CN100389119C - （反式）-2-脱氧-2-（氟亚甲基）-4-r酰胞苷化合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物及其制备方法，其特点是：在(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-胞苷的化学结构上增加了R酰基侧链，它能够有效地提高化合物的脂溶性，帮助更易、更快地进入生物细胞内，有效的抑制和杀伤荷瘤动物的肿瘤细胞，并且不伴有明显的毒副作用，因此，有可能改变传统的化疗药物对所有快速分裂的细胞进行全面打击的作用方式，即能够主要针对肿瘤细胞的基因突变或基因表达异常发挥作用，而对正常细胞没有影响，它适应于肺癌，直肠癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，脑瘤等的治疗，尤其是对耐药的肿瘤具有较好的治疗效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种能有效地抑制和杀伤荷瘤动物的肿瘤细胞，并且不伴有明显的毒副作用，因此有可能改变传统的化疗药物对所有快速分裂的细胞进行全面打击的作用方式，即能够主要针对肿瘤细胞的基因突变或基因表达异常来发挥其有效作用，而对正常细胞没有影响的(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物及其制备方法。
背景技术
癌症是世界公认的人类现代疾病中的重大杀手，据世界卫生组织国际癌症研究中心的研究报告表明，根据癌症的发病趋势，2020年全世界的癌症发病率将比现在增加50％，全球每年新增的癌症患者人数将达到1500万人。据统计，我国自20世纪70年代以来，癌症发病率一直呈上升趋势，因患癌症致死已经成为城镇居民诸多死因中的第一位，我国目前每年癌症发病的人数已经高达200万，死于癌症的人数已经超过140万。农村及西部地区癌症的上升速度已经明显高于城市及全国的平均水平，这不仅严重的影响了公民的身体的健康，而且已成为我国医疗费用上涨的重要因素。据有关部门估算，每年用于癌症病人的医疗费用高达数百亿元。此外，由于中晚期癌症患者的治疗效果普遍不佳，其不良的预后往往波及亲友和家庭，影响社会的安全和稳定。因此，寻找有效的抗肿瘤药物和治疗方法一直是一个受到社会和政府高度重视的重大课题。
随着科技的进步，恶性肿瘤对人类已不再是“不治之症”，药物治疗作为癌症治疗的主要手段之一，近年来进展迅速。据Scrip最新报道，美国正在加紧抗肿瘤新药的开发，目前正在研究开发的有315个，其中：皮肤癌60个，乳腺癌58个，结肠癌35个，淋巴癌33个，实体瘤33个，与肿瘤有关的疾病32个，卵巢癌24个，头颈癌18个，肺癌16个，肾癌13个，胃癌10个，膀胱癌9个，多发性骨髓瘤8个，肉瘤8个，肝癌7个，宫颈癌7个，成神经细胞瘤5个和其他癌40个。其中，(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-胞苷作为一种核糖核苷酸二磷酸还原酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤作用，目前在美国已经进入了临床III期试验。
发明内容
本发明的目的是：为提高和改善(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-胞苷化合物的效用和价值，从改善其脂溶性出发，设计合成了(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物。
本发明是在(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-胞苷化合物的基础上增加R酰基侧链后所形成的新化合物，使其能够更加迅速地通过生物膜进入细胞内，它不仅具有良好的水溶性，而且还具有良好的脂溶性。
本发明提出的(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物(FMdc)的化学结构分子式是；
R＝(CH2)nCH3
n＝0-21
该化合物的制备方法
化学反应式：
其中：
其中：
a：TIPDS-Cl2-pyridine(1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷-吡啶)
b：(Me)2NCH(OMe)2(N，N-二甲基甲眯二甲缩醛)
c：Swernn oxidation(斯沃纳氧化反应)
d：PhSO2CH2F/(EtO)2P(O)Cl/LiHMDS(苯氟甲基砜/二乙氧基磷酰氯/六甲基二硅氮锂)
e：NH3/CH3OH(氨/甲醇)
f：BU3SnH/AlBN(氢化三丁基锡/偶氮二异丁氰)
g：CsF/MeOH(氟化铯/甲醇)
h：[RCO]2O，H2O，1，4-Dioxane(酸酐/水/二氧六环)
化学反应式(1)中的R＝(CH2)nCH3 n＝0-21
合成路线：
①、N-[(二甲氨基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成。
在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L组成的浆状液中，在N2保护下缓缓加入1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小时后变成溶液，温度上升到34℃，4小时后开始形成固体，18小时后，将N，N-二甲基甲眯二甲缩醛加入，374ml，2.82mol，约0.3小时左右加毕，温度升至37℃，溶液呈黄色，4小时后，减压除去溶剂，剩余物用乙酸乙酯1L，500ml，50ml加热提取三次，合并提取液，用无水硫酸镁(MgSO4)干燥，过滤，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加热，再加乙酸乙酯500ml以溶解剩余之固体，然后乘热过滤，冷却后，析出白色结晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，滤液浓缩，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重结晶，又得(2)83.0g，滤液再浓缩，重结晶，又得(2)22.6g，总计可得到(2)381.9g，85％，m.p137-138℃。
②、N[(二甲氨基)甲烯]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成。
在氮气保护下，在一个装有搅拌器，温度计和滴液漏斗的2L的三口瓶内放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，将溶液冷至-75℃，将21.3ml 0.3mol二甲基亚砜滴入，并控制反应温度-55℃以下，继续搅拌5分钟，再将纯(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，约10分钟，加毕，继续搅拌30分钟，于-75℃，将(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，让反应温热至室温，1小时后在室温下，混合物用等体积乙醚稀释，继续搅拌1小时，将混合物倒入装有硅胶500ml的玻璃漏斗内先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脱，乙醚洗下部分浓缩后用300ml的10％氯仿和90％己烷组成的混合液处理，滤集固体，干燥，得到白色粉状物36.1gN[(二甲氨基)甲烯]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脱部分浓缩后用300ml的10％氯仿和90％己烷组成的混合液重结晶，另又得到(3)12.5g，总共可得到(3)48.6g(90％)，mp 169.5-171℃。
③、2’-脱氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成。
将苯氟甲基砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氢呋喃800ml，氮气保护，冷却至-70℃，用注射器将16ml，0.11mol，的二乙氧基磷酰氯加到上溶液中，称取1mol的六甲基二硅氮锂放入200ml四氢呋喃，用滴液漏斗缓缓滴加到上反应瓶内，加毕，温度升至-65℃，1小时，用少量饱和氯化铵/乙酸乙酯，终止反应，薄层板检测，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氢呋喃于-60℃滴加到上反应液中，将反应液升温至0℃，0.5小时，然后再升至室温25小时，用饱和氯化铵100ml终止反应，用600ml乙醚稀释，再加适量水去溶解无机盐，将反应液倒入分液漏斗内，水层用200ml乙醚提取，醚层再用冰盐水洗，有机层用无水硫酸镁干燥，浓缩，得到71.8g，黑色粘状油状物，将此粗品溶解在甲醇中，用氨气饱和，搅拌过夜，浓缩，剩余物用1.4L硅胶柱层析分离，洗脱剂为5％正己烷和95％乙酸乙酯混合液，收集每200ml1瓶，含纯产品浓缩，干燥，得20g 2’-脱氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)纯品，不纯部分16g可用高效液相乙酸乙酯溶剂纯化得到纯品11.4g，共计为31.4g，以上产品用正己烷重结晶，可得到白色粉末状固体，熔点135-145℃。
④、2’-脱氧-2’-[氟(三丁基甲锡烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成。
将样品(4)26g，0.0406mol放入500ml圆底烧瓶内，加300ml环己烷，未放冷凝管回流15分钟，冷至室温，加32.6g0.122mol的氢化三丁基锡(BU3SnH)和500mg的偶氮二异丁氰(AIBN)回流18小时，薄层层析检测，15％甲醇/乙酸乙酯，已没有起始原料，浓缩反应液，用14L硅胶柱层析分离，洗脱剂比例为4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，可得到265g(82.8％)2’-脱氧-2’-[氟(三丁基甲锡烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，其为黄色泡沫状。
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成。
将(5)26g，0.033mol和氟化铯25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小时，待冷却后，溶液被部分浓缩，加75ml硅胶，此粘稠物进一步浓缩至松散流动的固体，用1L硅胶柱层析分离，纯化，用2L的50％乙酸乙酯和50％己烷组成的洗脱剂洗脱，然后用8L的10％甲醇和90％乙酸乙酯组成的混合液洗脱，将含产品部分浓缩得到9.3g的白色固体，再用50％甲醇和50％乙酸乙酯混合液20ml重结晶，得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，其为白色晶体，另从母液中可得到1.66g，总计为5.82g，熔点167-169℃。
⑥、(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-R酰胞苷(1)的合成。
在反应瓶中，加入二氧六环30ml，酸酐2.47mmol，室温加入(6)300mg，1.23mmol，和水的溶液，于80℃搅拌5小时，反应毕，于60℃减压浓缩至干，剩余物可用苯洗涤除去生成的酸，得粗品(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-R酰胞苷，用二甲基亚砜重结晶，最终得到(1)。该化合物的用途：
生物体内的细胞是由蛋白质所组成，蛋白质是生命活动的基础。执行生命功能、表现生命特征的主要物质是蛋白质分子。而有着特定排列顺序的氨基酸是构成蛋白质分子的基本单位。细胞不停地利用氨基酸合成蛋白质和分解蛋白质成为氨基酸。
核酸是由核苷酸聚合而成的高分子化合物，是所有生物遗传信息的携带者。核苷酸是组成核酸的基本单位，其由磷酸基、戊糖和含氮碱基组成。根据核苷酸分子中戊糖的类型，核酸被分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类。组成DNA的核苷酸是脱氧核糖核苷酸，组成RNA的是核糖核苷酸。
脱氧核糖核酸(DNA)是生物界遗传的主要物质基础。生物有机体的遗传特征以密码(code)的形式编码在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序----即遗传信息，在细胞分裂前通过DNA的复制，将遗传信息由亲代传递给子代，在后代的个体发育过程中，遗传信息自DNA转录给RNA，并指导蛋白质合成，以执行各种生命功能，使后代表现出与亲代相似的遗传性状，这种遗传信息的传递方向，是从DNA到RNA再到蛋白质，即所谓的生物学“中心法则”。
被称为生物催化剂的酶，就是在活细胞内产生的具有高度专一性和催化效率的蛋白质。生物体的新陈代谢几乎都是在酶的催化下进行化学反应的。催化脱氧核糖核苷酸生成的酶被称为核糖核苷酸还原酶(RNR)。
研究表明，肿瘤细胞的快速繁殖主要表现在脱氧核糖核酸(DNA)的复制，然而脱氧核糖核酸(DNA)的复制则是受核糖核苷酸还原酶(RNR)所控制。正是由于RNR催化所产生的脱氧核塘核苷酸，为合成DNA提供了足够的原材料。
(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物是一种不可逆的核糖核苷酸二磷酸还原酶抑制剂，它主要参与细胞内的磷酸化过程，从而干扰了DNA的合成，使肿瘤细胞的生长得到抑制。动物试验结果表明，该化合物能有效地抑制和杀伤荷瘤动物的肿瘤细胞，并且不伴有明显的毒副作用，因此有可能改变传统的化疗药物对所有快速分裂的细胞进行全面打击的作用方式，即能够针对肿瘤细胞的基因突变或基因表达异常来发挥其有效作用，而对正常细胞的影响较小，该化合物适应于肺癌，直肠癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，脑瘤等的治疗，由于增强了对细胞膜的渗透，明显提高和改善了药物的疗效，尤其是对耐药的肿瘤具有较好的治疗效果，对裸鼠移植人结肠癌HCT-8和人肺癌A549均显示出显著的生长抑制作用，使用途径是静脉点滴或口服。
具体实施方式
实施例1
(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4丁酰胞苷的合成
①、N-[(二甲氨基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成。
在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L组成的浆状液中，在N2保护下缓缓加入1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小时后变成溶液，温度上升到34℃，4小时后开始形成固体，18小时后，将N，N-二甲基甲眯二甲缩醛加入，374ml，2.82mol，约0.3小时左右加毕，温度升至37℃，溶液呈黄色，4小时后，减压除去溶剂，剩余物用乙酸乙酯1L，500ml，50ml加热提取三次，合并提取液，用无水硫酸镁(MgSO4)干燥，过滤，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加热，再加乙酸乙酯500ml以溶解剩余之固体，然后乘热过滤，冷却后，析出白色结晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，滤液浓缩，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重结晶，又得(2)83.0g，滤液再浓缩，重结晶，又得(2)22.6g，总计可得到(2)381.9g，85％，m.p137-138℃。
②、N[(二甲氨基)甲烯]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成。
在氮气保护下，在一个装有搅拌器，温度计和滴液漏斗的2L的三口瓶内放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，将溶液冷至-75℃，将21.3ml 0.3mol二甲基亚砜滴入，并控制反应温度-55℃以下，继续搅拌5分钟，再将纯(2)54g，0.1mol于CH2CL2 750ml的溶液加入，约10分钟，加毕，继续搅拌30分钟，于-75℃，将(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，让反应温热至室温，1小时后在室温下，混合物用等体积乙醚稀释，继续搅拌1小时，将混合物倒入装有硅胶500ml的玻璃漏斗内先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脱，乙醚洗下部分浓缩后用300ml的10％氯仿和90％己烷组成的混合液处理，滤集固体，干燥，得到白色粉状物36.1g N[(二甲氨基)甲烯]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脱部分浓缩后用300ml的10％氯仿和90％己烷组成的混合液重结晶，另又得到(3)12.5g，总共可得到(3)48.6g(90％)，mp 169.5-171℃。
③、2’-脱氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成。
将苯氟甲基砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氢呋喃800ml，氮气保护，冷却至-70℃，用注射器将16ml，0.11mol，的二乙氧基磷酰氯加到上溶液中，称取1mol的六甲基二硅氮锂放入200ml四氢呋喃，用滴液漏斗缓缓滴加到上反应瓶内，加毕，温度升至-65℃，1小时，用少量饱和氯化铵/乙酸乙酯，终止反应，薄层板检测，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氢呋喃于-60℃滴加到上反应液中，将反应液升温至0℃，0.5小时，然后再升至室温25小时，用饱和氯化铵100ml终止反应，用600ml乙醚稀释，再加适量水去溶解无机盐，将反应液倒入分液漏斗内，水层用200ml乙醚提取，醚层再用冰盐水洗，有机层用无水硫酸镁干燥，浓缩，得到71.8g，黑色粘状油状物，将此粗品溶解在甲醇中，用氨气饱和，搅拌过夜，浓缩，剩余物用1.4L硅胶柱层析分离，洗脱剂为5％正己烷和95％乙酸乙酯混合液，收集每200ml1瓶，含纯产品浓缩，干燥，得20g 2’-脱氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)纯品，不纯部分16g可用高效液相乙酸乙酯溶剂纯化得到纯品11.4g，共计为31.4g，以上产品用正己烷重结晶，可得到白色粉末状固体，熔点135-145℃。
④、2’-脱氧-2’-[氟(三丁基甲锡烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成。
将样品(4)26g，0.0406mol放入500ml圆底烧瓶内，加300ml环己烷，未放冷凝管回流15分钟，冷至室温，加32.6g0.122mol的氢化三丁基锡(BU3SnH)和500mg的偶氮二异丁氰(AIBN)回流18小时，薄层层析检测，15％甲醇/乙酸乙酯，已没有起始原料，浓缩反应液，用14L硅胶柱层析分离，洗脱剂比例为4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，可得到265g(82.8％)2’-脱氧-2’-[氟(三丁基甲锡烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，其为黄色泡沫状。
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成。
将(5)26g，0.033mol和氟化铯25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小时，待冷却后，溶液被部分浓缩，加75ml硅胶，此粘稠物进一步浓缩至松散流动的固体，用1L硅胶柱层析分离，纯化，用2L的50％乙酸乙酯和50％己烷组成的洗脱剂洗脱，然后用8L的10％甲醇和90％乙酸乙酯组成的混合液洗脱，将含产品部分浓缩得到9.3g的白色固体，再用50％甲醇和50％乙酸乙酯混合液20ml重结晶，得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，其为白色晶体，另从母液中可得到1.66g，总计为5.82g，熔点167-169℃。
⑥、(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷(1)的合成。在反应瓶中，加入二氧六环30ml，丁酸酐391mg，2.47mmol，在室温下加入(6)300mg，1.23mmol和水的溶液。于80℃搅拌5小时。反应毕，于60℃减压浓缩至干，剩余物用苯洗涤，除去生成的丁酸，得粗品(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，然后用二甲基亚砜重结晶，可得(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4丁酰胞苷305mg。
实施例2
(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4乙酰胞苷的合成
同实施例1，首先需制备得到(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，然后在反应瓶中，加入二氧六环30ml，醋酐255mg(2.47mmol)，室温加入(6)300mg(1.23mmol)和水的溶液。于80℃搅拌5小时。反应毕，于60℃减压浓缩至干，剩余物用苯洗涤(可除去生成的乙酸)，得粗品((反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-乙酰胞苷，然后用二甲基亚砜重结晶，可得(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4乙酰胞苷285mg。
实施例3
(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4丙酰胞苷的合成
同实施例1，首先应制备得到(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，然后在反应瓶中，加入二氧六环30ml，丙酐321mg，2.47mmol，室温加入(6)300mg，1.23mmol和水的溶液，于80℃搅拌5小时。反应毕，于60℃减压浓缩至干，剩余物可用苯洗涤，除去丙酸，得粗品(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丙酰胞苷，然后用二甲基亚砜重结晶，可得(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4丙酰胞苷290mg。
实施例4
用实施例1所制备的(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，对不同组织来源的肿瘤细胞系的增殖抑制作用(见表1)。
实施例5
用实施例1所制备的(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，对小鼠种植性乳腺癌EMT-6的抑制作用(见表2)。
实施例6
用实施例1所制备的(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，对小鼠种植性Lewis肺癌的抑制作用(见表3)。
实施例7
用实施例1所制备的(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，对裸鼠移植人结肠癌HCT-8的生长抑制(见表4)。
表1.对不同组织来源的肿瘤细胞系的增殖抑制作用
表2.对小鼠种植性乳腺癌EMT-6的抑制作用
| 组别 | 剂量、途径及给药次数 | 动物数始末 | 平均体重(g)始末 | 平均瘤重(g)(X±SD) | 抑瘤率(％) | P |
| 溶剂对照 | 0.2ml/只po×10 | 7 7 | 19.8 22.3 | 2.27±0.25 | - | - |
| 5-FU | 20mg/kgip×10 | 7 7 | 20.1 21.4 | 0.77±0.21 | 66.0 | ＜0.001 |
| MS-275 | 50mg/kg po×325mg/kg po×7 | 7 4 | 20.1 18.4 | 0.98±0.26 | 57.0 | ＜0.001 |
| FMdc(高) | 200mg/kgip×5100mg/kgip×5 | 7 6 | 19.9 18.3 | 0.70±0.24 | 69.2 | ＜0.001 |
| FMdc(中) | 100mg/kg ip×550mg/kg ip×5 | 7 7 | 19.8 18.6 | 0.74±0.11 | 67.4 | ＜0.001 |
| FMdc(低) | 50mg/kg ip×525mg/kg ip×5 | 7 7 | 19.6 20.2 | 0.86±0.17 | 62.1 | ＜0.001 |
表3.对小鼠种植性Lewis肺癌的抑制作用
| 组别 | 剂量、途径及给药次数 | 动物数始末 | 平均体重(g)始末 | 平均瘤重(g)(X±SD) | 抑瘤率(％) | P |
| 对照 | 0.2ml/只po×10 | 7 7 | 20.1 22.9 | 3.36±0.53 | - | - |
| 5-FU | 20mg/kgip×10 | 7 7 | 20.4 19.5 | 1.33±0.50 | 60.4 | ＜0.001 |
| MS-275 | 25mg/kgpo×10 | 7 6 | 20.4 17.7 | 1.68±0.40 | 50.0 | ＜0.001 |
| FMdc(高) | 100mg/kgip×10 | 7 6 | 20.8 18.2 | 1.42±0.60 | 57.7 | ＜0.001 |
| FMdc(中) | 50mg/kgip×10 | 7 7 | 20.2 20.5 | 1.51±0.48 | 55.1 | ＜0.001 |
| FMdc(低) | 25mg/kgip×10 | 7 7 | 20.4 21.8 | 2.27±0.45 | 32.4 | ＜0.001 |
表4.对裸鼠移植人结肠癌HCT-8的生长抑制
Claims (2)
1.一种(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物，其特征在于：其化学结构分子式是：
R＝(CH2)nCH3
n＝0-21。
2.一种(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物制备方法，其特征在于：该化合物采用以下的合成路线：
①、N-[(二甲氨基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成：在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L组成的浆状液中，在N2保护下缓缓加入1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷268ml，0.84mol，0.5小时后变成溶液，温度上升到34℃，4小时后开始形成固体，18小时后，将N，N-二甲基甲眯二甲缩醛加入，374ml，2.82mol，用0.3小时加毕，温度升至37℃，溶液呈黄色，4小时后，减压除去溶剂，剩余物用乙酸乙酯1L，500ml，50ml加热提取三次，合并提取液，用无水硫酸镁干燥，过滤，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加热，再加乙酸乙酯500ml以溶解剩余之固体，然后乘热过滤，冷却后，析出白色结晶得到276.3g N-[(二甲氨基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，滤液浓缩，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重结晶，又得(2)83.0g，滤液再浓缩，重结晶，又得(2)22.6g，总计得到381.9g，85％，m.p137-138℃；
②、N[(二甲氨基)甲烯]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成：在氮气保护下，在一个装有搅拌器，温度计和滴液漏斗的2L的三口瓶内放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷750ml，将溶液冷至-75℃，将21.3ml，0.3mol二甲基亚砜滴入，并控制反应温度-55℃以下，继续搅拌5分钟，再将纯(2)54g，0.1mol于二氯甲烷750ml的溶液加入，用10分钟加毕，继续搅拌30分钟，于-75℃，将三乙胺75.5ml，0.54mol加入，除去冰浴，让反应温热至室温，1小时后在室温下，混合物用等体积乙醚稀释，继续搅拌1小时，将混合物倒入装有硅胶500ml的玻璃漏斗内先用乙醚1L，再用二氯甲烷洗脱，乙醚洗下部分浓缩后用300ml的10％氯仿和90％己烷组成的混合液处理，滤集固体，干燥，得到白色粉状物36.1g N[(二甲氨基)甲烯]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷洗脱部分浓缩后用300ml的10％氯仿和90％己烷组成的混合液重结晶，另又得到(3)12.5g，总共可得到(3)48.6g，mp 169.5-171℃；
③、2’-脱氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成：将苯氟甲基砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氢呋喃800ml，氮气保护，冷却至-70℃，用注射器将16ml，0.11mol，的二乙氧基磷酰氯加到上溶液中，称取1mol的六甲基二硅氮锂放入200ml四氢呋喃，用滴液漏斗缓缓滴加到上反应瓶内，加毕，温度升至-65℃，1小时，用少量饱和氯化铵/乙酸乙酯，终止反应，薄层板检测，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氢呋喃于-60℃滴加到上反应液中，将反应液升温至0℃，0.5小时，然后再升至室温25小时，用饱和氯化铵100ml终止反应，用600ml乙醚稀释，再加适量水去溶解无机盐，将反应液倒入分液漏斗内，水层用200ml乙醚提取，醚层再用冰盐水洗，有机层用无水硫酸镁干燥，浓缩，得到71.8g，黑色粘状油状物，将此粗品溶解在甲醇中，用氨气饱和，搅拌过夜，浓缩，剩余物用1.4L硅胶柱层析分离，洗脱剂为5％正己烷和95％乙酸乙酯混合液，收集每200ml1瓶，含纯产品浓缩，干燥，得20g 2’-脱氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)纯品，不纯部分16g用高效液相乙酸乙酯溶剂纯化得到纯品11.4g，共计31.4g，以上产品用正己烷重结晶得到白色粉末状固体，熔点135-145℃；
④、2’-脱氧-2’-[氟(三丁基甲锡烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成：将样品(4)26g，0.0406mol放入500ml圆底烧瓶内，加300ml环己烷，回流15分钟，冷至室温，加32.6g0.122mol的氢化三丁基锡和500mg的偶氮二异丁氰回流18小时，薄层层析检测，15％甲醇/乙酸乙酯，已没有起始原料，浓缩反应液，用14L硅胶柱层析分离，洗脱剂比例为4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，得到265g(82.8％)2’-脱氧-2’-[氟(三丁基甲锡烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，为黄色泡沫状；
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成：将(5)26g，0.033mol和氟化铯25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小时，待冷却后，溶液被部分浓缩，加75ml硅胶，此粘稠物进一步浓缩至松散流动的固体，用1L硅胶柱层析分离，纯化，用2L的50％乙酸乙酯和50％己烷组成的洗脱剂洗脱，然后用8L的10％甲醇和90％乙酸乙酯组成的混合液洗脱，将含产品部分浓缩得到9.3g的白色固体，再用50％甲醇和50％乙酸乙酯混合液20ml重结晶，得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)白色晶体，另从母液中得到1.66g，总计为5.82g，熔点167-169℃；
⑥、(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-R酰胞苷(1)的合成：在反应瓶中，加入二氧六环30ml，酸酐2.47mmol，室温加入(6)300mg，1.23mmol，和水的溶液，于80℃搅拌5小时，反应毕，于60℃减压浓缩至干，剩余物可用苯洗涤除去生成的丁酸，得到粗品(反式)-2-脱氧-2-甲基)-4-R酰胞苷，然后用二甲基亚砜重结晶，最终得到(反式)-2-脱氧-2-(氟亚甲基)-4-R酰胞苷化合物。
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