CN100591328C - 含有鹰嘴豆提取物和类维生素a化合物的化妆品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了含有与类维生素A化合物组合的鹰嘴豆提取物的化妆品护肤组合物。还公开了通过涂敷此类组合物调理皮肤的方法。

Description

含有鹰嘴豆提取物和类维生素A化合物的化妆品组合物
发明领域
本发明涉及含有与类维生素A化合物(retinoids)组合的鹰嘴豆(chick pea)提取物的化妆品组合物以及通过在皮肤上涂敷所述组合物来调理皮肤的方法。
发明背景
视黄醇(维生素A)是一种内源性化合物，其天然存在于人体内且是正常上皮细胞分化所必需的。天然与合成的维生素A衍生物业已被广泛应用在多种皮肤疾病的治疗中并且作为皮肤修复和更新剂。视黄酸已经用来治疗各种皮肤病症如痤疮、皱纹、牛皮癣、老年斑和皮肤变色。
在细胞中，视黄醇和视黄酸与特异性细胞结合蛋白结合，两种主要的蛋白是CRABP-1和-2(Roos等，Pharmacological Reviews：50，315-333，1998)。这些蛋白通过在类维生素A化合物代谢中充当贮藏蛋白或穿梭蛋白来发挥调节细胞内类维生素A化合物浓度的作用。这种蛋白的水平是通过细胞内视黄酸的量来调控。较高细胞水平的类维生素A化合物使CRABP-2的表达增加。因此，这种蛋白在细胞中的量，是细胞的类维生素A化合物活性的一个量度。在表皮和真皮中皮肤细胞皆含有CRABP-2。成纤维细胞中CRABP-2对体外给予类维生素A化合物的反应被用作类维生素A化合物生物活性的一种可再现量度，其可以预测出人体皮肤的应答(Elder等，J.Invest.Dermatol.，106：517-521，1996)。所以，成纤维细胞的CRABP-2表达是产生多种美化皮肤益处(抗衰老、抗皱、皮肤调理等)的类维生素A化合物活性的一个量度。
鹰嘴豆或西班牙豆(鹰嘴豆属(Cicer arietinum))，一种常见的食用扁豆，含有类黄酮类化合物，包括大豆黄素(daidzein)、芒柄花黄素(formononetin)、鹰嘴豆素A(biochanin A)、红车轴草素(pratensein)、高2’，5，7-三羟基-4’-甲氧异黄酮(homoferreirin)、美迪紫檀素(medicarpin)、高丽槐素(maackiain)、甲基香豆雌醇(methyl coumestrol)、苜蓿内酯(medicagol)、芒柄花黄素葡糖苷和鹰嘴豆素A葡糖苷(Ingham等，在：Progress in the chemistry ofOrganic natural products，vol 43：Ed-W.Herz等，Springer-Verlag，Wien，New York，1983中)。衍生自鹰嘴豆的类黄酮类化合物据报导具有降低大鼠的血液和肝脏内脂质的作用。若干营养学研究报告了衍生自鹰嘴豆的蛋白用作营养补剂和提高鹰嘴豆蛋白质量的方法。Vasiliou在US专利4,761,285中公开了鹰嘴豆作为食品强化剂或用于痔疮的内部或局部治疗的用途。在印度，从鹰嘴豆粉与水混合制成美容面膜或皮肤处理是常见的美容处理。
本发明部分基于与类维生素A化合物组合的有机溶剂鹰嘴豆提取物可以提高成纤维细胞中CRABP-2表达的发现。
发明概述
本发明涉及一种化妆品护肤组合物，含有：
(i)含量占所述组合物0.00001-10％(重量)的鹰嘴豆的有机溶剂提取物；
(ii)含量为0.001-10％(重量)的类维生素A化合物；和
(iii)化妆上可接受的赋形剂。
本发明还包括一种改善或预防起皱、有细纹、干燥、易剥落(flaky)、老化或光损伤皮肤的状况和提高皮肤厚度、弹性、柔软性、光亮度、红润度和丰满度的方法，该方法包括把本发明组合物涂敷在皮肤上。本发明的组合物旨在用于哺乳动物皮肤的局部涂敷，所述的皮肤业已干燥、易剥落、有细纹、起皱、衰老、光损伤，或者可以预防性涂敷来减少劣化性变化。
发明详述
除了在实施例中，或者另外明确指出之处，本说明书中所有表示物质的量或反应的条件、物质的物理性质和/或用途的数字均理解为由词“约”修饰。所有的量是以该组合物的重量计，除非另外说明。
鹰嘴豆适合以有机提取物的形式应用于本发明的组合物中。用于本发明中的鹰嘴豆提取物是从干燥的鹰嘴豆制成，干燥的鹰嘴豆可以得自Arrowhead Mills，取自保健食品店或超市。
有机鹰嘴豆提取物是通过用溶剂提取干燥的鹰嘴豆来得到，这种提取是通过把1份干燥鹰嘴豆与2-5份的溶剂在室温下搅拌4-24小时。适用的溶剂在下文描述。通过过滤和/或离心使该提取物澄清，随后经过蒸发干燥(任选地，在真空下)得到有机鹰嘴豆提取物。
适合用来制备本发明所用鹰嘴豆提取物的溶剂包括，但不限于：乙醇、甲醇、己烷、氯仿、二氯甲烷和乙酸乙酯。优选的溶剂是二氯甲烷、甲醇，或乙醇以便使活性最佳化。提取物可以进一步浓缩，分馏，反萃取(re-extracted)或纯化，例如通过有机溶剂提取或利用色谱。
通常，鹰嘴豆提取物在本发明组合物中的含量是该组合物重量的0.00001％-10％(重量)。为了降低成本和使效果最大，优选鹰嘴豆提取物的量是该组合物重量的0.01-10％(重量)且最优选0.1％-5％(重量)。
本发明的组合物还含有选自视黄醇或视黄基酯的类维生素A化合物。术语“视黄醇”包括下列视黄醇的异构体：全反式视黄醇、13-顺式-视黄醇、11-顺式-视黄醇、9-顺式-视黄醇、3，4-二脱氢-视黄醇。优选的异构体是全反式视黄醇、13-顺式-视黄醇、3，4-二脱氢-视黄醇、9-顺式-视黄醇。最优选全反式视黄醇，这归因于其广泛的商业可得性。
视黄基酯是视黄醇的酯。术语“视黄醇”定义如上。适合用于本发明的视黄基酯是视黄醇的C1-C30酯，优选C2-C20酯，并且最优选C2、C3和C16酯，因为它们更通常可得。视黄基酯的实例包括但不限于：棕榈酸视黄基酯、甲酸视黄基酯、乙酸视黄基酯、丙酸视黄基酯、丁酸视黄基酯、戊酸视黄基酯、异戊酸视黄基酯、己酸视黄基酯、庚酸视黄基酯、辛酸视黄基酯、壬酸视黄基酯、癸酸视黄基酯、十一烷酸视黄基酯、十二烷酸视黄基酯、十三烷酸视黄基酯、肉豆蔻酸视黄基酯、十五烷酸视黄基酯、十七烷酸视黄基酯、硬脂酸视黄基酯、异硬脂酸视黄基酯、十九烷酸视黄基酯、花生四烯酸视黄基酯、山
Figure C0081845100051
酸视黄基酯、亚油酸视黄基酯、油酸视黄基酯。
本发明优选的酯选自棕榈酸视黄基酯、乙酸视黄基酯和丙酸视黄基酯，因为这些酯商业上最易得，因而最便宜。亚油酸视黄基酯也因其功效而优选。
视黄醇或视黄基酯在本发明组合物中的用量是该组合物重量的约0.001％-约10％(重量)，优选约0.01％-约1％(重量)，最优选约0.01％-约0.5％(重量)。
本发明的组合物还包括化妆上可接受的赋形剂，在组合物中为鹰嘴豆和类维生素A化合物起稀释剂、分散剂或载体的作用，由此使组合物在涂敷于皮肤上时易于分配。
与水不同的，或除了水以外的赋形剂可以包括液体或固体润肤剂、溶剂、保湿剂、增稠剂和粉末。尤其优选的非水载体是聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本发明的聚硅氧烷类化合物可以是那些25℃下粘度为约10-10,000,000mm2/s(厘沲)的化合物。尤其理想的是低粘度和高粘度聚硅氧烷的混合物。这些聚硅氧烷类化合物可得自the General Electric Company的商标Vicasil、SE和SF下以及Dow Corning Company的200和550系列下。可以在本发明组合物中使用的聚硅氧烷的量介于该组合物重量的5％-95％，优选25％-90％(重量)的范围内。
化妆上可接受的赋形剂一般占该组合物重量的5％-99.9％，优选25％-80％(重量)，并且可以，在其它化妆品添加剂不存在时，构成该组合物的余量。优选地，赋形剂中水至少是赋形剂重量的80％(重量)。优选地，水占本发明组合物的至少50％(重量)，更优选是组合物重量的60-80％(重量)。
任选的皮肤有益物质和化妆品添加剂
油或油性物质可以存在，与乳化剂一起提供油包水乳液或水包油乳液，这很大程度上依赖于所使用乳化剂的平均亲水-亲油平衡(HLB)。
本发明组合物优选包括防晒剂。防晒剂包括那些常用来阻断紫外线的物质。示例化合物为PABA、肉桂酸酯和水杨酸酯的衍生物。例如，可以使用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯酮(也称作羟苯甲酮)。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯酮可分别购自商标Parsol MCX和二苯酮-3下。所用防晒剂在该乳液中的精确量可以根据预期防日光UV辐射的程度来变化。
润肤剂亦可以掺混在本发明的化妆品组合物中。此类润肤剂的水平可以是该组合物总重量的0.5％-50％，优选5％-30％(重量)。润肤剂可以按照一般化学种类来分类，如酯类、脂肪酸类和醇类，多元醇类和烃类。
酯类化合物可以是单-或二-酯。脂肪二酯类化合物的可接受实例包括己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二聚酸二异丙酯(diisopropyldimerate)和琥珀酸二辛酯。可接受的支链脂肪酯类化合物包括肉豆蔻酸2-乙基-己酯、硬脂酸异丙酯和棕榈酸异硬脂基酯。可接受的三元酸酯类化合物包括三亚油酸三异丙酯和柠檬酸三月桂基酯。可接受的直链脂肪酯类化合物包括棕榈酸月桂基酯、乳酸肉豆蔻基酯和油酸硬脂基酯。优选的酯类化合物包括椰油-辛酸酯/癸酸酯(coco-caprylate/caprate)(椰油辛酸酯和椰油癸酸酯的混合物)，丙二醇肉豆蔻基醚乙酸酯、己二酸二异丙酯和辛酸鲸蜡基酯。
适用的脂肪醇和酸包括那些具有10-20个碳原子的化合物。尤其优选的化合物是鲸蜡基、肉豆蔻基、棕榈基和硬脂基的醇和酸类化合物。
可以起润肤剂作用的多元醇中是直链和支链烷基多羟基化合物。例如，优选丙二醇、山梨糖醇和甘油。也可以使用聚合多元醇类化合物如聚丙二醇和聚乙二醇。丁二醇和丙二醇尤其还优选作为渗透增强剂。
可以充当润肤剂的示例烃类化合物是那些具有12-30个碳原子的烃链的烃类化合物。具体实例包括矿物油、矿脂、角鲨烯和异链烷烃。
本发明的化妆品组合物中另一类功能组分是增稠剂。增稠剂的存在量通常是该组合物重量的0.1-20％(重量)，优选约0.5％-10％(重量)。增稠剂的例子是交联聚丙烯酸酯材料，购自B.F.GoodrichCompany的商标Carbopol下。树胶可以使用例如黄原胶、角叉菜胶、明胶、刺梧桐树胶、果胶和刺槐豆胶。在某些情况下，利用也做聚硅氧烷或润肤剂的物质可以完成增稠功能。譬如，大于10厘沲的聚硅氧烷胶和酯类化合物如硬脂酸甘油酯具有双重功能性。
本发明的化妆品组合物中可以掺入粉末。这些粉末包括白垩、滑石、高岭土、淀粉、绿土、化学改性的硅酸镁铝、有机改性的蒙脱石粘土、水合硅酸铝、热解法二氧化硅(fumed silica)、淀粉辛烯基琥珀酸铝及其混合物。
其它次要添加剂成分也可以掺混在所述的化妆品组合物中。这些成分可以包括着色剂、遮光剂和香料。这些其它次要添加剂成分的含量可以是该组合物重量的0.001％至20％(重量)。
组合物的应用
本发明的组合物主要用来作为一种局部美容涂敷在人体皮肤上的产品，尤其是作为调理、湿润和平滑皮肤的试剂，并且预防或减少条纹、皱纹或老化皮肤的出现。
在使用中，从适当容器或涂敷器把少量的组合物，例如1-100ml，涂敷在皮肤的暴露区域，而且如果必要，随后用手或手指或适当装置铺展和/或擦抹到皮肤内。
产品形式和包装
本发明的局部皮肤处理组合物可以配制为洗液、膏霜或凝胶。所述的组合物可以包装在与其粘度匹配的适当容器内并由用户使用。例如，洗液或膏霜可以包装在瓶或滚珠涂敷器(roll-ball applicator)中，或抛射剂驱动气雾剂装置或带有适合手指操作的泵的容器。当组合物是膏霜时，可以简单贮藏在非变形瓶或挤压容器中，例如管内或有盖子的广口瓶中。所述的组合物也可以包含在胶囊内，例如那些在U.S.专利5,063,507(在此通过引用并入本文)中描述的。本发明因此还提供一种含有在此定义的化妆上可接受组合物的封闭容器。
下列具体实施例进一步举例说明本发明，但本发明不限于此。在全部实施例中，鹰嘴豆得自本地超级市场。类维生素A化合物得自Sigma。用学生t检验计算所有的p-值。
实施例
采用下列方法：
方法：
1.鹰嘴豆提取物的制备：
干燥的鹰嘴豆购自本地超市并在干燥研磨机中粉化。通过把1g的干燥鹰嘴豆粉末在10ml的乙醇中室温下搅拌4-24小时制得鹰嘴豆的醇提取物。通过过滤和离心使提取物变澄清，得到鹰嘴豆在乙醇中的10％提取物。
2.细胞培养方法：
使用得自25-30岁女性志愿者的防晒内臂的成人成纤维细胞。令细胞在含有10％FBS的1∶1DMEM/Hams F12培养基内、于37℃5％CO2气氛中正常大气氧张力下生长。第三传代成人成纤维细胞在含有10％FBS的DMEM培养基中于12孔平板内以40,000细胞/ml/孔的接种密度生长。80％融合的细胞在无血清和无酚红(PRF)的DMEM培养基中漂洗2次。用鹰嘴豆提取物预处理4小时，随后给予类维生素A化合物并孵育48小时。孵育后，孔用1X PBS洗涤2次，细胞单层收获在100μl细胞裂解缓冲液(含有1X PBS，1％TritonX，0.5％脱氧胆酸钠，含有蛋白酶抑制剂的0.1％SDS(10mg/ml PMSF，存在于异丙醇中，10μl/ml))中。该混悬液在14000rpm下旋转10分钟，收集上清液且用等分上清液进行蛋白定量分析。利用Pierce蛋白试剂盒测定蛋白浓度。其余的100μl上清液(细胞裂解物)在40μl样本缓冲液(NOVEX)和0.5％β巯基乙醇(BME)中通过煮沸样本5分钟使其变性。等量的蛋白加载在16％Tris-甘氨酸凝胶上，通过SDS记录(page)进行蛋白分析且通过蛋白质免疫印迹(Western Immuno-blotting)进行CRABP-2蛋白表达。
3.成纤维细胞中细胞视黄酸结合蛋白2(CRABP-2)的检测：
为了测量CRABP-2在如上制备的成纤维细胞中的水平，将细胞上清液重新悬浮在4X样本缓冲液和0.5％BME中，煮沸5分钟且用于蛋白质印迹。把等量的蛋白加载在16％Tris-甘氨酸凝胶上通过SDS记录和蛋白质免疫印迹进行CRABP-2蛋白分析。将凝胶转移至硝酸纤维素印迹并利用CRABP-2的单克隆抗体按照标准方法进行蛋白印迹。用得自Santa Cruz Biotechnology(SantaCruz，CA)的化学发光体系在蛋白印迹中使CRABP-2蛋白带显色。薄膜中的色带通过光密度扫描定量，由三份样本获得的数据计算为对照的百分比且在下表中表示为一式三份样本的相对于对照的百分增量(对照为100％)+/-SD。
实施例1-4
下列实施例研究不同浓度的鹰嘴豆提取物和类维生素A化合物的组合形式对于成纤维细胞的CRABP-2表达的影响。
实施例1：100nM类维生素A化合物和0.1μl的10％鹰嘴豆提取物
  组   CRABP-2水平   作为对照的百分比   相对于对照的P值   相对于类维生素A化合物的P值   相对于鹰嘴豆的P值   协同
  对照   0.7+/-0.2   100+/-29   1
  视黄醇   2.02+/-0.23   289+/-34   0.0000056   1
  棕榈酸视黄基酯   1.84+/-0.16   262+/-24   0.00053   1
  亚油酸视黄基酯   2.06+/-0.09   294+/-12   0.0000014   1
  乙酸视黄基酯   1.44+/-0.26   206+/-37   0.0022   1
  鹰嘴豆提取物   1.71+/-0.09   245+/-13   0.00010
  鹰嘴豆+视黄醇   3.38+/-0.22   482+/-32   4.4E-07   0.00208   0.000031   有
  鹰嘴豆+棕榈酸视黄基酯   1.85+/-036   264+/-52   0.000113   0.975   0.564   无
  鹰嘴豆+亚油酸视黄基酯   1.89+/-0.19   270+/-28   0.000075   0.256   0.23   无
  鹰嘴豆+乙酸视黄基酯   3.72+/-1.06   532+/-151   0.0000177   0.022   0.030   有
实施例2：100nM类维生素A化合物和1.0μl的10％鹰嘴豆提取物
  组   CRABP-2水平   作为对照的百分比   相对于对照的P值   相对于类维生素A化合物的P值   相对于鹰嘴豆的P值   协同
  对照   0.7+/-0.2   100+/-29   1
  视黄醇   2.02+/-0.23   289+/-34   0.0000056   1
  棕榈酸视黄基酯   1.84+/-0.16   262+/-24   0.00053   1
  亚油酸视黄基酯   2.06+/-0.09   294+/-12   0.0000014   1
  乙酸视黄基酯   1.44+/-0.26   206+/-37   0.0022   1
  鹰嘴豆提取物   1.46+/-0.37   209+/-54   0.0049
  鹰嘴豆+视黄醇   5.52+/-0.02   789+/-3.0   7.3E-08   0.000293   7.3E-04   有
  鹰嘴豆+棕榈酸视黄基酯   3.24+/-0.42   462+/-60   0.0000019   0.049   0.016   有
  鹰嘴豆+亚油酸视黄基酯   3.69+/-1.5   527+/-223   0.00167   0.147   0.075   无
  鹰嘴豆+乙酸视黄基酯   3.48+/-0.21   498+/-30   2.88E-07   0.00047   0.0012   有
实施例3：500nM类维生素A化合物和0.1μl的10％鹰嘴豆提取物
  组   CRABP-2水平   作为对照的百分比   相对于对照的P值   相对于类维生素A化合物的P值   相对于鹰嘴豆的P值   协同
  对照   0.7+/-0.2   100+/-29   1
  视黄醇   0.72+/-0.04   102+/-6   0.877   1
  棕榈酸视黄基酯   0.94+/-0.31   135+/-45   0.196   1
  亚油酸视黄基酯   0.81+/-0.16   115+/-23   0.455   1
  乙酸视黄基酯   1.65+/-0.49   235+/-70   0.0057   1
  鹰嘴豆提取物   1.71+/-0.09   245+/-13   0.00010   1
  鹰嘴豆+视黄醇   0.74+/-0.22   106+/-31   0.78   0.86   0.0021   无
  鹰嘴豆+棕榈酸视黄基酯   2.63+/-0.58   376+/-83   0.0000124   0.0118   0.045   有
  鹰嘴豆+亚油酸视黄基酯   3.83+/-1.79   547+/-256   0.00026   0.043   0.011   有
  鹰嘴豆+乙酸视黄基酯   6.31+/-1.63   901+/-233   4.5E-05   0.033   0.0082   有
实施例4：500nM类维生素A化合物和1.0μl的10％鹰嘴豆提取物
  组   CRABP-2水平   作为对照的百分比   相对于对照的P值   相对于类维生素A化合物的P值   相对于鹰嘴豆的P值   协同
  对照   0.7+/-0.2   100+/-29   1
  视黄醇   0.72+/-0.04   102+/-6   0.877   1
  棕榈酸视黄基酯   0.94+/-0.31   135+/-45   0.196   1
  亚油酸视黄基酯   0.81+/-0.16   115+/-23   0.455   1
  乙酸视黄基酯   1.65+/-0.49   235+/-70   0.0057   1
  鹰嘴豆提取物   1.71+/-0.09   245+/-13   0.00010   1
  鹰嘴豆+视黄醇   3.19+/-0.14   456+/-20   3.53E-07   9.45E-06   0.0018   有
  鹰嘴豆+棕榈酸视黄基酯   2.78+/-0.11   393+/-15   1.02E-06   0.000733   0.0047   有
  鹰嘴豆+亚油酸视黄基酯   3.43+/-0.26   490+/-37   5.7E-07   0.000132   0.0018   有
  鹰嘴豆+乙酸视黄基酯   3.74+/-0.09   534+/-13   6.27E-08   0.0044   0.00054   有
实施例1-4概括的结果证明，某些浓度的类维生素A化合物与某些浓度的鹰嘴豆提取物具有协同作用。最佳协同作用是在500nM水平的所有类维生素A化合物和1μl的鹰嘴豆提取物时观察到。
应理解，本发明在此举例和描述的具体形式仅仅是代表性的。可以在不脱离本申请公开内容的清楚教导下对举例的实施方式进行改变，包括但不限于本说明书中提出的那些改变。所以，在判断本发明的范围时应该参见下面所附的权利要求书。

Claims (9)

1.一种化妆品护肤组合物，含有：
(i)含量为0.01-10重量％的鹰嘴豆的有机溶剂提取物；
(ii)含量为0.01-1重量％的选自视黄醇和视黄基酯的类维生素A化合物；和
(iii)化妆上可接受的赋形剂。
2.根据权利要求1的化妆品护肤组合物，其中所述类维生素A化合物是视黄醇。
3.根据权利要求1的化妆品护肤组合物，其中所述类维生素A化合物是棕榈酸视黄基酯，并且其中所述棕榈酸视黄基酯的存在量为100nM，以及所述鹰嘴豆的提取物的存在量为1.0μl 10％的鹰嘴豆提取物，或者，所述棕榈酸视黄基酯的存在量为500nM，而所述鹰嘴豆的提取物的存在量为0.1μl或1.0μl 10％的鹰嘴豆提取物。
4.根据权利要求1的化妆品护肤组合物，其中所述类维生素A化合物是亚油酸视黄基酯，并且其中所述亚油酸视黄基酯的存在量为500nM，以及所述鹰嘴豆的提取物的存在量为0.1μl或1.0μl10％的鹰嘴豆提取物。
5.根据权利要求1的化妆品护肤组合物，其中所述类维生素A化合物是乙酸视黄基酯。
6.权利要求1的组合物在制备涂敷于皮肤的用于改善起皱、细纹、干燥、易剥落、老化或光损伤皮肤的表观和提高皮肤厚度、弹性、柔软性和丰满度的产品的应用。
7.根据权利要求6的应用，其中所述组合物为权利要求5的组合物。
8.权利要求1的组合物在制备涂敷于皮肤的用于提高皮肤成纤维细胞中细胞视黄酸结合蛋白的水平的产品的应用。
9.根据权利要求8的应用，其中所述组合物为权利要求5的组合物。
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