CN100339472C - 一种绿僵菌银纹夜蛾亚种及其杀虫培育使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种可以导致多种农作物害虫僵病死亡的绿僵菌银纹夜蛾亚种，同时本发明还涉及其杀虫培育使用方法，属于微生物技术领域。本发明的金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种于2004年12月5日在武汉中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为：CCTCCNO：M204078，拉丁学名为Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8。试验表明，本发明对害虫及其杀灭效果十分理想，对其它动植物无任何影响。由此证明MaGXW26-8能够作为新一代绿色农药——生物杀虫剂开发。
Description
技术领域
本发明涉及一种真菌，尤其是一种可以导致多种农作物害虫僵病死亡的绿僵菌银纹夜蛾亚种，同时本发明还涉及其杀虫培育使用方法，属于微生物技术领域。
背景技术
据申请人了解，夜蛾科害虫是多数农作物、尤其是蔬菜类作物的害虫。
长期以来，抑制和消灭害虫一直是人类争取农业增收的主要措施。近年来，害虫的生物防治研究取得了明显进展。根据2005年4月中国农业科学技术出版社发行的《迈入二十一世纪的中国生物防治》一书中介绍，目前我国推广的真菌生物农药主要是白僵菌及绿僵菌系列产品，如防治蛴螬的白僵菌及蝗虫绿僵菌等。
这些真菌杀虫制剂虽有一定的杀虫效果，但杀虫范围较窄。尤其是对蔬菜危害较重的夜蛾科害虫防效较差。
发明内容
本发明的目的在于：针对目前蔬菜生产中危害性较大、抗药性较强、一般药剂防效较差的鳞翅目夜蛾科害虫，给出一种可以高效杀灭多种农作物害虫，并且使用安全，对动植物无毒害作用，不污染环境的绿僵菌银纹夜蛾亚种，同时给出其杀虫培育使用方法。
本发明的金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种于2004年12月5日在武汉中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的保藏，保藏编号为：CCTCCNO：M204078拉丁学名为Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8(下文简称MaGXW26-8)。
其个体形态特征为：菌落(PDA培养基)3.5μm，绒毛状，表面颜色为白色→橄榄绿色，无分泌色素，气生菌丝丰茂，有分隔，无核，无足细胞，气生菌丝有分枝，分生胞子梗单生，瓶梗柱状单生，菌丝末端产生分生胞子，外生胞子长串链状，椭圆形，大小3-4μm×5-8μm，表面光滑，连状形式，无分散与对称。
生理生化特性为：能利用多种碳水化合物，包括a-D葡萄糖、D-果糖、吐温80、阿东糖醇、D-阿拉伯糖、D-阿拉伯醇、半乳糖、m-肌醇、D-乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、蜜二糖，能利用少量的D-纤维二糖和甘油，不能利用D-半乳糖醛酸、琥珀酸、癸二酸、L-鼠李糖和D-棉子糖。
本发明MaGXW26-8培育使用方法可采取三级培养法，步骤如下：
A.将分离、筛选、纯化的MaGXW26-8菌株用试管或菌种瓶进行斜面培养，温度27-28℃，光照3000Lx，时间120-130小时，PH值6.8-6.9；
B.挑选斜面上生活率高的优良菌株，接种到液体培养罐内，进行液体培养；
C.再将液体菌种罐内的菌种按固体发酵罐内培养料的5-15％加入到发酵罐内，在27-28℃环境下进行120-130小时的培养，当料面长出丰茂的菌丝和孢子，由白转绿色时，进行恒温干燥处理，使含水量低于5％。
D.粉碎、包装，粉剂细度小于60目，每克基质中的孢子含量达1.5×1010。
E.使用时将菌剂稀释后洒到害虫取食生活的环境中。稀释倍数以(0.5-1)×107为宜。
观察发现，接触菌剂的害虫12-24小时取食渐减，36-42小时虫体软而放松，达最长，药后44-50小时虫体背面出现大小不等的黑斑，头部上仰，并渐停止运动，56-60小时，虫体趋向僵化并死亡。分析证明MaGXW26-8菌剂害虫接触和服食后，孢子萌发，分泌溶解酶，菌丝穿越体壁，并很快发育，充满体腔，同时被害虫服食的MaGXW26-8菌剂在体内产生一种椭圆形状的孢子，分泌粘稠状黄白色的毒素(如蛋白质酶、几丁质酶、脂酶等)阻止和破坏害虫的生理生化及代谢过程，从而导致和加速害虫的死亡。因此具有独特的杀虫机理和效果。对动植物和生态环境无任何影响，所以可作为新一代绿色生物杀虫剂来开发。
有关专家认为：金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种，是绿僵菌中唯一的夜蛾科害虫的病原真菌，根据Sovokin1883年建立的绿僵菌属后依据形态学，先后认定和发表了12个种或变种(而金龟子绿僵菌被TuHoeh分为2个变种即大孢和小孢变种，只能表明对金龟子有病原性)，而金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种是2004年4月从银纹夜蛾高龄幼虫尸体上分离出来的，为首次发现的菌株。试验对多种夜蛾类科害虫及同翅目害虫有效的病原物，并经形态学、生理生化、RNA序列测定，鉴定命名为金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种。再加之MaGXW26-8菌株的个体特征、致病特点、生理生化反应特性以及对鳞翅目夜蛾科害虫有别现有的生物致病效果和独特之处，值得进行加快开发推广应用。
具体实施方式
实施例：
本实施例的金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种提取于2004年12月5日在武汉中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的保藏，保藏编号为：CCTCCNO：M204078拉丁学名为Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8相同的菌种，经下列步骤培育并用于杀灭鳞翅目夜蛾科及其它害虫。
A.将分离、筛选、纯化的MaGXW26-8菌株用试管或菌种瓶进行斜面培养，温度27-28℃，光照3000Lx，时间120-130小时PH值6.8-6.9。
B.挑选斜面上生活率高的优良菌株，接种到液体培养罐内，进行液体培养，时间控制在48小时±2小时为宜。
C.再将液体菌种罐内的菌种按固体发酵罐内培养料的10％加入到发酵罐内，在27-28℃环境下进行120-130小时的培养，当料面长出丰茂的孢子，由白转绿色时，进行恒温干燥处理，温度控制在35℃±3℃±为宜，使含水量低于5％。
D.粉碎、包装，粉剂细度小于60目，每克基质中的孢子含量达1.5×1010。
E.使用时将保存的菌剂稀释(0.5-1)×107后洒到害虫取食生活的环境中。
金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种的杀虫试验效果如下：
对鳞翅目夜蛾科和螟蛾科2-5龄幼虫致病死亡率
药后时间(t) 银纹夜蛾 斜纹夜蛾 大豆卷叶螟
24 - - -
72 85％ 75％ 87％
120 100％ 100％ 100％
注：试验时温度为27-28℃，相对湿度80-85％，光照强度3000-3500Lx.
2004年10月2日-10月9日，为了解MaGXW26-8对天敌类和数量影响，在包莱田喷洒浓度为1×108孢子/ml，调查面积为1平方尺。结果见后面附表。
由附表可见MaGXW26-8对天敌无不良影响。
试验表明，MaGXW26-8对害虫和杀灭效果十分理想，对其它动植物无任何影响。由此证明MaGXW26-8能够作为新一代绿色农药——生物杀虫剂开发。
附表：
| 2处理 | 调查种类 | 调查时间(t) | ||
| 24 | 72 | 120 | ||
| MaGXW26-81×108孢子/ml | 寄生蜂 | 2.1 | 2.4 | 2.3 |
| 草蛉 | 2.3 | 2.6 | 2.5 | |
| 寄生蝇 | 0.4 | 0.5 | ||
| 蚂蚁 | 4.3 | 4.6 | 4.6 | |
| 敌杀死3000倍加甲胺膦1000倍 | 寄生蜂 | 0.2 | ||
| 草蛉 | ||||
| 寄生蝇 | 1 | 0.8 | 1.4 | |
| 蚂蚁 | 3.2 | 2.1 | 2.3 | |
Claims (6)
1.金龟子绿僵菌银纹夜蛾亚种，于2004年12月5日在武汉中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为：CCTCCNO：M204078，拉丁学名为Metarhizium anisopliae var.argyrogrammaagnata GXW26-8。
2.根据权利要求1所述绿僵菌银纹夜蛾亚种的杀虫培育使用方法，其步骤为：
A.将分离、筛选、纯化的CCTCC NO：M204078菌株用试管或菌种瓶进行斜面培养，温度27-28℃，光照3000Lx，时间120-130小时，PH值6.8-6.9；
B.挑选斜面上生活率高的优良菌株，接种到液体培养罐内，进行液体培养；
C.再将液体菌种罐内的菌种按固体发酵罐内培养料的5-15％加入到发酵罐内，在27-28℃环境下进行120-130小时的培养，当料面长出丰茂的菌丝和孢子，由白转绿色时，进行恒温干燥处理，使含水量低于5％；
D.粉碎、包装，粉剂细度小于60目，每克基质中的孢子含量达1.5×1010；
E.将菌剂稀释后洒到害虫取食生活的环境中。
3.根据权利要求2所述绿僵菌银纹夜蛾亚种的杀虫培育使用方法，其特征在于：所述步骤B中的液体培养时间为48小时±2小时。
4.根据权利要求3所述绿僵菌银纹夜蛾亚种的杀虫培育使用方法，其特征在于：所述步骤C进行恒温干燥处理的温度为35℃±3℃。
5.根据权利要求4所述绿僵菌银纹夜蛾亚种的杀虫培育使用方法，其特征在于：所述步骤E中的稀释倍数为(0.5-1)×107。
6.根据权利要求1所述绿僵菌银纹夜蛾亚种作为生物杀虫剂的应用。
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| CN1840652A CN1840652A (zh) | 2006-10-04 |
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Non-Patent Citations (2)
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| 绿僵菌研究的新进展 郭素萍，科技情报开发与经济，第14卷第10期 2004 * |
| 金龟子绿僵菌固体培养条件的筛选 卢忠燕等人，应用与环境生物学报，第10卷第2期 2004 * |
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