CN100339092C - 一种用于治疗中风的中药组合物及其制备方法和其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于治疗中风的中药组合物及其制备方法和其用途。该组合物以水蛭为君药，对中风、特别是缺血性中风、尤其是以血瘀气虚为主要表现症状的缺血性中风具有很好的预防或治疗效果。本发明的组合物毒理作用研究表明：本发明组合物疗效确切、安全无毒，对以血瘀气虚为主要表现症状的缺血性中风具有很好的预防或治疗效果。

Description

一种用于治疗中风的中药组合物及其制备方法和其用途

技术领域

本发明涉及一种用于治疗中风的中药组合物。更具体地说，本发明涉及一种以水蛭为君药的中药组合物及其制备方法和其用途。

背景技术

脑血管疾病是当今世界危害人类健康的重要慢性疾病之一，也是全球人口死亡的三大主要原因之一。世界卫生组织1979年公布的资料表明：在世界57个国家中，脑卒中的死亡顺序进入前三位的就有40个国家。1995年我国统计资料表明：在城市脑卒中居死因首位，在农村居第二位。估计目前有脑卒中病人500～600万人，其中3/4的存活者有不同程度的残废^[4]。由于脑卒中发病急、死亡率高、致残率高，不仅影响人类的生命质量，也给个人、家庭、社会带来巨大的经济损失。美国每年脑卒中费用占全部卫生费用的2.6％，约65～112亿美元；英国占卫生总费用的2.5％～3％；法国占全国社会担保预算的2％；我国到2000年仅脑卒中的治疗费比1994年增长了10倍多，为所有慢性病中治疗费用增长最快的病症。且流行病学调查表明：目前脑血管疾病中出血性中风仅占18％；82％为缺血性中风，其中脑血栓形成约占急性脑血管病的55％，而且多有后遗症，国家每年因脑血栓造成的各种损失高达40亿元以上，给社会及国家带来沉重的社会问题及经济负担。因此，积极寻求治疗防治脑血管疾病及其相关疾病的有效方药，并减轻其后遗症，具有十分重要的现实意义。

补阳还五汤由清代著名医学家王清任《医林改错·半身不遂》所制，该方由黄芪、当归尾等药组成，具有补气、活血、通络功能，主治中风后遗症，并有着很好的治疗效果。但随着经济的发展，人们社会生活及饮食结构的改变，致使中风病的病机发生了明显地改变。目前，临床中风病患者多以血瘀表现为主，以气虚为主者日少；即使兼有气虚表现，也多是因瘀致虚，瘀血阻窍在前，元气渐亏在后；血瘀为本，气虚为标。因此，目前临床中风以血瘀为主要表现症状，补阳还五汤对目前临床中风治疗中呈现一定的局限性。

发明内容

发明人通过大量的临床观察，本着辨证与辨病相结合，对缺血性中风，特别是脑血栓的病因病机有了进一步的认识，认为瘀血阻窍、气血不畅，进而导致元气亏虚、脏腑机能衰退是脑血栓及其脑血管病后遗症期的基本病机。即瘀血阻窍在前，为本；元气亏虚在后，为标。从而有别于清代王清任补阳还五汤中，元气亏虚导致瘀血阻滞的传统认识，变气虚血瘀为血瘀气虚，使中医对中风后遗症期病因病机的认识有了新的飞跃。据此，发明人进而以中医理论为基础，对古代名方补阳还五汤进行加减，并通过临床实验筛选、总结和确定新的制剂产品配比，将其定位为适用于缺血性中风血瘀气虚证的脑血管疾病及其相关疾病的治疗，并通过现代工艺技术来大大提高其中活性成分的提取率，并显著提高了产品的品质和药效。

发明人通过将补阳还五汤中的君药黄芪改为破血祛瘀的水蛭，既大幅度减少黄芪在原方中的用量，且以生水蛭入药，将原方益气活血剂改为祛瘀活血之剂，使原方活血通络之功效得到明显加强，从而更加符合目前中风以血瘀为主要表现的治疗需要。同时，发明人对水蛭采用低温粉碎、膜分离浓缩、冷冻干燥等先进提取工艺，避免了传统煎煮法使水蛭活性蛋白在高温下的破坏，使其有效成分得到了最大保留，在制备工艺上有明显创新。从中药组合物的药效学试验结果和临床实践来看，该组合物明显提高了对脑血栓及其后遗症的临床疗效，具有良好地开发应用前景。

因此，本发明一是提供一种用于治疗中风的中药组合物，组合物中各组分的重量配比为：水蛭饮片0.6-60、川芎0.6-60、黄芪0.4-40、丹参0.4-40，以及适量的药学上可接受的载体。

优选组合物中各组分的重量配比为：水蛭饮片3-12、川芎3-12、黄芪2-8、丹参2-8；最优选组合物中各组分的重量配比为：水蛭饮片6、川芎6、黄芪4、丹参4。

本发明组合物中的水蛭饮片还可用鲜水蛭代替。当选用鲜水蛭来制备组合物时，其在组合物中的用量应为水蛭饮片用量的8-12倍，优选10倍。

除非另有说明，本发明涉及的百分比均为重量百分比或重量配比。

本发明的药物组合物主要通过改造补阳还五汤创制而成。方中以水蛭为君药，破血通络，搜剔积血，专化有形之瘀血。以川芎为臣，既能增强水蛭活血通络之功用，又可上行头目，引药直达脑络，而兼有使药之长。黄芪、丹参为佐，黄芪益气以行血滞，气行则血行，助水蛭活血以通络；同时，黄芪益气而能升阳，兼可协同川芎引药直达病所。丹参活血化瘀、功同“四物”，除加强水蛭活血祛瘀之力外，尚能长养阴血，安心宁神，从而可以兼制水蛭破血散血及川芎辛温耗阴之弊。四药全用，共奏祛瘀通络，益气活血之功。全方药味咸、辛、甘、苦相合，行血、益气、化瘀、安神、行气开郁并进，药性有平、微温、微寒之异，四药相配，无温燥、苦寒之弊，不损脾胃，不耗津液，安全有效。上述诸端，正是本方的特色所在，符合继承创新之旨。

方中水蛭，味咸、苦，性平，有小毒，入肝经。功擅破血逐瘀，历代医家均认为水蛭用于活血化瘀，有效专力宏的特点。李时珍《本草纲目》记载其有“逐恶血瘀血，破癥瘕积聚”之功，缪希雍《本草经疏》谓之“咸入血走血……，善破血也”。徐灵胎《本草经百种录》则日“水蛭最喜食人之血，而性又迟缓善入，迟缓则生血不伤，善入则坚积易破^[6]”。现代药理研究证实：水蛭含水蛭素和多种活性物质，其中水蛭素是目前世界上发现的最强的天然凝血酶抑制剂，有显著的抗血小板聚集、抗凝、纤溶、抗血拴、扩张血管和降低血粘度等作用，目前已广泛用于心、脑、血管等疾病的治疗^[7]。现代实验研究还发现，水蛭中含有多种生物活性成分，其所含的古今本草专著多谓其属性猛，有毒，宜炙用，但张锡纯则认为水蛭“味咸为水味，色黑为水色，气腐为水气，纯系水之精华生成，故最宜生用，甚忌火炙^[6]”。指出水蛭原于水之精气所生，炙后则伤水之精气，破血逐瘀的作用会减弱，现已得到多数临床医家的公认和药理学研究证实，故本方亦取其生用。

川芎味辛，性温，归肝、胆经。可活血行气，祛风止痛。本品辛香行散，温通血脉，前人称之为血中气药，且其性上行，《本经》认为其“主中风入脑”，《药性论》还有“治腰脚软弱，半身不遂^[6]”的记载。故本方辅之以增强水蛭的破血逐瘀功能，并引其药力直达病所——脑络。现代研究认为该药所含川芎素可抑制血栓素A₂在血小板中的生成，对血小板粘附、聚集均有明显抑制作用。

黄芪味甘，性微温，入肺、脾经。炙用可补中益气，为补气要药，尤适用于气虚血滞导致的肢体麻木、半身不遂或关节痹痛等。故黄芪桂枝五物汤、蠲痹汤、补阳还五汤等方剂均选其与祛风湿、通经络、活血化瘀药配伍以治疗痹证、中风等病证。《本经逢原》认为其“性虽温补，而能通调血脉，流引经络^[6]”。本方亦取此意，与破血逐瘀之水蛭相伍，佐其用于缺血性脑血管病的治疗，使瘀血得祛，血脉流畅，经络通利。其主要成分为多糖类和皂甙类物质，现代药理研究证实其有明显的增强机体免疫功能，并能改善脑微循环，增加脑血流量，有利于提高脑的血氧和能量供应。

丹参味苦，性微寒，入心、肝经。功可活血祛瘀，养血通脉，适用于多种瘀血为患或血行不畅的病证。《别录》谓其“专入血分，其功在于活血行血^[6]”。现代药理研究证实其主要成分丹参酮可提高纤维蛋白溶解活性，调节血液流变性，改善血液的“浓、粘、凝、聚”倾向，目前已被广泛用于治疗心、脑、血管疾病的治疗。

从文献及有关药理研究成果来看，上述四药中以水蛭活血化瘀力量为最强，川芎、丹参次之，其中目前临床上单纯应用川芎嗪注射液、丹参注射液治疗脑血栓后遗症的报道已屡见不鲜。黄芪为补气要药，又有通调血脉之功，除增强机体免疫功能外，并能改善脑微循环，增加脑血流量，有利于提高脑的血氧和能量供应，从而有利于脑血栓后遗症患者的病情恢复。四药全用，旨在活血化瘀通络，适用于瘀血阻于脑络引起的各种脑血管疾病，药味不多，却立法严谨，配伍精当。

本发明的组合物具有活血化瘀，益气通络之功效，具有较强的溶解血栓的作用，同时具有抑制血小板聚集、抗凝血、抑制血栓形成，明显改善脑血流量，降低脑血管阻力等作用。因而，主要用于中风的治疗，如脑血栓或其后遗症及其相关疾病，尤其是缺血性中风的治疗，特别是以血瘀气虚证为主要表现的缺血性中风的治疗。缺血性中风也叫缺血性脑卒中，是由于血管、血液成分、血液的力学、颅外血管等因素的异常改变，引起脑血管的一过性、部分性或完全性阻塞，造成脑组织缺血、缺氧，形成脑功能异常的一类疾病。包括短暂性脑缺血、脑血拴形成、脑梗塞及腔隙性梗塞等。此外，本发明组合物的急性毒性试验和长期毒性试验表明：临床用药量是安全有效的。临床样品通过长期观察，制剂疗效确切、安全有效、质量稳定，能达到临床使用的要求。

本发明的另一目的在于提供一种制备本发明组合物的方法，该方法包括以下步骤：

1)取配比量的水蛭药材粗粉或鲜水蛭，加入4-8倍量的含0.01-0.1w/w％防腐剂水溶液或生理盐水，于37℃条件下搅拌提取，离心弃去沉淀，上清液经膜过滤，再经超滤浓缩后，将浓缩液进行冷冻干燥，得水蛭冻干粉；

1)步中优选的技术方案为：所述的防腐剂可为本领域常用的适应药用或食品用，例如选自苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯或尼泊金丙酯等；水溶液或生理盐水的用量为6倍；搅拌时间为20小时；搅拌速度为100转/分；离心时间为30min；离心速度为6000转/分；膜过滤条件为：1um孔径膜预滤，滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌；浓缩用超滤膜的截留规格为6000-10000道尔顿。

2)取配比量的川芎、丹参、黄芪药材粗粉，用4-8倍量的65-95v/w％乙醇回流提取，过滤、浓缩回流液得其醇浓缩液；药渣加入原药材重量3-5倍量的水，煎煮提取，滤过，浓缩滤液得其水浓缩液；合并醇浓缩液和水浓缩液，喷雾干燥，得川芎混合粉；

2)步中的优选技术方案为：回流提取的醇溶液用量为6倍；醇溶液的浓度为80v/w％；回流次数为2次；回流时间为2h；提取药渣的水量为4倍；提取次数为1次；提取时间为1h；优选50℃时醇浓缩液或水浓缩液的相对密度为1.1-1.3，更优选相对密度为1.15-1.2；

3)将1)步所得的水蛭冻干粉和2)步所得的川芎混合粉均匀混合，再加入适量药学上可接受的载体，均匀混合即得。

本发明还提供另一种提取水蛭有效成分的方法，包括如下步骤：取配比量的水蛭药材粗粉或鲜水蛭于-20℃冷冻过夜，粉碎，加4-8倍量水或生理盐水，在37℃孵育6-24小时，优选孵育12小时，将离心所得的上清液经膜过滤，再经超滤浓缩，将缩液进行冷冻干燥，得水蛭冻干粉。优选所述的膜过滤条件为：离心所得的上清液经1um孔径膜预滤，所得预滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌。

此外，还可采用本领域熟知的浓缩技术来获得水蛭的浓缩液和川芎等的浓缩液，所述的浓缩方式为薄膜浓缩或减压浓缩，以实现较短时间、较低温度条件下完成浓缩，最大程度保留提取液中的活性成分或保证提取物的提取率。

本工艺采用低温提取、膜分离、膜超滤等现代提取技术，既克服了传统炮制工艺对水蛭抗凝溶栓活性蛋白等有效成分的破坏等缺陷，且显著提高了对其活性蛋白的提取率或保留率，以充分发挥水蛭的活血化瘀、抗凝溶栓等作用。并且本工艺采用醇回流和水煎煮的联合提取工艺，最大程度提取了川芎、黄芪和丹参中的活性成分，为保证和提高组合物的疗效奠定了基础。

本发明的组合物可为本领域熟知的口服剂型，如所述适合于本发明的剂型可以为片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂或滴丸等。可采用本领域熟知的制剂技术手段来制备完成本发明组合物的制备。所述的药物可接受载体为本领域熟知用于制备口服制剂的常用赋形剂或辅料，包括但不仅限于填充剂或稀释剂、润滑剂或助流剂或抗粘着剂、分散剂、湿润剂或粘合剂等。粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮，优选的纤维素衍生物为微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐、山梨醇或甘氨酸，优选无机钙盐为硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙；润滑剂，例如微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇；崩解剂，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素，优选的淀粉衍生物为羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇等。

另外，还可将活性成分与药学上可接受的缓控释载体按其制备要求加以混合，再按照本领域熟知的缓控释制剂的制备方法，如加入阻滞剂包衣或将活性成分微囊化后再制成微丸，如缓释微丸或控释微丸；所述的缓控释载体包括但不仅限于油脂性掺入剂、亲水胶体或包衣阻滞剂等，所述的油脂性掺入剂为单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、矿油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的亲水胶体为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等纤维素衍生物，或PVP、阿拉伯胶、西黄耆胶或卡波普等；所述的包衣阻滞剂为乙基纤维素(EC)、羟丙甲基纤维素(HMPC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、丙稀酸类树脂等。

本发明的还一目的在于提供本发明的组合物在制备与中风或其后遗症及其相关疾病中药物中的应用。所述中风的治疗包括对脑血栓、脑缺血、脑梗塞或腔隙性梗塞及其后遗症或其相关疾病的治疗，优选中风为缺血性中风，更优选以血瘀气虚证为主要表现的缺血性中风。

本发明组合物的常用剂量范围为(每粒/片含生药量1-10g)每日1-4粒/片，每日三次(胶囊/片)，优选剂量范围每日2粒/片，每日三次。

具体实施方式

以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。

实施例1

组合物的配比组成为：

水蛭                600g

川芎                600g

丹参                400g

黄芪                400g

淀粉                适量

微粉硅胶            适量

共制成              1000粒胶囊(0.25克/粒)

制备方法：1)取配比量的水蛭药材粗粉，加入6倍量0.1％苯甲酸钠水溶液，于37℃条件下搅拌20小时(100转/分)，离心30min(6000转/分)，弃去沉淀，上清液经1um孔径膜预滤，滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌，再经超滤器(截留规格为6000-10000)超滤浓缩约600ml(相对密度1.15，室温)，浓缩液冷冻干燥成粉，得水蛭冻干粉；

2)取配比量的川芎、丹参、黄芪药材粗粉，用6倍量80v/w％乙醇回流2次，每次2小时，滤过，合并回流液，浓缩至相对密度1.20(50℃测定)；药渣加入原药材重量4倍量的水，煎煮1次，时间为1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.20(50℃测定)；合并浓缩液，喷雾干燥，得川芎混合粉；

3)将1)步所得的水蛭冻干粉和2)步所得的川芎混合粉均匀混合，再加入占总重量10w/w％的淀粉和5w/w％的微粉硅胶，均匀混合，过80目筛后，装肠溶胶囊即得。

实施例2

组合物的配比组成为：

水蛭                600g

川芎                600g

丹参                400g

黄芪                400g

微粉硅胶            适量

淀粉                适量

共制成              1000粒胶囊(0.25克/粒)

制备方法：1)取配比量的水蛭药材粗粉，加入6倍量生理盐水于37℃条件下搅拌20小时(100转/分)，离心30min(6000转/分)，弃去沉淀，上清液经1um孔径膜预滤，滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌，再经超滤器(截留规格为6000-10000)超滤浓缩约600ml(相对密度1.15，室温)，浓缩液冷冻干燥成粉，得水蛭冻干粉；

2)取配比量的川芎、丹参、黄芪药材粗粉，用6倍量80v/w％乙醇回流2次，每次2小时，滤过，合并回流液，浓缩至相对密度1.20(50℃测定)；药渣加入原药材重量4倍量的水，煎煮1次，时间为1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.20(50℃测定)；合并浓缩液，喷雾干燥，得川芎混合粉；

3)将1)步所得的水蛭冻干粉和2)步所得的川芎混合粉均匀混合，再加入占总重量10w/w％的淀粉和5w/w％的微粉硅胶，混合均匀，过80目筛后，装肠溶胶囊即得。

实施例3

组合物的配比组成为：

鲜水蛭                6000g

川芎                  600g

丹参                  400g

黄芪                  400g

微粉硅胶              适量

淀粉                  适量

共制成                1000片(0.30克片)

有效成分的提取方法同实施例1；将1)步所得的水蛭冻干粉和2)步所得的川芎混合粉均匀混合，再加入占总重量20w/w％的淀粉和10w/w％的微粉硅胶，混合均匀，过80目筛后，压片，包肠溶衣即得。

以下通过药效试验例或毒性试验例来以验证本发明药物组合物对中风的治疗效果。试验例所用的药物为本发明实施例1或3制备得到的组合物干粉，试验时用蒸馏水配成所需浓度的混悬液供试，其中1g干粉相当于8g生药。除非另有说明，本发明试验例的给药剂量标准均以生药计。

试验例1、本发明组合物对大鼠大脑中动脉阻断的保护作用

尼龙栓子制备参考Zealonga方法(Longa EI，Weinstein PR，Carlson S，et al.《Strock》，1989，20：84)：将一长40mm，直径为0.2mm的尼龙线一端加热为光滑球形。用酒精擦干净并于距球端18.5mm处标记。置于0.9％生理盐水中备用。

分组及给药：将实验动物随机分为假手术组、模型组、高、中、低剂量三个受试物组和阳性对照组。实验前模型组和假手术组灌胃给予生理盐水，三个受试物组灌胃给受试物1g/kg，3g/kg，9g/kg，阳性对照组灌胃给尼莫同片20mg/kg，一天一次，连续一周。

SD大鼠用10％水合氯醛麻醉(30mg/100g)仰卧手术台上，颈正中切开。分离左侧颈总动脉(CCA)，颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA)。用0#线接扎并剪断ECA分支。接扎(两道以利于剪断)并游离ECA主干一段。沿ECA向下分离并电凝翼颚动脉。动脉夹夹住CCA及ICA。在ECA剪一小口，将制好尼龙线插入ECA，将ECA剪断后，经CCA分叉处通过ICA入颅至大脑前动脉(ACA)，尼龙线插入深度约为18mm。6h后再灌注时外拉尼龙线使其球端回至ECA内即可恢复大脑中动脉的血供。如果动物已苏醒，需再次麻醉后再灌注。假手术组不插入尼龙线外其余步骤同上。并按照如下方法检测下述指标：

A.神经病学评分

(1)提鼠尾离地面约一尺，观察牵制情况。正常大鼠两前肢对称地伸向地面。有左肩内旋，左前肢内收者评为4分，否则0分。

(2)将鼠置于平滑地面上，分别推左/右肩向对侧移动，检查抵抗推动的阻力。正常大鼠对侧阻力明显对称。右肩向左侧移动时，发现阻力下降者，根据下降程度的不同，评为1-3分。

(3)将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的肌张力。正常大鼠两前肢肌张力明显对称。发生左前肢肌张力明显下降者，根据下降的轻重，评1-3分。根据以上标准评分，满分10分。分数越高，说明动物的行为障碍越严重。评分采用单盲法。

B.TTC染色测量脑梗塞面积和梗塞百分率

MCAO后24小时断头取脑，将脑置于冰冻的生理盐水中10分钟。去除嗅球、小脑和低位脑干后，冠状切四刀成五片。第一刀在前极与视交叉连线中间；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。忽然迅速将脑片置于5ml含有1％TTC的磷酸缓冲液中避光温孵30分钟(温度为37℃)。其中每隔7-8分钟翻动一次。经染色后正常组织呈玫瑰红色，而梗塞组织呈白色，且界限分明。温孵完毕后，将脑片照相。分别称脑片照片的重量和其中梗塞部分的重量，计算梗塞占全脑的百分率，以此评价药效。

本发明组合物对神经病学评分结果见表1，对大脑中动脉阻断大鼠梗塞率的影响结果参见表2。

表1神经病学评分(n＝8，X±SD)

组别	剂量(g/kg)	评分
				术后6h	术后24h
		假手术组模型组低剂量组中剂量组高剂量组尼莫同组	生理盐水生理盐水1390.02			06.75±0.895.75±1.672.62±2.06**1.75±1.67**1.88±1.96**	07.75±1.046.50±1.203.62±1.90**2.62±2.06**2.62±1.92**

注：和模型组相比：^**P＜0.01

由表1得知：模型组大鼠手术后全部出现异常神经症状，本发明组合物的中剂量组3g/kg和高剂量组9g/kg具有明显减轻大鼠大脑中动脉阻断导致缺血性脑梗塞而引起的异常神经症状，与模型组相比具有明显差异(P＜0.01)。

表2本发明组合物对大脑中动脉阻断大鼠梗塞率的影响(n＝8，X±SD)

组别	剂量	梗塞面积百分率(％)
			假手术组模型组低剂量组中剂量组高剂量组尼莫同组	生理盐水生理盐水1390.02	028.81±3.7520.41±9.88*10.60±11.09**4.57±7.90**6.07±10.09**

注：和模型组相比：^**P＜0.01；^*P＜0.05

由表2得知：本发明组合物降低脑梗塞面积的作用具有剂量依赖性，其三个剂量组与模型组相比均有统计学差异。

试验例2、本发明组合物对大鼠动脉血栓形成的影响

体重150-250g为SD大鼠50只，雌雄兼用，随机分为5组。空白对照组灌胃给予等体积的生理盐水，药物的低剂量组为0.125g干粉/Kg、中剂量组为0.375g干粉/Kg，高剂量组1.125g干粉/Kg；阳性对照组为脑血栓片组，给药剂量为0.3g干粉/Kg。每组每日以0.5ml/100g体重灌胃给药连续6天，于末次给药后1h用氯胺酮(0.5ml/100g体重)麻醉，仰位固定。分离右颈总动脉和左颈外静脉，将放有长6cm，重约9mg的4号手术线的聚乙烯管一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉，管内肝素抗凝，开放血流15min后中断血流，取出手术线称湿重，于60℃恒温干燥24h至恒重，称干重，干重、湿重分别减去手术线重为血栓干重和湿重。实验结果见表3。

表3本发明组合物对大鼠动脉血栓形成的影响(X±SD，n＝10)

组别	剂量(干粉g/kg)	湿血栓		干血栓
						湿重(mg)	抑制率(％)	干重(mg)	抑制率(％)
		空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组脑血栓片组	生理盐水0.1250.3751.1250.3	34.50±9.2626.25±9.0822.70±6.07**22.60±5.72**25.60±5.21*	23.9134.2034.4925.80					11.95±2.388.95±2.25**7.80±1.69**7.55±1.16**9.10±1.66**	25.1034.7336.8223.85

注：和空白对照组相比：^**P＜0.01；^*P＜0.05

由表3得知：本发明组合物3g/kg以上能明显减少动脉血栓的湿重，而在1g/kg以上能减少血栓干重。表明本发明组合物能明显抑制动脉血栓的形成。

试验例3、本发明组合物对大鼠凝血时间的影响

体重为80-220g的SD大鼠100只，雌雄兼用。每组每日以0.5ml/100g体重灌胃给药6天，于末次给药1h后，用剪刀距尾端约0.2cm处剪去尾尖，即有血流出，于载玻片上滴1滴血，血液直径约5mm，立即用秒表记时。每隔30s用细针能过血滴并挑血滴1次，仔细观察，如见针尖挑起纤维蛋白丝，停表记时。实验结果见表4。

表4本发明组合物对大鼠凝血时间的影响(X±SD，n＝20)

组别	剂量(生药g/kg)	凝血时间(min)
			空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组脑血栓片组	生理盐水1390.3	3.050±0.4263.825±0.335**4.100±0.821**4.125±0.604**3.625±0.604**

注：和空白对照组相比：^**P＜0.01

由表4得知：本发明组合物1g/kg以上能明显延长大鼠的凝血时间，表现良好的抗凝作用。

试验例4、本发明组合物对大鼠血液流变学的影响

体重为200-300g的SD大鼠48只，雌雄兼用，随机分为6组，每组每日以0.5ml/100g体重灌胃连续给药6天，于给药第7天造急性血瘀模型：皮下注射肾上腺素(Adr10μg/ml)0.08ml/100g体重2次，两次间隔4h。在二次注射Adr之间(距前后各2h)将大鼠浸入冰水内5min，处置后停食，次晨眼眶取血抗凝，用LBY-N6A自清洗旋转式粘度计测定血液粘度。模型组不给任何药物，第7天和给药组同时造模。正常对照组不给任何药物，不造模。实验结果见表5。

表5本发明组合物对大鼠血液流变学的影响(X±SD，n＝8)

组别	剂量(生药g/kg)	全粘度(mPas)			血浆粘度(mPas)
						高切	中切	低切
		正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组脑血栓片组模型组	生理盐水1390.3	9.78±1.16##11.54±1.38*10.62±0.60##10.51±0.43##11.25±0.67**#13.16±1.94**					5.81±0.35##6.52±1.006.04±0.215.93±0.26#6.13±0.31#6.98±0.98**	4.96±0.24##5.45±0.815.03±0.18#4.95±0.26##5.04±0.25#5.82±0.75**	1.29±0.19##1.45±0.101.41±0.12#1.36±0.17#1.39±0.09##1.59±0.15**

注：和正常对照组相比：^**P＜0.01；^*P＜0.05

和模型组相比，##P＜0.01；#P＜0.05

由表5得知：在高血粘度大鼠模型中，全血比粘度(高、低切变率)和血浆比粘度增高，反映大鼠血液流变性呈粘、凝改变。本发明组合物3g/kg以上剂量能明显降低血浆和全血粘度，使其基本恢复到正常对照组水平，具有活血作用。

试验例5、本发明组合物对大鼠凝血酶时间和凝血酶原时间的影响

体重为250-300g的雄性SD大鼠40只，随机分为5组，各组每日以0.5ml/100g体重灌胃连续给药6天，于未次给药后1h取血进行如下实验：

A.血浆凝血酶时间：被测血浆0.1ml，加凝血酶液0.1ml，立即开动秒表，密切观察。

B.凝血酶原时间

在一试管中按需加入等量的兔脑浸出液和0.025mol/LCacl₂液，混和后置37℃水浴中预温(不超过30min)，同时将用枸橼酸盐作抗凝剂的血浆亦置于37℃预温。在浸于37℃水浴的小试管中加入预温的兔脑浸液—氯化钙混合液0.2ml，再加入预温的血浆0.1ml，立即混匀，再浸入37℃水浴中，同时开动秒表。至约8s时，自水浴中取出，仔细观察，记录血浆流动慢并出现纤维蛋白丝的时间。试验结果见表6。

表6本发明组合物对大鼠凝血酶时间和凝血酶原时间的影响(X±SD，n＝8)

组别	剂量(生药g/kg)	凝血酶原时间(s)	血浆凝血酶时间(s)
				空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组脑血栓片组	生理盐水1390.3	15.50±1.7716.50±3.5117.50±1.93*21.88±1.64**15.62±0.74	20.00±4.0725.87±5.36*40.50±8.43**42.13±4.02**24.38±5.55

注：和空白对照组相比：^**P＜0.01；^*P＜0.05

由表6得知：1g/kg以上本发明组合物能明显延长凝血酶原时间，3g/kg以上本发明组合物能显著延长血浆凝血酶时间，表现良好的抗凝作用。

试验例6、本发明组合物对小鼠全脑缺血的作用(小鼠断头法)

体重为18-22g的ICR小鼠，雌雄兼用，随机分为6组。其中受试物组包括本发明组合物的低、中、高剂量组，其给药剂量分别为：以生药计，2g/kg、6g/kg、18g/kg；阳性对照组为脑血栓片0.12g/kg；缺血空白对照组给予等体积的蒸馏水；正常空白对照组的小鼠不断头，整体投入液氮中，余下操作方法同其他组。

各组每日以0.2ml/10g体重灌胃连续给药6天，进行以下实验：

喘气次数和时间：小鼠不麻醉，用大剪刀在耳下部快速断头，记录喘气次数和时间。

能量代谢：小鼠断头后，将头颅在室温放30秒后投入液氮快速冷冻。测定时从液氮中取出头颅，立即用，小刀挖取单侧大脑半球，称取100mg左右脑组织，置乳钵(冰浴)中粉碎，加10％过氯酸5ml提取，冷冻30min后3000r/min离心30min，取上清液，进行下述测定，组织提取液可在-20℃贮存。

(1)ATP含量测定：作ATP标准曲线，确定线性浓度范围。用20mol/L Tris-HCl(PH7.8)稀释组织提取液900倍，取稀释液200μl置比色杯中，放入液体闪烁仪中记录本底，然后注入100μl虫荧光光素酶-虫荧光素提取物，1min后记录发光值，计数时间为6秒，从标准曲线计算每克脑组织中ATP的量(mmol)。

(2)LA(乳酸)含量测定：按乳酸测定试剂盒进行操作。

	空白管	标准管	测定管
				蒸馏水3mmol/L标准(ml)样品(ml)缓冲液(ml)	0.021	0.21	0.021

酶试剂(ml)显色剂(ml)

0.010.2

0.010.2

0.010.2

混匀，37℃水浴10min，各管加终止液2ml混匀，530nm 1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。LA含量计算：

测定得到的小鼠断头后的喘气次数和时间见表7-1，ATP和LA测定结果见表7-2。

表7-1本发明组合物对断头后小鼠的喘气时间和次数的影响(X±SD)

组别	剂量(g生药/kg)	喘气时间(秒)	喘气次数(次)
				缺血空白对照组(n＝10)低剂量组中剂量组高剂量组脑血栓片组(n＝9)	26180.6	15.10±2.3816.12±2.6417.62±2.20*18.11±2.20*17.11±2.57	9.50±1.9010.12±2.6412.88±1.46**13.78±2.99**12.00±1.41**

注：和缺血空白对照组相比：^**P＜0.01，^*P＜0.05；

表7-2本发明组合物对小鼠ATP和LA的影响

组别	剂量(g生药/kg)	ATP含量(μmol/L)	LA含量(mmol/L)
				正常空白对照组(n＝8)缺血空白对照组(n＝8)低剂量组中剂量组高剂量组脑血栓片组(n＝9)	26180.12	14.83±12.33**1.36±0.69##2.51±1.33*##3.38±2.26*#5.63±4.30**2.94±1.10**#	16.40±5.92**41.92±7.25##29.54±11.42**##25.63±9.50**#20.48±7.49**27.39±8.59**##

注：和缺血空白对照组相比：^**P＜0.01，^*P＜0.05；

和正常空白对照组相比：##P＜0.01，#P＜0.05。

由表7-1，7-2得知：给本发明组合物2g/kg以上，脑缺血30s后脑组织中ATP含量较缺血对照组明显增高，而LA含量则明显降低，中、高剂量组断头后的喘气次数长时间增加，提示本发明组合物可减轻小鼠脑缺血时能量物质ATP的减少和代谢物乳酸LA的增加程度。

试验例7、本发明组合物对大鼠血小板聚集性的影响

SD大鼠禁食12-18h，用氯胺酮(0.5ml/100g体重)腹腔注射麻醉，由颈总动脉取血5ml，以枸橼酸钠抗凝。根据文献(陈奇等，《中药药理研究方法学》第一版，人民卫生出版社)，制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)。用PRP调记录仪于10％基线，以PPP调90％基线。在PRP中加磷酸缓冲液(0.2mol/L)10μl，温育3min后加入凝血酶(50U/ml)10μl，描记10min聚集曲线作为空白对照，以不同浓度的受试药物代替缓冲液，测定对血小板聚集的影响。在描出的聚集曲线上算出1，3，5，10min聚集强度，最大聚集强度(MA)，达到MA的时间(TMA)和1/2MA的时间(T_1/2MA)，并以MA求给药组的聚集抑制率。结果见表8。

由表8得知：对大鼠血浆给予20mg/ml本发明组合物5min后，明显抑制凝血酶引起的血小板聚集的强度，受试物三个剂量组的抑制率分别为10.18％，22.63％，42.16％，高剂量组达到最大聚集强度的时间(TMA)缩短，而半数时间T_1/2MA则没有明显改变。

小结：本发明组合物3g/kg以上能显著减轻大鼠大脑中动脉阻断导致缺血性脑梗塞而引起的异常神经症状，具有剂量依赖性降低脑梗塞面积的作用，与模型组相比三个剂量组均有统计学差异(P＜0.05)；并能明显减少动脉血栓的湿重和干重，显著延长大鼠的凝血时间，凝血酶原时间和血浆凝血酶时间，其效果优于阳性对照药。

给予20mg/ml本发明组合物5min后，明显抑制凝血酶引起的血小板聚集的强度，受试物三个剂量组的抑制率分别为10.18％，22.63％，42.16％，高剂量组达到最大聚集强度的时间(TMA)缩短，而半数时间T_1/2MA则没有明显改变，表现良好的抗凝血、抗聚集和抗动脉血栓作用。

在高血粘度大鼠模型中，本发明组合物3g/kg以上剂量能明显降低全血和血浆比粘度，改变模型大鼠血液的粘、凝状态，使其基本恢复到正常对照组水平，表现较强的活血作用；2g/kg以上本发明组合物能明显减轻小鼠全脑缺血时能量物质ATP的减少和代谢物乳酸(LA)的增加程度，6g/kg以上能增加断头后的喘气次数和时间，表明本发明组合物能维持神经细胞膜和脑组织功能，减少缺血时脑细胞损伤，对脑缺血或脑卒中有明显的保护作用。

试验例8、本发明组合物对狗脑血血流量的影响

试验方法参见文献(李仪奎主编《中药药理试验方法学》，上海科技出版社，1991：129-130)。

取体重10-12kg健康狗30只，雌雄兼用。均分成正常组(等容量蒸馏水)、阳性组(脑血栓片，0.55g/kg，相关于临床人用量8片2.4g的9倍)、受试组为本发明组合物的小剂量组(0.3g生药/kg)、中剂量组(0.9g生药/kg)和大剂量组(2.7g生药/kg)，分别相当于临床人用量12g的1、3和9倍。

静脉注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，仰卧固定于手术台上，沿颈正中线切开皮肤，分离一侧颈总动脉，再分离颈外动脉及枕动脉并结扎，保留颈内动脉；再分离一侧股动脉，连接血压计，用记纹鼓记录血压变化；再边疆心电图仪描记II导心电图。选择合适的电磁流量计传感器，小心套上颈总动脉，记录颈内动脉血流量。手术结束约10min，待动物血压，脑血流量和心电图稳定后，按剂量灌胃给药4ml/kg。分别于药后20、40、60、100、120、140、160、180min观察并记录颈内动脉血流量、血压和心电图的变化，实验结束后，开颅取全脑称重，根据颈内动脉压、血压和心电图按以下公式计算脑血流量、脑血管阻力和心肌张力时间指数(代表心肌耗氧量)等指标。

试验结果参见表9-表13。

结论：本发明组合物按0.3g生药/kg、0.9g生药/kg和2.7g生药/kg给狗灌胃给药，均能增加其脑血流量。大量组在用药60min后作用明显，维持时间到140min；中量组从100min作用明显，维持时间到140min；而小量组在120min和140min作用明显；脑血管阻力有所减少，但与正常相比，无明显差异；用药后狗血压、心率及心肌耗氧量无明显变化。

可见，本发明组合物明显增加狗的脑血流量，提示对脑卒中有一定的治疗作用。

试验例9.本发明组合物的毒理研究结果

1.急性毒性试验研究结果

对小鼠灌胃给予本发明组合物进行如下急性毒性试验：用蒸馏水将药物组合物溶解成0.5g干粉/ml(4tg生药/ml)，以最大体积0.8ml/20g体重，一次灌胃体重为19～21g的ICR。小鼠20只，雌雄各半，试验前禁食12小时，自由饮水。

灌胃给药后，观察并记录给药7天内动物所出现的毒副反应及死亡情况。可见，给药10min后，动物活动明显减少，过4-5h后活动自如，食欲正常，连续观察七天未见死亡，由此计算得知本发明的药物组合物的LD₅₀＞160g生药/kg，相当于人用量(0.025g干粉/kg)的800倍。

同时进行最大给药量试验：其余条件同前，在24h内对20只ICR小鼠(雌雄各半)灌胃两次。观察并记录给药7天内动物所出现的毒副反应及死亡情况。可见，每次给药10min后，动物活动明显减少，过4-5h后活动自如，食欲正常，连续观察七天未见死亡，由此获得本发明药物组合物的最大给药量为320g生药/kg(40g干粉/kg)，相当于人用量1600倍。

2.长期毒性试验研究结果

本发明组合物所进行的大鼠长期毒性试验：大鼠120只，雌雄各半，分为低剂量组34.53g生药/kg(相当于人用剂量的15倍)，中剂量组69.03g生药/kg(相当于人用剂量的30倍)，高剂量组138.1g生药/kg(相当于人用剂量的60倍)和对照组(等量蒸馏水)。给药途径均为灌胃给药，每周六次，连续六个月，停药后观察恢复期两周，分别于给药三个月、六个月和停药两周后取血剖杀，以正常动物作对照，检查指标：血尿常规，肝肾功能、病理组织学检查，脏器系数等。结果表明：各组动物给药期间食欲正常，活动自如，生长情况良好，体重正常增长，血尿常规，肝肾功能均在正常范围内，各组间无统计差异。病理组织学检查，各剂量组与对照组相比无明显差异，未见药物对动物各脏器及组织有明显毒性病理损伤。

该试验表明：本品对大鼠无明显毒性作用，对大鼠的无毒剂量在138.1g生药/kg以上。

试验例10、本发明组合物的II期临床研究试验结果

本发明组合物的II期临床研究试验结果表明：本发明组合物和对照药物脑安胶囊(主用于血瘀气虚证患者的治疗)对中风的治疗具有相同治疗效果，在改善中风症状方面两组均有明显的疗效，PP数据集结果表明，试验组基本痊愈5/115，痊愈率15％，显效58/116，显效率50.43％，进步41/115，进步率35.65％，无效11/115，无效率9.57％，痊显率为54.78％；总有效率为90.43％；对照组基本痊愈2/110，痊愈率1.82％，显效46/110，显效率41.82％，进步47/110，进步率42.73％，无效15/110，无效率13.64％，痊显率为43.64％；总有效率为86.37％。经采用CMH检验，以中心为分层因素进行两组之间比较，结果表明，两组疗效差别比较无统计学意义，但P值已接近0.05(P＝0.069)。中心间疗效比较无统计学意义。经对FAS数据集CMH检验，结果表明两组疗效差别比较有统计学意义(P＝0.026)。

可见，本发明组合物和脑安胶囊在改善中风症状方面均有明显的疗效，以神经功能缺损程度评分为主要指标比较两组疗效时，试验组优于对照组(结论为优效)，如将神经功能缺损程度评分转化为疗效频数时，两组疗效基本一致(结论为等效)。说明两组疗效有一定的差别，但反映在临床上尚不十分明显。

此外，本次II期临床研究试验结果表明，本发明组合物和脑安胶囊治疗中风在改善中医证候疗效方面两组均有明显的疗效：试验组痊愈4/115，痊愈率3.48％，显效27/115，显效率23.48％，有效76/115，有效率66.09％，无效8/115，无效率13.91％，痊显率为26.96％；总有效率为93.05％；对照组痊愈1/110，痊愈率0.91％，显效19/110，显效率17.27％，有效79/110，有效率71.82％，无效11/110，无效率10.00％，痊显率为18.18％；总有效率为90.00％；两组疗效差别比较无统计学意义，FAS数据集和PP数据集结果一致。

另外，本发明组合物和脑安胶囊在改善证候方面两组经治疗后证候计分均明显下降，经对两组之间比较，采用一般线性模型，重复测量方差分析，考虑中心效应、时间点效应，进行试验组和对照组的比较。结果表明，时间点效应、中心效应和组间效应均有统计学意义。为排除治疗前证候积分对治疗后积分的影响，采用协方差分析模型，以治疗前积分为协变量，考虑中心效应，对治疗后两组积分进行比较，结果表明两组之间差异有统计学意义(p＝0.026)，另外，两组积分的修正均数之差的可信区间也表明为优效性结果(可信区间不含0)，试验组优于对照组。各中心之间差异有统计学意义。

经对治疗前后证候计分改变差值和下降率组间比较，改变差值无统计学意义，下降率有统计学意义。将下降率转换为疗效频数后，两组疗效差异无统计学意义。

小结：本发明组合物和脑安胶囊均可用于治疗中风。在改善中医证候方面两组均有明显的疗效；以中医证候积分为主要指标比较两组疗效时，试验组优于对照组(结论为优效)，如将中医证候积分转化为疗效频数时，两组疗效基本一致(结论为等效)。说明两组中医证候疗效有一定的差别，但反映在临床上尚不十分明显。

表8本发明组合物对大鼠血小板聚集性的影响(X±SD，n＝8)

组别	剂量(mg/ml)	聚集强度(％)							抑制率(％)
										1A	3A	5A	10A	MA	TMA(min)	T1/2(min)
		空白对照低剂量组中剂量组高剂量组阿斯匹林	缓冲液20601800.4	00000	43.38±14.7540.25±13.9230.31±6.28*24.75±3.07**6.44±4.32**	74.56±3.9266.31±8.77*55.12±.65**39.19±.95**17.94±.56**	84.62±4.4076.12±.93**65.50±.76**47.31±1.60**45.31±.51**	85.38±4.4076.69±5.71**66.06±4.69**49.38±11.70**46.50±7.11**									9.78±1.229.94±0.959.51±1.248.26±1.45*7.78±1.97**	3.01±0.962.82±0.823.14±0.522.95±0.683.34±1.25	10.1822.6342.1645.54

注：和空白对照组相比：^**P＜0.01；^*P＜0.05

表9本发明组合物对狗的脑血流量的影响(X±S，n＝6)

组别	脑血流量(ml/min.100g脑重)
											0	20	40	60	80	100	120	140	160	180(min)
	正常组阳性组小量组中量组大量组	142.24±17.65140.37±14.06140.85±17.79143.20±7.52140.72±5.93	148.23±28.30142.07±9.90142.39±17.16136.14±14.60141.40±11.79	139.83±23.20138.02±17.19138.18±21.39143.17±12.27151.11±9.75	137.73±21.37159.83±18.13160.20±22.71158.94±15.31159.75±6.03*	149.50±26.00177.91±16.35*175.37±21.76168.45±8.73174.04±11.77	138.14±27.54173.19±15.43*166.30±15.05180.89±15.21**177.14±11.39**	141.81±20.20172.72±22.03*168.53±20.94*165.68±12.38*175.62±9.62**	135.37±15.98158.20±24.87158.15±16.76*161.43±11.85**156.97±9.31*	139.43±17.66145.65±12.41148.15±22.11146.27±11.90153.98±4.94											143.50±23.98145.07±13.35143.96±20.51144.85±13.46143.43±8.52

与正常组比^*P＜0.05  ^**P＜0.01

表10本发明组合物对狗的脑血管阻力的影响(X±S，n＝6)

组别	脑血管阻力(mmHg.min.100g脑重/ml)
											0	20	40	60	80	100	120	140	160	180(min)
	正常组阳性组小量组中量组大量组	0.83±0.190.83±0.140.82±0.070.81±0.160.84±0.05	0.80±0.180.83±0.110.82±0.080.84±0.180.80±0.06	0.85±0.220.84±0.160.83±0.100.80±0.160.76±0.05	0.85±0.220.74±0.130.71±0.090.71±0.120.71±0.05	0.78±0.160.65±0.120.65±0.120.67±0.100.66±0.07	0.86±0.260.66±0.110.68±0.090.63±0.120.67±0.01	0.82±0.190.65±0.130.68±0.100.69±0.120.68±0.06	0.84±0.180.72±0.120.77±0.080.79±0.170.78±0.06	0.80±0.150.75±0.120.77±0.080.79±0.170.78±0.06											0.79±0.240.76±0.130.77±0.120.81±0.190.84±0.06

表11本发明组合物对狗的心率的影响(X±S，n＝6)

组别	心率(次/分)
											0	20	40	60	80	100	120	140	160	180(min)
	正常组阳性组小量组中量组大量组	163.33±15.05170.00±37.94166.67±60.88163.33±61.21170.00±30.33	168.33±21.37176.67±41.31160.00±54.03168.33±58.45166.67±30.76	173.33±23.38176.67±35.59160.00±49.40163.33±64.65165.00±26.65	176.67±29.44176.67±41.31158.33±50.36166.67±60.88171.67±28.58	173.33±31.44180.00±43.82163.33±54.28163.33±53.54165.00±30.17	176.67±35.02181.67±45.35160.00±51.77161.67±47.50161.67±34.88	173.33±28.75186.67±48.44160.00±51.77160.00±45.61160.00±38.47	176.67±31.41186.67±48.45158.33±51.15155.00±43.70155.00±41.35	173.33±29.44185.00±46.79160.00±52.54156.67±42.74163.33±44.12											178.33±31.89185.00±46.79161.67±55.65156.67±42.74161.67±42.15

表12本发明组合物对狗的血压的影响(X±S，n＝6)

组别	血压(mmHg)
											0	20	40	60	80	100	120	140	160	180(min)
	正常组阳性组小量组中量组大量组	115.67±17.41115.00±13.19114.67±5.61115.33±19.42118.33±6.38	115.67±16.66117.00±11.71115.33±5.75113.00±18.19113.00±10.26	115.67±15.46114.00±12.90113.33±8.16113.00±16.96114.33±5.99	113.67±15.77116.33±12.29112.00±8.39111.33±16.08112.33±6.38	114.67±15.37114.67±12.75112.00±10.67112.00±15.65113.33±8.16	114.33±17.32114.00±13.27113.00±12.57112.00±14.59119.00±6.29	112.00±14.37110.67±11.71113.00±13.19113.67±14.61118.00±6.69	112.00±13.56109.67±10.84113.67±11.35113.67±14.61118.33±6.37	109.33±13.06108.00±10.51112.33±13.47113.33±17.05120.33±7.74											110.00±15.44109.00±12.57110.83±12.81115.00±18.67120.00±7.59

Claims (19)

1、一种用于治疗中风的中药组合物，其特征在于，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为：水蛭饮片3份-12份、川芎3份-12份、黄芪2份-8份和丹参2份-8份。

2、如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份为：水蛭饮片6份、川芎6份、黄芪4份和丹参4份。

3、如权利要求1-2任一项所述的中药组合物，组合物中的水蛭饮片可用鲜水蛭代替，则鲜水蛭在组合物中的用量为水蛭饮片用量的8-12倍。

4、如权利要求3所述的中药组合物，组合物中的水蛭饮片可用鲜水蛭代替，则鲜水蛭在组合物中的用量为水蛭饮片用量的10倍。

5、如权利要求1-2或4任一项所述的中药组合物，所述组合物的制剂选自口服剂型。

6、如权利要求3所述的中药组合物，所述组合物的制剂选自口服剂型。

7、如权利要求5所述的中药组合物，所述的口服剂型选自片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂或滴丸或其相应的缓控释剂型。

8、如权利要求6所述的中药组合物，所述的口服剂型选自片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂或滴丸或其相应的缓控释剂型。

9、权利要求1-8任一项所述的中药组合物在制备用于治疗中风药物中的应用。

10、如权利要求9所述的应用，所述的中风为缺血性中风及其后遗症或其相关疾病。

11、如权利要求10所述的应用，所述的缺血性中风及其后遗症或其相关疾病选自以血瘀气虚为主要表现症状的缺血性中风及其后遗症或其相关疾病。

12、如权利要求10-11任一项所述的应用，所述的相关疾病选自短暂性脑缺血、脑血拴、脑梗塞或腔隙性梗塞。

13、一种制备权利要求1-8任一所述中药组合物的方法，包括如下步骤：

1)取配比量的水蛭药材粗粉或鲜水蛭，加入4-8倍量的0.01-0.1w/w％防腐剂水溶液或生理盐水，于37℃条件下搅拌提取，离心弃去沉淀，上清液经膜过滤，再经超滤浓缩后，将浓缩液进行冷冻干燥，得水蛭冻干粉；

2)取配比量的川芎、丹参、黄芪药材粗粉，用4-8倍量的65-95v/w％乙醇回流提取，过滤、浓缩回流液得其醇浓缩液；药渣加入原药材重量3-5倍量的水，煎煮提取，滤过，浓缩滤液得其水浓缩液；合并醇浓缩液和水浓缩液，喷雾干燥，得川芎混合粉；

3)将1)步所得的水蛭冻干粉和2)步所得的川芎混合粉均匀混合，再加入药学上可接受的载体，均匀混合即得。

14、如权利要求13所述的方法，1)步中的操作条件为：所述的防腐剂可选自苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯或尼泊金丙酯；水溶液或生理盐水的用量为6倍；搅拌时间为20小时；搅拌速度为100转/分；离心时间为30min；离心速度为6000转/分；膜过滤条件为：1um孔径膜预滤，滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌；超滤膜的截留规格为6000-10000。

15、如权利要求13所述的方法，2)步中的操作条件为：回流提取的醇溶液用量为6倍；醇溶液的浓度为80v/w％；回流次数为2次；回流时间为2h；提取药渣的水量为4倍；提取次数为1次；提取时间为1h；50℃时醇浓缩液或水浓缩液的相对密度为1.1-1.3。

16、如权利要求15所述的方法，2)步中的操作条件为：50℃时醇浓缩液或水浓缩液的相对密度为1.15-1.2。

17、如权利要求13-16任一项所述的方法，还可以用下述方法提取水蛭中的有效成分：取配比量的水蛭药材粗粉或鲜水蛭于-20℃冷冻过夜，粉碎，加4-8倍量水或生理盐水，在37℃孵育6-24小时，将离心所得的上清液经膜过滤，再经超滤浓缩，将缩液进行冷冻干燥，得水蛭冻干粉。

18、如权利要求17所述的方法，所述的水蛭药材粗粉或鲜水蛭的水溶液或生理盐水溶液在37℃孵育的时间为12小时。

19、如权利要求17-18任一项所述的方法，所述的膜过滤条件为：离心所得的上清液经1um孔径膜预滤，所得预滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌。