CN100998610A - 雨生红球藻抗疲劳药物 - Google Patents
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Abstract
一种雨生红球藻抗疲劳药物,它是由雨生红球藻为原料按照下述方法制备的口服药剂:将雨生红球藻用粉碎机粉碎成粗粉,过20目筛,用70%乙醇回流提取二次,第一次8倍量,第二次6倍量,回流2小时,滤过,合并二次滤液,在60℃减压浓缩至相对密度为1.20~1.25,减压干燥,粉碎,过五号筛,加入有机或无机的固体或液体赋形剂混合,按制剂学的常规制备方法制备的口服药剂。本发明药物的原料药雨生红球藻经药效试验,证明雨生红球藻具有较强的抗脂质过氧化、清除过度训练所产生的自由基,提高机体能量储备的功能,延缓运动中疲劳的发生,提高大鼠跑台运动能力。
Description
技术领域
本发明属于含有原料或其与不明结构之反应产物的医用配制品技术领域,具体涉及到来源于植物的材料。
背景技术
运动时将产生大量的氧自由基(FR·),尤其长时间的亚极量运动。近年来的许多研究证实了运动疲劳的FR·学说。运动时FR·生成增多与运动能力下降关系密切的主要原因是由于自由基的大量堆积会对机体各组织细胞产生毒性作用,如生物膜脂质过氧化、核酸、蛋白质变性及细胞外可溶成分的降解,引起线粒体等细胞器功能和蛋白质功能障碍,能量合成受阻,导致运动能力下降,诱发运动性疲劳发生。
运动时自由基生成增多引起脂质过氧化反应以及其它毒性反应的机制目前主要认为有:运动时机体氧消耗量增多,增加了血红蛋白的载氧负荷,氧合血红蛋白的自氧化以及肌肉、心肌等部位线粒体呼吸作用增强,泛半醌转运率加快等都可以生成自由基;运动应激时儿茶酚胺大量分泌,可提高心肌和骨骼肌的氧化代谢,并激活β-肾上腺素受体,经线粒体通路使ROS生成增加;大强度运动可模拟缺血再灌注造成对机体的损伤,并激活黄嘌呤氧化酶通道;底物如葡萄糖、糖原的耗竭排空和/或者产物如乳酸的堆积;NADH/NADPH比值变化,引起依赖此二者作为辅酶的许多抗氧化酶的功能下降,从而造成细胞氧化还原状态的紊乱;运动时体温的升高;进行比自身训练水平强度不相符的较为激烈的运动。
近年的研究表明,伴随着剧烈运动产生的氧自由基是细胞和组织损伤的主要原因之一。长时间持续性衰竭运动中,氧代谢大大加强,各组织中自由基产生明显增多并大量堆积,度超过了伤害“阈值”,则可能产生广泛的细胞和组织损伤并导致多种病理紊乱。过多自由基的产生不仅会导致遗传物质的破坏、蛋白质交联或多肽断裂,一些重要代谢酶因交联聚合而失活,引起一系列病理变化,导致人体衰老;而且自由基还会攻击生物膜上的多不饱和脂肪酸产生脂质过氧化,使生物膜结构和功能改变,表现为生物膜通透性增加,细胞内容物逸出,线粒体膜流动性降低,功能紊乱,造成ATP生成下降,能量供应不足;肌浆网受损、不能正常摄取Ca2+,造成胞浆Ca2+堆积;溶酶体膜的破坏释放大量水解酶,从而加重组织的损伤,致使人体工作能力下降,并产生疲劳等。
目前普遍认为自由基的产生与剧烈运动即刻或运动后的许多细胞、组织、器官水平的紊乱有直接关系。脂质的自动氧化也称脂质过氧化作用(peroxidation),一般指多不饱和脂肪酸或脂质的氧化变质(oxidation delerioration)。脂质过氧化物(LPO)与蛋白质发生反应,可形成不易被分解的不溶性聚合物脂褐素(lipofuscin),从而影响RNA代谢,使细胞萎缩、死亡。此外自由基对机体的损伤还与一些疾病的发生有关,如动脉粥样硬化、糖尿病、肿瘤、胃肠道功能失调、感染、免疫失调等。研究发现,运动中自由基的大量产生和血浆LPO水平的显著性升高是导致运动性疲劳产生的重要原因。剧烈运动后,肌纤维膜和内质网的完整性因自由基的攻击而受到损坏,这可能与自由基的产生对Na+,K+-ATP酶的活性产生影响从而引起细胞膜的通透性发生改变有关。随着运动强度的增加,血浆LPO水平升高,LPO能对调节Ca2+转运的Ca2+-ATP酶活性产生影响,造成细胞中Ca2+的堆积,影响肌纤维的兴奋-收缩耦联,使肌肉工作能力下降。而且LPO的显著升高,还能造成肌肉等组织的损伤,妨碍正常的细胞代谢功能,从而加快运动中疲劳的产生。研究还发现,自由基能使线粒体呼吸链产生ATP的过程受到伤害,从而使细胞的能量生成发生障碍,影响肌纤维的收缩功能。
在长时间有氧剧烈运动中呼吸链加紧传递电子制造ATP的同时,漏电子产生超氧自由基的水平相应增加,产生的自由基损伤呼吸链酶导致机体产生更多ROS。机体清除自由基的能力不足以平衡运动应激情况下产生的自由基,导致机体细胞内处于高浓度自由基水平的氧化应激状态,引起线粒体出现各种形式的氧化应激损伤。
红细胞极易受到氧化损伤。成熟红细胞主要通过氧合血红蛋白自氧化成高铁血红蛋白来产生活性氧,正常情况下,每天虽然有3%的氧合血红蛋白被氧化,由于高铁血红蛋白还原酶的作用,使得常人血液中的高铁血红蛋白很少,然而氧合血红蛋白持续的自氧化将产生
经一系列反应在Fe3+的催化下可产生毒性极大的·OH。
自由基的产生是有氧代谢的结果,运动中摄氧量增加,血红蛋白自氧化和自由基产量将可能按比例的增加,从而导致红细胞氧化损伤加剧。研究发现一次亚极量运动后红细胞氧化应激脆性增加,但膜结合铁和高铁血红蛋白都没有增加。Gohil等测定运动后全血还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)发现前者减少60%,后者增加100%,维生素C和维生素E的消耗也可能是氧化脆性增加的原因,因此补充抗氧化剂有助于减轻红细胞的氧化损伤。长期运动训练可引起红细胞抗氧化系统的适应。耐力训练可增大氧化型谷胱甘肽还原酶和过氧化氧酶的活性,其活性增加还与训练距离有关。训练还可增加抗氧化成分的含量,如还原型谷胱甘肽、维生素E、维生素C的含量都高于常人。
激素的种类很多,生理作用复杂,其中研究较多,与运动有密切关系的激素是甲状腺素、肾上腺素、去甲肾上腺素、胰岛素、胰高血糖素、生长激素、各种性激素和糖皮质激素。这些激素被称为运动的“应激激素”。体育运动或训练使激素调节的总体效应表现为增强(或减弱)某些细胞中激素的代谢活动,有利于身体机能充分发挥。
在运动前,机体处于能源物质的吸收积累阶段,这时胰岛素分泌增多,促进葡萄糖转运进肌肉和脂肪细胞使糖原和脂肪的合成加强。胰岛素对肌细胞吸收氨基酸有敏感性,故能促进蛋白质合成。当吸收阶段结束,机体处于吸收后休息状态阶段,体内能源物质的合成相对稳定,胰高血糖素在肾上腺素、甲状腺素等影响下,使肝脏糖异生作用及肝糖原分解加速在多种激素调节下,保持血糖水平恒定。胰高血糖素还具有间接的促进脂肪水解而起到节省机体糖贮备的作用,使血糖主要为神经组织利用,而其他组织,包括肌肉,基本上由脂肪代谢供应能量。当运动时,血浆胰岛素浓度降低,肾上腺素、糖皮质激素、胰高血糖素、生长激素等激素分泌加强,总体效应是加速糖原分解,脂肪动员,促进糖异生作用。随着运动强度的增大,对肌糖原依赖性的加强,体内贮存的肌糖原、肝糖原被大量动用,持续长时间运动,体内缺糖原时,糖皮质激素、甲状腺素和生长激素等作用加强,可加速氨基酸尤其是支链氨基酸的转氨过程,发挥氨基酸氧化供能的潜在力量,以保证运动过程三大能源物质能协调、有效地发挥作用。
在运动过程中,ATP消耗的增加、含量的减少、活性氧的产生、pH值的下降、肌肉温度的升高和自由基的产生等均可影响ATPase的活性。目前研究较多的是自由基的影响。自由基损害ATPase的途径有两个方面,一方面是自由基直接作用于ATPase上的活性基团,引起基团结构变化,导致ATPase活性的改变;另一方面,可能是自由基作用于酶蛋白周围的脂类,引起这些脂类过氧化,使ATPase活性发生改变,肌球蛋白ATPase(m-ATPase)活性则易于受到多种因素的调节而发生改变,因而是影响心肌收缩性能的很重要的一个方面。高强度运动时,心室后负荷急剧增大,长时间、剧烈运动,体内能量代谢增加,组织、器官的耗氧量也增加,大约是安静时的20-40倍,红细胞中血红蛋白运送氧分子活动频率和数量都增加,自由基的生成机率和数量也显著增加,使大量的自由基不能被及时清除,而造成对红细胞膜的攻击,容易导致内环境失调,运动能力下降。而ATPase在这一代谢过程中对维持细胞膜的正常功能,发挥着重要作用。
目前在临床上用于治疗运动性疲劳的药物有助阳补虚类中成药、氨基酸类药物、肌酸,用于增加合成代谢和肌肉力量。有1,6-二磷酸果糖(FDP)、肌酸、L-肉碱、丙酮酸盐,用于促进能量代谢。还有维生素E、维生素C和辅酸Q10,用于抗氧化、调节内环境稳态。上述西药的主要缺点是时效性较强、副作用大、药物依赖强,影响运动员的长期服用。中药调节能力比较强、副作用小,但见效慢,很难适应竞技体育中高强度的运动训练。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述药物的缺点,提供一种抗疲劳功能显著无毒副作用的雨生红球藻抗疲劳药物。
解决上述技术问题所采用的技术方案是由雨生红球藻为原料按照下述方法制备的药剂:将雨生红球藻用粉碎机粉碎成粗粉,过20目筛,用70%乙醇回流提取二次,第一次8倍量,第二次6倍量,回流2小时,滤过,合并二次滤液,减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(60℃),减压干燥,粉碎,过五号筛,加入有机或无机的固体或液体赋形剂混合,按制剂学常规制备方法制备的口服药剂。
本发明的口服药剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液。
雨生红球藻在分类学上属于绿藻门(Chlorophata)绿藻纲(Chlorophyceae)团藻目(Volvocales)红球藻科(Haematococcaceae)红球藻属(Haematoccoccus,Ag)。细胞形态由广卵形到广。雨生红球藻粉是一种的天然抗氧化剂,它含有天然虾青素、生物碱、丰富的维生素和矿物质,以及多种氨基酸等有效化学成分,其消除自由基、提高免疫能力、抗心肌和脑缺血缺氧及强壮的作用,雨生红球藻对大强度运动造成的机体损伤有一定的保护作用。目前雨生红球藻在运动医学方面的研究还未见报道。
最新的研究表明,给小鼠饲喂富含虾青素的雨生红球藻,能够明显降低幽门螺杆菌对胃的附着和感染,国外已开发了口服药剂作为抗感染制剂。
雨生红球藻在国内已作为营养保健品,目前市场上销售有食用雨生红球藻粉,具有抗氧化延缓衰老的功能。
有效成分用雨生红球藻制备抗疲劳的口服药物以常规药用制剂的形式来使用;所述的常规药用制剂含作为活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内的有机或无机的固体或液体赋形剂混合,该药用制剂可以是固体形式如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂,也可以是液体形式如乳剂、糖浆剂等。
上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂,如乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸等。
本发明药物片剂的制备方法如下:
将雨生红球藻用粉碎机粉碎成粗粉,过20目筛,用70%乙醇回流提取二次,第一次8倍量,第二次6倍量,回流2小时,滤过,合并二次滤液,减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(60℃),减压干燥,粉碎,过五号筛,加入淀粉,混合均匀,加95%乙醇润湿,16目筛制粒,60℃以下烘干,14目筛整粒,压片,包衣,包装,即得。每片重0.3g,每片含雨生红球藻1.60g。
本发明药物胶囊剂的制备方法如下:
本发明药物胶囊剂所用的雨生红球藻原料以及重量配比与本发明药物片剂完全相同,雨生红球藻的提取工艺步骤与本发明片剂制备方法雨生红球藻的提取工艺步骤相同,所用的辅料以及其它工艺步骤按胶囊剂的常规制备方法进行。每粒重0.3g,每粒含雨生红球藻1.60g。
本发明药物颗粒剂的制备方法如下:
本发明药物颗粒剂所用的雨生红球藻原料以及重量配比与本发明药物片剂所用的雨生红球藻原料完全相同,雨生红球藻的提取工艺步骤与本发明片剂制备方法雨生红球藻的提取工艺步骤相同,所用的辅料以及其它工艺步骤按颗粒剂的常规制备方法进行。每袋重5g,每克含雨生红球藻1.28g。
本发明药物口服液的制备工艺如下:
本发明药物口服液所用的雨生红球藻原料以及重量配比与本发明药物片剂完全相同,雨生红球藻的提取工艺步骤与本发明片剂制备方法雨生红球藻的提取工艺步骤相同,所用的辅料和其它工艺步骤按照口服液的常规制备方法进行。每瓶10mL,每毫升含雨生红球藻0.64g。
有效成分雨生红球藻作为抗疲劳的口服药物,所制备成各种剂型的口服药物,成人口服,药物中雨生红球藻的含量应为每天19.2g。
本发明药物的原料药雨生红球藻经药效试验,证明雨生红球藻具有较强的抗脂质过氧化、清除过度训练所产生的自由基,提高机体能量储备的功能,延缓运动中疲劳的发生,提高大鼠跑台运动能力。
具体实施方式
下面发结合实施例对本发明进一步详细说明,但本发明不限于这些实施例。
实施例1
以生产本发明片剂产品1000片为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
雨生红球藻 1600g
淀粉 加至300g。
将雨生红球藻1600g用粉碎机粉碎成粗粉,过20目筛,用70%乙醇回流提取二次,第一次8倍量,第二次6倍量,回流2小时,滤过,合并二次滤液,减压浓缩至相对密度1.20~1.25(60℃),减压干燥,粉碎,过五号筛,加入淀粉至300g,混合均匀,加95%乙醇润湿16目筛制粒,60℃以下烘干,14目筛整粒,压片,包衣,包装,即得。每片重0.3g,每片含雨生红球藻1.60g。
实施例2
以生产本发明胶囊剂产品1000粒为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
雨生红球藻 1600g
淀粉 加至300g。
其制备方法按本发明胶囊剂的制备方法进行。每粒重0.3g,每粒含雨生红球藻1.6g。
实施例3
以生产本发明颗粒剂产品1000克为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
雨生红球藻 1280g
蔗糖 400g
糊精 加至1000g。
其制备方法按本发明颗粒剂的制备工艺进行。每袋重5g,每克含雨生红球藻1.28g。
实施例4
以生产本发明口服液产品1000mL为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
雨生红球藻 640g
蔗糖 400g
蒸馏水 加至1000mL。
其制备方法按本发明口服液制备方法进行。每瓶10mL,每毫升含雨生红球藻0.64g。
为了验证本发明药物的抗疲劳的效果,发明人采用本发明药物的原料药雨生红球藻粉进行了药效试验,各种试验情况如下:
试验目的:采用整体动物试验,观察本发明药物的抗疲劳作用,反映本发明药物的功效与主治,为临床试验提供理论依据。
受试药物:雨生红球藻粉,由荆州市天然虾青素有限公司生产,其中虾青素含量达到细胞干重的2.5%。给动物灌胃用药时:将适量雨生红球藻粉溶于5%的二甲基亚砜(DMSO)生理盐水溶液中,配成一定浓度的雨生红球藻粉溶液。
对照药品和试剂:蛋白定量(双缩脲)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒、总抗氧化能力(T-AOC)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒、过氧化氢酶(CAT)测试盒、血红蛋白(Hb)测试盒、乳酸脱氢酶(LDH)测试盒、肌糖原及肝糖原试剂盒由南京建成生物工程研究所生产;肌酸激酶试剂盒,由北京中生生物工程高技术公司生产;血清睾酮放射免疫分析测定盒、皮质醇放射免疫分析测定盒,由天津九鼎医学生物工程有限公司生产;血清生长激素放射免疫分析测定盒、胰岛素放射免疫分析测定盒、血清胰高血糖素放射免疫分析测定盒由北京北方生物技术研究所生产;冰醋酸(AR),由天津市化学试剂三厂生产;二甲基亚砜(DMSO)(AR),由上海光铧科技有限公司。
实验仪器:电动跑台,由中国杭州段氏制作生产;TGL-16G台式高带冷冻离心机上海安亭科学仪器厂;721B型分光光度计,由上海第三分析仪器生产厂;751B型紫外分光光度计,由上海第三分析仪器厂生产;DK-98-1A恒温浴锅,由天津泰斯特有限公司生产;BCD-203A容声冰箱,由中国科龙电器股份有限公司生产;Bonso-TCS-2000A电子称,由武汉自动化仪表厂生产。
实验动物:SD雄性健康大鼠24只,体重180-220g,由西安交通大学医学院实验动物中心提供。国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养,自由饮食,动物室温度23℃±5℃,相对湿度40%-70%,分笼饲养备用。
1、建立实验动物模型
实验动物适应性饲养7d后,以15m/min,5min/d运动量对动物进行为期3d的筛选,淘汰个别不适应跑台训练者。将剩余大鼠随机分为3组:安静对照组8只、运动对照组8只、运动加药组8只。力竭判定标准为:动物跟不上预定速度,大鼠臀部压在笼具后壁,后肢随转动皮带后拖达30秒,毛刷刺激驱赶无效。行为特征为:呼吸深急、幅度大,神情疲倦,俯卧位,垂头,刺激后无反应。
运动对照组和运动加药组每天训练前以15m/min的速度做适应运动5min后正式训练,训练模型基于Bedford模型结合实际略加调整,共为期6周。具体运动方案见表1。
表1实验动物运动方案
周 | 速度(m/min) | 坡度(%) | 运动时间(min/d) | 运动强度(VO2max) |
123456 | 1515.215.226.826.826.8 | 0555510 | 202030203020 | 58.4±1.758.4±1.774.3±2.974.3±2.981.0±3.5 |
2、给药方法如下
安静对照组:用5%二甲基亚砜生理盐水溶液2ml灌胃给药,一天一次,共42天。
运动对照组:用5%二甲基亚砜生理盐水溶液2ml灌胃给药,一天一次,共42天。
运动给药组:将雨生红球藻粉溶于2ml重量浓度为5%的二甲基亚砜(DMSO)生理盐水溶液中,用量为2g/kg/d,一天一次,共42天。
3、制备实验样品
第六周最后1天,运动对照组和运动加药组在力竭运动后记录力竭时间,安静对照组、运动对照组和运动加药组大鼠都用20%乌拉坦(0.5ml/kg体重)腹腔麻醉后,眼球取血,迅速取脑、肾、肝、心、以及股四头肌置于预冷的生理盐水中洗净血污,再用滤纸吸干后置于-20℃冰箱保存备用。
制备血清:取血后置37℃水浴中30min后,以2500-3000转/分离心10min,提取上清液置于4℃冰箱保存备用。
制备红细胞样品:取肝素抗凝全血1500~2000rpm/min 4℃离心5min,除去血浆和灰白色的白细胞层,按1∶2体积加入生理盐水,混合后反复洗涤3次,离心条件同上,除去上清液留压积红细胞。分离好的红细胞置于-20℃冰箱冻存。
制备红细胞膜样品:取上述沉淀的红细胞按1/10(v/v)加入预冷的破膜液(0.1mmol/L乙二胺四乙酸二钠[EDTANa],2.5mmol/L NaHPO4,0.03mmol/L笨甲基磺酰氟[PMSF],PH7.4-8.0),均匀搅拌2min,待完全溶血后,以12000rpm/min 4℃离心10min,将沉淀重复依上法再洗涤3次,弃去上清液及离心管底部褐色的纤维状沉淀物,收集乳白色的红细胞膜样品,取50μL用考马斯亮兰试剂做蛋白定量,将红细胞膜用低渗液(破膜液)配成蛋白含量为2mg/ml左右的悬液,将上悬液分装到小容器中,-20℃冰箱冻存。
制备组织匀浆:称取组织0.2~1g按W(g)组织块重量/V(ml)匀浆介质为1/9的比例加取预冷的0.9%的NaCL溶液于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块(以上全部操作在冰水浴中进行)。手工制备匀浆后,3000转/分低温离心10~15分钟,分离提取上清液,一部分4℃冰箱冷藏,另一部分-20℃冰箱冰冻备用。
制备线粒体:将大鼠断头处死后,迅速剥取股四头肌和心肌并称重,按1∶10的比例将肌肉放人预冷的缓冲液中剪碎,电动玻璃匀浆器中匀浆,匀浆液以3000r/min,离心10min,去沉淀,上清液再以10000r/min离心10min,得沉淀,用0.9%的NaCL溶液将所得沉淀洗两次,再加人一定量的0.9%的NaCL溶液制备成线粒体悬液。
4、实验结果
(1)雨生红球藻粉及跑台训练对实验大鼠周体重的影响
实验结果见表2。
表2雨生红球藻粉及跑台训练对实验大鼠周体重的影响
测试时间 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
基础值(平均值)第一周(平均值)第二周(平均值)第三周(平均值)第四周(平均值)第五周(平均值)第六周(平均值) | 237.89267.03302.11322.67348.00363.62378.11 | 242.55274.79304.50327.90336.90342.49344.20 | 233.30270.74300.22328.90343.80355.65365.20 |
表2结果显示,在训练期的前三周,安静组、运动组和加药组大鼠的体重增长情况比较一致,无明显差异,说明运动强度较小,大鼠的适应情况良好。与安静组相比,从第四周开始,由于运动强度的增大,运动对照组大鼠体重增长明显下降,甚至停滞;而加药组大鼠虽从第四周开始,体重的增长率有所下降,但体重稳步增长。显示雨生红球藻粉有抑制大强度训练造成的实验动物体重下降的趋势,使训练大鼠体重无显著性下降。
(2)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠某些血清指标的影响
实验方法:取血清0.2ml进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)指标的测试,测试方法分别按照丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表3。
表3雨生红球藻粉对耐力训练大鼠血清ALT、AST、LDH、CK活性的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
ALT(U/L)AST(U/L)LDH(U/L)CK(IU/L) | 52.30±6.30163.30±17.821298.75±135.45662.00±89.33 | 77.80±8.61▲▲271.20±33.34▲▲1619.25±164.75▲▲1179.13±114.55▲▲ | 61.55±7.90▲#211.00±24.12▲▲#1572.88±155.82▲▲789.25±97.85▲▲## |
注:▲代表安静组与运动组比较,▲代表具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表具有极显著性差异(P<0.01);#代表运动组与加药组比较,#代表具有较显著性差异(P<0.05),##代表具有极显著性差异(P<0.01)。
由表3可知,力竭运动后,运动对照组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性都极显著高于安静对照组(P<0.01);运动加药组与运动对照组相比,血清丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性有较显著的降低(P<0.05),血清肌酸激酶活性有极显著的降低(P<0.01),血清乳酸脱氢酶活性虽有所降低,但并未达到显著性水平。力竭运动后,运动加药组血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性都高于安静对照组水平。
(3)雨生红球藻对训练大鼠血红蛋白、尿素氮、血糖及肌肝糖原含量的影响
实验方法:分别取全血0.05ml和血清0.2ml进行血红蛋白、尿素氮、血糖及肌肝糖原指标的测试,测试方法分别按照血红蛋白、尿素氮、血糖及肌肝糖原测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表4。
表4雨生红球藻粉对训练大鼠血红蛋白、尿素氮、血糖及肌肝糖原含量的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
Hb/(g/dL)肝糖原/(mg/g组织)肌糖原/(mg/g组织)Glu/(mmol/L)BUN/(mmol/L) | 10.80±0.8014.16±3.901.87±0.205.53±1.596.22±0.65 | 8.74±0.79▲8.86±3.57▲▲0.75±0.15▲▲4.27±0.89▲10.17±0.85▲▲ | 9.67±0.7#11.63±2.68▲▲#1.08±0.24▲▲#5.02±0.98#9.26±0.67▲▲# |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表4显示,力竭运动后,运动对照组大鼠与安静对照组相比,血清血糖浓度和全血血红蛋白含量有较显著的降低(P<0.05),肌糖原、肝糖原含量有极显著的下降(P<0.01),血清尿素氮浓度则显著高于安静对照组(P<0.01);运动加药组大鼠在力竭运动后,血清血糖浓度、全血血红蛋白以及肌肝糖原含量与运动对照组相比有较显著的升高(P<0.05),且血糖和血红蛋白的值都接近安静组水平,表明雨生红球藻有利于维持运动中的血糖水平和糖原含量,运动加药组大鼠血清尿素氮浓度相对于运动对照组有较显著的降低(P<0.05),说明雨生红球藻能够抑制大强度耐力运动中膜蛋白的氧化损伤和蛋白质的分解供能。
(4)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠血清某些激素指标的影响
实验方法:取血清0.2ml进行胰岛素、胰高血糖素、生长激素、睾酮、皮质醇指标测试,测试方法采用放射免疫分析测定盒,用FJ-2008P型γ放射免疫计数器测定,由电脑自动处理得出结果,具体操作在陕西省第二人民医院放射免疫科进行。
测试结果见表5。
表5雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠血清某些激素指标的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
胰岛素(IU/L)胰高血糖素(pg/ml)生长激素(ng/ml睾酮(ng/dl)皮质醇(ng/ml)睾酮/皮质醇 | 27.49±3.98207.04±14.212.44±0.75546.98±37.2115.52±1.7335.24±4.24 | 17.72±3.42▲▲237.25±17.38▲▲2.99±0.91402.73±34.94▲▲25.39±3.35▲▲15.86±2.01▲▲ | 23.03±3.07▲▲#262.64±17.23▲▲##3.61±0.88▲▲#478.19±36.27▲▲#20.02±2.95▲▲##23.89±3.24▲▲## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表5结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠血清胰岛素、睾酮以及睾酮/皮质醇的值极显著下降(P<0.01),雨生红球藻可以抑制血清胰岛素、睾酮以及睾酮/皮质醇值的过度降低(P<0.05),但其值还显著的低于安静对照组的水平。力竭运动引起血清胰高血糖素极显著的升高(P<0.01),生长激素也有升高的趋势,但未达到显著性水平;雨生红球藻可以促进这一升高趋势,分别极显著和较显著提高胰高血糖素(P<0.01)和生长激素(P<0.05)的水平。力竭运动引起血清皮质醇极显著的升高(P<0.01),雨生红球藻可以抑制这一升高趋势,但其值也显著的高于安静对照组的水平。
(5)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠血清抗氧化能力的影响
实验方法:取血清1.5ml进行血清抗氧化能力指标的测试,测试方法分别按照超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、巯基(-SH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表6。
表6雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠血清抗氧化能力的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
T-SOD(U/ml)Cu,Zn-SOD(U/ml)Mn-SOD(U/ml)T-AOC(U/ml)MDA(nmol/ml)CAT(U/ml)GSH(mg/ml)-SH(mmol/L)GSH-Px(U/ml) | 367.56±25.94292.83±17.6475.04±8.994.80±0.403.64±0.326.65±0.54530.77±31.770.27±0.074786.36±415.43 | 303.92±18.02▲▲231.31±16.66▲▲72.60±9.933.49±0.51▲▲5.04±0.67▲▲5.36±0.63▲466.11±23.51▲▲0.09±0.01▲▲4304.55±407.46▲ | 347.82±21.57▲##270.68±20.46▲##77.13±9.305.65±0.78▲##4.26±0.64▲#5.69±0.68▲519.93±26.58▲##0.19±0.03▲▲##4710.76±424.77 |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表6结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠血清总超氧化物歧化酶,Cu、Zn超氧化物歧化酶活性极显著的下降(P<0.01),血清总抗氧化能力水平和血清还原型谷胱甘肽、巯基含量极显著的下降(P<0.01),血清谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性较显著的下降(P<0.05),血清丙二醛含量极显著的升高(P<0.01),血清Mn超氧化物歧化酶活性虽有所降低,但未达到显著性水平;雨生红球藻可以抑制这一现象,血清总超氧化物歧化酶、Cu、Zn超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性有较显著的提高(P<0.05),血清总抗氧化能力水平和还原型谷胱甘肽含量也有较显著的提高(P<0.05),血清巯基含量有极显著的提高(P<0.01),血清丙二醛的含量有较显著的降低(P<0.05),而血清Mn超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性虽有所升高,但未达到显著性水平。
(6)雨生红球藻对耐力训练大鼠心肌组织抗氧化能力的影响
实验方法:取大鼠心肌组织上清液2ml进行抗氧化能力指标的测试,测试方法分别按照超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、丙二醛、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、巯基、谷胱甘肽过氧化物酶测试试剂盒各自的操作方法进行。
测试结果见表7。
表7雨生红球藻对耐力训练大鼠心肌组织上清液抗氧化能力的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
T-SOD(U/mgprot)Cu,Zn-SOD(U/mgprot)Mn-SOD(U/mgprot)T-AOC(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)CAT(U/mgprot)-SH(μmol/gprot)GSH(mg/gprot)GSH-Px(U/mgprot) | 167.46±12.02126.62±9.6440.84±4.360.45±0.064.05±0.442.62±0.4643.50±4.02342.71±28.0839.84±4.90 | 144.57±11.48▲▲108.31±9.98▲36.26±3.46▲0.32±0.05▲▲5.72±0.62▲▲2.19±0.41▲35.80±4.14▲▲270.53±35.97▲▲31.76±3.17▲▲ | 158.05±12.85#119.11±10.64#38.94±4.070.40±0.05#4.83±0.65▲▲#2.49±0.4340.20±5.20#302.75±26.76▲#37.65±5.34## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表7结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠心肌组织总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及总抗氧化能力、还原型谷胱甘肽、巯基含量极显著的下降(P<0.01),心肌组织Cu、Zn超氧化物歧化酶、Mn超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性较显著的下降(P<0.05),心肌组织丙二醛含量极显著的升高(P<0.01);雨生红球藻可以抑制这一现象,较显著提高心肌组织总超氧化物歧化酶、Cu、Zn超氧化物歧化酶活性、还原型谷胱甘肽、巯基含量以及总抗氧化能力水平(P<0.05),极显著提高心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.01),较显著降低心肌组织丙二醛的含量(P<0.05),心肌组织Mn超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性虽有所升高,但未达到显著性水平。
(7)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠肝组织抗氧化能力的影响
实验方法:取大鼠肝组织上清液2ml进行抗氧化能力指标的测试,测试方法分别按照超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、丙二醛、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、巯基、谷胱甘肽过氧化物酶测试试剂盒各自的操作方法进行。
测试结果见表8。
表8雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠肝组织上清液抗氧化能力的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
T-SOD(U/mgprot)Cu,Zn-SOD(U/mgprot)Mn-SOD(U/mgprot)T-AOC(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)CAT(U/mgprot)-SH(μmol/gprot)GSH(mg/gprot)GSH-Px(U/mgprot) | 319.84±27.67225.89±20.7994.95±5.741.04±0.232.06±0.1420.00±1.4394.90±9.01323.74±26.94113.31±12.07 | 262.88±28.63▲▲175.45±14.79▲▲87.43±10.370.8±0.18▲3.19±0.62▲▲15.02±2.03▲▲86.50±8.87▲297.17±32.46▲▲86.15±10.83▲▲ | 294.10±28.6#204.71±19.00▲#90.39±9.741.05±0.2#2.30±0.45##18.89±2.31#98.90±9.6##340.11±36.24##99.78±11.36▲# |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表8结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠肝组织总超氧化物歧化酶,Cu、Zn超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽含量极显著的下降(P<0.01),肝组织总抗氧化能力水平和巯基含量较显著的下降(P<0.05),肝组织丙二醛含量极显著的升高(P<0.01);雨生红球藻可以抑制这一现象,较显著提高肝组织总超氧化物歧化酶、Cu、Zn超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、和谷胱甘肽过氧化物酶的活性以及总抗氧化能力水平(P<0.05),极显著提高肝组织还原型谷胱甘肽和巯基含量(P<0.01),极显著降低肝组织丙二醛的含量(P<0.01)。
(8)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠脑组织抗氧化能力的影响
实验方法:取大鼠脑组织上清液2ml进行抗氧化能力指标的测试,测试方法分别按照超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、丙二醛、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、巯基、谷胱甘肽过氧化物酶测试试剂盒各自的操作方法进行。
测试结果见表9。
表9雨生红球藻对耐力训练大鼠脑组织上清液抗氧化能力的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
T-SOD(U/mgprot)Cu,Zn-SOD(U/mgprot)Mn-SOD(U/mgprot)T-AOC(U/mgprot)MD)A(nmol/mgprot)CAT(U/mgprot)-SH(μmol/gprot)GSH(mg/gprot)GSH-Px(U/mgprot) | 25.59±2.3716.20±2.239.39±0.790.35±0.073.36±0.332.21±0.2547.40±3.52425.82±45.735.16±0.51 | 21.46±1.98▲▲12.46±1.19▲▲9.00±0.900.35±0.053.96±0.39▲1.43±0.16▲▲40.5±4.64▲370.28±37.99▲▲4.50±0.49▲▲ | 23.51±2.05▲#14.30±1.82▲#9.21±0.820.39±0.063.42±0.41#1.97±0.21▲##46.10±4.61#416.60±41.75##5.10±0.45## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表9结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠脑组织总超氧化物歧化酶,Cu、Zn超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽含量极显著的下降(P<0.01),脑组织巯基含量较显著的下降(P<0.05),脑组织丙二醛含量较显著的升高(P<0.05),脑组织Mn-超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力水平变化并不显著;雨生红球藻可以抑制这一现象,与运动对照组比较,雨生红球藻可以较显著提高脑组织总超氧化物歧化酶和Cu、Zn超氧化物歧化酶的活性以及巯基含量(P<0.05),极显著提高脑组织过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽含量(P<0.0 1),较显著降低脑组织丙二醛的含量(P<0.05),脑组织总抗氧化能力和Mn-超氧化物歧化酶活性虽都有所升高,但未达到显著性水平。
(9)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠肾组织抗氧化能力的影响
实验方法:取大鼠肾组织上清液2ml进行抗氧化能力指标的测试,测试方法分别按照超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、丙二醛、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、巯基、谷胱甘肽过氧化物酶测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表10。
表10雨生红球藻对耐力训练大鼠肾组织上清液抗氧化能力的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
T-SOD(U/mgprot)Cu,Zn-SOD(U/mgprot)Mn-SOD(U/mgprot)T-AOC(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)CAT(U/mgprot)-SH(μmol/gprot)GSH(mg/gprot)GSH-Px(U/mgprot) | 169.68±15.29105.86±9.3067.82±7.761.89±0.220.74±0.088.36±1.1457.50±5.71367.84±31.6737.99±4.23 | 139.86±13.24▲▲75.25±7.57▲▲64.61±8.171.56±0.20▲0.98±0.15▲▲6.78±0.96▲▲47.60±5.86▲317.21±30.32▲▲31.23±3.12▲▲ | 153.44±14.78▲#91.01±8.25▲#62.43±7.891.97±0.16##0.87±0.11▲#8.63±1.22▲#54.50±5.62#377.42±21.77##42.49±3.91▲## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表10结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠肾组织总超氧化物歧化酶,Cu、Zn超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽含量极显著的下降(P<0.01),肾组织巯基含量以及总抗氧化能力水平较显著的下降(P<0.05),肾组织丙二醛含量极显著的升高(P<0.01),肾组织Mn-超氧化物歧化酶活性变化并不显著;与运动对照组比较,雨生红球藻粉可以较显著提高肾组织总超氧化物歧化酶和Cu、Zn超氧化物歧化酶的活性以及巯基含量(P<0.05),极显著提高肾组织过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力水平以及还原型谷胱甘肽含量(P<0.01),较显著降低肾组织丙二醛的含量(P<0.05),肾组织Mn-超氧化物歧化酶活性变化并不显著。
(10)雨生红球藻对耐力训练大鼠股四头肌组织抗氧化能力的影响
实验方法:取大鼠股四头肌组织上清液2ml进行抗氧化能力指标的测试,测试方法分别按照超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、丙二醛、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、巯基、谷胱甘肽过氧化物酶测试试剂盒各自的操作方法进行。
测试结果见表11。
表11 雨生红球藻对耐力训练大鼠股四头肌组织上清液抗氧化能力的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
T-SOD(U/mgprot)Cu,Zn-SOD(U/mgprot)Mn-SOD(U/mgprot)T-AOC(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)CAT(U/mgprot)-SH(mmol/gprot)GSH(mg/gprot)GSH-Px(U/mgprot) | 38.26±3.4030.77±3.057.49±0.76#0.28±0.042.76±0.363.07±0.3239.12±4.47436.31±45.892.65±0.29 | 32.37±3.03▲▲25.08±2.50▲▲7.29±0.630.19±0.03▲▲4.51±0.55▲▲2.19±0.30▲▲29.54±3.72▲▲302.46±33.25▲▲2.08±0.21▲▲ | 34.36±3.33▲#27.50±2.45▲#7.29±0.720.24±0.03▲##3.87±0.47▲▲##2.58±0.28▲#34.06±4.34▲#368.00±36.58▲#2.39±0.25▲# |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表11结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠股四头肌组织总超氧化物歧化酶,Cu、Zn超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽、巯基含量、总抗氧化能力水平极显著的下降(P<0.01),股四头肌组织丙二醛含量极显著的升高(P<0.01),股四头肌组织Mn超氧化物歧化酶活性变化并不显著;雨生红球藻粉可以抑制这一现象,与运动对照组比较,雨生红球藻粉可以较显著提高股四头肌组织总超氧化物歧化酶,Cu、Zn超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽、巯基含量(P<0.05),极显著提高股四头肌组织总抗氧化能力水平(P<0.01),极显著降低股四头肌组织丙二醛的含量(P<0.01),股四头肌组织Mn-超氧化物歧化酶活性变化并不显著。
(11)雨生红球藻对训练大鼠不同组织Na+,K+-ATP酶活性的影响
实验方法:分别取大鼠心组织、肝组织、脑组织、肾组织和股四头肌组织上清液0.2ml进行Na+,K+-ATP酶活性指标的测试,测试方法按照Na+,K+-ATP酶测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表12。
表12不同组织Na+,K+-ATP酶活性的影响(单位:μmolpi/mgprot/hourt)
组织 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
心脏肝脏脑肾脏股四头肌 | 4.60±0.412.97±0.252.22±0.193.52±0.302.44±0.19 | 3.45±0.39▲▲2.42±0.28▲1.65±0.20▲▲2.98±0.33▲1.90±0.21▲▲ | 4.14±0.45▲#2.74±0.29#2.08±0.22▲##3.37±0.36#2.15±0.23▲# |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表12结果显示,运动对照组大鼠在力竭运动后,各组织Na+,K+-ATP酶活性呈明显的下降趋势,与安静对照组比较,肝脏和肾脏组织Na+,K+-ATP酶活性有较显著的下降(P<0.05),心脏、脑组织和股四头肌组织Na+,K+-ATP酶活性有极显著的下降(P<0.01);雨生红球藻粉可以抑制这一现象,提高各组织Na+,K+-ATP酶活性,与运动对照组相比,心脏、肝脏、肾脏和股四头肌组织中的Na+,K+-ATP酶活性有较显著的升高(P<0.05),脑组织Na+,K+-ATP酶活性有极显著的升高(P<0.01)。加药组大鼠在力竭运动后,肝脏和肾脏组织中的Na+,K+-ATP酶活性略低于安静组水平,而心脏、脑组织和股四头肌组织Na+,K+-ATP酶活性较显著低于安静对照组水平(P<0.05)。
(12)雨生红球藻对训练大鼠不同组织Ca2+-ATP酶活性的影响
实验方法:分别取大鼠心组织、肝组织、脑组织、肾组织和股四头肌组织上清液0.2ml进行Ca2+-ATP酶活性指标的测试,测试方法按照Ca2+-ATP酶测试试剂盒的操作方法进行。测试结果见表13。
表13不同组织Ca2+-ATP酶活性的影响(单位:μmolpi/mgprot/hourt)
组织 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
心肌肝脏脑肾脏股四头肌 | 6.99±0.625.61±0.522.01±0.195.40±0.513.46±0.32 | 4.81±0.51▲▲4.59±0.48▲1.69±0.17▲4.61±0.47▲2.42±0.31▲▲ | 6.15±0.65▲##5.10±0.57#1.89±0.18#4.94±0.533.10±0.30▲## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表13结果显示,运动对照组大鼠在力竭运动后,各组织Ca2+-ATP酶活性呈明显的下降趋势,与安静对照组比较,肝脏、肾脏和脑组织Ca2+-ATP酶活性有较显著的下降(P<0.05),心肌和股四头肌组织Ca2+-ATP酶活性有极显著的下降(P<0.05);雨生红球藻可以抑制这一现象,提高各组织Ca2+-ATP酶活性,与运动对照组比较,心肌和股四头肌组织Ca2+-ATP酶活性有极显著的升高(P<0.01),肝脏和脑组织Ca2+-ATP酶活性有较显著的升高(P<0.05),肾脏组织中Ca2+-ATP酶活性虽有所升高,但并未达到显著性水平。运动加药组在力竭运动后,与安静对照组相比,心肌和股四头肌组织Ca2+-ATP酶活性有显著性的降低(P<0.05),肝脏、脑和肾脏组织Ca2+-ATP酶活性略有降低,但未达到显著性水平。
(13)雨生红球藻对训练大鼠不同组织Mg2+-ATP酶活性的影响
实验方法:分别取大鼠心组织、肝组织、脑组织、肾组织和股四头肌组织上清液0.2ml进行Mg2+-ATP酶活性指标的测试,测试方法按照Mg2+-ATP酶测试试剂盒的操作方法进行。测试结果见表14。
表14不同组织Mg2+-ATP酶活性的影响(单位:μmolpi/mgprot/hourt)
组织 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
心肌肝脏脑肾脏股四头肌 | 4.99±0.604.50±0.472.93±0.314.40±0.463.66±0.43 | 3.11±0.50▲▲3.76±0.39▲2.28±0.28▲▲3.69±0.37▲2.82±0.38▲▲ | 4.45±0.7##4.34±0.4#2.71±0.29#4.09±0.41#3.24±0.39▲# |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表14结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠心肌、脑和股四头肌组织Mg2+-ATP酶活性极显著的下降(P<0.01),肝脏和肾脏组织Mg2+-ATP酶活性有较显著的下降(P<0.05);雨生红球藻可以抑制这一现象,提高各组织Mg2+-ATP酶活性,与运动对照组比较,心肌组织Mg2+-ATP酶活性有极显著的升高(P<0.01),肝脏、脑、肾脏和股四头肌组织Mg2+-ATP酶活性有较显著的升高(P<0.05)。加药组大鼠在力竭运动后,心肌、肝脏、脑和肾脏组织Mg2+-ATP酶活性略低于安静对照组的水平,而股四头肌组织Mg2+-ATP酶活性与安静对照组比较有较显著的下降(P<0.05)。
(14)红球藻对大鼠心肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性的影响
实验方法:取大鼠心肌制备心肌线粒体悬液1.5ml,并进行心肌线粒体悬液的抗氧化能力及ATP酶活性指标的测试,测试方法分别按照丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化氢、琥珀酸脱氢酶、ATP酶分型测试试剂盒各自的操作方法进行。测试结果见表15。
表15红球藻粉对大鼠心肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
MDA(nmol/mgprot)T-SOD(U/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)CAT(U/m prot)H2O2(mmol/L)SDH(U/mgprot)Na+,K+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt)Ca2+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt)Mg2+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt) | 2.05±0.3535.72±3.8222.03±2.568.71±0.76207.21±31.5184.44±9.5939.97±4.1229.70±2.8834.70±3.58 | 2.63±0.31▲▲32.08±3.54▲18.29±1.98▲▲6.33±0.63▲▲423.67±34.17▲▲76.25±7.82▲34.85±3.18▲▲24.33±2.54▲▲30.13±3.04▲▲ | 2.26±0.30#36.20±3.89#20.25±2.26#7.18±0.72▲▲#345.06±36.36▲▲##90.59±12.08##38.45±3.93#27.78±2.81##33.78±6.21## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表15结果显示,力竭运动引起运动对照组大鼠心肌线粒体谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性极显著的下降(P<0.01),心肌线粒体总超氧化物歧化酶和琥珀酸脱氢酶(琥珀酸脱氢酶)活性较显著的下降(P<0.05),心肌线粒体丙二醛和过氧化氢含量极显著的升高(P<0.01);在力竭运动后,运动加药组大鼠与运动对照组比较结果显示,雨生红球藻可以较显著提高心肌线粒体总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶和Na+,K+-ATP酶的活性(P<0.05),极显著提高心肌线粒体琥珀酸脱氢酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性(P<0.01),较显著降低心肌线粒体丙二醛的含量(P<0.05),极显著降低心肌线粒体过氧化氢的含量(P<0.01)。
(15)雨生红球藻对股四头肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性的影响
实验方法:取大鼠股四头肌制备股四头肌线粒体悬液1.5ml,并进行股四头肌线粒体悬液的抗氧化能力及ATP酶活性指标的测试,测试方法分别按照丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化氢、琥珀酸脱氢酶、ATP酶分型测试试剂盒各自的操作方法进行。测试结果见表16。
表16雨生红球藻对股四头肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
MDA(nmol/mgprot)T-SOD(U/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)CAT(U/mgprot)H2O2(mmol/L)SDH(U/mgprot)Na+,K+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt)Ca2+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt)Mg2+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt) | 3.40±0.2632.37±3.6319.26±2.035.63±0.62238.45±21.3446.41±4.8018.31±1.9215.79±1.6513.99±1.45 | 5.68±0.54▲▲28.66±3.13▲15.86±1.66▲▲3.99±0.42▲▲485.67±34.25▲▲38.70±3.34▲▲14.89±1.63▲▲12.04±1.39▲▲10.74±1.29▲▲ | 4.39±0.46▲▲##31.26±3.80#17.89±1.89▲#5.09±0.47▲##395.74±26.65▲▲##51.90±-5.17▲##16.55±1.87▲#14.27±1.53▲##12.97±1.33▲## |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表16结果显示,力竭运动引起股四头肌线粒体丙二醛含量极显著升高(P<0.01);雨生红球藻可以抑制这一现象,股四头肌线粒体丙二醛含量极显著低于运动对照组水平(P<0.01),但仍高于安静对照组水平。力竭运动引起股四头肌线粒体抗氧酶过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性极显著的下降(P<0.01),总超氧化物歧化酶有较显著的下降(P<0.05);雨生红球藻粉可以抑制这一现象,使股四头肌线粒体总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶较显著升高(P<0.05),过氧化氢酶活性有极显著的升高(P<0.01),其中总超氧化物歧化酶已接近安静组水平,过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶仍低于安静对照组水平。力竭运动引起股四头肌线粒体过氧化氢含量极显著的升高(P<0.01),加入药物干预后,加药组大鼠股四头肌线粒体过氧化氢含量极显著低于运动对照组水平(P<0.01),但也显著高于安静组的水平。力竭运动引起股四头肌线粒体琥珀酸脱氢酶活性极显著的下降(P<0.01),加入药物干预后,加药组大鼠股四头肌线粒体琥珀酸脱氢酶活性极显著高于运动对照组(P<0.01),且也显著高于安静组的水平。力竭运动引起股四头肌线粒体ATP酶(Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶)活性极显著的下降(P<0.01);雨生红球藻可以抑制这一现象,与运动对照组比较,Mg2+-ATP酶和Ca2+-ATP酶有极显著的升高(P<0.01),Na+,K+-ATP酶有较显著的升高(P<0.05),但Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶仍低于安静对照组水平。
(16)雨生红球藻对红细胞抗氧化能力及红细胞膜ATP酶活性的影响
实验方法:取大鼠全血1.5ml制备红细胞和全血1ml制备红细胞膜样品,并进行红细胞的抗氧化能力及红细胞膜ATP酶活性指标的测试,测试方法分别按照丙二醛、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶、ATP酶分型测试试剂盒各自的操作方法进行。测试结果见表17。
表17雨生红球藻对大鼠红细胞抗氧化能力及红细胞膜ATP酶活性的影响
指标 | 安静对照组(n=8) | 运动对照组(n=8) | 运动加药组(n=8) |
MDA(nmol/mgHb)CAT(U/mgHb)GSH(mg/ml)GSH-Px(U/gHb)T-SOD(U/gHb)Na+,K+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt)Ca2+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt)Mg2+-ATPase(μmolpi/mgprot/hourt) | 0.37±0.076.23±0.8443.64±5.861011.16±47.3611125.55±923.471.24±0.211.84±0.252.14±0.31 | 0.82±0.15▲▲3.83±0.53▲▲33.20±4.59▲▲895.07±36.78▲▲8234.03±1403.23▲▲0.87±0.11▲▲1.42±0.19▲▲1.72±0.22▲▲ | 0.53±0.09▲▲##4.94±0.66▲▲#39.03±4.11▲#965.77±43.49▲##10464.02±959.53##1.02±0.18▲#1.65±0.21▲#1.95±0.27# |
注:▲代表与安静对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),▲▲代表与安静对照组比较具有极显著性差异(P<0.01);#代表与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05),##代表与运动照组比较具有极显著性差异(P<0.01)。
表17结果显示,力竭运动引起红细胞丙二醛极显著升高(P<0.01);雨生红球藻可以抑制这一现象,加药组大鼠红细胞丙二醛含量极显著低于运动对照组水平(P<0.01),但仍高于安静对照组水平。力竭运动引起红细胞总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性和还原型谷胱甘肽含量极显著的下降(P<0.01),雨生红球藻可以抑制这一现象,使红细胞总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性极显著升高(P<0.01),过氧化氢酶活性和还原型谷胱甘肽含量较显著的升高(P<0.05),但各值仍低于安静对照组水平。力竭运动引起红细胞膜ATP酶(Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶)活性极显著的下降(P<0.01);雨生红球藻可以抑制这一现象,较显著的提高ATP酶活性(P<0.05)。力竭运动后,运动加药组大鼠红细胞Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶都低于安静对照组的水平,而Mg2+-ATP酶接近于安静组水平。
(17)雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠跑台至力竭时间的影响
实验方法:在给大鼠服药的第42天,将运动对照组和运动加药组大鼠分别置于动物跑台上,进行一次性力竭试验并进行力竭时间指标的测试,力竭判定标准为,动物跟不上预定速度,大鼠臀部压在笼具后壁,后肢随转动皮带后拖达30秒,毛刷刺激驱赶无效。行为特征为呼吸深急、幅度大,神情疲倦,俯卧位,垂头,刺激后无反应。测试结果见表18。
表18雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠跑台至力竭时间的影响
组别 | 力竭时间/min | 力竭延缓率 |
运动对照组(n=8)运动加药组(n=8) | 88.42±10.47111.76±12.78# | -26.39% |
注:#表示与运动对照组比较具有较显著性差异(P<0.05).
表17显示,雨生红球藻能显著提高大鼠跑台至力竭的时间,力竭延缓率高达26.39%,说明雨生红球藻有较明显的抗疲劳作用。
5、实验结论
(1)雨生红球藻能够明显延长大强度耐力训练大鼠跑台运动至力竭的时间,具有抗疲劳作用。
(2)雨生红球藻能显著降低运动训练和力竭运动造成的大鼠血清丙氨酸氨基转移酶,天门冬氨酸氨基转移酶,乳酸脱氢酶,肌酸激酶活性的过度升高,提示雨生红球藻可以减轻大强度耐力运动对大鼠肝脏、心肌、骨骼肌等组织的损伤。
(3)雨生红球藻能够有效抑制运动训练造成大鼠血红蛋白含量下降,增强肝、肌糖原的增加,提示雨生红球藻可以提高机体能量储备和有氧运动能力。
(4)雨生红球藻能降低运动训练造成的血清尿素氮含量的升高,提示雨生红球藻可以降低运动大鼠体内蛋白质分解代谢速率,降低机体对运动强度的应激状况。
(5)雨生红球藻可以提高运动训练大鼠血清睾酮水平,使血清睾酮的下降得到了缓解,并对其它激素如胰岛素、胰高血糖素、生长激素、皮质醇有一定的调节作用,揭示雨生红球藻可以在某种程度上改善运动造成的内分泌紊乱。
(6)雨生红球藻对运动训练大鼠心、肝、肾、脑、肌各组织都表现出一定的抗脂质氧化和清除自由基的能力,对运动引起的抗氧化物酶活性下降有一定的抑制作用,说明雨生红球藻有一定的抗氧化作用。
(7)雨生红球藻可以明显延缓大强度耐力运动对大鼠心、肝、肾、脑、肌各组织ATP酶抑制作用,保证了细胞膜内外的离子浓度梯度,对维持内环境的稳定和骨骼肌、心肌的收缩功能都具有重要的意义。
(8)雨生红球藻对运动训练大鼠心肌线粒体和股四头肌线粒体都表现出一定的抗脂质氧化和清除自由基的能力,并且可以延缓大强度运动对线粒体ATP酶活性的抑制作用,说明雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体和股四头肌线粒体具有保护作用,保证了耐力运动中的氧化功能,提高大鼠的耐力水平。
(9)雨生红球藻可以降低大强度耐力运动对红细胞的氧化损伤,并且可以延缓大强度运动对红细胞膜ATP酶活性的抑制作用,说明雨生红球藻对大强度耐力训练大鼠红细胞的完整性和流动性具有保护作用,保证了耐力运动中各组织器官的氧供,提高大鼠的耐力水平。
本发明的功能:消除自由基、提高免疫能力、抗心肌和脑缺血缺氧、抗疲劳功能。
本发明的规格:本发明药物胶囊剂每粒重0.3g,每粒含雨生红球藻1.60g;本发明药物片剂每片重0.3g,每片含雨生红球藻1.60g;本发明药物颗粒剂每袋重5g,每克含雨生红球藻1.28g;本发明药物口服液每瓶10mL,每毫升含雨生红球藻0.64g。
本发明的用法用量:每日口服三次,每次口服胶囊剂4粒或片剂4片或颗粒剂1袋或口服液1瓶。
注意事项:避光保存。
Claims (2)
1、一种雨生红球藻抗疲劳药物,其特征在于它是由雨生红球藻为原料按照下述方法制备的口服药剂:将雨生红球藻用粉碎机粉碎成粗粉,过20目筛,用70%乙醇回流提取二次,第一次8倍量,第二次6倍量,回流2小时,滤过,合并二次滤液,在60℃减压浓缩至相对密度为1.20~1.25,减压干燥,粉碎,过五号筛,加入有机或无机的固体或液体赋形剂混合,按制剂学的常规制备方法制备的口服药剂。
2、按照权利要求1所述的雨生红球藻抗疲劳药物,其特征在于:所说的口服药剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液。
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