CN100356854C - 一种植物杀钉螺剂及其制备方法与使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种植物杀钉螺剂及其制备方法与使用方法，具体为：银杏外种皮石油醚提取物，是将银杏外种皮粉碎后加入石油醚(沸程60～90℃)，经超声萃取得到的浸膏、银杏外种皮乙酸乙酯提取物，是将银杏外种皮粉碎后加入乙酸乙酯，75℃回流提取2～3h，得到的浸膏或银杏外种皮乙醇提取物，是将银杏外种皮粉碎后，加入乙醇，70℃回流2～3h，提取得到的浸膏。本发明使用的原材料来源广泛、成本低廉、环保、制备工艺简单、便于工业化生产、使用方便，便于在银杏资源丰富的疫区大规模推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及农药，特指一种植物杀钉螺剂及其制备方法与使用方法。
背景技术
血吸虫病是由于人或哺乳动物感染了血吸虫所引起的一种疾病，是一种烈性急性传染病，如得不到有效的控制，患者将逐渐丧失劳动能力，直至危害生命。
目前，中国约有血吸虫病人81万。据卫生部门统计，中国目前血吸虫病尚未得到控制的地区主要集中在长江流域的湖南、湖北、江西、安徽、江苏、四川、云南7省的110个县(市、区)，生活在疫区的人口约6000万。重疫区主要是江汉平原、洞庭湖区、鄱阳湖区、沿长江的江(湖、洲)滩地区，以及四川、云南的部分山区。
钉螺是血吸虫的唯一中间宿主，消灭钉螺可以有效地切断血吸虫病的传播途径。目前主要的灭螺方法有生态灭螺、物理灭螺和药物灭螺，其中药物灭螺是一种省力、省时、见效快的重要方法。药物灭螺包括化学药物和植物药物灭螺。
从50年代起，我国常用的有效化学灭螺药物有五氯酚钠、氯硝柳胺、溴乙酰胺、石灰氮、生石灰和敌百虫等。五氯酚钠是我国使用较早的灭螺药物，灭螺效果好，但毒性大、对人、家禽以及水生动物都有毒害，目前已逐步禁止使用。石灰氮、生石灰来源广，但用量大、对皮肤有较强的刺激作用。溴乙酰胺和由世界卫生组织推荐的氯硝柳胺杀螺剂由于对鱼类等非靶生物有较大毒性，且价格昂贵，难于大面积和长期运用。
植物来源的灭螺药物，特别采用在是当地具有丰富资源的植物或农产品加工废弃物灭螺，具有化学药物无法比拟的优势：来源丰富、成本低廉、对环境的污染小。目前效果比较好的植物灭螺药物有茶子饼、黄杜鹃、龙芽草等。
我国先行选择灭螺药物的标准是安全、有效、价廉和使用方便。因此结合当地资源情况，从本地资源丰富的植物或农产品加工废弃物中寻找有效的植物灭螺药物是杀灭钉螺、控制血吸虫病传播的方向之一。
我国是银杏资源的大国，占世界银杏资源的70％以上。江苏和广西两省又是我国银杏资源的主要省份。江苏的邳县和三泰地区都植有大规模的银杏园。仅泰兴市年产白果约3500吨，全省年产白果约5000吨以上。与此相对应，每年全省的银杏外种皮就在1万吨以上。而就全国估计每年至少有3万吨新鲜的银杏外种皮，除去水分，干银杏外种皮每年约有1.2万吨。这些外种皮现在基本上作为废弃物，剥离后作为肥料还田或作为农家燃料被烧掉。
因此采用在我省仍至我国有着丰富资源的白果生产的废弃物——银杏外种皮作为植物来源的灭螺药物具有经济、实用的特点，易为广大群众接受。
发明内容
本发明的目的在于提供一种植物杀钉螺剂及其制备方法和使用方法。该杀钉螺剂是以在江苏省乃至我国有丰富资源的生产白果的废弃物——银杏外种皮为原料制成，能有效杀灭钉螺，以切断血吸虫病的传播途径。该杀钉螺剂具有：杀螺效果好、药物用量低、成本低廉、对环境污染小的特点，且来源丰富、经济实用、易为当地群众所接受。
本发明所述的植物杀钉螺剂，其特征在于由银杏外种皮有机溶剂提取物组成，含有银杏酸(ginkgolic acids)，具体为：
1.银杏外种皮石油醚提取物，是将银杏外种皮粉碎后加入石油醚(沸程60～90℃)，经超声萃取得到的浸膏。
2.银杏外种皮乙酸乙酯提取物，是将银杏外种皮粉碎后加入乙酸乙酯，75℃回流提取2～3h，得到的浸膏。
3.银杏外种皮乙醇提取物，是将银杏外种皮粉碎后，加入乙醇，70℃回流2～3h，提取得到的浸膏。
上述的银杏外种皮是指包裹在银杏(Ginkgo biloba L.)果实——白果外的胞衣层。
本发明的植物杀钉螺药物可以直接在有钉螺的水域使用，也可与杀钉螺药物的增效剂，如槟榔碱配合使用。
本植物杀钉螺剂的制作方法：
1.银杏外种皮石油醚提取物的制作方法：取干银杏外种皮粉碎后，按1∶5～1∶10的比例加入石油醚，超声萃取多次，每次1～2h，减压过滤，挥去溶剂得浸膏。
2.银杏外种皮乙酸乙酯提取物的制作方法：取干银杏外种皮粉碎后，按1∶5～1∶10的比例加入乙酸乙酯，75℃回流提取多次，每次2～3h，减压过滤，挥去溶剂得浸膏。
3.银杏外种皮乙醇提取物的制备方法：取干银杏外种皮粉碎后，按1∶5～1∶10的比例加入乙醇，70℃回流提取多次，每次2～3h，减压过滤，挥去溶剂得浸膏。
本发明的使用方法为：进行灭钉螺时，将浸膏以二甲基甲酰胺或乙醇或丙酮等溶剂溶解后加入水中，浓度为0.2mg～200mg/100mL水，其中二甲基甲酰胺或乙醇或丙酮的含量不超过0.5mL～1mL/100mL水。
且可将所述浸膏的二甲基甲酰胺或乙醇或丙酮溶液与氢溴酸槟榔碱或槟榔水提物的水溶液(以其中槟榔碱含量为基准)按浓度2.5∶1～1∶25的比例加入到含钉螺水域中，进行联合灭螺。
本发明的优点在于：
(1)根据血吸虫病传播的特点，采用的杀钉螺物质能有效地杀灭钉螺，切断血吸虫的传播途径。
(2)提供的杀钉螺剂采用在江苏省仍至全国有着丰富资源的白果生产的废弃物——银杏外种皮，原材料来源广泛，成本低廉。具有环保的特点。
(3)直接采用银杏外种皮的初步提取物制作杀钉螺药物，具有制备工艺简单，便于工业化生产、使用方便的特点，便于在银杏资源丰富的疫区大规模推广应用。
具体实施方式
下面举例对本发明作详细的描述：
实施例1：称取干银杏外种皮100g粉碎，5倍量石油醚超声萃取三次，每次2h，合并提取液，减压过滤，挥去溶剂成石油醚浸膏。将浸膏以二甲基甲酰胺溶解后配成待用药液，加入到钉螺生活的水中，其中二甲基甲酰胺的含量不超过0.5mL/100mL水。
实施例2：称取干银杏外种皮100g粉碎，5倍量乙酸乙酯75℃回流提取三次，每次2h，合并提取液，减压过滤，挥取溶剂成乙酸乙酯浸膏。将浸膏以二甲基甲酰胺溶解配成待用药液，加入到钉螺生活的水中，其中二甲基甲酰胺含量不超过0.5mL/100mL水。
实施例3：称取干银杏外种皮100g粉碎，5倍量乙醇70℃回流提取三次，每次3h，合并提取液，减压过滤，挥取溶剂成乙醇浸膏。将浸膏以二甲基甲酰胺溶解配成待用药液，加入到钉螺生活的水中，其中二甲基甲酰胺的含量不超过0.5mL/100mL水。
实施例4：称取干银杏外种皮100g粉碎，8倍量石油醚超声萃取三次，每次2h，合并提取液，减压过滤，挥去溶剂成石油醚浸膏。将浸膏以乙醇溶解后配成待用药液，加入到钉螺生活的水中，其中乙醇的含量不超过0.5mL/100mL水。
实施例5：称取干银杏外种皮100g粉碎，8倍量乙酸乙酯75℃回流提取三次，每次2h，合并提取液，减压过滤，挥取溶剂成乙酸乙酯浸膏。将浸膏以乙醇溶解配成待用药液，加入到钉螺生活的水中，其中乙醇含量不超过0.5mL/100mL水。
实施例6：称取干银杏外种皮100g粉碎，8倍量乙醇70℃回流提取三次，每次3h，合并提取液，减压过滤，挥取溶剂成乙醇浸膏。将浸膏以丙酮溶解配成待用药液，加入到钉螺生活的水中，其中丙酮的含量不超过0.5mL/100mL水。
实施例7：银杏外种皮石油醚浸膏与氢溴酸槟榔碱的联合灭钉螺试验。
将银杏酸外种皮石油醚浸膏用二甲基甲酰胺配成浓度为3.2mg/mL的溶液，对半稀释成四个浓度梯度；氢溴酸槟榔碱用水配成50mg/mL浓度的溶液。分别取0.5mL四个浓度石油醚浸膏的二甲基甲酰胺溶液、100μL氢溴酸槟榔碱水溶液加入100mL饲养钉螺的水中(其中石油醚提取物与氢溴酸槟榔碱的浓度比为1∶3、1∶6、1∶12.5、1∶25)，并于24h、48h、72h、96h观察钉螺的存活率。
实施例8：银杏外种皮石油醚浸膏与槟榔水提物的联合灭钉螺试验。槟榔水提物的制备：称取5目槟榔粗粉100g加2％硫酸500mL超声提取2h，滤过，残渣再加重复提取一次，合并滤液，70℃浓缩，得浸膏26.5克。并用酸碱滴定法测出浸膏中槟榔碱含量为10mg/g浸膏。银杏酸外种皮石油醚浸膏用二甲基甲酰胺配成浓度为3.2mg/mL的溶液，对半稀释成四个浓度梯度为3.2mg/mL、1.6mg/mL、0.8mg/mL、0.4mg/mL；槟榔水提物按其中槟榔碱的含量配成浓度为0.625mg槟榔碱/mL水的溶液。分别取0.5mL四个浓度石油醚浸膏的二甲基甲酰胺溶液、1.0mL槟榔水提物的水溶液加入100mL饲养钉螺的水中(其中石油醚提取物与槟榔碱浓度比分别为2.5∶1、1.2∶1、1∶1.5和1∶3)，并于24h、48h、72h、96h观察钉螺的存活率。
以实施例1～3的产品和实施例7、8为研究对象，进行该杀螺剂的杀螺功效实验，结果表明，该杀钉螺剂具有良好的杀螺效果。
1.银杏外种皮石油醚提取物的灭螺效果：
采用浸杀法进行银杏外种皮石油醚提取物的灭螺试验。用尼龙窗纱制成螺袋，每袋装20只鲜活螺，以4袋为一组，浸没于溶有0.5mL药液的100ml去氯水中，以含0.5％(v/v)二甲基甲酰胺的去氯水为溶剂对照组；以去氯水作为阴性对照。分别于24h、48h、72h、96h各取出一袋钉螺，用去氯水清洗三次，饲养4h后40倍显微镜下观察钉螺的存活率，以未见活动，并用针刺无反应者判为死螺。
25℃恒温下，在实验室进行多批不同浓度和不同时间的浸泡杀螺试验，结果显示：浸泡24h时，银杏外种皮石油醚提取物剂量为3.12mg/100mL水时，钉螺死亡率达90％；6.25mg/100mL水时，钉螺死亡率达95％；12.5mg/100mL水时，钉螺死亡率可达100％。浸泡48h时，银杏外种皮石油醚提取物剂量为0.78mg/100mL水时，钉螺死亡率达100％。如此低剂量的植物杀螺剂并不多见。而溶剂对照组和阴性对照组，浸泡96h，钉螺全部存活，死亡率为0％。说明100mL水中加入0.5mL的DMF对钉螺的存活率没有影响。
2.银杏外种皮乙酸乙酯提取物的灭螺效果：
采用浸杀法进行银杏外种皮乙酸乙酯提取物的灭螺试验。25℃恒温下，结果显示：浸泡24h时，银杏外种皮乙酸乙酯提取物剂量为3.12mg/100mL水时，钉螺死亡率达85％；12.5mg/100mL时，钉螺死亡率可达100％。浸泡48h时，银杏外种皮乙酸乙酯提取物剂量为1.56mg/100mL水时，钉螺死亡率达100％。而溶剂对照组和阴性对照组，浸泡96h，钉螺全部存活，死亡率为0％。
3.银杏外种皮乙醇提取物的灭螺效果：
采用浸杀法进行银杏外种皮乙醇提取物的灭螺试验。25℃恒温下，结果显示：浸泡24h时，银杏外种皮乙醇提取物剂量为6.25mg/100mL水时，钉螺死亡率达60％；12.5mg/100mL水时，钉螺死亡率达75％；25.0mg/100mL时，钉螺死亡率可达100％。浸泡48h时，银杏外种皮乙醇提取物剂量为12.5mg/100mL水时，钉螺死亡率达100％。而溶剂对照组和阴性对照组，浸泡48h，钉螺全部存活，死亡率为0％。
银杏外种皮的石油醚、乙酸乙酯和乙醇三种有机溶剂提取物灭螺效果的比较，见表1。由表1可见，在三种银杏外种皮的有机溶剂提取物中，以石油醚提取物的灭螺效果最好、乙酸乙酯提取物的灭螺效果次之、乙醇提取物的灭螺效果在三者中最差。通过24h浸泡，三组提取物使钉螺死亡率达100％的最低浓度分别为：石油醚提取物和乙酸乙酯提取物都为12.5mg/100mL水，而乙醇提取物的浓度需达到25.0mg/100mL水；经过48h浸泡，三组提取物使钉螺死亡率达100％的最低浓度分别是：石油醚提取物0.78mg/100mL水、乙酸乙酯提取物1.56mg/100mL水、乙醇提取物12.5mg/100mL水。总的趋势是，随着浸泡时间的延长，钉螺的死亡率上升，使钉螺全部死亡所需的最低药物浓度降低。在试验过程中，溶剂对照组和阴性对照组的钉螺没有出现死亡，说明浓度为0.5mL/100mL水的二甲基甲酰胺对钉螺的生长没有影响。
表1银杏外种皮石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物灭螺效果比较
| 组 | 剂 量(mg/100mL水) | 24h | 48h | 72h | 96h | ||||
| 存活数(只) | 死亡率(％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | ||
| 石油醚提取物组乙酸乙酯提取物组乙醇提取物组溶剂组 | 100.050.025.012.56.253.121.560.78100.050.025.012.56.253.121.560.78100.050.025.012.56.253.121.560.78DMF0.5mL+100mL 水 | 00001251000004320180105816202020 | 10010010010095907550100100100100808501010095100756020000 | 0000000000000004000116171720 | 10010010010010010010010010010010010010010010080100100100100957015150 | 000000000000000500000042020 | 100100100100100100100100100100100100100100100751001001001001001008000 | 00000000000000011-----_--20 | 10010010010010010010010010010010010010010010045_-------0 |
| 阴性 | 100mL水 | 20 | 0 | 20 | 0 | 20 | 0 | 20 | 0 |
注：“-”表示未测
4.银杏外种皮石油醚浸膏与氢溴酸槟榔碱的联合灭螺作用：
试验方法同前，采用浸杀法进行银杏酸外种皮石油醚提取物与氢溴酸槟榔碱的联合灭螺试验，氢溴酸槟榔碱(供含量测定的对照品)购自中国药品生物制品研究所，以蒸馏水配成溶液备用。
25℃恒温下，结果显示(见表2)：银杏外种皮石油醚提取物的浓度为1.6mg/100mL水时，浸泡24h，钉螺的死亡率为60％；加入5mg氢溴酸槟榔碱后，钉螺死亡率达到了100％。氢溴酸槟榔碱的加入，降低了银杏外种皮石油醚提取物的用量。说明氢溴酸槟榔碱与银杏外种皮石油醚提取物具有协同灭螺作用。试验中发现氢溴酸槟榔碱对照组中也出现了钉螺死亡现象，作为一种灭螺增效剂，氢溴酸槟榔碱的浓度还可以降低。
表2银杏外种皮石油醚提取物与氢溴酸槟榔碱的联合灭螺效果
| 分组 | 剂量(mg/100mL水 | 24h | 48h | 72h | 96h | ||||
| 存活数(只) | 死亡率(％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | ||
| 石油醚提取物组石油醚提取物+槟榔碱槟榔对照组 | 1.60.80.40.21.6+5.00.8+5.00.4+5.00.2+5.0槟榔碱5.0+DMF0.5mL | 81618190171217 | 602010510095654015 | 025500000 | 100907575100100100100100 | 001000000 | 10010095100100100100100100 | 000000000 | 100100100100100100100100100 |
| 阴性对照 | 100mL水 | 20 | 0 | 20 | 0 | 20 | 0 | 20 | 0 |
5.银杏外种皮石油醚浸膏与槟榔水提物的联合灭螺作用：
试验方法同前，采用浸杀法进行银杏酸外种皮石油醚提取物与槟榔水提物的联合灭螺试验，槟榔水提物的制备见实施例8，以其中槟榔碱含量为基准配成0.625mg槟榔碱/mL水溶液。灭钉螺时每100mL水中加入0.5mL石油醚浸膏和1.0mL配置的槟榔水提物的水溶液。
25℃恒温下，结果见表3。根据24h的观察结果：槟榔水提物对照组钉螺100％存活，浓度为0.2rog/100mL水石油醚浸膏组，钉螺存活率为95％，说明在这两种浓度条件下，槟榔与银杏外种皮浸膏对钉螺的影响很小。但将这两种浓度的槟榔水提物与银杏外种皮浸膏联用时，钉螺的存活率仅为15％，两者联用使钉螺的存活率急剧下降，说明槟榔对银杏石油醚浸膏的灭螺有很好的增效作用，其增效效果高于纯的氢溴酸槟榔碱。
表3银杏外种皮石油醚提取物与槟榔水提物的联合灭螺效果
| 分组 | 齐量(mg/100ml水) | 24h | 48h | 72h | 96h | ||||
| 存活数只) | 死亡率％) | 存活数(只) | 死亡率％) | 存活数只) | 死亡率％) | 存活数(只) | 死亡率(％) | ||
| 石油醚提取物组石油醚提取物+槟榔水提物槟榔水提物对照组 | 1.6O.80.4O.21.64+0.6250.8+0.6250.4+0.6250.2+0.625槟榔碱O.625+DMF0.5mL | 8161819100320 | 602010595100100850 | 0255000113 | 1009075751001001009535 | 0010000010 | 1001009510010010010010050 | 000000002 | 10010010010010010010010090 |
| 阴性对照 | 100mL水 | 20 | O | 20 | 0 | 20 | 0 | 20 | 0 |
Claims (3)
1.一种植物杀钉螺剂，其特征在于由银杏外种皮有机溶剂提取物组成，含有银杏酸；
具体为：银杏外种皮乙酸乙酯提取物，是将银杏外种皮粉碎后加入乙酸乙酯，75℃回流提取2～3小时，得到的浸膏；其中上述的银杏外种皮是指包裹在银杏果实-白果外的胞衣层。
2.权利要求1所述银杏外种皮乙酸乙酯提取物的制备方法，其特征在于取干银杏外种皮粉碎后，按1∶5～1∶10的比例加入乙酸乙酯，75℃回流提取2～3小时，减压过滤，挥去溶剂得浸膏。
3.权利要求1所述的一种植物杀钉螺剂的使用方法，其特征为：进行灭钉螺时，将权利要求1所述浸膏以二甲基甲酰胺或乙醇溶剂溶解后加入水中，浓度为0.2mg～200mg/100mL水，其中二甲基甲酰胺或乙醇或丙酮溶剂的含量不超过0.5mL～1mL/100mL水。
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Legal Events
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20071226 Termination date: 20101130 |