Procédé de préparation de dilaydrodesoxystreptomycines La présente invention a pour objet un procédé de préparation de dihydrodesoxystreptomycines par réduction des streptomycines correspondantes. Ce procédé est caractérisé en ce que l'on dissout un sel de la streptomycine correspondante dans une solu tion aqueuse d'un sel acide d'aluminium, et en ce que l'on traite la solution avec de l'aluminium amal- gamé pour réduire ladite streptomycine.
Le but de l'invention est la préparation de dihy- drodesoxystreptomycines de haute pureté, un nouvel agent tuberculostatique ne comportant pas d'effet secondaire, dans les molécules duquel le groupe aldéhyde (- CHO) et le groupe hydroxylë tertiaire (-OH) de la moitié streptose sont simultané ment transformés en groupe hydroxyle primaire (- CH20H) et en atome d'hydrogène (-H),
respec tivement.
Formule développée de la streptomycine
EMI0001.0027
Formule développée de l'hydroxystreptomycine
EMI0001.0029
Formule développée de la mannosidostrepto- mycine
EMI0002.0003
R1 représente le résidu de la streptidine de formule
EMI0002.0006
RZ représente le résidu de la _N-méthyl-Lrglucosa- mine de formule
EMI0002.0010
R3 représente le résidu de D-mannose de formule
EMI0002.0012
En appliquant le procédé de réduction
selon l'in vention, on peut obtenir la dihydrodesoxystrepto- mycin.e (IV) à partir de la streptomycine, la dihy- drodesGxyhydroxystreptomycine (V) à partir de l'hy- droxystxeptomycine et la déhydrodesoxymannosido- streptomycine (VI)
à partir de la mannosidostrepto- mycine. On donne ci-après les formules développées de ces produits de réduction Formule développée de la dihydrodesoxystrepto- mycine
EMI0002.0036
Formule développée de la dihydrodesoxyhy- droxystreptomycine
EMI0002.0039
Formule développée de la déhydrodesoxymanno- sidostreptomycine
EMI0002.0042
L'invention est basée sur la découverte qu'en traitant <RTI
ID="0002.0044"> les sels de streptomycine avec de l'aluminium amalgamé dans une solution aqueuse de sel acide d'aluminium on peut effectuer la réduction ci-dessus.
On explique ci-après le mécanisme de la réac tion du présent procédé Dans les molécules des streptomycines mention nées, le groupe aldéhyde (- CHO) et le groupe hydroxyle tertiaire (- OH) adjacents au troisième atome de carbone du streptose sont réduits simulta nément, et le premier devient un groupe hydroxyle primaire (- CH20H), alors que le second perd son atome d'oxygène et devient un atome d'hydrogène (-H). Autrement dit,
EMI0003.0002
devient
EMI0003.0003
On a trouvé à la suite d'essais sur animaux et d'essais cliniques que les dihydrodesoxystreptomyci- nes sont très actives en tant qu'agents tuberculosta- tiques dépourvus d'effets secondaires.
Il a été remarqué que pour mettre en couvre le présent procédé sur une échelle industrielle, il con vient de maintenir constamment le pH du mélange réactionnel entre 2,0 et 2,6 sans addition d'acide au cours de la réaction.
A la suite de diverses recherches basées sur les considérations précédentes, il a pu être établi que les conditions ci-dessus peuvent être satisfaites en réduisant, au moyen d'aluminium amalgamé, les streptomycines dissoutes dans une solution aqueuse de sel d'aluminium, spécialement de sulfate d'alu- minium ou de chlorure d'aluminium.
On décrit ci-après le résultat des expériences effectuées.
Le sulfate d'aluminium commercial peut être représenté par la formule brute Al2(S04)3.18H40. La relation entre la température et le pH des solu tions aqueuses (10 %-70 %) de cette substance est donnée dans le tableau ci-dessous.
Valeur du pH du sulfate d'aluminium A12(S04)3 .18H20 à une concentration donnée.
Les chiffres entre parenthèses désignent le pour centage correspondant en A12(SO4)3.
EMI0003.0040
<U>Concentration <SEP> (@/o) <SEP> 70 <SEP> 50 <SEP> 40 <SEP> 30 <SEP> 20 <SEP> 10 <SEP> 5</U>
<tb> Température <SEP> ( C) <SEP> (35,9) <SEP> (25,65) <SEP> (20,55) <SEP> (15,4) <SEP> (10,25) <SEP> (5,13) <SEP> (2,56)
<tb> 5 <SEP> 2;
83 <SEP> 2,99 <SEP> 3,31
<tb> 10 <SEP> i <SEP> 1,63 <SEP> 2,30 <SEP> 2,43 <SEP> 2,70 <SEP> 2,87 <SEP> 3,02 <SEP> 3,20
<tb> 15 <SEP> 1,53 <SEP> 2,20 <SEP> 2,30 <SEP> 2,55 <SEP> 2,70 <SEP> 2,90 <SEP> 3,07
<tb> 20 <SEP> 1,43 <SEP> 2,11 <SEP> 2,20 <SEP> 2,44 <SEP> 2,57 <SEP> 2,75 <SEP> 2,93
<tb> 25 <SEP> 1,36 <SEP> 2,01 <SEP> 2,08 <SEP> 2,32 <SEP> 2,47 <SEP> 2,66 <SEP> 2,82
<tb> 30 <SEP> 1,30 <SEP> 1,91 <SEP> 2,00 <SEP> 2,23 <SEP> 2,36 <SEP> 2,57 <SEP> 2,71
<tb> 35 <SEP> 1,24 <SEP> 1,83 <SEP> 1,91 <SEP> 2,14 <SEP> 2,26 <SEP> 2,48 <SEP> 2,61
<tb> 40 <SEP> 1,18 <SEP> 1,75 <SEP> 1,83 <SEP> 2,05 <SEP> 2,16 <SEP> 2,39 <SEP> 2,52
<tb> 45 <SEP> 1,13 <SEP> 1,67 <SEP> 1,74 <SEP> 1,97 <SEP> 2,07 <SEP> 2,30 <SEP> 2,43
<tb> 50 <SEP> 1,08 <SEP> 1,59 <SEP> 1,65 <SEP> 1,86 <SEP> 1,98 <SEP> 2,19 <SEP> 2,34
<tb> 55 <SEP> 1,05 <SEP> 1,49 <SEP> 1,53 <SEP> 1,76 <SEP> 1,87 <SEP> 2,08 <SEP> 2,
25
<tb> 60 <SEP> 1,01 <SEP> 1,38 <SEP> 1,43 <SEP> 1,65 <SEP> 1,74 <SEP> 1;98 <SEP> 2,16
<tb> 65 <SEP> 0,95 <SEP> 1,24 <SEP> 1,31 <SEP> 1,52 <SEP> I <SEP> 1,60 <SEP> 1,84 <SEP> 2,00 Ainsi qu'il ressort du tableau ci-dessus, le pH varie en fonction de la concentration. De plus, le pH a tendance à baisser avec les températures crois santes.
Lorsque la réaction se produit effectivement, le pH du mélange réactionnel est légèrement supérieur au pH mentionné ci-dessus de la solution aqueuse de sulfate d'aluminium seul, en raison de la présence d'aluminium amalgamé et de streptomycine. Cepen dant, cette différence est en général dans la limite d'environ 0,5.
Comme mentionné, la solution aqueuse de sul fate d'aluminium est employée de préférence dans cette réaction. En outre, pour obtenir des cristaux de dihydrodesoxystreptomycine à partir du mélange réactionnel lorsque la streptomycine a été soumise à la réaction, on ajoute de l'hydroxyde de baryum à la solution, ce qui convertit les ions sulfate en sul fate de baryum et les ions aluminium en hydroxyde d'aluminium, et ces deux ions peuvent être séparés par filtration en raison de leur insolubilité,
et la dihydrodesoxystreptomycine peut être facilement cristallisée dans le filtrat.
On a donc découvert qu'en employant du sul fate d'aluminium, non seulement la condition de pH peut être satisfaite durant la réaction, mais le traite ment subséquent à la réaction peut être exécuté industriellement de manière avantageuse.
Le chlorure d'aluminium peut être utilisé à la place du sulfate d'aluminium, bien que le pH soit légèrement plus bas que. lorsque le sulfate d'alumi- nium est employé.
Après la réaction, l'ion chlorure peut également être séparé comme chlorure d'argent par addition de carbonate d'argent au mélange réac tionnel, et les ions aluminium et carbonate peuvent également être éliminés comme hydroxyde d'alumi nium et carbonate de baryum par addition d'hy droxyde de baryum.
Il convient d'utiliser le sulfate d'aluminium pour la réduction des sulfates de streptomycines, et le chlorure d'aluminium pour la réduction des chlorhy- drates de streptomycines ou les sels complexes chlorhydrate de streptomycine et chlorure de calcium.
Selon une forme particulière de mise en oeuvre du présent procédé, on dissout soit le sulfate d'une streptomycine dans la solution aqueuse de sulfate d'aluminium à une concentration prescrite, soit le chlorhydrate d'une streptomycine ou le sel complexe chlorhydrate de streptomycine-chlorure de calcium dans une solution aqueuse de chlorure d'aluminium de concentration prescrite.
On ajoute ensuite de l'alu minium amalgamé et on le fait réagir en maintenant la température à 50-60() C. Dès que l'épreuve au maltol montre que les streptomycines résiduelles dans le mélange réactionnel sont de concentration infé rieure à 1-2 %, la réaction est terminée et on filtre le mélange réactionnel. Ensuite, dans le cas du sul fate d'aluminium,
on ajoute de l'hydroxyde de ba ryum au filtrat et on sépare par filtration les préci pités résultants de sulfate de baryum et d'hydroxyde d'aluminium; dans le cas du chlorure d'aluminium, on ajoute au filtrat du carbonate d'argent et on sépare le précipité résultant de chlorure d'argent et on concentre le filtrat, ou on ajoute de l'acétone au filtrat.
Ensuite, on sépare les cristaux de base libre de dihydrodesoxystreptomycine. On peut obtenir les sulfates de dihydrodesoxystreptomycine par séchage sous congélation de la solution aqueuse obtenue par neutralisation des cristaux de la base libre mention née avec de l'acide sulfurique dilué, ou par adjonc tion de méthanol à cette solution.
On peut également obtenir les chlorhydrates et phosphates de dihydrodesoxystreptomycine en neu tralisant la base libre mentionnée avec de l'acide chlorhydrique dilué ou de l'acide phosphorique dilué, respectivement.
En ce qui concerne la concentration de la solu tion aqueuse du sulfate d'aluminium ou du chlorure d'aluminium, on peut adopter une concentration de 2,5 à 35 % en A12(SO4)3, ainsi qu'il ressort du tableau ci-dessus.
Pratiquement cependant, une solu tion diluée est avantageuse car elle simplifie la sépa ration de l'ion sulfate, de l'ion chlore et de l'ion aluminium après la réaction et, en même temps, elle favorise le rendement. On a trouvé qu'une concen- tration de 5 à 20 % en donne le meilleur résultat.
11 est désirable de maintenir la température de réaction à 50-60o C. La réaction peut s'effectuer à des températures plus basses, mais elle n'est plus assez rapide et, de plus, la teneur en dihydro- streptomycine dans la dihydrodesoxystreptomycine résultante augmente. Aux températures plus élevées, il y a danger de décomposition des streptomycines dans le mélange réactionnel, durant la réaction.
Le, procédé selon l'invention peut fort bien être mis en pauvre en utilisant comme matières de départ des streptomycines de pureté ne dépassant pas 50 60 %. Il va sans dire qu'il en est de même des streptomycines de qualité supérieure.
Le fait de pouvoir utiliser une matière de départ impure est un grand avantage pratique et permet de réduire le taux de production. Il convient cepen dant de relever qu'alors que les sels purs des dihy- drodesoxystreptomycines peuvent être immédiate- ment obtenus à partir des streptomycines de départ de grande pureté en rendant neutre le pH du mé lange réactionnel, l'emploi de streptomycines de qua lité impure comme matières de départ rend néces saire, après la réaction,
l'élimination de l'ion métal lique et de l'ion acide du mélange réactionnel, et la séparation des cristaux des bases libres de dihydro- desoxystreptomycine, suivie de neutralisation de ces cristaux avec un acide en vue de l'obtention des sels purs.
<I>Exemple 1</I> On dissout 70g de sulfate de streptomycine de grande pureté (activité: 755 EL/mg, pureté. 94,7 % ) dans 335 ml d'une solution aqueuse à 20 % de A12(S04)3.18H20 (10,25 % de A'2(SO4)3)- On ajoute à la solution 8 g d'aluminium amalgamé et on fait réagir en agitant. On maintient la température du mélange réactionnel à 50-600 C.
Après 3 heures de réaction, l'épreuve au maltol montre que la quantité de streptomycine contenue dans le mélange réaction nel est de 5 %_. On ajoute ensuite encore 8 g d'alu- minium amalgamé et on fait réagir 2 heures à 45 501> C, après quoi la teneur en streptomycine résiduelle est réduite à moins de<B>1%.</B> Lorsque la réaction est terminée, on dilue la solution avec 700 ml d'eau distillée, on ajoute une solution aqueuse chaude d'hy droxyde de baryum pour neutraliser la solution et on filtre.
On lave le résidu deux fois avec de l'eau distillée, on réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite. On ajoute goutte à goutte 250 ml du concentré à 1500 ml de métha nol, et le sulfate de dihydrodesoxystreptomycine pré cipite. On le filtre, on le lave avec du méthanol et on le sèche.
Rendement. 61,5 g ; 97,2 % ;teneur en dihy- drostreptomycine : 2,18 % (la pureté de la dihydro- desoxystreptomycine est donc de 97,82 %) ; acti vité: 830 R/mg.
Analyse Calculé d'après C2iH4lN7011. 3/2 H,,SO4 C=35,29%; H=6,21%; N=13,72%.
Trouvé:<B>C=35,68%;</B> H=6,31%; <B>N=13,41%.</B> <I>Exemple 2</I> On emploie comme matière de départ 90g de sulfate de streptomycine de qualité impure (activité 520 u,/mg, pureté<B>:</B> 65,2 %).
Après avoir exécuté la réaction exactement de la même manière que dans l'exemple 1, on ajoute au mélange réactionnel de la solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum et on sépare les ions aluminium et sulfate. On mélange le filtrat avec une quantité égale d'acétone et, après avoir laissé refroidir pendant la nuit, on recueille par filtration les cristaux de base libre de dihydro- desoxystreptomycine qui se sont formés.
et solidi fiés, on neutralise avec de l'acide sulfurique à 10 %, on filtre après avoir précipité avec du méthanol, on sèche et on obtient le sulfate de dihydrodesoxy- streptomycine. (La neutralisation peut également être effectuée avec du méthanol chlorhydrique.
On ajoute ensuite goutte à goutte la solution à de l'acétone et on obtient le chlorhydrate de dihydrodesoxystrepto- mycine en séparant le précipité résultant et en le séchant.) Rendement<B>:</B> 49,5 g ; 89,2 % ;teneur en dihy- drostreptomycine : 1,55 % (la pureté de la dihydro- desoxystreptomycine est donc de 98,45 %) ; acti vité: 843 u/mg. <I>Exemple 3</I> On dissout 70 g d'hydroxystreptomycine de haute qualité (activité:
705 u/mg) dans une solution aqueuse à 30 % de A12(SOI.18H20 (15,4 % de A12(SO4)3). On ajoute à ce mélange 10 g d'aluminium amalgamé et on effectue la réduction sous agita tion. Après avoir poursuivi la réaction pendant 5 heures en maintenant la température à 50-600 C, la teneur en hydroxystreptomycine de la solution devient inférieure à 1 % et l'aluminium amalgamé qui a été ajouté est presque entièrement dissous. Après la fin de la réaction, on dilue la solution avec une quantité double d'eau distillée.
On ajoute à cette solution de la solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum pour la neutraliser et on filtre. On lave deux fois le résidu à l'eau distillée. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite à 45-500 C. On ajoute goutte à goutte 250 ml du concentré à 1500 ml de méthanol. Le sulfate de dihydrodesoxyhydroxystreptomycine précipite; on le sépare par filtration et on le sèche.
Rendement: 62,5 g ; 95,0 % ; teneur en dihy- drohydroxystreptomycine : 3,1 % (la pureté de la dihydrodesoxyhydroxystreptomycine est donc de 96,9 %) ; activité: 750 [t/mg. Analyse Calculé d'après C21H41N7012 # 3/2 H2SO4: C=34,52%; H=6,07%; N=13,42%. Trouvé: C=34,87%; H=6,15%; N=13,31%.
<I>Exemple 4</I> On emploie comme matière de départ 90 g d'hy- droxystreptomycine impure (activité: 500 u/mg). Après avoir exécuté la réaction exactement de la même façon qu'à l'exemple 3, on ajoute au mélange réactionnel de la solution aqueuse chaude d'hy droxyde de baryum et on sépare les ions aluminium et sulfate. On mélange le filtrat avec une quantité égale d'acétone et, après avoir laissé refroidir pen dant la nuit,
on recueille par filtration les cristaux de base libre de dihydrodesoxyhydroxystreptomycine qui se sont formés et solidifiés, et on neutralise avec de l'acide sulfurique à 10 %. On précipite la solu tion neutralisée avec 6 fois sa quantité de méthanol, on sépare par filtration, on sèche et on obtient le sulfate de dihydrodesoxyhydroxystreptomycine.
Rendement<B>:</B> 54,0 g ; 91,2 % ; teneur en dihy- drohydroxystreptomycine : 2,0 % (la pureté de la dihydrodesoxyhydroxystreptomycine est donc de 98 %) ; activité:
760 #t/mg. <I>Exemple 5</I> On dissout 70g de sulfate de mannosidostrepto- mycine de grande pureté (activité 230 u/mg) dans 200 ml de solution aqueuse à 15 % de A12(SO4)8 .18H20 (7,7 % de Al2(SO4)3). On ajoute à ce mé lange 7,0g d'aluminium amalgamé et on fait réagir sous agitation.
Après 6 heures de réduction conti nue, en maintenant la température à 50-601) C, la teneur en mannosidostreptomycine de la solution tombe en dessous de 1 % et l'aluminium amalgamé introduit est presque entièrement dissous. Après la fin de la réaction, on dilue la solution avec environ le double de sa quantité d'eau distillée.
On ajoute à cette solution une solution aqueuse chaude d'hy-- droxyde de baryum pour neutraliser la solution et on filtre. On lave complètement le résidu à l'eau et après avoir réuni le filtrat et les eaux de lavage, on concentre sous pression réduite à 45-500 C. On ajoute goutte à goutte le concentré - à 1200 ml de méthanol, on filtre et sèche le sulfate de déhydro- desoxymannosidostreptomycine quia précipité.
Rendement: 63,0 g ; 92,0 % ;teneur en dihy- drômannosidostreptomycine : 3,1 % (la pureté de la déhydrodesoxymannosidostreptomycine est donc de 96,9 %) ; activité: 235 u/mg. Analyse Calculé d'après C27H,1016N7. 3/2 H?S04 C=36,98%; H=6,21%; N=11,18%.
Trouvé: C=37,12%; H=6,36%; N=11,35%. <I>Exemple 6</I> On emploie comme matière de départ 90 g de sulfate de mannosidostreptomycine -de qualité impure (activité 150 u/mg). On exécute la réaction exacte ment de la même manière qu'à l'exemple 5. Une fois la réaction terminée, on ajoute à la solution une solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum et on sépare les ions aluminium et sulfate. On ajoute alors une quantité égale d'acétone au filtrat et on laisse refroidir pendant la nuit.
On filtre les cristaux de base libre de déhydrodesoxymannosidostreptomy- cine qui se sont séparés et solidifiés, et on neutralise avec de l'acide sulfurique à 10 %. En ajoutant le mélange neutralisé à 6 fois sa quantité de méthanol, on obtient un précipité. On filtre, on lave et on sèche ce précipité, et on obtient le sulfate de déhy- drodesoxymannosidostreptomycine.
Rendement: 49,5 g ; 88,0 % ;teneur en dihy- dromannosidostreptomycine 2,5 % (la pureté de la déhydrodesoxymannosidostreptomycine est donc de 97,5 %) ; activité: 240 u/mg. <I>Exemple 7</I> On dissout 70g de sulfate de streptomycine de grande pureté (activité :
757 i/mg, pureté 94,8 %) dans 300 ml de solution aqueuse à 10 % de AIC13 .6H20 (5,53 % de AIC13). On ajoute à cette solu tion 8,5 g d'aluminium amalgamé et on fait réagir sous agitation.
Après avoir poursuivi la réaction pen dant 6 heures en maintenant la température du mé lange réactionnel à 50-55o C, la teneur en strepto mycine de la solution devient inférieure à 1 % et l'aluminium amalgamé que l'on a ajouté est presque entièrement dissous.
Une fois la réaction terminée, on dilue la solution avec une quantité égale d'eau distillée, on ajoute en agitant 75 g de carbonate d'ar gent en poudre, pour éliminer le chlorure d'alumi nium,
et on filtre les précipités de chlorure d'argent et d'hydroxyde d'aluminium. On lave le résidu à l'eau distillée. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite jusqu'à consistance sirupeuse. On dissout le sirop dans 300 ml de méthanol déshydraté et on ajoute cette solution goutte à goutte à 3000 ml d'acétone déshy dratée. On filtre le précipité de chlorhydrate de dihy drodesoxystreptomycine qui s'est formé, on le lave et on le sèche.
Rendement<B>.</B> 60,0 g ; 92,5 % ;teneur en dihy- drostreptomycine : 2,5 % (la pureté de la dihydro- desoxystreptomycine est donc de 97,5 %) ; activité 860 i,/mg.
Analyse Calculé d'après C21H41N7011. 3HC1 C=37,26%; H=6,55%; N=14,48%. Trouvé: C=37,38%; H=6,65%; N=14,58%. <I>Exemple 8</I> On emploie comme matière de départ 90g de chlorhydrate" de streptomycine impur (activité 560 #t/mg, pureté: 66,5<B>%).</B> On effectue la réaction exactement comme décrit à l'exemple 7. Une fois la réaction terminée, on dilue la solution avec une quantité égale d'eau distillée. On ajoute à cette solu tion 200g de carbonate d'argent en poudre et on agite énergiquement.
Les ions chlorure et aluminium sont éliminés par précipitation. Après filtration, on lave à fond le résidu avec de l'eau distillée. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite. On ajoute à 250 ml de cette solution concentrée une solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum pour séparer l'ion carbo nate. On ajoute à 400 ml du filtrat une quantité égale d'acétone et on laisse refroidir pendant la nuit.
On filtre et sèche les cristaux de base libre de dihy- drodesoxystreptomycine qui se sont séparés et soli difiés. On les neutralise avec une solution 2N d'acide chlorhydrique sec dans du méthanol. On verse la solution neutralisée dans sept fois sa quantité d'acé tone séchée, on filtre le précipité résultant, on le sèche et on obtient le chlorhydrate de dihydrodesoxy- streptomycine. Rendement : 51,0 g ; 89,2 % ;teneur en dihy- drostreptomycine : 1,60 %.
(La pureté de la dihy- drodesoxystreptomycine est donc de 98,40 %) ; activité<B>:</B> 880 ii/mg. <I>Exemple 9</I> On dissout 70g de chlorhydrate d'hydroxy- streptomycine de grande pureté (activité<B>:
</B> 745 w/mg) dans une solution aqueuse à 10 % de AIC13. 6H20 (5,53 % de AIC13). On ajoute à cette solution 7,8 g d'aluminium amalgamé et on fait réagir en agitant. Après 6 heures de réaction en maintenant la tem pérature du mélange réactionnel à 45-500 C, la teneur en hydroxystreptomycine résiduelle tombe en dessous de 1 %, et l'aluminium amalgamé que l'on a ajouté est presque entièrement dissous.
Une fois la réaction terminée, on dilue la solution avec une quantité égale d'eau distillée. On ajoute à cette solu tion 75 g de carbonate d'argent en poudre et on agite énergiquement. Le chlorure d'aluminium est éliminé sous forme de précipités de chlorure d'argent et d'hydroxyde d'aluminium.
On lave à fond le résidu avec de l'eau distillée. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite à 42-45 C, jusqu'à consistance sirupeuse. On dissout ce sirop dans 300 ml de méthanol séché et on coule la solution dans 2000 ml d'acétone séchée. On filtre et sèche le précipité résultant et on obtient le chlor- hydrate de dihydrodesoxyhydroxystreptomycine.
Rendement<B>:</B> 62,0 g ; 91,6 % ;teneur en dihy- drohydroxystreptomycine : 3,2 %. (La pureté de la dihydrodesoxyhydroxystreptomycine est donc de 96,8 %) ; activité: 770 [,/mg.
Analyse Calculé d'après C21H41N7012.3HC1: C=36,39%; H=6,40%; N=14,15%. Trouvé: C=36,52%; H=6,51%; N=14,38%. <I>Exemple 10</I> On emploie comme matière de départ 90g de chlorhydrate d'hydroxystreptomycine de qualité impure (activité: 540 [t/mg). On effectue la réac tion exactement comme décrit à l'exemple 9. Une fois la réaction terminée, on dilue la solution avec une quantité égale d'eau distillée.
On ajoute à cette solution 190g de carbonate d'argent en poudre, on agite énergiquement et les ions aluminium et chlo rure sont complètement éliminés. On lave le résidu à fond avec de l'eau distillée, on réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite à 40-450 C. On ajoute à 250 ml du concen tré une solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum et on sépare l'ion carbonate. On ajoute à 400 ml du filtrat une quantité égale d'acétone et on laisse refroidir pendant la nuit.
On filtre et sèche les cristaux de base libre de dihydrodesoxyhydroxy- streptomycine qui se sont séparés et solidifiés. On les neutralise avec une solution 2N d'acide chlorhy drique sec dans du méthanol. En ajoutant la solution neutralisée à sept fois sa quantité d'acétone séchée, on obtient un précipité, que l'on filtre et sèche. On obtient le chlorhydrate de dihydrodesoxyhydroxy- streptomycine.
Rendement:<B>53,0g;</B> 87,3 % ; teneur en dihy- drostreptomycine : 2,2 % (la pureté de la dihydro- desoxyhydroxystreptomycine est donc de 97,8 %) ;
activité: 800 I,/mg. <I>Exemple 11</I> On dissout 70 g de chlorhydrate de mannosido- streptomycine de grande pureté (activité : 225 g/mg) dans 200 ml d'une solution aqueuse à 10 % de AICI3.6H20 (5,53 % de AIC13). On ajoute à cette solution 7 g d'aluminium amalgamé et on fait réagir sous agitation.
Après 6 heures de réduction en main tenant la température du mélange réactionnel à 45 501) C, la teneur en mannosidostreptomycine rési duelle dans le mélange réactionnel tombe en dessous de 1 % et l'aluminium amalgamé qui a été ajouté est presque entièrement dissous. Après la fin de la réaction, on dilue le mélange avec une quantité égale d'eau distillée et, après, avoir ajouté 50 g de carbo nate d'argent en poudre et avoir agité énergique ment, on sépare le chlorure d'aluminium sous forme de précipité de chlorure d'argent et d'hydroxyde d'aluminium.
On lave le précipité avec de l'eau distil lée, on réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite à. 42-45 C jusqu'à consistance sirupeuse. On dissout le sirop dans 200 ml de méthanol sec et on ajoute la solution a 1200 ml d'acétone sèche. Ensuite, on filtre et sèche le chlorhydrate de déhydrodesoxymannosidostrepto- mycine quia précipité.
Rendement<B>:</B> 62,0 g ; 90,5 % ; teneur en dihy- dromannosidostreptomycine : 3,3 % (la pureté de la déhydrodesoxymannosidostreptomycine est donc de 96,7 %) ; activité: 230 R/mg. Analyse Calculé d'après C27H51N701E. 3HC1. H20 <B>C=37,72%;</B> H=6,59%; 14=11,44%. Trouvé:<B>C=37,43%;</B> 11=6,47%; N=11,24%.
<I>Exemple 12</I> On emploie comme matière de départ 90g de chlorhydrate de mannosidostreptomycine (activité 140 #t/mg) ; on exécute la réaction exactement comme décrit à l'exemple 11. Une fois la réaction terminée, on dilue la solution avec une quantité égale d'eau distillée. On ajoute à cette solution 140 g de carbonate d'argent en poudre, on agite énergique ment, et les ions chlorure et aluminium sont entière ment éliminés. On lave soigneusement le résidu à l'eau distillée. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite à 42 450 C.
A 200 ml de ce concentré, on ajoute de la solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum pour éliminer l'ion carbonate. A 300 ml du filtrat, on ajoute une quantité égale d'acétone et on laisse refroidir pendant la nuit.
On filtre et sèche les cris taux de base libre de déhydrodesoxymannosido- streptomycine qui se sont séparés et solidifiés, et on neutralise avec une solution 2N d'acide chlorhydri que sec dans du méthanol. On coule la solution neu tralisée dans sept fois sa quantité d'acétone sèche, on filtre et sèche le précipité résultant, et on obtient le chlorhydrate de déhydrodesoxymannosidostrepto- mycine.
Rendement<B>:</B> 46,5 g ; 86,7 % ;teneur en dihy- dromannosidostreptomycine : 2,3 % (la pureté de la déhydrodesoxymannosidostreptomycine est donc de 97,7 %) ; activité: 235 R/mg. <I>Exemple 13</I> On dissout 70 g de sel complexe chlorhydrate de streptomycine-chlorure de calcium, de haute qualité (activité<B>:</B> 770 [t/mg, pureté<B>:
</B> 98,7 %) dans 300 ml de solution aqueuse à 10 % de AlC13. 6H20 (5,5 % de AIC13). On ajoute à cette solution 8,1 g d7alumi- nium amalgamé et on fait réagir sous agitation. Après 5,5 heures de réaction en maintenant la température à 50-550 C, la teneur en streptomycine résiduelle de la solution devient inférieure à 1 % et l'aluminium amalgamé qui a été ajouté est presque entièrement dissous.
Lorsque la réaction est terminée, on -dilue la solution avec une quantité double d'eau distillée. On ajoute à cette solution 80 g de carbonate d'argent en poudre et on agite énergiquement pour éliminer les ions aluminium, calcium et chlorure. On lave à fond le résidu à l'eau distillée. On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on concentre sous pression réduite à 42-45 C jusqu'à consistance sirupeuse.
On dissout le sirop dans 300 ml de méthanol séché et on ajoute goutte à goutte cette solution à 2000 ml d'acétone séchée, après quoi le chlorhydrate de dihy- drodesoxystreptomycine précipite. On filtre ce pré cipité, on le lave et on le sèche.
Rendement: 59,5 g ; 93,8 % ; teneur en dihy- drostreptomycine : 2,4 % (la pureté de la dihydro- desoxystreptomycine est donc de 97,6 %) ; activité 850 l,/mg. Analyse Calculé d'après Cz1H41N7011.3HC1 C = 37,26 % ; H = 6,55 % ; N = 14,48 Trouvé: C=37,18%; H=6,38%; N=14,37%.
<I>Exemple 14</I> On emploie comme matière de départ 90g de sel complexe chlorhydrate de streptomycine-chlorure de calcium, de qualité impure (activité: 530 [,/mg, pureté: 68<B>%).</B> On exécute la réaction exactement comme décrit à l'exemple 13. Une fois la réaction terminée, on dilue la solution avec une quantité dou ble d'eau distillée. On ajoute à cette solution<B>200g</B> de carbonate d'argent en poudre et on agite énergi quement pour éliminer les ions aluminium, calcium et chlorure comme précipités. On lave soigneusement le précipité à l'eau distillée.
On réunit le filtrat et les eaux de lavage et on les concentre sous pression réduite à 42-45 C. A 250 ml de ce concentré, on ajoute de la solution aqueuse chaude d'hydroxyde de baryum pour éliminer l'ion carbonate. On ajoute à 400 ml du filtrat une quantité égale d'acétone et on laisse refroidir pendant la nuit.
On filtre et sèche les cristaux de base libre de- dihydrodesoxystrepto- mycine qui se sont séparés et solidifiés, et on neu tralise avec une solution méthanolique 2N d'acide chlorhydrique sec. On ajoute la solution neutralisée goutte à goutte à sept fois sa quantité d'acétone séchée et le chlorhydrate de dihydrodesoxystrepto- mycine précipite. On filtre et sèche le précipité.
Rendement: 49,5 g ; 90,3 % ;teneur en dihy- drostreptomycine :<B>1,65</B> % (la pureté de la dihy- drodesoxystreptomycine est donc de 98,35 activité : 870 w/mg.