CN100361568C

CN100361568C - 安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法

Info

Publication number: CN100361568C
Application number: CNB2005100134948A
Authority: CN
Inventors: 季静; 王罡; 姚振; 孙文君; 王萍
Original assignee: LONG KANGTAI BIOTECH CO Ltd TIANJIN
Current assignee: LONG KANGTAI BIOTECH CO Ltd TIANJIN
Priority date: 2005-05-12
Filing date: 2005-05-12
Publication date: 2008-01-16
Anticipated expiration: 2025-05-12
Also published as: CN1695428A

Abstract

本发明涉及安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法。应用安祖花的组织包括商品安祖花嫩叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、气生根尖、火焰苞、火焰苞基、以及幼苗的叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、茎节、茎等部分组织作为外植体，通过培养基控制愈伤组织发育过程，由愈伤组织直接诱导球型胚团，利用球型胚团来进行快繁，它的优点是快繁材料选材方便、准确、快速，快繁苗量大、稳定、简便。利用安祖花组织直接诱导球型胚团快繁的方法，进行快速繁殖，其植株繁殖数量可进行产业化生产，是一种价格低廉，操作方便而实用的方法。

Description

安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法

技术领域

本发明涉及花卉快速繁殖技术；特别是一种安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法。由愈伤组织直接诱导球型胚团，再利用同一培养基使球型胚团长出5-300株幼苗来进行快繁，它的优点是快繁材料选材方便、准确、快速、快繁苗量大、稳定、简便，避免了体细胞胚诱导的繁杂技术程序和过程。其植株繁殖数量可进行产业化生产，且价格低廉，操作方便，实用于企业。

背景技术

安祖花(anthurium)又名红掌、花烛、火鹤花等，栽培品种主要是由andreanum和scherzerianum两个种经杂交选育而成，属于天南星科花烛属，多年生常绿草本植物，可常年开花，一般植株长到一定时期，每个叶腋处都能抽生花蕾并开花。红掌常采用异花授粉，授粉方式主要借助于昆虫，如蜜蜂、蝴蝶、飞蛾等。安祖花原产于哥斯达黎加、哥伦比亚等热带雨林区，常附生在树上，有时附生在岩石上或直接生长在地上，性喜温暖、潮湿、半阴的环境，忌阳光直射。

现有的安祖花繁殖方法主要有四种：组培苗、切株、穴盘苗和盆栽苗。一个基本的原则：越小的植株，栽培难度越大。切株、穴盘苗和盆栽苗法进行安祖花繁殖，繁殖率极低，播种繁殖所需时间长，且易产生变异。最先进、科学、快速的方法是利用组织培养进行快速繁殖，即将安祖花的外植体在培养基中培养，通过诱导产生愈伤组织、发芽、生根、移植栽培等过程进行快速繁殖。

中国专利200310109713.3公开了安祖花体细胞胚诱导快速繁殖方法，安祖花组织一步诱导球型胚团的快繁方法未见报道。

发明内容

本发明的目的是提出一种安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法。本发明的快繁方法可用同一种培养基将愈伤组织诱导、球型胚团形成、幼苗分化等一步完成，解决目前尚无用安祖花组织直接诱导球型胚团的快速繁殖安祖花的问题，是一种安祖花组织一步诱导球型胚团的快繁方法，特点为：安祖花快繁材料选材方便、准确、快速、快繁苗量大、稳定、简便，避免了体细胞胚诱导的繁杂技术程序和过程、便于花卉企业进行产业化生产的快速繁殖方法。

本发明安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法，其特征在于它包含下列各步骤：

1)取安祖花外植体，活体灭菌5-10分钟，在无菌室或超净工作台上，将上述组织利用剪刀剪碎，放入球型胚团诱导培养基中，温度20-30℃，培养基25-70天；

2)更换培养基，在光照下进行培养，每天光照7-15小时，光强为20000-35000勒克斯，最大光照强度不可长期超过35000勒克斯，25-70天更换培养基，继续培养直至愈伤组织团长至较大形成小型球型胚团；每块球型胚团能够长出5-300株幼苗不等。

3)将球型胚团组织块换瓶，25-70天更换培养基，直至球型胚团长出幼苗；

4)将幼苗切下放入生根培养基中，长成完整的植株。

所述的安祖花外植体是：安祖花的嫩叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、气生根尖、火焰苞、火焰苞基；以及幼苗的叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、茎节或茎部分。

所述的步骤2)的愈伤组织切分成多块愈伤组织块培养。

所述的诱导球型胚团的培养基配方为：1/2MS(或MS)(基本培养基)+BA(6-苄基腺嘌呤)0-2.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0-1mg/L+KT(N⁶-呋喃甲基腺嘌呤)0-2.5mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0-1mg/L+3％蔗糖或葡萄糖。所述生根培养基配方浓度为：1/2MS(基本培养基)+IBA(3-吲哚丁酸)0-1mg/L+NAA(α-萘乙酸)0-1mg/L+3％蔗糖。

本发明的技术方案详细描述如下：

成熟植株组织培养取材组织的特征

成熟植株可从温室或市售花获得，实验表明红花、粉花、白花等各种类型安祖花都可作为组织培养取材材料。取材组织包括：嫩叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、气生根尖、火焰苞、火焰苞基等都可取材来诱导愈伤组织。茎轴、茎尖的取材是将叶片从根部扒掉，去除，再取茎轴、茎尖，这种操作需要破坏部分甚至整个植株。嫩叶、叶片柄端、叶柄、气生根尖、火焰苞、火焰苞基等组织取材比较简单，直接将所述组织取下进行组织灭菌即可，具体取材组织部位见图1、2。图1火焰苞、火焰苞基的取材；图2嫩叶、叶片柄端的取材。

幼小植株(花苗)组织培养取材组织部位的特征

幼苗的叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、茎节、茎等部分组织都可作为外植体进行取材，无菌苗也可取材，并可省略组织灭菌这一道操作，植株特征见图3，4，幼小植株组织图。幼小植株组织比较薄弱，操作时应尽量温柔，以免伤及细胞。

植物组织材料灭菌

取图1、图2中所述植物组织块作为外植体进行组织培养，首先要进行组织灭菌，一般用的灭菌液有乙醇(75％)、升汞(0.1％)、次氯酸钠(20％)等，这三种灭菌液任何一种都可起到活体组织灭菌作用。按要求取下尽量大的组织块，先用自来水洗净，再用蒸馏水冲洗3次，之后放入75％乙醇中1分钟，用无菌水冲洗2次，用上述升汞、或次氯酸钠浸泡5-10分钟，取出，再用无菌水冲洗3次，即可备用作组织培养材料。

诱导球型胚团及形成幼苗(图5、图6))在无菌室或超净工作台上，将上述组织利用剪刀剪碎，放入球型胚团诱导培养基中，培养直至愈伤组织团长至较大形成小型球型胚团；每块球型胚团能够长出5-300株幼苗不等。

剪下幼苗生根(图7、图8)将幼苗在球型胚团上剪下，放入上述生根培养基中，生根。

移栽可供产业化生产(图9)。

本发明通过培养基控制愈伤组织发育过程，由愈伤组织直接诱导球型胚团，再利用同一培养基使球型胚团长出5-300株幼苗来进行快繁，它的优点是快繁材料选材方便、准确、快速、快繁苗量大、稳定、简便，避免了体细胞胚诱导的繁杂技术程序和过程。利用本简单适用的安祖花组织一步诱导球型胚团快繁的方法，进行快速繁殖，其植株繁殖数量可进行产业化生产，且价格低廉，操作方便，实用于企业。

附图说明

图1、火焰苞、火焰苞基的取材部位。

图2、嫩叶、叶片柄端的取材部位。

图、3、4幼小植株组织图。

图5、图6球型胚团形成幼苗图。

图7、图8剪下幼苗生根图。

图9、移栽可供产业化生产幼苗。

图、10-12，嫩叶、叶片柄端组织培养形成愈伤组织及球型胚团。

图、13-15茎轴、茎尖、茎节组织培养形成愈伤组织及球型胚团。

图、16-18叶柄、气生根尖组织培养形成愈伤组织及球型胚团。

具体实施方式

实施例1：叶片、叶片柄端组织培养形成球型胚团及幼苗

取安祖花(取自吉林省长春市国联花卉基地售花处温室)成熟植株嫩叶或幼小植株(花苗)的叶片，如上所述灭菌(先用自来水洗净，再用蒸馏水冲洗3次，之后放入75％乙醇中1分钟，用无菌水冲洗2次，用升汞、或次氯酸钠浸泡5-10分钟，取出，再用无菌水冲洗3次，即可备用作组织培养材料)，在无菌条件下将其剪碎如图10，放入上述培养基：1/2MS(基本培养基)+BA(6-苄基腺嘌呤)0.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0.1mg/L+KT(N⁶-呋喃甲基腺嘌呤)0mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0mg/L+3％蔗糖。在光照下进行培养，每天光照7-15小时，光强为30000勒克斯，70天更换培养基，继续培养直至愈伤组织团长至较大形成小型球型胚团；每块球型胚团能够长出5-300株幼苗不等，将幼苗剪下，移置于生根培养基，所述的生根培养基配方为：1/2MS(基本培养基)+NAA(α-萘乙酸)0.5mg/L+IBA(3-吲哚丁酸)：0mg/L+3％蔗糖，直至长成完整植株。见图10-12，叶片柄端组织培养形成愈伤组织、球型胚团及幼苗。

实施例2：茎轴、茎尖、茎节组织培养形成球型胚团及幼苗

取安祖花(取自吉林省长春市国联花卉基地售花处温室)成株或幼苗，去其叶取其茎轴、茎尖、茎节，如上所述灭菌(先用自来水洗净，再用蒸馏水冲洗3次，之后放入75％乙醇中1分钟，用无菌水冲洗2次，用升汞、或次氯酸钠浸泡5-10分钟，取出，再用无菌水冲洗3次，即可备用作组织培养材料)，在无菌条件下将其切碎如图13，放入上述培养基中：1/2MS(基本培养基)+BA(6-苄基腺嘌呤)1mg/L+NAA(α-萘乙酸)0.1mg/L+KT(N⁶-呋喃甲基腺嘌呤)0.1mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0mg/L+3％蔗糖或葡萄糖放入上述培养基上，先暗培养3-7天，之后在光照下进行培养，每天光照7-15小时，光强为25000勒克斯，25天更换培养基，继续培养直至愈伤组织团长至较大形成小型球型胚团；每块球型胚团能够长出5-300株幼苗不等，将幼苗剪下，移置于生根培养基，所述的生根培养基配方为：1/2MS(基本培养基)+NAA(α-萘乙酸)0.5mg/L+3-吲哚丁酸(IBA)：0mg/L+3％蔗糖，直至长成完整植株。图13-15是茎轴、茎尖、茎节组织培养形成愈伤组织、球型胚团及幼苗。

实施例3：叶柄、气生根尖组织培养形成球型胚团及幼苗

取安祖花(取自长春市花鸟鱼虫批发市场盆花)成株的叶柄、气生根尖或幼苗的叶柄，如上所述灭菌(先用自来水洗净，再用蒸馏水冲洗3次，之后放入75％乙醇中1分钟，用无菌水冲洗2次，用升汞、或次氯酸钠浸泡5-10分钟，取出，再用无菌水冲洗3次，即可备用作组织培养材料)，在无菌条件下将其切成3mm长的段如图16，放入上述培养基：1/2MS(基本培养基)+BA(6-苄基腺嘌呤)1mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0.1mg/L+KT(N⁶-呋喃甲基腺嘌呤)0mg/L+3％蔗糖，在光照下进行培养，每天光照7-15小时，光强为25000勒克斯，45天更换培养基，继续培养直至愈伤组织团长至较大形成小型球型胚团；每块球型胚团能够长出5-300株幼苗不等，将幼苗剪下，移置于生根培养基，所述的生根培养基配方为：1/2MS(基本培养基)+3-吲哚丁酸(IBA)：0.5mg/L+α-萘乙酸(NAA)：0mg/L+3％蔗糖，直至长成完整植株。图16-18是叶柄、气生根尖组织培养形成愈伤组织、球型胚团及幼苗。

Claims

1.一种安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法，其特征在于它包含下列各步骤：

1)取安祖花外植体，活体灭菌5-10分钟，在无菌室或超净工作台上，将上述组织利用剪刀剪碎，放入球型胚团诱导培养基中，温度20-30℃，培养25-70天；

2)更换培养基，在光照下进行培养，每天光照7-15小时，光强为20000-35000勒克斯，25-70天更换培养基，继续培养直至愈伤组织团长至较大形成小型球型胚团；

4)将幼苗其基部切下放入生根培养基中，长成完整的植株；

所述的诱导球型胚团的培养基配方为：MS或1/2MS+6-苄基腺嘌呤0-2.5mg/L+α-萘乙酸0-1mg/L+N⁶-呋喃甲基腺嘌呤0-2.0mg/L+2，4-二氯苯氧乙酸0-1mg/L+3％蔗糖或葡萄糖；

所述的生根培养基配方为：1/2MS+3-吲哚丁酸0-1mg/L+α-萘乙酸0-1mg/L+3％蔗糖。

2.按照权利要求1所述的安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法，其特征在于所述的安祖花外植体是：安祖花的嫩叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、气生根尖、火焰苞或火焰苞基。

3.按照权利要求1所述的安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法，其特征在于所述的安祖花外植体是：幼苗的叶、叶片柄端、叶柄、茎轴、茎尖、茎节或茎部分。

4.按照权利要求1所述的安祖花组织直接诱导球型胚团的快繁方法，其特征在于所述的步骤2)的愈伤组织切分成多块愈伤组织块培养。