CN101068553A - 用于治疗新生血管性疾病的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供治疗新生血管性疾病(例如视网膜新生血管性疾病和肿瘤)的组合物和方法，所述方法通过给予罹患新生血管性疾病或肿瘤的患者血管发育抑制量的血管生成抑制药物的组合，所述药物组合包含色氨酰－tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和至少一种选自血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的化合物。所述方法中使用的组合物包含色氨酰－tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段、和血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂中至少一种、以及药学上可接受的赋形剂的混合物。

Description

用于治疗新生血管性疾病的组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2004年6月4日申请的美国临时专利申请顺序号60/577,156的权益，并要求于2004年7月1日申请的美国临时专利申请顺序号60/585,273的权益，还要求于2005年2月24日申请的美国临时专利申请顺序号60/655,801的权益，所述临时申请都通过引用结合到本文中。

政府权利声明

本文所述的部分工作由美国国立卫生院(National Institutes ofHealth)资助，资助号为EY11254。美国政府在本发明中享有一定的权利。

发明领域

本发明涉及新生血管性疾病(neovascular disease)(例如视网膜新生血管性疾病)的治疗。更具体地讲，本发明涉及通过给予患者血管生成抑制(angiostatic)药和抗血管生成药的组合治疗新生血管性疾病的方法，还涉及用于所述方法的组合物。

发明背景

引起灾难性视力减退的许多疾病都是由眼部新血管形成所致。例如，年龄相关性黄斑变性(ARMD)侵袭1200-1500万年龄超过65岁的美国人，其中10-15％的视力减退是脉络膜(视网膜下)新血管形成的直接结果。65岁以下美国人视力减退的主要原因是糖尿病；在美国有1600万糖尿病人，且每年有40,000人罹患该病的眼部并发症，通常是视网膜新血管形成的结果。虽然激光光凝术能有效预防高危糖尿病患者群体的严重视力减退，但是视网膜病的10年总发病率依然基本保持不变。对于伴有因ARMD或炎性眼病(例如眼部组织胞浆菌病)所致的脉络膜新血管形成的患者而言，除了极少例外，光凝术对预防视力减退来说无效。虽然新近开发的无创性光动力学疗法有望用于暂时性减少伴有先前无法治疗的脉络膜新血管形成的患者的视力减退，但是在每3-4个月接受治疗的患者中仅61.4％视力有改善或稳定，相比之下安慰剂治疗组为45.9％。

ARMD和糖尿病性视网膜病是工业化国家视力减退的主要原因，这是异常视网膜新血管形成的结果。因为视网膜由神经元、神经胶质和血管元件的清晰各层组成，所以相对小的扰乱(例如在血管增殖或水肿时可见的扰乱)都会导致明显的视力功能减退。遗传性视网膜变性，例如视网膜色素变性(RP)，也与血管异常(例如小动脉狭窄和血管萎缩)有关。尽管在促进和抑制血管生成的因子的鉴定方面已经取得显著进展，但是目前尚无可用的治疗方法能针对性治疗眼部血管病。

遗传性视网膜变性侵害1/3500的个体，其特征是渐进性夜盲、视野减小、视神经萎缩、小动脉缩窄(arteriolar attenuation)、血管渗透性改变和常常发展为全盲的中心视力减退(central loss of vision)(Heckenlively，J.R.编辑，1988；Retinitis Pigmentosa，Philadelphia：JBLippincott Co.)。对这些疾病进行分子遗传学分析，已经在超过110个不同基因中鉴定出突变，在已知侵害个体中仅占相当少百分比(Humphries等，1992，Science 256：804-808；Farrar等2002，EMBO J.21：857-864.)。这些突变中许多都与光传导机制的酶组分和结构组分相关，包括视紫红质、cGMP磷酸二酯酶、rds外周蛋白和RPE65。尽管有这些观察结果，但是仍无有效治疗方法能减慢或逆转这些视网膜变性病的进程。基因治疗的最新进展业已导致将野生型转基因传递给具有特定突变的动物的光受体或视网膜色素上皮(RPE)时在小鼠中成功逆转rds(Ali等2000，Nat.Genet.25：306-310)和rd(Takahashi等1999，J.Virol.73：7812-7816)表型，并且在狗中能成功逆转RPE65表型(Acland等，2001，Nat.Genet.28：92-95)。

血管生成是新血管形成过程。对特定化学信号应答，毛细血管从现有血管上出芽，最终生长成生物体所需的大小。最初，血管内衬的内皮细胞以现有血管的垂直方向分裂，形成实体芽(solid sprout)。相邻内皮细胞再形成大的空泡，细胞重排，使空泡以首尾相连的方向排列，最终汇合形成新毛细血管的内腔(管形成，tube formation)。

在脊椎动物(例如哺乳动物)中，血管生成受各种条件的刺激(例如响应伤口)并伴随几乎所有组织的生长。血管生成在某些疾病状态(例如某些癌症)中也起作用。例如，肿瘤的生长就需要血管生长，从而为不断生长的肿瘤组织提供氧气和营养。另外，眼部新血管形成与导致灾难性视力减退的大量眼病有关。

血管生成可因刺激血管生成过程的化学信号的干扰而停止或被抑制。例如，血管生成性内皮细胞产生蛋白酶，消化围绕在血管周围的基底膜，从而为新毛细血管扫清道路。抑制这些蛋白酶或者抑制其形成，可预防新血管的形成。同样，内皮细胞响应化学信号而增殖。特别重要的增殖信号包括血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)蛋白质家族。已经知道VEGF参与某些肿瘤的血管形成。干扰这些增殖信号传导过程也可抑制血管生成。

若干因子参与血管生成。酸性成纤维细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子分子都是内皮细胞和其它细胞类型的促分裂原。血管内皮细胞的一种高选择性促分裂原是VEGF。

在正常成体中，血管生成受到严格控制，仅限于伤口愈合、妊娠和子宫周期。血管生成是由特异性血管生成分子启动，所述分子例如碱性成纤维细胞生长因子和酸性成纤维细胞生长因子(FGF)、VEGF、血管生成素、转化生长因子(TGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血小板衍生生长因子(PDGF)。血管生成可受到抑制分子的抑制，所述抑制分子例如干扰素-α、血小板反应蛋白-1、血管生长抑素和内皮生长抑素。正是这些天然刺激剂与抑制剂的平衡，控制着正常静息的毛细血管血管形成。当这种平衡被扰乱时，例如在某些疾病状态下，毛细血管内皮细胞受到诱导而增殖、迁移并最终分化。

血管生成在各种疾病(包括癌症和眼部新血管形成)中起到主要作用。也已经表明，各种肿瘤的持续生长和转移都依赖于宿主新血管响应肿瘤衍生的血管生成因子而向肿瘤内部的生长。响应各种刺激而发生新血管的增殖，这是在大多数致盲眼病中的主要发现，所述眼病包括增殖性糖尿病性视网膜病、ARMD、虹膜红变性青光眼、间质性角膜炎和早熟性视网膜病。在这些疾病中，组织损伤可刺激血管生成因子的释放，导致毛细血管增殖。VEGF在虹膜新血管形成和新生血管性视网膜病中起到主要作用。尽管报告清楚表明眼内VEGF水平与缺血性视网膜病性眼部新血管形成之间有相关性，但是FGF可能也起作用。已知碱性FGF和酸性FGF存在于正常成体视网膜中，虽然其检出水平并不总是与新血管形成相关。这可能主要是因为以下事实：FGF与带电荷的胞外基质组分非常紧密地结合，可能不容易成为能用眼内液标准测定法检出的自由扩散形式。

血管生成应答中的最终共同途径涉及由整联蛋白介导的、增殖性血管内皮细胞与胞外基质之间的信息交换。称为整联蛋白的这类粘附受体在所有细胞上表达为具有α亚基和β亚基的异二聚体。一种这样的整联蛋白α_vβ₃是该家族最混杂的成员，允许内皮细胞与各种各样的胞外基质组分相互作用。该整联蛋白的肽拮抗剂和抗体拮抗剂通过选择性诱导增殖的血管内皮细胞的细胞凋亡而抑制血管生成。存在两种细胞因子依赖性血管生成途径，可以根据它们对不同血管细胞整联蛋白α_vβ₃、α_vβ₅的依赖性而定义。具体地讲，碱性FGF和VEGF所诱导的血管生成分别依赖于整联蛋白α_vβ₃和α_vβ₅，因为在兔角膜和鸡绒毛尿囊膜(CAM)模型中，各整联蛋白的抗体拮抗剂选择性阻断这些血管生成途径之一。阻断所有α_v整联蛋白的肽拮抗剂抑制FGF和VEGF所刺激的血管生成。尽管正常人眼血管并不存在任一种整联蛋白，但是α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白却选择性地存在于活动性新生血管性眼病患者组织的血管中。尽管在ARMD患者组织中仅持续观察到α_vβ₃的存在，但是α_vβ₃和α_vβ₅都存在于增殖性糖尿病性视网膜病患者组织中。在视网膜血管形成的小鼠模型中，系统性给予整联蛋白肽拮抗剂能阻断新血管形成。

因此，抗血管生成剂在治疗视网膜变性、以预防这些营养因子和生长因子的损害效应方面具有作用。在促进想要的血管生成、通过加大通向细胞的血流而延迟视网膜变性方面，血管生成剂也具有作用。

大量研究工作增进了我们对疾病发展期间血管生成机制的了解，这些研究的结果使得大量血管生成抑制分子已经或正在进行临床试验测定。然而，迄今为止，这些临床试验的结果仍是令人失望的，这些抗血管生成治疗对患者的益处至多也是很小的。

在血管生成抑制疗法最终获得成功之前，需要考虑许多因素。天然代偿机制可能最终使血管生成单一疗法不起作用。血管生成抑制药通常靶向单一的细胞因子或胞内血管生成途径。在体内，血管生成可能由多途径的联合信号传导而引发。因此，在新生血管性疾病治疗过程中，阻断单一途径可能并不足以阻止血管生成。更为复杂的是，阻断单一途径也可能诱导代偿和其它血管生成途径作用增加。

现已经发现，同时给予靶向不同途径的血管生成抑制化合物的组合，能增强血管生成抑制效力，并且也能干扰天然代偿机制。

发明概述

本发明提供通过给予罹患新生血管性疾病的哺乳动物其剂量足以抑制新血管形成的血管生成抑制药的组合，治疗新生血管性疾病(例如视网膜新生血管性疾病)的组合物和方法。这些药物可以是色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)的血管生成抑制片段和治疗药的组合。优选治疗药是VEGF信号传导抑制剂、整联蛋白信号传导抑制剂或其组合。另外，治疗药可包括血管生成抑制类固醇、抗肿瘤药、抗菌药、抗病毒药和抗炎药等。优选的哺乳动物是人。

一个特别优选的方法实施方案包括给予罹患新生血管性疾病的哺乳动物血管发育抑制量的药物混合物，所述混合物包含TrpRS的血管生成抑制片段(例如本文所述的T1片段、T2片段或小TrpRS片段)和至少一种选自以下的化合物：VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂。用于该目的的另一优选实施方案是T2-TrpRS血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂(例如VEGF适体)和整联蛋白信号传导抑制剂(例如α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白信号传导抑制剂)的三重组合。一个特别优选的三重组合包含人TrpRS的T2片段、对VEGF-165具有专一性的VEGF适体(例如pegaptanib sodium)和肽模拟(peptidemimetic)α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白信号传导抑制剂(例如本文所述的化合物(1))。对于抑制哺乳动物眼内新血管形成来说，这一具体的三重组合表现出强烈的协同效应。

可用本发明方法治疗的新生血管性疾病包括但不限于新生儿、青少年或完全成熟的哺乳动物的眼病，例如视网膜变性病、视网膜血管变性病、缺血性视网膜病、血管出血、血管渗漏和脉络膜病。本发明的方法也可用于治疗例如新生血管性疾病如实体瘤(例如肺癌、乳癌和前列腺癌)和类风湿性关节炎。

可用于抑制血管生成并因此治疗新生血管性疾病的治疗用组合物包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的混合物，以及其药学上可接受的赋形剂及载体。任选本发明的治疗用组合物也可包含一种或多种血管生成抑制类固醇、抗肿瘤药、抗菌药、抗病毒药、抗炎药等治疗药。

附图简述

图1描绘色氨酰-tRNA合成酶血管生成抑制片段(称为T2-TrpRS)的氨基酸序列SEQ ID NO：1和T2-TrpRS-GD的氨基酸序列SEQ IDNO：2(其突变体)。

图2描绘色氨酰-tRNA合成酶血管生成抑制片段(称为小(mini)TrpRS)的氨基酸序列SEQ ID NO：3和Tl-TrpRS的氨基酸序列SEQ IDNO：4。

图3描绘全长TrpRS的氨基酸序列(SEQ ID NO：5)，并显示出其T1、T2及小片段的位置。

图4描绘实施例1的对照小鼠(经玻璃体内注射PBS)的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图5描绘实施例1的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射(A)0.5x浓度(10mg/ml)的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)；(B)1x浓度(2mg/ml)的VEGF适体化合物(2)；和(C)整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)和VEGF适体化合物(2)的组合。

图6描绘实施例2的对照小鼠(经玻璃体内注射磷酸缓冲盐水(PBS))的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图7描绘实施例2的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.1x浓度(0.05mg/ml)的T2-TrpRS。

图8描绘实施例2的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.1x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图9描绘实施例2的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.1x浓度的T2-TrpRS和0.1x浓度的VEGF适体化合物(2)的组合。

图10描绘实施例3的对照小鼠(经玻璃体内注射PBS)的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图11描绘实施例3的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS。

图12描绘实施例3的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图13描绘实施例3的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS和1x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图14描绘实施例4的对照小鼠(经玻璃体内注射磷酸缓冲盐水(PBS))的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图15描绘实施例4的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS。

图16描绘实施例4的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.5x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图17描绘实施例4的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS和0.5x浓度的VEGF适体化合物(2)的组合。

图18描绘实施例5的对照小鼠(经玻璃体内注射PBS)的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图19描绘实施例5的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS。

图20描绘实施例5的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)。

图21描绘实施例5的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS和0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)的组合。

图22描绘实施例6的对照小鼠(经玻璃体内注射PBS)的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图23描绘实施例6的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS。

图24描绘实施例6的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图25描绘实施例6的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)。

图26描绘实施例6的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS和1x浓度的VEGF适体化合物(2)的组合。

图27描绘实施例6的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS和0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)的组合。

图28描绘实施例6的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS、0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)和正常浓度的VEGF适体化合物(2)的组合。

图29描绘实施例7的对照小鼠(经玻璃体内注射PBS)的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图30描绘实施例7的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS。

图31描绘实施例7的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图32描绘实施例7的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)。

图33描绘实施例7的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)和1x浓度的VEGF适体化合物(2)的组合。

图34描绘实施例7的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS、0.5x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)和1x浓度的VEGF适体化合物(2)的组合。

图35描绘实施例9的对照小鼠(经玻璃体内注射PBS)的视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片。

图36描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)。

图37描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的VEGF适体化合物(2)。

图38描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS。

图39描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射各1x浓度的T2-TrpRS和肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)。

图40描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射各1x浓度的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)和VEGF适体化合物(2)。

图41描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射各1x浓度的T2-TrpRS和VEGF适体化合物(2)的组合。

图42描绘实施例9的小鼠视网膜第一和第二血管层的光学显微镜照片，所述小鼠经玻璃体内注射各1x浓度的抑制剂T2-TrpRS、肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)和VEGF适体化合物(2)的组合。

图43是T2-TrpRS剂量实验数据的图示；

图44是VEGF-适体剂量实验数据的图示；

图45是数据的图示，表明对深部血管丛(deep vascular plexus)形成的抑制，随单独或联合给予的最佳浓度的VEGF适体和T2-TrpRS化合物而变；

图46是α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白拮抗剂剂量实验数据的图示。

图47是数据的图示，表明对深部血管丛形成的抑制，随单独或联合给予的最佳浓度的小分子α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白拮抗剂和T2-TrpRS而变；

图48是数据图示总结，表明在不同疗法组合中对深部血管丛形成的抑制；

图49数据的图示，表明在不同疗法组合中对深部血管丛形成的抑制程度；

图50是图49所示剂量水平时的不同疗法及其组合中的第一和深部(第二)血管层的一系列光学显微镜照片；

图51是不同剂量水平的三重组合疗法对血管丛形成的抑制水平的图示；

图52是类似于图51的图示，但是表明抑制＞75％、＞90％和100％；

图53是比较各种剂量水平下单一疗法和组合疗法对血管丛形成的抑制水平的图示；

图54是比较各种剂量水平下单一疗法和组合疗法对血管丛形成的75％、＞90％和100％抑制水平的图示；

图55是数据的图示，表明新血管簇(neovascular tuft)的面积随不同单一疗法和三重组合疗法而变，所述三重组合疗法采用单次注射治疗药；

图56类似于图55，但是数据来自两次注射治疗药；

图57是数据的图示，表明新血管簇的面积随不同单一疗法、双重疗法和三重疗法而变；

图58是一系列光学显微镜照片，显示经单一或联合血管生成抑制化合物治疗的小鼠视网膜；

图59显示VEGF适体化合物(2)(SEQ ID NO：6)即pegaptanibsodium的结构；和

图60显示用本发明组合物治疗(方块)的荷瘤大鼠与仅用PBS治疗(三角)的对照大鼠的存活率图。

优选实施方案的详细描述

适于治疗新生血管性疾病的组合物包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和治疗药。优选治疗药包含至少一种抗血管生成剂，其选自VEGF信号传导抑制剂(例如VEGF适体)和整联蛋白信号传导抑制剂(例如血管生成抑制性整联蛋白拮抗剂)。

优选的TrpRS血管生成抑制片段包括43kDa片段(例如T2片段，即“T2-TrpRS”，SEQ ID NO：1；T2-TrpRS的突变体，即“T2-TrpRS-GD”，SEQ ID NO：2；这两个片段都见图1)、48kDa片段(例如截短的TrpRS，称为小TrpRS(SEQ ID NO：3，见图2))和46kDa片段(例如截短的TrpRS，称为T1-TrpRS(SEQ ID NO：4，见图2))。T2-TrpRS-GD氨基酸残基序列(SEQ ID NO：2)与SEQ ID NO：1的不同之处在于两个氨基酸残基取代(即S121G和Y122D)。全长人TrpRS氨基酸残基序列(SEQ ID NO：5)见图3，并且标明了其T1、T2及小片段的位置。尽管不受理论的束缚，但据信TrpRS血管生成抑制片段可形成非共价二聚体(参见例如Yu等，J.Biol.Chem.2004，279：8378-8388)，这可能促成片段的生物活性。因此，本文和所附权利要求中提及TrpRS血管生成抑制片段(例如T1-TRpRS、T2-TrpRS、小-TrpRS)时都应被解释为指单体形式、二聚体形式或其混合物。

优选的整联蛋白信号传导抑制剂是α_vβ₃拮抗剂和α_vβ₅拮抗剂，包括RGD肽和肽模拟整联蛋白拮抗剂，前者例如为描述于以下文献的RGD肽：美国专利第5,693,612号、美国专利第5,766,591号、美国专利第5,767,071号、美国专利第5,780,426号和美国专利第6,610,826号，所述专利的相关公开内容通过引用结合到本文中；后者例如为描述于以下文献的拮抗剂：美国专利第5,614,531号、美国专利第5,614,535号、美国专利第6,326,403号、美国专利第6,455,529号、美国专利第6,521,646号、美国专利第6,559,144号、美国专利第6576,637号、美国专利第6,602,876号、美国专利第6,645,991号和美国专利第6,649,613号，所述专利的相关公开内容通过引用结合到本文中。一种特别优选的肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂是具有下式化合物(1)的化合物，所述化合物得自Merck KGaA(Darmstadt，Germany)，称为EMD 472523。

化合物(1)

优选的VEGF信号传导抑制剂包括VEGF-选择性适体(蛋白质结合寡核苷酸)，优选与VEGF-165结合的核酸酶抗性适体，例如与VEGF-165结合的基于2′-氟嘧啶RNA的适体，参见Ruckman等，J.Biol.Chem.1998，273：20556-20567(所述文献的相关公开内容通过引用结合到本文中)等；与VEGF结合的抗VEGF抗体及其片段，例如可得自Genentech(San Francisco，CA)的Rhu及其Fab片段(RhuFab V2)；可溶性VEGF受体(例如可溶性VEGFR1)；和靶向VEGF或其受体的小干扰RNA(siRNA)，例如Reich等，Mol.Vis.2003；9：210-216所述的siRNA(所述文献的相关公开内容通过引用结合到本文中。优选的VEGF信号传导抑制剂是核酸酶抗性VEGF适体，更优选对VEGF-165具有特异性的基于2′-氟嘧啶RNA的适体，例如pegaptanib sodium(化合物(2))，这是一种具有下式的聚乙氧基化寡核苷酸(SEQ ID NO：6；图59，图59中的R为40千道尔顿聚乙二醇(PEG)链)：5′-40K PEG-C5氨基接头-CfGmGmArArUfCfAmGmUfGmAmAmUfGmCfUfUfAmUfAmCfAmUfCfCfGm3′-3′dT

其中    Cf＝2′氟C      Ar＝2′OH(ribo)A

        Uf＝2′氟U      3′-3′dT＝反转的脱氧T

        Am＝2′OMe A    C5氨基接头＝戊基氨基接头

        Gm＝2′OMe G    40K PEG＝40K聚乙二醇酰胺

SEQ ID NO：6的一种聚乙氧基化寡核苷酸是EyetechPharmaceuticals，Inc.的市售产品，商标名为MACUGEN，也称为NX 1838或pegaptanib sodium。

在一个实施方案中，药物组合也包含至少一种额外的治疗药，例如血管生成抑制类固醇、抗肿瘤药、抗菌药、抗病毒药、抗炎药等。

合适的血管生成抑制类固醇的实例包括醋酸阿奈可他和曲安奈德。

合适的抗肿瘤药的实例包括阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；甲磺酸双奈法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；C放线菌素；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉曲滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎呱宁；甲磺酸地扎呱宁；地吖醌；多西他赛；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸酯钠；依他硝唑；乙碘油I 131；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；胶体金(Gold Au 198)；羟基脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸伊立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙立德；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美登素；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仑；美诺立尔；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替派；米丁度胺；米托卡星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；麦考酚酸；诺考达唑；诺拉霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普罗美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌罗霉素；盐酸嘌罗霉素；吡唑呋林；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素、盐酸锗螺胺；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；氯化锶Sr 89；磺氯苯脲；他利霉素；紫杉烷；Taxoid；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；替米嘌呤；硫鸟嘌呤；塞替派；噻唑呋林；替拉扎明；盐酸托泊替康；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；乌拉莫司汀；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗新；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；和净司他丁；盐酸佐柔比星。

合适的抗菌药的实例包括但不限于青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、单菌环胺类、利福霉素类、四环素类、氯霉素类、氯林肯霉素、林可霉素、亚胺培南、夫西地酸、新生霉素、磷霉素、夫西地酸钠、新霉素、多粘菌素、卷曲霉素、甲磺酸多粘菌素E、多粘菌素E、短杆菌肽、米诺环素、多西环素、万古霉素、杆菌肽、卡那霉素、庆大霉素、红霉素和头孢菌素。

合适的抗炎药的实例包括但不限于阿司匹林(乙酰水杨酸)、吲哚美辛、吲哚美辛钠三水合物、水杨酰胺、萘普生、秋水仙碱、非诺洛芬、舒林酸、二氟尼柳、双氯芬酸、吲哚洛芬和水杨酰胺钠。

合适的抗病毒药的实例包括但不限于α-甲基-P-金刚烷甲胺、1-D-呋喃核糖基-1，2，4-三唑-3-甲酰胺、9-(2-羟基-乙氧基)甲基鸟嘌呤、金刚烷胺、5-碘-2′-脱氧尿苷、三氟胸苷、干扰素、阿糖胞苷、CD4、3′-叠氮基-3′-脱氧胸苷(AZT)、9-(2-羟基乙氧基甲基)-鸟嘌呤(阿昔洛韦)、膦甲酸、1-金刚烷胺、肽T和2′，3′二脱氧胞苷。

治疗新生血管性疾病的一个特别优选的方法包括给予罹患新生血管性疾病的哺乳动物血管发育抑制量的药物组合，所述药物组合包含T2-TrpRS、至少一种VEGF-165信号传导抑制剂和任选至少一种α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白信号传导抑制剂。

本发明方法可治疗的新生血管性疾病包括但不限于眼部新生血管性疾病(例如视网膜新生血管性疾病和脉络膜新生血管性疾病)、虹膜红变性青光眼、翼状胬肉(pterygia)、实体瘤(例如肺癌、乳癌和前列腺癌)、骨关节炎、类风湿性关节炎、血管异常和畸形(例如血管瘤、淋巴管瘤等)和银屑病。

治疗哺乳动物视网膜新生血管性疾病的本发明方法优选包括向患有新生血管性疾病的哺乳动物眼部经玻璃体内注射血管发育抑制量的抗血管生成和血管生成抑制组合物的组合，所述组合提供TrpRS的血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂。

该方法可用于治疗新生儿、青少年或完全成熟的哺乳动物的眼病，例如血管变性性疾病、缺血性视网膜病、血管出血、血管渗漏和脉络膜病。这类疾病的实例包括年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病、推测的眼部组织胞浆菌病、早熟性视网膜病、镰状细胞贫血、血管瘤、翼状胬肉、缺血性中央视网膜静脉阻塞、视网膜静脉分枝阻塞、眼黑素瘤、视网膜母细胞瘤和视网膜色素变性、以及视网膜损伤。

本发明的另一方面是用于治疗新生血管性疾病的治疗用组合物，所述组合物包含TrpRS血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

在一个优选的实施方案中，所述组合物还包含至少一种额外的治疗药，例如血管生成抑制类固醇、抗肿瘤药、抗菌药、抗病毒药、抗炎药等。

治疗新生血管性疾病的方法包括给予患有新生血管性疾病的哺乳动物血管发育抑制有效量的药物组合，所述药物组合包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和至少一种选自以下的化合物：血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂。

通常，对于系统治疗，血管发育抑制有效量的本发明组合物至少约为10μg/kg体重，在大多数情况下，不超过约8mg/kg体重/天。优选剂量范围为约10μg/kg体重至约1mg/kg体重/天。对于眼部经玻璃体内治疗人患者而言，优选剂量范围对于给定治疗为约0.1至约5毫克/眼。可以单剂量、或在一段时间内以多剂量给予组合物。在考虑到具体患者、组合物中含有的药物、疾病状态和医药领域众所周知的其它因素后，医药领域普通技术人员将能确定本发明组合物的最佳有效治疗剂量。

本发明的治疗用组合物具体可包括多种剂型。这些剂型包括例如固体、半固体和液体剂型，例如片剂、丸剂、粉剂、液体溶液剂或混悬剂、气溶胶、脂质体、栓剂、注射用溶液剂和输注用溶液剂以及缓释形式。根据既定的给药方式和待治疗的疾病，采用本领域众所周知的药理学原理，医药领域普通技术人员将会选择合适的剂型。

本发明的治疗用组合物可通过常规给药途径来给予，例如胃肠外、皮下、静脉内、肌内、病灶内、胸骨内、玻璃体内、颅内或气溶胶途径。也可采用局部给药途径，将组合物局部用于合适的机体特定部分(例如眼、皮肤、肠道下部、阴道、直肠)。治疗用组合物也包括本领域技术人员已知的常规药学上可接受的载体和赋形剂。

通常，可以采用用于组合物中存在的各类活性成分的类似方法和组合物，配制和给予本发明的治疗用组合物。本领域技术人员能理解，常规剂量将视组合物中的具体活性成分、以及患者健康状况、体重、年龄、性别、病症或疾病和所需给药方式而有所变化。

本发明的治疗用组合物包括药理学上合适的药学上可接受的载体、赋形剂和溶媒。一般而言，这些载体包括含水或含醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质，例如磷酸缓冲盐水(PBS)。胃肠外溶媒可包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖(Ringer′s dextrose)、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液(lactated Ringer′s)或固定油类。另外，静脉内溶媒可包括体液和营养补充液，以及电解质补充液，例如基于林格氏葡萄糖的溶媒。也可含有赋形剂(例如防腐剂和其它添加剂)，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体。合适的配制助剂、载体、其它赋形剂和配制药物组合物的方法公开于以下文献：Remington′s Pharmaceutical Sciences，第14版，Mack Publishing Co.，1970，特别是第VIII部分，″Pharmaceutical Preparations，and TheirManufacture″，第1461-1762页，所述文献的相关公开内容通过引用结合到本文中。

本发明的治疗用组合物可包装在合适的灭菌瓶或管形瓶中，可以是多剂量或单位剂量形式。在灌装本发明组合物后，优选将容器密封。优选将组合物包装在附有标签的容器中，标签表明组合物中含有的药物，并且带有注意事项，其形式符合政府部门(例如美国食品和药品管理局)的规定，反映了该组合物已得到合适法律的批准，剂量信息等。标签优选含有有关组合物的信息，这类信息对于将该组合物给予患者的卫生保健专家来说是有用的。包装还优选含有关于给予组合物、使用说明、适应症和任何必要警告的印刷信息资料。方法

新生小鼠视网膜血管生成模型

模型的描述。刚出生时(出生后第0天；“P0”)，小鼠实际上没有视网膜血管系统。出生后4周(P28)，视网膜已经达到视网膜血管的成年模式，同时开始有视觉。通过固定不变的血管生成两阶段发育模式，视网膜的生理性新血管形成在该时期内发生。在视网膜血管发育的第一阶段，辐条样(spoke-like)视乳头周血管自中央视网膜动脉和静脉呈放射状生长，逐渐通过它们之间形成的毛细血管丛相互连接。这种“内视网膜丛(inner retinal plexus)”在出生后最初7-10天期间在神经纤维层内在面积、体积和复杂性方面作为单层离心生长。

视网膜血管形成的第二阶段在出生后第7天(P7)和第10天(P10)开始，此时侧支从表面丛(superficial plexus)的毛细血管出芽并伸入视网膜内，在此它们的顶端分支并侧向联结而形成平面“深部血管丛”。到P14，深部血管丛就位，它在P14-P21经历广泛的结构重塑。值得注意的是：在新生小鼠中这些血管网的形成明显类似于3个月的人类胎儿中所发生的事件。

模型的优势和定量测定。鼠视网膜发育过程的可再现性及其在新生动物中的易得性(accessibility)，提供了用血管生成的生理相关模型评价抗血管生成化合物功效的机会。新生小鼠模型的额外优势是能够定性及定量评价推定的血管生成拮抗剂的血管生成抑制效果。根据在P8和P12间发育的视网膜深部外部血管层(第二层)的血管生成的程度，对血管生成抑制活性进行了评价。评价了内部血管网(第一层)外观的正常发育和毒性症状。在已进行的本文所述的任何测定中，皆未观察到内部血管层的异常情况。可以通过对对适当染色的离体视网膜表层和深层进行显微摄影，并测定深部血管层形成受到完全或部分抑制的眼睛的百分率，对第二层血管形成进行定性评价。本文所示的所有数据都基于对治疗后表现出75-100％视网膜深部血管网形成受抑制的眼睛的百分率的定量分析。在大多数情况下，也提供了表现出＞95％和100％深部视网膜血管网形成受抑制的小鼠百分率。

组合物的制备。将肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)溶于PBS中，PBS中的浓度约为20mg/ml(1x浓度)。将T2-TrpRS溶于PBS中，浓度约为0.5mg/ml(1x浓度)。将VEGF适体(pegaptanibsodium；化合物(2))溶于PBS中，浓度约为2mg/ml(1x浓度)，以达到以1x的浓度注射约1μg/眼。对于所有组合测定来说，以各种材料为2或3倍的1x浓度来制备化合物，然后将其混合以产生终溶液，终溶液所含各化合物的浓度与单用浓度相同(例如1x、0.5x、0.25x或0.1x，视情况而定)。对于所有测定，单次注射0.5μl含药物的PBS溶液是通过玻璃体内给药，无论所注射的化合物的量是多少。本文所用的术语“0.1x”是指给定材料1x浓度的1/10，“0.25x”是指给定材料1x浓度的1/4，“0.5x”是指给定材料1x浓度的1/2，以此类推。

氧诱发性视网膜病(OIR)的小鼠模型。该模型参见Smith，L.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.35，101-111(1994)。在P7-P12，将小鼠放在高氧(75％O₂)下，然后放回正常氧下。当处于高氧下，中央视网膜血管闭塞，深部血管无法形成。当放回正常氧下时，视网膜含氧低，导致病理性新血管形成。

在OIR模型中新血管形成的定量测定包括新血管簇(enovasculartuft)形成的定量测定，以及闭塞的定量测定。制备视网膜全封片，用同工凝集素GS-IB₄对其血管进行染色。进行共焦成像，刚好在表面血管丛上聚焦，得到4象限的剪辑画面。识别新生血管簇(AdobePHOTOSHOP)并对像素形成(pixelation)面积进行量化。另外，描绘闭塞面积(Adobe PHOTOSHOP)并对像素形成面积进行量化。然后采用基于图像获取的转换因数(分辨率、大小等)以获得数值(以μm²为单位)。

血管生成测定的通用方法

采用新生小鼠(Balb/C，The Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)体内血管生成测定，评价整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)、T2-TrpRS和VEGF适体化合物(2)的血管生成抑制活性。进行玻璃体内注射并用解剖显微镜(SMZ 645，Nikon，Japan)来分离视网膜。在出生后第7天(P7)，用精细刀片制作眼睑裂隙(eyelid fissure)以暴露眼球，以便注射。用装有32号针头的Hamilton注射器((Hamilton Company，Reno，NV)注射样品(0.5μl)。在中纬线(equator)和角膜缘之间进行注射。在注射过程中，直接用目测监测针头位置，确定它在玻璃体腔内。将由针头诱导的晶状体或视网膜损伤的眼从研究中剔出去。注射后，将眼睑复位以闭合裂隙。

在出生后第12天(P12)，对动物实施安乐死，然后摘除眼球。在4％低聚甲醛(PFA)中过约10分钟后，通过沿结膜缘切开(limbalincision)，切下角膜、晶状体、巩膜和玻璃体。制备分离的视网膜，如下对其进行染色：于冰上在甲醇中浸泡约10分钟，再在含有20％正常山羊血清(The Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)、50％胎牛血清(Gibco，Grand Island，NY)的PBS中于冰上封闭约1小时。将视网膜在约4℃、用含兔抗小鼠胶原IV抗体(Chemicon，Temecula，CA)(1∶200稀释度)的封闭缓冲液稀释或者用荧光缀合的同工凝集素(来自Griffonia simplicifolia，Molecular Probes)染色约18小时，可以特异性地显现血管。将ALEXA FLUOR(Alexa)594缀合的山羊抗兔IgG抗体(Molecular probes，Eugene，OR)(1∶200稀释度，用封闭缓冲液稀释)与视网膜一起在约4℃孵育约2小时。再用缓慢退色的封固介质(Molecular Probes，Eugene，OR)将视网膜封固，供显微镜评价用。

实施例1.用肽模拟整联蛋白信号传导抑制剂和VEGF信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照上述血管生成测定的通用方法(“通用方法”)，在出生后第8天(P8)，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射0.25x浓度的整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)(5只小鼠)、0.5x浓度的VEGF适体化合物(2)(5只小鼠)或者0.25x浓度的化合物(1)和0.5x浓度的化合物(2)的组合(6只小鼠)。作为对照，另一组6只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表1和图4和图5。

表1.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％
						PBS0.5x化合物(2)0.1x化合物(1)组合	100.020400	0200.517	020200	020200	0202083

实施例2.用TrpRS血管生成抑制片段和VEGF信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射0.1x浓度的T2-TrpRS(8只小鼠)、0.1x浓度的VEGF适体化合物(2)(8只小鼠)或者0.1x浓度的T2-TrpRS和0.1x浓度的化合物(2)的组合(10只小鼠)。作为对照，另一组8只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表2和图6、图7、图8和图9。

表2.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS0.1x化合物(2)0.1x T2-TrpRS组合	100.087.55010	012.537.530	0012.520	00020	00020	0000	0000

实施例3.用TrpRS血管生成抑制片段和VEGF信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS(8只小鼠)、1x浓度的VEGF适体化合物(2)(8只小鼠)或者1x浓度的T2-TrpRS和1x浓度的化合物(2)的组合(10只小鼠)。作为对照，另一组6只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表3和图10、图11、图12和图13。

表3.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS1x化合物(2)1x T2-TrpRS组合	10037.512.50	012.512.50	012.5010	012.512.510	02562.580	012.540	0012.520

实施例4.用TrpRS血管生成抑制片段和VEGF信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS(8只小鼠)、0.5x浓度的VEGF适体化合物(2)(10只小鼠)或者1x浓度的T2-TrpRS和0.5x浓度的化合物(2)的组合(10只小鼠)。作为对照，另一组的6只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表4和图14、图15、图16和图17。

表4.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS0.5x化合物(2)1x T2-TrpRS组合	66.66012.50	16.73037.50	16.7012.510	0012.510	002570	00030	00020

实施例5.用TrpRS血管生成抑制片段和整联蛋白信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS、0.5x浓度的整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)或者1x浓度的T2-TrpRS和0.5x浓度的化合物(1)的组合，各治疗方案每组6只小鼠。作为对照，另一组4只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表5和图18、图19、图20和图21。

表5.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS0.5x化合物(1)1x T2-TrpRS组合	505033.30	2533.316.733.3	2516.733.316.7	0000	0016.750	0016.716.7	0000

实施例6.用TrpRS血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS，0.5x浓度的整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)，1x浓度的VEGF适体化合物(2)，1x浓度的T2-TrpRS与0.5x浓度的化合物(1)的组合，1x浓度的T2-TrpRS与1x浓度的化合物(2)的组合，或者1x浓度的T2-TrpRS、0.5x浓度的化合物(1)和1x浓度的化合物(2)的组合，各治疗方案每组8只小鼠。作为对照，另一组8只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表6和图22、图23、图24、图25、图26、图27和图28。

表6.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS0.5x化合物(1)1x化合物(2)1x T2-TrpRST2-TrpRS+化合物(2)T2-TrpRS+化合物(1)T2-TrpRS+(1)和(2)	1005037.55025500	012.525252500	012.512.512.52500	012.52512.5000	012.5002550100	00002537.587.5	000012.52575

实施例7.用TrpRS血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS，0.5x浓度的整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)，1x浓度的VEGF适体化合物(2)，0.5x浓度的化合物(1)与1x浓度的化合物(2)的组合，或者1x浓度的T2-TrpRS、0.5x浓度的化合物(1)和1x浓度的化合物(2)的组合，各治疗方案每组8只小鼠。作为对照，另一组6只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表7和图29、图30、图31、图32、图33和图34。

表7.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS0.5x化合物(1)1x化合物(2)1x T2-TrpRS化合物(1)+(2)T2-TrpRS+(1)和(2)	10012.5252500	0252512.512.50	012.5012.512.50	012.512.50250	037.537.55050100	00012.52562.5	00002550

实施例8.用TrpRS血管生成抑制片段和VEGF信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS(10只小鼠)、0.25x浓度的VEGF适体化合物(2)(11只小鼠)，或者1x浓度的T2-TrpRS和0.25x浓度的化合物(2)的组合(11只小鼠)。作为对照，另一组8只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表8。

表8

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS0.25x化合物(2)1x T2-TrpRS组合	10054.53018.2	036.43018.2	00209.1	001018.2	09.11027.3	0000	0000

实施例9.用TrpRS血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的组合，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼(每组8只小鼠)经玻璃体内注射1x浓度的T2-TrpRS，1x浓度的整联蛋白信号传导抑制剂化合物(1)，1x浓度的VEGF适体化合物(2)，1x浓度的T2-TrpRS与1x浓度的化合物(1)的组合，1x浓度的化合物(1)与1x浓度的化合物(2)的组合，或者1x浓度的T2-TrpRS、1x浓度的化合物(2)和1x浓度的化合物(2)的组合。作为对照，另一组8只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。

结果见表9和图35-42。

表9.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS1x化合物(1)1x化合物(2)1x T2-TrpRS化合物(1)+T2-TrpRS化合物(1)+(2)T2-TrpRS+化合物(2)T2-TrpRS+(1)+(2)	75252512.5012.500	2512.50012.512.512.525	012.512.52512.5012.50	037.512.512.52512.512.50	012.550505062.562.575	002512.52562.537.575	0012.5012.5502562.5

实施例10.用不同剂量的TrpRS血管生成抑制片段，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼(每组8-12只小鼠)经玻璃体内注射T2-TrpRS，浓度为0.1x(8小鼠)、0.3x(12只小鼠)、1x(12只小鼠)、2x(12只小鼠)和3x(12只小鼠)。作为对照，另一组10只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表10。

表10.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％
						PBS0.1x T2-TrpRS0.3x T2-TrpRS1x T2-TrpRS2x T2-TrpRS3x T2-TrpRS	1007533.38.38.366.7	02516.716.72525	008.32508.7	0016.78.716.70	002541.741.70

实施例11.用不同剂量的TrpRS血管生成抑制片段，对新生小鼠眼进行治疗

按照通用方法，在P4，新生Balb/C小鼠眼(每组6-14只小鼠)经玻璃体内注射T2-TrpRS，浓度为0.3x(6只小鼠)、1x(14只小鼠)、2x(8只小鼠)、3x(7只小鼠)和5x(6只小鼠)。作为对照，另一组10只小鼠仅接受玻璃体内注射PBS。按照通用方法，在P12对小鼠实施安乐死，从注射眼中取出视网膜，染色，封固并用显微镜进行评价。根据与对照眼相比的血管形成百分率，评价第二(视网膜外部血管)层的血管分布。结果见表11。

表11.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％
						PBS0.3x T2-TrpRS1x T2-TrpRS2x T2-TrpRS3x T2-TrpRS5x T2-TrpRS	6033.314.312.514.316.6	4016.714.312.514.333.3	007.112.514.333.3	0014.312.528.516.6	050505028.50

上述实施例中表现出＞95％和100％抑制的小鼠的数据表明，即使包含选自TrpRS血管生成抑制片段、VEGF信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的至少两种物质的组合物，所提供的对新生小鼠眼模型新血管形成的抑制功效，都出乎意料地大于单个组分组合的简单加性效应的预期抑制水平。当不同实施例的结果合并于表12时，这一点也是明显的，表12编辑了各实施例中在1x-2x浓度的整联蛋白抑制剂化合物(1)，0.5x-1x的VEGF适体化合物(2)和1x的T2-TrpRS，以及包含化合物(1)、化合物(2)和T2-TrpRS中至少两种的组合的本发明组合物(抑制值为表12中的粗体字)的结果。各组的小鼠数量在各组的括号中标明。表12的数据清楚地表明，在用本发明组合物处理过的小鼠眼深部血管层中血管形成的抑制水平，出乎意料地高于用单个抑制剂本身治疗的抑制水平或其数值之和。

表12.来自实施例的综合数据.

％抑制：	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	75-100％	＞95％	100％
								PBS(38只小鼠)1x-2x化合物(1)(30只小鼠)1x化合物(2)(30只小鼠)1x T2-TrpRS(46只小鼠)化合物(1)+T2-TrpRS(22只小鼠)化合物(1)+(2)(16只小鼠)T2-TrpRS+化合物(2)(36只小鼠)T2-TrpRS+(1)+(2)(24只小鼠)	84.233.339.123.918.26.35.60	10.5202017.413.612.511.18.3	5.313.37.615.29.16.313.90	016.711.98.79.118.88.30	016.721.434.85056.361.191.7	004.78.727.343.733.379.2	002.42.213.637.519.462.5

实施例10和11(表10和11)的数据表明，T2-TrpRS的功效在约1x-2x浓度时达到最大值，而不能使超过50％小鼠其深部血管层被75-100％抑制。功效在2x和更高浓度时开始下降。因此，对于95-100％抑制水平而言，即使用增加的剂量，T2也不能提供大于约50％的功效。

实施例12.给予T2-TrpRS血管生成抑制片段、VEGF适体和肽模拟α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白信号传导抑制剂的协同效应

为了研究不同血管生成抑制分子组合的效果，采用已知靶向关键却各不相同的血管生成途径的以下3种血管生成抑制化合物：小分子整联蛋白α_vβ₃和α_vβ₅拮抗剂(化合物(1)；得自Merck KGaA，Darmstadt，Germany的“EMD 472523”)、VEGF165拮抗剂(化合物(2)；pegaptanib sodium)和色氨酸tRNA合成酶的截短形式(T2-TrpRS，得自Angiosyn Inc.，La Jolla，CA)。尽管T2-TrpRS的确切作用机制尚未完全阐明，但是该作用机制并不直接与VEGF或整联蛋白拮抗相关。

采用新生小鼠视网膜血管生成模型测试各单一疗法以及这些单个化合物的不同组合的功效。如上所述，小鼠出生时没有视网膜血管系统。在出生后头3周内，发育出成体样血管系统。视网膜血管系统形成3个独特的平面丛，而表面血管丛在出生后第1周内发育。在出生后第8天(P8)，表面丛的血管出现分支并向内核层外缘的深部丛迁移。为了测试各单一疗法或组合溶液的血管生成抑制性能，在P7，当表面网络形成接近完成、但在深部丛开始形成之前，进行玻璃体内注射。5天后(P12)分析对深部血管丛形成的影响。对于每个经注射视网膜的抑制程度进行评分，评为0-10％、10-25％、25-50％、50-75％或75-100％(图48)，而75-100％抑制组再分为＞90％和100％抑制水平(图49)。评价先前形成的第一血管丛(primary vascular plexus)的外观、以及整个视网膜形态，以评价毒性症状。

样品分离。在室温(I.A.)或-20℃(V.A.)下将α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白拮抗剂(化合物(1))以冻干粉剂形式贮存于干燥器中，临用前溶于无菌、无RNAse的1x PBS中。根据公开信息(Bridonneau等，J.Chromatogr.B.Diomed.Sci.App.726：237-47(1999))，将VEGF适体(化合物(1))合成为40kDa PEG缀合的化合物(Transgenomic Inc，Boulder，CO)。通过反相液相色谱测定化合物是纯的。本文报告的浓度是指活性VEGF适体的终浓度，而不是PEG缀合化合物的总浓度，浓度通过在260/280nm的分光光度分析而测定。按照Otani等，Proc.Nat′l.Acad.Sci.，USA 99：178-183(2002)和美国临时专利申请顺序号60/598,019(2004年8月2日申请)，将T2-TrpRS肽制备成重组化合物，所述文献通过引用全部结合到本文中。将纯化产物贮存于-20℃、50％甘油中，临用前对无菌1x PBS透析。先配制各单一化合物的3x贮液，再制备组合溶液。然后将化合物混合在一起，合适时加入PBS，制备含有各种所需化合物的终溶液，各化合物浓度相当于各相应单一疗法的浓度。

玻璃体内注射。所有动物研究工作都遵守有关人道护理和使用动物的严格方案指南。进行玻璃体内注射，解剖出视网膜，然后使血管系统显现。按照Smith等，Invest.Ophthalmot.Vis.Sci.，35：101-111(1994)所述方案诱导OIR，即通过将出生后第7天(P7)的幼仔及其母鼠暴露在75％氧(高氧)环境下达5天，再放回室内空气中(正常氧)。在放回正常氧之后，立即在P12进行玻璃体内注射，在P17分析视网膜。用与Alexa Fluor 594(Molecular Probes，1∶150稀释在PBS中)缀合的同工凝集素GS-IB₄(来自Griffonia simplicifolia(凝集素GS))，对血管进行染色。用4x物镜进行共焦成像，小心地刚好在视网膜内界膜之上聚焦，突显层前(pre-laminar)新生血管簇。从每个视网膜得到4个重叠图像，将各图像转化成2×2英寸大小，300像素/英寸。用视网膜全封片，通过遮盖单个新生血管簇，定量测定新生血管簇面积。根据血管簇的特征性外观和高密度的同工凝集素染色，用AdobePHOTOSHOP软件的魔杖工具(magic wand tool)对血管簇进行逐一选择。然后测定像素的总面积。将新生血管簇形成的面积相对于注射PBS的对照OIR视网膜归一化。

剂量。开始进行剂量实验，以确定每种单个化合物的最大功效剂量。发现各化合物都具有钟形功效曲线，整联蛋白拮抗剂的最佳有效剂量为5-10μg(10-20nmoles)/眼(图46)，VEGF适体的最佳有效剂量为1.0-2.0μg(108-215pmoles)/眼(图44)，T2-TrpRS的最佳有效剂量为0.25-0.5μg(5.2-10.4pmoles)/眼(图43)。然后，以最佳剂量进行各单一疗法的单次注射，并单次注射含有相等剂量的各化合物的合适组合的溶液，以比较血管生成抑制活性。在最大单个剂量时，约35％视网膜不受注射整联蛋白拮抗剂或VEGF适体的影响。其余67％视网膜基本上均匀落入10-25％、25-50％、50-75％或75％-100％的范围内(下表13A)。T2-TrpRS肽对深部血管网的抑制略好一些。注射T2-TrpRS肽的视网膜有24％发育出正常完整的深部血管丛，而注射T2-TrpRS肽的视网膜有35％表现出超过75％的抑制，相比之下注射整联蛋白拮抗剂和VEGF适体分别有17％和21％的抑制(下表13A)。当联合注射血管生成抑制化合物时，对新血管形成的血管生成抑制效果显著。与单一疗法相比，每种双重组合，即整联蛋白拮抗剂+T2-TrpRS、整联蛋白拮抗剂+VEGF适体以及T2-TrpRS+VEGF适体，都证明能显著改善血管生成抑制活性。用联合疗法，明显更少视网膜对血管生成抑制治疗有抗性。在大多数用任一双重组合治疗的视网膜中，超过75％的新血管形成被抑制(下表13A)。

当所有3种化合物一起以与相应单一疗法注射相同的最佳剂量注射时(1x三重组合)，超过90％的视网膜具有＞75％的抑制。与单一疗法或双重组合治疗的视网膜不同，所有用三重组合治疗的视网膜都表现出一定程度的新生血管抑制。另外，仅8％的注射视网膜仍具有显著水平的新血管形成。在其它92％注射三重组合化合物的视网膜中，观察到血管生成几乎完全被抑制(下表13A；图48)。当＞75％抑制类型细分为＞90％抑制和100％抑制水平时，血管生成抑制功效的差异变得更为明显(图49)。超过80％的注射三重组合的视网膜其深部血管丛形成受到大于90％的抑制，而有63％其新血管形成受到100％抑制，其中甚至未观察到一个新生血管出芽。这比起单一疗法和双重组合两者疗法来说有了显著的改善，单一疗法中在＜5％的受治疗视网膜中有100％的抑制。另外，在用三重组合治疗的视网膜中有许多其表面血管丛类似于正常的P7视网膜，而不是P12视网膜，这说明三重组合在注射后不久也就阻止了表面丛内血管的进一步生长。在任何单一或双重疗法治疗的视网膜中，未观察到对表面血管丛生长的抑制。在注射前已形成的表面血管丛内更靠近中心的血管仍保持正常，这表明对已经存在的血管系统的毒性水平可以忽略不计。另外，未观察到神经元毒性症状，且视网膜形态未改变，这表明注射三重组合溶液没有发生可观察的不良副作用。来自一个完整的代表性实验的表面和深部血管丛图像见图50。

为了分析协同效应并测试用较低剂量三重组合能否保持有效的血管生成抑制活性，测试了系列稀释液。当稀释至100倍(0.01x三重组合)时，三重组合对血管生成的抑制依然非常有效(下表13B；图52和53)。当以最佳剂量的1/10来混合各化合物以制备三重组合时，几乎80％受治疗的视网膜仍表现出＞75％抑制，50％的视网膜表现出完全抑制(100％)新血管形成。在0.1x浓度(1μg整联蛋白拮抗剂/眼、0.2μgVEGF适体/眼和0.025μg T2-TrpRS/眼)时，单个血管生成抑制化合物对新血管形成的抑制可忽略不计(下表13C；图54)。注射0.1x T2-TrpRS和0.1x VEGF适体双重组合后，观察到一些功效。然而，尽管该组合在所有测试的双重组合中对血管生成抑制是最有效的，但是其血管生成抑制活性与注射0.1x三重组合所观察到的抑制水平相比仍是很小的。

表13.

A.新生小鼠血管生成模型组合实验

具有新生血管抑制指定水平的视网膜的百分率

注射	N	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	＞75％	＞90％	100％
									PBS	38	84.2	10.5	5.3	0.0	0.0	0.0	0.0
5-10μg整联蛋白拮抗剂	30	33.3	20.0	13.3	16.7	16.7	0.0	0.0
									1-2μg VEGF适体	42	39.1	20.0	7.6	11.9	21.4	4.7	2.4
0.25μg T2-TrpRS	46	23.9	17.4	15.2	8.7	34.8	8.7	2.2
									T2-TrpRS+整联蛋白拮抗剂	22	18.2	13.6	9.1	9.1	50.0	27.3	13.6
整联蛋白拮抗剂+VEGF适体	21	6.3	12.5	6.3	18.8	56.3	43.7	28.5
									T2-TrpRS+VEFG适体	36	5.6	11.1	13.9	8.3	61.1	38.3	19.4
三重组合	24	0	8.3	0	0	91.7	83.2	62.6

B.三重组合系列稀释实验

注射	N	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	＞75％	＞90％	100％
									PBS	14	71.4	14.3	14.3	0.0	0.0	0.0	0.0
1x三重组合	16	0.0	0.0	0.0	7.1	92.8	71.4	57.1
									0.5x三重组合	16	0.0	0.0	0.0	0.5	100.0	87.5	50.0
0.25x三重组合	16	0.0	0.0	0.0	0.5	100.0	68.8	43.8
									0.1x三重组合	18	0.0	5.5	11.1	5.5	77.8	61.1	44.4
005x三重组合	10	0.0	10.0	20.0	20.0	50.0	30.0	20.0
									0.01x三重组合	10	10.0	10.0	30.0	30.0	20.0	20.0	10.0

C.低剂量单一疗法与组合实验

注射	N	0-10％	10-25％	25-50％	50-75％	＞75％	＞90％	100％
									PBS	8	100	0	0	0	0	0	0
0.1x整联蛋白拮抗剂(1.0μg)	10	90	10	0	0	0	0	0
									0.1x VEGF适体(0.20μg)	8	75	25	0	0	0	0	0
0.1x T2-TrpRS(0.025μg)	10	50	37.5	12.5	0	0	0	0
									01x T2-TtpRS+VEFG适体	10	10	30	20.0	20	20	0	0
0.1x三重组合	18	0	5.5	11.1	5.5	77.8	61.1	44.4

实施例13.“三重疗法”的协同效应

以上介绍的氧诱发性视网膜病(OIR)小鼠模型是低氧诱导的视网膜新血管形成的公认模型。相关的血管变化可以稳定地再现并可定量。近年来该模型的应用已经延伸到疾病相关性缺血性血管病和相关抗血管生成介入的一般性研究上。为了在另外的血管生成病理模型中研究这些血管生成抑制化合物的协同特性，在小鼠OIR模型中测试单一疗法和联合疗法对病理性新血管形成的效果。初步实验采用来自新生儿血管生成模型的最佳剂量。在各种情况下，与单一疗法相比，联合疗法都表现出血管生成抑制活性的改善。然而，由于各单一疗法的血管生成抑制活性，难以确定不同化合物组合的结果到底是协同效应还是简单的加性效应。因此，根据用新生小鼠视网膜血管生成模型所观察的结果(所述结果证明联合疗法在相对低剂量时有同样功效)，用最佳剂量的1/10来测试各单一疗法和不同联合疗法。此外，组合溶液中各化合物的浓度与相应单一疗法的浓度相等。在较低浓度下，单一治疗后未观察到对病理性新生血管簇形成有显著抑制。然而，在使用各双重组合时，观察到新生血管簇形成的显著减少(图57)。当整联蛋白拮抗剂与T2-TrpRS肽联用时，病理性血管簇形成减少了＞50％。整联蛋白拮抗剂与VEFG适体联用时血管簇形成减少了＞40％。与对照处理的视网膜相比，当T2-TrpRS肽与VEGF适体联用时，病理性新血管形成减少了几乎80％。许多用T2-TrpRS/VEGF适体双重组合治疗的视网膜看来几乎正常，实际上没有病理性新血管形成的证据(图58)。

将多种靶向不同血管生成途径的血管生成抑制化合物组合，已经证明血管生成抑制活性明显增加。甚至化合物以单一疗法中无活性的剂量联用后，在血管生成的发育模型和病理模型中也都观察到强血管生成抑制活性。这表明是协同效应，而不是简单的加性效应。该数据也表明，有效的临床抗血管生成疗法可能需要靶向多途径，靶向多途径还可为新生血管性疾病治疗提供新的范例。优选至少两种抗血管生成治疗联用(例如VEGF信号传导抑制剂(例如VEGF适体)与TrpRS血管生成抑制片段(例如TrpRS的T2片段)组合，并任选与整联蛋白拮抗剂组合。

在两个单独的血管生成模型中，通过靶向和抑制3种不同的血管形成途径，几乎达到完全抑制血管生成。对于使用血管生成抑制疗法以有效治疗血管生成相关疾病来说，完全抑制新血管形成可能是重要的。在我们的模型中，即便是单一疗法注射的最好结果通常也只阻断50-75％新血管生长。这意味着在大多数情况下，大量新血管形成仍然发育。相比之下，2/3的注射三重组合疗法的新生小鼠视网膜，其新生血管形成受到100％的完全抑制(表13)。同样，在病理性血管生成的OIR模型中，大部分经治疗的小鼠表现出极少或没有病理性新生血管簇形成(图58)。在癌症治疗期间，可能需要高水平抑制血管生成，以使肿瘤细胞完全饥饿并防止肿瘤进一步生长。仅抑制50％新生血管生长的单一疗法可能仅是减少、而不是切断快速生长的肿瘤细胞的氧和营养供给。尽管这可能在一开始会减缓生长，但是可能并不足以阻止肿瘤进一步生长。在这类情况下，在癌症治疗期间，可达到完全抑制新血管生成的联合疗法将极大地改善抗血管生成疗法的效果。另外，通过使用相对低剂量、同时保持强血管生成抑制潜力，可尽量减少由血管生成抑制治疗所带来的毒副作用的可能性。总之，上述数据证明了不同血管生成抑制分子联合用于治疗疾病相关的新血管形成的益处。

本发明的组合物及其使用方法提供了意想不到的有效治疗新方案，用于治疗新生血管性疾病、尤其是眼部新生血管性疾病。

实施例14.肿瘤治疗

多形性成胶质细胞瘤是一种无法治愈的恶性脑瘤，通常在诊断后一年内死亡。采用9L大鼠胶质细胞瘤细胞系作为恶性胶质瘤模型。在两类胶质瘤中，肿瘤高度血管化并浸润到正常脑组织内。当移植肿瘤细胞后，接受9L细胞脑内推注的未经治疗动物有大约3周的存活期。第0天，将约50,000细胞/约2μl Delbecco氏改良Eagles培养基(DMEM；Life Technologies，Gaithersburg，MD)立体定位接种到已用氯胺酮和赛拉嗪麻醉的CD 344 Fisher大鼠右额叶，从而建立脑内9L肿瘤。

第6天，在约2分钟内，将10μl本发明的组合物(4.5mg/l T2-TrpRS、30mg/l化合物(1)和6mg/l化合物(2)；pegaptanib sodium)立体定位推注到与9L细胞移植相同的脑区内。推注后，将一个泵插入肩胛骨间的皮下小袋中。将通过管道连接泵的导管插入到用于引入9L细胞的同一钻洞中，然后固定到位。各泵流速约8μl/小时。将附加量的本发明组合物连续泵入各动物的脑内达约24小时。连续泵入使组合物分布遍及已植入肿瘤细胞的整个大脑半球。9只大鼠接受本发明的化合物，仅接受PBS的9只大鼠作为对照组。

第13天，在肩胛骨间制作切口，取出泵并换上新泵。然后用新泵以相同的泵流速，用本发明的组合物或PBS再治疗24小时。与PBS治疗对照组相比，用本发明组合物治疗的大鼠的存活率增加21％(参见图60)。

可以对以上所述实施方案进行各种改变和修饰，只要不偏离本发明的新特征的精神和范围。对本文所述的具体实施方案没有或不应有任何限制。

                                序列表

<110>Friedlander，Martin

     Aguilar，Hilda Edith

     Dorrell，Michael I.

<120>用于治疗新生血管性疾病的组合物和方法

<130>1042.3 PCT

<150>US 60/577,156

<151>2004-06-04

<150>US 60/585,273

<151>2004-07-01

<150>US 60/655,801

<151>2005-02-24

<160>5

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>379

<212>PRT

<213>homo sapiens

<400>1

Met Ser Ala Lys Gly Ile Asp Tyr Asp Lys Leu Ile Val Arg Phe Gly

 1               5                  10                  15

Ser Ser Lys Ile Asp Lys Glu Leu Ile Asn Arg Ile Glu Arg Ala Thr

            20                  25                  30

Gly Gln Arg Pro His His Phe Leu Arg Arg Gly Ile Phe Phe Ser His

        35                  40                  45

Arg Asp Met Asn Gln Val Leu Asp Ala Tyr Glu Asn Lys Lys Pro Phe

    50                  55                  60

Tyr Leu Tyr Thr Gly Arg Gly Pro Ser Ser Glu Ala Met His Val Gly

65                  70                  75                  80

His Leu Ile Pro Phe Ile Phe Thr Lys Trp Leu Gln Asp Val Phe Asn

                85                  90                  95

Val Pro Leu Val Ile Gln Met Thr Asp Asp Glu Lys Tyr Leu Trp Lys

            100                 105                 110

Asp Leu Thr Leu Asp Gln Ala Tyr Ser Tyr Ala Val Glu Asn Ala Lys

        115                 120                 125

Asp Ile Ile Ala Cys Gly Phe Asp Ile Asn Lys Thr Phe Ile Phe Ser

    130                 135                 140

Asp Leu Asp Tyr Met Gly Met Ser Ser Gly Phe Tyr Lys Asn Val Val

145                 150                 155                 160

Lys Ile Gln Lys His Val Thr Phe Asn Gln Val Lys Gly Ile Phe Gly

                165                 170                 175

Phe Thr Asp Ser Asp Cys Ile Gly Lys Ile Ser Phe Pro Ala Ile Gln

            180                 185                 190

Ala Ala Pro Ser Phe Ser Asn Ser Phe Pro Gln Ile Phe Arg Asp Arg

        195                 200                 205

Thr Asp Ile Gln Cys Leu Ile Pro Cys Ala Ile Asp Gln Asp Pro Tyr

    210                 215                 220

Phe Arg Met Thr Arg Asp Val Ala Pro Arg Ile Gly Tyr Pro Lys Pro

225                 230                 235                 240

Ala Leu Leu His Ser Thr Phe Phe Pro Ala Leu Gln Gly Ala Gln Thr

                245                 250                 255

Lys Met Ser Ala Ser Asp Pro Asn Ser Ser Ile Phe Leu Thr Asp Thr

            260                 265                 270

Ala Lys Gln Ile Lys Thr Lys Val Asn Lys His Ala Phe Ser Gly Gly

        275                 280                 285

Arg Asp Thr Ile Glu Glu His Arg Gln Phe Gly Gly Asn Cys Asp Val

    290                 295                 300

Asp Val Ser Phe Met Tyr Leu Thr Phe Phe Leu Glu Asp Asp Asp Lys

305                 310                 315                 320

Leu Glu Gln Ile Arg Lys Asp Tyr Thr Ser Gly Ala Met Leu Thr Gly

                325                 330                 335

Glu Leu Lys Lys Ala Leu Ile Glu Val Leu Gln Pro Leu Ile Ala Glu

            340                 345                 350

His Gln Ala Arg Arg Lys Glu Val Thr Asp Glu Ile Val Lys Glu Phe

        355                 360                 365

Met Thr Pro Arg Lys Leu Ser Phe Asp Phe Gln

    370                 375

<210>2

<211>379

<212>PRT

<213>homo sapiens

<400>2

Met Ser Ala Lys Gly Ile Asp Tyr Asp Lys Leu Ile Val Arg Phe Gly

 1               5                  10                  15

Ser Ser Lys Ile Asp Lys Glu Leu Ile Asn Arg Ile Glu Arg Ala Thr

            20                  25                  30

Gly Gln Arg Pro His His Phe Leu Arg Arg Gly Ile Phe Phe Ser His

        35                  40                  45

Arg Asp Met Asn Gln Val Leu Asp Ala Tyr Glu Asn Lys Lys Pro Phe

    50                  55                  60

Tyr Leu Tyr Thr Gly Arg Gly Pro Ser Ser Glu Ala Met His Val Gly

65                  70                  75                  80

His Leu Ile Pro Phe Ile Phe Thr Lys Trp Leu Gln Asp Val Phe Asn

                85                  90                  95

Val Pro Leu Val Ile Gln Met Thr Asp Asp Glu Lys Tyr Leu Trp Lys

            100                 105                 110

Asp Leu Thr Leu Asp Gln Ala Tyr Gly Asp Ala Val Glu Asn Ala Lys

        115                 120                 125

Asp Ile Ile Ala Cys Gly Phe Asp Ile Asn Lys Thr Phe Ile Phe Ser

    130                 135                 140

Asp Leu Asp Tyr Met Gly Met Ser Ser Gly Phe Tyr Lys Asn Val Val

145                 150                 155                 160

Lys Ile Gln Lys His Val Thr Phe Asn Gln Val Lys Gly Ile Phe Gly

                165                 170                 175

Phe Thr Asp Ser Asp Cys Ile Gly Lys Ile Ser Phe Pro Ala Ile Gln

            180                 185                 190

Ala Ala Pro Ser Phe Ser Asn Ser Phe Pro Gln Ile Phe Arg Asp Arg

        195                 200                 205

Thr Asp Ile Gln Cys Leu Ile Pro Cys Ala Ile Asp Gln Asp Pro Tyr

    210                 215                 220

Phe Arg Met Thr Arg Asp Val Ala Pro Arg Ile Gly Tyr Pro Lys Pro

225                 230                 235                 240

Ala Leu Leu His Ser Thr Phe Phe Pro Ala Leu Gln Gly Ala Gln Thr

                245                 250                 255

Lys Met Ser Ala Ser Asp Pro Asn Ser Ser Ile Phe Leu Thr Asp Thr

            260                 265                 270

Ala Lys Gln Ile Lys Thr Lys Val Asn Lys His Ala Phe Ser Gly Gly

        275                 280                 285

Arg Asp Thr Ile Glu Glu His Arg Gln Phe Gly Gly Asn Cys Asp Val

    290                 295                 300

Asp Val Ser Phe Met Tyr Leu Thr Phe Phe Leu Glu Asp Asp Asp Lys

305                 310                 315                 320

Leu Glu Gln Ile Arg Lys Asp Tyr Thr Ser Gly Ala Met Leu Thr Gly

                325                 330                 335

Glu Leu Lys Lys Ala Leu Ile Glu Val Leu Gln Pro Leu Ile Ala Glu

            340                 345                 350

His Gln Ala Arg Arg Lys Glu Val Thr Asp Glu Ile Val Lys Glu Phe

        355                 360                 365

Met Thr Pro Arg Lys Leu Ser Phe Asp Phe Gln

    370                 375

<210>3

<211>424

<212>PRT

<213>homo sapiens

<400>3

Met Ser Tyr Lys Ala Ala Ala Gly Glu Asp Tyr Lys Ala Asp Cys Pro

 1               5                  10                  15

Pro Gly Asn Pro Ala Pro Thr Ser Asn His Gly Pro Asp Ala Thr Glu

            20                  25                  30

Ala Glu Glu Asp Phe Val Asp Pro Trp Thr Val Gln Thr Ser Ser Ala

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Asp Tyr Asp Lys Leu Ile Val Arg Phe Gly Ser Ser Lys

    50                  55                  60

Ile Asp Lys Glu Leu Ile Asn Arg Ile Glu Arg Ala Thr Gly Gln Arg

65                  70                  75                  80

Pro His His Phe Leu Arg Arg Gly Ile Phe Phe Ser His Arg Asp Met

                85                  90                  95

Asn Gln Val Leu Asp Ala Tyr Glu Asn Lys Lys Pro Phe Tyr Leu Tyr

            100                 105                 110

Thr Gly Arg Gly Pro Ser Ser Glu Ala Met His Val Gly His Leu Ile

        115                 120                 125

Pro Phe Ile Phe Thr Lys Trp Leu Gln Asp Val Phe Asn Val Pro Leu

    130                 135                 140

Val Ile Gln Met Thr Asp Asp Glu Lys Tyr Leu Trp Lys Asp Leu Thr

145                 150                 155                 160

Leu Asp Gln Ala Tyr Ser Tyr Ala Val Glu Asn Ala Lys Asp Ile Ile

                165                 170                 175

Ala Cys Gly Phe Asp Ile Asn Lys Thr Phe Ile Phe Ser Asp Leu Asp

            180                 185                 190

Tyr Met Gly Met Ser Ser Gly Phe Tyr Lys Asn Val Val Lys Ile Gln

        195                 200                 205

Lys His Val Thr Phe Asn Gln Val Lys Gly Ile Phe Gly Phe Thr Asp

    210                 215                 220

Ser Asp Cys Ile Gly Lys Ile Ser Phe Pro Ala Ile Gln Ala Ala Pro

225                 230                 235                 240

Ser Phe Ser Asn Ser Phe Pro Gln Ile Phe Arg Asp Arg Thr Asp Ile

                245                 250                 255

Gln Cys Leu Ile Pro Cys Ala Ile Asp Gln Asp Pro Tyr Phe Arg Met

            260                 265                 270

Thr Arg Asp Val Ala Pro Arg Ile Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Leu Leu

        275                 280                 285

His Ser Thr Phe Phe Pro Ala Leu Gln Gly Ala Gln Thr Lys Met Ser

    290                 295                 300

Ala Ser Asp Pro Asn Ser Ser Ile Phe Leu Thr Asp Thr Ala Lys Gln

305                 310                 315                 320

Ile Lys Thr Lys Val Asn Lys His Ala Phe Ser Gly Gly Arg Asp Thr

                325                 330                 335

Ile Glu Glu His Arg Gln Phe Gly Gly Asn Cys Asp Val Asp Val Ser

            340                 345                 350

Phe Met Tyr Leu Thr Phe Phe Leu Glu Asp Asp Asp Lys Leu Glu Gln

        355                 360                 365

Ile Arg Lys Asp Tyr Thr Ser Gly Ala Met Leu Thr Gly Glu Leu Lys

    370                 375                 380

Lys Ala Leu Ile Glu Val Leu Gln Pro Leu Ile Ala Glu His Gln Ala

385                 390                 395                 400

Arg Arg Lys Glu Val Thr Asp Glu Ile Val Lys Glu Phe Met Thr Pro

                405                 410                 415

Arg Lys Leu Ser Phe Asp Phe Gln

            420

<210>4

<211>401

<212>PRT

<213>homo sapiens

<400>4

Ser Asn His Gly Pro Asp Ala Thr Glu Ala Glu Glu Asp Phe Val Asp

 1               5                  10                  15

Pro Trp Thr Val Gln Thr Ser Ser Ala Lys Gly Ile Asp Tyr Asp Lys

            20                  25                  30

Leu Ile Val Arg Phe Gly Ser Ser Lys Ile Asp Lys Glu Leu Ile Asn

        35                  40                  45

Arg Ile Glu Arg Ala Thr Gly Gln Arg Pro His His Phe Leu Arg Arg

    50                  55                  60

Gly Ile Phe Phe Ser His Arg Asp Met Asn Gln Val Leu Asp Ala Tyr

65                  70                  75                  80

Glu Asn Lys Lys Pro Phe Tyr Leu Tyr Thr Gly Arg Gly Pro Ser Ser

                85                  90                  95

Glu Ala Met His Val Gly His Leu Ile Pro Phe Ile Phe Thr Lys Trp

            100                 105                 110

Leu Gln Asp Val Phe Asn Val Pro Leu Val Ile Gln Met Thr Asp Asp

        115                 120                 125

Glu Lys Tyr Leu Trp Lys Asp Leu Thr Leu Asp Gln Ala Tyr Ser Tyr

    130                 135                 140

Ala Val Glu Asn Ala Lys Asp Ile Ile Ala Cys Gly Phe Asp Ile Asn

145                 150                 155                 160

Lys Thr Phe Ile Phe Ser Asp Leu Asp Tyr Met Gly Met Ser Ser Gly

                165                 170                 175

Phe Tyr Lys Asn Val Val Lys Ile Gln Lys His Val Thr Phe Asn Gln

            180                 185                 190

Val Lys Gly Ile Phe Gly Phe Thr Asp Ser Asp Cys Ile Gly Lys Ile

        195                 200                 205

Ser Phe Pro Ala Ile Gln Ala Ala Pro Ser Phe Ser Asn Ser Phe Pro

    210                 215                 220

Gln Ile Phe Arg Asp Arg Thr Asp Ile Gln Cys Leu Ile Pro Cys Ala

225                 230                 235                 240

Ile Asp Gln Asp Pro Tyr Phe Arg Met Thr Arg Asp Val Ala Pro Arg

                245                 250                 255

Ile Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Leu Leu His Ser Thr Phe Phe Pro Ala

            260                 265                 270

Leu Gln Gly Ala Gln Thr Lys Met Ser Ala Ser Asp Pro Asn Ser Ser

        275                 280                 285

Ile Phe Leu Thr Asp Thr Ala Lys Gln Ile Lys Thr Lys Val Asn Lys

    290                 295                 300

His Ala Phe Ser Gly Gly Arg Asp Thr Ile Glu Glu His Arg Gln Phe

305                 310                 315                 320

Gly Gly Asn Cys Asp Val Asp Val Ser Phe Met Tyr Leu Thr Phe Phe

                325                 330                 335

Leu Glu Asp Asp Asp Lys Leu Glu Gln Ile Arg Lys Asp Tyr Thr Ser

            340                 345                 350

Gly Ala Met Leu Thr Gly Glu Leu Lys Lys Ala Leu Ile Glu Val Leu

        355                 360                 365

Gln Pro Leu Ile Ala Glu His Gln Ala Arg Arg Lys Glu Val Thr Asp

    370                 375                 380

Glu Ile Val Lys Glu Phe Met Thr Pro Arg Lys Leu Ser Phe Asp Phe

385                 390                 395                 400

Gln

<210>5

<211>471

<212>PRT

<213>homo sapiens

<400>5

Met Pro Asn Ser Glu Pro Ala Ser Leu Leu Glu Leu Phe Asn Ser Ile

 1               5                  10                  15

Ala Thr Gln Gly Glu Leu Val Arg Ser Leu Lys Ala Gly Asn Ala Ser

            20                  25                  30

Lys Asp Glu Ile Asp Ser Ala Val Lys Met Leu Val Ser Leu Lys Met

        35                  40                  45

Ser Tyr Lys Ala Ala Ala Gly Glu Asp Tyr Lys Ala Asp Cys Pro Pro

    50                  55                  60

Gly Asn Pro Ala Pro Thr Ser Asn His Gly Pro Asp Ala Thr Glu Ala

65                  70                  75                  80

Glu Glu Asp Phe Val Asp Pro Trp Thr Val Gln Thr Ser Ser Ala Lys

                85                  90                  95

Gly Ile Asp Tyr Asp Lys Leu Ile Val Arg Phe Gly Ser Ser Lys Ile

            100                 105                 110

Asp Lys Glu Leu Ile Asn Arg Ile Glu Arg Ala Thr Gly Gln Arg Pro

        115                 120                 125

His His Phe Leu Arg Arg Gly Ile Phe Phe Ser His Arg Asp Met Asn

    130                 135                 140

Gln Val Leu Asp Ala Tyr Glu Asn Lys Lys Pro Phe Tyr Leu Tyr Thr

145                 150                 155                 160

Gly Arg Gly Pro Ser Ser Glu Ala Met His Val Gly His Leu Ile Pro

                165                 170                 175

Phe Ile Phe Thr Lys Trp Leu Gln Asp Val Phe Asn Val Pro Leu Val

            180                 185                 190

Ile Gln Met Thr Asp Asp Glu Lys Tyr Leu Trp Lys Asp Leu Thr Leu

        195                 200                 205

Asp Gln Ala Tyr Ser Tyr Ala Val Glu Asn Ala Lys Asp Ile Ile Ala

    210                 215                 220

Cys Gly Phe Asp Ile Asn Lys Thr Phe Ile Phe Ser Asp Leu Asp Tyr

225                 230                 235                 240

Met Gly Met Ser Ser Gly Phe Tyr Lys Asn Val Val Lys Ile Gln Lys

                245                 250                 255

His Val Thr Phe Asn Gln Val Lys Gly Ile Phe Gly Phe Thr Asp Ser

            260                 265                 270

Asp Cys Ile Gly Lys Ile Ser Phe Pro Ala Ile Gln Ala Ala Pro Ser

        275                 280                 285

Phe Ser Asn Ser Phe Pro Gln Ile Phe Arg Asp Arg Thr Asp Ile Gln

    290                 295                 300

Cys Leu Ile Pro Cys Ala Ile Asp Gln Asp Pro Tyr Phe Arg Met Thr

305                 310                 315                 320

Arg Asp Val Ala Pro Arg Ile Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Leu Leu His

                325                 330                 335

Ser Thr Phe Phe Pro Ala Leu Gln Gly Ala Gln Thr Lys Met Ser Ala

            340                 345                 350

Ser Asp Pro Asn Ser Ser Ile Phe Leu Thr Asp Thr Ala Lys Gln Ile

        355                 360                 365

Lys Thr Lys Val Asn Lys His Ala Phe Ser Gly Gly Arg Asp Thr Ile

    370                 375                 380

Glu Glu His Arg Gln Phe Gly Gly Asn Cys Asp Val Asp Val Ser Phe

385                 390                 395                 400

Met Tyr Leu Thr Phe Phe Leu Glu Asp Asp Asp Lys Leu Glu Gln Ile

                405                 410                 415

Arg Lys Asp Tyr Thr Ser Gly Ala Met Leu Thr Gly Glu Leu Lys Lys

            420                 425                 430

Ala Leu Ile Glu Val Leu Gln Pro Leu Ile Ala Glu His Gln Ala Arg

        435                 440                 445

Arg Lys Glu Val Thr Asp Glu Ile Val Lys Glu Phe Met Thr Pro Arg

    450                 455                 460

Lys Leu Ser Phe Asp Phe Gln

465                 470

Claims (36)

1.一种适于治疗新生血管性疾病的组合物，所述组合物包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和治疗药。

2.权利要求1的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段的分子大小不超过约48KDa。

3.权利要求1的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段的分子大小不超过约46KDa。

4.权利要求1的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段的分子大小不超过约43KDa。

5.权利要求1的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段具有选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸残基序列。

6.权利要求5的组合物，其中所述治疗药包含至少一种选自VEGF适体和血管生成抑制性整联蛋白拮抗剂的抗血管生成剂。

7.权利要求6的组合物，其中所述至少一种抗血管生成剂包括VEGF-165适体。

8.权利要求7的组合物，其中VEGF-165适体是基于2′-氟嘧啶RNA的VEGF-165适体。

9.权利要求8的组合物，其中基于2′-氟嘧啶RNA的VEGF-165适体是pegaptanib sodium。

10.权利要求6的组合物，其中所述至少一种抗血管生成剂包括α_vβ₃整联蛋白或α_vβ₅整联蛋白的血管生成抑制性肽模拟拮抗剂。

11.权利要求10的组合物，其中所述α_vβ₃整联蛋白或α_vβ₅整联蛋白的肽模拟拮抗剂是具有下式化合物(1)的化合物：

12.权利要求1的组合物，其中所述治疗药包含至少一种选自以下的药物：血管生成抑制类固醇、抗肿瘤药、抗菌药、抗病毒药和抗炎药。

13.一种组合物，所述组合物包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和至少一种选自VEGF适体和血管生成抑制性整联蛋白拮抗剂的抗血管生成剂。

14.权利要求13的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段具有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列。

15.权利要求14的组合物，其中所述至少一种抗血管生成剂包括VEGF-165适体。

16.权利要求15的组合物，其中VEGF-165适体是基于2′-氟嘧啶RNA的VEGF-165适体。

17.权利要求16的组合物，其中基于2′-氟嘧啶RNA的VEGF-165适体是pegaptanib sodium。

18.权利要求13的组合物，其中所述至少一种抗血管生成剂包括α_vβ₃整联蛋白或α_vβ₅整联蛋白的血管生成抑制拮抗剂。

19.权利要求18的组合物，其中α_vβ₃整联蛋白或α_vβ₅整联蛋白的血管生成抑制拮抗剂具有下式化合物(1)：

20.权利要求13的组合物，其中所述至少一种抗血管生成剂包括pegaptanib sodium和具有下式化合物(1)的化合物：

21.权利要求13的组合物，所述组合物还包含至少一种选自以下的治疗药：血管生成抑制类固醇、抗肿瘤药、抗菌药、抗病毒药和抗炎药。

22.权利要求13的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段是二聚体。

23.权利要求1的组合物，其中TrpRS血管生成抑制片段是二聚体。

24.一种治疗新生血管性疾病的方法，所述方法包括给予患有新生血管性疾病的哺乳动物血管发育抑制有效量的药物组合，所述药物组合包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和至少一种选自血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的化合物。

25.权利要求24的方法，其中TrpRS血管生成抑制片段具有选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸残基序列；所述血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂是pegaptanib sodium；而所述整联蛋白信号传导抑制剂为具有下式化合物(1)的化合物：

26.权利要求24的方法，其中所述哺乳动物是人。

27.权利要求24的方法，其中所述疾病是视网膜新生血管性疾病。

28.权利要求24的方法，其中所述药物组合经玻璃体内注射给予患有视网膜新生血管性疾病的患者眼内。

29.权利要求28的方法，其中所述疾病选自缺血性视网膜病、血管出血、血管渗漏、脉络膜病、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病、推测的眼组织胞浆菌病、早熟性视网膜病、镰状细胞贫血和视网膜色素变性。

30.一种治疗肿瘤的方法，所述方法包括给予肿瘤患者血管发育抑制量的药物组合，所述药物组合包含色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)血管生成抑制片段和至少一种选自血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂和整联蛋白信号传导抑制剂的化合物。

31.权利要求30的方法，其中TrpRS血管生成抑制片段具有选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸残基序列。

32.权利要求30的方法，其中所述血管内皮生长因子(VEGF)信号传导抑制剂是pegaptanib sodium。

33.权利要求30的方法，其中所述整联蛋白信号传导抑制剂是具有下式化合物(1)的化合物：

34.权利要求30的方法，其中所述哺乳动物是人。

35.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1的组合物和药学上可接受的载体。

36.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求13的组合物和药学上可接受的载体。

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