KR20210002461A

KR20210002461A - 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제

Info

Publication number: KR20210002461A
Application number: KR1020207026681A
Authority: KR
Inventors: 스스무 가와구치; 미호 가토
Original assignee: 누트리 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2018-04-19
Filing date: 2019-04-17
Publication date: 2021-01-08
Also published as: US20200405784A1; JP7296369B2; US12053496B2; JPWO2019203260A1; EP3782631A1; SG11202008791UA; WO2019203260A1; EP3782631A4; AU2019257028A1; KR102681178B1; CN111867607A; CA3096433A1

Abstract

새로운 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제를 제공한다. 엔테로코커스 속에 속하는 균이 녹농균 감염을 예방 및/또는 치료할 수 있음을 발견하였다. 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제를 제공한다. 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 의약품을 제공한다. 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 식품을 제공한다.

Description

녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제

본 발명은 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제에 관한 것이다.

녹농균(Pseudomonas aeruginosa)은 그램 음성 간균이며, 수회(水回) 등 생활 환경 중에 널리 상재하지만, 정상인에게는 통상 병원성을 나타내지 않는 약독 세균의 하나이다.

페니실린이나 세파졸린 등의 제1 세대 세펨 약에 자연 내성을 나타내고, 테트라사이클린계나 매크롤라이드계 항생 물질 등의 항균약에도 내성을 나타내는 경향이 강하며, 예로부터, 감염 방어 능력이 저하된 환자에 있어서, 수술 후 감염증 등의 기회 감염증의 기인균으로서 문제가 되고 있다.

또, 다제 내성 녹농균 감염증도 확인되어 있고, 항미생물 약제(항생 물질)의 부적절한 사용에 의해 다제 내성균이 발생하게 되며, 특히 면역력이 저하된 환자가 많은 병원이나 노인 시설 등에서는 원내(기회) 감염증의 발생이 사회적인 문제가 되고 있다.

본 발명은 새로운 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자들은, 열심히 노력한 결과, 엔테로코커스 속(屬)에 속하는 유산균이 녹농균 감염을 예방 및/또는 치료할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성시키기에 이르렀다.

본 발명의 요지는 이하와 같다.

(1) 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(2) 엔테로코커스 속에 속하는 균이 유산구균인 (1) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(3) 유산구균이 엔테로코커스 패칼리스인 (2) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(4) 엔테로코커스 패칼리스가 EF-2001 주(株)인 (3) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(5) 엔테로코커스 속에 속하는 균이 사균인 (1)∼(4) 중 어느 하나에 기재된 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(6) 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (1)∼(5)의 어느 하나에 기재된 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(7) 1회 당 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (6) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(8) 1일에 1회 이상, 1회 당 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (7) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(9) 1일에 1회 이상 5회 이하의 횟수로 1회 당 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (8) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(10) 1회 당 10∼500억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (6) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(11) 1일에 1회 이상, 1회 당 10∼500억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (10) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(12) 1일에 1회 이상 5회 이하의 횟수로 1회 당 10∼500억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (11) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(13) 1회 당 120억 CFU/㎏ 체중 이상의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (6) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(14) 1일에 1회 이상, 1회 당 120억 CFU/㎏ 체중 이상의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (13) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(15) 1일에 1회 이상 5회 이하의 횟수로 1회 당 120억 CFU/㎏ 체중 이상의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 (14) 기재의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(16) 엔테로코커스 속에 속하는 균이 7일 이상 경구 투여되도록 이용되는 (6)∼(15) 중 어느 하나에 기재된 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(17) 녹농균 감염증의 예방에 이용되는 (1)∼(16) 중 어느 하나에 기재된 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(18) 녹농균 감염증의 치료에 이용되는 (1)∼(16) 중 어느 하나에 기재된 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.

(19) 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 의약품.

(20) 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 식품.

(21) 엔테로코커스 속에 속하는 균을 의약적으로 유효한 양으로 피험자에게 투여하는 것을 포함하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료 방법.

(22) 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료를 위한 엔테로코커스 속에 속하는 균의 사용.

(23) 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 것인 엔테로코커스 속에 속하는 균.

본 발명에 의해 녹농균 감염을 예방 및/또는 치료할 수 있다.

본 명세서는 본원의 우선권의 기초인 일본 특허 출원 특원2018-80756의 명세서 및/또는 도면에 기재된 내용을 포함한다.

도 1은 실시예 1의 시험 결과(생존율(카플란-마이어 플롯(Kaplan-Meier plot)의 결과))을 나타낸다.
[도 2]실시예 1의 시험 결과(직장 온도)를 나타낸다.
[도 3]실시예 1의 시험 결과(체중)를 나타낸다.
[도 4]실시예 1의 시험 결과(섭이량)를 나타낸다.
[도 5]실시예 1의 시험 결과(섭수량)를 나타낸다.
[도 6]실시예 1의 시험 일정을 나타낸다.

이하, 본 발명의 실시형태에 대해 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제를 제공한다.

엔테로코커스 속에 속하는 균은 유산구균이면 되고(예를 들면, 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 아비움(Enterococcus avium), 엔테로코커스 갈리나룸(Enterococcus gallinarum), 엔테로코커스 카셀리플라버스(Enterococcus casseliflavus) 등), 생체 응답 조절 물질(Biological Response Modifier, BRM) 활성(약학잡지 112: 919-925 1992; 약학잡지 113: 396-399 1992; 동물 임상의학 3: 11-20 1994)을 갖는 것이 바람직하다. 엔테로코커스 패칼리스는 BRM 활성을 갖는 유산구균으로 알려져 있다. 엔테로코커스 패칼리스 EF-2001 주는 일본 베름 주식회사(일본 도쿄도 치요다구 나가다쵸 2-14-3)로부터 입수할 수 있다.

엔테로코커스 패칼리스-2001 주는 정상인 사람의 분변으로부터 채취할 수 있고, 하기의 성질을 갖고 있다.

그램 양성 구균이다. 콜로니의 형태(트립토소야 한천 배지, 24시간 배양): 직경 1.0 ㎜, 스무드, 정원형(正圓形), 백색 콜로니 균 형태: 구 내지 타원형(1.0×1.5 ㎛) 액체 배지에서 잘 연쇄(連鎖)한다. 아포(芽胞) 비형성. 통성 혐기성. 글루코오스를 발효하여 젖산 생산(최종 pH 4.3). 가스 비생산. 카탈라아제 음성. 10∼45℃에서 증식(최적은 37℃). pH 9.6, 6.5% NaCl, 40% 담즙에 증식. 0.04% 아(亞)텔루르산칼륨 양성. 0.01% 테트라졸륨 양성. 0.1% 메틸렌 블루 밀크 양성. 아르기닌을 가수분해. 아미그달린, 셀로바이오스, 프럭토오스, 갈락토오스, 글루코오스, 글리세롤, 락토오스, 말토오스, 만노오스, 만니톨, 리보오스, 살리신, 수크로오스, 멜리시토오스, 소르비톨을 발효하여 산 생산. 60℃, 30분 내성. 카제인, 젤라틴을 소화. 티로신을 탈탄산하여 티라민으로. 랜스필드(Lancefield) 항원 그룹 D. GC% 35.0±1.0%.

엔테로코커스 속에 속하는 균은 생균이어도, 사균이어도 되고, 균체에는 파괴 처리(호모지나이제이션 처리, 효소 처리, 초음파 처리 등), 가열, 건조(동결 건조, 분무 건조 등) 등의 처리가 실시되어도 된다. 가열 처리에 의해 생균이 사균으로 될 수 있다. 생균에는 젖산 발효에 의한 작용을 기대할 수 있고, 사균에는 장관 면역 부활 작용을 기대할 수 있다. 균체의 입경은 0.05 ㎛∼50 ㎛이어도 되며, 바람직하게는 0.08∼20 ㎛이고, 보다 바람직하게는 0.1∼10 ㎛이다. 균체는 희석제와 혼합한 후, 호료(糊料)를 첨가하여 과립 상(狀)으로 해도 된다. 희석제나 호료는 식품이나 의약품에 첨가하는 것으로 허가되어 있는 재료로부터 선택하면 된다.

본 발명의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제는 녹농균 감염 방어에 이용할 수 있다. 본 명세서에 있어서, 「감염 방어」란 감염의 예방뿐만 아니라 치료도 포함하는 개념이다. 본 발명의 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제는 의약품으로서, 혹은 식품첨가물로서 사용할 수 있다. 녹농균은 다제 내성 녹농균이어도 된다.

본 발명은 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 의약품을 제공한다.

의약으로서 이용하는 경우에는 엔테로코커스 속에 속하는 균을 단독으로, 혹은 부형제 또는 담체와 혼합하여 정제, 캡슐제, 산제(散劑), 과립제, 액제, 시럽, 에어로졸, 좌제, 주사제 등으로 제제화하면 된다. 부형제 또는 담체는 본 기술분야에서 상투적으로 사용되고, 의약적으로 허용되는 것이면 되고, 그 종류 및 조성은 적절히 선택된다. 예를 들면, 액상 담체로서는 물, 식물유 등이 이용된다. 고체 담체로서는 유당, 백당, 포도당 등의 당류, 감자 전분, 옥수수 전분 등의 전분, 결정 셀룰로오스 등의 셀룰로오스 유도체 등이 사용된다. 스테아르산 마그네슘 등의 활택제, 젤라틴, 히드록시 프로필 셀룰로오스 등의 결합제, 카르복시메틸 셀룰로오스 등의 붕괴제 등을 첨가해도 된다. 그 외, 항산화제, 착색제, 교미제, 보존제 등을 첨가해도 된다. 또, 동결 건조 제제(製劑)로서 이용하거나 할 수도 있다.

엔테로코커스 속에 속하는 균은 경구, 경비, 직장, 경피, 피하, 정맥내, 근육내 등의 여러 가지 경로에 의해 투여할 수 있다.

엔테로코커스 속에 속하는 균의 제제 중에서의 함량은 제제의 종류에 따라 상이하지만, 통상 0.001∼100 중량%, 바람직하게는 0.01∼100 중량%이다.

엔테로코커스 속에 속하는 균의 투여량은 의약적으로 유효한 양, 즉, 녹농균 감염의 예방 및/또는 치료 효과를 확인할 수 있는 양이면 되고, 제형, 투여 경로, 환자의 연령, 체중, 질환의 중독도(重篤度) 등에 따라 상이하지만, 예를 들면, 1회 당 투여량은 성인의 경우, 엔테로코커스 속에 속하는 균의 양으로 환산하여 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중 정도, 바람직하게는 10억∼500억 CFU/㎏ 체중 정도, 보다 바람직하게는 60억∼120억 CFU/㎏ 체중 정도로 하여, 1일에 1회부터 수 회(예를 들면, 2회, 3회, 4회, 5회 정도) 투여하면 된다. 투여 기간은, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 7일 이상, 10일 이상, 17일 이상이다.

엔테로코커스 속에 속하는 균은 식품에 첨가해도 된다. 본 발명은 엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 식품을 제공한다.

본 발명의 식품에는 단백질, 지질, 탄수화물, 나트륨 등의 일반 성분, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 인 등의 미네랄류, 철, 아연, 구리, 셀레늄, 크롬 등의 미량 원소, 비타민 A, β-카로틴, 비타민 B₁, 비타민 B₂, 비타민 B₆, 비타민 B₁₂, 비타민 C, 나이아신, 엽산, 비타민 D₃, 비타민 E, 바이오틴, 판토텐산 등의 비타민류, 코엔자임 Q10, α-리포산, 갈락토오리고당, 식물 섬유, 부형제(물, 카르복시메틸 셀룰로오스, 유당 등), 감미료, 교미제(말산, 시트르산, 아미노산 등), 향료 등을 첨가해도 된다. 본 발명의 식품을 액제로 하는 경우, 식품 성분을 분산 또는 용해하는 액체로서 물, 생리 식염수, 과즙 등을 이용할 수 있고, 경구 투여에서의 미각 향상의 목적으로는 과즙을 이용하면 된다.

본 발명의 식품은 분말, 과립, 정제, 액제 등의 어떠한 형상으로 해도 되지만, 환자나 고령자가 용이하게 섭취 가능하게 하기 위해서는 젤리 등의 겔상 제품으로 하는 것이 바람직하다.

겔화제로는 덱스트린, 한천, 크산탄 검, 로커스트 빈 검, 카라기난, 펙틴 등의 증점 다당류, 젤란 검, 사일리움 씨드 검, 타라 검, 구아 검, 글루코만난 알긴산, 타마린드 씨드 검, 셀룰로오스 등을 이용할 수 있고, 1종 또는 2종 이상의 증점 다당류를 이용하는 것이 바람직하다. 겔상 제품의 겔 강도는 5℃에서의 겔 강도가 7,000±2,000 N/㎡인 것이 바람직하고, 또, 겔 강도가 7,000±2,000 N/㎡일 때, 부착 에너지가 60±40 J/㎥이고, 응집성이 0.7±0.1 J/㎥인 것이 보다 바람직하다. 이와 같이 부착성이 낮고, 응집성이 높은 겔은 뛰어난 연하(嚥下) 적성을 갖는다.

겔 강도는 이하와 같이 하여 측정할 수 있다. 겔 강도 측정 기기로는 야마덴 텍스투로미터 및 φ16 ㎜의 플런저를 이용하여 측정 온도 25℃, 압축 속도(플런저를 압입하는 속도) 10 ㎜/s, 측정 왜율(歪率)(시료의 두께에 대한 압입률) 40.00%, 플런저를 압입하는 거리 10.00 ㎜, 플런저를 압입하는 횟수 2회로 측정을 행한다.

부착 에너지는 상기 겔 강도 측정에 있어서, 1회 압입한 후, 플런저를 인발할 때의 부(負)의 에너지로서 측정한다.

응집성은 상기 겔 강도 측정에 있어서, 2회 압입할 때에 1회째와 2회째의 에너지의 비율로서 측정한다.

엔테로코커스 속에 속하는 균의 섭취량은 녹농균 감염의 예방 및/또는 치료 효과를 확인할 수 있는 양이면 되고, 제형, 투여 경로, 환자의 연령, 체중, 질환의 중독도 등에 따라 상이하지만, 예를 들면, 1회 당의 섭취량은 성인의 경우, 엔테로코커스 속에 속하는 균의 양으로 환산하여 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중 정도, 바람직하게는 10억∼500억 CFU/㎏ 체중 정도, 보다 바람직하게는 60억∼120억 CFU/㎏ 체중 정도로 하고, 1일에 1회부터 수 회(예를 들면, 2회, 3회, 4회, 5회 정도) 섭취하면 된다.

실시예

이하, 실시예에 기초하여 본 발명을 상세히 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

다제 내성 녹농균의 전신 감염 모델 마우스를 이용하고, 유산균 함유 음료를 경구 투여하여, 녹농균의 감염 방어에 미치는 영향을 생존율 등의 지표로 평가하였다.

(시험 일정)

도 6에 나타낸다.

(재료 및 방법)

피험 물질 및 매체

· 피험 물질

명칭: 유산균 분말 EF-2001(일본 베름 주식회사)(가열 살균한 E. faecalis, 지름은 500 nm = 0.5 ㎛)

성상: 황갈색의 분말

보관 조건: 실온, 차광, 방습

관리 온도: 18.0∼28.0℃

· 매체

명칭: 주사용수

보관 조건: 실온

관리 온도: 18.0∼28.0℃

제조원: 주식회사 오오츠카 제약 공장

검체

· 피험 물질의 조제 방법

유산균 분말 EF-2001을 20 ㎎ 칭량(전자 천칭: XP205DR, 메틀러 톨레도 주식회사)하고, 주사용수에 현탁 후, 전량을 125 ㎖로 하여, 0.16 ㎎/㎖로 하였다. 유산균 분말은 침전하기 때문에, 잘 교반해 현탁하였다. 사용 시 조제로 하였다.

병원 미생물

· 사용 균주

슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa) P-45(이하, 다제 내성 녹농균)(국립 감염증 연구소로부터 분여)

· 보존 조건

초저온 냉각기(관리 온도: -90∼-70℃, MDF-394AT, 산요덴키 주식회사)에서 사용시까지 동결 보존하였다.

· 시약

(1) 하트 인퓨전 배지(에이켄 화학 주식회사)

(2) NAC 한천 평판 배지(에이켄 화학 주식회사)

(3) 생리 식염액(주식회사 오오츠카 제약 공장)

· 전(前) 배양

다제 내성 녹농균의 보존 균주를 해동하고, 하트 인퓨전 액체 배지에 접종하고, 37℃ 설정의 진탕 배양기(BR-23 FP, 다이테크 주식회사, 진탕 수: 200회/분)에서 약 24시간 진탕 배양하였다. 배양 후, 배양액을 회수하고, 원심분리(1,000 rpm, 5분간)하고, 상청을 폐기한 후, 침전물을 생리 식염액으로 10 ㎖로 하여 접종균 원액으로 하였다. 접종균 원액은 균액 접종일까지 냉장고(관리 온도: 2∼8℃, UKS-3610 DHC, 니혼 프리저 주식회사)에 보관하였다.

· 접종균 원액 중의 생균수 확인

접종균 원액을 생리 식염액으로 10², 10⁴, 10⁶배 희석하고, NAC 한천 평판 배지에 10⁴, 10⁶배 희석액을 도말한 후, 37℃ 설정의 항온기(ILE800, 야마토 과학 주식회사)에서 1일 배양하였다. 배양 후의 콜로니 수를 핸디 콜로니 카운터(CC-1, 아즈원 주식회사)로 계측하여 접종균 원액 1 ㎖ 중에 포함되는 생균수를 산출하였다.

· 접종 균액의 조제

균액 접종일에 접종균 원액을 생리 식염액으로 희석하여 1×10⁷ CFU/㎖의 농도로 조제하였다. 조제한 균액을 접종 균액으로 하였다. 조제 후의 접종 균액 중의 생균수를 (접종균 원액 중의 생균수 확인)에서 나타낸 방법에 준해 측정하였다.

시험계

· 동물 종, 계통

동물 종: 마우스(SPF)

계통: BALB/c 계(BALB/c Cr Slc)

· 동물의 성별, 주령, 입수 마리 수

암컷, 4주령, 44마리

· 입수 후 1일의 체중 범위

12.9∼18.1 g

· 공급원

일본 SLC 주식회사

· 예비 사육

입수한 동물은 5일간의 예비 사육 기간을 마련하였다. 이 사이에 일반 상태의 관찰을 1일 1회 행하고, 전자 천칭(MS3002S/02, PB3002-S/FACT, 메틀러 톨레도 주식회사)으로 체중을 2회(동물 입수의 다음날 및 예비 사육 기간 종료일) 측정하고, 체중 추이 및 일반 상태에 이상이 확인되지 않은 동물을 군 분리에 이용하였다.

· 군 분리 방법

군 분리는 컴퓨터 프로그램(IBUKI, 주식회사 일본 바이오 리서치 센터)을 이용하여 체중을 층별로 나눈 후, 무작위 추출법에 의해 각 군의 평균 체중 및 분산이 거의 동일하게 되도록 군 분리일에 행하였다.

· 개체 식별법

동물은 입수일에 유성 잉크에 의한 꼬리에 대한 기입법 및 유성 잉크에 의한 사지에 대한 색소 도포법을 병용하여 식별을 하였다. 군 분리 후에는 유성 잉크를 이용해 꼬리에 대한 동물 번호의 기입에 의해 식별하였다. 각 케이지에는 예비 사육 기간 중에는 시험 번호, 입수 연월일, 예비 사육 동물 번호를 기입한 라벨을, 군 분리 후에는 시험 번호, 군 명칭 및 동물 번호를 기입하고, 군마다 색분(色分)한 라벨을 부착하였다.

· 환경 조건 및 사육 관리

관리 온도: 18∼28℃(실측값: 20∼24℃), 관리 습도: 30∼80%(실측값: 39∼67%), 명암 각 12 시간(조명: 오전 6시∼오후 6시)으로 유지된 사육실(키소산센 분실 사육실 3호실)에서 동물을 사육하였다. 동물은 예비 사육 기간 중 및 군 분리 후 모두 스테인리스제 망 케이지(W: 100 × D: 160 × H: 80 ㎜)를 이용해 개별 사육으로 하였다.

케이지 및 급이기(給餌器)의 교환은 1주간에 1회 이상, 급수병 및 받침 접시의 교환은 1주간에 2회 이상 행하였다. 동물 사육실의 청소는 소독액을 담근 자루걸레에 의해 마루를 닦아 소독을 매일 실시하였다.

· 사료

제조 후 5개월 이내의 고형 사료(CRF-1, 오리엔탈 효모 공업 주식회사)를 급이기에 넣고 자유롭게 섭취시켰다.

사료의 사용 로트에 대하여, 사료 중의 오염 물질 농도, 세균 수 및 영양 성분 함량이 시험 시설의 허용 기준에 적합해 있음을 확인하였다.

· 음료수

상수도 물을 음료수로 하여서 급수병을 이용해 자유롭게 섭취시켰다. 음료수 중의 오염 물질 농도 및 세균 수를 거의 6개월마다 분석하여 시험 시설의 허용 기준에 적합해 있음을 확인하였다.

투여

· 투여 경로: 경구

· 투여 방법

마우스용 존데(유한회사 후치가미 기계)를 장착한 1 ㎖용 1회용 주사기(테루모 주식회사)를 이용하여 강제적으로 경구 투여하였다. 또한, 투여 시에는 검체를 교반하여 필요량을 채취하였다.

· 투여액 양, 투여 시각, 투여 횟수 및 투여 기간

투여액 양: 투여일의 체중값에 기초하여 10 ㎖/㎏으로 산출하였다.

투여 시각: 오전 11시에 제1군으로부터 순차적으로 행하였다.

투여 횟수: 제1, 제2 및 제3군은 1일 1회로 하였다. 제4군에서는 균액 접종전 7일간은 1일 1회, 균액 접종일로부터 10일간은 1일 3회로 하여 8시간 간격으로 하였다.

투여 기간과 내용: 투여 개시일을 1일로 기산하였다. 제1군에서는 균액 접종전 7일간, 균액 접종일로부터 10일간 매체를 투여하였다. 제2군에서는 균액 접종전 7일간, 균액 접종일로부터 10일간, 제3군 및 제4군에서는 균액 접종일부터 10일간 피험 물질을 투여하였다. 단, 제3군 및 제4군에서는 균액 접종전 7일간은 매체를 투여하였다.

· 군 구성

동물 수 및 군 구성을 아래 표에 나타내었다.

*: 매체인 주사용수를 투여하였다.

**: 균 접종 전 7일간은 주사용수를 1일 1회 투여하였다.

유산균 분말 EF-2001을 80 ㎎/125 ㎖의 양으로 1일 1회 마우스에 투여하는 것은 120억 CFU/㎏/일의 투여량에 상당한다.

시클로포스파미드 투여 방법 및 균액 접종 방법

군 분리 4일 후(균액 접종 3일 전) 피험 물질 및 매체의 투여 후에, 시클로포스파미드(주사용 엔독산(등록상표) 100 ㎎, 시오노기 제약 주식회사) 200 ㎎/㎏을 복강내 투여(액량: 10 ㎖/㎏)하였다. 군 분리 7일 후(시클로포스파미드 투여 3일 후)에 접종 균액 0.5 ㎖(5×10⁶ CFU)를 복강 내에 접종하였다. 또한, 접종마다 접종 균액을 교반해 이용하였다. 균액은 피험 물질 및 매체 투여의 2시간 전에 접종하였다.

파종 균수 설정 이유: 참고문헌¹⁾을 참고로 설정하였다.

관찰 및 검사

· 일반 상태의 관찰

군 분리일부터 균액 접종 전일까지는 1일 1회 피험 물질 및 매체 투여 전에 일반 상태를 관찰하였다. 균액 접종일부터 접종 3일 후까지는 오전 오후 각 2회(오전 2회는 피험 물질 및 매체 투여 전)의 합계 4회, 접종 4일 후 이후에는 오전 오후(오전은 피험 물질 및 매체 투여 전)의 합계 2회 관찰하고, 관찰 종료일은 오전 1회 관찰하였다. 또한, 균액 접종일은 균액의 접종 전에 오전 1회째를 행하였다.

· 직장 온도의 측정

군 분리일 이후의 피험 물질 및 매체 투여 전에 직장 온도를 측정(Physitemp, Model BAT-12, PHYSITEMP INSTRUMENTS INC.)하였다. 측정할 때에는 센서에 바셀린을 바르고, 마우스의 항문에 삽입해 측정하였다.

· 체중 측정

군 분리일 이후에는 매일, 일반 상태 확인 후에 체중을 측정(전자 천칭: MS3002S/02, PB3002-S/FACT, 메틀러 톨레도 주식회사)하였다.

· 섭이량 및 섭수량의 측정

군 분리일 이후, 매일 급이기 및 급수병마다 급이량 및 급수량을 측정(전자 천칭: MS3002S/02, PB3002-S/FACT, 메틀러 톨레도 주식회사)하고, 다음날에 잔량을 측정하였다. 급이량 및 급수량과 각각의 잔량의 차로부터, 1일 당 섭이량 및 섭수량을 산출하였다.

통계학적 방법

각 군에서 생존율을 산출하였다. 직장 온도, 체중, 섭이량 및 섭수량은 각 군의 평균값 및 표준오차를 산출하였다.

유의차 검정은 생존율에서는 관찰일마다 대조군과 각 군간에 피셔(Fisher) 정확 확률 검정을 이용하였다. 관찰 기간 전체에 대해서는 카플란-마이어 플롯을 실시해 일반화 윌콕슨(Wilcoxon) 검정을 행하고, 군간 비교에 대해서는 다중성의 조정을 하기 위한 홀름(Holm) 보정을 하였다.

직장 온도, 체중, 섭이량 및 섭수량의 유의차 검정은 다중 비교 검정을 이용하였다. 즉, 바틀렛(Bartlett) 법에 의한 등분산성의 검정을 행하고, 등분산의 경우에는 터키(Tukey) 검정을 이용해 행하였다. 한편, 등분산으로 확인되지 않은 경우에는 스틸-드와스(Steel-Dwass) 검정을 이용해 행하였다.

위험률은 5%로 하고, 각각 5% 미만 및 1% 미만으로 나누어 표시하였다.

또한, 통계 해석은 시판되는 통계 프로그램(SAS 시스템: SAS 인스티튜트 재팬)을 이용하였다.

단, 대조군에 대해서는 접종 1일 후 이후의 생존예는 1예가 되어 군의 평균값을 나타내고 있다고는 생각하기 어렵기 때문에, 접종 1일 후 이후의 유의차의 「있음」의 결과는 평가 및 고찰로부터 제외하였다.

(시험 성적)

일반 상태

관찰 결과를 표 1에 나타내었다. 생존율에 대해서는 카플란-마이어 플롯을 도 1에 나타내었다.

일반 상태를 관찰하면, 전체 군에 있어서 입모(立毛) 및 자발 운동의 저하가 보였고, 전기간 투여군, 균 접종 후 투여군 및 균 접종 후 3회 투여군에서 저체온이 보였다. 또, 전체 군에 있어서 접종 1일 후부터 2일 후에 걸쳐서 사망이 보였다.

대조군에서는 균액 접종일에 자발 운동의 저하 및 입모가 9/10 례 보였고, 접종 1일 후에 9/10 례가 사망하였다. 접종 1일 후∼2일 후에까지 입모가 1/1 례로 보였지만, 접종 3일 후 이후에는 이상은 확인되지 않았다. 생존율은 10%였다.

전기간 투여군에서는 접종일에 입모 및 자발 운동의 저하가 1/10 례 보였다. 접종 1일 후의 오전 1회째의 관찰에서는 입모 및 저체온이 3/10 례, 자발 운동의 저하가 9/10 예가 보였고, 오후의 2번째의 관찰까지 3/10 례가 사망하였다. 접종 2일 후에는 2/7 례가 사망하고, 생존예에 입모 혹은 자발 운동의 저하가 보였지만, 접종 3일 후 이후에는 이상은 확인되지 않았다. 생존율은 50%이며, 대조군과 비교하여 접종 1일 후에 유의한 높은 값(피셔 정확 확률 검정)이 보였고, 관찰 기간 전체(일반화 윌콕슨)에 유의한 높은 값이 확인되었다.

균 접종 후 1회 투여군에서는 접종일에 입모 및 자발 운동의 저하가 1/10 례 보였다. 접종 1일 후의 오전 1회째의 관찰에서는 입모 및 저체온이 3/10 례, 자발 운동의 저하가 9/10 례가 보였고, 오후의 2번째의 관찰까지 3/10 례가 사망하였다. 접종 2일 후에는 4/7 례가 사망하였고, 생존예에 입모 혹은 자발 운동의 저하가 보였다. 접종 3일 후에 자발 운동의 저하가 보였지만, 접종 4일 후 이후에는 이상은 확인되지 않았다. 생존율은 30%이며, 대조군과 비교하여 접종 1일 후에 유의한 높은 값(피셔 정확 확률 검정)이 보였고, 관찰 기간 전체(일반화 윌콕슨)에 유의한 높은 값이 확인되었다.

균 접종 후 3회 투여군에서는 접종일에 이상은 보이지 않았지만, 접종 1일 후의 오전 1회째의 관찰에서는 입모가 6/10 례, 자발 운동의 저하가 10/10 례, 저체온이 4/10 례 보였고, 오후의 2번째의 관찰까지 4/10 례가 사망하였다. 접종 2일 후에는 2/6 례가 사망하였고, 생존예에 자발 운동의 저하 혹은 입모가 보였지만, 접종 3일 후 이후에는 이상은 확인되지 않았다. 생존율은 40%이며, 대조군과 비교하여 관찰 기간 전체(일반화 윌콕슨)에 유의한 높은 값이 확인되었다.

직장 온도측정

측정 결과를 도 2에 나타내었다.

대조군에서는 평균 직장 온도가 접종일로부터 접종 2일 후에 계속해서 하강하여, 2일간 0.5℃ 저하하였다(대조군의 접종 1일 후 이후의 생존예(n)는 1 례였다).

전기간 투여군에서는 평균 직장 온도가 접종일로부터 접종 1일 후에 3.1℃ 저하하였다. 단, 사망을 면한 5 례에서는 접종 1일 후의 체온은 상승하고 있고(접종일: 37.6℃, 접종 1일 후: 38.3℃), 이후에는 접종일의 체온에 근사해 추이하였다.

균 접종 후 1회 투여군에서는 평균 직장 온도가 접종일로부터 접종 1일 후에 3.2℃ 저하하였다. 단, 사망을 면한 3 례에서는 접종 1일 후의 체온은 상승하였지만(접종일: 37.4℃, 접종 1일 후: 38.8℃), 이후에는 접종일의 체온에 근사해 추이하였다. 접종 6일 후에 전기간 투여군과 비교하여 유의한 낮은 값이 확인되었다.

균 접종 후 3회 투여군에서는 평균 직장 온도가 접종일로부터 접종 1일 후에 9.3℃ 저하하였다. 단, 사망을 면한 4 례 중 3 례(F04457 제외함)에서는 접종 1일 후의 체온은 상승하였지만(접종일: 37.0℃, 접종 1일 후: 37.9℃), 이후에는 접종일의 체온에 근사해 추이하였다. 대조군과 비교하여 접종 7일 후, 9일 후 및 10일 후에 유의한 높은 값이 확인되었고, 또 접종 6일 후에 균 접종 후 1회 투여군과 비교하여 유의한 높은 값이 확인되었다.

체중

체중을 도 3에 나타내었다.

대조군에서는 평균 체중은 순조롭게 추이하였다(대조군의 접종 1일 후 이후의 생존예(n)는 1 례였다).

전기간 투여군에서는 평균 체중이 접종 1일 후에 1.9 g 감소하였지만, 사망을 면한 5 례에서는 감소는 작았다(접종일: 17.5 g, 접종 1일 후: 16.3 g). 그 다음은 순조롭게 추이하였다.

균 접종 후 1회 투여군에서는 평균 체중이 접종 1일 후에 2.0 g 감소하였지만, 사망을 면한 3 례에서는 감소는 작았다(접종일: 17.3 g, 접종 1일 후: 15.9 g). 그 다음은 순조롭게 추이하였다.

균 접종 후 3회 투여군에서는 평균 체중이 접종 1일 후에 2.2 g 감소하였지만, 사망을 면한 4 례에서는 감소는 작았다(접종일: 17.1 g, 접종 1일 후: 15.6 g). 그 다음은 순조롭게 추이하였다.

섭이량

측정 결과를 도 4에 나타내었다.

대조군에서는 평균 섭이량의 변동은 작았다(대조군의 접종 1일 후 이후의 생존예(n)는 1 례였다).

전기간 투여군에서는 평균 섭이량이 접종 1일 후에 2.2 g 감소하였지만, 그 다음은 회복하였다. 대조군과 비교하여 접종 2일 후에 유의한 낮은 값이 확인되었다.

균 접종 후 1회 투여군에서는 평균 섭이량이 접종 1일 후에 2.4 g 감소하였지만, 그 다음은 회복하였다. 대조군과 비교하여 접종 2일 후에 유의한 낮은 값이 확정되었다.

균 접종 후 3회 투여군에서는 평균 섭이량이 접종 1일 후에 2.3 g 감소하였지만, 그 다음은 회복하였다. 대조군과 비교하여 접종 2일 후에 유의한 낮은 값이 확인되었다.

섭수량

측정 결과를 도 5에 나타내었다.

대조군에서는 평균 섭수량의 변동은 작았다(대조군의 접종 1일 후 이후의 생존예(n)는 1 례였다).

전기간 투여군에서는 접종 1일 후에 평균 섭수량이 0.8 ㎖ 감소하였지만, 그 다음은 회복하였다.

균 접종 후 1회 투여군에서는 접종 1일 후에 평균 섭수량이 0.4 ㎖ 감소하였지만, 그 다음은 회복하였다. 대조군과 비교하여 접종 5일 전 및 3일 전에 유의한 낮은 값이 확인되었다. 또 전기간 투여군과 비교하여 접종 5일 후에 유의한 낮은 값이 확인되었고, 그 외에 접종 5일 전 및 3일 전에 유의한 낮은 값이 보였다.

균 접종 후 3회 투여군에서는 접종 1일 후에 평균 섭수량의 감소는 없었다. 대조군과 비교하여 접종 5일 전 및 3일 전에 유의한 낮은 값과 접종 2일 전 및 9일 후에 유의한 높은 값이 보였다. 또 전기간 투여군과 비교하여 접종 6일 후 및 9일 후에 유의한 높은 값이 확인되었고, 그 외에 접종 5일 전 및 3일 전에 유의한 낮은 값이 보였다. 균 접종 후 1회 투여군과 비교하여 접종 6일 후, 7일 후 및 9일 후에 유의한 높은 값이 확인되었다.

(고찰)

다제 내성 녹농균 전신 감염 모델 마우스를 이용해 유산균 함유 음료를 경구 투여하여 녹농균의 감염과 투여 개시 시기의 타이밍이나 투여량이 감염 방어에 미치는 영향을 생존율 등의 지표로 평가하고, 가장 효과적인 섭취 조건을 검토하였다.

대조군에서 녹농균 접종일에 일반 상태의 이상이 9/10 례 보인 것에 대하여, 유산균 분말을 투여한 3군 모두 접종일의 일반 상태의 이상은 0/10 례 혹은 1/10 례로 극히 소수예의 발현이었다. 다른 한편, 발현한 증상의 소실 시기는 대조군이 접종 3일 후, 유산균 분말군은 접종 3일 후로 차이는 없었다. 또, 유산균 분말군 사이에 차이는 없었다.

생존율은 대조군이 10%(9/10 례 사망)에 대하여, 전기간 투여군이 50%(5/10 례 사망), 균 접종 후 1회 투여군이 30%(7/10 례 사망), 균 접종 후 3회 투여군이 40%(6/10 례 사망)이고, 전체 유산균 분말군 모두 유의한 상승이 보였다.

체중, 직장 온도, 섭이량 및 섭수량은 접종 1일 후의 대조군의 생존예는 1예가 보였고, 이 기간 중(접종 1일 후 이후)의 체중, 직장 온도, 섭이량 및 섭수량에서의 대조군과의 비교에 대해서는 정확성이 낮기 때문에, 유산균 분말의 투여에 기인한 영향이라고는 판단하지 않았다. 체중 및 직장 온도의 저하에 대해서는 그 영향은 사망예에서 강하고 생존예에서는 약하였다. 체중, 직장 온도, 섭이량 및 섭수량의 변화에서는 유산균 분말군 사이에 차이는 없었다.

이와 같이, 감염 방어에 미치는 영향에 유산균 분말군 사이의 차이가 확인된 것은 생존율이었다. 생존율은 전기간 투여군, 균 접종 후 3회 투여군, 균 접종 후 1회 투여군의 순으로 높았다. 따라서, 가장 효과적인 섭취 조건은 감염 전부터 감염 후까지의 계속 투여였다. 다음에, 사망이 1예만의 차이지만, 1.6 ㎎/㎏/일(균 접종 후 1회 투여)의 1회 투여에 비해 4.8 ㎎/㎏/일(균 접종 후 3회 투여)가 효과적이라고 판단하였다.

이상으로부터, 유산균 함유 음료의 성분인 유산균 분말 EF-2001의 섭취는 다제 내성 녹농균 감염 전부터 개시하고, 감염 후에도 계속하는 것이 감염 방어에 가장 효과적인 것이 나타났다. 다른 한편, 감염 후의 섭취에서도 투여량에 따른 유효성이 확인되었지만, 감염 전부터의 개시에 비하면 효과는 한정적이었다.

(문헌)

1) 히라이 토시로, 외. 헌혈 유래 정주용(靜注用) 인간 면역 글로불린 제제(IVIG)에 대한 약효 약리 작용-II. 호중구 감소 마우스에서의 실험적 녹농균 감염증에 대한 IVIG의 감염 방어 효과. 약리와 임상. 16(2). 141∼149.2006.

본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허 출원을 그대로 참고로서 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

본 발명은 녹농균 감염의 예방 및/또는 치료에 이용할 수 있다.

Claims

엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 1에 있어서,
엔테로코커스 속에 속하는 균이 유산구균인 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 2에 있어서,
유산구균이 엔테로코커스 패칼리스인 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 3에 있어서,
엔테로코커스 패칼리스가 EF-2001 주(株)인 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
엔테로코커스 속에 속하는 균이 사균인 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 6에 있어서,
1회 당 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 7에 있어서,
1일에 1회 이상, 1회 당 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 8에 있어서,
1일에 1회 이상 5회 이하의 횟수로, 1회 당 1억∼1,000억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 6에 있어서,
1회 당 10∼500억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 10에 있어서,
1일에 1회 이상, 1회 당 10∼500억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 11에 있어서,
1일에 1회 이상 5회 이하의 횟수로, 1회 당 10∼500억 CFU/㎏ 체중의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 6에 있어서,
1회 당 120억 CFU/㎏ 체중 이상의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 13에 있어서,
1일에 1회 이상, 1회 당 120억 CFU/㎏ 체중 이상의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 14에 있어서,
1일에 1회 이상 5회 이하의 횟수로, 1회 당 120억 CFU/㎏ 체중 이상의 엔테로코커스 속에 속하는 균이 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 6 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
엔테로코커스 속에 속하는 균이 7일 이상 경구 투여되도록 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 있어서,
녹농균 감염증의 예방에 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 있어서,
녹농균 감염증의 치료에 이용되는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료제.
엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 의약품.
엔테로코커스 속에 속하는 균을 함유하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료용 식품.
엔테로코커스 속에 속하는 균을 의약적으로 유효한 양으로 피험자에게 투여하는 것을 포함하는 녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료 방법.
녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료를 위한 엔테로코커스 속에 속하는 균의 사용.
녹농균 감염증의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 것인 엔테로코커스 속에 속하는 균.