CH620125A5 - Process for extracting calf embryo skins - Google Patents
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Description
La présente invention a pour objet un nouveau procédé d'extraction de peaux embryonnaires de veaux, ainsi que l'utilisation des substances ainsi obtenues pour la réalisation de compositions cosmétiques.
On a déjà proposé de nombreux procédés d'extraction de tissus protéiniques et notamment de tissus provenant de peaux de veaux, ces procédés étant en général réalisés à basse température, soit en milieu acide, soit en milieu alcalin, ces conditions douces étant préconisées de façon à ne pas dénaturer le produit d'extraction.
Les produits obtenus le sont en général avec des rendements relativement très faibles et ne possèdent pas une excellente activité anti-inflammatoire ou cicatrisante.
Il a également été proposé d'extraire certains tissus protéiniques à des températures très élevées, par exemple de l'ordre de 90 à 120° C, notamment en milieu aqueux tamponné à pH alcalin ou également éventuellement en milieu acide; toutefois, ces procédés conduisent à une dégradation des produits d'extraction, ceux-ci contenant une très forte proportion en gélatine.
La société titulaire, dans le but, d'une part, d'augmenter le rendement en extraits et, d'autre part, d'obtenir des extraits ayant tout particulièrement une excellente activité cicatrisante a constaté qu'en réalisant l'extraction uniquement à partir de peaux embryonnaires de veaux, à pH acide, et dans certaines limites critiques de température, il était possible d'obtenir de tels extraits utilisables de façon avantageuse dans des compositions pharceu-tiques ainsi que cosmétiques.
La présente invention, conformément au procédé selon les peaux embryonnaires de veaux sont soumises aux étapes de broyage, d'extraction, de séparation et de lyophilisation, l'étape d'extraction étant réalisée en milieu aqueux à pH acide et à une température comprise entre 60 et 75° C pendant au moins 3 h.
De façon préférentielle, le pH de la solution d'extraction est compris entre 3 et 5.
Ce pH est obtenu par addition d'un acide organique, tel que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide trichloracétique, l'acide succinique, l'acide ascorbique ou l'acide lactique.
La solution aqueuse d'extraction est en général dans un rapport kilos de peaux/litres d'eau compris entre 1:1 à 1:4.
De façon préférentielle, cette étape d'extraction est effectuée durant une période variant entre 3 et 22 h et de préférence de 8 à 15 h.
Bien entendu, le chauffage peut être effectué progressivement, c'est-à-dire que l'on peut, par exemple, chauffer pendant un temps déterminé à une température inférieure à la température de 60° C, puis entre les gammes de températures ci-dessus indiquées.
Inversement, il est possible de chauffer tout d'abord dans la gamme de températures préconisée, puis de diminuer la température et la maintenir pendant un temps variable.
Selon le procédé d'extraction de l'invention, il importe donc que le chauffage entre 60 et 75° C puisse intervenir au minimum durant 3 h.
En effet, si l'on chauffe à une température inférieure et si le chauffage est réalisé pendant un temps inférieur au temps limite, on obtient alors un extrait ne présentant pas toutes les qualités requises et, de plus, le rendement est beaucoup plus faible.
Comme on l'a indiqué ci-dessus, lorsque la température d'extraction est plus élevée, les produits d'extraction subissent une dégradation et ne présentent plus dès lors les propriétés recherchées.
Il s'est avéré, par les essais effectués par la titulaire, que la température de 75° C devait être considérée comme un maximum à ne pas dépasser.
Comme on l'a indiqué ci-dessus, les tissus protéiniques utilisés pour la réalisation du nouveau procédé d'extraction selon l'invention sont des peaux embryonnaires de veaux prélevées entre le deuxième mois de la gestation et la naissance.
L'extraction des peaux embryonnaires de veaux peut être réalisée immédiatement après le prélèvement ou les peaux peuvent être conservées avant extraction, cette conservation pouvant être effectuée soit par congélation, soit par salaison.
La première étape, étape d'ailleurs couramment utilisée dans ce type d'extraction, est le broyage ou découpage ou éventuellement pulvérisation des peaux embryonnaires de veaux, cette étape pouvant être réalisée à sec, notamment sur les produits congelés, dans de l'eau ou encore directement dans le milieu servant à l'extraction.
Comme type de broyeur, on peut par exemple utiliser ceux connus sous les dénominations commerciales de Manurhin ou U-TurraxT.P.
L'étape de séparation qui suit l'étape d'extraction peut être également réalisée selon les méthodes traditionnelles, c'est-à-dire par centrifugation, par filtration ou par essorage.
Cette étape de séparation est en général réalisée à la température ordinaire, du moins à une température inférieure à 30° C.
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Dans certains cas, il est souhaitable de répéter l'étape de séparation, notamment lorsqu'il s'agit d'une centrifugation, de façon à obtenir un surnageant le plus clair possible.
Dans le cas où le surnageant est légèrement coloré, il est alors souhaitable de le soumettre à une étape complémentaire de décoloration à l'aide de charbon actif.
Cette étape peut alors également être suivie d'une centrifugation ou filtration.
Avant l'étape terminale de lyophilisation, il est également souhaitable d'opérer une concentration sous vide à une température inférieure ou égale à 30° C, de façon à réduire le volume du surnageant.
Le surnageant est alors soumis à la dernière étape du procédé qui est l'étape de lyophilisation; celle-ci est réalisée par congélation entre —40 et — 60° C, de préférence à — 50° C.
Après cette étape de lyophilisation, on obtient l'extrait recherché qui se présente sous la forme d'une poudre blanc crème, soluble dans l'eau à pH acide.
Le produit obtenu se caractérise par le fait qu'il contient des quantités importantes de glycine, égales ou supérieures à trois fois et demie les quantités d'hydroxyproline. Ces acides aminés résultent de l'hydrolyse des protéines contenues dans la peau.
Les extraits embryonnaires obtenus selon le procédé tel que décrit ci-dessus sont utilisables en tant qu'agents actifs de compositions cosmétiques.
Les compositions cosmétiques qui peuvent être appliquées sur la peau contiennent en général de 0,3 à 5% en poids d'extraits et de préférence de 0,8 à 2%. Ces compositions peuvent être des solutions aqueuses ayant un pH compris entre 4 et 7.
Les compositions peuvent également se présenter sous d'autres formes telles que lotions, gels, crèmes, pommades, sprays aérosols.
Lorsque les compositions sont appliquées sur la peau, celles-ci permettent de combattre la dégradation et le vieillissement des tissus cutanés, d'agir en tant qu'anti-inflammatoire vis-à-vis des rougeurs, des brûlures provoquées par le soleil ou peuvent également favoriser la cicatrisation des plaies ou des brûlures.
Les compositions selon l'invention peuvent également être utilisées pour réaliser des compositions pharmaceutiques destinées à une administration parentérale telle qu'injection intramusculaire ou sous-cutanée, ces compositions consistant essentiellement en une solution aqueuse physiologique non toxique des extraits selon l'invention présents en une proportion comprise entre 0,5 à 2% en poids à pH environ 6,5 à 7,5 de préférence d'environ 7.
Ces compositions ainsi administrées sont très efficaces contre les inflammations aiguës ou chroniques telles qu'œdèmes, brûlures ou contre les inflammations subchroniques telles qu'arthrites, rhumatismes, etc.
Ces compositions sont également efficaces dans la cicatrisation des plaies.
Les extraits selon l'invention peuvent également être employés pour réaliser des compositions pharmaceutiques par voie orale qui consistent essentiellement en un mélange d'un véhicule ingé-rable non toxique et d'extraits embryonnaires selon l'invention.
De telles compositions par voie orale peuvent se présenter sous diverses formes telles que des pilules, poudres, granulés, tablettes ou microcapsules.
De façon à montrer que les conditions d'extraction, à savoir la température et le pH, ont une importance capitale dans l'obtention d'extraits ayant une excellente activité cicatrisante, différents essais comparatifs ont été réalisés.
1. Influence de la température
Les extraits de peaux embryonnaires de veaux obtenus à des températures comprises entre 60 et 75° C ont été comparés, sur le plan de l'action cicatrisante, à des extraits obtenus à des températures soit inférieures soit supérieures à celles préconisées. (Ces différentes extractions ont été réalisées selon la technique de l'exemple 1 ci-après, c'est-à-dire pH 4 et avec un temps d'extraction de 15 h.)
Les résultats obtenus sont rassemblés ci-dessous.
Température
Rendement
Hydroxy-
Activité
d'extraction
(g/kg de peaux)
proline cicatrisante
(°C)
(mg/g)
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N.B. : Des essais similaires effectués entre 60 et 75° C, mais utilisant des temps d'extraòtion de 3 et 22 h, ont permis de montrer que les variations, d'une part, sur le rendement et, d'autre part, sur l'activité étaient relativement faibles par rapport aux valeurs trouvées ci-dessus pour une extraction de 15 h.
De façon générale un temps plus court conduit à un rendement un peu plus faible, mais à une activité plus élevée, alors qu'un temps plus long conduit à un meilleur rendement mais à une activité un peu plus faible.
D'après les résultats obtenus, on constate que seules les extractions réalisées dans les conditions selon l'invention permettent d'obtenir des extraits ayant une bonne activité cicatrisante avec un excellent rendement.
Les extraits obtenus à 4 et 20° C ne sont certes pas dépourvus d'activité cicatrisante, mais celle-ci est cependant plus faible que celle observée entre 60 et 75° C et le rendement en extraits est très médiocre, puisqu'il est inférieur à environ cinq fois celui obtenu aux températures préconisées par l'invention.
.Les extractions réalisées à 40, 55, 80 et 90°C conduisent à des rendements en extraits comparables à ceux obtenus entre 60 et 75° C, mais l'activité cicatrisante est beaucoup plus faible, voire nulle, pour l'extrait obtenu à 90° C.
2. Influence du pH
Les extraits de peaux embryonnaires de veaux obtenus à des températures de 60 et 75° C et à pH 4 ont été comparés aux extraits obtenus à ces mêmes températures, mais à un pH de 8. Les extractions ont été réalisées selon le mode opératoire de l'exemple 1 ci-après, mais l'acide citrique a été remplacé-par la quantité suffisante de soude pour amener le pH à 8.
Les résultats obtenus sont rassemblés ci-dessous :
Température pH
Rendement
Hydroxy-
Activité
d'extraction
(g/kg de peaux)
proline cicatrisante
(°C)
(mg/g)
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Comme on peut le constater, l'activité cicatrisante des extraits obtenus à pH 8 est beaucoup plus faible. Ces extraits sont environ 2 à 2,5 fois moins actifs que ceux obtenus à pH 4 et, de plus, les rendements sont plus faibles.
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L'activité cicatrisante dont il a été fait mention ci-dessus résulte de la mesure de la résistance d'une cicatrice à l'arrachement.
Mode opératoire
Animaux
Les différents groupes d'animaux comprennent au moins 10 rats mâles de race Wistar, d'un poids voisin de 250+10 g.
Ces animaux sont anesthésiés au Pentobarbital sodique (50 mg/kg, soit 1 ml d'une solution à 12 mg/ml) puis la région dorsale du rat est rasée à l'aide d'une tondeuse électrique.
Les plaies expérimentales
L'étude des forces de rupture des cicatrices se fait sur des plaies dites par première intention, c'est-à-dire obtenues par incision linéaire de toute l'épaisseur de la peau à l'aide d'une lame de rasoir et de ciseaux. Cette cicatrice médiodorsale est perpendiculaire à l'axe de l'animal et a une longueur de 1 cm. Les bords de la plaie sont alors jointifs spontanément et la cicatrisation ne nécessite la pose ni d'agrafes ni de sutures.
Les animaux sont ensuite placés dans des cages individuelles de façon à éviter la perturbation et la souillure des plaies par les autres animaux.
L'administration des produits à étudier se fait en effectuant cinq applications topiques, à raison de 250 mg de crème sur une surface de 25 cm2, à partir des jours J + 5 jusqu'au jour J+9 compris (J étant le jour de réalisation de la plaie).
Les animaux sont sacrifiés au chloroforme le douzième jour après la réalisation de la plaie et on mesure pour chacun :
a) l'épaisseur de la peau de part et d'autre de la cicatrice (à 2 cm) à l'aide d'un micromètre Lhomargy.
b) la force de rupture de la cicatrice à l'aide d'éprouvettes de peau haltériformes découpées à l'emporte-pièce perpendiculairement à l'axe de la cicatrice.
Ces éprouvettes de peau ont 1 mm de large et 50 mm de long. Leurs deux extrémités sont serrées entre les mâchoires d'un dynamomètre Lhomargy. Celui-ci exerce une traction de force variable (de 0 à 500 g) mais à vitesse constante (5 cm/mn) sur la cicatrice.
Résultats
La force nécessaire à la rupture des bords de la plaie est donnée par l'appareil en centinewtons. Les chiffres trouvés sont traités statistiquement par le test «t» de Student.
On calcule ensuite le pourcentage d'augmentation de la force de rupture des plaies des animaux traités par rapport à celles des animaux n'ayant reçu aucun traitement.
On va maintenant donner à titre d'illustration et sans aucun caractère limitatif plusieurs exemples de préparation d'extraits embryonnaires de peaux de veaux selon l'invention, ainsi que plusieurs exemples de compositions cosmétiques et pharmaceutiques.
Exemples de préparation
Exemple 1 :
19 kg de peaux fraîches d'embryons de veaux sont broyés avec 401 d'eau distillée dont le pH a été amené à 4 par addition de la quantité nécessaire d'acide citrique.
La solution ainsi obtenue est alors portée à une température de 75° C pendant une nuit (environ 15 h), puis ramenée à une température de l'ordre de 35° C.
On centrifuge ensuite à 10000 t/mn pendant 2 h à la température ambiante.
Cette opération peut éventuellement être répétée si le surnageant ne se présente pas sous forme claire. On concentre alors sous vide à + 30° C et on lyophilise à — 50° C.
Selon ce procédé, on a ainsi obtenu 1,850 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux, sous forme de poudre, soit 100 g de poudre par kilo de peaux (activité cicatrisante: 31). Dans cet exemple, l'acide citrique peut être avantageusement remplacé par de l'acide trichloracétique sans pour cela qu'on constate une baisse du rendement, ou de l'activité cicatrisante.
5 Exemple 2:
11 kg de peaux embryonnaires de veaux sont broyés dans 151 d'eau distillée additionnée de la quantité suffisante d'acide acétique de façon à amener le pH à 4.
10 On porte alors à une température de + 60° C pendant une nuit (15 h), puis la température est ramenée à +35°C.
Après centrifugation et traitement à l'aide de charbon actif de façon à décolorer le surnageant, on lyophilise directement le produit sans concentrer sous vide.
15 La lyophilisation est réalisée à une température de l'ordre de —50°C.
On obtient ainsi 1 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux sous forme de poudre blanchâtre, soit 91 g de poudre par kilo de peaux.
20 Dans cet exemple, l'acide acétique peut être avantageusement remplacé soit par de l'acide succinique, soit par de l'acide ascorbique.
Exemple 3:
25 383 kg de peaux embryonnaires de veaux fraîches sont broyés avec 4001 d'eau distillée dans un broyeur Manurhin, puis additionnée d'acide acétique jusqu'à obtention d'un pH de 4,5.
La température est alors portée à 45° C pendant 15 h, puis pendant 3 h à 75° C.
30 On laisse la température revenir aux environs de 30° C.
On sépare tout d'abord l'insoluble au moyen d'un débourdeur (2 à 3 h) puis avec un clarificateur Westalia (une journée). Le surnageant obtenu est recueilli à +4°C.
On filtre l'ensemble du surnageant sous vide à une tempéra-35 ture de 30° C sur filtre de papier en utilisant une presse, puis on concentre le filtrat sur un concentrateur Thermap.
Après avoir ajouté 1 g de merthiolate de sodium pour 51 de jus concentré, on lyophilise à une température de l'ordre de —50°C.
40 On obtient ainsi 25 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux sous forme de poudre blanchâtre, soit 65,5 g de poudre par kilo de peaux.
Dans cet exemple, l'étape de séparation n'a pas été réalisée par centrifugation, ce qui explique en partie le rendement plus faible 45 obtenu.
Exemple 4:
300 kg de peaux embryonnaires de veaux sont broyés dans 4001 d'eau distillée dont le pH a été amené à 4 par addition 50 d'une quantité suffisante d'acide acétique. On porte ensuite la température à 65° C, pendant 22 h tout en agitant. On centrifuge et clarifie comme indiqué dans les exemples précédents.
Après concentration sous vide et lyophilisation à — 50° C, on obtient 30 kg d'extraits embryonnaires de peaux de veaux sous 55 forme de poudre, soit 100 g de poudre par kilo de peaux.
Dans cet exemple, l'acide acétique peut être remplacé par de l'acide succinique sans pour cela qu'on note une variation sur le rendement ou sur l'activité cicatrisante.
Exemples de compositions
Exemple A:
On prépare un lait corporel pour le traitement des peaux sèches, présentant des rugosités, en procédant au mélange des ingrédients suivants:
«s Mono- et distéarate de polyéthylèneglycol 600 vendu sous la dénomination commerciale de Tefosse 1500 par la société
Gattefosse 7 g
Stéarine 2 g
Huile de paraffine 10 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,15 g
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 1 0,85 g
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g
Ce lait appliqué régulièrement redonne aux peaux ainsi traitées un aspect satiné et lisse.
Exemple B:
On prépare un lait corporel destiné à être appliqué sur des peaux présentant des rougeurs dues à une exposition prolongée au soleil et au vent, en procédant au mélange des ingrédients suivants:
Stéarate de triéthanolamine 7 g
Stéarine 2 g
Huile de paraffine 10 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,15 g
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 2 1,25 g
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100g
Par application régulière de ce lait, on obtient une disparition des rougeurs de la peau.
Exemple C:
On prépare un lait corporel destiné au traitement de la desquamation de la peau des jambes en procédant au mélange des ingrédients suivants:
Alcool cétylique (2%) 7 g
Stéarine 2 g
Huile de paraffine 10 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,15 g
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 3 0,85 g
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g
Exemple D:
On prépare une crème destinée à traiter la peau du visage et du cou présentant de légères rides et plus particulièrement les peaux abîmées ou fatiguées en procédant au mélange des ingrédients suivants :
Polyéthylènecétyléther 2 g
Alcool cétylique 1 g
Alcool stéarylique 1 g
Huile de vaseline 15g
Lanoline 3 g
Palmitate d'isopropyle 5 g
Huile de Purcellin 3 g
Acide stéarique 2 g
Carbopol 940 0,4 g
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Triéthanolamine 0,4 g
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 4 1,250 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100g
L'aplication de cette crème de façon journalière redonne à la peau un aspect reposé et atténue les rides.
Exemple E:
On prépare une crème destinée au traitement de la couperose et des petites rougeurs, en procédant au mélange des ingrédients suivants:
Polyoxyéthylènestéaryléther 2 g
Alcool cétylique 2 g
Huile de vaseline 18g
Lanoline 3 g
Palmitate d'isopropyle 5 g
Acide stéarique 2 g
Carbopol 0,15 g
Triéthanolamine 0,4 g
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 2 1,250 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g
Exemple F:
On prépare une lotion destinée au traitement de peaux fatiguées et grasses en procédant au mélange des ingrédients suivants:
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 3 0,85 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g
Propylèneglycol 0,5 g
Parfum (eau de rose) 0,02 g
Triéthanolamine q.s.p. pH 6
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g
Cette lotion appliquée sur de telles peaux redonne un aspect normal et sain.
Exemple G:
On prépare une lotion destinée au traitement des paupières présentant des rougeurs et des boursouflures en procédant au mélange des ingrédients suivants:
Extrait embryonnaire obtenu selon l'exemple 3 0,85 g
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,2 g
Glycérine 0,5 g
Parfum (eau de rose) 0,02 g
Triéthanolamine q.s.p. pH 6
Eau déminéralisée stérile, q.s.p 100 g
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Claims (10)
1. Procédé d'obtention d'un extrait de peau d'embryon de veau comprenant les étapes de broyage de la peau, d'extraction de la peau broyée, de séparation de l'extrait et de lyophilisation de celui-ci, caractérisé par le fait que l'étape d'extraction est réalisée pendant au moins 3 h à l'aide d'une solution aqueuse ayant un pH acide et à une température comprise entre 60 et 75° C, et que l'on obtient un extrait contenant de la glycine et de l'hydroxyproline libérées par hydrolyse des protéines de la peau, la quantité de glycine étant égale à au moins trois fois et demie la quantité d'hydroxyproline.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'extraction est réalisée sur des peaux embryonnaires de veaux prélevées entre le deuxième mois de gestation et la naissance.
2
REVENDICATIONS
3. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le pH de la solution d'extraction est compris entre 3 et 5.
4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le pH acide est obtenu par l'addition d'un acide organique tel que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide trichloracétique, l'acide succinique, l'acide ascorbique ou l'acide lactique.
5. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que la solution aqueuse acide d'extraction est utilisée dans un rapport kilos de peaux/litres compris entre 1:1 à 1:4.
6. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'étape d'extraction est réalisée durant une période comprise entre 3 et 22 h et de préférence entre
7. Utilisation de l'extrait de peau d'embryon de veau obtenu conformément au procédé selon la revendication 1 en tant qu'agent actif d'une composition cosmétique à usage non thérapeutique.
8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée par le fait que la composition contient de 0,3 à 5% en poids d'extraits, de préférence de 0,8 à 2%.
8 et 15 h.
9. Utilisation selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisée par le fait que la composition est une solution aqueuse ayant un pH compris entre 4 et 7.
10. Utilisation selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisée par le fait que la composition se présente sous forme de lotion, de gel, de crème, de pommade ou de spray aérosol.
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|---|---|
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Family Applications (1)
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