CA2656844A1 - Modulateurs de scarb-1 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee - Google Patents
Modulateurs de scarb-1 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee Download PDFInfo
- Publication number
- CA2656844A1 CA2656844A1 CA002656844A CA2656844A CA2656844A1 CA 2656844 A1 CA2656844 A1 CA 2656844A1 CA 002656844 A CA002656844 A CA 002656844A CA 2656844 A CA2656844 A CA 2656844A CA 2656844 A1 CA2656844 A1 CA 2656844A1
- Authority
- CA
- Canada
- Prior art keywords
- expression
- scarb
- gene
- activity
- receptor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Abandoned
Links
- 206010000496 acne Diseases 0.000 title claims abstract description 29
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 76
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 31
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 15
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 55
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 27
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 16
- 206010039792 Seborrhoea Diseases 0.000 claims description 9
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 9
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 210000004378 sebocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 abstract description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 9
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 9
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 8
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 230000001548 androgenic effect Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 229960002074 flutamide Drugs 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000037312 oily skin Effects 0.000 description 4
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 4
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 3
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 208000020154 Acnes Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101100150273 Caenorhabditis elegans srb-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 2
- 229940030495 antiandrogen sex hormone and modulator of the genital system Drugs 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 229940123407 Androgen receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100328086 Caenorhabditis elegans cla-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000186427 Cutibacterium acnes Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004097 EU approved flavor enhancer Substances 0.000 description 1
- 206010049290 Feminisation acquired Diseases 0.000 description 1
- 208000034793 Feminization Diseases 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000889990 Homo sapiens Apolipoprotein(a) Proteins 0.000 description 1
- 101000740659 Homo sapiens Scavenger receptor class B member 1 Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical group C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102100037118 Scavenger receptor class B member 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 239000003936 androgen receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 229960000978 cyproterone acetate Drugs 0.000 description 1
- UWFYSQMTEOIJJG-FDTZYFLXSA-N cyproterone acetate Chemical compound C1=C(Cl)C2=CC(=O)[C@@H]3C[C@@H]3[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 UWFYSQMTEOIJJG-FDTZYFLXSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010064060 high density lipoprotein receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 102000045903 human LPA Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000001531 micro-dissection Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000005319 nano flow HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 229940075993 receptor modulator Drugs 0.000 description 1
- NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N reduced coenzyme Q9 Natural products COC1=C(O)C(C)=C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- -1 soaked swabs Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229960002256 spironolactone Drugs 0.000 description 1
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940032362 superoxide dismutase Drugs 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229940040064 ubiquinol Drugs 0.000 description 1
- QNTNKSLOFHEFPK-UPTCCGCDSA-N ubiquinol-10 Chemical compound COC1=C(O)C(C)=C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC QNTNKSLOFHEFPK-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6809—Methods for determination or identification of nucleic acids involving differential detection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/20—Dermatological disorders
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
L'invention concerne une mthode in vitro de criblage de composs candida ts pour le traitement prventif ou curatif de l'acn, comprenant la dtermin ation de la capacit d'un compos
moduler l'expression ou l'activit du r cepteur SCARB-1, ainsi que l'utilisation de modulateurs de l'expression ou d e l'activit de ce rcepteur pour le traitement de l'acn ou des dsordres c utans associs
une hypersborrhe. L'invention concerne aussi des mthode s de diagnostic ou pronostic in vitro de ces pathologies.
Description
Modulateurs de SCARB-1 dans le traitement de l'acné ou de l'hyperséborrhée L'invention concerne l'identification et l'utilisation de composés modulateurs du récepteur SCARB-1, pour le traitement de l'acné, ainsi que des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée. Elle concerne aussi des méthodes de diagnostic in vitro ou pronostic in vitro de ces pathologies.
Une peau grasse hyperséborrhéique est caractérisée par une sécrétion et une excrétion exagérées de sébum. Classiquement, un taux de sébum supérieur à 200 g/cm2 mesuré
au niveau du front est considéré comme caractéristique d'une peau grasse. Une peau grasse est souvent associée à un défaut de desquamation, un teint luisant, un grain de peau épais. En plus de ces désordres esthétiques, l'excès de sébum peut servir de support au développement anarchique de la flore bactérienne saprophyte (P.
acnes en particulier), et provoquer l'apparition de comédons et/ou de lésions acnéiques.
Cette stimulation de la production de glandes sébacées est induite par les androgènes.
L'acné est, de fait, une maladie chronique du follicule pilosébacé sous dépendance hormonale. Une thérapie hormonale contre l'acné est une possibilité de traitement pour les femmes, le but étant de s'opposer aux effets des androgènes sur la glande sébacée.
Dans ce cadre on utilise généralement des oestrogènes, des anti-androgènes, ou des agents diminuant la production d'androgènes par les ovaires ou la glande surrénale. Les anti-androgènes utilisés pour le traitement de l'acné incluent notamment la spironolactone, l'acétate de cyprotérone, et le flutamide. Cependant, ces agents présentent des effets secondaires sévères. Ainsi, toute grossesse doit être absolument empêchée, du fait notamment d'un risque de féminisation pour le fcetus mâle.
Ces agents sont prohibés chez les patients masculins.
Il existe donc un besoin d'identifier des médiateurs en aval de l'action des hormones stéroïdiennes, et de les moduler, pour obtenir un profil thérapeutique similaire, mais avec des effets secondaires réduits.
La demanderesse a maintenant découvert que le gène codant pour le récepteur SCARB-1 était exprimé dans les glandes sébacées humaines, et que son expression était régulée par les androgènes, in vivo, dans un modèle de glande préputiale de souris.
Elle propose dès lors de cibler le gène SCARB-1 ou son produit d'expression, pour prévenir ou améliorer les phénomènes d'acné, ainsi que les désordres cutanés associés à
une hyperséborrhée, notamment l'aspect de peau grasse.
Une peau grasse hyperséborrhéique est caractérisée par une sécrétion et une excrétion exagérées de sébum. Classiquement, un taux de sébum supérieur à 200 g/cm2 mesuré
au niveau du front est considéré comme caractéristique d'une peau grasse. Une peau grasse est souvent associée à un défaut de desquamation, un teint luisant, un grain de peau épais. En plus de ces désordres esthétiques, l'excès de sébum peut servir de support au développement anarchique de la flore bactérienne saprophyte (P.
acnes en particulier), et provoquer l'apparition de comédons et/ou de lésions acnéiques.
Cette stimulation de la production de glandes sébacées est induite par les androgènes.
L'acné est, de fait, une maladie chronique du follicule pilosébacé sous dépendance hormonale. Une thérapie hormonale contre l'acné est une possibilité de traitement pour les femmes, le but étant de s'opposer aux effets des androgènes sur la glande sébacée.
Dans ce cadre on utilise généralement des oestrogènes, des anti-androgènes, ou des agents diminuant la production d'androgènes par les ovaires ou la glande surrénale. Les anti-androgènes utilisés pour le traitement de l'acné incluent notamment la spironolactone, l'acétate de cyprotérone, et le flutamide. Cependant, ces agents présentent des effets secondaires sévères. Ainsi, toute grossesse doit être absolument empêchée, du fait notamment d'un risque de féminisation pour le fcetus mâle.
Ces agents sont prohibés chez les patients masculins.
Il existe donc un besoin d'identifier des médiateurs en aval de l'action des hormones stéroïdiennes, et de les moduler, pour obtenir un profil thérapeutique similaire, mais avec des effets secondaires réduits.
La demanderesse a maintenant découvert que le gène codant pour le récepteur SCARB-1 était exprimé dans les glandes sébacées humaines, et que son expression était régulée par les androgènes, in vivo, dans un modèle de glande préputiale de souris.
Elle propose dès lors de cibler le gène SCARB-1 ou son produit d'expression, pour prévenir ou améliorer les phénomènes d'acné, ainsi que les désordres cutanés associés à
une hyperséborrhée, notamment l'aspect de peau grasse.
2 PCT/FR2007/051686 Par acné, on entend toutes les formes d'acné, à savoir notamment les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, les acnés nodulokystiques, conglobata, ou encore les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse ou professionnelle.
La demanderesse propose également des méthodes de diagnostic, in vitro ou pronostic in vitro, basées sur la détection du niveau d'expression ou d'activité du SCARB-1.
Les récepteurs éboueurs ("scavengers") sont des protéines de surface cellulaire, qui sont typiquement trouvées sur les macrophages et qui se lient à divers types de lipoprotéines modifiées, telles que les lipoprotéines de basse densité (LDL). Cette famille de récepteurs transmembranaires, qui présente une grande diversité structurelle, est impliquée dans l'endocytose et la phagocytose des cellules apoptotiques et des bactéries, ainsi que dans l'adhésion cellulaire. Ces récepteurs interviendraient aussi dans le dépôt du LDL
cholestérol des macrophages au niveau des parois des artères coronaires, au cours des premières phases de la formation d'une plaque d'athérosclérose.
SCARB-1 ("scavenger receptor class B, member 1", désigné également SRB-1, ou Cla-1) appartient à la famille des récepteurs "éboueurs" ("scavengers"), de classe B, et est un récepteur des lipoprotéines de haute-densité, qui médie l'incorporation de cholestérol dans les cellules. SRB-1 peut aussi servir de récepteur à des lipoprotéines non-HDL et jouerait un rôle important dans le transport inverse du cholestérol.
L'expression de ce gène serait induite par la testostérone dans des macrophages et des hépatocytes en culture (Langer et al, Biochem Biophys Res Commun. 2002, 296(5) :1051-1057).
Millena et al (Mol Cell Endocrinol, 2004, 224(1-2) :29-39) ont, de leur côté, montré
qu'une augmentation de la production androgénique en réponse au TGFP était associée à
des niveaux élevés d'ARNm de SCARB-1.
Dans le contexte de l'invention, le terme gène SCARB-1 ou acide nucléique SCARB-1 signifie le gène ou la séquence nucléique codant pour un récepteur transmembranaire SCARB-1. Si la cible visée est de préférence le gène humain ou son produit d'expression, l'invention peut également faire appel à des cellules exprimant un récepteur SCARB-1 hétérologue, par intégration génomique ou expression transitoire d'une séquence d'acides nucléiques exogène codant pour l'enzyme (par exemple une enzyme d'un autre organisme).
Une séquence d'ADNc humain de SCARB-1 est reproduite en annexe (SEQ ID No.1).
Il s'agit de la séquence NM005505 dont la partie codante se situe de l'acide nucléique 70 à
1599.
La demanderesse propose également des méthodes de diagnostic, in vitro ou pronostic in vitro, basées sur la détection du niveau d'expression ou d'activité du SCARB-1.
Les récepteurs éboueurs ("scavengers") sont des protéines de surface cellulaire, qui sont typiquement trouvées sur les macrophages et qui se lient à divers types de lipoprotéines modifiées, telles que les lipoprotéines de basse densité (LDL). Cette famille de récepteurs transmembranaires, qui présente une grande diversité structurelle, est impliquée dans l'endocytose et la phagocytose des cellules apoptotiques et des bactéries, ainsi que dans l'adhésion cellulaire. Ces récepteurs interviendraient aussi dans le dépôt du LDL
cholestérol des macrophages au niveau des parois des artères coronaires, au cours des premières phases de la formation d'une plaque d'athérosclérose.
SCARB-1 ("scavenger receptor class B, member 1", désigné également SRB-1, ou Cla-1) appartient à la famille des récepteurs "éboueurs" ("scavengers"), de classe B, et est un récepteur des lipoprotéines de haute-densité, qui médie l'incorporation de cholestérol dans les cellules. SRB-1 peut aussi servir de récepteur à des lipoprotéines non-HDL et jouerait un rôle important dans le transport inverse du cholestérol.
L'expression de ce gène serait induite par la testostérone dans des macrophages et des hépatocytes en culture (Langer et al, Biochem Biophys Res Commun. 2002, 296(5) :1051-1057).
Millena et al (Mol Cell Endocrinol, 2004, 224(1-2) :29-39) ont, de leur côté, montré
qu'une augmentation de la production androgénique en réponse au TGFP était associée à
des niveaux élevés d'ARNm de SCARB-1.
Dans le contexte de l'invention, le terme gène SCARB-1 ou acide nucléique SCARB-1 signifie le gène ou la séquence nucléique codant pour un récepteur transmembranaire SCARB-1. Si la cible visée est de préférence le gène humain ou son produit d'expression, l'invention peut également faire appel à des cellules exprimant un récepteur SCARB-1 hétérologue, par intégration génomique ou expression transitoire d'une séquence d'acides nucléiques exogène codant pour l'enzyme (par exemple une enzyme d'un autre organisme).
Une séquence d'ADNc humain de SCARB-1 est reproduite en annexe (SEQ ID No.1).
Il s'agit de la séquence NM005505 dont la partie codante se situe de l'acide nucléique 70 à
1599.
3 PCT/FR2007/051686 Applications diagnostiques Un objet de l'invention concerne une méthode in vitro de diagnostic ou de suivi de l'évolution de lésions acnéiques ou d'un désordre cutané associé à une hyperséborrhée chez un sujet, comprenant la comparaison de l'expression ou de l'activité du SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans un échantillon biologique d'un sujet par rapport à un échantillon biologique d'un sujet contrôle.
L'expression de la protéine peut être déterminée par un dosage de la protéine par radioimmunoessai, par exemple par dosage ELISA. Une autre méthode, notamment pour mesurer l'expression du gène, est de mesurer la quantité d'ARNm correspondant, par toute méthode telle que décrit plus haut. Un dosage de l'activité du SCARB-1 peut être également envisagé.
Dans le cadre d'un diagnostic, le sujet contrôle est un sujet sain .
Dans le cadre d'un suivi de l'évolution des lésions acnéiques ou d'un désordre cutané lié
a une hyperséborrhée, le sujet contrôle fait référence au même sujet à un temps différent, qui correspond de préférence au début du traitement (To). Cette mesure de la différence d'expression ou de l'activité du SCARB-1, ou d'expression de son gène ou d'activité d'au moins un de ses promoteurs, permet notamment de suivre l'efficacité d'un traitement, notamment un traitement par un modulateur du SCARB-1, tel qu'envisagé plus haut ou par un autre traitement contre l'acné ou un désordre cutané associé à
une hyperséborrhée. Un tel suivi peut conforter le patient quant au bien fondé, ou à la nécessité, de poursuivre ce traitement.
Un autre aspect de la présente invention concerne une méthode in vitro de détermination d'une susceptibilité d'un sujet à développer des lésions acnéiques ou un désordre cutané
associé à une hyperséborrhée, comprenant la comparaison de l'expression ou de l'activité
du SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans un échantillon biologique d'un sujet par rapport à un échantillon biologique d'un sujet contrôle.
Là encore, l'expression de la protéine peut être déterminée par un dosage de la protéine SCARB-1 par radioimmunoessai, par exemple par dosage ELISA. Une autre méthode, notamment pour mesurer l'expression du gène, est de mesurer la quantité d'ARNm correspondant par toute méthode telle que décrit plus haut. Un dosage de l'activité du SCARB-1 peut être également envisagé.
Le sujet testé est ici un sujet asymptomatique, ne présentant aucun trouble cutané lié à
une hyperséborrhée ou une acné. Le sujet contrôle , dans cette méthode, signifie un
L'expression de la protéine peut être déterminée par un dosage de la protéine par radioimmunoessai, par exemple par dosage ELISA. Une autre méthode, notamment pour mesurer l'expression du gène, est de mesurer la quantité d'ARNm correspondant, par toute méthode telle que décrit plus haut. Un dosage de l'activité du SCARB-1 peut être également envisagé.
Dans le cadre d'un diagnostic, le sujet contrôle est un sujet sain .
Dans le cadre d'un suivi de l'évolution des lésions acnéiques ou d'un désordre cutané lié
a une hyperséborrhée, le sujet contrôle fait référence au même sujet à un temps différent, qui correspond de préférence au début du traitement (To). Cette mesure de la différence d'expression ou de l'activité du SCARB-1, ou d'expression de son gène ou d'activité d'au moins un de ses promoteurs, permet notamment de suivre l'efficacité d'un traitement, notamment un traitement par un modulateur du SCARB-1, tel qu'envisagé plus haut ou par un autre traitement contre l'acné ou un désordre cutané associé à
une hyperséborrhée. Un tel suivi peut conforter le patient quant au bien fondé, ou à la nécessité, de poursuivre ce traitement.
Un autre aspect de la présente invention concerne une méthode in vitro de détermination d'une susceptibilité d'un sujet à développer des lésions acnéiques ou un désordre cutané
associé à une hyperséborrhée, comprenant la comparaison de l'expression ou de l'activité
du SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans un échantillon biologique d'un sujet par rapport à un échantillon biologique d'un sujet contrôle.
Là encore, l'expression de la protéine peut être déterminée par un dosage de la protéine SCARB-1 par radioimmunoessai, par exemple par dosage ELISA. Une autre méthode, notamment pour mesurer l'expression du gène, est de mesurer la quantité d'ARNm correspondant par toute méthode telle que décrit plus haut. Un dosage de l'activité du SCARB-1 peut être également envisagé.
Le sujet testé est ici un sujet asymptomatique, ne présentant aucun trouble cutané lié à
une hyperséborrhée ou une acné. Le sujet contrôle , dans cette méthode, signifie un
4 PCT/FR2007/051686 sujet ou une population de référence saine . La détection de cette susceptibilité permet la mise en place d'un traitement préventif et/ou d'une surveillance accrue des signes liés à l'acné ou à un désordre cutané associé à une hyperséborrhée.
Dans ces méthodes de diagnostic ou pronostic in vitro, l'échantillon biologique testé peut être n'importe quel échantillon de liquide biologique ou un échantillon d'une biopsie. De préférence l'échantillon peut être néanmoins une préparation de cellules de la peau, obtenues par exemple par desquamation ou biopsie. Il peut également s'agir de sébum.
Méthodes de criblage Un objet de l'invention est une méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, comprenant la détermination de la capacité d'un composé à
moduler l'expression ou l'activité du récepteur SCARB-1 ou l'expression de son gène ou l'activité
d'au moins un de ses promoteurs, ladite modulation indiquant l'utilité du composé pour le traitement préventif ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à
une hyperséborrhée. La méthode permet donc de sélectionner les composés capables de moduler l'expression ou l'activité du récepteur SCARB-1, ou l'expression de son gène, ou l'activité d'au moins un de ses promoteurs.
Plus particulièrement, l'invention concerne une méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, comprenant les étapes suivantes :
a. préparation d'au moins deux échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
b. mise en contact d'un des échantillons ou mélanges réactionnels avec un ou plusieurs des composés à tester ;
c. mesure de l'expression ou de l'activité de la protéine SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
d. sélection des composés pour lesquels une modulation de l'expression ou de l'activité de la protéine SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, est mesurée dans l'échantillon ou le mélange traité en b), par rapport à l'échantillon ou au mélange non traité.
Dans ces méthodes de diagnostic ou pronostic in vitro, l'échantillon biologique testé peut être n'importe quel échantillon de liquide biologique ou un échantillon d'une biopsie. De préférence l'échantillon peut être néanmoins une préparation de cellules de la peau, obtenues par exemple par desquamation ou biopsie. Il peut également s'agir de sébum.
Méthodes de criblage Un objet de l'invention est une méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, comprenant la détermination de la capacité d'un composé à
moduler l'expression ou l'activité du récepteur SCARB-1 ou l'expression de son gène ou l'activité
d'au moins un de ses promoteurs, ladite modulation indiquant l'utilité du composé pour le traitement préventif ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à
une hyperséborrhée. La méthode permet donc de sélectionner les composés capables de moduler l'expression ou l'activité du récepteur SCARB-1, ou l'expression de son gène, ou l'activité d'au moins un de ses promoteurs.
Plus particulièrement, l'invention concerne une méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, comprenant les étapes suivantes :
a. préparation d'au moins deux échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
b. mise en contact d'un des échantillons ou mélanges réactionnels avec un ou plusieurs des composés à tester ;
c. mesure de l'expression ou de l'activité de la protéine SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
d. sélection des composés pour lesquels une modulation de l'expression ou de l'activité de la protéine SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, est mesurée dans l'échantillon ou le mélange traité en b), par rapport à l'échantillon ou au mélange non traité.
5 PCT/FR2007/051686 Par modulation , on entend tout effet sur l'expression ou l'activité du récepteur, l'expression de son gène ou l'activité d'au moins un de ses promoteurs, à
savoir éventuellement une stimulation (c'est à dire une activité agoniste), mais de préférence une inhibition, partielle ou complète (c'est à dire une activité antagoniste).
La différence d'expression obtenue avec le composé testé par rapport à un contrôle réalisé
en l'absence du composé est significative à partir de 25% ou plus.
Dans l'ensemble du présent texte, à moins qu'il ne soit spécifié autrement, par expression d'une protéine , on entend la quantité de cette protéine Par activité d'une protéine , on entend son activité biologique ;
Par activité d'un promoteur , on entend la capacité de ce promoteur à
déclencher la transcription de la séquence d'ADN codée en aval de ce promoteur (et donc indirectement la synthèse de la protéine correspondante).
Les composés testés peuvent être de tout type. Ils peuvent être d'origine naturelle ou avoir été produits par synthèse chimique. Il peut s'agir d'une banque de composés chimiques structurellement définis, de composés ou de substances non caractérisés, ou d'un mélange de composés.
Différentes techniques peuvent être mises en ceuvre pour tester ces composés et identifier les composés d'intérêt thérapeutique, modulateurs de l'expression ou de l'activité du récepteur SCARB-1.
Selon un premier mode de réalisation, les échantillons biologiques sont des cellules transfectées avec un gène rapporteur lié de manière opérante à tout ou partie du promoteur du gène SCARB-1, et l'étape c) décrite ci-dessus consiste à mesurer l'expression dudit gène rapporteur.
Le gène rapporteur peut notamment coder pour une enzyme qui, en présence d'un substrat donné, conduit à la formation de produits colorés, telle que CAT
(chloramphenicol acétyltransférase), GAL (beta galactosidase), ou GUS (beta glucuronidase). Il peut également s'agir du gène de la luciférase ou de la GFP
(Green Fluorescent Protein). Le dosage de la protéine codée par le gène rapporteur, ou de son activité, est réalisé classiquement, par des techniques colorimétriques, fluorométriques, ou de chimioluminescence, entre autres.
savoir éventuellement une stimulation (c'est à dire une activité agoniste), mais de préférence une inhibition, partielle ou complète (c'est à dire une activité antagoniste).
La différence d'expression obtenue avec le composé testé par rapport à un contrôle réalisé
en l'absence du composé est significative à partir de 25% ou plus.
Dans l'ensemble du présent texte, à moins qu'il ne soit spécifié autrement, par expression d'une protéine , on entend la quantité de cette protéine Par activité d'une protéine , on entend son activité biologique ;
Par activité d'un promoteur , on entend la capacité de ce promoteur à
déclencher la transcription de la séquence d'ADN codée en aval de ce promoteur (et donc indirectement la synthèse de la protéine correspondante).
Les composés testés peuvent être de tout type. Ils peuvent être d'origine naturelle ou avoir été produits par synthèse chimique. Il peut s'agir d'une banque de composés chimiques structurellement définis, de composés ou de substances non caractérisés, ou d'un mélange de composés.
Différentes techniques peuvent être mises en ceuvre pour tester ces composés et identifier les composés d'intérêt thérapeutique, modulateurs de l'expression ou de l'activité du récepteur SCARB-1.
Selon un premier mode de réalisation, les échantillons biologiques sont des cellules transfectées avec un gène rapporteur lié de manière opérante à tout ou partie du promoteur du gène SCARB-1, et l'étape c) décrite ci-dessus consiste à mesurer l'expression dudit gène rapporteur.
Le gène rapporteur peut notamment coder pour une enzyme qui, en présence d'un substrat donné, conduit à la formation de produits colorés, telle que CAT
(chloramphenicol acétyltransférase), GAL (beta galactosidase), ou GUS (beta glucuronidase). Il peut également s'agir du gène de la luciférase ou de la GFP
(Green Fluorescent Protein). Le dosage de la protéine codée par le gène rapporteur, ou de son activité, est réalisé classiquement, par des techniques colorimétriques, fluorométriques, ou de chimioluminescence, entre autres.
6 PCT/FR2007/051686 Selon un deuxième mode de réalisation, les échantillons biologiques sont des cellules exprimant le gène SCARB-1, et l'étape c) décrite ci-dessus consiste à mesurer l'expression dudit gène.
La cellule utilisée ici peut être de tout type. Il peut s'agir d'une cellule exprimant le gène SCARB-1 de manière endogène, comme par exemple une cellule de foie, une cellule ovarienne, ou encore mieux un sébocyte. On peut également utiliser des organes d'origine humaine ou animale, comme par exemple la glande préputiale, clitoridienne, ou encore la glande sébacée de la peau.
II peut également s'agir d'une cellule transformée par un acide nucléique hétérologue, codant pour un récepteur SCARB-1, de préférence humain, ou de mammifère.
Une grande variété de systèmes de cellules hôtes peut être utilisée, telle que par exemples les cellules Cos-7, CHO, BHK, 3T3, HEK293.
L'acide nucléique peut être transfecté de manière stable ou transitoire, par toute méthode connue de l'homme du métier, par exemple par phosphate de calcium, DEAE-dextran, liposome, virus, électroporation, ou microinjection.
Dans cette méthode, l'expression de SCARB-1 peut être déterminée en mesurant le taux de transcription dudit gène, ou son taux de traduction.
Par taux de transcription d'un gène, on entend la quantité d'ARNm correspondant produite. Par taux de traduction d'un gène, on entend la quantité de protéine correspondante produite.
L'homme du métier est familier des techniques permettant la détection quantitative ou semi-quantitative de l'ARNm d'un gène d'intérêt. Les techniques basées sur l'hybridation de l'ARNm avec des sondes nucléotidiques spécifiques sont les plus usuelles (Northern Blot, RT-PCR, protection à la RNase). Il peut être avantageux d'utiliser des marqueurs de détection, tels que des agents fluorescents, radioactifs, enzymatiques ou autres ligands (par exemple, avidine/biotine).
En particulier, l'expression du gène peut être mesurée par PCR en temps réel ou par protection à la RNase. Par protection à la RNase, on entend la détection d'un ARNm connu parmi les ARN-poly(A) d'un tissu qui peut se faire à l'aide d'une hybridation spécifique avec une sonde marquée. La sonde est un ARN complémentaire marqué
(radioactif) du messager à rechercher. Elle peut être construite à partir d'un ARNm connu dont l'ADNc, après RT-PCR, a été cloné dans un phage. De l'ARN-poly(A) du tissu où la séquence est à rechercher est incubé avec cette sonde dans des conditions d'hybridation lente en milieu liquide. Il se forme des hybrides ARN:ARN entre l'ARNm recherché et la
La cellule utilisée ici peut être de tout type. Il peut s'agir d'une cellule exprimant le gène SCARB-1 de manière endogène, comme par exemple une cellule de foie, une cellule ovarienne, ou encore mieux un sébocyte. On peut également utiliser des organes d'origine humaine ou animale, comme par exemple la glande préputiale, clitoridienne, ou encore la glande sébacée de la peau.
II peut également s'agir d'une cellule transformée par un acide nucléique hétérologue, codant pour un récepteur SCARB-1, de préférence humain, ou de mammifère.
Une grande variété de systèmes de cellules hôtes peut être utilisée, telle que par exemples les cellules Cos-7, CHO, BHK, 3T3, HEK293.
L'acide nucléique peut être transfecté de manière stable ou transitoire, par toute méthode connue de l'homme du métier, par exemple par phosphate de calcium, DEAE-dextran, liposome, virus, électroporation, ou microinjection.
Dans cette méthode, l'expression de SCARB-1 peut être déterminée en mesurant le taux de transcription dudit gène, ou son taux de traduction.
Par taux de transcription d'un gène, on entend la quantité d'ARNm correspondant produite. Par taux de traduction d'un gène, on entend la quantité de protéine correspondante produite.
L'homme du métier est familier des techniques permettant la détection quantitative ou semi-quantitative de l'ARNm d'un gène d'intérêt. Les techniques basées sur l'hybridation de l'ARNm avec des sondes nucléotidiques spécifiques sont les plus usuelles (Northern Blot, RT-PCR, protection à la RNase). Il peut être avantageux d'utiliser des marqueurs de détection, tels que des agents fluorescents, radioactifs, enzymatiques ou autres ligands (par exemple, avidine/biotine).
En particulier, l'expression du gène peut être mesurée par PCR en temps réel ou par protection à la RNase. Par protection à la RNase, on entend la détection d'un ARNm connu parmi les ARN-poly(A) d'un tissu qui peut se faire à l'aide d'une hybridation spécifique avec une sonde marquée. La sonde est un ARN complémentaire marqué
(radioactif) du messager à rechercher. Elle peut être construite à partir d'un ARNm connu dont l'ADNc, après RT-PCR, a été cloné dans un phage. De l'ARN-poly(A) du tissu où la séquence est à rechercher est incubé avec cette sonde dans des conditions d'hybridation lente en milieu liquide. Il se forme des hybrides ARN:ARN entre l'ARNm recherché et la
7 PCT/FR2007/051686 sonde antisens. Le milieu hybridé est alors incubé avec un mélange de ribonucléases spécifiques de l'ARN simple brin, de telle sorte que seuls les hybrides formés avec la sonde peuvent résister à cette digestion. Le produit de digestion est ensuite déprotéinisé
et repurifié, avant d'être analysé par électrophorèse. Les ARN hybrides marqués sont détectés par autoradiographie.
Le taux de traduction du gène est évalué par exemple par dosage immunologique du produit dudit gène. Les anticorps utilisés à cet effet peuvent être de type polyclonal ou monoclonal. Leur production relève de techniques conventionnelles. Un anticorps polyclonal anti-SCARB-1 peut, entre autres, être obtenu par immunisation d'un animal tel qu'un lapin ou une souris, à l'aide de l'enzyme entière, prélèvement puis épuisement de l'antisérum selon des méthodes en soi connues de l'homme du métier. Un anticorps monoclonal peut, entre autres, être obtenu par la méthode classique de Kôhler et Milstein (Nature (London), 256: 495- 497 (1975)). D'autres méthodes de préparation d'anticorps monoclonaux sont également connues. On peut, par exemple, produire des anticorps monoclonaux par expression d'un acide nucléique clone à partir d'un hybridome.
On peut également produire des anticorps par la technique d'expression sur phage ("phage display"), en introduisant des ADNc d'anticorps dans des vecteurs, qui sont typiquement des phages filamenteux qui présentent des banques de gènes V à la surface du phage (par exemple fUSE5 pour E.coli).
Le dosage immunologique peut être réalisé en phase solide ou en phase homogène; en un temps ou en deux temps; en méthode sandwich ou en méthode compétitive, à
titre d'exemples non limitatifs. Selon un mode de réalisation préféré, l'anticorps de capture est immobilisé sur une phase solide. On peut utiliser, à titre d'exemples non limitatifs de phase solide, des microplaques, en particulier des microplaques de polystyrène, ou des particules ou des billes solides, des billes paramagnétiques.
Des dosages ELISA, des radioimmunoessais, ou toute autre technique de détection peuvent être mis en oeuvre pour révéler la présence des complexes antigènes-anticorps formés.
La caractérisation des complexes antigène/anticorps, et plus généralement des protéines isolées ou purifiées mais également recombinantes (obtenues in vitro et in vivo) peut être réalisée par analyse en spectrométrie de masse. Cette identification est rendue possible grâce à l'analyse (détermination de la masse) des peptides générée par l'hydrolyse enzymatique des protéines (trypsine en générale). De façon générale, les protéines sont isolées selon les méthodes connues de l'homme du métier, préalablement à la digestion enzymatique. L'analyse des peptides (sous forme d'hydrolysat) est effectuée par
et repurifié, avant d'être analysé par électrophorèse. Les ARN hybrides marqués sont détectés par autoradiographie.
Le taux de traduction du gène est évalué par exemple par dosage immunologique du produit dudit gène. Les anticorps utilisés à cet effet peuvent être de type polyclonal ou monoclonal. Leur production relève de techniques conventionnelles. Un anticorps polyclonal anti-SCARB-1 peut, entre autres, être obtenu par immunisation d'un animal tel qu'un lapin ou une souris, à l'aide de l'enzyme entière, prélèvement puis épuisement de l'antisérum selon des méthodes en soi connues de l'homme du métier. Un anticorps monoclonal peut, entre autres, être obtenu par la méthode classique de Kôhler et Milstein (Nature (London), 256: 495- 497 (1975)). D'autres méthodes de préparation d'anticorps monoclonaux sont également connues. On peut, par exemple, produire des anticorps monoclonaux par expression d'un acide nucléique clone à partir d'un hybridome.
On peut également produire des anticorps par la technique d'expression sur phage ("phage display"), en introduisant des ADNc d'anticorps dans des vecteurs, qui sont typiquement des phages filamenteux qui présentent des banques de gènes V à la surface du phage (par exemple fUSE5 pour E.coli).
Le dosage immunologique peut être réalisé en phase solide ou en phase homogène; en un temps ou en deux temps; en méthode sandwich ou en méthode compétitive, à
titre d'exemples non limitatifs. Selon un mode de réalisation préféré, l'anticorps de capture est immobilisé sur une phase solide. On peut utiliser, à titre d'exemples non limitatifs de phase solide, des microplaques, en particulier des microplaques de polystyrène, ou des particules ou des billes solides, des billes paramagnétiques.
Des dosages ELISA, des radioimmunoessais, ou toute autre technique de détection peuvent être mis en oeuvre pour révéler la présence des complexes antigènes-anticorps formés.
La caractérisation des complexes antigène/anticorps, et plus généralement des protéines isolées ou purifiées mais également recombinantes (obtenues in vitro et in vivo) peut être réalisée par analyse en spectrométrie de masse. Cette identification est rendue possible grâce à l'analyse (détermination de la masse) des peptides générée par l'hydrolyse enzymatique des protéines (trypsine en générale). De façon générale, les protéines sont isolées selon les méthodes connues de l'homme du métier, préalablement à la digestion enzymatique. L'analyse des peptides (sous forme d'hydrolysat) est effectuée par
8 PCT/FR2007/051686 séparation des peptides par HPLC (nano-HPLC) basé sur leurs propriétés physico-chimiques (phase inverse). La détermination de la masse des peptides ainsi séparés est réalisée par ionisation des peptides et soit par couplage direct au spectromètre de masse (mode electrospray ESI) soit après dépôt et cristallisation en présence d'une matrice connue de l'homme de l'art (analyse en mode MALDI). Les protéines sont ensuite identifiées grâce à l'utilisation d'un logiciel approprié (par exemple Mascot).
Selon un troisième mode de réalisation, l'étape a) décrite ci-dessus consiste à préparer des mélanges réactionnels comprenant chacun un récepteur SCARB-1 et l'étape c) décrite ci-dessus consiste à mesurer la capacité de liaison du composé au récepteur et la modulation de son activité.
Le récepteur SCARB-1 peut être produit selon des techniques usuelles en utilisant les cellules Cos-7, CHO, BHK, 3T3, HEK293. Elle peut également être produite à
l'aide de microorganismes tels que des bactéries (par exemple E. coli ou B. subtilis), des levures (par exemple Saccharomyces, Pichia) ou des cellules d'insecte, telles que Sf9 ou Sf21.
La mesure de l'activité se réfère à la détermination de l'activité d'adhésion cellulaire, activité de transporteur, d'activité apoptotique, d'activité dans le métabolisme lipidique, dans la transduction du signal et/ou dans la sécrétion de cytokine.
Un exemple de méthode de détection est présenté dans TIAN et al., Bio Env Sci, 2005, 18 :265-272. Cette méthode de détection de l'activité du récepteur est basée sur l'utilisation de lipoprotéines humaines marquées par fluorescence, les Dil-lipoprotéines (Dil-AcLDL et DiLHDL). La mesure de la liaison des Dil-lipoprotéines est réalisée par incubation de cellules Sf9, préalablement transformées avec un baculovirus à
une M.O.I
(multiplicité d'infection) de 5 avec des baculovirus possédant ou non la séquence codante pour le récepteur SCARB1, dans 50 L de milieu de culture Grace contenant 0,2%
de BSA (sérumalbumine bovine) avec différentes concentrations de DiL-AcLDL et de Dil-HDL
à température ambiante pendant quelques heures. Après incubation, les cellules ont été
lavées deux fois avec un tampon phosphate (PBS) froid, détachées avec une pipette et transférées sur une plaque contenant 100 L de PBS. Les résultats ont été
quantifiés avec un lecteur de fluorescence de plaque. La mesure de l'activité de liaison spécifique du récepteur est faite par différence entre l'activité de liaison des cellules transformées avec le baculovirus n'exprimant pas le récepteur (contrôle) et l'activité de liaison les cellules transformées avec le baculovirus exprimant le récepteur.
Selon un troisième mode de réalisation, l'étape a) décrite ci-dessus consiste à préparer des mélanges réactionnels comprenant chacun un récepteur SCARB-1 et l'étape c) décrite ci-dessus consiste à mesurer la capacité de liaison du composé au récepteur et la modulation de son activité.
Le récepteur SCARB-1 peut être produit selon des techniques usuelles en utilisant les cellules Cos-7, CHO, BHK, 3T3, HEK293. Elle peut également être produite à
l'aide de microorganismes tels que des bactéries (par exemple E. coli ou B. subtilis), des levures (par exemple Saccharomyces, Pichia) ou des cellules d'insecte, telles que Sf9 ou Sf21.
La mesure de l'activité se réfère à la détermination de l'activité d'adhésion cellulaire, activité de transporteur, d'activité apoptotique, d'activité dans le métabolisme lipidique, dans la transduction du signal et/ou dans la sécrétion de cytokine.
Un exemple de méthode de détection est présenté dans TIAN et al., Bio Env Sci, 2005, 18 :265-272. Cette méthode de détection de l'activité du récepteur est basée sur l'utilisation de lipoprotéines humaines marquées par fluorescence, les Dil-lipoprotéines (Dil-AcLDL et DiLHDL). La mesure de la liaison des Dil-lipoprotéines est réalisée par incubation de cellules Sf9, préalablement transformées avec un baculovirus à
une M.O.I
(multiplicité d'infection) de 5 avec des baculovirus possédant ou non la séquence codante pour le récepteur SCARB1, dans 50 L de milieu de culture Grace contenant 0,2%
de BSA (sérumalbumine bovine) avec différentes concentrations de DiL-AcLDL et de Dil-HDL
à température ambiante pendant quelques heures. Après incubation, les cellules ont été
lavées deux fois avec un tampon phosphate (PBS) froid, détachées avec une pipette et transférées sur une plaque contenant 100 L de PBS. Les résultats ont été
quantifiés avec un lecteur de fluorescence de plaque. La mesure de l'activité de liaison spécifique du récepteur est faite par différence entre l'activité de liaison des cellules transformées avec le baculovirus n'exprimant pas le récepteur (contrôle) et l'activité de liaison les cellules transformées avec le baculovirus exprimant le récepteur.
9 PCT/FR2007/051686 Modulateurs du récepteur L'invention a également pour objet l'utilisation d'un modulateur du récepteur humain SCARB-1 susceptible d'être obtenu selon l'une des méthodes décrites ci-dessus pour la préparation d'un médicament destiné au traitement préventif et/ou curatif de l'acné, ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée.
Il est ainsi décrit ici une méthode de traitement préventif et/ou curatif de l'acné, ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, méthode comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un modulateur du récepteur humain SCARB-1, à un patient nécessitant un tel traitement.
L'invention vise enfin l'utilisation cosmétique d'un modulateur du récepteur SCARB-1, pour le traitement esthétique des peaux grasses.
De manière préférentielle, le modulateur est un antagoniste du récepteur. Le terme antagoniste ou inhibiteur se réfère à un composé ou une substance chimique qui élimine ou réduit substantiellement l'activité du récepteur SCARB-1. Le terme substantiellement signifie une réduction d'au moins 25%, de préférence d'au moins 35%, de préférence encore d'au moins 50%, et de manière plus préférée d'au moins 70%
ou 90%. Plus particulièrement il peut s'agir d'un composé qui interagit avec, et bloque, la liaison du récepteur avec son ligand.
Un inhibiteur préféré interagit avec le récepteur en solution à des concentrations en inhibiteur de moins de 1 M, de préférence moins de 0,1 M, de préférence encore moins de 0,01 M.
Le composé modulateur peut également être un polypeptide, un polynucleotide antisens d'ADN OU d'ARN, un si-ARN, ou un PNA ("Peptide nucleic acid", chaîne polypeptidique substituée par des bases puriques et pyrimidiques, dont la structure spatiale mime celle de l'ADN et permet l'hybridation à celui-ci).
Le composé modulateur peut être un anticorps inhibiteur anti- récepteur SCARB-1, de préférence un anticorps monoclonal. De manière avantageuse, un tel anticorps inhibiteur est administré en une quantité suffisante pour obtenir une concentration plasmatique d'environ 0.01 g par ml à environ 100 g/ml, de préférence d'environ 1 g par ml à environ 5 g/m l .
Il peut par exemple s'agir d'un anticorps qui se lie au domaine extracellulaire collagénique du récepteur, qui joue un rôle dans la liaison au ligand (Acton, 1993, J.
Biol. Chem. 268 (5): 3530-7). Des exemples d'anticorps neutralisants sont également décrits dans la demande W004/80385. D'autres anticorps neutralisants sont connus dans l'art antérieur (voir par exemple Frolov, 2000, J. Biol. Chem. 275 (17): 12769-12780).
Il est ainsi décrit ici une méthode de traitement préventif et/ou curatif de l'acné, ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, méthode comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un modulateur du récepteur humain SCARB-1, à un patient nécessitant un tel traitement.
L'invention vise enfin l'utilisation cosmétique d'un modulateur du récepteur SCARB-1, pour le traitement esthétique des peaux grasses.
De manière préférentielle, le modulateur est un antagoniste du récepteur. Le terme antagoniste ou inhibiteur se réfère à un composé ou une substance chimique qui élimine ou réduit substantiellement l'activité du récepteur SCARB-1. Le terme substantiellement signifie une réduction d'au moins 25%, de préférence d'au moins 35%, de préférence encore d'au moins 50%, et de manière plus préférée d'au moins 70%
ou 90%. Plus particulièrement il peut s'agir d'un composé qui interagit avec, et bloque, la liaison du récepteur avec son ligand.
Un inhibiteur préféré interagit avec le récepteur en solution à des concentrations en inhibiteur de moins de 1 M, de préférence moins de 0,1 M, de préférence encore moins de 0,01 M.
Le composé modulateur peut également être un polypeptide, un polynucleotide antisens d'ADN OU d'ARN, un si-ARN, ou un PNA ("Peptide nucleic acid", chaîne polypeptidique substituée par des bases puriques et pyrimidiques, dont la structure spatiale mime celle de l'ADN et permet l'hybridation à celui-ci).
Le composé modulateur peut être un anticorps inhibiteur anti- récepteur SCARB-1, de préférence un anticorps monoclonal. De manière avantageuse, un tel anticorps inhibiteur est administré en une quantité suffisante pour obtenir une concentration plasmatique d'environ 0.01 g par ml à environ 100 g/ml, de préférence d'environ 1 g par ml à environ 5 g/m l .
Il peut par exemple s'agir d'un anticorps qui se lie au domaine extracellulaire collagénique du récepteur, qui joue un rôle dans la liaison au ligand (Acton, 1993, J.
Biol. Chem. 268 (5): 3530-7). Des exemples d'anticorps neutralisants sont également décrits dans la demande W004/80385. D'autres anticorps neutralisants sont connus dans l'art antérieur (voir par exemple Frolov, 2000, J. Biol. Chem. 275 (17): 12769-12780).
10 PCT/FR2007/051686 L'invention comprend l'utilisation de tels composés antagonistes du récepteur pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné, ou tout désordre cutané
associé à une hyperséborrhée.
D'autres composés modulateurs identifiés par la méthode de criblage décrite plus haut sont également utiles.
Les composés modulateurs sont formulés au sein de composition pharmaceutique, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Ces compositions peuvent être administrées par exemple par voie orale, parentérale, ou topique.
De préférence, la composition pharmaceutique est appliquée par voie topique. Par voie orale, la composition pharmaceutique peut se présenter sous forme de comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granules, d'émulsions, de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques permettant une libération contrôlée. Par voie parentérale, la composition pharmaceutique peut se présenter sous forme de solutions ou suspensions pour perfusion ou pour injection.
Par voie topique, la composition pharmaceutique est plus particulièrement destinée au traitement de la peau et des muqueuses et peut se présenter sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de solutions, de gels, de sprays, de lotions ou de suspensions. Elle peut également se présenter sous forme de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques ou d'hydrogels permettant une libération contrôlée.
Cette composition pour application topique peut se présenter sous forme anhydre, sous forme aqueuse ou sous la forme d'une émulsion. Dans une variante préférée, la composition pharmaceutique se présente sous la forme d'un gel, d'une crème ou d'une lotion.
La composition peut comprendre une teneur en modulateur de la SCARB-1 allant de 0,001 à 10 % en poids, notamment de 0,01 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition pharmaceutique peut en outre contenir des additifs inertes ou des combinaisons de ces additifs, tels que - des agents mouillants;
- des agents d'amélioration de la saveur;
- des agents conservateurs tels que les esters de l'acide parahydroxybenzoïque;
associé à une hyperséborrhée.
D'autres composés modulateurs identifiés par la méthode de criblage décrite plus haut sont également utiles.
Les composés modulateurs sont formulés au sein de composition pharmaceutique, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Ces compositions peuvent être administrées par exemple par voie orale, parentérale, ou topique.
De préférence, la composition pharmaceutique est appliquée par voie topique. Par voie orale, la composition pharmaceutique peut se présenter sous forme de comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granules, d'émulsions, de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques permettant une libération contrôlée. Par voie parentérale, la composition pharmaceutique peut se présenter sous forme de solutions ou suspensions pour perfusion ou pour injection.
Par voie topique, la composition pharmaceutique est plus particulièrement destinée au traitement de la peau et des muqueuses et peut se présenter sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de solutions, de gels, de sprays, de lotions ou de suspensions. Elle peut également se présenter sous forme de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques ou d'hydrogels permettant une libération contrôlée.
Cette composition pour application topique peut se présenter sous forme anhydre, sous forme aqueuse ou sous la forme d'une émulsion. Dans une variante préférée, la composition pharmaceutique se présente sous la forme d'un gel, d'une crème ou d'une lotion.
La composition peut comprendre une teneur en modulateur de la SCARB-1 allant de 0,001 à 10 % en poids, notamment de 0,01 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition pharmaceutique peut en outre contenir des additifs inertes ou des combinaisons de ces additifs, tels que - des agents mouillants;
- des agents d'amélioration de la saveur;
- des agents conservateurs tels que les esters de l'acide parahydroxybenzoïque;
11 PCT/FR2007/051686 - des agents stabilisants;
- des agents régulateurs d'humidité;
- des agents régulateurs de pH;
- des agents modificateurs de pression osmotique;
- des agents émulsionnants;
- des filtres UV-A et UV-B
- et des antioxydants, tels que l'alpha-tocophérol, le butylhydroxyanisole ou le butylhydroxytoluene, la Super Oxyde Dismutase, l'Ubiquinol ou certains chelatants de métaux.
Les Figures et exemples suivants illustrent l'invention sans en limiter la portée.
Légendes des Figures La Figure 1 montre la mesure de l'expression du gène SCARB-1 chez des souris mâles gonadectomisés et traitées avec le véhicule, le DHT, le DHEA ou la combinaison de DHEA-Flutamide pendant une période de 7 jours une fois par jour (traitement long terme).
A la fin de l'expérience les glandes préputiales ont été enlevées, l'ARN a été
isolé et l'expression des gènes a été analysée par la technique Affymetrix.
GDX: souris gonadectomisées et traitées avec le véhicule DHT: souris gonadectomisées et traitées avec le Dihydrotestosterone (agoniste du récepteur aux androgènes) DHEA: souris gonadectomisées et traitées avec le Dihydroepiandrosterone (précurseur des hormones stéroïdiennes; dans les glandes préputiales métabolisé en androgène actif) DHEA-Flu: souris gonadectomisées et traitées avec une combinaison de Dihydroepiandrosterone et Flutamide (antagoniste du récepteur aux androgènes;
qui bloque les effets des agonistes DHT et DHEA).
Niveau d'expression: niveau d'expression de l'ARNm La Figure 2 est un graphe d'une étude cinétique de 15 à 96 heures. Les points 1_24h et 1_24h(R1) montrent le niveau d'expression de SCARB-1 de souris contrôles (=
souris non gonadectomisées; duplicata) au point 24 heures. Les points suivants proviennent de souris gonadectomisées et indiquent les temps successifs (en heures) de l'étude cinétique.
- des agents régulateurs d'humidité;
- des agents régulateurs de pH;
- des agents modificateurs de pression osmotique;
- des agents émulsionnants;
- des filtres UV-A et UV-B
- et des antioxydants, tels que l'alpha-tocophérol, le butylhydroxyanisole ou le butylhydroxytoluene, la Super Oxyde Dismutase, l'Ubiquinol ou certains chelatants de métaux.
Les Figures et exemples suivants illustrent l'invention sans en limiter la portée.
Légendes des Figures La Figure 1 montre la mesure de l'expression du gène SCARB-1 chez des souris mâles gonadectomisés et traitées avec le véhicule, le DHT, le DHEA ou la combinaison de DHEA-Flutamide pendant une période de 7 jours une fois par jour (traitement long terme).
A la fin de l'expérience les glandes préputiales ont été enlevées, l'ARN a été
isolé et l'expression des gènes a été analysée par la technique Affymetrix.
GDX: souris gonadectomisées et traitées avec le véhicule DHT: souris gonadectomisées et traitées avec le Dihydrotestosterone (agoniste du récepteur aux androgènes) DHEA: souris gonadectomisées et traitées avec le Dihydroepiandrosterone (précurseur des hormones stéroïdiennes; dans les glandes préputiales métabolisé en androgène actif) DHEA-Flu: souris gonadectomisées et traitées avec une combinaison de Dihydroepiandrosterone et Flutamide (antagoniste du récepteur aux androgènes;
qui bloque les effets des agonistes DHT et DHEA).
Niveau d'expression: niveau d'expression de l'ARNm La Figure 2 est un graphe d'une étude cinétique de 15 à 96 heures. Les points 1_24h et 1_24h(R1) montrent le niveau d'expression de SCARB-1 de souris contrôles (=
souris non gonadectomisées; duplicata) au point 24 heures. Les points suivants proviennent de souris gonadectomisées et indiquent les temps successifs (en heures) de l'étude cinétique.
12 PCT/FR2007/051686 La ligne bleue pointillée représente l'expression dans les souris gonadectomisées suite au traitement avec le DHT au temps zéro. La ligne rouge représente l'expression dans les souris gonadectomisées sans traitement avec le DHT.
Niveau d'expression: niveau d'expression de l'ARNm Exemples : DONNEES EXPERIMENTALES
Exemple 1 : Expression de SCARB-1 dans la glande sébacée humaine et dans l'épiderme humain.
Des glandes sébacées humaines ont été séparées de l'épiderme humain par traitement à
la dispase et dissection sous une loupe binoculaire. Des échantillons d'ARN
totaux ont été
préparés à partir des glandes sébacées et à partir de l'épiderme.
L'expression des gènes a été analysée sur une station d'Affymetrix (module microfluidique; four à hybridation; scanner; ordinateur) en suivant les protocoles fournis par la société. En bref, l'ARN total isolé des tissus est transcrit en ADNc. A
partir de l'ADNc double brin on synthétise un ARNc marqué à la biotine en utilisant la polymérase T7 et un NTP précurseur conjugué à la biotine. Les ARNc sont ensuite fragmentés en fragments de petites tailles. Toutes les étapes de biologie moléculaire sont contrôlées en utilisant le système Lab on a chip d'Agilent pour confirmer les bonnes efficacités des réactions enzymatiques. La puce Affymetrix est hybridée avec l'ARNc biotinylé, rincée et ensuite marquée par fluorescence en utilisant un fluorophore conjugué à la Streptavidine.
Après des lavages la puce est scannée et les résultats sont calculés en utilisant le logiciel MAS5 fourni par Affymetrix. On obtient une valeur d'expression pour chaque gène ainsi que l'indication de la significativité de la valeur obtenue. Le calcul de la significativité de l'expression est basé sur l'analyse des signaux qui sont obtenus suite à
l'hybridation de l'ARNc d'un gène donné avec un oligonucléotide s'hybridant parfaitement ( perfect match ) versus un oligonucléotide qui contient une mutation ( single mismatch ) dans la région centrale de l'oligonucléotide (voir tableau 1) Tableau 1: Mesure de l'expression de SCARB-1 dans l'épiderme et dans la glande sébacée humaine par utilisation de la technologie Affymetrix.
Niveau d'expression: niveau d'expression de l'ARNm Exemples : DONNEES EXPERIMENTALES
Exemple 1 : Expression de SCARB-1 dans la glande sébacée humaine et dans l'épiderme humain.
Des glandes sébacées humaines ont été séparées de l'épiderme humain par traitement à
la dispase et dissection sous une loupe binoculaire. Des échantillons d'ARN
totaux ont été
préparés à partir des glandes sébacées et à partir de l'épiderme.
L'expression des gènes a été analysée sur une station d'Affymetrix (module microfluidique; four à hybridation; scanner; ordinateur) en suivant les protocoles fournis par la société. En bref, l'ARN total isolé des tissus est transcrit en ADNc. A
partir de l'ADNc double brin on synthétise un ARNc marqué à la biotine en utilisant la polymérase T7 et un NTP précurseur conjugué à la biotine. Les ARNc sont ensuite fragmentés en fragments de petites tailles. Toutes les étapes de biologie moléculaire sont contrôlées en utilisant le système Lab on a chip d'Agilent pour confirmer les bonnes efficacités des réactions enzymatiques. La puce Affymetrix est hybridée avec l'ARNc biotinylé, rincée et ensuite marquée par fluorescence en utilisant un fluorophore conjugué à la Streptavidine.
Après des lavages la puce est scannée et les résultats sont calculés en utilisant le logiciel MAS5 fourni par Affymetrix. On obtient une valeur d'expression pour chaque gène ainsi que l'indication de la significativité de la valeur obtenue. Le calcul de la significativité de l'expression est basé sur l'analyse des signaux qui sont obtenus suite à
l'hybridation de l'ARNc d'un gène donné avec un oligonucléotide s'hybridant parfaitement ( perfect match ) versus un oligonucléotide qui contient une mutation ( single mismatch ) dans la région centrale de l'oligonucléotide (voir tableau 1) Tableau 1: Mesure de l'expression de SCARB-1 dans l'épiderme et dans la glande sébacée humaine par utilisation de la technologie Affymetrix.
13 PCT/FR2007/051686 Identifiant Nom du Expression Expression Significativité Significativité
Affymetrix gène dans la dans de de glande l'épiderme l'expression* l'expression*
sébacée humain dans la dans humaine glande l'épiderme sébacée humain humaine 201819_at Récepteur 190 77 1 1 scavenger membre 1 de la classe B
(SCARB1) *Indicateur de la significativité du gène analysé dans l'échantillon indiqué :
présence (=1) ou absence (=0).
Résultats :
Le récepteur SCARB-1 est bien exprimé dans les deux tissus (glande sébacée, épiderme). L'analyse différentielle entre l'expression dans la glande sébacée humaine et l'épiderme humain montre que SCARB-1 est exprimé plus fortement dans la glande sébacée humaine.
Exemple 2 : expression de SCARB-1 dans la glande préputiale de souris A. Les glandes préputiales de souris montrent une différenciation du type sébocytaire et sont utilisées comme modèle expérimental de glande sébacée. Elles ont une taille suffisante pour permettre l'isolement d'ARN sans avoir recours à des technologies de microdissection.
L'analyse de l'expression de SCARB-1 dans les glandes préputiales de souris a été
réalisée dans des conditions de déficience en hormones stéroïdiennes (notamment en hormones androgéniques) suite à une gonadectomie. Les animaux gonadectomisés ont ensuite été traités avec des quantités physiologiques de Dihydrotestosterone (DHT) ou de Dihydroepiandrosterone (DHEA) pour restituer un niveau physiologique des hormones androgéniques, ou bien comme expérience de contrôle avec une combinaison de DHEA-Flutamide dans laquelle le Flutamide, un antagoniste du récepteur aux androgènes bloque l'effet de la DHEA. La comparaison de l'expression génique dans ces conditions
Affymetrix gène dans la dans de de glande l'épiderme l'expression* l'expression*
sébacée humain dans la dans humaine glande l'épiderme sébacée humain humaine 201819_at Récepteur 190 77 1 1 scavenger membre 1 de la classe B
(SCARB1) *Indicateur de la significativité du gène analysé dans l'échantillon indiqué :
présence (=1) ou absence (=0).
Résultats :
Le récepteur SCARB-1 est bien exprimé dans les deux tissus (glande sébacée, épiderme). L'analyse différentielle entre l'expression dans la glande sébacée humaine et l'épiderme humain montre que SCARB-1 est exprimé plus fortement dans la glande sébacée humaine.
Exemple 2 : expression de SCARB-1 dans la glande préputiale de souris A. Les glandes préputiales de souris montrent une différenciation du type sébocytaire et sont utilisées comme modèle expérimental de glande sébacée. Elles ont une taille suffisante pour permettre l'isolement d'ARN sans avoir recours à des technologies de microdissection.
L'analyse de l'expression de SCARB-1 dans les glandes préputiales de souris a été
réalisée dans des conditions de déficience en hormones stéroïdiennes (notamment en hormones androgéniques) suite à une gonadectomie. Les animaux gonadectomisés ont ensuite été traités avec des quantités physiologiques de Dihydrotestosterone (DHT) ou de Dihydroepiandrosterone (DHEA) pour restituer un niveau physiologique des hormones androgéniques, ou bien comme expérience de contrôle avec une combinaison de DHEA-Flutamide dans laquelle le Flutamide, un antagoniste du récepteur aux androgènes bloque l'effet de la DHEA. La comparaison de l'expression génique dans ces conditions
14 PCT/FR2007/051686 expérimentales permet d'identifier de façon non ambiguë la modulation ou non de l'expression génique d'un gène en question par les hormones androgéniques (Figure 1).
L'expression génique a été analysée en utilisant la technologie Affymetrix décrit ci-dessus.
Résultat:
L'ARNm de SCARB-1 est induit par un traitement chronique pendant 7 jours aux androgènes dans la glande préputiale.
B. Des souris mâles gonadectomisées et traitées avec le véhicule, ou le DHT.
Une étude cinétique de l'expression du gène, de 15 minutes à 96 heures, a été réalisée.
Pour cela, les glandes préputiales ont été prélevées pendant une période allant jusqu'à 4 jours (traitement androgénique unique - observation d'une cinétique de court terme), l'ARN a été isolé, et l'expression des gènes a été analysée par la technique Affymetrix (Figure 2).
Résultats:
La gonadectomie (qui provoque une déficience d'hormones stéroïdiennes) induit une diminution de la quantité d'ARNm de SCARB-1 dans la glande préputiale de la souris.
L'ARNm de SCARB-1 dans la glande préputiale de la souris n'est pas induit par un traitement court terme avec le DHT (effet non visible à 18, 24, 48 et 96 heures).
L'expression génique a été analysée en utilisant la technologie Affymetrix décrit ci-dessus.
Résultat:
L'ARNm de SCARB-1 est induit par un traitement chronique pendant 7 jours aux androgènes dans la glande préputiale.
B. Des souris mâles gonadectomisées et traitées avec le véhicule, ou le DHT.
Une étude cinétique de l'expression du gène, de 15 minutes à 96 heures, a été réalisée.
Pour cela, les glandes préputiales ont été prélevées pendant une période allant jusqu'à 4 jours (traitement androgénique unique - observation d'une cinétique de court terme), l'ARN a été isolé, et l'expression des gènes a été analysée par la technique Affymetrix (Figure 2).
Résultats:
La gonadectomie (qui provoque une déficience d'hormones stéroïdiennes) induit une diminution de la quantité d'ARNm de SCARB-1 dans la glande préputiale de la souris.
L'ARNm de SCARB-1 dans la glande préputiale de la souris n'est pas induit par un traitement court terme avec le DHT (effet non visible à 18, 24, 48 et 96 heures).
Claims (10)
1. Méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée, comprenant la détermination de la capacité d'un composé à moduler l'expression ou l'activité du récepteur SCARB-1 ou l'expression de son gène ou l'activité
d'au moins un de ses promoteurs.
d'au moins un de ses promoteurs.
2. Méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné et/ou des désordres cutanés associés à une hyperséborrhée selon la revendication 1, comprenant les étapes suivantes :
a. Préparation d'au moins deux échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
b. Mise en contact d'un des échantillons ou mélanges réactionnels avec un ou plusieurs des composés à tester ;
c. Mesure de l'expression ou de l'activité du récepteur SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
d. Sélection des composés pour lesquels une modulation de l'expression ou de l'activité du récepteur SCARB-1, ou une modulation de l'expression de son gène ou une modulation de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, est mesurée dans l'échantillon ou le mélange traité en b) par rapport à
l'échantillon ou au mélange non traité.
a. Préparation d'au moins deux échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
b. Mise en contact d'un des échantillons ou mélanges réactionnels avec un ou plusieurs des composés à tester ;
c. Mesure de l'expression ou de l'activité du récepteur SCARB-1, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ;
d. Sélection des composés pour lesquels une modulation de l'expression ou de l'activité du récepteur SCARB-1, ou une modulation de l'expression de son gène ou une modulation de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, est mesurée dans l'échantillon ou le mélange traité en b) par rapport à
l'échantillon ou au mélange non traité.
3. Méthode selon la revendication 2, caractérisée en ce que les composés sélectionnés à l'étape d) inhibent l'expression ou l'activité du récepteur SCARB-1, ou l'expression de son gène ou l'activité d'au moins un de ses promoteurs.
4. Méthode selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que les échantillons biologiques sont des cellules transfectées avec un gène rapporteur lié de manière opérante à tout ou partie du promoteur du gène codant le récepteur SCARB-1, et en ce que l'étape c) consiste à mesurer l'expression dudit gène rapporteur.
5. Méthode selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que les échantillons biologiques sont des cellules exprimant le gène codant pour SCARB-1, et en ce que l'étape c) consiste à mesurer l'expression dudit gène.
6. Méthode selon la revendication 4 ou 5, dans laquelle les cellules sont des sébocytes.
7. Méthode selon la revendication 4 ou 5, dans laquelle les cellules sont des cellules transformées par un acide nucléique hétérologue codant pour le récepteur SCARB-1.
8. Méthode selon l'une des revendications 2 à 7, dans laquelle l'expression du gène est déterminée en mesurant le taux de transcription dudit gène.
9. Méthode selon l'une des revendications 2 à 7, dans laquelle l'expression du gène est déterminée en mesurant le taux de traduction dudit gène.
10. Méthode selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que les mélanges réactionnels comprennent chacun un récepteur SCARB-1, et en ce que l'étape c) consiste à mesurer l'activité du récepteur.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0653034A FR2904004B1 (fr) | 2006-07-19 | 2006-07-19 | Modulateurs de scarb-1 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee |
| FR0653034 | 2006-07-19 | ||
| PCT/FR2007/051686 WO2008009859A2 (fr) | 2006-07-19 | 2007-07-18 | Modulateurs de scarb-1 dans le traitement de l'acné ou de l'hyperséborrhée |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CA2656844A1 true CA2656844A1 (fr) | 2008-01-24 |
Family
ID=37668112
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CA002656844A Abandoned CA2656844A1 (fr) | 2006-07-19 | 2007-07-18 | Modulateurs de scarb-1 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20090246776A1 (fr) |
| EP (1) | EP2044435A2 (fr) |
| CA (1) | CA2656844A1 (fr) |
| FR (1) | FR2904004B1 (fr) |
| WO (1) | WO2008009859A2 (fr) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2938336A1 (fr) * | 2008-11-13 | 2010-05-14 | Galderma Res & Dev | Modulateurs de gos2 dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee |
| FR2938337A1 (fr) * | 2008-11-13 | 2010-05-14 | Galderma Res & Dev | Modulateurs de mcam dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee |
| FR2938333A1 (fr) * | 2008-11-13 | 2010-05-14 | Galderma Res & Dev | Modulateurs de cidea dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee |
| FR2938342A1 (fr) * | 2008-11-13 | 2010-05-14 | Galderma Res & Dev | Ciblage de modulateurs de ces1 et/ou ces3 dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5654013A (en) * | 1995-03-13 | 1997-08-05 | Taylor; Lesli A. | Method for treating rosacea |
| US5925333A (en) * | 1995-11-15 | 1999-07-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods for modulation of lipid uptake |
| US5965790A (en) * | 1997-03-06 | 1999-10-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | SR-BI regulatory sequences and therapeutic methods of use |
| US5998141A (en) * | 1997-07-10 | 1999-12-07 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Intronic and polymorphic SR-BI nucleic acids and uses therefor |
| JP2005512511A (ja) * | 2001-05-23 | 2005-05-12 | サイトクロマ インコーポレーティッド | レチノイン酸代謝性シトクロムｐ４５０ |
| WO2005100998A2 (fr) * | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Europroteome Ag | Marqueurs membranaires destines a etre utilises pour le diagnostic et le traitement du cancer |
-
2006
- 2006-07-19 FR FR0653034A patent/FR2904004B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-07-18 CA CA002656844A patent/CA2656844A1/fr not_active Abandoned
- 2007-07-18 EP EP07823605A patent/EP2044435A2/fr not_active Withdrawn
- 2007-07-18 WO PCT/FR2007/051686 patent/WO2008009859A2/fr active Application Filing
-
2009
- 2009-01-21 US US12/320,166 patent/US20090246776A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2008009859A3 (fr) | 2008-03-13 |
| WO2008009859A2 (fr) | 2008-01-24 |
| FR2904004A1 (fr) | 2008-01-25 |
| US20090246776A1 (en) | 2009-10-01 |
| EP2044435A2 (fr) | 2009-04-08 |
| FR2904004B1 (fr) | 2008-09-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FR2938341A1 (fr) | Modulateurs de la monoglyceride lipase dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2737993A1 (fr) | Modulateurs de fzd2 dans le traitement de l'alopecie | |
| CA2656844A1 (fr) | Modulateurs de scarb-1 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2656841A1 (fr) | Modulateurs de hsd17b7 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938338A1 (fr) | Modulateurs de l'acetyl-coenzyme a acyltransferase 1 ou 2 dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2656839A1 (fr) | Modulateurs de sc4mol dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2656838A1 (fr) | Modulateurs du transporteur abcd3 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2656842A1 (fr) | Modulateurs de la udp-glucose ceramide glucosyltransferase dans le traitement de l'acne ou de l'hyperkeratinisation | |
| FR2938333A1 (fr) | Modulateurs de cidea dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938342A1 (fr) | Ciblage de modulateurs de ces1 et/ou ces3 dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2656891A1 (fr) | Modulateurs de elovl5 dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938334A1 (fr) | Modulateurs de l'adfp dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| CA2656908A1 (fr) | Modulateurs de la lanosterol synthetase dans le traitement de l'acne ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938337A1 (fr) | Modulateurs de mcam dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938340A1 (fr) | Modulateurs de la carnitine octanoyltransferase dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938335A1 (fr) | Modulateurs de l'isovaleryl-coenzyme a dehydrogenase dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938336A1 (fr) | Modulateurs de gos2 dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938339A1 (fr) | Modulateurs de la pctp dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| FR2938343A1 (fr) | Ciblage de modulateurs de cyp2b15 et/ou gpd1 pour le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee | |
| WO2009071841A2 (fr) | Modulateurs de egr1 dans le traitement de l'alopécie | |
| WO2011154640A2 (fr) | Modulateurs de trmp1, mmp2, mia ou ptgs1 dans le traitement du melasma | |
| FR2936256A1 (fr) | Modulateurs de lgr5 dans le traitement de l'alopecie |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FZDE | Discontinued |
Effective date: 20130718 |