CN100396178C - 一种玻璃海鞘的全人工养殖方法及简易型连续投饵装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种玻璃海鞘的人工养殖方法及简易型连续投饵装置，人工养殖的方法：第一步，用人工授精的方法获得受精卵，将受精卵在塑料培养皿中用消毒海水孵化成蝌蚪幼体；第二步，将变态的幼体转入小型容器中一级培养，海水经煮沸消毒，投喂硅藻；第三步，幼体长至1cm时，移入大型水族缸中用自然海水养殖，并采用连续投饵装置投喂由螺旋藻粉、包膜饲料、虾蟹开口料、鸡蛋黄组成的人工饵料。当养殖到个体体长达到4-7cm后其性腺逐渐成熟，再用第一步的方法获得受精卵。如此完成玻璃海鞘整个生活史的全人工养殖。本发明养殖成活率高，养殖装置和饵料简便易得、成本低廉，可以突破季节限制常年繁养殖，随时为实验提供材料。

Description

一种玻璃海鞘的全人工养殖方法及简易型连续投饵装置

技术领域

本发明涉及滤食性实验动物的人工养殖方法，特别是涉及玻璃海鞘的受精卵获得、孵化、幼体海鞘附着、养成及海鞘人工饲料制备的全套方法。

背景技术

玻璃海鞘是一种低等脊索动物，有一个自由游泳的幼体期，形似小蝌蚪状，具有背神经索、脑原基和脊索。玻璃海鞘曾经是胚胎生物学研究的风靡模型，早在19世纪就开始了发育生物学的研究，曾在细胞质决定子的发现中起一定作用，也是率先开始细胞谱系研究的动物之一。近年来，玻璃海鞘的全基因组序列测试完毕并得以公布，数十万的EST数据已经公开，大量的发育表达基因得到克隆，数百的基因表达模式得以发表。玻璃海鞘的基因组小，大约只有人类的十七分之一，再加上与脊椎动物进化的近缘关系，海鞘是理想的全基因组序列分析以及与人类基因组进行比对的理想生物。发掘玻璃海鞘胚胎的分子发生机理，对理解人类和其它脊索动物始祖的发育程序是非常必要的。目前海鞘基因表达研究正全面展开，包括大规模表达序列标签分析，cDNA测序和原位杂交筛查，加上目前研究基因调控和功能的方法学进展，使得海鞘成为脊索动物发育遗传学基因水平分析的具诱惑力的实验系统。

然而，玻璃海鞘作为一种非常重要的实验动物，它的材料来源往往受到季节和地域的限制，这严重影响了玻璃海鞘的科研应用。因此，对玻璃海鞘进行实验室养殖往往成为深入研究的前提和基础。目前，国际上只有少数实验室开展了玻璃海鞘的养殖试验，但往往需要昂贵的紫外、臭氧消毒仪、蠕动泵和海水过滤等配套设备，也没有提供一种简便易得的饲料来源。而且在幼体附着时经常由于水质和敌害生物的影响，幼体往往不能顺利长成。

发明内容

为了克服以往养殖方法中成本高、可操作性差、成活率低等不足，本发明根据玻璃海鞘的生物学特性，针对已有养殖方法中存在的主要问题，解决了从玻璃海鞘的幼体孵化、附着、养殖水质管理、饲料组成、投饵设备等养殖过程中存在的技术问题；本发明的目的在于提供一种成本低、可操作性强、成活率高的玻璃海鞘的全人工养殖方法及简易型连续投饵装置。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

玻璃海鞘的全人工养殖方法，养殖过程分三个阶段进行；

第一步，将受精卵在塑料培养皿中用消毒海水孵化成蝌蚪幼体：在温度为20-23℃、恒湿的生化培养箱中，受精卵经过12-16hr孵化；将蝌蚪幼体转入底面粗糙的塑料培养皿中，保持水位5-10mm，此时大部分蝌蚪幼体头部附着在培养皿底部；

采用改变养殖水温、改善营养条件和控制光照时间的方法，促使野生的玻璃海鞘自然产卵排精，获取受精卵；或通过人工授精的方法，获得受精率为100％的受精卵。

第二步，将幼体转入小型水体养殖：待蝌蚪幼体尾部吸收完毕、变态完成后，连同培养皿转入体积为20L的玻璃钢容器中，水温恒定在18-23℃范围内；所用的海水经过脱脂棉过滤、煮沸消毒；每天分三次投喂，开口饵料为硅藻或金藻。

第三步，将生长至0.5-1cm的玻璃海鞘幼体移入大型水族缸中用自然海水养成，水温恒定在18-23℃范围内，投喂人工饵料：人工饵料的重量组成为30-50％螺旋藻粉、15-20％虾蟹育苗用包膜微颗粒饲料(如：思福德^TM牌包膜微颗粒饲料等)和15-20％虾蟹育苗用的开口料(如：海森特^TM牌虾蟹种苗开口料苗健宝)、10-30％鸡蛋黄；

当养殖到个体体长达到4-7cm后其性腺逐渐成熟，玻璃海鞘卵巢呈橙红色，精巢呈乳白色，再用第一步的方法促使玻璃海鞘产卵；如此完成玻璃海鞘整个生活史的全人工养殖。

所述投喂人工饵料，人工饵料料经过水化(1-3hr)后于高速分散器分散后投喂(每天投喂两次，亦可以采用本发明配套的自动投饵装置投喂)或4℃冷藏。

人工饵料于高速分散器中最好分散成均质、颗粒粒径在30-150um的液体饵料；用自然海水养成过程每天换水40-60％或每隔一天换水50-80％。

本发明养殖方法的简易型连续投饵装置，置于养殖容器上方，投饵装置包括饵料池、导流管和流量调节阀；导流管的一端置于饵料池中，另一端伸入养殖容器中，流量调节阀置于导流管上。

所述导流管和流量调节阀可为医用输液器，医用输液器由医用输液管和流量控制阀(斜滑道和调速压轮)组成；用医用输液管调节投饵速度；在投饵装置上可设置有固定设备用于固定饵料池和导流管。

本发明的优点为：本发明养殖装置成本低廉，玻璃海鞘的养殖成活率高(达85％)，生长迅速，饲料来源廉价易得；简易型连续投饵装置的投饵方式根据海鞘的摄食习性设计，满足了海鞘的滤食性连续摄食的需求；能控制投饵速度，做到投饵速率与海鞘的摄食能力基本平衡，使得养殖水体中始终保持较稳定的食物量，节省了人力和时间；养殖装置简便易得、成本低廉，可以突破季节限制常年繁养殖，随时为实验提供材料。整个养殖流程能满足以玻璃海鞘为实验材料的发育生物学、分子生物学的实验需要，提供了一种普通实验室都可以操作的玻璃海鞘的养殖模式。

附图说明

图1为简易型连续投饵装置，图中1为医用输液管，2为盛放饵料的饵料池(5L)，3为养殖容器(200L的水族缸)，4为医用输液管的流量控制阀。通过调节流量控制阀可以控制液体饵料的投喂速度，使投饵速率与海鞘的摄食能力基本平衡，养殖水体中始终保持较稳定的食物量。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明。

第一步，采用人工诱导的方法，促使野生的玻璃海鞘自然产卵排精，获取受精卵；或通过人工授精的方法，获得受精率为100％的受精卵。在温度为23℃、恒湿的生化培养箱中，受精卵经过12-14hr孵化；将蝌蚪幼体转入底面粗糙的塑料培养皿中，保持水位5-10cm，此时大部分蝌蚪幼体头部附着在培养皿底部；24小时内蝌蚪幼体尾部消失，逐步完成变态过程。

人工诱导促使野生的玻璃海鞘自然产卵排精的具体做法是：当自然水温在10-16℃时，从港湾采集成年的玻璃海鞘，养殖在水温为20℃的水族缸中；对玻璃海鞘进行连续光照，日光灯的功率为25W，与水面的距离为50cm，每日投喂自制的人工饵料(人工饵料配制的方法和配方详见第三步)；3-5d后，玻璃海鞘的性腺发育成熟，将水族缸中的水全部换掉，水温升高至22℃，用黑布遮住整个水族缸，此时玻璃海鞘将在6hr内同步产卵排精；受精后，用120目的筛绢收集受精卵，用煮沸消毒的清洁海水洗涤2遍。同上法孵化、附着。

人工授精获得玻璃海鞘受精卵的具体做法是：采集野外或人工养殖后达到性成熟的玻璃海鞘，用镊子去掉外膜，暴露出生殖腺，用巴斯德管分别吸取卵细胞和精液，卵细胞在煮沸消毒过的海水中漂洗数遍以洗去卵液，精液置于1.5ml的eppendorf管，4℃保存备用；取少量精子与卵子混合，受精后洗去多余的精子。同上法孵化、附着。

第二步，待蝌蚪幼体尾部吸收完毕、变态完成后，连同培养皿转入体积为20L的玻璃钢容器中进行一级培养。所用的海水经过脱脂棉过滤、煮沸消毒。这样能充分提高饵料的利用率，同时可以防止自然海水带来桡足类等敌害生物或饵料竞争生物。每天分三次投喂密度为200万/ml的小新月菱形藻，根据摄食情况调整投喂量。每天换水30％。在食物充足、水质良好的情况下，玻璃海鞘生长迅速。

第三步，当玻璃海鞘幼体生长至1cm时，移入水体体积为200L的水族缸中养成。饵料改为人工配合的饵料。将螺旋藻粉、思福德^TM牌包膜微颗粒饲料、海森特^TM牌虾蟹种苗开口料苗健宝(三者均有市售)、鸡蛋黄分别称取5g、2g、2g、1g，混合均匀后，加入蒸馏水100ml，水化2hr，用高速分散器分散3min，即得到颗粒均匀、粒径在50um以下的配合饵料。投喂时每天取10ml，稀释到5000ml。注入简易型连续投饵装置(图1)的饵料池中，根据海鞘的摄食速度用流量控制阀调节饵料流入养殖容器中。每天换水50％。当养殖到个体体长超过5cm时，玻璃海鞘的性腺逐步发育成熟，再用第一步的方法获得受精卵，如此循环完成玻璃海鞘整个生活史的全人工养殖。

Claims (5)

1.一种玻璃海鞘的全人工养殖方法，其特征在于：养殖过程分三个阶段进行，

第一步将受精卵在塑料培养皿中用消毒海水孵化成蝌蚪幼体；

第二步将幼体转入小型水体养殖，养殖用海水经过过滤和消毒，饵料为单细胞藻类；

第三步将生长至0.5-1cm的玻璃海鞘幼体移入大型水族缸中用自然海水养成，水温恒定在18-23℃范围内，投喂人工饵料；人工饵料的重量组成为30-50％螺旋藻粉、10-30％鸡蛋黄、15-20％虾蟹育苗用的包膜微颗粒饲料和15-20％虾蟹育苗用的开口料；

当养殖到个体体长达到4-7cm后，其性腺逐渐成熟，玻璃海鞘达到性成熟，再用第一步的方法获得蝌蚪幼体；如此完成玻璃海鞘整个生活史的全人工养殖。

2.按照权利要求1所述的养殖方法，其特征在于：所述投喂人工饵料，人工饵料经过水化后，用高速分散器分散后投喂。

3.按照权利要求2所述的养殖方法，其特征在于：所述人工饵料于高速分散器中分散成均质、颗粒粒径在30-150um的液体饵料。

4.一种权利要求1所述的养殖方法，采用简易型连续投饵装置，置于养殖容器上方，所述投饵装置包括饵料池、导流管和流量调节阀；导流管的一端置于饵料池中，另一端伸入养殖容器中，流量调节阀置于导流管上。

5.按照权利要求4所述的养殖方法，采用简易型连续投饵装置，其中所述导流管和流量调节阀为医用输液器，所述医用输液器由医用输液管和流量控制阀组成。

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