttcg accattgaac 5220

tgcatcgtcg ccgtgtccca aaatatgggg attggcaaga acggagacct accctggcct 5280

ccgctcagga acgagttcaa gtacttccaa agaatgacca caacctcttc agtggaaggt 5340

aaacagaatc tggtgattat gggtaggaaa acctggttct ccattcctga gaagaatcga 5400

cctttaaagg acagaattaa tatagttctc agtagagaac tcaaagaacc accacgagga 5460

gctcattttc ttgccaaaag tttggatgat gccttaagac ttattgaaca accggaattg 5520

gcaagtaaag tagacatggt ttggatagtc ggaggcagtt ctgtttacca ggaagccatg 5580

aatcaaccag gccacctcag actctttgtg acaaggatca tgcaggaatt tgaaagtgac 5640

acgtttttcc cagaaattga tttggggaaa tataaacttc tcccagaata cccaggcgtc 5700

ctctctgagg tccaggagga aaaaggcatc aagtataagt ttgaagtcta cgagaagaaa 5760

gactaacagg aagatgcttt caagttctct gctcccctcc taaagctatg catttttata 5820

agaccatggg acttttgctg gctttagatc ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt 5880

ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca 5940

attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc 6000

acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc 6060

atcaatgtat cttatcatgt ctggagagag actagtagag agtatcgata gagagcgatc 6120

gaattaattc gtaatcatgt catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat 6180

tccacacaac atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag 6240

ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg 6300

ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc 6360

ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc 6420

agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa 6480

catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt 6540

tttccatagg ctcggccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg 6600

gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgttcccc cctggaagct ccctcgtgcg 6660

ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag 6720

cgtggcgctt tctcaatgct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc 6780

caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa 6840

ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg 6900

taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc 6960

taactacggc tacactagaa ggacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac 7020

cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg 7080

tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt 7140

gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt 7200

catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa 7260

atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct taatcagtga 7320

ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac tgcccgtcgt 7380

gtagataact acgatacggg agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg 7440

agacccacgc tcaccggctc cagatttatc agcaataaac cagccagccg gaagggccga 7500

gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatccgc ctccatccag tctattaatt gttgccggga 7560

agctagagta agtagttcgc cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg 7620

catcgtggtg tcacgctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc 7680

aaggcgagtt acatgatccc ccatgttgtg aaaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc 7740

gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca 7800

taattctctt actgtcatgc catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac 7860

caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg 7920

ggataatacc gcgccacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc 7980

ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg 8040

tgcacccaac tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac 8100

aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat 8160

actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata 8220

catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa 8280

agtgccacct gggtcctttt catcacgtgc tataaaaata attataattt aaatttttta 8340

atataaatat ataaattaaa aatagaaagt aaaaaaagaa attaaagaaa aaatagtttt 8400

tgttttccga agatgtaaaa gactctaggg ggatcgccaa caaatactac cttttatctt 8460

gctcttcctg ctctcaggta ttaatgccga attgtttcat cttgtctgtg tagaagacca 8520

cacacgaaaa tcctgtgatt ttacatttta cttatcgtta atcgaatgta tatctattta 8580

atctgctttt cttgtctaat aaatatatat gtaaagtacg ctttttgttg aaatttttta 8640

aacctttgtt tatttttttt tcttcattcc gtaactcttc taccttcttt atttactttc 8700

taaaatccaa atacaaaaca taaaaataaa taaacacaga gtaaattccc aaattattcc 8760

atcattaaaa gatacgaggc gcgtgtaagt tacaggcaag cgatccgtcc taagaaacca 8820

ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt cgtctcgcgc 8880

gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt 8940

gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg 9000

ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata 9060

ccaccttttc aattcatcat ttttttttta ttcttttttt tgatttcggt ttctttgaaa 9120

tttttttgat tcggtaatct ccgaacagaa ggaagaacga aggaaggagc acagacttag 9180

attggtatat atacgcatat gtagtgttga agaaacatga aattgcccag tattcttaac 9240

ccaactgcac agaacaaaaa cctgcaggaa acgaagataa atcatgtcga aagctacata 9300

taaggaacgt gctgctactc atcctagtcc tgttgctgcc aagctattta atatcatgca 9360

cgaaaagcaa acaaacttgt gtgcttcatt ggatgttcgt accaccaagg aattactgga 9420

gttagttgaa gcattaggtc ccaaaatttg tttactaaaa acacatgtgg atatcttgac 9480

tgatttttcc atggagggca cagttaagcc gctaaaggca ttatccgcca agtacaattt 9540

tttactcttc gaagacagaa aatttgctga cattggtaat acagtcaaat tgcagtactc 9600

tgcgggtgta tacagaatag cagaatgggc agacattacg aatgcacacg gtgtggtggg 9660

cccaggtatt gttagcggtt tgaagcaggc ggcagaagaa gtaacaaagg aacctagagg 9720

ccttttgatg ttagcagaat tgtcatgcaa gggctcccta tctactggag aatatactaa 9780

gggtactgtt gacattgcga agagcgacaa agattttgtt atcggcttta ttgctcaaag 9840

agacatgggt ggaagagatg aaggttacga ttggttgatt atgacacccg gtgtgggttt 9900

agatgacaag ggagacgcat tgggtcaaca gtatagaacc gtggatgatg tggtctctac 9960

aggatctgac attattattg ttggaagagg actatttgca aagggaaggg atgctaaggt 10020

agagggtgaa cgttacagaa aagcaggctg ggaagcatat ttgagaagat gcggccagca 10080

aaactaaaaa actgtattat aagtaaatgc atgtatacta aactcacaaa ttagagcttc 10140

aatttaatta tatcagttat taccctgcgg tgtgaaatac cgcacagatg cgtaaggaga 10200

aaataccgca tcaggaaatt gtaaacgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt 10260

gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa 10320

aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa 10380

agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac 10440

gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga 10500

accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa 10560

aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc 10620

tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcgcgccatt 10680

cgccattcag gctgcgcaac tgttgggaag ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac 10740

gccagctggc gaagggggga tgtgctgcaa ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt 10800

cccagtcacg acgttgtaaa acgacggcca gtgagtgacg ttgcattagt tattaatagt 10860

aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta 10920

cggtaaatgg cccgcct 10937

<210>179

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>179

cgaggcaccc caaggatttc ag 22

<210>180

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>180

aggccctgcc acccaccttc 20

<210>181

<211>38

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>181

cgtacgggcc ggccaccatg gggagctcca gactggca 38

<210>182

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>182

tgacgaggcg cgcctcaacc taggtctgca agt 33

<210>183

<211>9159

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>哺乳动物表达载体

<220>

<221>misc_feature

<222>7226

<223>n＝A，T，C or G

<400>183

cagtcacgac gttgtaaaac gacggccagt gagtgacgtt gcattagtta ttaatagtaa 60

tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt tccgcgttac ataacttacg 120

gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc cattgacgtc aataatgacg 180

tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac gtcaatgggt ggagtattta 240

cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata tgccaagtac gccccctatt 300

gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc agtacatgac cttatgggac 360

tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt 420

tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac 480

cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc aatgaaagac cccacctgta ggtttggcaa 540

gctagcttaa gtaacgccat ttgcaaggca tggaaaaata cataactgag aatagagaag 600

ttcagatcaa ggtcaggaac agagaaacag gagaatatgg gccaaacagg atatctgtgg 660

taagcagttc ctgccccgct cagggccaag aacagttgga acaggagaat atgggccaaa 720

caggatatct gtggtaagca gttcctgccc cgctcagggc caagaacaga tggtccccag 780

atcggtcccg ccctcagcag tttctagaga accatcagat gtttccaggg tgccccaagg 840

acctgaaatg accctgtgcc ttatttgaac taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt 900

cgcgcgcttc tgctccccga gctcaataaa agagcccaca acccctcact cggcgcgcca 960

gtcctccgat agactgcgtc gcccggggct agcggctcgt ggatctcagc tacaggtaag 1020

gggctcacag tagcaggctt gaggtctggc catatacatc ggtgacattg acatccactt 1080

tgcctttctc tccacaggtg tcctcgagaa ttcatatagg ccggccacca tggatgcaat 1140

gaagagaggg ctctgctgtg tgctgctgct gtgtggcgcc gtcttcgttt cgctcagcca 1200

ggaaatccat gccgagttga gacgcttccg tagaaaataa tctagaggcg cgccttaaaa 1260

cagctctggg gttgtaccca ccccagaggc ccacgtggcg gctagtactc cggtattgcg 1320

gtacccttgt acgcctgttt tatactccct tcccgtaact tagacgcaca aaaccaagtt 1380

caatagaagg gggtacaaac cagtaccacc acgaacaagc acttctgttt ccccggtgat 1440

gtcgtataga ctgcttgcgt ggttgaaagc gacggatccg ttatccgctt atgtacttcg 1500

agaagcccag taccacctcg gaatcttcga tgcgttgcgc tcagcactca accccagagt 1560

gtagcttagg ctgatgagtc tggacatccc tcaccggtga cggtggtcca ggctgcgttg 1620

gcggcctacc tatggctaac gccatgggac gctagttgtg aacaaggtgt gaagagccta 1680

ttgagctaca taagaatcct ccggcccctg aatgcggcta atcccaacct cggagcaggt 1740

ggtcacaaac cagtgattgg cctgtcgtaa cgcgcaagtc cgtggcggaa ccgactactt 1800

tgggtgtccg tgtttccttt tattttattg tggctgctta tggtgacaat cacagattgt 1860

tatcataaag cgaattggat tgcggccgcc caagcttggg cggccgccca ttatgtgatc 1920

aggggagcgc gtcatggcct taccagtgac cgccttgctc ctgccgctgg ccttgctgct 1980

ccacgccgcc aggccgagcc agttccgggt gtcgccgctg gatcggacct ggaacctggg 2040

cgagacagtg gagctgaagt gccaggtgct gctgtccaac ccgacgtcgg gctgctcgtg 2100

gctcttccag ccgcgcggcg ccgccgccag tcccaccttc ctcctatacc tctcccaaaa 2160

caagcccaag gcggccgagg ggctggacac ccagcggttc tcgggcaaga ggttggggga 2220

caccttcgtc ctcaccctga gcgacttccg ccgagagaac gagggctact atttctgctc 2280

ggccctgagc aactccatca tgtacttcag ccacttcgtg ccggtcttcc tgccagcgaa 2340

gcccaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc 2400

cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg 2460

gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccctg gccgggactt gtggggtcct 2520

tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caaccacagg taaggatctg gggtggcatc 2580

cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca 2640

gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata 2700

ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg 2760

cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa 2820

tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc 2880

aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca 2940

tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca 3000

aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtccttctg attttaaaat 3060

aactatacca gcaggaggac gtccagacac agcataggct acctggccat gcccaaccgg 3120

tgggacattt gagttgcttg cttggcactg tcctctcatg cgttgggtcc actcagtaga 3180

tgcctgttaa gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag 3240

caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc 3300

caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag 3360

tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc 3420

cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc 3480

tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aacgttctgc 3540

agacgagccg tcgagatccg tgccatcatg gttcgaccat tgaactgcat cgtcgccgtg 3600

tcccaaaata tggggattgg caagaacgga gacctaccct ggcctccgct caggaacgag 3660

ttcaagtact tccaaagaat gaccacaacc tcttcagtgg aaggtaaaca gaatctggtg 3720

attatgggta ggaaaacctg gttctccatt cctgagaaga atcgaccttt aaaggacaga 3780

attaatatag ttctcagtag agaactcaaa gaaccaccac gaggagctca ttttcttgcc 3840

aaaagtttgg atgatgcctt aagacttatt gaacaaccgg aattggcaag taaagtagac 3900

atggtttgga tagtcggagg cagttctgtt taccaggaag ccatgaatca accaggccac 3960

ctcagactct ttgtgacaag gatcatgcag gaatttgaaa gtgacacgtt tttcccagaa 4020

attgatttgg ggaaatataa acttctccca gaatacccag gcgtcctctc tgaggtccag 4080

gaggaaaaag gcatcaagta taagtttgaa gtctacgaga agaaagacta acaggaagat 4140

gctttcaagt tctctgctcc cctcctaaag ctatgcattt ttctaagacc atgggacttt 4200

tgctggcttt agatcataat cagccatacc acatttgtag aggttttact tgctttaaaa 4260

aacctcccac acctccccct gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt tgttgttaac 4320

ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat 4380

aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat 4440

catgtctgga tctagatatc gatgaattaa ttcgtaatca tgtcatagct gtttcctgtg 4500

tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa 4560

gcctggggtg cctaatgagt gaggtaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct 4620

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ttaagccgct aaaggcatta tccgccaagt acaatttttt actcttcgaa gacagaaaat 9480

ttgctgacat tggtaataca gtcaaattgc agtactctgc gggtgtatac agaatagcag 9540

aatgggcaga cattacgaat gcacacggtg tggtgggccc aggtattgtt agcggtttga 9600

agcaggcggc agaagaagta acaaaggaac ctagaggcct tttgatgtta gcagaattgt 9660

catgcaaggg ctccctatct actggagaat atactaaggg tactgttgac attgcgaaga 9720

gcgacaaaga ttttgttatc ggctttattg ctcaaagaga catgggtgga agagatgaag 9780

gttacgattg gttgattatg acacccggtg tgggtttaga tgacaaggga gacgcattgg 9840

gtcaacagta tagaaccgtg gatgatgtgg tctctacagg atctgacatt attattgttg 9900

gaagaggact atttgcaaag ggaagggatg ctaaggtaga gggtgaacgt tacagaaaag 9960

caggctggga agcatatttg agaagatgcg gccagcaaaa ctaaaaaact gtattataag 10020

taaatgcatg tatactaaac tcacaaatta gagcttcaat ttaattatat cagttattac 10080

cctgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggaaattgta 10140

aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac 10200

caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg 10260

agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa 10320

gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt 10380

tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt 10440

agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga 10500

gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc 10560

gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt 10620

tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa ggggggatgt 10680

gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttcc 10719

<210>185

<211>51

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>185

ctctgatcca tcaacttcat cagatccgtg tctgtaagag acatccggac a 51

<210>186

<211>11199

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>表达载体

<220>

<221>misc_feature

<222>9266

<223>n＝A，T，C or G

<400>186

cagtcacgac gttgtaaaac gacggccagt gagtgacgtt gcattagtta ttaatagtaa 60

tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt tccgcgttac ataacttacg 120

gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc cattgacgtc aataatgacg 180

tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac gtcaatgggt ggagtattta 240

cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata tgccaagtac gccccctatt 300

gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc agtacatgac cttatgggac 360

tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt 420

tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac 480

cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc aatgaaagac cccacctgta ggtttggcaa 540

gctagcttaa gtaacgccat ttgcaaggca tggaaaaata cataactgag aatagagaag 600

ttcagatcaa ggtcaggaac agagaaacag gagaatatgg gccaaacagg atatctgtgg 660

taagcagttc ctgccccgct cagggccaag aacagttgga acaggagaat atgggccaaa 720

caggatatct gtggtaagca gttcctgccc cgctcagggc caagaacaga tggtccccag 780

atcggtcccg ccctcagcag tttctagaga accatcagat gtttccaggg tgccccaagg 840

acctgaaatg accctgtgcc ttatttgaac taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt 900

cgcgcgcttc tgctccccga gctcaataaa agagcccaca acccctcact cggcgcgcca 960

gtcctccgat agactgcgtc gcccggggct agcggctcgt ggatctcagc tacaggtaag 1020

gggctcacag tagcaggctt gaggtctggc catatacatc ggtgacattg acatccactt 1080

tgcctttctc tccacaggtg tcctcgagaa ttcatatagg ccggccacca tggatgcaat 1140

gaagagaggg ctctgctgtg tgctgctgct gtgtggcgcc gtcttcgttt cgctcagcca 1200

ggaaatccat gccgagttga gacgcttccg tagagctggg attggctttc gccacctgcc 1260

ccactggaac acccgctgtc ctctggcctc ccacacggat gacagtttca ctggaagttc 1320

tgcctatatc ccttgccgca cctggtgggc cctcttctcc acaaagcctt ggtgtgtgcg 1380

agtctggcac tgttcccgct gtttgtgcca gcatctgctg tcaggtggct caggtcttca 1440

acggggcctc ttccacctcc tggtgcagaa atccaaaaag tcttccacat tcaagttcta 1500

taggagacac aagatgccag cacctgctca gaggaagctg ctgcctcgtc gtcacctgtc 1560

tgagaagagc catcacattt ccatcccctc cccagacatc tcccacaagg gacttcgctc 1620

taaaaggacc caaccttcgg atccagagac atgggaaagt cttcccagat tggactcaca 1680

aaggcatgga ggacccgagt tctcctttga tttgctgcct gaggcccggg ctattcgggt 1740

gaccatatct tcaggccctg aggtcagcgt gcgtctttgt caccagtggg cactggagtg 1800

tgaagagctg agcagtccct atgatgtcca gaaaattgtg tctgggggcc acactgtaga 1860

gctgccttat gaattccttc tgccctgtct gtgcatagag gcatcctacc tgcaagagga 1920

cactgtgagg cgcaaaaaat gtcccttcca gagctggcca gaagcctatg gctcggactt 1980

ctggaagtca gtgcacttca ctgactacag ccagcacact cagatggtca tggccctgac 2040

actccgctgc ccactgaagc tggaagctgc cctctgccag aggcacgact ggcataccct 2100

ttgcaaagac ctcccgaatg ccacggctcg agagtcagat gggtggtatg ttttggagaa 2160

ggtggacctg cacccccagc tctgcttcaa gttctctttt ggaaacagca gccatgttga 2220

atgcccccac cagactgggt ctctcacatc ctggaatgta agcatggata cccaagccca 2280

gcagctgatt cttcacttct cctcaagaat gcatgccacc ttcagtgctg cctggagcct 2340

cccaggcttg gggcaggaca ctttggtgcc ccccgtgtac actgtcagcc aggcccgggg 2400

ctcaagccca gtgtcactag acctcatcat tcccttcctg aggccagggt gctgtgtcct 2460

ggtgtggcgg tcagatgtcc agtttgcctg gaagcacctc ttgtgtccag atgtctctta 2520

cgggggttcg ggtggctcag gcggaggatc cggatctgat gaagttgatg gatcagagcc 2580

caaatcttca gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg 2640

accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc 2700

tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg 2760

gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa 2820

cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa 2880

ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc 2940

caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga 3000

gctgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat 3060

cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt 3120

gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg 3180

gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac 3240

gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa ataaaaataa tctagaggcg cgccttaaaa 3300

cagctctggg gttgtaccca ccccagaggc ccacgtggcg gctagtactc cggtattgcg 3360

gtacccttgt acgcctgttt tatactccct tcccgtaact tagacgcaca aaaccaagtt 3420

caatagaagg gggtacaaac cagtaccacc acgaacaagc acttctgttt ccccggtgat 3480

gtcgtataga ctgcttgcgt ggttgaaagc gacggatccg ttatccgctt atgtacttcg 3540

agaagcccag taccacctcg gaatcttcga tgcgttgcgc tcagcactca accccagagt 3600

gtagcttagg ctgatgagtc tggacatccc tcaccggtga cggtggtcca ggctgcgttg 3660

gcggcctacc tatggctaac gccatgggac gctagttgtg aacaaggtgt gaagagccta 3720

ttgagctaca taagaatcct ccggcccctg aatgcggcta atcccaacct cggagcaggt 3780

ggtcacaaac cagtgattgg cctgtcgtaa cgcgcaagtc cgtggcggaa ccgactactt 3840

tgggtgtccg tgtttccttt tattttattg tggctgctta tggtgacaat cacagattgt 3900

tatcataaag cgaattggat tgcggccgcc caagcttggg cggccgccca ttatgtgatc 3960

aggggagcgc gtcatggcct taccagtgac cgccttgctc ctgccgctgg ccttgctgct 4020

ccacgccgcc aggccgagcc agttccgggt gtcgccgctg gatcggacct ggaacctggg 4080

cgagacagtg gagctgaagt gccaggtgct gctgtccaac ccgacgtcgg gctgctcgtg 4140

gctcttccag ccgcgcggcg ccgccgccag tcccaccttc ctcctatacc tctcccaaaa 4200

caagcccaag gcggccgagg ggctggacac ccagcggttc tcgggcaaga ggttggggga 4260

caccttcgtc ctcaccctga gcgacttccg ccgagagaac gagggctact atttctgctc 4320

ggccctgagc aactccatca tgtacttcag ccacttcgtg ccggtcttcc tgccagcgaa 4380

gcccaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc 4440

cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg 4500

gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccctg gccgggactt gtggggtcct 4560

tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caaccacagg taaggatctg gggtggcatc 4620

cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca 4680

gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata 4740

ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg 4800

cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa 4860

tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc 4920

aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca 4980

tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca 5040

aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtccttctg attttaaaat 5100

aactatacca gcaggaggac gtccagacac agcataggct acctggccat gcccaaccgg 5160

tgggacattt gagttgcttg cttggcactg tcctctcatg cgttgggtcc actcagtaga 5220

tgcctgttaa gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag 5280

caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc 5340

caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccatag 5400

tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc 5460

cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc 5520

tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aacgttctgc 5580

agacgagccg tcgagatccg tgccatcatg gttcgaccat tgaactgcat cgtcgccgtg 5640

tcccaaaata tggggattgg caagaacgga gacctaccct ggcctccgct caggaacgag 5700

ttcaagtact tccaaagaat gaccacaacc tcttcagtgg aaggtaaaca gaatctggtg 5760

attatgggta ggaaaacctg gttctccatt cctgagaaga atcgaccttt aaaggacaga 5820

attaatatag ttctcagtag agaactcaaa gaaccaccac gaggagctca ttttcttgcc 5880

aaaagtttgg atgatgcctt aagacttatt gaacaaccgg aattggcaag taaagtagac 5940

atggtttgga tagtcggagg cagttctgtt taccaggaag ccatgaatca accaggccac 6000

ctcagactct ttgtgacaag gatcatgcag gaatttgaaa gtgacacgtt tttcccagaa 6060

attgatttgg ggaaatataa acttctccca gaatacccag gcgtcctctc tgaggtccag 6120

gaggaaaaag gcatcaagta taagtttgaa gtctacgaga agaaagacta acaggaagat 6180

gctttcaagt tctctgctcc cctcctaaag ctatgcattt ttctaagacc atgggacttt 6240

tgctggcttt agatcataat cagccatacc acatttgtag aggttttact tgctttaaaa 6300

aacctcccac acctccccct gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt tgttgttaac 6360

ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat 6420

aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat 6480

catgtctgga tctagatatc gatgaattaa ttcgtaatca tgtcatagct gtttcctgtg 6540

tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa 6600

gcctggggtg cctaatgagt gaggtaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct 6660

ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga 6720

ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc 6780

gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa 6840

tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt 6900

aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctcggcc cccctgacga gcatcacaaa 6960

aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttc 7020

ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg 7080

tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcaat gctcacgctg taggtatctc 7140

agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc 7200

gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta 7260

tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct 7320

acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc 7380

tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa 7440

caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa 7500

aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa 7560

aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt 7620

ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac 7680

agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc 7740

atagttgcct gactgcccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc 7800

cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata 7860

aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc 7920

cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc 7980

aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca 8040

ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgaaaaaaa 8100

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ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt 8220

tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt 8280

tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg 8340

ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga 8400

tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc 8460

agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg 8520

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ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg 8640

gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgggtcct tttcatcacg tgctataaaa 8700

ataattataa tttaaatttt ttaatataaa tatataaatt aaaaatagaa agtaaaaaaa 8760

gaaattaaag aaaaaatagt ttttgttttc cgaagatgta aaagactcta gggggatcgc 8820

caacaaatac taccttttat cttgctcttc ctgctctcag gtattaatgc cgaattgttt 8880

catcttgtct gtgtagaaga ccacacacga aaatcctgtg attttacatt ttacttatcg 8940

ttaatcgaat gtatatctat ttaatctgct tttcttgtct aataaatata tatgtaaagt 9000

acgctttttg ttgaaatttt ttaaaccttt gtttattttt ttttcttcat tccgtaactc 9060

ttctaccttc tttatttact ttctaaaatc caaatacaaa acataaaaat aaataaacac 9120

agagtaaatt cccaaattat tccatcatta aaagatacga ggcgcgtgta agttacaggc 9180

aagcgatccg tcctaagaaa ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat 9240

cacgaggccc tttcgtctha bvrrtnrmat tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc 9300

tctgacacat gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca 9360

gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg 9420

cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc accacgcttt tcaattcaat tcatcatttt 9480

ttttttattc ttttttttga tttcggtttc tttgaaattt ttttgattcg gtaatctccg 9540

aacagaagga agaacgaagg aaggagcaca gacttagatt ggtatatata cgcatatgta 9600

gtgttgaaga aacatgaaat tgcccagtat tcttaaccca actgcacaga acaaaaacct 9660

gcaggaaacg aagataaatc atgtcgaaag ctacatataa ggaacgtgct gctactcatc 9720

ctagtcctgt tgctgccaag ctatttaata tcatgcacga aaagcaaaca aacttgtgtg 9780

cttcattgga tgttcgtacc accaaggaat tactggagtt agttgaagca ttaggtccca 9840

aaatttgttt actaaaaaca catgtggata tcttgactga tttttccatg gagggcacag 9900

ttaagccgct aaaggcatta tccgccaagt acaatttttt actcttcgaa gacagaaaat 9960

ttgctgacat tggtaataca gtcaaattgc agtactctgc gggtgtatac agaatagcag 10020

aatgggcaga cattacgaat gcacacggtg tggtgggccc aggtattgtt agcggtttga 10080

agcaggcggc agaagaagta acaaaggaac ctagaggcct tttgatgtta gcagaattgt 10140

catgcaaggg ctccctatct actggagaat atactaaggg tactgttgac attgcgaaga 10200

gcgacaaaga ttttgttatc ggctttattg ctcaaagaga catgggtgga agagatgaag 10260

gttacgattg gttgattatg acacccggtg tgggtttaga tgacaaggga gacgcattgg 10320

gtcaacagta tagaaccgtg gatgatgtgg tctctacagg atctgacatt attattgttg 10380

gaagaggact atttgcaaag ggaagggatg ctaaggtaga gggtgaacgt tacagaaaag 10440

caggctggga agcatatttg agaagatgcg gccagcaaaa ctaaaaaact gtattataag 10500

taaatgcatg tatactaaac tcacaaatta gagcttcaat ttaattatat cagttattac 10560

cctgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggaaattgta 10620

aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac 10680

caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg 10740

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gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt 11100

tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa ggggggatgt 11160

gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttcc 11199

Claims

1.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：9。

2.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：12。

3.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414。

4.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：21的氨基酸残基24至414。

5.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：23。

6.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437。

7.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：122。

8.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414。

9.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414。

10.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：113。

11.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：115。

12.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：117。

13.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含SEQ ID NO：119。

14.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含含有SEQ ID NO：115的第一多肽和含有选自SEQ ID NO：117和119的多肽的第二多肽。

15.权利要求14的分离的ZcytoR21可溶性受体，其中所述第二多肽包含SEQ ID NO：117。

16.权利要求14的分离的ZcytoR21可溶性受体，其中所述第二多肽包含SEQ ID NO：119。

17.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含含有SEQ ID NO：117的第一多肽和含有选自SEQ ID NO：115和119的多肽的第二多肽。

18.权利要求17的分离的ZcytoR21可溶性受体，其中所述第二多肽包含SEQ ID NO：115。

19.权利要求17的分离的ZcytoR21可溶性受体，其中所述第二多肽包含SEQ ID NO：119。

20.分离的ZcytoR21可溶性受体，其包含含有SEQ ID NO：119的第一多肽和含有选自SEQ ID NO：115和117的多肽的第二多肽。

18.权利要求20的分离的ZcytoR21可溶性受体，其中所述第二多肽包含SEQ ID NO：115。

21.权利要求17的分离的ZcytoR21可溶性受体，其中所述第二多肽包含SEQ ID NO：117。

22.包含ZcytoR21的分离的可溶性受体，其中ZcytoR21包含具有选自下列的氨基酸残基序列的多肽：SEQ ID NO：9、12、23、122、113、115、117、119，SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414，SEQ ID NO：21的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437，SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414，和SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414，并且其中所述可溶性受体降低了IL-17C(SEQ ID NO：17)的活性。

23.抗体或抗体片段，其结合具有选自下列的氨基酸残基序列的多肽：SEQ ID NO：9、12、23、122、113、115、117、119，SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414，SEQ ID NO：21的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437，SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414，和SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414，并且其中所述可溶性受体降低了IL-17C(SEQ ID NO：17)的活性。

24.根据权利要求23的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是(a)多克隆抗体、(b)鼠类单克隆抗体、(c)来源于(b)的人源化抗体、(d)抗体片段或(e)人单克隆抗体。

25.根据权利要求23的抗体或抗体片段，其中所述抗体进一步包含放射性核素、酶、底物、辅助因子、荧光标记物、化学发光标记物、肽标签、磁性颗粒、药物或毒素。

26.权利要求24的抗体，其中所述抗体进一步包含PEG化。

27.用于治疗需要此类治疗的患者中免疫介导的疾病的方法，其包含施用包含可溶性ZcytoR21受体的药物组合物的步骤。

28.权利要求27的方法，其中所述可溶性ZcytoR21受体是具有选自下列的氨基酸残基序列的多肽：SEQ ID NO：9、12、23、122、113、115、117、119，SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414，SEQ ID NO：21的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437，SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414，和SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414。

29.减少IL-17C介导的炎症的方法，其包含给具有炎症的哺乳动物施用足以减少炎症的量的根据权利要求23的抗体的组合物。

30.减少IL-17C介导的炎症的方法，其包含给具有炎症的哺乳动物施用足以减少炎症的量的包含ZcytoR21可溶性受体的组合物，其中所述ZcytoR21可溶性受体包含具有选自下列的氨基酸残基序列的多肽：SEQID NO：9、12、23、122、113、115、117、119，SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414，SEQ ID NO：21的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437，SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414，和SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414。

31.治疗遭受IL-17C在其中起作用的炎性疾病的哺乳动物的方法，其包含：

给所述哺乳动物施用ZcytoR21的拮抗剂以减少炎症，其中所述拮抗剂包含(i)特异性结合ZcytoR21的多肽或多肽片段的抗体、抗体片段或结合多肽，或(ii)ZcytoR21的多肽或多肽片段；并且

其中IL-17C的炎症活性被降低。

32.权利要求31的方法，其中所述疾病是哮喘。

33.权利要求31的方法，其中所述疾病是慢性炎性疾病。

34.权利要求33的方法，其中所述疾病是慢性炎性疾病，包含炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、关节炎、特应性皮炎或牛皮癣。

35.权利要求31的方法，其中所述疾病是急性炎性疾病。

36.权利要求35的方法，其中所述疾病是急性炎性疾病，包含内毒素血症、败血症、中毒性休克综合征或传染性疾病。

37.权利要求31的方法，其中所述抗体、抗体片段或结合多肽进一步包含放射性核素、酶、底物、辅助因子、荧光标记物、化学发光标记物、肽标签、磁性颗粒、药物或毒素。

38.治疗受试者中与ZcytoR21活性关联的病理状态的方法，其包含施用有效量的ZcytoR21可溶性受体，其中所述ZcytoR21可溶性受体包含具有选自下列的氨基酸残基序列的多肽：SEQ ID NO：9、12、23、122、113、115、117、119，SEQ ID NO：21的氨基酸残基136至414，SEQ IDNO：21的氨基酸残基24至414，SEQ ID NO：107的氨基酸残基159至437，SEQ ID NO：109的氨基酸残基136至414，和SEQ ID NO：109的氨基酸残基24至414，从而治疗所述病理状态。

39.权利要求38的方法，其中所述病理状态是哮喘。

40.权利要求38的方法，其中所述病理状态是慢性炎性病状。

41.权利要求40的方法，其中所述慢性炎性病状包含炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、关节炎、特应性皮炎或牛皮癣。

42.权利要求38的方法，其中所述病理状态是急性炎性病状。

43.权利要求42的方法，其中所述急性炎性病状包含内毒素血症、败血病、中毒性休克综合征或传染性疾病。

44.治疗遭受ZcytoR21在其中起作用的炎性疾病的哺乳动物的方法，其包含：

给哺乳动物施用ZcytoR21的拮抗剂以减少炎症，其中所述拮抗剂包含特异性结合ZcytoR21的多肽或多肽片段的抗体、抗体片段、ZcytoR21可溶性受体或结合多肽，并且

其中炎症活性被降低。

45.权利要求44的方法，其中所述疾病是哮喘。

46.权利要求44的方法，其中所述疾病是慢性炎性疾病。

47.权利要求46的方法，其中所述疾病是慢性炎性疾病，包含炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、关节炎、特应性皮炎或牛皮癣。

48.权利要求44的方法，其中所述疾病是急性炎性疾病。

49.权利要求48的方法，其中所述疾病是急性炎性疾病，包含内毒素血症、败血病、中毒性休克综合征或传染性疾病。

50.权利要求44的方法，其中所述抗体、抗体片段或结合多肽进一步包含放射性核素、酶、底物、辅助因子、荧光标记物、化学发光标记物、肽标签、磁性颗粒、药物或毒素。

51.权利要求44的方法，其中所述抗体、抗体片段或结合多肽进一步包含PEG化。