CN100478353C - 小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 - Google Patents

小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 Download PDF

Info

Publication number
CN100478353C
CN100478353C CNB2006100428293A CN200610042829A CN100478353C CN 100478353 C CN100478353 C CN 100478353C CN B2006100428293 A CNB2006100428293 A CN B2006100428293A CN 200610042829 A CN200610042829 A CN 200610042829A CN 100478353 C CN100478353 C CN 100478353C
Authority
CN
China
Prior art keywords
molecular weight
subunit
low molecular
water
gel electrophoresis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB2006100428293A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1876675A (zh
Inventor
张宏
吉万全
王长有
王秋英
任志龙
王亚娟
蔡东明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northwest A&F University
Original Assignee
Northwest A&F University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northwest A&F University filed Critical Northwest A&F University
Priority to CNB2006100428293A priority Critical patent/CN100478353C/zh
Publication of CN1876675A publication Critical patent/CN1876675A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100478353C publication Critical patent/CN100478353C/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种小麦麦谷蛋白亚基低分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,该方法对常用的蛋白凝胶电泳方法的基础上进行改进,去除了小麦高、低分子量麦谷蛋白中醇溶蛋白对分离效果的干扰,并且样品缓冲液中不使用有臭味的β巯基乙醇;丙烯酰胺凝胶分离胶使用交连度为2.6%的10%丙烯酰胺凝胶,降低分子筛孔度,一步同时分离高、低分子量亚基,达到了更好的分离效果;电极缓冲液采用0.4M甘氨酸,增大了缓冲液电泳的离子效应,配合凝胶清晰的分离出低分子量麦谷蛋白亚基;使用清水脱色即可,节约药品成本。该方法简单,高效,能够清晰的单向一步分离低分子量麦谷蛋白亚基。

Description

小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及小麦麦谷蛋白亚基的分离方法,特别涉及小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,。
技术背景
小麦麦谷蛋白亚基是小麦的一类重要的储藏蛋白。研究表明,亚基的组成对小麦面粉的加工品质和营养品质有重要影响,不同亚基和亚基组合对加工品质的影响或贡献大小不同。麦谷蛋白亚基按分子量大小分为高分子量谷蛋白亚基和低分子量谷蛋白亚基。两类亚基对品质的贡献,早先研究认为高分子量亚基的贡献较大。经过进一步研究认为低分子量亚基对品质,尤其是加工品质有相当贡献。对蛋白亚基的分离是研究亚基和亚基对品质作用的基础,也可利用麦谷蛋白亚基对小麦种质资源进行分类研究。
聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,经过国内外研究者的创立和改良,目前是应用最为广泛的分离麦谷蛋白亚基的技术,在分离构成多采用β巯基乙醇来打破二硫键,解聚蛋白质。在我国,对麦谷蛋白亚基的研究多集中于对高分子量亚基的电泳分离和研究,主要原因之一在于低分子量麦谷蛋白亚基难以分离或分离不清。因此要进一步扩大我国在蛋白亚基、品质、品质育种等方面的成就,必须在研究高分子量麦谷蛋白亚基的同时,注意对低分子量谷蛋白亚基的研究,分析其对品质的影响和其与高分子量亚基之间的相互作用。这就意味着必须要改良现有凝胶电泳技术体系,建立一种简单,高效的能清晰分离低分子量谷蛋白亚基的凝胶电泳技术。
发明内容
本发明的目的在于,对常用的蛋白凝胶电泳方法的基础上进行改进,提供一种小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,该方法简单,高效,能够清晰的单向一步分离低分子量麦谷蛋白亚基。
为了实现上述任务,本发明采取如下的技术解决方案:
1.一种小麦麦谷蛋白亚基低分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,其特征在于,具体包括下列步骤:
1)小麦麦谷蛋白亚基的提取与处理
首先将1/3种子研压破碎成粉末;然后使用体积分数50%异丙醇,60℃水浴30min,10000rpm离心10分钟,弃去上清,重复一次,去除醇溶蛋白和沉淀蛋白后加入缓冲液50ul,该缓冲液为含有24%的甘油,8%的十二烷基硫酸钠,0.012%溴酚兰的pH值为6.8的0.125MTris-Hcl样品缓冲液;35℃~40℃水浴1h备用;
2)单向一步分离高、低分子量谷蛋白亚基电泳
A.采用电泳仪进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳,压条封边后,将交联度2.6%的10%pH8.8丙烯酰氨分离胶灌至胶板的4/5处,立即用蒸馏水或无水乙醇封顶,凝胶半小时以上;
B.弃去封顶水或无水乙醇,用4%浓度的交联度1.3%的PH为6.8的丙烯酰氨浓缩胶灌满胶板,插入长城齿梳子,凝胶半小时以上;
C.用Tris-甘氨酸电极缓冲液,其中含0.3%Tris,0.1%SDS,0.4M甘氨酸,pH值为8.3,在20mA恒压电泳11-12h;
3)脱色
用G250考马斯亮兰染色3h,清水脱色24h,即可清晰分离出低分子量麦谷蛋白亚基。
本发明的方法,去除了小麦高、低分子量麦谷蛋白中醇溶蛋白对分离效果的干扰,并且样品缓冲液中不使用有臭味的β巯基乙醇;丙烯酰胺凝胶分离胶使用交连度为2.6%的10%丙烯酰胺凝胶,降低分子筛孔度,一步同时分离高、低分子量亚基,达到了更好的分离效果;电极缓冲液采用0.4M甘氨酸,增大了缓冲液电泳的离子效应,配合凝胶清晰的分离出低分子量麦谷蛋白亚基;使用清水脱色即可,节约药品成本。
附图说明
图1是采用本发明清晰分离的低分子量麦谷蛋白亚基图片。
具体实施方式
本发明参考了朱金宝和Morel等提出的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,并对其中部分作了调整和改进,其主要步骤是:
1.小麦麦谷蛋白亚基的提取
1)切取1/3种子放入1.5ml离心管,将其研压破碎成粉末。
2)在粉末中加入120ul体积分数50%异丙醇,60℃水浴30min,10000rpm离心10分钟,弃去上清,重复一次,去除醇溶蛋白对分离条带特别是D、B、C区的干扰。
3)加入160ul含0.3%二硫苏糖醇的50%异丙醇,60℃水浴30min。加入等体积含1.4%4-已烯基吡啶的50%异丙醇溶液,60℃水浴30min,10000rpm离心10分钟,小心移取200ul上清液于另一试管。
4)在试管中加入上清液4倍体积的丙酮,在35℃-40℃水浴30min,10000rpm离心10分钟,弃去上清。
5)加入含有24%甘油,8%十二烷基硫酸钠,0.012%溴酚兰的0.125MTris-Hcl样品缓冲液(PH6.8)50ul,35℃-40℃水浴1h备用。
2.单向一步分离高、低分子量谷蛋白亚基电泳
1)采用北京六一仪器厂生产的ECP三恒电泳仪进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳,压条封边后,将交联度2.6%的10%pH8.8丙烯酰氨分离胶灌至胶板的4/5处,立即用蒸馏水或无水乙醇封顶,凝胶半小时以上。
2)弃去封顶水或无水乙醇,用4%交联度1.3%的pH6.8丙烯酰氨浓缩胶灌满胶板,插入长城齿梳子,凝胶半小时以上。
3)用Tris-甘氨酸电极缓冲液(含0.3%Tris,0.1%SDS,0.4M甘氨酸,PH8.3)在20mA恒压电泳11-12h(指示线刚刚迁移出凝胶)。
3.脱色
用G250考马斯亮兰染色3h,清水脱色24h即可分离出低分子量麦谷蛋白亚基(如图1所示)。
本发明的方法与改进前的技术的不同之处参见下表:
    项目     现有技术     本发明
    还原剂     β巯基乙醇(有臭味)     二硫苏糖醇
    分离胶浓度     8%-12%     10%
    分离胶交连度     1.3%     2.6%
    电极缓冲液Gly-浓度     0.2M     0.4M
    脱色液     甲醇、醋酸、蒸馏水     水
    蛋白亚基分离效果     BC区条带聚集成片     BC区条带清晰

Claims (1)

1.一种低分子量小麦麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)小麦麦谷蛋白亚基的提取与处理
首先将1/3种子研压破碎成粉末;然后使用体积分数50%异丙醇,60℃水浴30min,10000rpm离心10分钟,弃去上清,重复一次,去除醇溶蛋白和沉淀蛋白后加入缓冲液50ul,该缓冲液为含有24%的甘油,8%的十二烷基硫酸钠,0.012%溴酚兰的pH值为6.8的0.125MTris-Hcl样品缓冲液;35℃~40℃水浴1h备用;
2)单向一步分离高、低分子量谷蛋白亚基电泳
A.采用电泳仪进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳,压条封边后,将交联度2.6%的10%pH8.8丙烯酰氨分离胶灌至胶板的4/5处,立即用蒸馏水或无水乙醇封顶,凝胶半小时以上;
B.弃去封顶水或无水乙醇,用4%浓度的交联度1.3%的PH为6.8的丙烯酰氨浓缩胶灌满胶板,插入长城齿梳子,凝胶半小时以上;
C.用Tris-甘氨酸电极缓冲液,其中含0.3%Tris,0.1%SDS,0.4M甘氨酸,pH值为8.3,在20mA恒压电泳11-12h;
3)脱色
用G250考马斯亮兰染色3h,清水脱色24h,即可清晰分离出低分子量麦谷蛋白亚基。
CNB2006100428293A 2006-05-18 2006-05-18 小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 Expired - Fee Related CN100478353C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100428293A CN100478353C (zh) 2006-05-18 2006-05-18 小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100428293A CN100478353C (zh) 2006-05-18 2006-05-18 小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1876675A CN1876675A (zh) 2006-12-13
CN100478353C true CN100478353C (zh) 2009-04-15

Family

ID=37509255

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2006100428293A Expired - Fee Related CN100478353C (zh) 2006-05-18 2006-05-18 小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN100478353C (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101532016B (zh) * 2009-04-24 2010-12-08 首都师范大学 一段dna分子、含有该dna分子的重组表达载体及其应用
US20130280814A1 (en) * 2010-05-27 2013-10-24 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Method and kit for protein labeling
CN101891799B (zh) * 2010-06-21 2013-05-01 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种低分子量麦谷蛋白亚基的提取分离鉴定方法
CN108776165A (zh) * 2018-04-18 2018-11-09 湖北民族学院 木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法
CN108828049B (zh) * 2018-08-27 2020-05-12 河北省农林科学院遗传生理研究所(河北省农林科学院农产品质量安全研究中心) 一种小麦高低分子量麦谷蛋白亚基sds-page分离方法
CN110669120B (zh) * 2019-10-30 2022-07-29 天津市农作物研究所(天津市水稻研究所) 基于单粒醇溶蛋白提取和检测技术的谷子杂交种纯度鉴定方法
CN110615834B (zh) * 2019-10-30 2022-07-29 天津市农作物研究所(天津市水稻研究所) 能够满足谷子杂交种纯度鉴定要求的单粒醇溶蛋白提取方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
小麦低分子量麦谷蛋白亚基组成研究. 段淑娥.西北植物学报,第25卷第4期. 2005
小麦低分子量麦谷蛋白亚基组成研究. 段淑娥.西北植物学报,第25卷第4期. 2005 *
染色体工程法聚合小麦优质麦谷蛋白亚基及其对品质影响的研究. 张宏.西北农林科技大学2005届攻读硕士学位研究生学位(毕业)论文. 2005
染色体工程法聚合小麦优质麦谷蛋白亚基及其对品质影响的研究. 张宏.西北农林科技大学2005届攻读硕士学位研究生学位(毕业)论文. 2005 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN1876675A (zh) 2006-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100478353C (zh) 小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法
Tan et al. Three phase partitioning for simultaneous purification of aloe polysaccharide and protein using a single-step extraction
MX2011007148A (es) Composicion de zeina.
Yan et al. Three-phase partitioning for efficient extraction and separation of polysaccharides from Corbicula fluminea
Salvi et al. Purification and proteomic analysis of chloroplasts and their sub-organellar compartments
CN107586821A (zh) 一种肉苁蓉多肽的提取方法及用途
CN102533728B (zh) 富含多糖多酚植物高质量细胞核dna的提取方法
CN104418774A (zh) 栝楼瓤微生物发酵提取l-瓜氨酸的方法
CN101830995B (zh) 采用减压内部沸腾提取多糖的方法
CN104558229A (zh) 一种枸杞多糖的分离纯化方法
US20170298103A1 (en) Conotoxin polypeptide k-cptx-bt105, and method for preparation threof and application thereof
WO2018233092A1 (zh) 一种甜茶苷制备方法
WO2020067648A3 (ko) 수지상세포를 이용한 면역 소재의 면역증진 효과 평가방법 및 면역 소재 스크리닝 방법
CN103319627A (zh) 一种对透明质酸钠进行分子量分级的方法
CN103884765B (zh) 辣椒花药双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法
Park et al. Enantioseparation using sulfated cyclosophoraoses as a novel chiral additive in capillary electrophoresis
US20170298098A1 (en) Conotoxin polypeptide k-cptx-bt104, and method for preparation threof and application thereof
CN101893528B (zh) 一种制备绍兴黄酒成品麦曲中微生物胞外酶双向电泳样品的方法
Ratanapariyanuch et al. Industrial clarification of wheat-based distillers’ solubles and thin stillage
CN105130943B (zh) 一种原花青素的提取方法
CN103951730A (zh) 水牛睾丸曲精细管总蛋白样品的制备方法和双向电泳分离方法
CN103951738A (zh) 一种高效萃取藻红蛋白的双水相法
CN103333869A (zh) 从甘薯的茎和叶中提取和制备过氧化物酶的方法
CN106801081A (zh) 一种从米糠中提取活性蛋白的方法
CN105985402B (zh) 一种甾醇内酰胺化合物马勃内酰胺及其在制备抗补体药物中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20090415

Termination date: 20100518