CN100502672C - 一种调节机体免疫力的牛奶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种配方组合牛奶及其制备方法。该牛奶是通过在普通牛奶中添加L-精氨酸,并经均质工艺加工制成。本发明的配方组合牛奶具有调节机体免疫力的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种牛奶及其制备工艺,特别涉及一种调节机体免疫力的牛奶及其制备工艺。
背景技术
精氨酸在人体具有重要的生理功能。生物化学的研究早就证明了精氨酸在尿素循环代谢中的重要作用。因此,精氨酸长期以来被作为一种解除氨中毒的药物在临床广泛应用。营养学的研究也已经证明精氨酸是一种条件必需氨基酸。当人体处于饥饿状态、蛋白质摄入过量、创伤、青春生长期等体内蛋白质分解代谢增强时,精氨酸的需要量就会大大增加。在营养学的意义上,精氨酸具有良好的生殖营养功能,在生殖细胞的发育和精子形成过程中具有重要的营养作用。新近的研究证明,精氨酸是合成一氧化氮的底物,由此人们逐步发现了精氨酸的许多免疫调节和心血管的生物活性。实验研究表明,长期食用精氨酸可以预防动脉硬化的形成。人体在创伤(手术、意外伤、烧伤)、高温等生理性应激以及许多心因性应激情况下精氨酸对于因应激而造成的免疫功能低下有显著的预防和恢复作用。研究还证明,精氨酸能够提高机体的免疫监视功能,调节抑制性T细胞、杀伤性T细胞和辅助性T细胞的功能关系,因而对于肿瘤的免疫预防和治疗具有独特作用。
药物制剂技术的研究证明,有很多药物或生物活性物质经过乳化剂和乳化工艺制成乳剂,其生物利用度会大大提高。在传统的知识里,这样的乳化工艺常常是靠添加各种天然或合成的乳化剂实现的。
牛奶既是最富于营养和人们最常用的食品之一,同时又是天然最优良的乳剂,可以作为许多营养物质、药物和其它生物活性物质理想的乳剂或营养强化载体。虽然人类已经发展了许多强化营养素的牛奶,例如强化钙、维生素A、D、牛黄酸等,但有关在牛奶中强化精氨酸的研究却还未见有研究报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种L-精氨酸配方组合牛奶及其制备方法,本发明另一目的在于提供该配方组合牛奶的新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现:
本发明L-精氨酸牛奶,是按100ml牛奶中L-精氨酸含量为0.5-20g配制而成;100ml牛奶中L-精氨酸含量优选1g、5g、7.5g、10g、20g。
本发明的配方组合牛奶优选制备方法如下:
取普通牛奶,按以上比例在牛奶中添加L-精氨酸,并经高压均质工艺加工制成。
在牛奶中按照一定比例强化配伍,并经特定工艺加工制成的牛奶是一种具有显著调节机体免疫功能的组合配方奶,这种配方奶较单用精氨酸有更好的调节机体免疫力的作用。因为牛奶是人们日常饮用的食品,所以,本发明L-精氨酸牛奶可以更方便,更有顺从性地用于免疫功能低下人群、在各种自然、生理和病理条件下(例如瘟疫流行、物理和心理应激、疾病以及外科术后等)需要增强免疫功能的人群以及肿瘤患者的免疫治疗和放化疗后的免疫功能抢救。本发明牛奶还可以制成各种奶制品。
下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 精氨酸牛奶(L-ArgMilk)对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
1.1 受试药物及试剂
L-ArgMikl(精氨酸乳品),由山西大学分子生物研究所提供。批号:06-0802;置冰箱中备用。
印度墨汁:北京西中化工厂生产,批号:960502
1.2 动物:km种小鼠,体重18-22g,由山西医科大学实验动物中心提供,合格证号:医动学第07-0102;于25±2℃恒温室内饲养。全价营养颗粒饲料及消毒垫料均由山西医科大学实验动物中心提供。
1.3 受试药物的剂量及分组:
一、空白对照 0.9%NaCl溶液,每鼠ig0.2ml/10g体重。
二、L-精氨酸对照取L-精氨酸15g,加水至200ml溶解,配成0.075g/ml浓度溶液。每鼠ig0.2ml/10g体重,等于L-精氨酸药量1.5g/kg;然后4倍稀释,配制成187.5mg/ml浓度溶液。每鼠ig0.2ml/10g体重,等于L-精氨酸药量0.375g/kg。
三、纯牛奶:每鼠ig0.2ml/10g体重
四、纯牛奶+L-精氨酸:取L-精氨酸15g,加纯牛奶至200ml溶解,配成0.075g/ml浓度溶液。每鼠ig0.2ml/10g体重,等于L-精氨酸药量1.5g/kg;
五、对倍稀释,分别配制成375mg/ml、187.5mg/ml浓度溶液。每鼠ig0.2ml/10g体重,分别等于L-精氨酸药量0.75g/kg、0.375g/kg。
1.4 方法与结果
对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的影响:
取小鼠60只,雌雄皆用;随机分为6组,分别为对照组:生理盐水20ml/kg;L-精氨酸对照组:L-Arg 1.5g/kg,0.375g/kg;纯牛奶对照组,L-Arg milk(精氨酸乳品)三个剂量组,每组10只。每日ip给药一次,连续14天,体积20ml/kg,末次给药后1h,称体重,各鼠均按0.1ml/10g剂量由尾静脉注入印度墨汁(以生理盐水按1:5稀释),注射后分别在1min(t1)、6min(t2)从小鼠眼眶静脉丛取血20ul,溶于3.0ml 0.1%Na2CO3溶液中摇匀,放置20min后在721型分光光度计上于680nm处测其吸光度值(A),根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数a值。计算公式:K=(logA1-logA2)/(t2-t1);a=K1/3×体重/(肝重+脾重)[3]。结果见表1。
表1 对小鼠碳粒廓清速率的影响(X±s)
注:与对照组比*p<0.05;
由表1结果可见,单独服用牛奶,小鼠的K值和a值均无统计学意义的升高作用。单独服用L-精氨酸(1.5g/kg、0.375g/kg),对小鼠的K值和a值也均未见有统计学意义的升高作用,但是在同等剂量下,L-精氨酸牛奶(L-Arg+M、1.5g/kg)对小鼠的廓清指数K值和a值均有升高作用,同对照组相比,差异有显著性意义。而且在0.75g/kg剂量时,对小鼠的K值也有显著的升高作用。说明L-精氨酸和牛奶组合,具有增强免疫功能的协同作用。
实验例2 L-精氨酸牛奶对免疫功能低下小鼠免疫器官重量的影响
取昆明种小鼠40只,雌雄各半,体重20±2g,随机分为对照组(A)、模型组(B)、L-精氨酸水溶液组(C)、纯牛奶组(D)和L-精氨酸牛奶组(E)五组,每组10只。E组小鼠以1.5g/kg剂量灌服L-精氨酸牛奶;C组小鼠以1.5g/kg剂量灌服等体积L-精氨酸水溶液;D组灌服等体积的纯牛奶,模型组和空白组小鼠均灌服等体积生理盐水,每日一次,连续给药10天。于给药第7天开始,除对照组外,各实验组小鼠均按60mg/kg的剂量腹腔注射环磷酰胺,连续4天;对照组小鼠同途径注射等量生理盐水作为空白对照,于最后一天灌胃和注射环磷酰胺2小时后,处死动物,称体重,迅速剖取胸腺、脾脏组织,用滤纸吸去其表面附着的血液,立即在精密扭力天平上称其湿重。结果见表2。
表2 L-精氨酸牛奶对免疫功能低下小鼠免疫器官重量的影响(x±SD)
与空白组比较,*P<0.01;
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;
与水溶液组比较,ΔP<0.05
结果表明,模型组与空白组比较,其胸腺指数和脾指数明显降低(P<0.01),说明造模成功。
与模型组比较,L-精氨酸水溶液组和L-精氨酸牛奶组的胸腺指数和脾指数明显升高(P<0.05,P<0.01),说明两种溶液对于环磷酰胺造成的免疫器官重量及其免疫功能下降具有明显的改善作用。
与L-精氨酸水溶液组比较,L-精氨酸牛奶组胸腺指数和脾指数升高更显著,与单独服用L-精氨酸组相比,具有显著的意义(P<0.05),说明L-精氨酸牛奶对于环磷酰胺造成的免疫器官重量及其免疫功能下降的改善作用优于单纯使用L-精氨酸。
实验例3 本发明L-精氨酸牛奶对血虚模型小鼠红细胞及血红蛋白的影响
取昆明种小鼠,雌雄各半,体重20±2g,随机分为模型组、L-精氨酸水溶液组和L-精氨酸牛奶组,每组10只。先测出各鼠给药前红细胞(RBC)和血红蛋白(Hb)值,然后尾部放血法造成失血性血虚模型(RBC、Hb均明显低于正常值)后,L-精氨酸水溶液组以1.5g/kg剂量灌服L-精氨酸水溶液,L-精氨酸牛奶组则每日灌服等体积的L-精氨酸牛奶,模型组灌服等体积生理盐水,均为每日一次。连续给灌服12天。末次给药2小时后,尾部采血测RBC和Hb值。结果见表3。
表3 L-精氨酸牛奶对血虚模型小鼠红细胞和血红蛋白的影响(x±SD)
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;
与水溶液组比较,ΔP<0.05
实验结果表明:服用L-精氨酸牛奶12天后的血虚小鼠RBC和Hb值显著高于模型组(P<0.01)和L-精氨酸水溶液组,说明L-精氨酸配方组合牛奶具有较好的补血作用,
实验例4 高温应激下补充L-精氨酸牛奶对小鼠免疫功能的影响
(一)实验动物与分组
选用6~8周龄雄性BALB/C小鼠105只,动物购回后在室温(25±1℃,相对湿度50%)下适应三天,自由摄食和饮自来水。将105只小鼠随机分为3组,A组为对照组:给蒸溜水;B组:按L-精氨酸1.5g/kg,用L-精氨酸水溶液灌胃;C组:按精氨酸1.5g/kg,用20%L-精氨酸牛奶灌胃;
(二)高温应激方法
将每组35只小鼠再分为7个小组,每小组5只(即常温对照、热应激处理后0、2、4、8、12、24h)。常温对照不入高温仓,其余6个小组都入高温仓接受热应激。对照组及各处理组灌胃14天后放入动物高温实验仓进行热应激处理,参数为干球温度为(41±0.5)℃,相对湿度为65%,热应激时间为120min。
(三)实验结果
1、L-精氨酸牛奶对热应激小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响
胸腺或脾脏指数=胸腺或脾脏质量(g)/小鼠热应激后体重(g)
表4 各组小鼠胸腺指数的变化(x±SD)
表5 实验小鼠脾脏指数的变化(x±SD)
实验结果表明:未补充L-精氨酸的热应激组小鼠的胸腺指数和脾脏指数都显著低于相应的常温对照组,而补充L-精氨酸牛奶组小鼠两指数在热应激条件下都显著高于其水溶液组,提示与L-精氨酸的水溶液相比,L-精氨酸牛奶具有更好的保护脾脏和胸腺等免疫器官在高温应激时的急性萎缩的作用。
2、L-精氨酸牛奶对热应激小鼠淋巴细胞增殖活性的影响
小鼠淋巴细胞增殖活性以ConA刺激指数来表示,ConA刺激指数=实验孔吸光度(OD值)/对照孔吸光度(OD值),实验结果见表6。
表6 实验小鼠淋巴细胞增殖活性(ConA刺激指数)的变化(x±SD)
实验结果表明:与L-精氨酸水溶液组相比,L-精氨酸组配方牛奶组在更强的刺激高温应激条件下实验小鼠淋巴细胞有增值活性。
3、L-精氨酸牛奶对热应激小鼠胸腺细胞IL-2含量的影响
L-精氨酸牛奶对热应激小鼠活化的胸腺细胞IL-2的含量影响的实验结果见表7。
表7 各实验组小鼠IL-2质量浓度的变化(x±SD)(ng/l)
实验结果表明:与L-精氨酸水溶液相比,L-精氨酸牛奶具有更好的提高实验小鼠胸腺细胞IL-2含量的作用。
4、L-精氨酸牛奶对热应激小鼠活化的胸腺细胞IL-2R表达的影响
对活化的胸腺细胞IL-2R表达,结果以IL-2R阳性细胞数占所测细胞数(5000个细胞)的百分比表示。结果见表8。
表8 各实验组小鼠活化胸腺细胞IL-2R表达率的变化(x±SD)%
实验结果表明:与L-精氨酸水溶液相比,L-精氨酸牛奶具有更好的促进高温应激条件下实验小鼠胸腺细胞IL-2R表达的作用。
5、L-精氨酸牛奶对胸腺细胞胞浆游离钙离子浓度的影响
活化的胸腺细胞浆游离钙离子[Ca2+]以荧光强度表示,测定结果见表9。
表9 各组细胞浆[Ca2+]荧光强度的变化(x±SD)
实验结果表明:与L-精氨酸水溶液组相比,L-精氨酸牛奶组具有更好的活化胸腺细胞[Ca2+]的作用。因此,可以认为在高温应激条件下,补充L-精氨酸牛奶能够保护胸腺细胞结构的完整性。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
具体实施方式
实施例1:取牛奶100ml,在牛奶中添加1g L-精氨酸,经高压均质工艺加工,制成1%(g/ml)浓度的L-精氨酸配方组合牛奶。
实施例2:取牛奶100ml,在牛奶中添加5g L-精氨酸,经高压均质工艺加工,制成5%(g/ml)浓度的L-精氨酸配方组合牛奶。
实施例3:取牛奶100ml,在牛奶中添加7.5g L-精氨酸,经高压均质工艺加工,制成7.5%(g/ml)浓度的L-精氨酸配方组合牛奶。
实施例4:取牛奶100ml,在牛奶中添加20g L-精氨酸,经高压均质工艺加工,制成20%(g/ml)浓度的L-精氨酸配方组合牛奶。
实施例5:取牛奶100ml,在牛奶中添加20g L-精氨酸,经高压均质工艺加工,制成10%(g/ml)浓度的L-精氨酸配方组合牛奶。
Claims (10)
1、一种调节机体免疫力的牛奶,其特征在于该牛奶的原料组成为:
牛奶 100ml L-精氨酸 7.5-20g。
2、如权利要求1所述的牛奶,其特征在于该牛奶的原料组成为:
牛奶 100ml L-精氨酸 7.5g、10g或20g。
3、如权利要求1或2所述的牛奶的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:取普通牛奶,按7.5-20%(g/ml)的浓度在牛奶中添加L-精氨酸,并经高压均质工艺加工制成。
4、如权利要求3所述的牛奶的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:取普通牛奶,按7.5%(g/ml)、10%(g/ml)或20%(g/ml)的浓度在牛奶中添加L-精氨酸,并经高压均质工艺加工制成。
5、如权利要求1或2所述的牛奶在制备具有调节机体免疫功能的药品、保健品或食品中的应用。
6、如权利要求1或2所述的牛奶在制备具有保护脾脏和胸腺免疫器官在高温应激时的急性萎缩的作用的药品、保健品或食品中的应用。
7、如权利要求1或2所述的牛奶在制备具有提高胸腺细胞IL-2含量作用的药品、保健品或食品中的应用。
8、如权利要求1或2所述的牛奶在制备促进胸腺细胞IL-2R表达作用或活化胸腺细胞[Ca2+]作用的药品、保健品或食品中的应用。
9、如权利要求1或2所述的牛奶在制备保护胸腺细胞结构完整性的药品、保健品或食品中的应用。
10、如权利要求1或2所述的牛奶在制备具有补血作用的药品、保健品或食品中的应用。
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牛奶中的氨基酸含量及其营养价值. 陆东林,张丹凤,刘新丽,荆文清.中国乳业,第2期. 2002 |
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