Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel 1
EMI1.1
in der R ein Wasserstoffatom, eine Hydroxyl- oder Aminogruppe und X eine Gruppe NR1R2 bedeuten, in der R1 und R2 unabhängig voneinander je eine geradkettige oder verzweigte Alkyl- oder Alkenylgruppe, eine Aryl- oder Aralkylgruppe, R1 ausserdem ein Wasserstoffatom, bedeuten, wobei die aromatischen Ringe durch Halogenatome, Hydroxylgruppen, Alkylgruppen oder Alkoxygruppen und die Alkylgruppen durch OH-Gruppen substituiert sein können oder R1 und Re die Ergänzung zu einem gegebenenfalls ein weiteres Ringheteroatom enthaltenden heterocyclischen Rest bilden.
Unter Alkyl-, Alkenyl- und Alkoxygruppen werden insbesondere solche mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen in gerader oder verzweigter Kette verstanden, wobei solche mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bevorzugt sind. Allfällige Aralkylgruppen weisen allgemein bis zu 8 Kohlenstoffatome in der Alkylgruppe, die geradkettig oder verzweigt sein kann, auf.
Als Heteroatome kommen insbesondere Stickstoff oder Sauer stoff in Betracht.
Cyclische 3':5'-Phosphate von Nucleosiden gewinnen in der Biochemie laufend an Bedeutung und Adenosin-3':5'cyclophosphat ist seit seiner Entdeckung durch Sutherland vor 10 Jahren (Sutherland, Rall. J. Amer, Chem. Soc. 79, 3608 [1957]) zu einer Schlüsselsubstanz in der Glykose, der Lipolyse und bei Hormonstoffwechselwirkungen geworden, deren physiologische Bedeutung vielfach mit dem wichtigsten Energieüberträger ATP in der Zelle gleichgesetzt wird. Nach der Theorie von Sutherland fällt dem Adenosin-3':5'-cyclophosphat physiologisch in der Zelle die Funktion eines Second messenger zu, was am Beispiel der Wirkung des Peptidhormons ACTH kurz veranschaulicht sei.
Von der Hypophyse ausgeschüttetes ACTH gelangt über die Blutbahn an die Nebennierenrinde, in deren Zellwand das Enzym Adenylcyclase sitzt, die auf das extracelluläre ACTH-Signal hin aus Adenosintriphosphat intracellulär-Adenosin-3':5'-cyclophosphat bildet, das nun seinerseits die Biosynthese und Ausschüttung von Corticosteroiden bewirkt. Ähnlich liegen die Verhältnisse bei der Glykogenolyse, Lipolyse usw. Die Selektivität ist also durch die Rezeptoren der jeweiligen Erfolgsorgane gegeben, die Adenosin-3':5'-cyclophosphat als intracelluläres Signal haben; Adenosin-3':5'-cyclophosphat von aussen appliziert, hat jedoch multiple Wirkungen, was pharmakologisch oft unerwünscht ist. Ausserdem wird es im Organismus verhältnismässig rasch gespalten, so dass seine Wirkungsdauer gering ist.
Es besteht daher ein Bedürfnis nach Schaffung von Ade nosin-3':5'-cyclophophatanalogen mit verbesserter Spezifität der Wirkung und längerer Wirkungsdauer.
Die Synthese von modifizierten Analogen von Adenosin3':5'-cyclophosphatderivaten erfolgte bisher auf sehr umständliche und aufwendige Weise, die am Beispiel des 6 Mercaptopurinribonucleosid-3': 5'-cyclophosphates illustriert sei:
Inosin < Überführung in 2',3',5'-Tribenzylinosin Reaktion mit P2Ss zum 6-Mercaptopurinribonucleosid Entfernung der Schutzgruppe und Einführung einer neuen Schutzgruppe an 2',3'-Hydroxylgruppe (z. B. durch Katalisierung), wobei die 5'-OH-Stellung freibleibt , Phosphorylierung am 5'OH mit ss-Cyanoäthylphosphat und DCC als Kondensationsmittel o Abspaltung a) von 2',3'-OH-Schutzgruppe, b) von Phosphat-Schutzgruppe < Cyclisierung zum gewünschten Produkt.
Die Ausbeuten bei dieser vielstufigen Synthese sind sehr niedrig (1,5 /0 der Theorie; J. Thomas, Montgomery J. Med.
Pharm Chem. 11, 44 [1968]), zumal die hydrolyse- und oxydationsempfindliche Mercaptogruppe von Anfang an mit durch die einzelnen Reaktionsstufen gezogen werden muss.
Auf analogem Wege wurden diverse Derivate von Deazapurinribonucleosid-3':5'-cyclophosphat (Tubercidin) hergestellt (A. Hanze, Upjohn, USA-Patentschrift 3 300 479; A. Hanze, Biochemistry 7, 932 [1968]); ebenso Cytosinarabinosid-2':5'cyclophosphat.
Für ein industriell anwendbares Verfahren schied die obige Herstellungsweise auf Grund ihrer Umständlichkeit und geringen Ausbeute aus. Es wurde daher ein Weg gesucht, von der präformierten Cyclophosphatverbindung ausgehend die Substitution in Stellung 6 des Puringerüstet durchzuführen.
Folgende Verfahren zur Umwandlung der Hydroxylgruppe in die Chlorgruppe bei gewöhnlichen Nucleosiden sind bekannt:
1. Chlor in Methanol [G. D. Daves et al., J. Amer. Chem.
Soc. 82, 2633 (1969); F. Bergmann et al., J. Chem. Soc.
10, 1966],
2. konzentrierter Salzsäure, Chlorgas und Methanol [Gerster et al., J. Org. Chem. 28, 945, (1963)],
3. Diäthylanilin und POC13 [Gerster et al., J. Org.
Chem. 28, 945, (1963)],
4. SoCl2-DMF [M. Ikehara, Chem. Pharm. Bull. 12, 267 (1964)].
Es wurde jedoch gefunden, dass keines dieser bekannten Verfahren bei Anwendung auf das 6-Hydroxypurinribonucleosid-3':5'-cyclophosphat zu dem gesuchten Produkt führt.
Die Versuche ergaben, dass hierbei entweder eine extensive Degradation auftrat oder das Ausgangsmaterial überhaupt nicht umgesetzt wurde. Dies zeigt, dass die Reaktionsfähigkeit bei Einführung einer Cyclophosphatgruppe auch im Purinkern grundsätzlich verändert wird und daher die für die Purinnucleoside bekannten Verfahren sich nicht auf die cyclischen Nucleosid-3':5'-phosphate übertragen lassen. Das gleiche gilt auch für die in der Nucleosidreihe bekannte Umwandlung von Inosin in das entsprechende 6-Mercaptoderivat durch Umsetzung mit P2S5. Am präformierten Cyclophosphat ist diese mit den Nucleosiden glatt verlaufende Reaktion nicht durchführbar und führt unter keinen Bedingungen zum gewünschten 6-Mercaptoderivat.
In der japanischen Patentschrift 7957/68 wurde bereits die Herstellung von 6-Chlorpurin-desoxyribosid-3': 5'-cyclo- phosphat beschrieben durch Umsetzung mit Phosphortrichlorid und einer alkalischen Substanz, wie einem anorganischen Alkali oder aliphatischen oder aromatischen Amin.
Dieses bekannte Verfahren führt zu einer Ausbeute von 26 /0.
Es wurde jedoch festgestellt, dass sich diese Umsetzung nicht beim gewöhnlichen 6-Hydroxypurinribonucleosid-3' :5'- cyclophosphat durchführen lässt. In Gegenwart von Basen wie z. B. Diäthylanilin ergibt sich unter den Bedingungen des bekannten Verfahrens keine Umwandlung und das Reaktionsmedium färbt sich schwarz-braun und enthält zahlreiche Zersetzungsprodukte.
Es wurde nun festgestellt, dass man die Verbindungen der Formel 1 ohne Schwierigkeiten und in guter Ausbeute erhalten kann, wenn man von den entsprechenden, in 6-Stellung halogensubstituierten Verbindungen ausgeht und diese mit einem entsprechenden Amin umsetzt.
Die Umsetzung mit einem Akin, z. B. einem primären, sekundären oder tertiären Amin, erfolgt zweckmässig in alkalischem Medium. Vorzugsweise wird das Amin als Lösungsmittel verwendet. Gegebenenfalls unter Zusatz eines weiteren üblichen Lösungsmittels.
Die Reinigung der erhaltenen Produkte erfolgt nach den in der Nucleosidchemie üblichen Methode. Gute Ergebnisse werden mit der chromatographischen Reinigung erzielt. Vorzugsweise wird hierzu ein Anionenaustauscher, Aktivkohle oder Kieselgel verwendet.
Die als Ausgangsmaterial zu verwendenden 6-Halogen purinribonucleosid-3' : 5'-cyclophosphate können erhalten werden, indem ein entsprechendes 6-Hydroxypurinribonucleosid 3':5'-cyclophosphat mit einem Acylierungsmittel in Gegenwart einer Base umgesetzt, nicht umgesetztes Acylierungsmittel und Base entfernt und der Rückstand mit überschüssigem Phosphoroxyhalogenid umgesetzt wird.
Vorzugsweise wird mit Phosphoroxychlorid das 6-Chlorderivat bei einer Temperatur zwischen Raumtemperatur und Rückflusstemperatur hergestellt.
Das für die Halogenierung verwendete Ausgangsprodukt wid dabei in der ersten Stufe des Verfahrens acyliert, um es im Phosphoroxyhalogenid löslich zu machen. Die Acylierung muss nur in solchem Ausmass durchgeführt werden, dass das acylierte Produkt ausreichend löslich für die Umsetzung in POHals ist. Vorzugsweise wird die Acylierung mit einem Acylchlorid oder Acylanhydrid in Gegenwart eines alkalischen Mittels durchgeführt. Bevorzugt erfolgt die Acylierung mit Acetylchlorid, Essigsäureanhydrid oder Benzoylchlorid.
Als alkalisches Mittel werden vorzugsweise organische Basen verwendet, die sich zusammen mit überschüssigem Acylierungsmittel leicht durch Destillation vom acylierten Nucleosid abtrennen lassen. Als gut geeignet erwies sich die Umsetzung mit Essigsäureanhydrid in Pyridin, die unschwierig auch bei Raumtemperatur durchgeführt werden kann. Hierbei entsteht das 6-Hydroxypurin-2'-0-acetylribonucleosid-3':5'-cyclo- acetylphosphat, welches in POHals gut löslich ist und sich daher für die Umsetzung besonders eignet. Das 2'-0-Acetyl 6-hydroxypurinribonucleosid-3' : 5'-cyclophosphat eignet sich ebenfalls, jedoch ist die Ausbeute infolge der geringeren Löslichkeit schlechter.
Nach beendeter Acylierung werden restliches Acylierungs- mittel und Base entfernt, vorzugsweise durch Destillation.
Das zurückbleibende ölige Acylierungsprodukt wird direkt mit überschüssigem POHals umgesetzt. Hierbei dient das POHals sowohl als Lösungsmittel als auch als Reagenz. In Abwesenheit einer basischen Substanz, wie z. B. Diäthylanilin bildet sich hierbei innerhalb kurzer Zeit mit einer Ausbeute von über 50 0/0 das gewünschte 6-Halogenpurinribonucleosid3':5'-cyclophosphat, wobei als Hauptnebenprodukt 6-Halogen purin gebildet wird.
Die Acylierung in der ersten Stufe des Verfahrens erfolgt in üblicher Weise, vorteilhaft bei Raumtemperatur. Vorzugsweise erfolgt die Umsetzung hierbei unter Lichtabschluss.
Nach der Entfernung des restlichen Acylierungsmittels und der alkalischen Substanz wird das zurückbleibende Öl vorzugsweise durch Waschen mit einem geeigneten Lösungsmittel, wie Äther, von letzten Resten an alkalischer Substanz und Acylierungsmittel befreit.
Die Acylierungsreaktion kann bei Temperaturen zwischen Zimmertemperatur und Rückflusstemperatur der am niedrigsten siedenden Komponente durchgeführt werden.
Die Umsetzung mit dem überschüssigen POHal3, vorzugsweise POCl3, lässt sich ebenfalls bei Temperaturen zwischen Raumtemperatur und der Rückflusstemperatur der am niedrigsten siedenden Komponente durchgeführt werden.
Die Umsetzung mit dem überschüssigen POHal3, vorzugsweise POCls, lässt sich ebenfalls bei Temperaturen zwischen Raumtemperatur und der Rückflusstemperatur durchführen. Vorzugsweise wird bei erhöhter Temperatur, insbesondere am Rückfluss gekocht. Unter diesen Bedingungen ist die Umsetzung nach etwa 15 bis 60 Minuten beendet und überschüssiges POHal3 wird abdestilliert. Die Reinigung des so gewonnenen rohen 6-Chlorpurinribonucleosid-3':5'-cyclophosphats erfolgt vorteilhaft durch Chromatographie an einem geeigneten Ionenaustauscher oder Kieselgel.
Die erfindungsgemäss erhältlichen Verbindungen sind neu. Sie sind interessante therapeutisch wirksame Substanzen und können als solche oder in Form ihrer Salze mit physioloigsch verträglichen Basen zur Beeinflussung der Glykolyse, der Lipolyse und des Hormonstoffwechsels eingesetzt werden.
Der besten bekannten Verbindung gleicher Wirkungsrichtung und vergleichbarer chemischer Konstitution, dem N6-2'-0-Di- butryl-adenosin-3':5'-monophosphat, sind die erfindungsgemässen Verbindungen in verschiedener Hinsicht überlegen.
Insbesondere weisen sie folgende Vorteile auf:
1. Die Phosphorylase-Aktivierung tritt bei den erfindungsgemässen Substanzen bereits bei geringeren Konzentrationen an als bei der erwähnten bekannten Verbindung.
2. Die Lipolyse-Aktivierung der erfindungsgemässen Verbindungen tritt entweder bei gleicher oder bei mässig verminderter Konzentration auf. Die Folge ist eine Verschiebung des Wirkungsspektrums zugunsten der Phosphorylase-Aktivierung, die in der nachstehenden Tabelle durch den Konzentrationsquotienten für beide Aktivierungen (letzte Spalte) zum Ausdruck kommt. Gegenüber einem Faktor 2 für die bekannte Verbindung verschieben sich die Wirkungen bei den erfindungsgemässen Verbindungen auf den Faktor 3 bis 500.
In einigen Fällen ist die Lipolyse-Aktivität hierbei so schwach ausgeprägt, dass von einer nahezu reinen Phosphorylasewirksamkeit, also hoher pharmakologischer Spezifität, gesprochen werden kann.
In der nachstehenden Tabelle sind die Ergebnisse der durchgeführten Vergleichsversuche aufgeführt.
Tabelle I
Physiologisch-chemische Eigenschaften der 6-substituierten Derivate des Purinribofuranosid-3' :5'-monophosphats (PR-3':5'-MP) Substanz max. Aktivierung Halbwert-Aktivierung Quotient der Konzen der Lipolyse bei (M) der Phosphorylase trationen für Lipase bei (M) und Phosphorylase
Aktivierung N6-2'-O-Dibutyryl-A-3':5'-MP 4.10-6 2.10-6 2 6-Benzylamino-PR-3':5'-MP 1.10-7 7.10-9 14 6-(2-Methylbenzylamino)-PR-3':5'-MP 5.10-6 1.10-8 500 6-(4-Methylbenzylamino)-PR-3':5'-MP 5.10-7 1.10-7 5 6-(2-Chlorbenzylamino)-PR-3':5'-MP 5.10-7 7.10-9 71 6{1-Phenyl-)äthylamino-PR-3':
:5'-MP 3.10-1 3.10-8 10 6-(2-Phenyl-)äthylamino-PR-3':5'-MP 1.10-6 gross 6-Pentylamino-PR-3':5'-MP 1.10-4 7.10-8 gross 6-(1-Allylamino)-PR-3':5'-MP 1.10-5 1.10-' 100 6-Ephedrinyl-PR-3':5'-MP 1.10-5 7.10-i 14 6-Morpholino-PR-3':5'-MP 2.10-i 7.10-8 3
Ausser der Beeinflussung des Kohlehydratstoffwechsels und Lipidstoffwechsels kommen den erfindungsgemäss erhältlichen Verbindungen weitere interessante Wirkungen zu, z. B. eine allgemeine energiemobilisierende Wirkung, die beispielsweise einen Einsatz bei Strass und Schock gestattet.
Eine weitere Wirksamkeit liegt in der Erhöhung der Nebennierensteroidprodukte sowie bei der Lösung von Asthma. Die erfindungsgemäss erhältlichen Verbindungen wirken auch als präformiertes Nucleotid und können daher beispielsweise eine Antimetabolitwirkung bei der Immunsupression sowie bei Tumoren aufweisen. Ferner wurde neben einer allgemeinen sedierenden Wirkung in einigen Fällen auch eine Potenzierung der Wirkung von Narkotika gefunden. Auch ein positiv inotroper Herzeffekt konnte festgestellt werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter.
Beispiel 1 6-Morpholino-purinribofuranosid-3':5'-MP-Natriumsalz
5 g rohes 6-Chlorpurinribosid-3':5'-MP in Form der freien Säure (Gehalt an reinem 6-Chlorpurinribosid-3':5'-MP ca.
60 0/o) werden in 20 ml Wasser gelöst, mit einem Überschuss an Morpholin (6 ml) versetzt und 1 h bei 800 gehalten. Nach dem Abkühlen wird der grösste Teil des Morpholins durch dreimaliges Ausschütteln mit Äther entfernt. Die wässrige Phase wird nach Ansäuern mit Essigsäure auf pH = 3 auf eine Anionenaustauschersäule (Dowex 1 X 2, Formiat; 1 m lang, 1,5 cm °)) aufgezogen, mit 500 ml Wasser gewaschen und mit einem linearen Gradienten von 2 1 Wasser gegen 21 1 M Ammoniumformiat eluiert. Dabei werden alle Ver- unreinigungen entfernt. Das gewünschte Produkt wird mit 1,5 M Ammoniumformiat eluiert, das Eluat über eine Kohlensäule (100 ml Inhalt) entsalzt und das Produkt mit Iso propanol: Wasser: NH3 = 50 : 50 1 eluiert.
Nach Kon- zentration im Vakuum und Kationenaustauscherpassage (Dowex 50 - Na-Form) wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 3,5 g (70 O/o der Theorie).
Analyse: Ci4H1,O7N5PNa1H2O, Molgewicht 439,31 Berechnet: N 15,93 %, P 6,82 %, Na 5,24 8%, H20 4,1 % Gefunden: N 16,3 %, P 6,98 %, Na 5,3 %, HsO 4,1 %
Beispiel 2 6-(4-Methylbenzylamino)-purinribofuranosid-3':5'-MP- Natriumsalz
5 g rohes 6-Chlorpurinribosid-3':5'-MP in Form der freien Säure (12,5 mMol, 67,5 o/o an freier Säure), werden mit 4,5 g 4-Methylbenzylamin (37,5 mMol) in 50 ml Äthanol gelöst und 1 bis 2 h am Rückfluss erhitzt. Nach Abdestillation des Alkohols wird in 100 ml Wasser aufgenommen und 2mal mit je 50 ml Äther im Scheidetrichter extrahiert.
Die wässrige Phase wird über eine Dowex 1 X 2 Säule (Formiat-Form, 5-100 mesh) gezogen. Mit einem linearen Gradienten von 21 Wasser, 21 1,5 M Ammoniumformiat werden die Verunreinigungen ausgewaschen. Durch anschliessende Elution mit 1,5 M Natriumchlorid, pH = 3, wird das Produkt eluiert, die vereinigten Fraktionen werden über Kohle entsalzt und mit einem Gemisch von Äthanol: Wasser: NH5 = 50 : 60: 1 eluiert. Die wässrige Phase wird eingeengt und nach einer Dowex 50 - Na-Form-Passage gefriergetrocknet.
Ausbeute: 3,2 g, ca. 73 o/o der Theorie, bezogen auf das eingesetzte 6-Chlorpurinribosid-3':5'-MP. Reinheit ca. 95 0/o.
Zur restlosen Entfernung der Verunreinigungen werden die 3,2 g Produkt in wenig Wasser gelöst und auf 3 Kieselgel Dickschichtplatten (50 cm lang, 20 cm hoch; Schichtdicke 2,5 mm) aufgetragen und mit Isopropanol: NH3: H20 = 7 1: 1, pH = 10, innerhalb 10 Stunden entwickelt. Nach Entfernung von kolloidal gelöstem SiO2 an Kohle werden so 1,9 g reines Natriumsalz erhalten.
Analyse: C18H19O6N5PNa, Molgewicht 455,37
Die gefriergetrocknete Substanz enthält noch 4,98 0/0 H2O Berechnet: N 14,65 /o, P 6,50 0/0, Na 4,83 o/o Gefunden: N 13,80 O/o, P 6,11 0/0, Na 5,3 0/0
Beispiele 3 bis 18
Die nachstehend aufgeführten Verbindungen wurden wie in den vorhergehenden Beispielen beschrieben, dargestellt.
Beispiel Verbindung X
3 6-Phenylamino-Pu-3':5'-MP NR1R2; Rot = Pentyl, R2 = H
4 6-Dimethylamino-Pu-3':5'-MP NR1R2; Rs = R2-Methyl
5 6-(Allylamino)-Pu-3':5'-MP NR1R2; Rt = Allyl, R2 = H
6 6-(Benzylamino)-Pu-3':5'-MP NRtR2; R1 = Benzyl; R2 = H
7 6-(2'-Chlorbenzylamino)-Pu-3':5'-MP NRtR2; R1 = 2'-Chlorbenzyl; R2 = H
8 6-(2'-Methylbenzylamino)-Pu-3':5'-MP NRtR2; R1 = 2'-Methylbenzyl;
R2 = H
9 6-(3',4'-Dimethoxyphenyläthylamino)-Pu-3':5'-MP NRtR2; Rot = 3',4'-Dimethoxyphenyläthyl, R2 = H
10 6-(2-Phenyläthylamino)-Pu-3' :5'-MP NRoR2; R1 = Phenyläthyl-(2), R2 = H
11 6-(1-Phenyläthylamino)-Pu-3':5'-MP NR1R2; Ri = Phenyläthyl-(1), R2 = H
12 6-(1-Phenylbutyl-(3)-amino)-Pu-3':5'-MP NR1R2;
R1 = 1-Phenyl-butyl-(3), Ri = H
13 6-(Piperidino)-Pu-3' :5'-MP NRtR2; Ri + R2 = Piperidino
14 6-(Ephedrino)-Pu-3':5'-MP NR1R2; Rot = 3-Phenyl-3-hydroxypropyl-(2), R2 = CH3
15 6-Penhylamino-Pu-3' :5'-MP Nur92; R1 = Phenyl, R2 = H
16 6-Phenylamino-Pu-3':5'-MP NR1R2; Ri = Phenyl, R2 = H
17 6-Piperazino-Pu-3':5'-MP NRlR2; R1 + R2 = heterocyclischer Ring
18 6-(1-Methyl-2-phenyläthylamino)-Pu-3' :
:5'-MP NRtR2; R1 = 1-Methyl-2-phenyläthyl, R2 = H
In der nachstehenden Tabelle sind die charakteristischen Daten der in den Beispielen aufgeführten erfindungsgemässen Verbindungen hinsichtlich UV-Spektrum und elektrophoretischem Verhalten wiedergegeben.
Tabelle II Verbindung Neutral Sauer Alkalisch
005 M Phosphat O. IN HCI O. IN NaOH min. max. max. min. max. min.
6-Piperidino-Pu-3':5'-MP 279,5 244 278 238 281,5 246 6-Morpholino-Pu-3':5'-MP 277 235 273,5 235 278 238,5 6-Ephedrino-Pu-3' :5'-MP 277 246 273 241 279 245
6-Allylamino-Pu-3' :5'-MP 266 230 262,5 230 267 233 6-Pentylamino-Pu-3':5'-MP 266,5 231 262 229 267,5 234 6-Benzylamino-Pu-3' :5'-MP 266 236 2S5 235 268 238
6-(2'-Chlorbenzylamino)-Pu-3' :5'-MP 267,5 232,5 264 232,5 268,5 235 6-(3',4'-Dimethoxyphenyläthylamino)-Pu-3' :5'-MP 268 235 264 234 269 240 6-(4'-Methylbenzy]amino)-Pu-3':5'-MP 267 237 266 236 269 240 6-(2-Phenyläthylamino)-Pu-3' :5'-MP 268 232,5 264 232 268 234,5
6-(1-Phenyläthylamino)-Pu-3':5'-MP 267,5 241 266 234 270 238
6-(1-Phenylbutylamino-(3)-)-Pu-3':
:5'-MP 269 237 266 236 270 240 6-Dimethylamino-Pu-3' :5'-MP 274 235 268 231,5 275 237,5 6-(2'-Methylbenzylamino)-Pu-3';5'-MP 266,5 231,5 264 232,5 267,5 235 Tabelle II (Fortsetzung)
Verbindung W-Quotient* * Elektrophor. * Chromato neutral sauer MOB Rel. zu graphie in
250/ 280/ 290/ 250/ 280/ 290/ A-3':5'-MP LSMA***
260 260 260 260 260 260
6-Piperidino-Pu-3':5'-MP 0,46 2,17 1,88 0,53 1,22 0,82 0,94 0,74
6-Morpholino-Pu-3':5'-MP 0,46 1,93 1,27 0,52 1,35 0,91 0,97 0,64
6-Ephedrino-Pu-3':5'-MP 0,49 1,94 1,61 0,57 1,28 0,89 0,84 0,78
6-Allylamino-Pu-3':5'-MP 0,58 0,67 0,21 0,65 0,47 0,13 0,95 0,67
6-Pentylamino-Pu-3':5'-MP 0,56 0,79 0,32 0,66 0,45 0,14 0,91 0,80
6-Benzylamino-Pu-3':5'-MP 0,58 0,84 0,33 0,64 0,70 0,24 0,86 0,73
6-(2'-Chlorbenzylamino)-Pu-3' :
:5'-MP 0,56 0,79 0,27 0,63 0,68 0,24 0,73 0,79 6-(3',4'-Dimethoxyphenyläthylamino)-Pu-3':5'-
MP 0,55 0,93 0,43 0,67 0,61 0,25 0,87 0,81 6-(4'-Methylbenzylamino)-Pu-3':5"-MP 0,57 0,87 0,34 0,65 0,72 0,26 0,81 0,77 6-(2-Phenyläthylamino)-Pu-3':5'-MP 0,56 0,83 0,33 0,63 0,64 0,22 0,83 0,78
6-(1-Phenyläthylamino)-Pu-3':5'-MP 0,57 0,88 0,35 0,63 0,74 0,25 0,86 0,80 6-(1-Phenylbutylamino)-(3)-Pu-3' :5'-MP 0,55 0,99 0,48 0,65 0,70 0,30 0,80 0,86
6-Dimethylamino-Pu-3':5'-MP 0,47 1,44 0,87 0,59 0,82 0,37 1,1 0,61
6-(2'-Methylbenzylamino)-Pu-3':5'-MP 0,57 0,77 0,28 0,64 0,65 0,18 0,85 0,76
Tabelle II (Fortsetzung) Verbindung Neutral Sauer Alkalisch
005 M Phosphat O. IN HCI O. IN NaOH max. mm. maL min. max. min.
6-Phenylamino-Pu-3':5'-MP 287,5 243 273 237 288 243 6-Phenylamino-Pu-3':5'-MP 289 243,5 273 237 287,5 247 6-Piperazino-Pu-3' :5'-MP 286 240 282 234,5 286 240 Verbindung UV-Quotient* * Elektrophor.* Chromato neutral sauer MOB Rel. zu graphin in
250/ 280/ 290/ 250/ 280/ 290/ A-3':5'-MP LSMA***
260 260 260 260 260 260 6-Phenylamino-Pu-3':5'-MP 0,61 2,22 2,48 0,64 1,19 0,93 0,70 0,73 6-(1-Methyl-2-phenyläthylamino)-Pu-3':5'-MP 0,52 1,00 0,46 0,62 0,73 0,28 6-Phenylamino-Pu-3':5'-MP 0,59 2,24 2,50 0,64 1,10 0,93 0,70 0,71 6-Piperazino-Pu-3':5'-MP 0,602 2,38 2,52 0,545 1,74 1,49 0,87 0,23 * Elektrophoreses auf Whatman-Papier No. 3 MM, 13 cm breit, 1200 Volt, 45 Minuten; Puffer: 0,05 M Triäthyl ammoniumbicarbonat, pH: 7,5
Chromatographie auf Schleicher und Schüll-Papier 2043 b, absteigend, 15 Stunden; Laufmittel: Isopropanol:
NHa: H20 = 7: 1 :2 (= LSM A).
The invention relates to a process for the preparation of compounds of formula 1
EMI1.1
in which R is a hydrogen atom, a hydroxyl or amino group and X is a group NR1R2, in which R1 and R2 are each, independently of one another, a straight-chain or branched alkyl or alkenyl group, an aryl or aralkyl group, R1 is also a hydrogen atom, where the aromatic rings can be substituted by halogen atoms, hydroxyl groups, alkyl groups or alkoxy groups and the alkyl groups can be substituted by OH groups, or R1 and Re form the addition to a heterocyclic radical optionally containing another ring heteroatom.
Alkyl, alkenyl and alkoxy groups are understood to mean in particular those with up to 18 carbon atoms in a straight or branched chain, with those with up to 6 carbon atoms being preferred. Any aralkyl groups generally have up to 8 carbon atoms in the alkyl group, which can be straight-chain or branched.
Particularly suitable heteroatoms are nitrogen or oxygen.
Cyclic 3 ': 5'-phosphates of nucleosides are becoming increasingly important in biochemistry, and adenosine 3': 5'-cyclophosphate has been used since its discovery by Sutherland 10 years ago (Sutherland, Rall. J. Amer, Chem. Soc. 79, 3608 [1957]) has become a key substance in glucose, lipolysis and hormone metabolism, the physiological importance of which is often equated with the most important energy carrier in the cell, ATP. According to Sutherland's theory, adenosine 3 ': 5'-cyclophosphate physiologically functions as a second messenger in the cell, which is briefly illustrated using the example of the action of the peptide hormone ACTH.
ACTH released from the pituitary gland reaches the adrenal cortex via the bloodstream, in whose cell wall the enzyme adenylcyclase is located, which in response to the extracellular ACTH signal from adenosine triphosphate forms intracellular adenosine 3 ': 5'-cyclophosphate, which in turn is responsible for biosynthesis and Causes the release of corticosteroids. The conditions are similar in glycogenolysis, lipolysis, etc. The selectivity is thus given by the receptors of the respective success organs, which have adenosine 3 ': 5'-cyclophosphate as an intracellular signal; Adenosine 3 ': 5'-cyclophosphate is applied externally, but has multiple effects, which is often pharmacologically undesirable. In addition, it is split relatively quickly in the organism, so that its duration of action is short.
There is therefore a need to create adenosin-3 ': 5'-cyclophophate analogs with improved specificity of action and longer duration of action.
The synthesis of modified analogs of adenosine3 ': 5'-cyclophosphate derivatives has so far been carried out in a very laborious and costly manner, which is illustrated using the example of 6 mercaptopurine ribonucleoside 3': 5'-cyclophosphate:
Inosine <conversion into 2 ', 3', 5'-tribenzylinosine reaction with P2Ss to the 6-mercaptopurine ribonucleoside Removal of the protective group and introduction of a new protective group on the 2 ', 3'-hydroxyl group (e.g. by catalization), whereby the 5' -OH position remains free, phosphorylation on the 5'OH with β-cyanoethyl phosphate and DCC as condensation agent o cleavage a) of 2 ', 3'-OH protective group, b) of phosphate protective group <cyclization to the desired product.
The yields in this multi-stage synthesis are very low (1.5 / 0 of theory; J. Thomas, Montgomery J. Med.
Pharm Chem. 11, 44 [1968]), especially since the mercapto group, which is sensitive to hydrolysis and oxidation, has to be drawn through the individual reaction stages from the start.
Various derivatives of deazapurine ribonucleoside-3 ': 5'-cyclophosphate (tubercidin) were prepared in an analogous way (A. Hanze, Upjohn, USA Patent 3 300 479; A. Hanze, Biochemistry 7, 932 [1968]); likewise cytosine arabinoside-2 ': 5'cyclophosphate.
For an industrially applicable process, the above production method was ruled out because of its complexity and low yield. A way was therefore sought to carry out the substitution in position 6 of the purine arm starting from the preformed cyclophosphate compound.
The following processes for converting the hydroxyl group into the chlorine group in common nucleosides are known:
1. Chlorine in methanol [G. D. Daves et al., J. Amer. Chem.
Soc. 82: 2633 (1969); F. Bergmann et al., J. Chem. Soc.
10, 1966],
2. Concentrated hydrochloric acid, chlorine gas and methanol [Gerster et al., J. Org. Chem. 28, 945, (1963)],
3. Diethylaniline and POC13 [Gerster et al., J. Org.
Chem. 28, 945, (1963)],
4. SoCl2-DMF [M. Ikehara, Chem. Pharm. Bull. 12, 267 (1964)].
It has been found, however, that none of these known processes, when applied to 6-hydroxypurine ribonucleoside 3 ': 5'-cyclophosphate, leads to the product sought.
The tests showed that either extensive degradation occurred or the starting material was not converted at all. This shows that the reactivity is fundamentally changed when a cyclophosphate group is introduced also in the purine nucleus and therefore the processes known for the purine nucleosides cannot be transferred to the cyclic nucleoside 3 ': 5'-phosphates. The same also applies to the conversion of inosine into the corresponding 6-mercapto derivative known in the nucleoside series by reaction with P2S5. This reaction, which proceeds smoothly with the nucleosides, cannot be carried out on the preformed cyclophosphate and does not lead to the desired 6-mercapto derivative under any conditions.
The preparation of 6-chloropurine-deoxyriboside-3 ': 5'-cyclo-phosphate by reaction with phosphorus trichloride and an alkaline substance such as an inorganic alkali or an aliphatic or aromatic amine has already been described in Japanese patent 7957/68.
This known process leads to a yield of 26/0.
It was found, however, that this reaction cannot be carried out with the ordinary 6-hydroxypurine ribonucleoside 3 ': 5'-cyclophosphate. In the presence of bases such as B. Diethylaniline there is no conversion under the conditions of the known process and the reaction medium turns black-brown and contains numerous decomposition products.
It has now been found that the compounds of the formula 1 can be obtained without difficulty and in good yield if one starts from the corresponding compounds which are halogen-substituted in the 6-position and reacts them with a corresponding amine.
Implementation with an Akin, e.g. B. a primary, secondary or tertiary amine, is conveniently carried out in an alkaline medium. The amine is preferably used as the solvent. If necessary with the addition of a further customary solvent.
The products obtained are purified by the methods customary in nucleoside chemistry. Good results are obtained with chromatographic purification. An anion exchanger, activated carbon or silica gel is preferably used for this.
The 6-halo purine ribonucleoside 3 ': 5'-cyclophosphates to be used as starting material can be obtained by reacting a corresponding 6-hydroxypurine ribonucleoside 3': 5'-cyclophosphate with an acylating agent in the presence of a base, removing unreacted acylating agent and base and the residue is reacted with excess phosphorus oxyhalide.
The 6-chloro derivative is preferably prepared with phosphorus oxychloride at a temperature between room temperature and reflux temperature.
The starting material used for the halogenation is acylated in the first stage of the process in order to make it soluble in the phosphorus oxyhalide. The acylation only needs to be carried out to such an extent that the acylated product is sufficiently soluble for conversion in POH. Preferably the acylation is carried out with an acyl chloride or acyl anhydride in the presence of an alkaline agent. The acylation is preferably carried out with acetyl chloride, acetic anhydride or benzoyl chloride.
The alkaline agent used is preferably organic bases which, together with excess acylating agent, can easily be separated from the acylated nucleoside by distillation. The reaction with acetic anhydride in pyridine, which can easily be carried out at room temperature, has proven to be very suitable. This produces 6-hydroxypurine-2'-0-acetylribonucleoside-3 ': 5'-cyclo-acetyl phosphate, which is readily soluble in POH and is therefore particularly suitable for the reaction. The 2'-0-acetyl 6-hydroxypurine ribonucleoside 3 ': 5'-cyclophosphate is also suitable, but the yield is poorer because of the lower solubility.
After the acylation has ended, the remaining acylating agent and base are removed, preferably by distillation.
The oily acylation product that remains is reacted directly with excess POH. Here the POH serves as both a solvent and a reagent. In the absence of a basic substance, such as. B. Diethylaniline forms the desired 6-halopurine ribonucleoside3 ': 5'-cyclophosphate within a short time with a yield of over 50%, with 6-halopurine being formed as the main by-product.
The acylation in the first stage of the process is carried out in a customary manner, advantageously at room temperature. The reaction is preferably carried out in the absence of light.
After the remaining acylating agent and the alkaline substance have been removed, the remaining oil is freed from the last residues of alkaline substance and acylating agent, preferably by washing with a suitable solvent, such as ether.
The acylation reaction can be carried out at temperatures between room temperature and the reflux temperature of the lowest boiling component.
The reaction with the excess POHal3, preferably POCl3, can also be carried out at temperatures between room temperature and the reflux temperature of the lowest-boiling component.
The reaction with the excess POHal3, preferably POCls, can also be carried out at temperatures between room temperature and the reflux temperature. It is preferred to boil at an elevated temperature, in particular at reflux. Under these conditions the reaction is over after about 15 to 60 minutes and excess POHal3 is distilled off. The crude 6-chloropurine ribonucleoside-3 ': 5'-cyclophosphate obtained in this way is advantageously purified by chromatography on a suitable ion exchanger or silica gel.
The compounds obtainable according to the invention are new. They are interesting therapeutically active substances and can be used as such or in the form of their salts with physiologically compatible bases to influence glycolysis, lipolysis and hormone metabolism.
The compounds according to the invention are superior in several respects to the best known compound with the same direction of action and comparable chemical constitution, N6-2'-0-di-butryl-adenosine-3 ': 5'-monophosphate.
In particular, they have the following advantages:
1. The phosphorylase activation occurs with the substances according to the invention even at lower concentrations than with the known compound mentioned.
2. The lipolysis activation of the compounds according to the invention occurs either at the same or at a moderately reduced concentration. The result is a shift in the spectrum of activity in favor of phosphorylase activation, which is expressed in the table below by the concentration quotient for both activations (last column). Compared to a factor of 2 for the known compound, the effects of the compounds according to the invention shift to a factor of 3 to 500.
In some cases, the lipolysis activity is so weak that it is almost pure phosphorylase activity, i.e. high pharmacological specificity.
The table below shows the results of the comparative tests carried out.
Table I.
Physiological-chemical properties of the 6-substituted derivatives of purine ribofuranoside 3 ': 5'-monophosphate (PR-3': 5'-MP) substance max. Activation Half-value activation quotient of the concentration of lipolysis at (M) the phosphorylase trations for lipase at (M) and phosphorylase
Activation N6-2'-O-dibutyryl-A-3 ': 5'-MP 4.10-6 2.10-6 2 6-Benzylamino-PR-3': 5'-MP 1.10-7 7.10-9 14 6- (2 -Methylbenzylamino) -PR-3 ': 5'-MP 5.10-6 1.10-8 500 6- (4-methylbenzylamino) -PR-3': 5'-MP 5.10-7 1.10-7 5 6- (2-chlorobenzylamino ) -PR-3 ': 5'-MP 5.10-7 7.10-9 71 6 {1-phenyl-) ethylamino-PR-3':
: 5'-MP 3.10-1 3.10-8 10 6- (2-phenyl-) äthylamino-PR-3 ': 5'-MP 1.10-6 large 6-pentylamino-PR-3': 5'-MP 1.10- 4 7.10-8 large 6- (1-allylamino) -PR-3 ': 5'-MP 1.10-5 1.10-' 100 6-ephedrinyl-PR-3 ': 5'-MP 1.10-5 7.10-i 14 6 -Morpholino-PR-3 ': 5'-MP 2.10-i 7.10-8 3
In addition to influencing the carbohydrate metabolism and lipid metabolism, the compounds obtainable according to the invention have other interesting effects, e.g. B. a general energy mobilizing effect, which allows for example use with rhinestones and shock.
Another effectiveness is in increasing adrenal steroid products as well as in solving asthma. The compounds obtainable according to the invention also act as preformed nucleotide and can therefore, for example, have an antimetabolic effect in immunosuppression and in tumors. In addition to a general sedative effect, a potentiation of the effect of narcotics was also found in some cases. A positive inotropic heart effect could also be determined.
The following examples further illustrate the invention.
Example 1 6-Morpholino-purine ribofuranoside-3 ': 5'-MP sodium salt
5 g raw 6-chloropurine riboside-3 ': 5'-MP in the form of the free acid (content of pure 6-chloropurine riboside-3': 5'-MP approx.
60%) are dissolved in 20 ml of water, an excess of morpholine (6 ml) is added and the mixture is kept at 800 for 1 h. After cooling, most of the morpholine is removed by shaking it out three times with ether. After acidification with acetic acid to pH = 3, the aqueous phase is drawn up on an anion exchange column (Dowex 1 X 2, formate; 1 m long, 1.5 cm °)), washed with 500 ml of water and with a linear gradient of 2 l of water eluted against 21 1 M ammonium formate. All impurities are removed in the process. The desired product is eluted with 1.5 M ammonium formate, the eluate is desalinated on a carbon column (100 ml content) and the product is eluted with isopropanol: water: NH3 = 50: 50 1.
After concentration in vacuo and passage through the cation exchanger (Dowex 50 - Na form), it is freeze-dried. Yield: 3.5 g (70% of theory).
Analysis: Ci4H1, O7N5PNa1H2O, molecular weight 439.31 Calculated: N 15.93%, P 6.82%, Na 5.24 8%, H20 4.1% Found: N 16.3%, P 6.98%, Na 5.3%, HsO 4.1%
Example 2 6- (4-Methylbenzylamino) -purine ribofuranoside-3 ': 5'-MP sodium salt
5 g of crude 6-chloropurine riboside-3 ': 5'-MP in the form of the free acid (12.5 mmol, 67.5 o / o of free acid) are mixed with 4.5 g of 4-methylbenzylamine (37.5 mmol ) dissolved in 50 ml of ethanol and refluxed for 1 to 2 h. After distilling off the alcohol, it is taken up in 100 ml of water and extracted twice with 50 ml of ether each time in a separating funnel.
The aqueous phase is drawn through a Dowex 1 X 2 column (formate form, 5-100 mesh). The impurities are washed out with a linear gradient of 21 water, 21 1.5 M ammonium formate. The product is eluted by subsequent elution with 1.5 M sodium chloride, pH = 3, the combined fractions are desalted over charcoal and eluted with a mixture of ethanol: water: NH5 = 50: 60: 1. The aqueous phase is concentrated and freeze-dried after a Dowex 50 - Na-Form passage.
Yield: 3.2 g, approx. 73 o / o of theory, based on the 6-chloropurine riboside-3 ': 5'-MP used. Purity approx. 95%.
To completely remove the impurities, the 3.2 g of product are dissolved in a little water and applied to 3 silica gel thick-layer plates (50 cm long, 20 cm high; layer thickness 2.5 mm) and mixed with isopropanol: NH3: H20 = 7 1: 1, pH = 10, developed within 10 hours. After removing colloidally dissolved SiO2 on carbon, 1.9 g of pure sodium salt are obtained.
Analysis: C18H19O6N5PNa, molecular weight 455.37
The freeze-dried substance still contains 4.98% H2O. Calculated: N 14.65 / o, P 6.50 0/0, Na 4.83 o / o Found: N 13.80 O / o, P 6.11 0/0, Na 5.3 0/0
Examples 3 to 18
The compounds listed below were prepared as described in the previous examples.
Example connection X
3 6-phenylamino-Pu-3 ': 5'-MP NR1R2; Red = pentyl, R2 = H
4 6-dimethylamino-Pu-3 ': 5'-MP NR1R2; Rs = R2-methyl
5 6- (allylamino) -Pu-3 ': 5'-MP NR1R2; Rt = allyl, R2 = H
6 6- (benzylamino) -Pu-3 ': 5'-MP NRtR2; R1 = benzyl; R2 = H
7 6- (2'-chlorobenzylamino) -Pu-3 ': 5'-MP NRtR2; R1 = 2'-chlorobenzyl; R2 = H
8 6- (2'-methylbenzylamino) -Pu-3 ': 5'-MP NRtR2; R1 = 2'-methylbenzyl;
R2 = H
9 6- (3 ', 4'-dimethoxyphenylethylamino) -Pu-3': 5'-MP NRtR2; Red = 3 ', 4'-dimethoxyphenylethyl, R2 = H
10 6- (2-phenylethylamino) -Pu-3 ': 5'-MP NRoR2; R1 = phenylethyl- (2), R2 = H
11 6- (1-phenylethylamino) -Pu-3 ': 5'-MP NR1R2; Ri = phenylethyl- (1), R2 = H
12 6- (1-phenylbutyl- (3) -amino) -Pu-3 ': 5'-MP NR1R2;
R1 = 1-phenyl-butyl- (3), Ri = H
13 6- (piperidino) -Pu-3 ': 5'-MP NRtR2; Ri + R2 = piperidino
14 6- (ephedrino) -Pu-3 ': 5'-MP NR1R2; Red = 3-phenyl-3-hydroxypropyl- (2), R2 = CH3
15 6-penhylamino-Pu-3 ': 5'-MP Nur92; R1 = phenyl, R2 = H
16 6-phenylamino-Pu-3 ': 5'-MP NR1R2; Ri = phenyl, R2 = H
17 6-piperazino-Pu-3 ': 5'-MP NRIR2; R1 + R2 = heterocyclic ring
18 6- (1-methyl-2-phenylethylamino) -Pu-3 ':
: 5'-MP NRtR2; R1 = 1-methyl-2-phenylethyl, R2 = H
The table below shows the characteristic data of the compounds according to the invention listed in the examples with regard to the UV spectrum and electrophoretic behavior.
Table II Compound Neutral Acid Alkaline
005 M phosphate O. IN HCl O. IN NaOH min. Max. Max. min. Max. min.
6-piperidino-Pu-3 ': 5'-MP 279.5 244 278 238 281.5 246 6-morpholino-Pu-3': 5'-MP 277 235 273.5 235 278 238.5 6-ephedrino- Pu-3 ': 5'-MP 277 246 273 241 279 245
6-Allylamino-Pu-3 ': 5'-MP 266 230 262.5 230 267 233 6-Pentylamino-Pu-3': 5'-MP 266.5 231 262 229 267.5 234 6-Benzylamino-Pu- 3 ': 5'-MP 266 236 2S5 235 268 238
6- (2'-chlorobenzylamino) -Pu-3 ': 5'-MP 267.5 232.5 264 232.5 268.5 235 6- (3', 4'-dimethoxyphenylethylamino) -Pu-3 ': 5 '-MP 268 235 264 234 269 240 6- (4'-methylbenzy] amino) -Pu-3': 5'-MP 267 237 266 236 269 240 6- (2-phenylethylamino) -Pu-3 ': 5' -MP 268 232.5 264 232 268 234.5
6- (1-Phenylethylamino) -Pu-3 ': 5'-MP 267.5 241 266 234 270 238
6- (1-Phenylbutylamino- (3) -) - Pu-3 ':
: 5'-MP 269 237 266 236 270 240 6-dimethylamino-Pu-3 ': 5'-MP 274 235 268 231.5 275 237.5 6- (2'-methylbenzylamino) -Pu-3'; 5 ' -MP 266.5 231.5 264 232.5 267.5 235 Table II (continued)
Compound W quotient * * electrophore. * Chromato neutral acidic MOB Rel. To graphie in
250/280/290/250/280/290 / A-3 ': 5'-MP LSMA ***
260 260 260 260 260 260
6-piperidino-Pu-3 ': 5'-MP 0.46 2.17 1.88 0.53 1.22 0.82 0.94 0.74
6-Morpholino-Pu-3 ': 5'-MP 0.46 1.93 1.27 0.52 1.35 0.91 0.97 0.64
6-Ephedrino-Pu-3 ': 5'-MP 0.49 1.94 1.61 0.57 1.28 0.89 0.84 0.78
6-allylamino-Pu-3 ': 5'-MP 0.58 0.67 0.21 0.65 0.47 0.13 0.95 0.67
6-pentylamino-Pu-3 ': 5'-MP 0.56 0.79 0.32 0.66 0.45 0.14 0.91 0.80
6-benzylamino-Pu-3 ': 5'-MP 0.58 0.84 0.33 0.64 0.70 0.24 0.86 0.73
6- (2'-chlorobenzylamino) -Pu-3 ':
: 5'-MP 0.56 0.79 0.27 0.63 0.68 0.24 0.73 0.79 6- (3 ', 4'-dimethoxyphenylethylamino) -Pu-3': 5'-
MP 0.55 0.93 0.43 0.67 0.61 0.25 0.87 0.81 6- (4'-methylbenzylamino) -Pu-3 ': 5 "-MP 0.57 0.87 0 .34 0.65 0.72 0.26 0.81 0.77 6- (2-Phenylethylamino) -Pu-3 ': 5'-MP 0.56 0.83 0.33 0.63 0.64 0 , 22 0.83 0.78
6- (1-Phenylethylamino) -Pu-3 ': 5'-MP 0.57 0.88 0.35 0.63 0.74 0.25 0.86 0.80 6- (1-Phenylbutylamino) - ( 3) -Pu-3 ': 5'-MP 0.55 0.99 0.48 0.65 0.70 0.30 0.80 0.86
6-dimethylamino-Pu-3 ': 5'-MP 0.47 1.44 0.87 0.59 0.82 0.37 1.1 0.61
6- (2'-methylbenzylamino) -Pu-3 ': 5'-MP 0.57 0.77 0.28 0.64 0.65 0.18 0.85 0.76
Table II (continued) Compound Neutral Acid Alkaline
005 M phosphate O. IN HCl O. IN NaOH max. mm. sometimes min. Max. min.
6-phenylamino-Pu-3 ': 5'-MP 287.5 243 273 237 288 243 6-phenylamino-Pu-3': 5'-MP 289 243.5 273 237 287.5 247 6-piperazino-Pu- 3 ': 5'-MP 286 240 282 234.5 286 240 Compound UV-quotient * * Electrophor. * Chromato neutral acidic MOB Rel. To graphin in
250/280/290/250/280/290 / A-3 ': 5'-MP LSMA ***
260 260 260 260 260 260 6-Phenylamino-Pu-3 ': 5'-MP 0.61 2.22 2.48 0.64 1.19 0.93 0.70 0.73 6- (1-methyl- 2-phenylethylamino) -Pu-3 ': 5'-MP 0.52 1.00 0.46 0.62 0.73 0.28 6-phenylamino-Pu-3': 5'-MP 0.59 2, 24 2.50 0.64 1.10 0.93 0.70 0.71 6-piperazino-Pu-3 ': 5'-MP 0.602 2.38 2.52 0.545 1.74 1.49 0.87 0 , 23 * electrophoresis on Whatman paper No. 3 MM, 13 cm wide, 1200 volts, 45 minutes; Buffer: 0.05 M triethyl ammonium bicarbonate, pH: 7.5
Chromatography on Schleicher and Schüll paper 2043 b, descending, 15 hours; Eluent: Isopropanol:
NHa: H20 = 7: 1: 2 (= LSM A).