CN1925858A

CN1925858A - 治疗高血脂症的组合物

Info

Publication number: CN1925858A
Application number: CN 200580006900
Authority: CN
Inventors: 赵志全
Original assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Current assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Priority date: 2004-06-16
Filing date: 2005-06-16
Publication date: 2007-03-07

Abstract

本发明提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其包括的第一个活性成分为阿昔莫司，第二个活性成分选自罗苏伐他汀、或其可药用的盐、酯或溶剂化物；第一与第二活性成分(以游离酸计)的重量比为为15－100∶1，优选重量比为40－100∶1，进一步优选重量比为60∶1。阿昔莫司和罗苏伐他汀的联合应用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方，表明两药合用有协同作用，同时又无明显的毒性作用，且与阿昔莫司普伐他汀联合使用、阿昔莫司洛伐他汀联合使用相比较，降脂效果更为明显。

Description

治疗髙血脂症的组合物

技术领域

本发明涉及一种新的治疗高血脂症的组合物，它含有阿昔莫司与罗苏伐他汀或罗苏伐他汀可药用的盐、酯或溶剂化物。背景技术：

罗苏伐他汀（Rosuvastatin ) 是国内外进行了广泛研究并已在多国上市的 HMG-CoA 还原酶抑制剂，它通过在体内选择性地抑制胆固醇合成过程中的限速酶 HMG-CoA 还原酶，使胆固醇的合成减少，也使低密度脂蛋白受体合成增加，主要作用部位在肝脏，结果使血胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平降低，由此对动脉粥样硬化和冠心病的防治产生作用。本品还降低血清甘油三酯水平和增高血高密度脂蛋白水平。罗苏伐他汀有 5、 10、 20和 40mg的片剂。在临床试验中，多数病人服用 5 或 10mg 的开始剂量就达到了国家胆固醇教育计划（National Cholesterol Education Program)推荐的目标 LDL-C水平。 20mg剂量可以作为胆固醇水平非常高的病人的初始剂量，而 40mg的剂量仅应在 20mg剂量治疗疗效不足时使用。 Shepherd 教授最近完成了一项他汀类药物降脂作用比较的临床试验，用药 8周的结果显示：罗苏伐他汀 10mg ( n=539) LDL- C达标率为 80%, 而阿托伐他汀 10mg (n=529 ) 达标率为 63% (P<0. 001 )，阿托伐他汀 20mg (n=925 ) LDL-C达标率为 74% ( Ρ〈0· 01 )。 Jones PH的研究显示：罗苏伐他汀 10mg降低 LDL- C46%，而阿托伐他汀从 10mg递增到 20mg、 40mg， LDL-C分别降低 37% ( P<0. 001 ), 43%和 48%；辛伐他汀从 10mg递增到 20mg、 40mg, LDL-C分别降低 28%、 35%和 39% ( P值均〈0. 001 ); 普伐他汀从 10mg递增到 20mg、 40mg, 降低 LDL- C分别为 20%、 24%和 30% (P值均 <0. 001 )。 Brown WV等将罗苏伐他汀的降脂活性和安全性与普伐他汀和辛伐他汀进行了 52 周的临床随机双盲对照研究，结果表明，在用药 12周后，罗苏伐他汀 5mg和 10mg剂量组的低密度脂蛋白胆固醇 ( LDL-C)分别下降了 39. 1%和 47. 4%，与普伐他汀 20mg组（下降 26. 5%) 和辛伐他汀 20mg组（下降 34. 6%) 有显著差异（P<0. 05 )。用药 52周后，罗苏伐他汀 5mg和 lOmg组达到美国国家胆固醇教育计划推荐 LDL-C目标的比率分别为 88%和 87. 5%, 而普伐他汀组仅为 60%，辛伐他汀组为 72. 5%, (在后 40周，未达目标的患者剂量加倍）所有实验组患者均耐受良好 ^['^]。纵然罗苏伐他汀有着如此强效的优势, 但其不良反应和其它他汀类药物相比较要严重一些，在上市之前的临床试验中，大剂量（80mg) 组有 7例患者发生了危及生命的横纹肌溶解症，因此当时其安全性就受到过质疑。上市前临床试验中还发现，罗苏伐他汀还可损害一些患者的肾功能（未观察到其他他汀类有类似不良反应）。最终， FDA因考虑到罗苏伐他汀的优势（药效稍强于其他他汀类）而批准其上市，但建议服用剂量从 5mg〜10mg开始，最大剂量不超过 40mg。

阿昔莫司（Acipimox) 是一种人工合成的烟酸衍生物，该药口服后吸收迅速，服后 2小时内血浆浓度即达高峰，半衰期为 2小时。阿昔莫司与血浆蛋白结合，几乎不变地从尿中排出，主要作用于脂肪组织，抑制脂肪组织释放非酯化脂肪酸，减少 TG、 VLDL及 LDL的生成。并通过激活脂蛋白脂肪酶，加速 VLDL的降解，通过抑制肝脂肪酶而增高血桨 HDL水平。阿昔莫司是一种安全、有效及易耐受的血脂调节药，尤其适用于血清 TG水平明显升高、 1¾1^~(：水平明显低下， TC水平轻度上升或正常的糖尿病患者。

目前，该领域的研究趋势是将两种不同作用机制的血脂调节药制成复方制剂，可以发挥协同作用，同时减少毒副作用。

欧洲专利申请 EP0373507公开了 HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀、洛伐他汀、 velostatin分别为 5mg、 10 mg、 20 mg、 40 mg和烟酸 500mg的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的实验数据，更没有涉及阿昔莫司与罗苏伐他汀组合物及最佳配比。

《洛伐他汀和烟酸肌醇单用和合用治疗高血脂症的比较》，发表于《心血管病学进展》 1996年第 17卷第六期，公开洛伐他汀和烟酸肌醇合用治疗高血脂症；《普伐他汀和烟酸肌醇单用和合用治疗高血脂症的疗效观察》，发表于《中国动脉硬化杂志》 1997年，第 5卷第 3期，公开普伐他汀和烟酸肌醇合用治疗高血脂症。二者均未涉及阿昔莫司与罗苏伐他汀的组合物及最佳配比。

美国专利 US5260305A公开了 HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀和烟酸及其衍生物的组合物，具体公开了规格为普伐他汀 5mg、 10 mg, 20 mg, 40 mg和阿昔莫司 750mg 的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的实验数据，更没有涉及阿昔莫司和罗苏伐他汀组合物及最佳配比。发明内容

本发明的目的是通过一系列科学的筛选实验，提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其优点是作用强、毒副作用低和使用方便。本药物组合物含有一定比例的阿昔莫司和罗苏伐他汀或阿昔莫司和罗苏伐他汀可药用的盐、酯或溶剂化物，由于两种药物作用机制不同，组成组合物后降脂作用将更加全面，并且两类药物合用有协同作用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方；虽然罗苏伐他汀有着较强大的降脂效果，但大剂量的罗苏伐他汀存在发生可危机生命的横紋肌溶解症的风险，通过阿昔莫司伍用，显著降低了组合物中罗苏伐他汀的用量，使组合物在有效降低血脂水平的同时，大大降低了罗苏伐他汀的用药风险性，同时本组合物一日只需用药一次，用药方便，这将大大提高患者的用药依从性。

此外，通过对本发明的组合物与背景技术中的 US5260305A和 CN1425374A的组合物进行比较研究，在实验中意外地发现，阿昔莫司与罗苏伐他汀的联合使用在降低血清总胆固醇、血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇方面不仅存在着明显的协同性作用，而且与阿昔莫司和普伐他汀的联合使用、阿昔莫司和洛伐他汀的联合使用相比较，降脂效果更为明显，在升高高密度脂蛋白胆固醇方面，也有着比较明显的优势。

本发明提供的治疗高血脂症的组合物包括两种活性成分，第一个活性成分为阿昔莫司，第二个活性成分选自罗苏伐他汀、或其可药用的盐、酯或溶剂化物。罗苏伐他汀可药用的盐为合适的罗苏伐他汀生理可接受盐，包括衍生自无机的和有机的碱所形成的盐，其可为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐、铁盐。所述的罗苏伐他汀可药用的酯为合适的罗苏伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、杂环醇所形成的酯，可为甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。

本发明以罗苏伐他汀钙为例对两种活性成分的重量比进行筛选，综合考虑它们对高血脂模型大鼠降脂活性和不良反应的程度，可以认为阿昔莫司和罗苏伐他汀（以游离酸计，下同）的重量比在 15-100: 1范围内具有较好的降脂效果和较轻微的不良反应，优选的比例是 40-100: 1，进一步优选的比例是 60: 1；其中阿昔莫司优选做成缓释部分。该组合物的药物制剂的剂型，包括片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸等固体制剂。

本发明的组合物在制成固体制剂，如片剂或胶囊时，为达到持久的治疗效果，优选地将有效量的阿昔莫司制成缓释部分，再与有效量的罗苏伐他汀钙共同制成缓释制剂，如缓释片、.缓释胶囊等。相应地，可药用的辅料包括稀释剂，如淀粉、乳糖、甘露醇、预胶化淀粉、糊精、微晶纤维素；崩解剂，如羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠；缓释剂，如乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素 -4M、羟丙基甲基纤维素- 15M;优特奇 RS-100、 RL100、 RS30D、 RL30D、 NE30D, 以及苏丽丝（乙基纤维素的水分散体）粘合剂，如聚乙烯吡咯垸酮，交联聚乙烯吡咯烷酮，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等。

本发明的组合物通过药理方面的研究工作，表明当用本发明的组合物时，尤其是采用优选的配比时，与单独应用有效量的阿昔莫司或罗苏伐他汀时相比，本发明的组合物给出令人吃惊的更好效果，同时毒性没有增加，在达到相同降脂效果的情况下，两类药物伍用大大降低了每种药物的使用剂量，这就显著降低了阿昔莫司的不良反应和罗苏伐他汀的用药风险。本发明的组合物可以每日 1-2次给药，优选为每日一次。

另外，我们在筛选实验中发现，本发明组合物中罗苏伐他汀的药理活性与其所成的盐、酯或溶剂化物关系很小，其降脂活性的大小主要与罗苏伐他汀游离酸的量相关。所以本发明中阿托伐他汀可以为任何一种可以药用的盐，也可以为任何一种阿托伐他汀可以药用的酯，或者溶剂化物。具体实施方式：

现通过如下实施例进一步说明本发明的内容，但本发明的应用范围不局限于下列实施例。实施例 1

阿昔莫司 200g

乳糖 30g

羧甲基淀粉钠 30g

微晶纤维素 18g

6%PVP的无水乙醇溶液 lOOg

硬脂酸镁 2g 制备工艺：阿昔莫司过 100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过 80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入 6%PVP 无水乙醇溶液适量制粒， 6CTC干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂罗苏伐他汀钙（其重量以游离酸计，下同） 5g

羟丙基纤维素 15g

预胶化淀粉 10g

6%PVP的无水乙醇溶液 30g

山榆酸甘油酯 lg

制备工艺：罗苏伐他汀钙过 100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过 80目筛，称取处方量的罗苏伐他汀钙和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入 6%PVP的无水乙醇溶液适量制粒， 6CTC干燥， 16目筛整干颗粒，千颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述 a, b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。实施例 2

阿昔莫司 200g

乳糖 30g

羧甲基淀粉钠 30g

微晶纤维素 18g

6%PVP的无水乙醇溶液 lOOg

硬脂酸镁 2g

制备工艺：阿昔莫司过 100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过 80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入 6%PVP 无水乙醇溶液适量制粒， 60°C干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂 b、罗苏伐他汀钙 10g

羟丙基纤维素 30g '

预胶化淀粉 20g

6%PVP的无水乙醇溶液 50g

山榆酸甘油酯 2g

制备工艺：罗苏伐他汀钙过 100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过 80目筛，称取处方量的罗苏伐他汀钙和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入 6%PVP的无水乙醇溶液适量制粒， 60°C干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述 a， b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。

实施例 3

a、阿昔莫司 300g

羟丙基甲基纤维素- 4M 40g 微晶纤维素 30g

8%PVP的无水乙醇溶液 150g

硬酯酸镁 2g

制各工艺：阿昔莫司过 100目筛，羟丙基纤维素 - 4M、微晶纤维素过 80目筛，称取处方量的阿昔莫司和羟丙基纤维素 -4M、微晶纤维素混合均匀，加入 8%PVP无水乙醇溶液适量制粒， 60°C干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸锾。 b、罗苏伐他汀钙 5g

羧甲基纤维素钠 30g

乳糖 20g

6%PVP的 95%乙醇溶液 50g

硬酯酸镁 2g

制备工艺：罗苏伐他汀钙过 100目筛，羧甲基纤维素钠、乳糖过 80目筛，称取处方量的罗苏伐他汀钙和羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，加入 6%PVP的 95%乙醇溶液适量制粒， 6CTC干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。 c、将上述 a, b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。实施例 4

a、阿昔莫司 500g

甘露醇 10g

乳糖 40g

微晶纤维素 20g

6%PVP的 95%乙醇溶液 120g

硬酯酸镁 2g

制备工艺：阿昔莫司过 100目筛，甘露醇、乳糖、微晶纤维素过 80目筛，称取处方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纤维素混合均匀，加入 6%PVP的 95%乙醇溶液适量制粒， 60Ό干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。 b、罗苏伐他汀钙 5g

预胶化淀粉 50g

甘露醇 50g

6%PVP的 95%乙醇溶液 100g

微粉硅胶 5g

制备工艺：罗苏伐他汀钙过 100目筛，预胶化淀粉、甘露醇过 80目筛，称取处方量的罗苏伐他汀钙和预胶化淀粉、甘露醇混合均匀，按等量递加法与罗苏伐他汀混勾后，加入 6%PVP的 95%乙醇溶液适量制粒， 60°C干燥， 16目筛整干颗粒，千颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

c、将上述 a, b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。实施例 5

a、阿昔莫司 500g 乳糖 30g

羟丙基甲基纤维素- 15M 20g

8%PVP的 95%乙醇溶液 150g

山榆酸甘油酯 2g

制备工艺：阿昔莫司过 100 目筛，乳糖、羟丙基.甲基纤维素 -15M过 80 目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羟丙基甲基纤维素- 15M混合均勾，加入 8%PVP的 95% 乙醇溶液适量制粒， 60Ό千燥， 16目筛整千颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酉 ¹⁵

b、罗苏伐他汀钙

羟丙基纤维素

糊精

6%PVP的 95%乙醇溶液

滑石粉

制备工艺：罗苏伐他汀钙过 100目筛，羟丙基纤维素、糊精过 80目筛，称取处方量的罗苏伐他汀钙和羟丙基纤维素、糊精混合均匀，加入 6%PVP的 95%乙醇溶液适量制粒， 60°C干燥， 16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的滑石粉。

c、将上述 a, b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。实施例 6

a、阿昔莫司 200g

空白丸芯 250g

7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 200g

制备工艺：将阿昔莫司过 120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机（台湾元成机械厂），入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C，喷枪压力（CYL) 3bar, 雾化压力（CAP1 ) 0. 8bar, 倒入空白丸芯，造粒，下料速度 4rpm，蠕泵 12%，转盘转速 145rpm，喷 7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇）。造粒结束， 50Ό烘千，出料。 b、罗苏伐他汀钙 5g

空白丸芯 90g

7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 50g

制备工艺：将罗苏伐他汀钙过 120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C， CYL3bar, CAP1 0. 8bar, 倒入空白丸芯，造粒，下料速度 4rpm, 蠕泵 6%，转盘转速 160 rpm，喷 7%PVP溶液（溶剂为 90% 乙醇）。造粒结束， 45Ό烘干，出料。

c、将 a和 b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与罗苏伐他汀钙的重量分别为 200mg和 30mg进行填充，即可。实施例 7

a、阿昔莫司 300g

空白丸芯 250g 7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 200g

制备工艺：将阿昔莫司过 120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C， CYL3bar， CAP1 0. 8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度 4rpm，蠕泵 12%，转盘转速 145 rpm, 喷 7%PVP溶液（溶剂为 90% 乙醇）。造粒结束， 50°C烘干，出料。

b、 a中制得的含阿昔莫司小丸

Surelease 90g

滑石粉 lg

纯水 50g

制备工艺：将 a中制得的含阿昔莫司小丸倒入转盘，开造粒包衣机，入风压力 l. Obar, 入风温度 30°C， CYL3bar, CAP1 1. 5bar, 蠕泵 5%，转盘转速 180 rpm, 喷入 Surelease的纯水溶液。包衣结束， 50°C烘干，出料。

c、按照实施例 5中 b的要求制得罗苏伐他汀钙小丸，与本例 b中制得的阿昔莫司小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与罗苏伐他汀钙的重量分别为 300mg和 30rag进行填充，即可。实施例 8

阿昔莫司 200g

空白丸芯 200g

7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 200g

制备工艺：将阿昔莫司过 120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C， CYL3bar， CAP1 0. 8bar, 倒入空白丸芯，造粒，下料速度 4rpm，蠕泵 12%，转盘转速 165 rpm，喷入 7%PVP溶液（溶剂为 90% 乙醇）。造粒结束， 5CTC烘干，出料。

b、罗苏伐他汀钙 20g

空白丸芯 150g

7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 150g

制备工艺：将罗苏伐他汀钙过 120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C， CYL3bar, CAP1 0. 8bar，倒入空白丸芯，下料速度 4rpm，蠕泵 12%，转盘转速 120 rpm, 喷入 7%PVP溶液（溶剂为 90% 乙醇）。造粒结束， 45Ό烘干，出料。

c、将 a与 b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与罗苏伐他汀钙的重量分别为 200mg和 40mg进行填充，即可。实施例 9

a、阿昔莫司 300g

空白丸芯 300g

7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 200g

制备工艺：将阿昔莫司过 120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C , CYL3bar, CAP1 0. 8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度 4rpm, 蠕泵 12%，转盘转速 145 rpm，喷入 7%PVP溶液（溶剂为 90% 乙醇）。造粒结束， 50°C烘干，出料。

b、 a中制得的含阿昔莫司小丸

乙基纤维素

硬脂酸

聚乙二醇 -6000

滑石粉

95%乙醇

制备工艺：将 a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。幵造粒包衣机，入风温度 30°C，入风压力 0. 5bar，入风温度 30°C， CYL3bar, CAP1 1. Obar，蠕泵 6%，转盘转速 175 rpm，喷入乙基纤维素、硬脂酸和聚乙二醇- 6000的 95%乙醇溶液。包衣结束， 50Ό烘干，出料。

c、罗苏伐他汀钙 20g

空白丸芯 150g

7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇） 150g

制备工艺：将罗苏伐他汀钙过 120目筛, 处方量称取，倒入下料斗中，开造粒包衣机，入风压力 0. 5bar，入风温度 30'C , CYL3bar, CAP1 0. 8bar, 倒入空白丸芯，造粒。下料速度 4rpm，蠕泵 12%，转盘转速 120rpm，喷入 7%PVP溶液（溶剂为 90%乙醇）。造粒结束， 45°C烘千，出料。

d、将 b与 c制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与罗苏伐他汀钙的重量分别为 300mg和 40mg进行填充，即可。实施例 10 阿昔莫司和罗苏伐他汀钙复方对大鼠高脂血症降脂效果的配比筛选本试验目的在于通过筛选确定毒性低、作用强和使用方便的阿昔莫司和罗苏伐他汀钙复方制剂配伍组成。采用正常 Wistar大鼠或高脂饲料致大鼠高脂血症模型。受试品阿昔莫司为鲁南制药股份有限公司生产，罗苏伐他汀钙由 AstraZeneca公司生产。结果发现，饲以高脂饲料 14天后，大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇均明显升高，形成高脂血症模型。给模型大鼠灌服阿昔莫司（100〜 500mg/kg) 和（或）罗苏伐他汀钙（5〜40mg/kg) 14天后，血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均明显下降，高密度脂蛋白胆固醇升高。单用其中一种药或两药伍用，其效果随剂量递增加强。

结果表明，阿昔莫司和罗苏伐他汀钙伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显治疗作用，效果与两种药物的剂量相关。从药效和毒性两方面分析，罗苏伐他汀钙 5mg/kg和阿昔莫司 300mg/kg伍用效果较好。

1 试验目的

通过筛选确定阿昔莫司和罗苏伐他汀钙复方制剂组成，以达到复方制剂毒副作用低、作用全面和增强、使用方便（如每日 1次用药）之目.的。在上述实验基础上按有关要求，进行复方制剂的量效关系和多组份相互影响的试验，为申报开发复方制剂提供实验依据。

2 受试药物

2. 1 阿昔莫司 (Acipimox)

批号： 0307002

纯度：大于 99. 7%

生产单位：鲁南制药股份有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期 1年半。

配制方法：临用前用 1%CMC混匀，配成试验所需浓度。

2. 2 罗苏伐他汀（Rosuvastatin)

批号： 030205

纯度：大于 99. 0%

生产单位：阿斯利康公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期 2年。

配制方法：临用前用 1%CMC混勾，配成试验所需浓度。

3 实验动物

3. 1 品系和来源

Wistar大鼠，军事医学科学院医学实验动物中心繁殖，实验动物质量许可证号为医动字 D01- 3039。

3. 2 体重和性别

年龄为 9周〜 10周。体重 180- 220g。雄性。

3. 3饲养条件

动物实验室空气定时排风、光照良好，常温。每笼饲养 5只动物，饲以本院实验动物中心专门为大鼠配制的膨化饲料，自由饮水。动物实验条件合格证号为医动字 D01-2051。试验开始前，观察动物进食、活动及粪便等 1周，选择健康动物进入试验。

4 大鼠高脂血症模型制备^[2]

' 大鼠高脂血症模型采用高脂伺料致高脂血症法。高脂词料配方如下：基础饲料 87. 3%、胆固醇 2%、猪油 10%、甲基硫氧嘧啶 0. 2%、猪胆盐 0. 5%，各成分保证混合均匀。连续 2周。给药期间隔天给予高脂饲料，其余时间给予正常饲料。

5 阿昔莫司和罗苏伐他汀钙对正常大鼠血脂的影响 ^[2]

5. 1 剂量选择

临床上阿昔莫司剂量为 250mg/次 (按人体重 60 kg计算，上述剂量为 4. 2mg/kg), 2〜3次 I日，每日量最大不超过 1200mg ^M。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为 50mg/kg/day。结合文献报道 ^[:'^]，加之本试验采用 1次 /日给药方法，故在本试验中阿昔莫司剂量设为 100、 200、 300、 500mg/kg。

临床上罗苏伐他汀的剂量为 5〜20mg/次（按人体重 60 kg 计算，上述剂量为 0.1-0.3mg/kg), 1次 /日，每日量最大不超过 40mg^[3]。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为 0.5-1.5mg/kg，结合文献报道，将本试验中罗苏伐他汀钙剂量（以游离酸计，下同）设为 5、 10、 20、 40mg/kg_o 5.2 组别设置

依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，把正常动物按照随机原则分为： (1) 正常对照组； (6) 阿昔莫司 100mg/kg组； (7) 阿昔莫司 200mg/kg组；

(8)阿昔莫司 300mg/kg组； (9)阿昔莫司 500mg/kg组； (10)罗苏伐他汀钙 5mg/kg 组；（11) 罗苏伐他汀钙 lOmg/kg组；（12) 罗苏伐他汀钙 20mg/kg组；（13) 罗苏伐他汀钙 40mg/kg组； (14) 阿昔莫司 200mg/kg和罗苏伐他汀钙 5mg/kg组； (15) 阿昔莫司 200mg/kg和罗苏伐他汀钙 10mg/kg组；（16) 阿昔莫司 200 mg/kg和罗苏伐他汀钙 20 mg/kg组； (17) 阿昔莫司 200 mg/kg和罗苏伐他汀钙 40 mg/kg组； (18) 阿昔莫司 300 mg/kg和罗苏伐他汀钙 5 mg/kg组； (19) 阿昔莫司 300 mg/kg和罗苏伐他汀钙 10 mg/kg组； (20) 阿昔莫司 300 mg/kg和罗苏伐他汀钙 20 mg/kg组（21) 阿昔莫司 500 mg/kg和罗苏伐他汀钙 10 mg/kg组。每组 6只，雄性。

5.4 给药

临床给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃 4天。灌胃均在动物进食后进行。每天 1次。给药体积为 0.3ml/100g体重。 14:00〜16:00给药。

5.5检测指标

血清化学指标包括总胆固醇 (TC)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、肌酸激酶（CK)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-L)。其中丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、肌酸激酶（CK)检测试剂采用北京中生生物工程高技术公司产品，用 SABA/18全自动生化分析仪测定；其余试剂采用日本罗氏试剂公司产品，用曰立 7020自动生化分析仪测定。测定方法参照试剂说明书取血样前禁食 16小时。

6 阿昔莫司和罗苏伐他汀钙对模型大鼠血脂的影响

6.1 剂量依据

同正常大鼠实验。

6.2 组别设置

依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，把正常动物按照随机原则分为：（1) 正常对照组；（2)模型对照组；（3) 阿昔莫司 150mg/kg组；（4) 阿昔莫司 200mg/kg组； (5) 阿昔莫司 300mg/kg组； (6) 阿昔莫司 400mg/kg组； (7) 阿昔莫司 500mg/kg组；（8) 罗苏伐他汀钙 5mg/kg组；（9) 罗苏伐他汀钙 lOmg/kg组； (10) 罗苏伐他汀钙 20mg/kg组；（11) 罗苏伐他汀钙 40mg/kg组；（12) 阿昔莫司 150mg/kg和罗苏伐他汀钙 10mg/kg组； (13) 阿昔莫司 200mg/kg和罗苏伐他汀钙 10mg/kg组； (14) 阿昔莫司 300 mg/kg和罗苏伐他汀钙 5 mg/kg组； (15) 阿昔莫司 300 mg/kg和罗苏伐他汀钙 10 mg/kg组；（16) 阿昔莫司 300 mg/kg和罗苏伐他汀钙 20 mg/kg组；（17) 阿昔莫司 400 mg/kg和罗苏伐他汀钙 5 mg/kg组（18) 阿昔莫司 500 mg/kg和罗苏伐他汀钙 5 mg/kg组。每组 10只，雄性。

6.3 给药

临床给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药， <连续灌胃 14天。灌胃均在动物进食后进行。每天 1次。给药体积为 0.3ml/100g体重。

6.4检测指标

同正常大鼠实验。

7 试验结果

7.1 阿昔莫司和罗苏伐他汀钙对正常大鼠血脂的影响

正常大鼠给药 4天后，阿昔莫司、罗苏伐他汀钙和联合用药组的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均有所降低，高密度脂蛋白胆固醇升高 (表 1)。给药后血清甘油三酯略有下降，但无统计学差异。联合用药组的效果优于单药。阿昔莫司和罗苏伐他汀钙及配伍对正常大鼠血脂的影响

高密度脂蛋白胆固总胆固醇甘油三酯低密度脂蛋白胆固醇组别醇

(mmol/L) (mmol/L) (mmol/L)

(raraol/L) 正斜照 2. 07 + 0. 28 0. 88±0. 56 0. 44 + 0. 10 0. 83 ±0. 09 阿昔莫司 15Qng/kg 1. 68 + 0. 27* 0. 80±0. 27 0. 39±0. 08 0. 86 + 0. 19 阿昔莫司 200mgkg 1. 73±0. 22 0. 75±0. 19 0. 37±0. 06 0. 92 + 0. 22 阿昔莫司 300n¾kg 1. 52 + 0. 21* 0. 73土 0. 12 0. 36±0. 04 0. 95±0. 26 阿昔莫司 400mgkg 1. 69 + 0. 31 0. 66±0, 35 0. 38 + 0. 16 0. 91±0. 32 阿昔莫司 500mgkg 1. 63±0. 27* 0. 50±0, 20 0. 33+0. 08 1. 03 + 0. 30 划娜丐 5m&kg 2. 00±0. 11 0. 73 + 0. 32 0. 39±0. 09 1. 11±0. 37 罗苏伐他汀钙 1. 92±0. 37 0. 68±0. 08 0. 36±0. 10 1. 10 + 0. 14*

10tngkg

罗苏伐他汀钙 1. 83+0. 26 0. 67±0. 20 0. 32 + 0. 10 1. 06±0. 19

20mg/kg

罗苏伐他汀钙 1. 73 + 0. 33 0. 60±0. 21 0. 35+0. 22 1. 05 + 0. 47

40mg kg

阿 150 10 mg kg 1. 49 ±0. 31" 0. 65 + 0. 22 0. 37 + 0. 20 1. 02 + 0. 33 阿 200 10 mg/kg 1. 47±0· 28" 0. 63±0. 19 0. 30±0. 15 0. 93±0. 29 阿 300 5 mg/kg 1. 38±0. 27" 0. 53 + 0. 22 0. 32±0. 11 1. 07 + 0. 31 阿 300 10 mg/kg 1. 50 ±0. 38* 0. 56 + 0. 13 0. 29±0. 10 1. 20+0. 34 阿 300 20 mg kg 1. 60±0. 28* 0. 45±0. 21 0. 35 + 0. 05" 1. 35 + 0. 35* 阿 400 5 mg/kg 1. 41±0. 23** 0. 61 + 0. 21 0. 34±0. 15 0. 95+0. 32 阿 500 5 mg/kg 1. 56±0. 61 0. 56±0. 37 0. 31 + 0. 13 1. 21±0. 43 与正常对照组比较, *Ρ<0.05, **Ρ<0.01 7.2 阿昔莫司和罗苏伐他汀钙对模型大鼠血脂的影响

大鼠词以高脂饲料 14天后分组给药。阿昔莫司的剂量从 100〜500mg/kg，罗苏伐他汀钙的剂量从 5〜40mg/kg，组成联合用药组。给药 14天后，与模型对照组比较，阿昔莫司和罗苏伐他汀钙各剂量组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均显著下降（表 2)。

部分阿昔莫司剂量组及与罗苏伐他汀钙联合用药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶升高，高剂量组升高幅度大（表 3)。各组大鼠血清中肌酸激酶活性变化趋势与血清丙氨酸氨基转移酶相似。因此在复方中应尽可能降低罗苏伐他汀钙的剂量，以阿昔莫司 300mg/kg和罗苏 O伐他汀钙 5mg/k_g剂量配伍较好，对血清中肌酸激酶与血清丙氨酸氨基转移酶活性的影响较小。表 2 阿昔莫司和罗苏伐他汀及复方对模型大鼠血脂的影响血清总胆固醇血清甘油三酯

组别

(mmol/L) (mmol/L) (mmol/L) 正缠 1.96±0· 30 0.73 ±0.13 0.50±0.13 1.18±0· 22

¾ '醒 5.80 ±0.33™ 2.87 ±0.34™ 3.38±0· 11** 0.99±0.13 阿昔莫司 150 m^kg 5.42±0.82 2.53 ±0.20 3.18 ±0.46 0.97±0· 17 阿昔莫司 200 mgkg 5.21 ±0.52* 2.51±0.12 3.03 ±0.48 0.99 ±0.22 阿昔莫司 300 mg kg 5.11 ±0.49*** 2.33 ±0.21* 2.94±0.33*** 1.10±0· 25 阿昔莫司 400 rag/kg 5.02±0.44^w 2.23 ±0.18** 2.85 ±0.40*" 1.17±0.3 阿昔莫司 500 nig/kg 4.98 ±0.50™ 2.28±0· ΐΓ* 2.83 ±0.38*" 1.19±0.36" 磨丁钙 4.57±0.45 2.20±0· 15 2.96 ±0.61 0.94 ±0.14

5 mg kg

罗苏伐細丐 4.16±0.43*" 2.10±0.20 2.77 ±0.59* 0·98±0.15

10 rag/kg

频划鎮 3.93±0.3 1.81±0.4Γ* 2.60±0.26*" 1.17±0.31

20 mg/kg

罗苏伐他汀鈣 3.56 ±0.36*" 1.77±0.10 2.55 ±0.45*** 1.20 ±0.27**

40 mg kg

阿 150罗苏 10 mg/kg 2.81 ±0.33" 1.27 ±0.36"* 1.12 ±0.27*** 1.80±0.29** 阿 200 10 mg/kg 2.78±0·4(Γ 1·23±0· 46*" 1.10±0.25** 1.88±0· 37** 阿 300 5 mg kg 2.70 ±0.25" 1.20±0.32" 1.05 ±0.15" 1.75 ±0.34*" 阿 300 10 mgkg 2.55±0,3广 1.13±0.2广 0.92 ±0.24*" 1·99±0· 25" 阿 300 20 rag/kg 2.50 ±0.54" 1·05±0· 23^w 0.94 ±0.13™ 2·01±0.26*" 阿 400罗苏 5 mg/kg 2.75 ±0.35*" 1.21±0.23" 1.11±0.2广 1.79±0.32**** 阿 500 5 mg/kg 2.68±0.28** 1.17土 0.15" 1.08±0.25"* 1.73±0.3Γ* 注：与正常对照组比较， #tt#P<0.001；与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001 表 3 阿昔莫司和罗苏伐他汀钙及复方对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶

和肌酸激酶的影响丙氨酸氨基转移酶肌酸激酶

组另 ij

(U/L)

正常对照组 527.9± 138.8 509.2土 184.6^W

模型細组 683.5±257.6 267.2 ±78.5

阿昔莫司 150 mg/kg 591.6± 128.8 259.2 ±134.0

阿昔莫司 200 mg/kg 613.8±131.2 264.2± 129.6

阿昔莫司 300 mg/kg 636.8 ±229.3 272.8 ±86.0

阿昔莫司 400 mg/kg 566.1±265.7 322.5 ±135.6

阿昔莫司 500 mg/kg 766.1±215.3 309.3± 115.4

罗苏 5 mg/kg 524.1±233.8 243.6± 112.5

o

罗苏 10 mg/kg 951.4±312.9* 569.4 ±129.0

罗苏 20 rag/kg 1562.7±613.6" 1481.2±338.8"

罗苏 40 mg/kg 1808.0±855.9" 1543.2 ±1395.2"

阿 150罗苏 10 mg/kg 821.7± 165.8 311.2± 169.5

阿 200罗苏 10 mg/kg 819.3 ±178.2 308.4± 175.2

阿 300罗苏 5 mg/kg 548.8± 186.8 269.6± 106.3

阿 300罗苏 10 mg/kg 950.3 ±620· 6 749.1±318. Γ

阿 300罗苏 20 mg/kg 1381.3±678.0* 1031.5 ±749.2"*

阿 400罗苏 5 mg/kg 516.8 ±189.6 235.3 ±97.8

阿 500罗苏 5 mg/kg 551.9± 115.5' 258.4 ±107.0

注：与模型对照组比较， *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

8 结论

阿昔莫司和罗苏伐他汀钙伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显治疗作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，我们在试验种发现，当阿昔莫司与罗苏伐他汀的剂量配比在 15:1— 100:1的范围内时，各剂量组均取得了很好的协同性作用，本发明所找到的阿昔莫司与罗苏伐他汀的配比范围与 CN03122340.0 所公开的阿昔莫司和罗苏伐他汀 10:1 的比例在降低血清总胆固醇和升高血清高密度胆固醇方面更具有优势。同时我们结合阿昔莫司和罗苏伐他汀钙复方对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的升高（不良反应），发现，当阿昔莫司与罗苏伐他汀的比例小于 15:1时，虽然也能够取得一定的协同性降血脂效应，但是，在各剂量组给药时，要么由于给药总量太低，不能够取得理想的降脂效果，要么由于罗苏伐他汀的给药量过高，不良反应增强。当罗苏伐他汀的用药量为 5mg/kg时，血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的活性与模型对照组相比较没有区别，当用量大于 10 mg/kg Βΐ，血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶随着给药量的增加迅速升高。当阿昔莫司和罗苏伐他汀的用量配比大于 100:1时，由于罗苏伐他汀的用量过小，不能够取得显著的协同性作用。阿昔莫司 300mg/kg和罗苏伐他汀钙 5mg/kg剂量伍用效果显著，同时又无明显的毒性作用。综合考虑降血脂效果和不良反应的程度，阿昔莫司与罗苏伐他汀的重量比在 40- 100 : 1的范围内，有更好的效果和更低的不良反应。此外，本试验结果发现，较高剂量的阿昔莫司每日给药. 1次也有显著的降血 '脂作用，且毒性小，这为阿昔莫司和罗苏伐他汀钙组成复方，实现每日给药 1次提供了实验依据。实施例 11

阿昔莫司和罗苏伐他汀联合使用与阿昔莫司和普伐他汀、阿昔莫司和洛伐他汀联合使用的降脂效果比较

我们根据实施例 10所筛选到的阿昔莫司罗苏伐他汀的配比与 US5260305A和 CN1425374A所公开的组合物进行了比较研究，在实验中意外发现，并通过大量的动物实验验证了阿昔莫司罗苏伐他汀联合使用在降低血清总胆固醇、血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇方面不仅存在着明显的协同性作用，而且与阿昔莫司普伐他汀联合使用、阿昔莫司洛伐他汀联合使用相比较，有着显著的差异，降脂效果更为明显，在升高高密度脂蛋白胆固醇方面，也有着比较明显的优势。

11. 1 受试药物、动物、大鼠高脂血症模型制备同实施例 10。

11. 2组别设置

按血清总胆固醇水平均衡原则，将模型大鼠随机分为：

正常对照组；

模型对照组；

阿昔莫司 300mg/kg普伐他汀 20mg/kg组；

阿昔莫司 300mg/kg洛伐他汀 10mg/kg组；

阿昔莫司 200mg/kg罗苏伐他汀 10mg/kg组；

阿昔莫司 300mg/kg罗苏伐他汀 5mg/kg组；

阿昔莫司 300mg/kg罗苏伐他汀 lOmg/kg组；

阿昔莫司 300mg/kg罗苏伐他汀 20mg/kg组；

阿昔莫司 400mg/kg罗苏伐他汀 5mg/kg组；

阿昔莫司 500mg/kg罗苏伐他汀 5mg/kg组。

11. 3给药

同实施例 10中的 6. 3。

11. 4检测指标

血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL- L)。

11. 5实验结果

大鼠词以高脂词料 14天后分组给药。给药 14天后，阿昔莫司罗苏伐他汀各剂量组在降低血清总胆固醇、血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇方面与阿昔莫司 300mg/kg普伐他汀 20mg/kg组、阿昔莫司 300mg/kg洛伐他汀 10mg/kg组相比较，有着显著的差异；在升高高密度脂蛋白胆固醇方面，也有着比较明显的优势。我们的试验结果充分证明阿昔莫司和罗苏伐他汀联合使用在降低血脂方面具有意想不到的效果，阿昔莫司和罗苏伐他汀不仅取得了显著的协同性作用，而且和现有技术公开的阿昔莫司与洛伐他汀，阿昔莫司与普伐他汀的联合使用更具有优势。具体结果见表 5。阿昔莫司罗苏伐他汀联合使用与阿昔莫司普伐他汀、

阿昔莫司洛伐他汀联合使用降脂效果比较

血清总胆固醇血清甘油三酯低雄 aas醇敲劍鍾围组别

〇 (mmol/L) (mmol/L)

正就廳 1. 96±0· 30 0. 73±0. 13 0. 50 ±0. 13 1. 18±0. 22

5. 80±0. 33™ 2. 87 ±0. 34™ 3. 38 ±0. 11" 0. 99 ±0. 13 阿 150 10mg/kg 2. 81 ±0. 33*"** 1. 27±0· 36**** 1. 12 ±0. 27*"** 1. 80±0. 29*"** 阿 20Cl0ra^kg 2. 78±0, 43™** 1. 23 ±0. 46"*** 1. 10±0. 25*"** 1. 88 ±0. 37™** 阿 300罗苏 5 rag/kg 2. 70±0· 25**** 1. 20±0. 32"*** 1. 05±0· 15 1. 75 ±0. 34™** 阿 300罗苏 10 rag/kg 2. 55土 0. 31*"** 1. 03±0. 2广" 0. 92 ±0. 24**** 1. 99 ±0. 25™*** 阿 300 20 mg/kg 2. 50 ±0. 54"*** 1. 05±0. 23*"** 0. 94±0· 13"*** 2. 01 ±0. 26"*** 阿 400 5 mg kg 2. 75 ±0. 35**** 1· 21±0. 23"** 1. 11±0. 21 1. 79±0· 32·** 阿 500 5 mg kg 2. 68±0. 28"*** 1. 17 ±0. 15™** 1. 08±0. 25"** 1. 73±0· 31™** 阿 300+ 普伐

3. 95 ±0. 39** 1. 73 ±0· 25" 2. 19±0. 29"* 1. 22±0. 23*

20mg/kg

阿 300+ 洛伐

3. 81 ±0. 64** 1. 69±0· 26" 2. 35 ±0. 32*" 1. 31 ±0. 38" 10mg/kg 注：与正常对照组比较，漏 P<0. 001; 与模型对照组比较， **P<0. 01 , ***P<0. 001； 3

o 与阿昔 300+普伐 20mg/kg组和阿昔 300+洛伐 lOrag/kg组相比较， *P<0. 05, **P<0. 01 , ***Ρ<0. 001 ο 参考文献

[1] Brown WV, Bays HE et al， Efficacy and safety of rosuvastatin compared with pravastatin and simvaststin in patients with hypercholesterolemia: a randomized, double— bl ined, 52-week trial.

[2] 徐叔云，卞如濂，陈修主编.药理学实验方法学（第三版），人民卫生出版社出版， 2002年 1月， 1201-1202

[3] 0LBETAM (acipimox) 说明书（Pharmacia, New Zealand)

[4] Al-Shurbaji A, et al. The effect of Acipimox on triacylglycerol metabolism in rat. Scand J Clin Lab Invest, 1990, 50 (2) : 203-208

[5] Crestor (Rosuvastatin) 说明书

Claims

权利要求

1. 一种治疗高血脂症的组合物，其特征在于，所述组合物包括：

a) 第一个活性成分：阿昔莫司；

b) 第二个活性成分：罗苏伐他汀或其可药用的盐、酯或溶剂化物；第一个活性成分和第二个活性成分（以游离酸计）的比例为 15— 100 : 1。

2. 按照权利要求 1 所述的组合物，其特征在于，所述的罗苏伐他汀可以药用的盐为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐、铁盐。

3. 按照权利要求 1 所述的组合物，其特征在于，所述的罗苏伐他汀可药用的酯为脂肪醇、芳香醇、杂环醇所形成的酯。

4. 按照权利要求 3所述的组合物，其特征在于，所述可药用的酯为罗苏伐他汀的甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。

5. 按照权利要求 1-4之一所述的组合物，其特征在于，阿昔莫司与罗苏伐他汀（以游离酸计）的重量比是 40〜100： 1。

6. 按照权利要求 5所述的组合物，其特征在于，阿昔莫司与罗苏伐他汀（以游离酸计）的重量比是 60: 1。

7. 按照权利要求 1-6之一所述的组合物，其特征在于，所述组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或滴丸。