CN100493530C - 一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：a辛夷挥发油、磷脂、胆固醇、抗氧化剂、脂质体膜调节剂混合，溶于溶解溶剂中；b将步骤a得到的混合溶剂恒温减压蒸发；c将步骤b得到的类脂膜加入缓冲液中震荡溶解，调节PH值，加入辅料；d将步骤c得到的脂质体分散液，冰水浴超声处理，经过微孔滤膜过滤；e将步骤d得到的脂质体混悬液，在滤液中加入稳定剂制备成鼻腔给药制剂。本发明制备方法简单，可操作性强。用该方法制备的脂质体具有很高的稳定性和一定的柔性和变形性，比相同粒径的普通脂质体更容易通过黏膜吸收，因而具有更好的通透性。

Description

一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法

技术领域

本发明涉及一种制备滴鼻剂的方法，尤其是涉及一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法。

背景技术

辛夷挥发油含有多种成分，其中除了含有主要有效成分桉叶素外，还含有α-蒎烯、芳樟醇，香叶醇，α-松油醇、耗牛儿醇，金合欢醇、丁香油酚，香豆素类，木脂素类等成分。辛夷性味辛、温，具有发散风寒，通鼻窍的功效。辛夷花的提取精油—辛夷挥发油对过敏性鼻炎治疗的靶点较多，可以通过抗组胺，抗过敏，抗炎和对肥大细胞的保护作用等多个环节而对过敏性鼻炎发生影响，对过敏性鼻炎的治疗是几种机理的协同作用，从而可以获得较好的治疗效果。

脂质体是一个描述由化学和物理性质变化范围很宽的一些化合物的不同排列术语。它与胶束、微乳液、液晶、单分子膜、多分子膜、主客体系等统称为“分子有序组合体”，脂质体实际上是一种两亲性分子在水中能自发形成由双分子膜包裹的球状小完全封闭的囊的膜材料。它可以将水溶性或者脂溶性药物都可以制成包封率较高的脂质体，药物包封在这种纳米级微粒具有类细胞结构，从而达到减小毒性、缓释、持续疗效等效果，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

由于脂质体易制备，具有很好的生物适应性和低毒性，所以近年来被广泛地用作生物模型和药物载体。脂质体包裹药物为物理过程，不改变药物分子结构，当药物被包裹后可降低药物毒性，减小药物使用量，具有缓释和控释作用，而且各种分子大小的药物都可被包裹。可制备特殊性能的脂质体，如免疫脂质体、各种条件敏感性脂质体进行靶向给药，提高药物效果。

脂质体的主要原料磷脂是脂质体双分子膜的主要构成材料，其中卵磷脂是构成人体细胞膜的主要成份，是保持细胞正常形态和功能的生命基础物质之一。脂质体与人体的相容性好，在人体内被酶分解后产物完全无毒性。脂质体的直径一般在25-1000nm范围，根据脂质体形态结构不同，主要结构有两种：单层脂质体和多层脂质体。单层脂质体组成脂质体只有单层分子膜，多层脂质体有多层单分子膜组成。单层脂质体又分为小单层脂质体、中单层脂质体和大单层脂质体三种。

脂质体的在药物包封材料方面已经引起了科学界很大的兴趣。在脂质体鼻腔给药研究中，国内已有人开展这方面的研究，董泽民[(董泽民赖氨匹林脂质体鼻腔给药的研究[J]中国医药工业杂志1995，26(5)：199-202)]用冻融法制备了重建型赖胺匹林脂质体，平均粒径为1.29μm。家兔20mg/kg连续鼻腔给药20天，对鼻黏膜无损害。

中华人民共和国专利公开号为1200668的G格雷戈里埃蒂斯等发明了一种包含水不溶性或不溶解的颗粒性物质的形成直径0.1μm至50μm具有单层或多层结构的脂质体。

中华人民共和国专利公开号为1446534介绍了一种中药生物碱类脂质体及其制剂，它能够提高有效血药浓度。

中华人民共和国专利公开号为1080523介绍了一种鼻腔给药的缓释剂型，是用中空的海绵状载体吸附药物与辅料的混合液，经干燥处理后而制成。

目前，国内外还没有关于辛夷挥发油脂质体的专利报道。现在的市面上辛夷滴鼻剂都是采用常见的方式，直接作用于鼻粘膜，不同点在于成分和制备方法不同。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法。

本发明的目的是通过以下技术方法来实现的：本发明采用常见的逆向蒸发法和注射法及超声处理制备纳米脂质体，使脂质体及纳米技术和在中国传统治疗方式中药滴鼻剂方面的应用开创了广阔的应用前景。

脂质体的制备方法有很多，常见的逆向蒸发法、注射法、压缩法等，本发明的脂质体混悬液采用逆向蒸发和超声相结合的方法制备，在保证药物包封率的同时，可以方便的对脂质体的粒径进行控制。

鼻腔给药是藉由鼻腔血管将药物传入体内。鼻腔给药系统可避免肝脏的首过效应和药物在胃肠道的降解，起效快，鼻黏膜是一种类脂膜，血管丰富，黏膜上皮毛细血管及腺体周围毛细血管的内膜，具有窗格样空隙，使血管与组织之间容易进行物质交换，药物吸收后可迅速进入血液循环。

本发明一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法包括以下步骤：

a辛夷挥发油、磷脂、胆固醇、抗氧化剂、脂质体膜调节剂混合，溶于溶解溶剂中；

b将步骤a得到的混合溶剂恒温减压蒸发；

c将步骤b得到的类脂膜加入缓冲液中震荡溶解，调节PH值，加入辅料；

d将步骤c得到的脂质体分散液，冰水浴超声处理，经过微孔滤膜过滤；

e将步骤d得到的脂质体混悬液，在滤液中加入稳定剂制备成鼻腔给药制剂；

其中所述的溶解溶剂选自氯化物烷烃类、醇类溶剂及醚类中的一种或几种溶剂，

其中所述的辅料选自控缓释制剂、防腐剂一种或几种。

在步骤a中辛夷挥发油、磷脂、胆固醇比例为15-8:6-1:2-1。

磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种或几种。

在步骤a中抗氧化剂选自胶原蛋白、维生素A醋酸酯、维生素E中的一种或几种，抗氧化剂加入量占磷脂重量的0.5-5％。

在步骤a中脂质体膜调节剂选自胆酸钠、去氧胆酸钠、Triton-100，脂质体膜调节剂加入量占磷脂重量的0.001-2.5％。

在步骤b中蒸发的温度为28-65℃。

在步骤c中调节PH值为5.5-7.5。

在步骤c中控缓释剂选自硬脂酸胺、二乙酰磷酸中的一种或几种，控缓释剂加入量占磷脂重量的3-25％。

在步骤c中防腐剂选自聚山梨酯80、甲基羟苯甲酯、苯基羟苯甲酯中的一种或几种，防腐剂加入量占磷脂重量比小于0.025％。

在步骤d中超声的温度在0-10℃，超声频率在200-1000Hz，超声的有效时间0.5-20min。

在步骤e中稳定剂选自磷脂酰甘油、磷脂酸、硬脂胺中的一种或几种，稳定剂加入量占磷脂重量的0.9-4.25％。

本发明所公开一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法，其优点表现在：

(1)本发明制备方法简单，可操作性强。

(2)本发明方法制备的脂质体采用滴鼻剂的形式，比常规滴鼻剂有更大的比表面积，增大了它与鼻腔粘膜的接触面积，相对延长了它与鼻腔粘膜的接触时间和黏膜吸收速度，而且使用方便，同时可以避免由于使用的过程中造成的药物损失，提高有效利用率。

(3)用本发明方法制备的脂质体具有一定的柔性和变形性，比相同粒径的普通脂质体更容易通过黏膜吸收，因而具有更好的通透性。脂质体的粒径在一定的范围内可以方便通过改变一两个条件进行调节。

(4)用本发明的方法制备的脂质体混悬液，比常规脂质体混悬液具有更好的物理化学稳定性和药物不易泄露的特点。

附图说明

图1显示TEM观察下包覆辛夷挥发油的脂质体形貌图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述。

实施例1

包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的制备方法(一)

200mg大豆卵磷脂、750mg辛夷挥发油、100mg胆固醇、0.2mg胆酸钠、1mg胶原蛋白，溶于20ml的2：1甲醇/氯仿的混合溶剂。38℃恒温、减压蒸发形成类脂膜，加入20ml的磷酸缓冲液震荡溶解，调节PH值为5.5，加入10mg硬脂酸胺、0.05mg聚山梨酯80，得到大多室脂质体分散液。在超声温度10℃，超声频率200Hz条件下冰水浴超声处理20分钟，经过0.15μm微孔滤膜过滤形成均匀的单层的脂质体混悬液，在滤液中加入8.5mg磷脂酰甘油制备成鼻腔给药制剂。测定混悬液中包封药物载体脂质体平均粒径为56nm，包封率为94.8％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存150天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。

实施例2

包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的制备方法(二)

200mg蛋黄卵磷脂、330mg辛夷挥发油、66mg胆固醇、0.01mg去氧胆酸钠、10mg维生素A醋酸酯，溶于30ml甲醇的混合溶剂。28℃恒温、减压蒸发形成类脂膜，加入20ml的磷酸缓冲液震荡溶解，调节PH值为7.0，加入100mg二乙酰磷酸、0.1mg甲基羟苯甲酯，得到大多室脂质体分散液。在超声温度1℃，超声频率600Hz条件下冰水浴超声处理10分钟，经过0.15μm微孔滤膜过滤形成均匀的单层的脂质体混悬液，在滤液中加入4mg磷脂酸制备成鼻腔给药制剂。测定混悬液中包封药物载体脂质体平均粒径为73nm，包封率为93.6％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存150天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。

实施例3

包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的制备方法(三)

200mg大豆卵磷脂、1600mg辛夷挥发油、200mg胆固醇、5mgTriton-100、5mg维生素E溶于40ml氯仿混合溶剂，65℃减压蒸发形成类脂膜，加入20ml的磷酸缓冲液震荡溶解，调节PH值为7.5，加入20mg硬脂酸胺、50mg二乙酰磷酸、0.1mg苯基羟苯甲酯，得到大多室脂质体分散液，在超声温度5℃，超声频率1000Hz条件下冰水浴超声处理1分钟，经过0.15μm微孔滤膜过滤形成均匀的单层的脂质体混悬液，在滤液中加入2mg硬脂胺制备成鼻腔给药制剂。测定混悬液中包封药物载体脂质体平均粒径为66nm，包封率为95.8％，常温下保存60天，溶液物理化学性质稳定，低温4℃下保存150天，溶液均匀稳定无分层和变质现象。

实施例4

对过敏性鼻炎豚鼠的影响

豚鼠过敏性鼻炎模型制备取300～350g豚鼠40只，雌雄各半，均分5组，每组8只，除留一组作正常对照外，其余四组，以24二异氰酸甲苯酯(TDL)滴鼻致敏。即将10％TDL橄榄油溶液10μl，用加样器滴入豚鼠双侧鼻孔(每侧5μl)，每日一次，连续7d，模型判定成功后，改为隔日维持1次，直至观察药物结束；对照组滴橄榄油的方法、剂量同模型组。

模型判定以出现鼻痒抓挠、喷嚏、流涕为判定指标，首次给致敏物TDL始，30min内可见不同程度鼻痒抓挠、喷嚏，3d后见流涕，随致敏时间延长，症状渐加重，始发时间缩短，呈现典型以上症状。治疗药作用效果以鼻痒抓挠次数，喷嚏次数、流涕程度(流至鼻前孔为1分，超过鼻前孔为2分，流涕满为3分)作为观察指标，观察时间为末次给TDI后30min内。

实验方法及结果模型建立后，于第8天分组给药，每日二次，用加样器于豚鼠双侧鼻孔给药，对照组给予蒸馏水，连续7d，末次给药后30min，给予TDL，观察30min内各组豚鼠鼻痒抓挠及喷嚏次数、流涕程度，结果见表1。

表1辛夷挥发油纳米脂质体鼻腔给药对豚鼠过敏性鼻炎症状的作用(x±s；n＝8)

 

组别	剂量μl只	抓挠(次)	喷嚏(次)	流涕(分)
					正常对照	100	0.3±0.4	0.5±0.6	0
模型对照	100	5.2±1.2Δ	12.2±3.6Δ	2.6±1.0Δ
					酮替酚滴鼻液	100	1.9±0.6<sup>**</sup>	4.3±1.8<sup>**</sup>	1.0±0.7<sup>**</sup>
辛夷挥发油	100	3.6±1.4<sup>*</sup>	8.7±2.8<sup>*</sup>	1.5±0.9<sup>*</sup>
					纳米辛夷挥发油	100	2.4±1.2<sup>**</sup>	5.2±1.4<sup>**</sup>	0.8±0.8<sup>**</sup>

注：与正常对照组比较ΔP<0.01，与模型组比较^*P<005，^**P<001

上述实验的结果表明：辛夷挥发油纳米滴鼻液能有效对抗豚鼠过敏性鼻炎所产生的鼻痒、喷嚏、流涕的症状。治疗效果优于常规辛夷挥发油药物。

Claims (9)

1、一种制备包覆辛夷挥发油纳米脂质体滴鼻剂的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

a、辛夷挥发油、磷脂、胆固醇、抗氧化剂、脂质体膜调节剂混合，溶于溶解溶剂中；

b、将步骤a得到的混合溶剂恒温减压蒸发；

c、将步骤b得到的类脂膜加入缓冲液中震荡溶解，调节PH值，加入辅料；

d、将步骤c得到的脂质体分散液，冰水浴超声处理，经过微孔滤膜过滤；

e、将步骤d得到的脂质体混悬液中加入稳定剂制备成鼻腔给药制剂；

其中所述的溶解溶剂选自氯化物烷烃类、醇类溶剂及醚类中的一种或几种溶剂，

其中所述的辅料选自硬脂酸胺、二乙酰磷酸、防腐剂的一种或几种，在步骤a中辛夷挥发油、磷脂、胆固醇比例为15-8:6-1:2-1，在步骤a中脂质体膜调节剂选自胆酸钠、去氧胆酸钠、Triton-100，脂质体膜调节剂加入量占磷脂重量的0.001-2.5％。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种或几种。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤a中抗氧化剂选自胶原蛋白、维生素A醋酸酯、维生素E中的一种或几种，抗氧化剂加入量占磷脂重量的0.5-5％。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤b中蒸发的温度为28-65℃。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤c中调节PH值为5.5-7.5。

6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：硬脂酸胺、二乙酰磷酸加入量占磷脂重量的3-25％。

7、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤c中防腐剂选自聚山梨酯80、甲基羟苯甲酯、苯基羟苯甲酯中的一种或几种，防腐剂加入量占磷脂重量比小于0.025％。

8、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤d中超声的温度在0-10℃，超声频率在200-1000Hz，超声的有效时间0.5-20min。

9、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤e中稳定剂选自磷脂酰甘油、磷脂酸、硬脂胺中的一种或几种，稳定剂加入量占磷脂重量的0.9-4.25％。

Images