CN100566717C - 治疗高血脂症的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其包括的第一个活性成分为阿昔莫司，第二个活性成分匹伐他汀、或其可药用的盐、酯或溶剂化物；第一与第二活性成分(以游离酸计)的重量比为(50-800)∶1，优选重量比为(100-400)∶1，进一步优选重量比为200∶1。阿昔莫司和匹伐他汀的联合应用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方，表明两药合用有协同作用，同时又无明显的毒性作用，且与阿昔莫司普伐他汀联合使用、阿昔莫司洛伐他汀联合使用相比较，降脂效果更为明显。

Description

治疗高血脂症的组合物

技术领域

本发明是2005年5月25日提交的申请号为200580007179.2、发明名称为“治疗高血脂症的组合物”的专利申请的分案申请。

本发明涉及一种新的治疗高血脂症的组合物，其包括第一种活性成分阿昔莫司和第二种活性成分匹伐他汀钙或其可药用盐、酯或溶剂化物。

背景技术

随着医药科学的不断发展，人们认识到胆固醇、脂肪等含量过高是发生心血管疾病的基本病因，高血脂是发生冠心病及高血压的主要危险因素。因此，人们开始把血脂调节药的开发作为防治心血管疾病的重点。自20世纪80年代末起，降血脂药物大量推出，其中他汀类药物受到人们好评，其临床疗效之佳是其它各类调节血脂药物所不能相比的。十多年来，几个国际大规模冠心病防治试验的完成，证实他汀类药物可以降低冠心病的发病率和死亡率，而且能使已经形成的动脉粥样硬化斑块发展减缓，甚至减退，从而打破了冠心病不可逆转的传统观念，由“他汀”引发的一场血脂革命正在全球兴起。目前，医药界对调脂药在防治心血管疾病方面的作用充满信心，调脂疗法将成为21世纪预防心血管疾病的主要方法。

匹伐他汀(Pitavastatin)是第一个全合成的羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂类调血脂新药，无需代谢转化而直接具有药理活性。本品在体内竞争性地抑制胆固醇合成过程中的限速酶羟甲戊二酰辅酶A还原酶，使胆固醇的合成减少，继而使低密度脂蛋白受体合成增加，从而加强了由受体介导的低密度脂蛋白胆固醇的分解和清除，本品还抑制极低密度脂蛋白胆固醇的合成从而减少低密度脂蛋白胆固醇的生成。以上主要作用部位在肝脏，结果使血胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平降低，由此对动脉粥样硬化和冠心病的防治产生作用。最近的研究显示，匹伐他汀可以通过诱导内皮细胞中NO合酶的活性，增加NO的生成，对由炎症诱导的内皮细胞损伤产生显著的保护作用^[1]。本品还可中度降低血甘油三酯水平和轻度升高血高密度脂蛋白胆固醇水平。临床主要用于治疗高胆固醇血症和混合型高脂血症，最大降脂作用在4周内达到。经大量临床研究证实，本品具有优良的效益/风险比率，毒性低，副作用少而轻微，患者耐受性良好，是安全有效的降脂药物。上市的是其钙盐。

阿昔莫司(Acipimox)是一种人工合成的烟酸衍生物，能抑制脂肪组织的分解，减少游离脂肪酸自脂肪组织释放，从而降低甘油三酯(TG)在肝脏中的合成，并通过抑制极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的合成，使血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的浓度下降。本品还可抑制肝脏脂肪酶的活性，减少高密度脂蛋白(HDL)的分解。该药口服吸收迅速，药后2小时内血药浓度即达峰值，半衰期为2小时。该药不与血浆蛋白结合，不被代谢，主要以原形经尿排出。在临床上，阿昔莫司可有效治疗高甘油三酯症(IV型)、高胆固醇血症(IIa型)及高甘油三酯合并高胆固醇血症(IIb型)，是一种安全、有效、耐受性好的调血脂药。

目前，该领域的研究趋势是将两种不同作用机制的调血脂药制成复方制剂，从而使降脂作用更加全面，同时还可发挥协同作用，增强疗效，减少毒副作用。

美国专利US5260305A公开了HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀和烟酸及其衍生物的组合物，具体公开了规格为普伐他汀5mg、10mg、20mg、40mg和阿昔莫司750mg的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的药理实验数据，更没有涉及到匹伐他汀和阿昔莫司的联合用药问题。

中国专利申请CN1425374A公开了阿昔莫司和洛伐他汀组合物，公开的比例是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比为25～50∶1，优选的比例是25∶1或37.5∶1，但没有涉及阿昔莫司和匹伐他汀复方的最佳配比及相应药理实验数据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，该组合物含有第一种活性成分阿昔莫司和第二种活性成分匹伐他汀或其可药用盐、酯或溶剂化物。由于两药作用机制不同，组成组合物后降脂作用更加全面，并且两药合用有协同作用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方。此外，通过合理选择组合物中匹伐他汀的用量，使组合物在有效降低血脂水平的同时又无明显的毒副作用，同时本组合物一日只需用药一次，用药方便，这将大大提高患者的用药依从性。

为实现上述目的，本发明提供了一种治疗高血脂症的组合物，该组合物包括两种活性成分，第一个活性成分为阿昔莫司，第二个活性成分为匹伐他汀、或其可药用的盐、酯或溶剂化物。匹伐他汀可药用的盐为合适的匹伐他汀生理可接受盐，包括衍生自无机的和有机的碱所形成的盐，其可为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐、铁盐。所述的匹伐他汀可药用的酯为合适的匹伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、杂环醇所形成的酯，如可为甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。

本发明以匹伐他汀钙为例对两种活性成分的重量比进行筛选，通过实验得出阿昔莫司和匹伐他汀(以游离酸计，下同)的重量比为50～800∶1，优选的比例是100～400∶1，进一步优选的比例是200∶1。

本发明组合物的药物制剂的剂型，包括片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸等固体制剂，可以按照本领域公知的一般制剂方法制备，阿昔莫司含量相当于在将组合物给药时约200～750mg的日剂量，匹伐他汀盐含量以游离酸计相当于0.25～2mg的日剂量。匹伐他汀盐包括钠盐、钾盐等碱金属盐或镁、钙等碱土金属盐，优选钠盐。

本发明的组合物在制成固体制剂，如片剂或胶囊时，为达到持久的治疗效果，优选地将有效量的阿昔莫司制成缓释部分，再与有效量的匹伐他汀盐共同制成缓释制剂，如缓释片、缓释胶囊等。相应地，可药用的辅料包括稀释剂，如淀粉、乳糖、甘露醇、预胶化淀粉、糊精、微晶纤维素；崩解剂，如羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠；缓释剂，如乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素-4M、羟丙基甲基纤维素-15M；优特奇RS-100、RL100、RS30D、RL30D、NE30D，以及苏丽丝(Surelease，乙基纤维素的水分散体)粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮，交联聚乙烯吡咯烷酮，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等。

本发明的组合物通过药理方面的研究工作，表明当采用本发明的组合物，尤其是采用优选的配比时，与单独应用有效量的阿昔莫司或匹伐他汀相比，显示出令人吃惊的更好效果，同时毒性没有增加，因而安全剂量范围大，疗效持续时间长，综合效果好，使用方便。本发明的组合物可以每日1～2次给药，优选为每日1次。本发明的组合物与阿昔莫司和普伐他汀联合使用、与阿昔莫司和洛伐他汀的联合使用相比，也表现出更好的降脂活性。

另外，我们在实验中发现，本发明组合物中匹伐他汀的药理活性与其所成的盐、酯或溶剂化物关系很小，其降脂活性的大小仅与匹伐他汀游历酸的量有关，所以本发明中匹伐他汀可以为任何一种可以药用的盐，也可以为任何一种匹伐他汀可以药用的酯或溶剂化物。

通过对本发明的组合物与背景技术中的US5260305A和CN1425374A的组合物进行比较研究，在实验中意外地发现，阿昔莫司与匹伐他汀的联合使用在降低血清总胆固醇、血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇方面不仅存在着明显的协同性作用，而且与阿昔莫司和普伐他汀的联合使用、阿昔莫司和洛伐他汀的联合使用相比较，降脂效果更为明显，在升高高密度脂蛋白胆固醇方面，也有着比较明显的优势。

具体实施方式

现通过如下实施例进一步说明本发明的内容，但本发明的保护范围不限于以下实施例。

实施例1

a、阿昔莫司                 200g

空白丸芯                    250g

7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)  200g

制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，喷枪压力(CYL)3bar，雾化压力(CAP1)0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。

b、匹伐他汀钙              0.5g(以匹伐他汀游离酸计)

空白丸芯                   30g

7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 30g

制备工艺：将匹伐他汀钙过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵6％，转盘转速160rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。

c、将a和b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为200mg和0.5mg进行填充，即可。

实施例2

a、阿昔莫司                200g

乳糖                       30g

羧甲基淀粉钠               30g

微晶纤维素                 18g

6％PVP的无水乙醇溶液       100g

硬脂酸镁                   2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、匹伐他汀钙              1g(以匹伐他汀游离酸计)

羟丙基纤维素                30g

预胶化淀粉                  20g

6％PVP的无水乙醇溶液        30g

山榆酸甘油酯                1g

制备工艺：匹伐他汀钙过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的匹伐他汀钙和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片，每片含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为200mg和1mg。

实施例3

a、阿昔莫司                 200g

乳糖                        30g

羧甲基淀粉钠                30g

微晶纤维素                  18g

6％PVP的无水乙醇溶液        100g

硬脂酸镁                    2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、匹伐他汀钙               1.5g(以匹伐他汀游离酸计)

羟丙基纤维素                50g

预胶化淀粉                  40g

6％PVP的无水乙醇溶液        50g

山榆酸甘油酯                2g

制备工艺：匹伐他汀钙过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的匹伐他汀钙和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片，每片含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为200mg和1.5mg。

实施例4

a、阿昔莫司                200g

乳糖                       30g

羧甲基淀粉钠               30g

微晶纤维素                 18g

6％PVP的无水乙醇溶液       100g

硬脂酸镁                   2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、匹伐他汀钙              2g(以匹伐他汀游离酸计)

羟丙基纤维素               75g

预胶化淀粉                 60g

6％PVP的无水乙醇溶液       50g

山榆酸甘油酯               2g

制备工艺：匹伐他汀钙过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的匹伐他汀钙和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片，每片含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为200mg和2mg。

实施例5

a、阿昔莫司                300g

羟丙基甲基纤维素-4M        40g

微晶纤维素                 30g

8％PVP的无水乙醇溶液       150g

硬酯酸镁                   2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素混合均匀，加入8％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、匹伐他汀钙            1g(以匹伐他汀游离酸计)

羧甲基纤维素钠           30g

乳糖                     20g

6％PVP的95％乙醇溶液     50g

硬酯酸镁                 2g

制备工艺：匹伐他汀钙过100目筛，羧甲基纤维素钠、乳糖过80目筛，称取处方量的匹伐他汀钙和羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片，每片含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为300mg和1mg。

实施例6

a、阿昔莫司                 300g

空白丸芯                    250g

7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)  200g

制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。

b、a中制得的含阿昔莫司小丸

Surelease                    90g

滑石粉                       1g

纯水                         50g

制备工艺：将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入转盘，开造粒包衣机，入风压力1.0bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：1.5bar，蠕泵5％，转盘转速180rpm，喷入Surelease的纯水溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。

c、按照实例1中b的要求制得匹伐他汀钙小丸，与本例b中制得的阿昔莫司小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为300mg和0.5mg进行填充，即可。

实施例7

a、阿昔莫司                  300g

空白丸芯                     300g

7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)   200g

制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。

b、a中制得的含阿昔莫司小丸

乙基纤维素                  40g

硬脂酸                      70g

聚乙二醇-6000               6g

滑石粉                      12g

95％乙醇                    1000g

制备工艺：将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风温度30℃，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：1.0bar，蠕泵6％，转盘转速175rpm，喷入乙基纤维素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。

c、匹伐他汀钙               1.5g(以匹伐他汀游离酸计)

空白丸芯                    90g

7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)  30g

制备工艺：将匹伐他汀钙过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中，开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速120rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。

d、将b与c制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为300mg和1.5mg进行填充，即可。

实施例8

a、阿昔莫司               400g

甘露醇                    10g

乳糖                      40g

微晶纤维素                20g

6％PVP的95％乙醇溶液      120g

硬酯酸镁                  2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，甘露醇、乳糖、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、匹伐他汀钙             0.5g(以匹伐他汀游离酸计)

预胶化淀粉                50g

甘露醇                    50g

乳糖                      40g

6％PVP的95％乙醇溶液      100g

微粉硅胶                  5g

制备工艺：匹伐他汀钙过100目筛，预胶化淀粉、甘露醇、乳糖过80目筛，称取处方量的匹伐他汀钙和预胶化淀粉、甘露醇、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片，每片含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为400mg和0.5mg。

实施例9

a、阿昔莫司               400g

乳糖                      30g

羟丙基甲基纤维素-15M      20g

8％PVP的95％乙醇溶液      150g

山榆酸甘油酯              2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M混合均匀，加入8％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

b、匹伐他汀钙           1g(以匹伐他汀游离酸计)

羟丙基纤维素            75g

糊精                    70g

6％PVP的95％乙醇溶液    50g

滑石粉                  2g

制备工艺：匹伐他汀钙过100目筛，羟丙基纤维素、糊精过80目筛，称取处方量的匹伐他汀钙和羟丙基纤维素、糊精混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的滑石粉。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片，每片含阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的量分别为400mg和1mg。

实施例10阿昔莫司和匹伐他汀钙联合使用对大鼠高血脂模型降脂效果的配比筛选

本试验的目的在于通过筛选确定毒性低、作用强、使用方便的阿昔莫司和匹伐他汀钙复方制剂的组成。采用高脂饲料诱发大鼠高脂血症模型，给模型大鼠连续灌服阿昔莫司(100～400mg/kg)和(或)匹伐他汀钙(0.25～2mg/kg，以游离酸计，下述匹伐他汀钙的剂量均以匹伐他汀游离酸计)14天。结果发现，阿昔莫司和匹伐他汀钙伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显的治疗作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，阿昔莫司200～400mg/kg与匹伐他汀钙0.5～2mg/kg组成的复方可不同程度地降低大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇水平(LDL-C)，升高高密度脂蛋白胆固醇水平(HDL-C)。其中阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg联合用药组效果最显著，对TC和LDL-C水平均表现出协同作用，并且对高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的水平影响较小，优选阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组成的复方。在本实验剂量范围内，联合用药组对与肝脏和肌肉毒性相关的血清酶活性无明显影响。

1试验目的

通过筛选确定阿昔莫司和匹伐他汀钙复方制剂的组成，以达到复方制剂毒副作用低、作用全面和增强、使用方便之目的。

2受试药物

2.1烟酸衍生物

药品名称：阿昔莫司(Acipimox)

批号：0308002

纯度：大于99.7％

生产单位：鲁南制药股份有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期1年半。

配制方法：临用前用1％羧甲基纤维素钠(CMC)混匀，配成试验所需浓度。

2.2他汀类药物

药品名称：匹伐他汀钙(Pitavastatin calcium)

批号：0309002

纯度：大于99.0％

提供单位：山东新时代药业有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期2年。

配制方法：临用前用1％CMC混匀，配成试验所需浓度。

3动物

3.1品系和来源

Wistar大鼠，军事医学科学院医学实验动物中心繁殖，实验动物质量许可证号为医动字D01-3039。

3.2体重和性别

年龄9周～10周，体重180-220g，雄性。

3.3饲养条件

动物实验室空气定时排风、光照良好，常温。每笼饲养5只动物，饲以本院实验动物中心专门为大鼠配制的膨化饲料，自由饮水。动物实验条件合格证号为医动字D01-2051。试验开始前，观察动物进食、活动及粪便等1周，选择健康动物进入试验。

4大鼠高脂血症模型制备^[2]

大鼠高脂血症模型采用高脂饲料致高脂血症法。高脂饲料配方如下：基础饲料86.3％、胆固醇3％、猪油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、猪胆盐0.5％，保证各成分混合均匀。连续2周。给药期间隔天给予高脂饲料。

5阿昔莫司和匹伐他汀钙对正常大鼠血脂水平的影响

5.1剂量设置依据

临床上阿昔莫司的剂量为250mg/次(按人体重60kg计算，上述剂量为4.2mg/kg)，2～3次/日，每日量最大不超过1200mg^[3]。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为50mg/kg/day。结合文献报道^[4]，将本试验中阿昔莫司的剂量设定为100、200、300、400mg/kg。

临床上匹伐他汀钙的剂量为1～2mg/次，按人体重60kg计算，上述剂量为0.165～0.33mg/kg，1次/日，每日量最大不超过4mg。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为0.0425mg/kg。参考文献报道，将本试验中匹伐他汀钙的剂量设定为0.25、0.5、1、1.5、2mg/kg。

5.2组别设置

依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，将正常动物随机分为：(1)正常对照组；(2)阿昔莫司100mg/kg组；(3)阿昔莫司200mg/kg组；(4)阿昔莫司300mg/kg组；(5)阿昔莫司400mg/kg组；(6)匹伐他汀钙0.25mg/kg组；(7)匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(8)匹伐他汀钙1mg/kg组；(9)匹伐他汀钙1.5mg/kg组；(10)匹伐他汀钙2mg/kg组；(11)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(12)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙1mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组；(14)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙2mg/kg组；(15)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1mg/kg组；(17)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组；(18)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(19)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀钙1mg/kg组。每组10只。

5.3给药

临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃4天。灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。

5.4检测指标

血清化学指标包括总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-L)。其中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)检测试剂采用北京中生生物工程高技术公司产品，用SABA/18全自动生化分析仪测定；其余试剂采用日本罗氏试剂公司产品，用日立7020自动生化分析仪测定。测定方法参照试剂说明书取血样前禁食16小时。

6阿昔莫司和匹伐他汀钙对高脂血症大鼠血脂水平的影响

6.1剂量设置依据

同5.1正常大鼠实验。

6.2组别设置

依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，将模型大鼠随机分为：(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司100mg/kg组；(4)阿昔莫司200mg/kg组；(5)阿昔莫司300mg/kg组；(6)阿昔莫司400mg/kg组；(7)匹伐他汀钙0.25mg/kg组；(8)匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(9)匹伐他汀钙1mg/kg组；(10)匹伐他汀钙1.5mg/kg组；(11)匹伐他汀钙2mg/kg组；(12)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙1mg/kg组；(14)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组；(15)阿昔莫司200mg/kg和匹伐他汀钙2mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙10mg/kg组；(17)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1mg/kg组；(18)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组；(19)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀钙0.5mg/kg组；(20)阿昔莫司400mg/kg和匹伐他汀钙1mg/kg组。每组10只。

6.3给药

临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃14天。灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。

6.4检测指标

同5.4正常大鼠实验。

7阿昔莫司和匹伐他汀钙复方不同组分相互影响试验

7.1组别设置

从疗效较显著的阿昔莫司和匹伐他汀钙剂量组中，确定阿昔莫司和匹伐他汀钙复方的剂量：(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司300mg/kg；(4)匹伐他汀钙1.5mg/kg；(5)阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组复方组。每组10只。分组前测定血清总胆固醇水平，按均衡原则随机分组。每组10只。

7.2给药和检测指标

同前述6.3和5.4。

8试验结果

8.1阿昔莫司和匹伐他汀钙对正常大鼠血脂水平的影响

正常大鼠给药4天后，阿昔莫司、匹伐他汀钙和联合用药组的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均有所降低，高密度脂蛋白胆固醇水平有所升高，给药后血清甘油三酯略有下降。其中，阿昔莫司200mg/kg与匹伐他汀钙2mg/kg、阿昔莫司300mg/kg与匹伐他汀钙1mg/kg和阿昔莫司300mg/kg与匹伐他汀钙1.5mg/kg三个联用组总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇与正常对照组比较有显著下降，见表1。

表1阿昔莫司和匹伐他汀钙及复方对正常大鼠血脂的影响

注：1、与正常对照组比较，^*P＜0.05  2、阿代表阿昔莫司，匹代表匹伐他汀钙，下同。

8.2阿昔莫司和匹伐他汀钙对模型大鼠血脂水平的影响

大鼠饲以高脂饲料14天后分组给药。阿昔莫司的剂量范围为100～400mg/kg，匹伐他汀钙的剂量范围为0.25～2mg/kg，组成联合用药组。给药14天后，与模型对照组比较，阿昔莫司和匹伐他汀钙各剂量组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有不同程度的下降，高密度脂蛋白胆固醇水平均有所升高。而联合用药各剂量组的血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均取得了显著协同性降低效应，高密度脂蛋白胆固醇水平也协同性升高，其中阿昔莫司300mg/kg与匹伐他汀钙1.5mg/kg联用组大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平降低最为明显，高密度脂蛋白胆固醇水平显著升高。综合考虑各联合用药组降低血脂的协同性大小与总的降血脂效果，我们认为，阿昔莫司300mg/kg与匹伐他汀钙1.5mg/kg联用组效果最佳。

表2阿昔莫司和匹伐他汀钙及复方对模型大鼠血脂的影响

注：与正常对照组比较，###P＜0.001；与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

8.3阿昔莫司和匹伐他汀钙对模型大鼠血清酶活性的影响

本实验通过测定用药14天后高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的水平，来评价阿昔莫司和匹伐他汀钙及复方对模型大鼠肝脏功能和骨骼肌组织的影响。结果表明，与模型对照组相比，阿昔莫司各剂量(100～400mg/kg)组模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶水平均无显著差异(P＞0.05)；匹伐他汀钙各剂量(0.25～2mg/kg)组模型大鼠血清中上述指标亦未见显著差异(P＞0.05)，匹伐他汀钙和阿昔莫司各联合用药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和血清肌酸激酶均无明显变化(P＞0.05)，见表3。

表3阿昔莫司和匹伐他汀钙及复方对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的影响

9结论

阿昔莫司和匹伐他汀钙伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显的治疗作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，阿昔莫司200～400mg/kg与匹伐他汀钙0.5～2mg/kg组成的复方可不同程度地降低大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇水平(LDL-C)，升高高密度脂蛋白胆固醇水平(HDL-C)。其中阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg联合用药组效果最显著，对TC和LDL-C水平均表现出协同作用，并且对高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的水平影响较小，优选阿昔莫司300mg/kg和匹伐他汀钙1.5mg/kg组成的复方。在本实验剂量范围内，联合用药组对与肝脏和肌肉毒性相关的血清酶活性无明显影响。此外，目前阿昔莫司单方的临床用法为3次/日，本实验证明，阿昔莫司1次/日仍有显著的降血脂作用，且毒性小，这为阿昔莫司和匹伐他汀钙组成复方后一日仅用药1次提供了可靠的实验依据，这必将大大方便患者服用，提高患者用药的依从性。

实施例11阿昔莫司和匹伐他汀钙联合使用与阿昔莫司和普伐他汀、阿昔莫司和洛伐他汀联合使用的降脂效果比较

我们根据实施例10所筛选到的阿昔莫司匹伐他汀的配比与US5260305A和CN1425374A所公开的组合物进行了比较研究，在实验中意外发现，并通过大量的动物实验验证了阿昔莫司匹伐他汀钙联合使用在降低血清总胆固醇、血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇方面不仅存在着明显的协同性作用，而且与阿昔莫司普伐他汀联合使用、阿昔莫司洛伐他汀联合使用相比较，有着显著的差异，降脂效果更为明显，在升高高密度脂蛋白胆固醇方面，也有着比较明显的优势。

10.1受试药物、动物、大鼠高脂血症模型制备同实施例9。

10.2组别设置

按血清总胆固醇水平均衡原则，将模型大鼠随机分为：

正常对照组；

模型对照组；

阿昔莫司300mg/kg普伐他汀20mg/kg组；

阿昔莫司300mg/kg洛伐他汀10mg/kg组；

阿昔莫司200mg/kg匹伐他汀钙0.5mg/kg组；

阿昔莫司200mg/kg匹伐他汀钙1mg/kg组；

阿昔莫司200mg/kg匹伐他汀钙1.5mg/kg组；

阿昔莫司200mg/kg匹伐他汀钙2mg/kg组；

阿昔莫司300mg/kg匹伐他汀钙0.5mg/kg组；

阿昔莫司300mg/kg匹伐他汀钙1mg/kg组；

阿昔莫司300mg/kg匹伐他汀钙1.5mg/kg组；

阿昔莫司400mg/kg匹伐他汀钙0.5mg/kg组；

阿昔莫司400mg/kg匹伐他汀钙1mg/kg组。

10.3给药

同实施例10中的6.3。

10.4检测指标

血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-L)。

10.5实验结果

大鼠饲以高脂饲料14天后分组给药。给药14天后，阿昔莫司匹伐他汀钙各剂量组在降低血清总胆固醇、血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇方面与阿昔莫司300mg/kg普伐他汀20mg/kg组、阿昔莫司300mg/kg洛伐他汀10mg/kg组相比较，有着显著的差异；在升高高密度脂蛋白胆固醇方面，也有着比较明显的优势。我们的试验结果充分证明阿昔莫司和匹伐他汀联合使用在降低血脂方面具有意想不到的效果，阿昔莫司和匹伐他汀不仅取得了显著的协同性作用，而且和现有技术公开的阿昔莫司与洛伐他汀，阿昔莫司与普伐他汀的联合使用更具有优势。具体结果见表4。

表4阿昔莫司匹伐他汀钙联合使用与阿昔莫司普伐他汀、阿昔莫司洛伐他汀联合使用降脂效果比较

注：与正常对照组比较，###P＜0.001；与模型对照组比较，^**P＜0.01，^***P＜0.001；

与阿昔300+普伐20mg/kg组和阿昔300+洛伐10mg/kg组相比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.01

参考文献

[1]Takashi Tokoro，et al，The novel HMG-CoA reductase inhibitor，pitavastatin，induces aprotective action in vascular endothelial cells through the production of nitric oxide(NO).The pharmaceutical society of Japan，2004，124(3)121-126

[2]徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理学实验方法学(第三版)，人民卫生出版社出版，2002年1月，1201-1202

[3]OLBETAM(acipimox)说明书(Pharmacia，New Zealand)

[4]Scand.J.Clin.Lab.Invest.，1990，50(2)：203-208

Claims (5)

1、一种治疗高血脂症的组合物，其特征在于，所述的组合物包括：

a)第一个活性成分：阿昔莫司；

b)第二个活性成分：匹伐他汀钙；

2、按照权利要求1之一所述的组合物，其特征在于，阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的重量比是(50～800)∶1。

3、按照权利要求2所述的组合物，其特征在于，阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的重量比是(100～400)∶1。

4、按照权利要求3所述的组合物，其特征在于，阿昔莫司与匹伐他汀钙(以游离酸计)的重量比是200∶1。

5、按照权利要求1-4任一所述的组合物，其特征在于，所述组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸。