CN100339077C - 吲哚类衍生物作为抗传染性非典型肺炎药物的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通式I的吲哚类衍生物包括其消旋体或旋光异构体或其可药用的盐和/或水合物，用于治疗和/或预防SARS病毒感染的新用途。其中：R₁、R₂、R₃和R₄独立选自氢，C₁～C₄直链或支链烷基，C₂～C₄直链或支链烯基，C₃～C₈环烷基，C₅～C₈环烯基，其中的烷基或者烯基链上可以无取代，也可以被选自下面的一个或者多个基团所取代：卤素，C₃～C₈环烷基，C₅～C₇环烯基，R₅和R₆独立选自氢，卤素，硝基，羟基，羟甲基。

Description

吲哚类衍生物作为抗传染性非典型肺炎药物的新用途

技术领域

本发明涉及识别吲哚类衍生物作为抗传染性非典型肺炎(SevereAcute Respiratory Syndrome，SARS)的药物及含有它们的药物组合物的新用途。

背景技术

传染性非典型肺炎称为严重急性呼吸综合征(Severe AcuteRespiratory Sydrome，SARS)。研究发现，一种新型的冠状病毒极可能是病因，2003年4月16日，世界卫生组织(WHO)正式确认SARS病毒是传染性非典型肺炎的病因。严重急性呼吸综合征SARS首先发病的地区为我国的华南和香港地区，加上SARS病毒本身的高度传染性、变异性，因此疫情具有爆发急、传播快、范围广、影响大的特点，已迅速演变成为我国和全球的公共卫生危机。

SARS病人的呼吸道切片和细胞培养物的电子显微镜照片显示，存在冠状病毒颗粒。这是一种新型的冠状病毒，与冠状病毒属中其他已知的成员不同，该病毒可引起非洲绿猴肾细胞(VERO-E6)发生病变效应，病毒复制能够被SARS感染康复人的血清所抑制，可以利用感染的细胞和康复病人的血清进行免疫荧光检测法(Immunof luorescenceassays，IFA)检测培养细胞中细胞感染有SARS病毒的情况，该方法表现出特异性的反应。美国、加拿大和香港的研究表明，非SARS病人的血清不能和新冠状病毒发生反应；传染性肠胃炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus，TGEV)、鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus，MHV)、猫传染性腹膜炎病毒(FelineInfectious Peritonitis virus，FIPV)、229E人冠状病毒的超抗血清可以抑制培养的病毒生长。几个实验室对病毒的测序表明，新病毒和冠状病毒属相关，但不同于同属的其它冠状病毒个群，是冠状病毒的一个新的变种。

SARS冠状病毒在种属分类上属于正链RNA病毒(ssRNA positive-strand viruses)家系的巢状病毒(Nidovirales)族中的冠状病毒(Coronaviridae)系。它是冠状病毒家族中新出现的一个子类。2003年三月，科学家们发现了导致SARS的元凶SARS冠状病毒(SARSCoronaviruses，SARS-CoV)，并且成功的完成了SARS-CoV基因组的完整测序。SARS-CoV基因组共有29727个核苷酸、11个开放阅读框(Opening Reading Frames)组成。它的基因组结构和其他的冠状病毒非常相似。但通过比较遗传史和序列比对表明SARS-CoV的特征和以前发现的冠状病毒的特征并不完全相似，它不仅表现有其他冠状病毒共有的特征，还有SARS-CoV本身特有的特征(Rota et al.，Characterization of a Novel Coronavirus Associated with SevereAcute Respiratory Syndrome，Paul A.Published online 1 May2003；10.1126/science.1085952)。科学家同时进行了SARS相关的冠状病毒加拿大多伦多(Tor2)分离株29751个碱基的基因组测序。基因组序列揭示这个冠状病毒与已知的冠状病毒(包括人类冠状病毒HcoV-OC43，HCoV-229E)无密切相关。预测病毒蛋白的种系分析表明，该冠状病毒与已知的三族冠状病毒均非密切相似。基因组序列将有助于人类了解SARS病毒感染的机制、潜在动物宿主的诊断检测(使用PCR和免疫测试法)，同时也有助于发展抗病毒制剂(包括中和抗体)和找出疫苗抗原决定簇(The Genome Sequence of the SARS-AssociatedCoronavirus，Marco A.Marra et al.，Published online 1 May2003；10.1126/science.1085953)。

但迄今为止，人们对SARS-CoV病毒的感染机制研究还很不充分，为降低感染率和死亡率，临床上对能够预防和/或治疗的SARS-CoV感染的特效药物有着十分紧迫的需求。

发明内容

本发明的目的是采用建立的病毒引起非洲绿猴肾细胞(VERO-E6)发生病变效应的模型，筛选已上市的以及正在开发的抗病毒药物，从中寻找对SARS病毒敏感的抗病毒药物，为临床预防和/或治疗SARS-CoV感染提供有效的抗病毒药物。

美国专利US5198552披露了含有通式I吲哚类衍生物可以用于作为预防和治疗流行性感冒的抗病毒药物及其制备方法。本发明在建立的SARS病毒引起的非洲绿猴肾细胞(VERO E6)发生病变效应的细胞模型上，筛选出具有通式I的吲哚类衍生物可以阻断SARS病毒对VEROE6细胞的侵入并阻断SARS病毒的复制，可以对SARS病毒感染的VERO-E6细胞起到保护作用，可以用于治疗和/或预防SARS病毒感染的新用途。

通式I的吲哚类衍生物中各取代基的定义如下：

其中：

R₁、R₂、R₃和R₄独立选自氢，C₁～C₄直链或支链烷基，C₂～C₄直链或支链烯基，C₃～C₈环烷基，C₅～C₈环烯基，其中的烷基或者烯基链上可以无取代，也可以被选自下面的一个或者多个基团所取代：卤素，C₃～C₈环烷基，C₅～C₇环烯基，

R₅和R₆独立选自氢，卤素，硝基，羟基，羟甲基。

本发明另一方面还涉及药物组合物，其包括至少一种通式I吲哚类衍生物或者其药用盐或其水合物以及药用载体或赋形剂的新用途。

本发明还涉及药物组合物的新用途，其包括至少一种通式I吲哚类衍生物或者其药用盐或其水合物以及药用载体或赋形剂用于预防和/或治疗传染性非典型性肺炎(Severe Acute Respiratory Syndfome，SARS)的新用途，其包括将预防和/或治疗有效量的至少一种式I吲味类衍生物或者其药用盐或其水合物给予需要上述预防和/或治疗的SARS患者。

具体讲，本发明涉及通式I的吲哚化合物，其消旋体或旋光异构体或其可药用的盐和/或水合物在制备用于治疗和/或预防SARS病毒感染的药物中用途，

其中：

R₁、R₂、R₃和R₄独立选自C₁～C₄直链或支链烷基，

R₅为羟基，R₆为卤素。

另外，本发明的药物合物为作为治疗和/或预防SARS病毒感染的药物组合物，其包括本页15-27行中所述式I吲哚化合物或盐酸阿比朵尔单结晶水的消旋体或旋光异构体或其可药用盐和/或水合物和至少一种药学上可接受的载体。

本发明还涉及式I化合物其药学上可以接受的盐，其包括但不限于：盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硝酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，磷酸氢盐，乙酸盐，丙酸盐，丁酸盐，草酸盐，三甲基乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，乳酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，富马酸盐，苦味酸盐，天门冬氨酸盐，葡糖酸盐，苯甲酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和双羟茶酸盐。

根据本发明，本发明式I吲哚类衍生物或其药用盐或水合物新用途优选自下面的化合物，6-溴代-4-(二甲胺基甲基)-5-羟基-1-甲基-2-(苯基巯基甲基)-1H-3-吲哚羧酸乙酯单结晶水盐酸盐(盐酸阿比朵尔单结晶水，Arbid01)。

本发明的另一个方面涉及药物组合物，其含有本发明化合物的消旋体或旋光异构体和至少一种药学上可接受的载体，其可用于体内治疗并具有生物相容性。所述药物组合物可以根据不同给药途径而制备成各种形式。本发明所提及的化合物也可以被制备成各种药学可接受的盐，本发明所说的药物组合物可以用于预防和/或治疗由于冠状病毒感染造成的传染性非典型性肺炎(Severe Acute RespiratorySyndrome，SARS)。

本发明涉及的可以用于预防和/或治疗由于冠状病毒感染造成的传染性非典型性肺炎(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)的药物组合物的用途是指包括有效剂量的本发明式I的吲哚类衍生物或其可药用盐和/或水合物和一种或多种适宜的可药用载体。这里的药用载体包括但不限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛脂。

本发明涉及用式I的吲哚类衍生物或其可药用盐和/或水合物阻断SARS病毒对VERO E6细胞的侵入并阻断SARS病毒的复制，，可以用于治疗和/或预防SARS病毒感染的医药用途。

本发明化合物的药物组合物可以以下面的任意方式施用：口服，喷雾吸入，直肠用药，鼻腔用药，颊部用药，局部用药，非肠道用药，如皮下，静脉，肌内，腹膜内，鞘内，心室内，胸骨内和颅内注射或输入，或借助一种外植储器用药。其中预防SARS病毒感染时优选口服、治疗SARS病毒感染时优选腹膜内或静脉内给药方式。

当口服用药时，本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊、水溶液或水悬浮液。其中，片剂使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入润滑剂如硬脂酸镁。胶囊制剂使用的稀释剂一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。如果需要，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、芳香剂或着色剂。

当局部用药时，特别是治疗局部外敷容易达到的患面或器官，如眼睛、皮肤或下肠道神经性疾病时，可根据不同的患面或器官将本发明化合物制成不同的局部用药制剂形式，具体说明如下：

当眼部局部施用时，本发明化合物可配制成一种微粉化悬浮液或溶液的制剂形式，所使用载体为等渗的一定pH的无菌盐水，其中可加入也可不加防腐剂如氯化苄基烷醇盐。对于眼用，也可将化合物制成膏剂形式如凡士林膏。

当皮肤局部施用时，本发明化合物可制成适当的软膏、洗剂或霜剂制剂形式，其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蜡和水；洗剂或霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，吐温60，十六烷酯蜡，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。

本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药，包括无菌注射水或油悬浮液或无菌注射溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。

另外需要指出，本发明化合物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。优选的使用剂量介于0.01～100mg/kg体重/天，其中最优剂量在1mg/kg-50mg/kg体重/天。

附图说明

图1A.正常Vero-E6细胞。

图1B.接种SARS病毒五天后的Vero-E6细胞。

图1C.接种SARS病毒同时加入药物盐酸单结晶水阿比朵尔10微克/毫升，五天后的Vero-E6细胞。

                      实施例

下面的实施例是本发明说明性优选实施方案，对本发明不构成任何限制。

实施例1：药物单结晶水盐酸阿比朵尔对Vero E6细胞的细胞毒性试验

单结晶水盐酸阿比朵尔按照美国专利US5198552提供的方法制备。将处理好的长成单层的非洲绿猴肾细胞(Vero E6)，接种于10mL细胞培养瓶中，37℃吸附1h，然后吸出标本液、加含有2％小牛血清的细胞维持液，置37℃ CO₂培养箱培养。分别加入1微克/毫升、10微克/毫升和100微克/毫升的药物，五天后观察药物单结晶水盐酸阿比朵尔对Vero E6细胞的毒性。对Vero E6细胞的毒性的实验结果表明，在1微克/毫升、10微克/毫升的药物浓度下，单结晶水盐酸阿比朵尔对Vero E6细胞没有毒性，完全不影响Vero E6细胞增殖和传代。

实施例2：药物盐酸单结晶水阿比朵尔保护Vero E6细胞对抗SARS病毒感染的筛选试验

单结晶水盐酸阿比朵尔按照美国专利US5198552提供的方法制备。体外(in vitro)Vero E6细胞筛选试验，将处理好的SARS病毒标本，采用病毒浓度为能使半数Vero E6细胞感染浓度的100倍(100TCID₅₀)，攻击长成单层绿猴肾细胞(Vero E6)，然后接种于10mL细胞培养瓶中，每份标本接种两瓶，37℃吸附2h，然后吸出标本液、洗去病毒，加含有2％小牛血清的细胞维持液，置37℃ CO₂培养箱培养。用96孔板测试药物对病毒感染细胞的保护作用，设不加药的阴性对照和加入10微克/毫升的药物阿比朵尔，药物加入至少4个孔，五天后观察药物对防止SARS病毒感染Vero E6细胞的保护作用，实验结果表明，在10微克/毫升药物浓度下，单结晶水盐酸阿比朵尔可以完全对抗SARS病毒对Vero E6感染，四个孔的结果平行，没有加药和加阴性对照药物孔中的细胞则完全感染。阿比朵尔保护Vero E6细胞对抗SARS病毒感染结果显示在附图1A～1C中。

Claims (3)

1.通式I的吲哚化合物，其消旋体或旋光异构体或其可药用的盐和/或水合物在制备用于治疗和/或预防SARS病毒感染的药物中用途，

其中：

R₁、R₂、R₃和R₄独立选自C₁～C₄直链或支链烷基，

R₅为羟基，R₆为卤素。

2.权利要求1的用途，其中式I化合物为6-溴代-4-(二甲胺基甲基)-5-羟基-1-甲基-2-(苯基巯基甲基)-1H-3-吲哚羧酸乙酯单结晶水盐酸盐。

3.作为治疗和/或预防SARS病毒感染的药物组合物，其包括权利要求1或2任一项所述的化合物的消旋体或旋光异构体或其可药用盐和/或水合物和至少 一种药学上可接受的载体。

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