CN100531719C - 含氨甲喋呤增效剂的缓释注射剂 - Google Patents

Abstract

一种含氨甲喋呤的抗癌药物缓释剂为缓释注射剂，抗癌缓释注射剂由缓释微球和溶媒组成。其中缓释微球包括抗癌有效成分和缓释辅料，溶媒为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。抗癌有效成分为氨甲喋呤和选自抗肿瘤抗生素和/或紫杉烷的氨甲喋呤增效剂的组合；缓释辅料选自聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚苯丙生、FAD：葵二酸共聚物之一或其组合；助悬剂选自羧甲基纤维素钠、甘露醇、山梨醇、土温80之一或其组合。缓释微球还可制成缓释植入剂，肿瘤内或瘤周注射或放置该缓释剂不仅能够降低药物的全身毒性反应，同时还能选择性地提高肿瘤局部的药物浓度，增强化疗药物及放射治疗等非手术疗法的治疗效果。

Description

含氨甲喋呤增效剂的缓释注射剂

(一)技术领域

本发明涉及一种含氨甲喋呤增效剂的缓释注射剂及其制备方法，属于药物技术领域。具体而言，本发明提供一种含氨甲喋呤与其增效剂组合的抗癌药物缓释剂。

(二)背景技术

氨甲喋呤作为一种常用的抗癌药物，已广泛用于治疗多种肿瘤，如乳腺癌等内分泌肿瘤。然而，在应用过程中，其明显的全身毒性极大地限制了该药的应用。

为有效提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度，人们研究了含氨甲喋呤的药物缓释系统，包括缓释植入剂(见：中国专利号ZL96115937.5、ZL97107077.6和美国专利US5,651,986)等。然而，固体缓释植入剂(中国专利号ZL96115937.5；ZL97107077.6)和现有的如用于治疗脑肿瘤(ZL00809160.9)缓释微球或美国专利(US5,651,986)均存在不容易操作、疗效差、并发症多等问题。

另外，肿瘤间质中的血管、结缔组织、基质蛋白、纤微蛋白及胶原蛋白等不仅为肿瘤细胞的生长提供了支架及必不可少的营养物质，还影响了化疗药物在肿瘤周围及肿瘤组织内的渗透和扩散(参见尼提等“细胞外间质的状况对实体肿瘤内药物运转的影响”《癌症研究》60期2497-503页(2000年)(Netti PA，Cancer Res.2000，60(9)：2497-503))。由于实体肿瘤过度膨胀性增生，其间质压力、组织弹性压力、流体压力及间质的粘稠度均较其周围正常组织为高，因此，常规化疗，难于肿瘤局部形成有效药物浓度，参见孔庆忠等“瘤内放置顺铂加系统卡莫司汀治疗大鼠脑肿瘤”《外科肿瘤杂志》69期76-82页(1998年)(KongQ et al.，J Surg Oncol.1998 Oct；69(2)：76-82)，单纯提高给药剂量又受到全身反应的限制。除此之外，许多实体肿瘤对抗癌药包括氨甲喋呤的敏感性较差，且在治疗过程中容易产生耐药性。药物局部应用可能在某种程度上解决药物浓度的问题，然而药物植入等手术操作较复杂，创伤性大，除易导致出血、感染、免疫力降低等各种并发症外，还可引起或加速肿瘤的扩散与转移。除此之外，手术前后本身的准备及昂贵的费用常常影响其有效的实施。

另外，许多肿瘤细胞内的DNA修复功能在化疗之后明显增加。后者常导致肿瘤细胞对抗癌药物的耐受性的增强，其结果是治疗失败。

除此之外，低剂量的抗癌药物治疗不仅能够增加癌细胞的药物耐受性，而且还可促进其浸润性生长”(参见梁等“抗癌药物脉冲筛选后增加了人肺癌细胞的药物耐受性及体外浸润能力并伴有基因表达的改变”《国际癌症杂志》111期484-93页(2004年)(Liang Y，etal.，Int J Cancer.2004；111(4)：484-93))。

因此，便于在肿瘤局部维持高的药物浓度以及增加肿瘤细胞对药物的敏感程度的制剂和方法便成为一个重要研究课题。

(三)发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种新的含氨甲喋呤及其增效剂的缓释注射剂。

本发明发现，本发明中提到的药物与氨甲喋呤合用可使其抗癌作用相互加强(以下将能使氨甲喋呤抗癌作用相互增加的药物称之为氨甲喋呤增效剂)。除此之外，将氨甲喋呤或氨甲喋呤与其增效剂的组合包装于特定的缓释辅料中并配以特殊溶媒制成抗癌药物缓释注射剂不仅能够极大地提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度、降低药物对正常组织的毒性，还能够极大方便药物注射、减少手术操作的并发症、降低病人的费用。以上意外发现构成本发明的主要内容。

本发明氨甲喋呤缓释剂的一种形式是缓释注射剂，由缓释微球和溶媒组成。具体而言，该抗癌缓释注射剂由以下成分组成：

(A)缓释微球、包括：

抗癌有效成分         0.5-60％

缓释辅料             40-99％

助悬剂               0.0-30％

以上为重量百分比

和

(B)溶媒，为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。

其中，

抗癌有效成分为氨甲喋呤与其增效剂的组合，氨甲喋呤增效剂选自抗肿瘤抗生素和或紫杉烷；缓释辅料选自聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)、聚苯丙生、FAD：癸二酸(SA)共聚物、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、钾盐、钠盐、透明质酸、胶原蛋白、明胶和白蛋胶之一或其组合；助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。

抗癌有效成分中的氨甲喋呤可为其各种盐，其中以其盐酸盐为优选。

抗肿瘤抗生素类药物选自下列之一或组合：

癌霉素、博来霉素(Bleomycin，平阳霉素、博来霉素A5)、(盐酸)博来霉素、佐尔博霉素、哌来霉素、硫酸哌来霉素、抗生素、波外定、克拉霉素(Clarithromycin)、阿克拉霉素(Aclacinomycin A、阿柔比星)、阿克拉霉素-B、盐酸阿可达佐、阿可达佐、克大霉素、乙酰克大霉素(乙酰贵田霉素)、阿佐霉素(含氮霉素)、道诺霉素(正定霉素，柔红霉素，daunomycin)、依达比星(Idarubicin Hydrochloride，去甲氧柔红霉素)、蛇形菌素(Diacetoxysciroenol)、盐酸阿霉素(多柔比星，doxorubicin，adriamycin)、三铁阿霉素、表阿霉素(epiadriamycin)或表柔比星(Epirubicin)、戊柔比星(valrubicin)、吡柔比星、7-O-甲基诺加-4’-表阿霉素(7-o-methylnogallol-4’-epiadriamycin)、二乙氧醋酰阿霉素、环霉素，丝裂霉素(Mitomycin)、丝裂霉素C(mitomycin C)、丝林霉素、放线菌素D(Dactinomycin)、放线菌素C、环孢菌素A、消癌菌素(carzinocidin)、嗜癌素(carzinophylin)、嗜癌霉素、瘤菌素、治癌菌素(carzinostatin，制癌菌素)、新制癌菌素(neocarzinostain)、重氮霉素(diazamycine)、大菌素(macrocin)、大菌霉素(macrocinomycin)、更生霉素、丙氨菌素、丙氨肽霉素、阿乐盖、新丝菌素(neothricin，neothramycin)、大分子霉素(macromomycin或macromycin)、新塞那霉素、诺卡菌素(nocardin)、诺卡菌红素(nocardorubin)、诺卡型霉素(noformicin)、诺加霉素(诺加拉霉素，nogalamycin or nogaromycin)、丝裂红素(mitochromine ormitocromine)、多粘菌素E(Polymyxin E)、吡利霉素(Pirlimycin)、地红霉素(Dirithromycin)、安曲霉素、恶溶菌素、达佐霉素、橄榄霉素、链黑霉素、链黑霉素甲酯、链脲霉素、培洛霉素、嘌罗霉素、司帕霉素、他利霉素、洛撒蒽醌、洛索蒽醌(Losoxantrone)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、吡罗蒽醌(Piroxantrone)、替洛蒽醌(Teloxantrone)、羟硝氨糖环素、蒽霉素(氨茴霉素，安拉霉素)、甲基蒽霉素、艾菲地可宁、曲林菌素、(盐酸)卡米诺霉素、他利霉素、巨毛霉素、去甲柔毛霉素、氯脲霉素、色霉素A3、氯佐星(chlorozotocin)、去甲利福平、蒽环霉素-A、黑他七霉素、脱氧助间型霉素、嘌呤霉素、盐酸嘌呤霉素、雷查霉素、瑞必克霉素、桑霉素、抗癌霉素、西伯利亚霉素、他利霉素、米托佐罗、硒唑呋喃、斯潘格宁、盐酸锗螺胺、锗螺胺、螺妙斯定、抗癌锑。

上述抗肿瘤抗生素药物以博来霉素、道诺霉素、阿柔比星、阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌、替洛蒽醌或氯佐星为优选。

以上抗肿瘤抗生素药物还包括其盐，如，但不限于，硫酸盐、磷酸盐、盐酸盐、乳糖酸盐、醋酸盐、天冬酸盐、硝酸盐、枸橼酸盐、嘌呤或嘧啶盐、琥珀酸盐或马来酸盐。

紫杉烷(Taxanes)类抗癌药物选自紫杉醇(Paclitaxel，taxol，泰素)、多烯紫杉醇(Docetaxel，紫杉特尔、多西他赛)、2’-羟基紫杉醇(paclitaxel-2’-hydroxy)、10-去乙酰浆果赤霉素III(10-deacetylbaccatin III，DAB)、14β-羟基-10-去乙酰浆果赤霉素III(14-OH-DAB)、9-二氢-13-浆果赤霉素III(DHB)、IDN5109、10-去乙酰紫杉醇(10-deacetyl taxol)、7-表-紫杉醇(7-epi-taxol)、浆果赤霉素、浆果赤霉素III(baccatin III)、浆果赤霉素V、云实紫杉(Taxus brevifolia)、加拿大紫杉(TaxusCanadensis)、浆果紫杉(Taxus baccata)以及中国紫杉(Taxus chinensis)、尖齿紫杉(Taxus cuspidata)、培植紫杉(Taxus X media cultivars)、云南紫杉Taxusyunnanensis)、佛罗里达紫杉(Taxus floridana)或它们的盐。

上述紫杉醇类抗癌药物以紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉醇、10-去乙酰紫杉醇和7-表-紫杉醇为优选。

以上紫杉醇类抗癌药物在缓释注射剂微球中的重量百分比从0.01％-50％，以1％-40％为佳，以5％-30％为最佳。

抗癌有效成分为氨甲喋呤增效剂或氨甲喋呤与其增效剂的组合。当药物缓释微球中的抗癌药物仅为氨甲喋呤增效剂时，抗癌缓释注射剂主要用于增加其他途径应用的氨甲喋呤的作用效果或用于对放疗或其它疗法的增效。当用于增加其他途径应用的氨甲喋呤的作用效果时，氨甲喋呤可经动脉、静脉或局部注射、放置给药。

抗癌药物在药物缓释微球中的重量百分比为0.5％-60％，以2％-40％为佳，以5％-30％为最佳。氨甲喋呤和氨甲喋呤增效剂的重量比为1-9：1到1：1-9，以1-2：1为优选。

本发明抗癌缓释注射剂微球中的抗癌有效成分优选如下，均为重量百分比：

(a)2-40％的氨甲喋呤与2-40％的博来霉素、道诺霉素、阿柔比星、阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌、替洛蒽醌或氯佐星的组合；或

(b)2-40％的氨甲喋呤与2-40％的紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

缓释辅料优选聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)、FAD:SA共聚物和聚苯丙生之一或其组合。

当选用聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)与聚乙醇酸的混合物、乙醇酸和羟基羧酸的共聚物(PLGA)时，PLA和PLGA含量重量百分比分别为0.1-99.9％和99.9-0.1％。聚乳酸的分子量峰值可为，但不限于，5000-200,000，但以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；聚乙醇酸的分子量可为，但不限于，5000-200，000，但以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；以上聚羟基酸可单选或多选。当单选时，以聚乳酸(PLA)或羟基羧酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)为优选，共聚物的分子量可为，但不限于，5000-200,000，但以20,000-60,000为优选，以30,000-50，000为最优选；当多选时，以高分子多聚物或不同高分子多聚物组成的复合多聚物或共聚物为优选，以含不同分子量聚乳酸或癸二酸的复合多聚物或共聚物为最优选，如，但不限于，分子量为1000到30000的聚乳酸与分子量为20000到50000的聚乳酸混合、分子量为10000到30000的聚乳酸与分子量为30000到80000的PLGA混合、分子量为20000到30000的聚乳酸与癸二酸混合、分子量为30000到80000的PLGA与癸二酸混合。

在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或癸二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、乙醇酸和羟基羧酸的混合物、癸二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羟基羧酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和羟基羧酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是聚苯丙生[聚(1，3-二(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸)(p(CPP-SA))、双脂肪酸-癸二酸共聚物(PFAD-SA)]、聚(芥酸二聚体-癸二酸)[P(EAD-SA)]和聚(富马酸-癸二酸)[P(FA-SA)]等。对羧苯氧基丙烷(p-CPP)与癸二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40：50-90，最好是重量比15-30：65-85。

除上述辅料外，还可选用其他物质见美国专利(4757128；4857311；4888176；4789724)及《药用辅料大全》(第123页，四川科学技术出版社1993年出版，罗明生和高天惠主编)中已有详细描述。另外，中国专利(申请号96115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美国发明专利(专利号5,651,986)也列举了某些药用辅料，包括充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。

为调节药物释放速度或改变本发明的其它特性，可以改变聚合物的单体成分或分子量、添加或调节药用辅料的组成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各种糖或盐等。其中糖可为，但不限于，木糖醇、低聚糖、(硫酸)软骨素及甲壳素等，其中盐可为，但不限于，钾盐和钠盐等。

缓释注射剂中，药物缓释系统可制成微球、亚微球、微乳、纳米球、颗粒或球形小丸，然后与注射溶媒混合后制成注射剂使用。在各种缓释注射剂中以混悬型缓释注射剂为优选，混悬型缓释注射剂是将含抗癌成分的药物缓释系统悬浮于注射液中所得的制剂，所用的辅料为上述缓释辅料中的一种或其组合，所用溶媒为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。普通溶媒为，但不限于，蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液。助悬剂的目的在于有效悬浮含药微球，从而利于注射之用。

为方便注射，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)优选1000cp-3000cp(20℃-30℃时)最优选1500cp-3000cp(20℃-30℃时)。

助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。

助悬剂在普通溶媒中的含量因其特性而定，可为0.1-30％因具体情况而定。优选助悬剂的组成为：

A)0.5-5％羧甲基纤维素钠+0.1-0.5％土温80；或

B)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土温80；或。

C)0.5-5％羧甲基纤维素钠+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土温80。

溶媒的制备则取决于溶媒的种类，普通溶媒有市售，也可以自制，如蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液，但必需严格按照有关标准。特殊溶媒需考虑到助悬剂的种类及其组成、溶媒所悬浮的药物、缓释微球(或微囊)的组成、性质及其需要量及注射剂的制备方法，如将羧甲基纤维素钠(1.5％)+甘露醇和或山梨醇(15％)和/或吐温80(0.1％)溶于生理盐水中得相应得溶媒，黏度在10cp-650cp(20℃-30℃时)。

本发明发现影响药物和/或缓释微球悬浮和/或注射的关键因素是溶媒的黏度，黏度越大，悬浮效果越好，可注射性越强。这种意外发现构成了本发明的主要指数特征之一。溶媒的黏度取决于助悬剂的黏度，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)，优选1000cp-3000cp(20℃-30℃时)，最优选1500cp-3000cp(20℃-30℃时)。按照此条件所制得的溶媒的黏度为10cp-650cp(20℃-30℃时)，优选20cp-650cp(20℃-30℃时)，最优选60cp-650cp(20℃-30℃时)。

注射剂的制备有多种方法，一种是将助悬剂为“0”的缓释微粒(A)直接混于特殊溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；另一种是将助悬剂不为“0”的缓释微粒(A)混于特殊溶媒或普通溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；再一种是将缓释微粒(A)混于普通溶媒中，然后加入助悬剂混匀，得到相应的缓释微粒注射剂。除外，还可先将缓释微粒(A)混于特殊溶媒中制得相应的混悬液，然后用真空干燥等办法去除混悬液中的水分，之后再用特殊溶媒或普通溶媒混悬，得到相应的缓释微粒注射剂。以上方法只是用于说明而非限制本发明。值得注意的是，悬浮药物或缓释微球(或微囊)在注射剂中的浓度因具体需要而定，可为，但不限于，10-400mg/ml，但以30-300mg/ml为优选，以50-200mg/ml最优选。注射剂的黏度为50cp-1000cp(20℃-30℃时)，优选100cp-1000cp(20℃-30℃时)，最优选200cp-650cp(20℃-30℃时)。此黏度适用于18-22号注射针头和特制的内径更大的(至3毫米)注射针头。

缓释注射剂的制备方法是任意的，可用若干种方法制备：如，但不限于，混合法、熔融法、溶解法、喷雾干燥法制备微球、溶解法结合冷冻(干燥)粉碎法制成微粉、脂质体包药法及乳化法等。其中以溶解法(即溶剂挥发法)、干燥法、喷雾干燥法和乳化法为优选。微球则可用于制备上述各种缓释注射剂，其方法是任意的。所用微球的粒径范围可在5-400um之间，以10-300um之间为优选，以20-200um之间为最优选。

微球还可用于制备其他缓释注射剂，如凝胶注射剂、嵌段共聚物胶束注射剂。其中，嵌段共聚物胶束由疏水-亲水嵌段共聚物在水溶液中形成，具有球形内核-外壳结构，疏水嵌段形成内核，亲水嵌段形成外壳。载药胶束注射进入体内达到控制药物释放或靶向治疗的目的。所用药物载体为上述任意一种或其组合。其中优选分子量为1000-15000的聚乙二醇(PEG)作为胶束共聚物的亲水嵌段，优选生物降解聚合物(如PLA、聚丙交酯、聚己内酯及其共聚物(分子量1500-25000))作为胶束共聚物的疏水嵌段。嵌段共聚物胶束的粒径范围可在10-300um之间，以20-200um之间的为优选。凝胶注射剂系将生物降解聚合物(如PLA、PLGA或DL-LA和ε-己内酯共聚物)溶于某些两亲性溶媒，再加入药物与之混溶(或混悬)后形成流动性较好的凝胶，可经瘤周或瘤内注射。一旦注入，两亲性溶媒很快扩散至体液，而体液中的水分则渗入凝胶，使聚合物固化，缓慢释放药物。

缓释微球还可用于制备缓释植入剂，所用的药用辅料可为上述药用辅料中的任何一种或多种物质，但以水溶性高分子聚合物为主选，在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或癸二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、PLA与PLGA的混合物、癸二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。聚乳酸(PLA)与聚乙醇酸的的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和乳酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是对羧苯基丙烷(p-CPP)，对羧苯基丙烷(p-CPP)与癸二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40：50-90，最好是重量比15-30：65-85。

本发明抗癌药物缓释剂的又一种形式是抗癌药物缓释剂为缓释植入剂。抗癌植入剂的有效成分可均匀地包装于整个药用辅料中，也可包装于载体支持物中心或其表面；可通过直接扩散和/或经多聚物降解的方式将有效成分释放。

缓释植入剂的特点在于所用的缓释辅料除高分子聚合物外，还含有上述任意一种或多种其它辅料。添加的药用辅料统称为添加剂。添加剂可根据其功能分为充填剂、致孔剂、赋型剂、分散剂、等渗剂、保存剂、阻滞剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂等。

缓释植入剂的主要成份可制成多种剂型。如，但不限于，胶囊、缓释剂、植入剂、缓释剂植入剂等；呈多种形状，如，但不限于，颗粒剂、丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、球形、块状、针状、棒状、柱状及膜状。在各种剂型中，以体内缓慢释放植入剂为优选。

缓释植入剂的最佳剂型为生物相容性、可降解吸收的缓释剂植入，可因不同临床需要而制成各种形状及各种剂型。其主要成份的包装方法和步骤在美国专利中(US5651986)已有详细描述，包括若干种制备缓释制剂的方法：如，但不限于，(i)把载体支持物粉末与药物混合然后压制成植入剂，即所谓的混合法；(ii)把载体支持物熔化，与待包装的药物相混合，然后固体冷却，即所谓的熔融法；(iii)把载体支持物溶解于溶剂中，把待包装的药物溶解或分散于聚合物溶液中，然后蒸发溶剂，乾燥，即所谓的溶解法；(iv)喷雾干燥法；及(v)冷冻干燥法等。

给药途径取决于多种因素，为于原发或转移肿瘤所在部位获得有效浓度，药物可经多种途径给予，如皮下、腔内(如腹腔、胸腔及椎管内)、瘤内、瘤周注射或放置、选择性动脉注射、淋巴结内及骨髓内注射。以选择性动脉注射、腔内、瘤内、瘤周注射或放置为优选。

本发明可以用于制备治疗人及动物的各种肿瘤的药物制剂，主要为缓释注射剂或缓释植入剂，所指肿瘤包括起源于大脑、中枢神经系统、肾脏、肝、胆囊、头颈部、口腔、甲状腺、皮肤、黏膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、肺脏、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宫、卵巢、子宫内膜、子宫颈、前列腺、膀胱、结肠、直肠的原发或转移的癌或肉瘤或癌肉瘤。

本发明所制的缓释注射剂或缓释植入剂中还可加入其它药用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼药、抗凝药、止血药等。

通过如下试验和实施例对本发明的技术方作进一步的描述：

试验1、不同方式应用氨甲喋呤后的局部药物浓度比较

以大白鼠为试验对象，将2×10⁵个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至1厘米直径后将其分组。每组所用氨甲喋呤剂量均为5mg/kg。测定不同时间肿瘤内药物含量(％)。结果表明，氨甲喋呤经不同方式应用后的局部药物浓度差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。这一发现构成本发明的重要特征。以下的相关抑瘤试验进一步证实了这一点。

试验2、不同方式应用氨甲喋呤后的体内抑瘤作用比较

以大白鼠为试验对象，将2×10⁵个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至0.5厘米直径后将其分为以下9组(见表2)。每组剂量均为5mg/kg。治疗后第10天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果.

表2

 

试验组(n)	给药方式	肿瘤体积(cm<sup>3</sup>)	P值
				1(6)	-	60
2(6)	尾静脉注射普通注射剂	55	0.05
				3(6)	腹腔注射普通注射剂	56	0.05
4(6)	瘤周注射普通注射剂	48	0.03
				5(6)	瘤周注射缓释注射剂	22	<0.01
6(6)	瘤周放置缓释植入剂	18	<0.01
				7(6)	瘤内注射普通注射剂	44	0.04
8(6)	瘤内注射缓释注射剂	16	<0.001
				9(6)	瘤内放置缓释植入剂	14	<0.001

以上结果表明，氨甲喋呤经不同方式应用后的抑瘤作用差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。不仅疗效好，毒副作用也小。

试验3、含氨甲喋呤和氨甲喋呤增效剂(缓释注射剂)的体内抑瘤作用

以大白鼠为试验对象，将2×10⁵个胰腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下10组(见表3)。第一组为对照，第2到10组为治疗组，药物经瘤内注射。剂量均为5mg/kg。治疗后第10天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表3)。

表3

 

试验组(n)	所受治疗	肿瘤体积(cm<sup>3</sup>)	P值
				1(6)	对照	70±8
2(6)	氨甲喋呤	46±5.2	<0.05
				3(6)	阿霉素	44±2.0	<0.01
4(6)	表柔比星	44±2.2	<0.01
				5(6)	依达比星	46±3.2	<0.01
6(6)	戊柔比星	40±3.0	<0.01
				7(6)	氨甲喋呤+阿霉素	20±2.0	<0.001
8(6)	氨甲喋呤+表柔比星	32±3.4	<0.001
				9(6)	氨甲喋呤+依达比星	34±3.4	<0.001
10(6)	氨甲喋呤+戊柔比星	20±2.0	<0.001

以上结果表明，氨甲喋呤及所用氨甲喋呤增效剂-抗肿瘤抗生素(阿霉素、表柔比星、依达比星、戊柔比星)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。这一发现构成本发明又一重要特征。

试验4、氨甲喋呤和氨甲喋呤增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用

所用的肿瘤细胞包括CNS-1、C6、9L、胃腺上皮癌(SA)、骨肿瘤(BC)、乳腺癌(BA)、肺癌(LH)、甲状腺乳头状腺癌(PAT)、肝癌等。将氨甲喋呤和氨甲喋呤增效剂按10ug/ml浓度加到体外培养24小时的各种肿瘤细胞中，继续培养48小时后计数细胞总数。其肿瘤细胞生长抑制效果见表4所示。

表4

 

瘤细胞	氨甲喋呤	丝裂霉素C	放线菌素D	米托蒽醌	氨甲喋呤+丝裂霉素C	氨甲喋呤+放线菌素D	氨甲喋呤+米托蒽醌
								CNS	61％	58％	62％	64％	90％	88％	88％
C6	62％	64％	60％	66％	94％	84％	94％
								SA	54％	62％	56％	62％	88％	92％	92％
BC	52％	64％	54％	64％	94％	84％	80％
								BA	52％	60％	62％	60％	98％	92％	92％
LH	62％	58％	62％	56％	92％	88％	84％
								PAT	64％	56％	64％	56％	90％	84％	89％

以上结果表明，所用氨甲喋呤及氨甲喋呤增效剂抗肿瘤抗生素(丝裂霉素C、放线菌素D、米托蒽醌)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。

试验5、氨甲喋呤及氨甲喋呤增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用

以大白鼠为试验对象，将2×10⁵个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组、联合治疗组。缓释植入剂经瘤内放置。剂量均为5mg/kg。治疗后第10天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表5)。

表5

 

实验组(n)	所受治疗	肿瘤抑制率(%)	P值
				1 (6)	对照	-
2 (6)	氨甲喋呤	56	<0.05
				3 (6)	紫杉醇	54	<0.05
4 (6)	多西他赛	52	<0.05
				5 (6)	2’-羟基紫杉醇	62	<0.05
6 (6)	7-表-紫杉醇	60	<0.01
				7 (6)	氨甲喋呤+紫杉醇	88	<0.01
8 (6)	氨甲喋呤+多西他赛	86	<0.01
				9 (6)	氨甲喋呤+2’-羟基紫杉醇	90	<0.01
10 (6)	氨甲喋呤+7-表-紫杉醇	92	<0.001

以上结果表明，所用氨甲喋呤及氨甲喋呤增效剂-紫杉烷(紫杉醇、多西他赛、2’-羟基紫杉醇、和7-表-紫杉醇)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。这一发现构成本发明又一重要特征。

试验6、注射剂粘度对缓释剂注射性的影响

将氨甲喋呤溶于含不同黏度助悬剂的溶媒中，按照实施例1-16所述之方法制成不同黏度的缓释注射剂。然后以小鼠皮下注射20次的成功率(％)代表其可注射性。见表6。溶媒的黏度范围为10cp-650(20℃-30℃时)。将等量缓释微球(约2-5毫克)混悬于5毫升溶媒中，用带18号或22号针头的5毫升注射器将之注射到小鼠皮下。每次注射的时间为1-2分钟，注射后注射器内的药物残留量大于5％为注射失败。

表6

 

溶媒黏度(cp)	注射成功次数	注射成功率(％)
			10	1	5
50	2	10
			100	4	20
200	7	35
			300	9	45
400	12	60
			500	14	70
550	14	70
			600	16	80
650	18	90

以上结果表明，影响注射剂可注射性的主要因素为溶媒的黏度，其中，在400到650cp黏度的溶媒的成功率在50％以上。这一发现构成本发明的又一主要特征。用22号针头重复试验6，得出同样结果。

以上结果表明，所用氨甲喋呤及氨甲喋呤增效剂单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。这一发现构成本发明又一重要特征。

综上结果表明，将氨甲喋呤与其增效剂组合包装于特定的缓释辅料中并配以特殊溶媒(见实施例)制成的抗癌药物缓释注射剂不仅能够极大地提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度、降低药物对正常组织的毒性，还能够极大方便药物注射、减少手术操作的并发症、降低病人的费用。以上意外发现构成本发明的主要内容。除此之外，所用氨甲喋呤与各种氨甲喋呤增效剂单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。因此，本发明所述的的有效成分为氨甲喋呤与任意一种氨甲喋呤增效剂的组合。含有以上有效成分的药物可制成缓释微球，进而制成缓释注射剂和植入剂，其中以与含助悬剂的特殊溶媒组合形成的混悬注射剂为优选。

缓释注射剂或缓释植入剂还可通过以下实施方式得以进一步说明。上述实施例及以下实施例只是对本发明作进一步说明，并非对其内容和使用作任何限制。

(四)具体实施方式

实施例1.

将80mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)：癸二酸(SA)为20：80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg氨甲喋呤和10mg阿霉素，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％氨甲喋呤和10％阿霉素的注射用微球。然后将微球悬浮于含15％甘露醇的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。

实施例2.

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例1相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比为：

2-40％的氨甲喋呤与2-40％的博来霉素、道诺霉素、阿柔比星、阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌、替洛蒽醌或氯佐星的组合。

实施例3.

将70mg分子量峰值为25000的聚乳酸(PLGA，75：25)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入15mg氨甲喋呤和15mg紫杉醇，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的含药固体组合物冷冻粉碎制成含10％氨甲喋呤和10％紫杉醇的微粉，然后悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。

实施例4

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例3相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比为：

2-40％的氨甲喋呤与2-40％的紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

实施例5.

将70mg乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入20毫克氨甲喋呤和10毫克紫杉醇，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％氨甲喋呤和10％紫杉醇的注射用微球。然后将微球悬浮于含5-15％山梨醇的注射液中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。

实施例6.

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例5相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为：

2-40％的氨甲喋呤与2-40％的紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

实施例7.

将70mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)：癸二酸(SA)为20：80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg氨甲喋呤和10mg多西他赛，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％氨甲喋呤与10％多西他赛的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠和0.5％吐温80的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。

实施例8.

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例7相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为：

15％的氨甲喋呤与15％的紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

实施例9

将70mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)：癸二酸(SA)为20：80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg氨甲喋呤和10mg丝裂霉素C，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％氨甲喋呤和10％丝裂霉素C的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠和15％山梨醇和0.2％吐温80的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。

实施例10

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例9相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为：

20％氨甲喋呤与10％的博来霉素、道诺霉素、阿柔比星、阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌、替洛蒽醌或氯佐星的组合。

实施例11

将70mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)：癸二酸(SA)为20：80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg表柔比星和20mg氨甲喋呤，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％表柔比星和20％氨甲喋呤的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为30-40天左右。

实施例12

加工成缓释植入剂的方法步骤与实施例11相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为：

20％的氨甲喋呤与10％的博来霉素、道诺霉素、阿柔比星、阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌、替洛蒽醌或氯佐星的组合。

实施例13

将70mg分子量峰值为35000的聚乳酸(PLGA，50：50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg氨甲喋呤和20mg多西他赛，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％氨甲喋呤和20％多西他赛的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为35-50天左右。

实施例14

加工成缓释植入剂的方法步骤与实施例11、13相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为：15％的氨甲喋呤与15％的紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

实施例15.

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例14相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比为：

15％的氨甲喋呤与15％的阿柔比星、阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌、替洛蒽醌、紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

实施例16

加工成缓释剂的方法步骤与实施例1-15相同，但所不同的是所用的缓释辅料为下列之一或其组合：

a)分子量峰值为10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000的聚乳酸(PLA)；

b)分子量峰值为10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)，其中，聚乙醇酸和羟基乙酸的比例为50-95：50-50；

c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)；

d)10：90、20：80、30:70、40：60、50：50或60：40的对羧苯基丙烷(p-CPP)：癸二酸(SA)共聚物(聚苯丙生)；

d)FAD与葵二酸(SA)共聚物；

e)木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、透明质酸、胶原蛋白、明胶或白蛋胶。

实施例17

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例1-16相同，但所不同的是所用的的助悬剂分别为下列之一或其组合：

a)0.5-3.0％羧甲基纤维素(钠)；

b)5-15％甘露醇；

c)5-15％山梨醇；

d)0.1-1.5％表面活性物质；

e)0.1-0.5％吐温20。

实施例18

加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例1-17相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为：

(a)15％的氨甲喋呤与15％的阿霉素、表柔比星、依达比星、吡柔比星、戊柔比星、丝裂霉素C、放线菌素D、洛索蒽醌、米托蒽醌、吡罗蒽醌或替洛蒽醌的组合；

(b)15％的氨甲喋呤与15％的紫杉醇、多烯紫杉醇(多西他赛)、2’-羟基紫杉酚、10-去乙酰紫杉酚或7-表-紫杉酚的组合。

以上实施例仅用于说明，而并非局限本发明的应用。

本发明所公开和保护的内容见权利要求。

Claims (2)

1. 【权利要求1】一种含氨甲喋呤的抗癌药物缓释注射剂，由以下成分组成：

   (A)缓释微球，包括：

   抗癌有效成分

   缓释辅料

   和

   (B)溶媒；

   其中，

   抗癌有效成分为氨甲喋呤与选自抗肿瘤抗生素的氨甲喋呤增效剂的组合；

   溶媒中的助悬剂为甘露醇、羧甲基纤维素钠、山梨醇、吐温80之一或其组合；

   所述的抗癌药物缓释注射剂为下列组合之一：

   (1)抗癌有效成分为10％氨甲喋呤和10％阿霉素，缓释辅料为对羧苯基丙烷：癸二酸为20：80的聚苯丙生，溶媒为含15％甘露醇的生理盐水；或

   (2)抗癌有效成分为20％氨甲喋呤和10％丝裂霉素C，缓释辅料为对羧苯基丙烷：癸二酸为20：80的聚苯丙生，溶媒为含1.5％羧甲基纤维素钠和15％山梨醇和0.2％吐温80的生理盐水；

   抗癌有效成分的重量百分比基于微球，助悬剂为体积重量比基于溶媒。
2. 【权利要求2】一种含氨甲喋呤的抗癌药物缓释植入剂，由以下成分组成：

   抗癌有效成分为10％表柔比星和20％氨甲喋呤，缓释辅料为对羧苯基丙烷：癸二酸为20：80的聚苯丙生；

   以上均为重量百分比。