CA2649993A1 - Composes c-glycopeptides gem-difluores, leur preparation et leur utilisation notamment pour la preservation de materiaux biologiques. - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I où n est un nombre entier égal à 3 ou 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert-butyldiphénylsilyle, R´ représente OR, NR"R'", N3, ou un phtalimide, R" et R'" représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R1 peut consister en un acide aminé dans le cas où R2 représente uniquement OR, R2 comprend un acide aminé dans le cas où R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand R1 représente un acide aminé, R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé. Elle s'applique à la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation de matériaux biologiques tels que des cellules, tissus et organes à différentes températures.
Description
COMPOSES C-GLYCOPEPTIDES GEM-DIFLUORES, LEUR
PREPARATION ET LEUR UTILISATION NOTAMMENT POUR LA
PRESERVATION DE MATERIAUX BIOLOGIQUES.
L'invention concerne un procédé pour la synthèse de composés C-glycopeptides gem-difluorés. Elle s'applique plus particulièrement, mais non exclusivement, à la préparation de composés ou compositions utilisables notamment pour la préservation de matériaux biologiques tels que des cellules, tissus et organes à différentes températures, mais également dans le traitement de l'inflammation.
Une famille de glycoprotéines antigels présentent notamment chez certains poissons et leur permettant de survivre dans un environnement ou les températures sont voisines ou inférieures à 0 C, a montré une activité
protectrice de matériaux biologiques dans de nombreuses études à basses voire très basses températures (environ +4 C à-196 C).
Depuis de nombreuses années, les scientifiques étudient l'influence de ces composés antigels extraits du milieu naturel (poissons, amphibiens, plantes, insectes...) et s'orientent vers la synthèse de composés analogues suffisamment stables et présentant une activité au moins égale voire supérieure aux molécules naturelles pour des applications commerciales.
En effet ces composés naturels présentent de nombreuses limitations :
- une extraction du milieu naturel ou des synthèses difficiles, - des analyses complexes avec des puretés faibles, - des produits instables face aux hydrolyses chimiques et enzymatiques.
PREPARATION ET LEUR UTILISATION NOTAMMENT POUR LA
PRESERVATION DE MATERIAUX BIOLOGIQUES.
L'invention concerne un procédé pour la synthèse de composés C-glycopeptides gem-difluorés. Elle s'applique plus particulièrement, mais non exclusivement, à la préparation de composés ou compositions utilisables notamment pour la préservation de matériaux biologiques tels que des cellules, tissus et organes à différentes températures, mais également dans le traitement de l'inflammation.
Une famille de glycoprotéines antigels présentent notamment chez certains poissons et leur permettant de survivre dans un environnement ou les températures sont voisines ou inférieures à 0 C, a montré une activité
protectrice de matériaux biologiques dans de nombreuses études à basses voire très basses températures (environ +4 C à-196 C).
Depuis de nombreuses années, les scientifiques étudient l'influence de ces composés antigels extraits du milieu naturel (poissons, amphibiens, plantes, insectes...) et s'orientent vers la synthèse de composés analogues suffisamment stables et présentant une activité au moins égale voire supérieure aux molécules naturelles pour des applications commerciales.
En effet ces composés naturels présentent de nombreuses limitations :
- une extraction du milieu naturel ou des synthèses difficiles, - des analyses complexes avec des puretés faibles, - des produits instables face aux hydrolyses chimiques et enzymatiques.
2 Les glycoprotéines, en raison de la présence d'une liaison osidique (liaison impliquant l'oxygène dit en position anomérique), sont fragiles vis-à-vis de plusieurs systèmes enzymatiques dont les enzymes glycosidases et sont également sensibles aux hydrolyses acido-basiques, ce qui rend leur synthèse plus difficile.
Il est donc intéressant, pour permettre aux composés de conserver leurs propriétés biologiques, de remplacer l'oxygène de la liaison osidique afin que cette liaison ne soit plus dégradée par un processus enzymatique.
Des analogues où l'oxygène est remplacé par un groupement CH2 ont été
synthétisés, mais, en dépit d'un accroissement de la stabilité et d'un encombrement stérique semblable à celui de l'oxygène, le groupement CH2 ne s'est pas toujours révélé être un bon mime de l'oxygène osidique. En conséquence, on ne retrouve pas forcément les propriétés biologiques du composé initial.
D'autres classes de composés où l'oxygène est remplacé par un azote ou un soufre et plus récemment par un groupe difluorométhylène sont étudiées afin de conférer aux composés glycoconjugués une stabilité accrue en milieu biologique.
En effet, le groupe CF2 est particulièrement résistant aux processus de dégradations biochimiques et il permet donc la synthèse de structures non hydrolysables.
Cette transposition O/CF2 semble particulièrement adaptée pour mimer l'oxygène sur le plan électronique ; les deux atomes de fluor jouant le rôle des deux doublets libres de l'oxygène.
Le Demandeur a développé des gem-difluoroglycopeptides qui ont démontré
une très forte activité de préservation de différentes lignées cellulaires à
des températures variant de -196 C à +37 C.
Il est donc intéressant, pour permettre aux composés de conserver leurs propriétés biologiques, de remplacer l'oxygène de la liaison osidique afin que cette liaison ne soit plus dégradée par un processus enzymatique.
Des analogues où l'oxygène est remplacé par un groupement CH2 ont été
synthétisés, mais, en dépit d'un accroissement de la stabilité et d'un encombrement stérique semblable à celui de l'oxygène, le groupement CH2 ne s'est pas toujours révélé être un bon mime de l'oxygène osidique. En conséquence, on ne retrouve pas forcément les propriétés biologiques du composé initial.
D'autres classes de composés où l'oxygène est remplacé par un azote ou un soufre et plus récemment par un groupe difluorométhylène sont étudiées afin de conférer aux composés glycoconjugués une stabilité accrue en milieu biologique.
En effet, le groupe CF2 est particulièrement résistant aux processus de dégradations biochimiques et il permet donc la synthèse de structures non hydrolysables.
Cette transposition O/CF2 semble particulièrement adaptée pour mimer l'oxygène sur le plan électronique ; les deux atomes de fluor jouant le rôle des deux doublets libres de l'oxygène.
Le Demandeur a développé des gem-difluoroglycopeptides qui ont démontré
une très forte activité de préservation de différentes lignées cellulaires à
des températures variant de -196 C à +37 C.
3 PCT/FR2007/000716 En effet, les modifications structurales apportées par rapport aux composés natifs et l'observation d'un véritable effet anti-apoptose, c'est-à-dire pas de mort cellulaire, à des températures physiologiques ont conduit le Demandeur à étendre le spectre d'activité des composés.
Ces composés ont été baptisés AAGP pour Anti Aging GlycoProteins.
Dans un souci de développer de nouveaux analogues toujours plus actifs c'est-à-dire apportant une meilleure préservation des matériaux biologiques et avec en première instance la volonté d'améliorer la préservation de fibroblastes pour des applications en cosmétologie, nous nous sommes orientés vers la synthèse de composés de plus faible poids moléculaire pouvant ainsi avoir une meilleure biodisponibilité tout en simplifiant les étapes de synthèse.
De tels composés seraient utilisables en vue de nombreuses applications telles que la préservation des cellules, plaquettes sanguines, tissus et organes.
Il existe en effet une forte demande afin d'améliorer le stockage et la conservation de matériaux vivants avec beaucoup moins de dommages que par les méthodes couramment utilisées.
On parle plus généralement de préservation en incluant la préservation à des températures différentes y compris la cryopréservation jusqu'à des températures de -196 C.
Ainsi, des composés utilisés comme adjuvants lors de la conservation et présentant une bonne stabilité pourraient être utiles pour préserver des matériaux biologiques notamment dans le domaine médical :.
- pour maintenir des organes humains entiers tels que des reins, des corurs et des foies à transplanter sans contrainte de temps, - pour préserver des cellules ou des tissus délicats avec un minimum de dommages et suffisamment longtemps pour permettre leur distribution éventuellement internationale,
Ces composés ont été baptisés AAGP pour Anti Aging GlycoProteins.
Dans un souci de développer de nouveaux analogues toujours plus actifs c'est-à-dire apportant une meilleure préservation des matériaux biologiques et avec en première instance la volonté d'améliorer la préservation de fibroblastes pour des applications en cosmétologie, nous nous sommes orientés vers la synthèse de composés de plus faible poids moléculaire pouvant ainsi avoir une meilleure biodisponibilité tout en simplifiant les étapes de synthèse.
De tels composés seraient utilisables en vue de nombreuses applications telles que la préservation des cellules, plaquettes sanguines, tissus et organes.
Il existe en effet une forte demande afin d'améliorer le stockage et la conservation de matériaux vivants avec beaucoup moins de dommages que par les méthodes couramment utilisées.
On parle plus généralement de préservation en incluant la préservation à des températures différentes y compris la cryopréservation jusqu'à des températures de -196 C.
Ainsi, des composés utilisés comme adjuvants lors de la conservation et présentant une bonne stabilité pourraient être utiles pour préserver des matériaux biologiques notamment dans le domaine médical :.
- pour maintenir des organes humains entiers tels que des reins, des corurs et des foies à transplanter sans contrainte de temps, - pour préserver des cellules ou des tissus délicats avec un minimum de dommages et suffisamment longtemps pour permettre leur distribution éventuellement internationale,
4 - pour conserver des plaquettes sanguines et différentes cellules, - pour protéger certains organismes, bactéries, virus ou des vaccins, mais également dans le domaine dermatologique et/ou cosmétique pour protéger la peau contre les dégradations causées par le stress oxydant ou les UV ou par le vieillissement par exemple.
L'invention a pour objet de résoudre ces inconvénients.
A cet effet, elle propose un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule RO O C N
____( NHR, RO R' O
OR
où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert-butyld iphényisilyle, R représente OR, NR"R"', N3, ou un phtalimide, R"et R"', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R, représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, Ri peut également représenter un acide aminé, mais dans ce cas R2 représente uniquement OR, R2 représente un acide aminé, mais dans ce cas R, représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand RI représente un acide aminé, R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé,
L'invention a pour objet de résoudre ces inconvénients.
A cet effet, elle propose un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule RO O C N
____( NHR, RO R' O
OR
où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert-butyld iphényisilyle, R représente OR, NR"R"', N3, ou un phtalimide, R"et R"', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R, représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, Ri peut également représenter un acide aminé, mais dans ce cas R2 représente uniquement OR, R2 représente un acide aminé, mais dans ce cas R, représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand RI représente un acide aminé, R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé,
5 ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
Les groupes alkyles linéaires ou ramifiés pourront être des groupes possédant de 1 à 10 atomes de carbones.
Ledit acide aminé pourra être une alanine ou une glycine ou une proline.
Par physiologiquement acceptable, on entend compatible avec la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
L'invention a également pour objet un médicament comprenant en tant que principe actif au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I
tel que défini précédemment.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment pour la préparation de médicaments destinés à traiter l'inflammation.
L'invention concerne également l'utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation ou la cryopréservation de matériaux biologiques tels que des fibroblastes.
Un autre objet de l'invention se rapporte à une composition comprenant au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment.
Les groupes alkyles linéaires ou ramifiés pourront être des groupes possédant de 1 à 10 atomes de carbones.
Ledit acide aminé pourra être une alanine ou une glycine ou une proline.
Par physiologiquement acceptable, on entend compatible avec la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
L'invention a également pour objet un médicament comprenant en tant que principe actif au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I
tel que défini précédemment.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment pour la préparation de médicaments destinés à traiter l'inflammation.
L'invention concerne également l'utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation ou la cryopréservation de matériaux biologiques tels que des fibroblastes.
Un autre objet de l'invention se rapporte à une composition comprenant au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment.
6 Bien entendu, la composition selon l'invention pourra comprendre un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I seul ou en mélange et en toutes proportions.
La composition selon l'invention pourra être destinée à un usage cosmétique ou pharmaceutique notamment dermatologique.
La composition pourra être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention pourra se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées.
La composition pourra comprendre un milieu et/ou un support physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration par voir orale, sublinguale, inhalée, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, les principes actifs pourront être administrés sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiquement acceptables classiques.
Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration topique, les implants, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.
Outre les excipients inertes, non toxiques et pharmaceutiquement acceptables, tels que l'eau distillée, le glucose, le lactose d'amidon, le talc, les huiles végétales, l'éthylène glycol..., les compositions ainsi obtenues pourront également contenir des agents de préservation.
D'autres principes actifs pourront être ajoutés dans ces compositions.
La composition selon l'invention pourra être destinée à un usage cosmétique ou pharmaceutique notamment dermatologique.
La composition pourra être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention pourra se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées.
La composition pourra comprendre un milieu et/ou un support physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration par voir orale, sublinguale, inhalée, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, les principes actifs pourront être administrés sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiquement acceptables classiques.
Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration topique, les implants, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.
Outre les excipients inertes, non toxiques et pharmaceutiquement acceptables, tels que l'eau distillée, le glucose, le lactose d'amidon, le talc, les huiles végétales, l'éthylène glycol..., les compositions ainsi obtenues pourront également contenir des agents de préservation.
D'autres principes actifs pourront être ajoutés dans ces compositions.
7 La quantité de composé selon l'invention et d'autres éventuels principes actifs dans de telles compositions pourra varier selon les applications, l'âge et le poids du malade ou de l'utilisateur le cas échéant.
Pour une application topique sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux, la composition selon l'invention pourra comprendre un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable.
De plus, la composition pourra se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules pouvant être des micro/nanocapsules ou micro/nanoparticules, des dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.
Cette composition pourra être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse.
Elle pourra également se présenter sous forme solide et, par exemple, sous forme de stick.
Elle pourra être utilisée comme produit de soin, comme produit de nettoyage, comme produit de maquillage.
La composition selon l'invention pourra aussi être une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant.
La composition pourra également contenir des adjuvants habituels dans les domaines cosmétiques ou dermatologiques.
Les quantités des différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.
Ces adjuvants, selon leur nature, pourront être introduits dans une phase aqueuse, une phase huileuse, dans des vésicules et/ou dans des micro/nanoparticules.
Pour une application topique sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux, la composition selon l'invention pourra comprendre un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable.
De plus, la composition pourra se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules pouvant être des micro/nanocapsules ou micro/nanoparticules, des dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.
Cette composition pourra être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse.
Elle pourra également se présenter sous forme solide et, par exemple, sous forme de stick.
Elle pourra être utilisée comme produit de soin, comme produit de nettoyage, comme produit de maquillage.
La composition selon l'invention pourra aussi être une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant.
La composition pourra également contenir des adjuvants habituels dans les domaines cosmétiques ou dermatologiques.
Les quantités des différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.
Ces adjuvants, selon leur nature, pourront être introduits dans une phase aqueuse, une phase huileuse, dans des vésicules et/ou dans des micro/nanoparticules.
8 Il est entendu que ces adjuvants ainsi que leur concentration devront être tels qu'ils ne modifient pas la propriété recherchée pour la composition selon l'invention.
L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique pour protéger la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu contre le stress oxydant et/ou les UV consistant à appliquer sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu, une composition comportant au moins un milieu physiologiquement acceptable et au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment ou un de ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de soivat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
Des modes d'exécution de l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples non limitatifs, avec référence aux dessins annexés dans lesquels :
La figure 1 est une équation de réaction pour obtenir le composé 2;
La figure 2 est une équation de réaction pour obtenir le composé 3;
La figure 3 est une équation de réaction pour obtenir le composé 4;
La figure 4 est une équation de réaction pour obtenir le composé 5;
La figure 5 est une équation de réaction pour obtenir le composé 6;
La figure 6 est une équation de réaction pour obtenir le composé 9;
La figure 7 est une équation de réaction pour obtenir le composé 10 ;
La figure 8 est une équation de réaction pour obtenir le composé 11 ;
La figure 9 est une équation de réaction pour obtenir le composé 12 ;
La figure 10 est une équation de réaction pour obtenir le composé 14;
La figure 11 est une équation de réaction pour obtenir le composé 15 ;
La figure 12 est une équation de réaction pour obtenir le composé 16 ;
La figure 13 est une équation de réaction pour obtenir le composé 19 ;
La figure 14 est une équation de réaction pour obtenir le composé 20 ;
La figure 15 est une équation de réaction pour obtenir le composé 21 ;
La figure 16 est une équation de réaction pour obtenir le composé 22 ;
L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique pour protéger la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu contre le stress oxydant et/ou les UV consistant à appliquer sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu, une composition comportant au moins un milieu physiologiquement acceptable et au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I tel que défini précédemment ou un de ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de soivat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
Des modes d'exécution de l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples non limitatifs, avec référence aux dessins annexés dans lesquels :
La figure 1 est une équation de réaction pour obtenir le composé 2;
La figure 2 est une équation de réaction pour obtenir le composé 3;
La figure 3 est une équation de réaction pour obtenir le composé 4;
La figure 4 est une équation de réaction pour obtenir le composé 5;
La figure 5 est une équation de réaction pour obtenir le composé 6;
La figure 6 est une équation de réaction pour obtenir le composé 9;
La figure 7 est une équation de réaction pour obtenir le composé 10 ;
La figure 8 est une équation de réaction pour obtenir le composé 11 ;
La figure 9 est une équation de réaction pour obtenir le composé 12 ;
La figure 10 est une équation de réaction pour obtenir le composé 14;
La figure 11 est une équation de réaction pour obtenir le composé 15 ;
La figure 12 est une équation de réaction pour obtenir le composé 16 ;
La figure 13 est une équation de réaction pour obtenir le composé 19 ;
La figure 14 est une équation de réaction pour obtenir le composé 20 ;
La figure 15 est une équation de réaction pour obtenir le composé 21 ;
La figure 16 est une équation de réaction pour obtenir le composé 22 ;
9 La figure 17 est une équation de réaction pour obtenir le composé 24 ;
La figure 18 est une équation de réaction pour obtenir le composé 25;
La figure 19 est une équation de réaction pour obtenir le composé 26 ;
La figure 20 est une équation de réaction pour obtenir le composé 28 ;
La figure 21 est une équation de réaction pour obtenir le composé 29 ;
La figure 22 est une équation de réaction pour obtenir le composé 30 ;
La figure 23 est une équation de réaction pour obtenir le composé 32 ;
La figure 24 est une équation de réaction pour obtenir le composé 33 ;
La figure 25 est une équation de réaction pour obtenir le composé 34;
La figure 26 est une équation de réaction pour obtenir le composé 35 ;
La figure 27 est une équation de réaction pour obtenir le composé 36 ;
La figure 28 est une équation de réaction pour obtenir le composé 37 ;
La figure 29 est une équation de réaction pour obtenir le composé 38 ;
La figure 30 est une équation de réaction pour obtenir le composé 39 ;
La figure 31 est une équation de réaction pour obtenir le composé 41 ;
La figure 32 est une équation de réaction pour obtenir le composé 42 ;
La figure 33 est une équation de réaction pour obtenir le composé 43 ;
La figure 34 est une équation de réaction pour obtenir le composé 44 ;
La figure 35 est une représentation des effets du composé 11 sur des fibroblastes adultes de la peau traités UV ;
La figure 36 est une représentation des effets du composé 11 sur des fibroblastes adultes de la peau à-3 C ;
Les figures 37, 38 et 39 sont des représentations des effets des différents dérivés sur la survie de cellules HELA soumises à des UVC.
Les abréviations rencontrées sont définies ainsi :
éq. : équivalent g: gramme Hz : Hertz mg : milligramme MHz: mégaHertz min.: minute mL: millilitre mmol: millimole mol: micromole nmol : nanomole app : apparent Les caractéristiques des appareils utilisés pour effectuer les analyses de tous les composés décrits dans la présente demande sont indiquées ci-dessous :
Les spectres RMN 1 H, "C, '9F ont été enregistrés sur des spectromètres BRUKER DPX 300 et DPX 600. En RMN 'H et 13C, le tétraméthylsilane est utilisé comme référence interne. En RMN 19F, la 5 référence externe est le fluorotrichlorométhane CFCI3. Les déplacements chimiques sont exprimés en partie par million (ppm), les constantes de couplage J en Hertz (Hz).
Les abréviations suivantes ont été utilisées :
s pour singulet, bs pour un large singulet, d pour doublet, t pour triplet, q pour
La figure 18 est une équation de réaction pour obtenir le composé 25;
La figure 19 est une équation de réaction pour obtenir le composé 26 ;
La figure 20 est une équation de réaction pour obtenir le composé 28 ;
La figure 21 est une équation de réaction pour obtenir le composé 29 ;
La figure 22 est une équation de réaction pour obtenir le composé 30 ;
La figure 23 est une équation de réaction pour obtenir le composé 32 ;
La figure 24 est une équation de réaction pour obtenir le composé 33 ;
La figure 25 est une équation de réaction pour obtenir le composé 34;
La figure 26 est une équation de réaction pour obtenir le composé 35 ;
La figure 27 est une équation de réaction pour obtenir le composé 36 ;
La figure 28 est une équation de réaction pour obtenir le composé 37 ;
La figure 29 est une équation de réaction pour obtenir le composé 38 ;
La figure 30 est une équation de réaction pour obtenir le composé 39 ;
La figure 31 est une équation de réaction pour obtenir le composé 41 ;
La figure 32 est une équation de réaction pour obtenir le composé 42 ;
La figure 33 est une équation de réaction pour obtenir le composé 43 ;
La figure 34 est une équation de réaction pour obtenir le composé 44 ;
La figure 35 est une représentation des effets du composé 11 sur des fibroblastes adultes de la peau traités UV ;
La figure 36 est une représentation des effets du composé 11 sur des fibroblastes adultes de la peau à-3 C ;
Les figures 37, 38 et 39 sont des représentations des effets des différents dérivés sur la survie de cellules HELA soumises à des UVC.
Les abréviations rencontrées sont définies ainsi :
éq. : équivalent g: gramme Hz : Hertz mg : milligramme MHz: mégaHertz min.: minute mL: millilitre mmol: millimole mol: micromole nmol : nanomole app : apparent Les caractéristiques des appareils utilisés pour effectuer les analyses de tous les composés décrits dans la présente demande sont indiquées ci-dessous :
Les spectres RMN 1 H, "C, '9F ont été enregistrés sur des spectromètres BRUKER DPX 300 et DPX 600. En RMN 'H et 13C, le tétraméthylsilane est utilisé comme référence interne. En RMN 19F, la 5 référence externe est le fluorotrichlorométhane CFCI3. Les déplacements chimiques sont exprimés en partie par million (ppm), les constantes de couplage J en Hertz (Hz).
Les abréviations suivantes ont été utilisées :
s pour singulet, bs pour un large singulet, d pour doublet, t pour triplet, q pour
10 quadruplet, m pour multiplet ou massif, dd pour doublet de doublet...
Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectrophotomètre de type Micromass TOF-SPEC, E 20 kV, a-cyano. pour l'ionisation Maldi et JEOL
AX500, 3 kV, Canon FAB JEOL, Xe, 4 kV, courant limite 10 A, Gly-NBA
50 : 50 pour l'ionisation FAB.
Les séparations par chromatographie sur colonne sont réalisées sous pression légère en suivant les techniques de chromatographie sur silice Kieselgel 60 (230-400 Mesh, Merck).
Le suivi est assuré par chromatographie sur couches minces (CCM) avec des plaques Kieselgel 60F-254-0.25mm. On appelle rapport frontal (Rf) le rapport de la distance de migration d'un composé sur un support donné sur la distance de migration d'un éluant.
Synthèse du cornposé 2(Figure 1) 5 O 1 OMe Bn0 Bn0 4 3 ,'Ill '/OBn 2 OBn
Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectrophotomètre de type Micromass TOF-SPEC, E 20 kV, a-cyano. pour l'ionisation Maldi et JEOL
AX500, 3 kV, Canon FAB JEOL, Xe, 4 kV, courant limite 10 A, Gly-NBA
50 : 50 pour l'ionisation FAB.
Les séparations par chromatographie sur colonne sont réalisées sous pression légère en suivant les techniques de chromatographie sur silice Kieselgel 60 (230-400 Mesh, Merck).
Le suivi est assuré par chromatographie sur couches minces (CCM) avec des plaques Kieselgel 60F-254-0.25mm. On appelle rapport frontal (Rf) le rapport de la distance de migration d'un composé sur un support donné sur la distance de migration d'un éluant.
Synthèse du cornposé 2(Figure 1) 5 O 1 OMe Bn0 Bn0 4 3 ,'Ill '/OBn 2 OBn
11 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le méthyl-D-galactopyranoside 1 (5 g; 26 mmol ;1 éq.) et de l'iodure de tétrabutylammonium nBu4Nl (500 mg ; 1,3 mmol ; 0,05 éq.) dans le diméthylformaldéhyde DMF (250 mL) est introduit de l'hydrure de sodium NaH (3,7 g; 0,15 mol ; 6 éq.) par petites portions. Puis du bromure de benzyle BnBr (18 mL; 0,15 mol ; 6 éq.) est additionné et le mélange est laissé sous agitation pendant au moins 24 heures.
Le milieu est hydrolysé avec de l'eau. Puis la phase aqueuse est extraite trois fois avec de l'éther. Les phases organiques sont ensuite rassemblées, lavées plusieurs fois à l'eau, séchées sur du sulfate de magnésium, filtrées puis évaporées.
Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de neuf pour un. Après concentration des fractions recueillies, le produit 2 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 95%.
C35H3806 M= 554,67 g.moi-1 Rf : 0.38 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
Synthèse du composé 3 (Figure 2) BnO
BnO 4 3 ,,1//
'/OBn 3 OBn
Le milieu est hydrolysé avec de l'eau. Puis la phase aqueuse est extraite trois fois avec de l'éther. Les phases organiques sont ensuite rassemblées, lavées plusieurs fois à l'eau, séchées sur du sulfate de magnésium, filtrées puis évaporées.
Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de neuf pour un. Après concentration des fractions recueillies, le produit 2 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 95%.
C35H3806 M= 554,67 g.moi-1 Rf : 0.38 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
Synthèse du composé 3 (Figure 2) BnO
BnO 4 3 ,,1//
'/OBn 3 OBn
12 Dans un ballon contenant le 1-O-Méthyl-2,3,4,6-Tetra-O-Benzyl-D-galactopyranose 2(5,5g ; 9,92 mmol) dans 80 mL d'acide acétique, est additionné 11 mL d'acide sulfurique HZSO4 à une concentration molaire de 3M. Le milieu réactionnel est chauffé à 100 C pendant une heure. La solution est ensuite diluée dans 100 mL d'eau froide.
Le mélange est extrait quatre fois avec 100 mL de toluène. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec 100 mL d'eau, 100 mL d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 et enfin avec 100 mL d'eau. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de 8,5 pour 1,5. Après concentration des fractions recueillies, le produit 3 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 75%.
C34H3606 M= 540,65 g.mol-1 Rf : 0,65 (cyclohexane/acétate d'éthyle 6/4).
Synthèse du composé 4 (Figure 3) BnO
BnO 4 3 '~~~~'/OBn 4 OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte, contenant le 2,3,4,6-Tétra-O-Benzyl-D-Galactopyranose 3 (4 g; 7,4 mmol) sont introduits le diméthylsulphoxyde DMSO (25,6 mL) et l'anhydride acétique Ac20 (16,8 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 12 heures.
Le mélange est extrait quatre fois avec 100 mL de toluène. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec 100 mL d'eau, 100 mL d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 et enfin avec 100 mL d'eau. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de 8,5 pour 1,5. Après concentration des fractions recueillies, le produit 3 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 75%.
C34H3606 M= 540,65 g.mol-1 Rf : 0,65 (cyclohexane/acétate d'éthyle 6/4).
Synthèse du composé 4 (Figure 3) BnO
BnO 4 3 '~~~~'/OBn 4 OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte, contenant le 2,3,4,6-Tétra-O-Benzyl-D-Galactopyranose 3 (4 g; 7,4 mmol) sont introduits le diméthylsulphoxyde DMSO (25,6 mL) et l'anhydride acétique Ac20 (16,8 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 12 heures.
13 Puis, de l'eau est ajoutée et la phase aqueuse est extraite trois fois avec de l'éther. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 puis de l'eau. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, la lactone 4 se présente sous la forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 82%.
C34H3406 M= 538,63 g.mol-' Rf : 0,61 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 3,6 (m, 2H, H6) ; 3,8 (dd, 2,1-9,6, 1H, H3) ; 4,1 (s, 1H, H4) ; 4,2 (m, 1H, H5) ;
4,4-5,1 (m, 9H, H2; 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 20H, H ar.) RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 67,4 (C6) ; 72,4 (C5) ; 72,6 (OÇH2Ph) ; 73,5 (OÇHZPh) ; 74,5 (C4) ; 75,1 (OÇH2Ph) ; 77,1 (C2) ; 79,9 (C3) ; 127,4 -128,3 (Car.) ; 137,2 ; 137,3 ; 137,6 (Çar. quat.) ; 169,8 (CO).
ao=+79,0 (c=1; CHCI3) Synthèse du composé 5 (Figure 4) O CF2CO2Et Bn0 V'/BnOOBn 5 OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du zinc Zn (1,7 g; 26 mmol ; 7 éq.) préalablement activé et décapé dans du tétrahydrofurane THF
(30 mL) au reflux, un mélange constitué de la lactone 4 (2 g; 3,7 mmol ; 1
Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, la lactone 4 se présente sous la forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 82%.
C34H3406 M= 538,63 g.mol-' Rf : 0,61 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 3,6 (m, 2H, H6) ; 3,8 (dd, 2,1-9,6, 1H, H3) ; 4,1 (s, 1H, H4) ; 4,2 (m, 1H, H5) ;
4,4-5,1 (m, 9H, H2; 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 20H, H ar.) RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 67,4 (C6) ; 72,4 (C5) ; 72,6 (OÇH2Ph) ; 73,5 (OÇHZPh) ; 74,5 (C4) ; 75,1 (OÇH2Ph) ; 77,1 (C2) ; 79,9 (C3) ; 127,4 -128,3 (Car.) ; 137,2 ; 137,3 ; 137,6 (Çar. quat.) ; 169,8 (CO).
ao=+79,0 (c=1; CHCI3) Synthèse du composé 5 (Figure 4) O CF2CO2Et Bn0 V'/BnOOBn 5 OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du zinc Zn (1,7 g; 26 mmol ; 7 éq.) préalablement activé et décapé dans du tétrahydrofurane THF
(30 mL) au reflux, un mélange constitué de la lactone 4 (2 g; 3,7 mmol ; 1
14 éq.) et de bromodifluoroacétate d'éthyle (1,42 mL ; 11 mmol ; 3 éq.) dans le THF (30 mL) est additionné goutte à goutte. La réaction est laissée au reflux pendant 3 heures. Après retour à la température ambiante, le zinc est filtré, puis une solution d'acide chlorhydrique HCI 1 N (60 mL) puis du dichlorométhane (6 mL) sont ajoutés au milieu réactionnel.
Les phases aqueuses et organiques sont séparées et la phase aqueuse est extraite à nouveau deux fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, le produit 5 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 82%.
C38H4oF20$ M= 662,72 g.mol-' Rf : 0,35 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 19F (CDCI3; 282,5 MHz) -118,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,2 (d, JF_F=256Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 1,1 (t; 7,2; 3H; CH3); 3,4-3,5 (m; 2H; H6) ; 3,7-3,8 (dd; 2,5-9,5; 1 H; H3);
3,8 (d; 2; 1 H; H4) ; 4-4,1 (m; 3H; H5 ; CHz) ; 4,25-4,85 (m; 9H; H2 ; 4OCH2Ph) ;
7,2 (m; 20H; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 14,2 (ÇH3) ; 63,6 (CH2) ; 68,6 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,2 (OCH2Ph); 73,9 (OÇH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,9 (OÇH2Ph) ; 75,1 (C2) ;75,8 (OÇH2Ph) ; 81,2 (C3) ; 96,9 (t, 27Hz, C1) ; 113 (t, 264Hz, ÇF2) ; 128,0 -128,9 (Car.) ;
138,2 ;138,3 ; 138,6 ; 139,1 (Car. quat.) ; 163,3 (t, 31 Hz, CO2Et).
ap=+52,6 (c=1; CHCI3) Synthèse du composé 6 (Figure 5) O
Bn0 CF2CO2H
5 j3l0Bn Bn0 4 6 OBn Dans un ballon contenant l'ester 5 (0,5 g ; 1,75 mmol, 1 éq.) dans le THF
5 (5 mL) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (84 mg ; 3.5 mmol, 2 éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé
12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont 10 rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées Le composé 6 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitative.
Les phases aqueuses et organiques sont séparées et la phase aqueuse est extraite à nouveau deux fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, le produit 5 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 82%.
C38H4oF20$ M= 662,72 g.mol-' Rf : 0,35 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 19F (CDCI3; 282,5 MHz) -118,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,2 (d, JF_F=256Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 1,1 (t; 7,2; 3H; CH3); 3,4-3,5 (m; 2H; H6) ; 3,7-3,8 (dd; 2,5-9,5; 1 H; H3);
3,8 (d; 2; 1 H; H4) ; 4-4,1 (m; 3H; H5 ; CHz) ; 4,25-4,85 (m; 9H; H2 ; 4OCH2Ph) ;
7,2 (m; 20H; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 14,2 (ÇH3) ; 63,6 (CH2) ; 68,6 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,2 (OCH2Ph); 73,9 (OÇH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,9 (OÇH2Ph) ; 75,1 (C2) ;75,8 (OÇH2Ph) ; 81,2 (C3) ; 96,9 (t, 27Hz, C1) ; 113 (t, 264Hz, ÇF2) ; 128,0 -128,9 (Car.) ;
138,2 ;138,3 ; 138,6 ; 139,1 (Car. quat.) ; 163,3 (t, 31 Hz, CO2Et).
ap=+52,6 (c=1; CHCI3) Synthèse du composé 6 (Figure 5) O
Bn0 CF2CO2H
5 j3l0Bn Bn0 4 6 OBn Dans un ballon contenant l'ester 5 (0,5 g ; 1,75 mmol, 1 éq.) dans le THF
5 (5 mL) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (84 mg ; 3.5 mmol, 2 éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé
12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont 10 rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées Le composé 6 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitative.
15 C36H36 F208 M= 634,66g.mol-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,3 (d, JF_F=259Hz) ; -119,0 (d, JF_F=259Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 3,2 (dd; 4,5Hz et 9,8Hz ;1 H; H6) ; 3,5 (dd; 7,7Hz et 9,8Hz,1 H; H6) ; 3,7 (d;
2Hz; 1 H; H4) ; 3,8 (dd; 2,6Hz et 9,5Hz; 1 H; H3); 4 (dd; 4,5Hz et 7,7Hz ;1 H, H5) ; 4,3-4,9 (m; 9H; H2 ; 4OCH2Ph) ; 7,2 (m; 20H; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 69,4 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,5 (OÇHZPh) ; 74,0 (OCH2Ph); 74,1 (C4) ; 75,0 (OÇH2Ph) ; 75,1 (C2) ; 75,9 (OCH2Ph) ; 80,8 (C3) ; 95,4 (t, 27Hz, C1) ; 112,5 (t, 260Hz, ÇF2) ; 127,8 -129,0 (Çar.) ; 137,6 ; 138,0 ; 138,1 (Çar. quat.) ;
163,1 (t; 30Hz; ÇO2H).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 3,2 (dd; 4,5Hz et 9,8Hz ;1 H; H6) ; 3,5 (dd; 7,7Hz et 9,8Hz,1 H; H6) ; 3,7 (d;
2Hz; 1 H; H4) ; 3,8 (dd; 2,6Hz et 9,5Hz; 1 H; H3); 4 (dd; 4,5Hz et 7,7Hz ;1 H, H5) ; 4,3-4,9 (m; 9H; H2 ; 4OCH2Ph) ; 7,2 (m; 20H; Har).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 69,4 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,5 (OÇHZPh) ; 74,0 (OCH2Ph); 74,1 (C4) ; 75,0 (OÇH2Ph) ; 75,1 (C2) ; 75,9 (OCH2Ph) ; 80,8 (C3) ; 95,4 (t, 27Hz, C1) ; 112,5 (t, 260Hz, ÇF2) ; 127,8 -129,0 (Çar.) ; 137,6 ; 138,0 ; 138,1 (Çar. quat.) ;
163,1 (t; 30Hz; ÇO2H).
16 Synthèse du composé 9 (Figure 6) H
PhO N OCH2Ph N
= H
O O
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la 7-Lysine(Boc)-OH 8 (2 g; 5,26 mmol ; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL), le carbonyldiimadozale CDI (878 mg ; 5,42 mmol ; 1,03 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI-+H3N-AlanineOBn 7 (1,13g; 5,26 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (1,92 mL; 11,04 mmol ; 2, éq.) dans dichlorométhane (40 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures puis hydrolysée avec de l'eau et extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de sept pour trois. Après concentration des fractions recueillies, le produit 9 se présente sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement pondéral de 66%.
C32H37N307 M=544,5 g.mol"1 RMN ' H (CDCI3, 300 MHz) 1,3 (m; 16H; CH3; (CH3)3C; 2CH2) ;1,6-1,7 (m; 2H; CH2) ; 3,0 (m; 2H;
NHCH2) ; 4,1 (m; 1 H; CHLys) ; 4,5 (m; 1 H; CHAIa) ; 4,6 (m; 1 H; NH) ; 5,0 (s;
PhO N OCH2Ph N
= H
O O
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la 7-Lysine(Boc)-OH 8 (2 g; 5,26 mmol ; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL), le carbonyldiimadozale CDI (878 mg ; 5,42 mmol ; 1,03 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI-+H3N-AlanineOBn 7 (1,13g; 5,26 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (1,92 mL; 11,04 mmol ; 2, éq.) dans dichlorométhane (40 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures puis hydrolysée avec de l'eau et extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de sept pour trois. Après concentration des fractions recueillies, le produit 9 se présente sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement pondéral de 66%.
C32H37N307 M=544,5 g.mol"1 RMN ' H (CDCI3, 300 MHz) 1,3 (m; 16H; CH3; (CH3)3C; 2CH2) ;1,6-1,7 (m; 2H; CH2) ; 3,0 (m; 2H;
NHCH2) ; 4,1 (m; 1 H; CHLys) ; 4,5 (m; 1 H; CHAIa) ; 4,6 (m; 1 H; NH) ; 5,0 (s;
17 2H; OCH2Ph) ; 5,1 (m; 1 H; ZNH); 5,5 (d; 7Hz; 1H; NH) ; 6,8 (d; 6,5Hz;1 H;
NH) ; 7,3 (m; 5H; Har.).
RMN "C (CDCI3, 75,5 MHz)
NH) ; 7,3 (m; 5H; Har.).
RMN "C (CDCI3, 75,5 MHz)
18,4 (CH3) ; 22,6 (CH2) ; 28,8 ((CH3)3C) ; 29,8 (CH2) ; 32,6 (ÇH2) ; 40,1 (NÇH2) ; 48,6 (ÇHAIa) ; 54,9 (ÇHLys) ; 67,4 et 67,5 (2OÇH2Ph) ; 80,2 ((CH3)3Ç) ; 128,5 -129 (Çar.) ; 135,6 et 136,6 (Çar. quat.) ; 156,6 (ÇO(Boc) et ÇO(Z)) ; 171,8 et 172,9 (ÇONH et ÇO2Et).
Synthèse du composé 10 (Figure 7) O C OCH2Ph BnO 5 l' N
H
4 Ph O NH O
BnO 3 ~OBn OBn 10 0 Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 9(1,8 g 3,36 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (5 mL; 67,2 mmol ; 20 éq.). Le mélange est laissé à
réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à
cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
Couplage Dans uh ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (1,38 g;
2,18 mmol ; 1,05 éq.), le peptide précédemment déprotégé (1,15 g;
2,08 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,336 g; 2,5 mmol ;
1,2 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,57 mL ; 5,2 mmol; 2,5 éq.) dans le DMF (35 mL), l'EDCI (0,478 g ; 2,49 mmol ; 1,2 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M (2*100 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 10 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 83%.
C60H65F2N3012 M=1058,17 g.mol"1 Rf : 0,48 (Cyclohexane/acétate d'éthyle 5/5).
RMN '9F (CDCI3, 282,5 MHz) -116,9 (d, JF_F=259Hz) ; -121,7 (d, JF_F=259Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1,2-1,4 (m; 7H; 1CH3; 2CH2); 1,5 (m; 1H; CH2) ; 1,6 (m; 1H; CFi2); 3,0 et 3,2 (2m; 2H; NHCH2); 3,4 (m; 2H; H6); 3,8-3,9 (m; 2H; H3; H4); 4,0 (m; 2H;
CHNH (Lys); H5); 4,2-4,9 (m; 9H; 4OCH2Ph ; CH (Ala)); 4,2 (d; 9Hz; 1 H; H2);
5,0 (s; 2H; OCH2Ph) ; 5,1 (m; 1 H; ZNH); 5,4 (d; 7,8 ; 1 H; NH); 6,5 (d; 7,2 1 H; NH) ; 6,7 (s; 1 H; NH); 7,2 (m; 30H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,3 (ÇH3) ; 22,4 (ÇH2) ; 28,7 (ÇH2) ; 32,5 (CH2) ; 39,3 (CH2N) ; 48,6 (CH
Ala) ; 54,9 (NCH Lys) ; 67,4 et 67,6 (2OÇH2Ph); 68,7 (C6) ; 71,2 (C5) ; 73,5 et 73,8 (2OCH2Ph) ; 74,4 (C4) ; 75,0 (OCH2Ph ; C2) ; 75,8 (OÇH2Ph) ; 80,9 (C3) ; 97,2 (t, 27Hz, C1) ; 113 (t, ÇF2); 127,9 -129 (Çar.) ; 135,7; 136,7;
138,2 ;138,3 ;138,7 ; 139,0 (Car. quat.) ; 156,0 (CO(Z)) ;163,7 (t, 28Hz, CFZÇONH) ; 172,0 (CONH) ; 173,0 (CO2Bn).
Synthèse du composé 10 (Figure 7) O C OCH2Ph BnO 5 l' N
H
4 Ph O NH O
BnO 3 ~OBn OBn 10 0 Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 9(1,8 g 3,36 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (5 mL; 67,2 mmol ; 20 éq.). Le mélange est laissé à
réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à
cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
Couplage Dans uh ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (1,38 g;
2,18 mmol ; 1,05 éq.), le peptide précédemment déprotégé (1,15 g;
2,08 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,336 g; 2,5 mmol ;
1,2 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,57 mL ; 5,2 mmol; 2,5 éq.) dans le DMF (35 mL), l'EDCI (0,478 g ; 2,49 mmol ; 1,2 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M (2*100 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 10 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 83%.
C60H65F2N3012 M=1058,17 g.mol"1 Rf : 0,48 (Cyclohexane/acétate d'éthyle 5/5).
RMN '9F (CDCI3, 282,5 MHz) -116,9 (d, JF_F=259Hz) ; -121,7 (d, JF_F=259Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1,2-1,4 (m; 7H; 1CH3; 2CH2); 1,5 (m; 1H; CH2) ; 1,6 (m; 1H; CFi2); 3,0 et 3,2 (2m; 2H; NHCH2); 3,4 (m; 2H; H6); 3,8-3,9 (m; 2H; H3; H4); 4,0 (m; 2H;
CHNH (Lys); H5); 4,2-4,9 (m; 9H; 4OCH2Ph ; CH (Ala)); 4,2 (d; 9Hz; 1 H; H2);
5,0 (s; 2H; OCH2Ph) ; 5,1 (m; 1 H; ZNH); 5,4 (d; 7,8 ; 1 H; NH); 6,5 (d; 7,2 1 H; NH) ; 6,7 (s; 1 H; NH); 7,2 (m; 30H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,3 (ÇH3) ; 22,4 (ÇH2) ; 28,7 (ÇH2) ; 32,5 (CH2) ; 39,3 (CH2N) ; 48,6 (CH
Ala) ; 54,9 (NCH Lys) ; 67,4 et 67,6 (2OÇH2Ph); 68,7 (C6) ; 71,2 (C5) ; 73,5 et 73,8 (2OCH2Ph) ; 74,4 (C4) ; 75,0 (OCH2Ph ; C2) ; 75,8 (OÇH2Ph) ; 80,9 (C3) ; 97,2 (t, 27Hz, C1) ; 113 (t, ÇF2); 127,9 -129 (Çar.) ; 135,7; 136,7;
138,2 ;138,3 ;138,7 ; 139,0 (Car. quat.) ; 156,0 (CO(Z)) ;163,7 (t, 28Hz, CFZÇONH) ; 172,0 (CONH) ; 173,0 (CO2Bn).
19 Synthèse du composé 11 (Figure 8) 6' OH
F
HO O C N N OH
l' Z, H
HO 4' "",,/"OH O NH3+CI- O
oH 11 H
O FZ H
H o H C N OH
N
HO HO,H
5 3 2 OH O NH3+CI' 5 Un ballon contenant le produit de départ 10 (150 mg ; 0,133 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (3 mL) et d'HCI 1 N(2 mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 11 sous la forme d'un solide jaune orangé avec un rendement de 92%.
C17H30CIF2N3O1o M=509,88 g.mol"1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,6 (d, JF_F=256Hz) ; -121,0 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF_F=257Hz).
RMN 'H (D20, 300 MHz) 1,4 (d; 7,3Hz; CH3) ; 1,4 (m; 2H; CH2); 1,5 (m; 2H; CH2) ; 1,8 (m; 2H; CH2);
3,2 (m; 2H; NHCH2); 3,5-3,6 (m; 2H6',2H6); 3,7 (m; H4 H5) ;3,8 (dd, 3,4Hz et 9,9Hz, H3') 3,9 (m; CH,H4',H5',H2'); 4,0 (t, 8,2Hz, H3); 4,3 (m; CH); 4,36 (d, 8,2Hz,H2).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 16,2 (ÇH3) ; 21,5 (CH2) ; 28,0 (CH2) ; 30,7 (ÇH2) ; 39,3 (ÇH2N) ; 49,1 (ÇH) ;
53,2 (NCH) ; 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,0 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3') ;
70,9 (C5) ; 72,5 (C2') ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ; 169,9 et 176,3 (ÇO).
5 Synthèse du composé 12 (Figure 9) O
_ 6' OH
F
HO O C N OH
5 l' N
2, H
HO 4 3' """""OH o NH2 O
H
HO H C N OH
N
HO HOH
Dans un ballon, le composé 10 (0.81 mmol) est dissout dans un mélange eau / tétrahydrofurane (1 : 1; 20 mL) et le palladium sur charbon et placé
10 sous une atmosphère d'hydrogène. Le mélange est agité pendant 2 jours à
température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, et concentré. Le brut est repris avec du dichlorométhane (20 mL) qui est éliminé, puis avec de l'eau (10 mL) qui est filtrée. La phase aqueuse est ensuite concentrée pour ainsi laisser le produit désiré en tant qu'un solide blanc avec un rendement 15 de 54%.
C1$H3lF2N301o M=473,42 g.mol-1 RMN 19F (D20, 282MHz) -119.3 (1 F, d, 2JF-F 255.5), 120.4 (1 F, d, 2JF-F 255.5)
F
HO O C N N OH
l' Z, H
HO 4' "",,/"OH O NH3+CI- O
oH 11 H
O FZ H
H o H C N OH
N
HO HO,H
5 3 2 OH O NH3+CI' 5 Un ballon contenant le produit de départ 10 (150 mg ; 0,133 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (3 mL) et d'HCI 1 N(2 mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 11 sous la forme d'un solide jaune orangé avec un rendement de 92%.
C17H30CIF2N3O1o M=509,88 g.mol"1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,6 (d, JF_F=256Hz) ; -121,0 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF_F=257Hz).
RMN 'H (D20, 300 MHz) 1,4 (d; 7,3Hz; CH3) ; 1,4 (m; 2H; CH2); 1,5 (m; 2H; CH2) ; 1,8 (m; 2H; CH2);
3,2 (m; 2H; NHCH2); 3,5-3,6 (m; 2H6',2H6); 3,7 (m; H4 H5) ;3,8 (dd, 3,4Hz et 9,9Hz, H3') 3,9 (m; CH,H4',H5',H2'); 4,0 (t, 8,2Hz, H3); 4,3 (m; CH); 4,36 (d, 8,2Hz,H2).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 16,2 (ÇH3) ; 21,5 (CH2) ; 28,0 (CH2) ; 30,7 (ÇH2) ; 39,3 (ÇH2N) ; 49,1 (ÇH) ;
53,2 (NCH) ; 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,0 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3') ;
70,9 (C5) ; 72,5 (C2') ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ; 169,9 et 176,3 (ÇO).
5 Synthèse du composé 12 (Figure 9) O
_ 6' OH
F
HO O C N OH
5 l' N
2, H
HO 4 3' """""OH o NH2 O
H
HO H C N OH
N
HO HOH
Dans un ballon, le composé 10 (0.81 mmol) est dissout dans un mélange eau / tétrahydrofurane (1 : 1; 20 mL) et le palladium sur charbon et placé
10 sous une atmosphère d'hydrogène. Le mélange est agité pendant 2 jours à
température ambiante. Le mélange réactionnel est filtré, et concentré. Le brut est repris avec du dichlorométhane (20 mL) qui est éliminé, puis avec de l'eau (10 mL) qui est filtrée. La phase aqueuse est ensuite concentrée pour ainsi laisser le produit désiré en tant qu'un solide blanc avec un rendement 15 de 54%.
C1$H3lF2N301o M=473,42 g.mol-1 RMN 19F (D20, 282MHz) -119.3 (1 F, d, 2JF-F 255.5), 120.4 (1 F, d, 2JF-F 255.5)
20 -120.7 (1 F, d, 2JF-F 256.6), 121.8 (1 F, d, 2JF-F 255.5) RMN 'H (D20, 300MHz) 1.31 (3H, d, 3JH11-H9 7=3, CFI3), 1.37-1.45 (2H, m, H CH2), 1.52-1.61 (2H, m, CH2), 1.74-1.87 (2H, m, CH2), 3.25-3.31 (2H, m, NCH2), 3.57-3.75 (4H, m,
21 2H6',2H6,H4,H5), 3.82 (dd, 3JH_H 3.2, 3JH_H 9.7, H3'), 3.95-4.02 (CH,H4',H5',H2'), 4.08-4.17 (m, CH,H3), 4.39 (d, 3JH_H 8.3,H2), RMN 13C (D20, 75MHz) 17.5 (CH3), 21.9 (CH2), 28.0 (CH2) 31.8 (ÇH2), 39.5 (NCH2), 51.5 (CH), 53.8 (CH), 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3') ; 70,9 (C5) ;
72,4 (C2') ; 74,0 (C3) ; 75,6 (C2) ; 80,2 (C4) ; 96.1 (d, 2Jc, '_F 25.7), 98.9 (t, 2Jc, _F 28.6) (C1 et C1'), 114.0 (t, 2JcT_F 256.5, ÇF2), 163.9 (t, 2JCW_F
28.0, CF2CO), 169,9 et 176,3 (CO).
Spectrométrie de masse :ESI+ : 496 (MH+Na)+, 474 (MH)+.
Synthèse du composé 14 (Figure 10) PhO N OCH3 N
= H
O O
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lysine(NHBoc)-OH 8 (5 g; 13,14 mmol ; 1 éq.) dans le dichlorométhane (50 mL), le carbonyldiimadozale CDI (2,56 g; 15,8 mmol ; 1,2 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI"
+H3N-AlanineOMe 13 (1,84g; 13,14 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (4,8 mL; 27,6 mmol ; 2,1 éq.) dans dichlorométhane (50 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures puis une solution d'acide chlorhydrique 1 N(50 mL) est additionnée, puis le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (100 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser le composé 14
72,4 (C2') ; 74,0 (C3) ; 75,6 (C2) ; 80,2 (C4) ; 96.1 (d, 2Jc, '_F 25.7), 98.9 (t, 2Jc, _F 28.6) (C1 et C1'), 114.0 (t, 2JcT_F 256.5, ÇF2), 163.9 (t, 2JCW_F
28.0, CF2CO), 169,9 et 176,3 (CO).
Spectrométrie de masse :ESI+ : 496 (MH+Na)+, 474 (MH)+.
Synthèse du composé 14 (Figure 10) PhO N OCH3 N
= H
O O
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lysine(NHBoc)-OH 8 (5 g; 13,14 mmol ; 1 éq.) dans le dichlorométhane (50 mL), le carbonyldiimadozale CDI (2,56 g; 15,8 mmol ; 1,2 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI"
+H3N-AlanineOMe 13 (1,84g; 13,14 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (4,8 mL; 27,6 mmol ; 2,1 éq.) dans dichlorométhane (50 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures puis une solution d'acide chlorhydrique 1 N(50 mL) est additionnée, puis le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (100 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser le composé 14
22 sous la forme d'un solide blanc qui est utilisé directement dans la suite de la synthèse avec un rendement de 99%.
C23H35N307 M=465,5 g.mol-1 Rf = 0.43, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1.30 (d, 3H, 3j H12-H9 7.4, CH3;), 1.33-1.45 (m, 12H, (ÇH3)3C; CH2), 1.52-1.69 (m, 2H, CH2), 1.76-1.82 (m, 1H, CH2), 3.00-3.08 (m, 2H, NCH2), 3.66 (s, 3H, CH3), 4.25 (m, 1 H, (ÇH), 4.48 (qt, 1 H, 3j H9-H12 7.4, (ÇH), 5.03 (s, 3H, OCH2Ph, NH), 6.03 (d, 1 H, 3JNH-H6 7=8, NH), 7.22-7.31 (m, 6H, HAr, NH).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,0 (CH3) ; 22,6 (ÇH2) ; 28,8 ((CH3)3C) ; 29,7 (ÇH2) ; 32,7 (CH2) ; 40,2 (NCH2); 48,4 (ÇH(Ala)) ; 52,7 (ÇH(Lys)) ; 67,2 (OCH2Ph) ; 79,3 ((CH3)3Ç) ;
128,3 ; 128,4(2C) ; 128,8 (2C) (Car.) ; 136,6 (Çar. quat.) ; 156,6 et 156,7 (ÇO(Boc) et ÇO(Z)) ; 172,4 et 173,6 (CONH et ÇO2Et).
Synthèse du composé 15 (Figure 11) O
F
B O O YN OMe Bn0 4 3 ~sOBn O PhO NH O
OBn 15 O
Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 14 (6 g 13 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (100 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (20 mL; 263 mmol ; 20 éq.). Le mélange est laissé à
réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à
cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
C23H35N307 M=465,5 g.mol-1 Rf = 0.43, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1.30 (d, 3H, 3j H12-H9 7.4, CH3;), 1.33-1.45 (m, 12H, (ÇH3)3C; CH2), 1.52-1.69 (m, 2H, CH2), 1.76-1.82 (m, 1H, CH2), 3.00-3.08 (m, 2H, NCH2), 3.66 (s, 3H, CH3), 4.25 (m, 1 H, (ÇH), 4.48 (qt, 1 H, 3j H9-H12 7.4, (ÇH), 5.03 (s, 3H, OCH2Ph, NH), 6.03 (d, 1 H, 3JNH-H6 7=8, NH), 7.22-7.31 (m, 6H, HAr, NH).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,0 (CH3) ; 22,6 (ÇH2) ; 28,8 ((CH3)3C) ; 29,7 (ÇH2) ; 32,7 (CH2) ; 40,2 (NCH2); 48,4 (ÇH(Ala)) ; 52,7 (ÇH(Lys)) ; 67,2 (OCH2Ph) ; 79,3 ((CH3)3Ç) ;
128,3 ; 128,4(2C) ; 128,8 (2C) (Car.) ; 136,6 (Çar. quat.) ; 156,6 et 156,7 (ÇO(Boc) et ÇO(Z)) ; 172,4 et 173,6 (CONH et ÇO2Et).
Synthèse du composé 15 (Figure 11) O
F
B O O YN OMe Bn0 4 3 ~sOBn O PhO NH O
OBn 15 O
Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 14 (6 g 13 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (100 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (20 mL; 263 mmol ; 20 éq.). Le mélange est laissé à
réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à
cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
23 Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (2,15 g 2,49 mmol ; 1,0 éq.), le peptide précédemment déprotégé (1,20 g;
2,49 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,37 g; 2,75 mmol ;
1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,83g; 8,22 mmol ; 3,3 éq.) dans le DCM (100 mL), l'EDCI (0,53 g; 2,75 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté après 15 minutes. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis L'eau (100 mL) est ajoutée ainsi que du dichlorométhane, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (200 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide beige.
Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / AcOEt (1 : 1) comme éluant pour donner le produit 15 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 38 %
C54H61 F2N3012 M=982,07g.mol-1 Rf = 0.27, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -117.0 (1 F, d, 2JF-F 258.0), -121.9 (1 F, d, 2JF-F 258.0).
RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 1.31 (d, 3H, 3JH12-H9 7.1, CI-I3), 1.30-1.78 (m, 6H, 3CH2), 3.05-3.38 (m, 2H, NCH2), 3.42-3.51 (m, 2H, H6), 3.66 (s, 3H, OCH3), 3.88 (m, 2H), 4.10 (m, 1 H), 4.28 (d, 1 H, J 9.0), 4.39-4.55 (m, 4H), 4.68-4.92 (m, 5H), 5.02-5.06 (m, 2H), 5.40 (d, 1H, 3J7.9, NH), 6.35 (d, 1H, 3J7.2, NH), 6.78 (Is, 1H, NH), 7.22-7.29 (m, 25H, HAr).
2,49 mmol ; 1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,37 g; 2,75 mmol ;
1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,83g; 8,22 mmol ; 3,3 éq.) dans le DCM (100 mL), l'EDCI (0,53 g; 2,75 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté après 15 minutes. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis L'eau (100 mL) est ajoutée ainsi que du dichlorométhane, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 100 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (200 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide beige.
Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / AcOEt (1 : 1) comme éluant pour donner le produit 15 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 38 %
C54H61 F2N3012 M=982,07g.mol-1 Rf = 0.27, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -117.0 (1 F, d, 2JF-F 258.0), -121.9 (1 F, d, 2JF-F 258.0).
RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 1.31 (d, 3H, 3JH12-H9 7.1, CI-I3), 1.30-1.78 (m, 6H, 3CH2), 3.05-3.38 (m, 2H, NCH2), 3.42-3.51 (m, 2H, H6), 3.66 (s, 3H, OCH3), 3.88 (m, 2H), 4.10 (m, 1 H), 4.28 (d, 1 H, J 9.0), 4.39-4.55 (m, 4H), 4.68-4.92 (m, 5H), 5.02-5.06 (m, 2H), 5.40 (d, 1H, 3J7.9, NH), 6.35 (d, 1H, 3J7.2, NH), 6.78 (Is, 1H, NH), 7.22-7.29 (m, 25H, HAr).
24 Synthèse du composé 16 (Figure 12) 6, OH
F
OMe HO O C N H 'y N
2, HO 4 "~~'~~OH O NH3+CI- O
3' H
N
HOH
HO
5 3 2 OH O NH3+CI' 5 Un ballon contenant le produit de départ 15 (497 mg ; 0,488 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (10 mL) et d'HCI 1 N (1,2eq.) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 16 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 87%.
C1$H32CIF2N3010 M=523,5 g.mol"1 RMN 19F (D20, 282MHz) -119.1 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -120.5 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -120.3 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -121.7 (1 F, d, 2JF-F 256.4).
RMN 'H (D20, 300MHz) 1.37-1.48 (m, 5H, CH3,CH2), 1.54-1.65 (m, 2H, CFi2), 1.72-1.91 (m, 2H, CH2), 3.24-3.32 (m, 2H, NCH2), 3.59-3.85 (m), 3.96-4.02 (m), 4.13 (, 1 H, 3J 7.9, H2).
Synthèse du composé 19 (Figure 13) H
N
ZHN OMe O
NHBoc 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-AIa-OH 17 (752 mg ;
3.37 mmol ; 1.0 éq.) dans le dichlorométhane (15 mL), le carbonyldiimadozale CDI (656 g; 4,05 mmol ; 1,2 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI-10 +H3N-Lys(NHBoc)OMe 18 (1g; 3,37 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (1,25 mL; 7,1 mmol ; 2,1 éq.) dans dichlorométhane (15 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures Une solution d'acide chlorhydrique 1 N(20 mL) est additionnée, puis le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 20 mL). Les phases organiques sont 15 lavées avec une solution saturée de NaCI (50 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice avec un mélange cyclohexane /
acétate d'éthyle (1 : 1) comme éluant afin d'isoler le produit 19 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 72%.
20 C23H35N307 M=465,5 g.mol-1 Rf = 0.25, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1.38 (d, 3H, 3J 6,8, CH3;), 1.25-1.84 (m, 6H, 3CH2), 1,42 (s, 9H, C(CH3)3), 3.02-3.09 (m, 2H, NCH2), 3.72 (s, 3H, OCH3), 4.29 (tapp., 6,8Hz, 1H, CH), 4.54-4,58 (m, 1 H, CH), 4,77 (Is, 1 H) ; 5.1 (s, 2H, OCH2Ph), 5,56 (s, 1 H, NH), 6.71 (d, 1H, 3J 7.5, NH), 7.33 (m, 5H, HAr).
Synthèse du composé 20 (Figure 14) O OMe O
F
O
Bn0 5 C N NHZ
N
n=4H
4 =
-Bn0 3 2 '"~~//OBn 0 OBn Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 19 (1 éq.) dans 10 le dichlorométhan est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (20 éq.).
Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
Couplage 15 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (1,26 g;
2,0 mmol ; 1,0 éq.), le peptide précédemment déprotégé (0,95 g; 2,0 mmol ;
1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,29 g; 2,25 mmol ; 1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,28g; 3 mmol ; 1,5 éq.) dans le DMF (35 mL), l'EDCI (0,44 g; 2,0 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté après 15 minutes. La réaction 20 est laissée sous agitation pendant 24 heures puis concentrée. Une solution d'HCI 1 N(20 mL) est ajoutée ainsi que du dichlorométhane, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 30 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (50 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide.
Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / AcOEt (1 : 1) comme éluant pour donner le produit 20 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 33 %.
C541-161 F2N3012 M=982,07g.mol-1 Rf = 0.30, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -117.8 (1 F, d, 2JF_F 259.2), -120.3 (1 F, d, 2JF_F 259.2).
RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 1.32 (d, 3H, 3J 7.0, CIi3), 1.35-1.80 (m, 6H, 3CH2), 2,92-3,18 (m,1H, NCH2), 3,25-3,36 (m,IH, NCH2), 3.51 (d, 6,5Hz, 2H, H6), 3.71 (s, 3H, OCH3), 3.88-3,96 (m, 2H, H3, H4), 4.13 (t, 2,3Hz, 1H, H5), 4.15-4,26 (m, 1H, CH), 4.33 (d, 10Hz, 1H, H2); 4.42 (d, 2H, OCH2Ph), 4.45-4.52 (m, 1H, CH), 4.58 (d, 1H, 2J 11.5, OCH2Ph), 4.71 (s, 2H, OCH2Ph), 4.77 (d, 1H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.85 (d, 1H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.95 (d, 1H, 2J 11.5, OCH2Ph), 5.05 (s, 2H, OCH2Ph), 5.32 (d, 1 H, 3J7.6, NH), 5.32 (s, 1 H, OH), 6.67 (d, 1 H, 3J 7.4, NH), 6.93 (Is, 1H, NH), 7.21-7.38 (m, 25H, HA,).
RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 18,4 (ÇH3) ; 21,9 (CH2) ; 28,2 (CH2) ; 31,2 (CH2) ; 38,6 (CH2N) ; 50,6 (ÇH) ;
52,1 (CH) ; 52,6 (OCH3); 67,1 (OCH2Ph); 68,6 (C6) ; 70,9 (C5) ; 73,3 et 73,5 (2OÇH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,7 (OÇH2Ph) ; 74,8 (C2) ; 75,6 (OCH2Ph) ; 80,7 (C3) ; 96,7 (t, 25,7Hz, Cl); 127,7; 127,8; 127,9; 128,0; 128,1; 128,2; 128,4 (2C); 128,6; 128,7 (Car.) ; 136,3; 137,9; 138,0 ;138,4 ;138,7 (Car. quat.) ;
164 (CF2CONH) ; 172,6 (CONH) ; 172,7 (ÇO2Me).
Synthèse du composé 21 (Figure 15) O OH
_ 5 _ F
Bn0 O C~N NHZ
=4H
4 =
Bn0 3 2 OBn 0 _ OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le composé 20 (575 mg ;
0.586 mmol ; 1 éq.) en solution dans le tétrahydrofurane (8 mL), une solution aqueuse de lithine (2M ; 2 éq.) est ajoutée et le mélange est agité pendant la nuit à température ambiante. Le milieu est acidifié avec une solution d'HCI
1 M(10 mL) puis extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 mL), et les phases organiques sont combinées, lavées avec une solution saturée de NaCI (20 mL) et concentrées directement. L'acide 21 est isolé ainsi comme un solide jaune pâle qui peut être utilisée directement pour la prochaine étape sans purifications supplémentaires avec un rendement brut de 81%.
C53H59F2N3012 M=961 g.mol-, RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -118.1 (1 F, d, 2JF_F 258.6), -119.9 (1 F, d, 2JF_F 258.6).
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 1.29 (tapp., 3H, 3J 9,7, CH3), 1.10-1.41 (m, 4H, 2CH2), 1.50-1.72 (m, 2H, CH2), 2,88-2,95 (m, 1 H, NCH2), 3,22-3,32 (m,1 H, NCH2), 3.49 (dapp, 6,0Hz, 2H, H6), 3.89-3,92 (m, 2H, H3, H4), 4.13 (t, 6Hz, 1H, H5), 4.22-4,43 (m, 3H, 2CH, H2); 4.38 (d, 2H, OCH2Ph), 4.54 (d, 1 H, 2J 11.5, OCH2Ph), 4.67 (s, 2H, OCH2Ph), 4.73 (d, 1 H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.81 (d, 1 H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.91 (d, 1H, 2J 11.4, OCH2Ph), 4,97 (s, 2H, OCH2Ph), 5.62 (d, 1 H, 3J7.7, NH), 7,07 (Is, 2H, 2NH), 7.18-7.32 (m, 25H, HAr).
RMN '3C (CDCI3, 75MHz) 19,0 (CH3) ; 22,4 (CH2) ; 28,8 (CH2) ; 30,9 (CH2) ; 39,0 (CH2N) ; 50,9 (ÇH) ;
52,9 (CH) ; 67,6 (OÇH2Ph); 69,0 (C6) ; 71,2 (C5) ; 73,7 et 73,9 (2OÇH2Ph) ;
74,6 (C4) ; 75,1 (OCH2Ph) ; 75,3 (C2) ; 75,9 (OCH2Ph); 81,0 (C3) ; 97,1 (t, 27,4Hz, C1) ; 128,1; 128,3; 128,5; 128,7; 128,8; 129,0; 129,1 (Çar.) ; 136,7;
138,2; 138,4 ;138,7 ;138,9 (Car. quat.) ; 164,9 (CF2CONH) ; 174,1 (ÇONH) ;
175,1 (ÇO2H).
Synthèse du composé 22 (Figure 16) O OH
OH O
__ F
HO O C N NH3*CI' 1 ~
n=H
4 =
H O =
HO 3 z,~~'11~O
O
OH OH
H
HO H NH3*GI' HO HO, 4 n=4 H
3 2 OH O =
5 Un ballon contenant le produit de départ 21 (458 mg ; 0,473 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (15 mL) et d'HCI 1N (1,2eq.) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 16 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 82%.
C17H30CIF2N3010 M=509 g.mol-1 RMN '9F (D20, 282MHz) -116.7 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -117.8 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -118.2 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -119.3 (1 F, d, 2JF_F 256.4).
RMN ' H (D20, 300MHz) 1.51 (3H, d, 3J 7.1 Hz, CFI3), 1.,25-1.90 (6H, m, 3CH2), 3.25-3.32 (2H, m, NCH2), 3.59-3.74 (m, 2H6',2H6,H4,H5), 3.81-4,17 (m, H3',CH,H4',H5',H2'), 4.32-4,41 (m, CH,H3,H2), RMN 13C (D20, 75MHz) 18,4 (ÇH3), 24,1 (CH2), 29,5 (CH2) 31.7 (ÇH2), 41,1 (NCH2), 50,8 (ÇH), 54,6 (ÇH), 62,7 (C6') ; 64,2 (C6) ; 68,7 (C5') ; 70,5 (C4') ; 72,2 (C3') ; 72,5 (C5) ;
74,1 (C2') ; 75,6 (C3) ; 77,2 (C2) ; 81,9 (C4) ; 172,8 (CO).
Synthèse du composé 24 (Figure 17) ZHN"'n'N~CO2Bn = H
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Orn(Boc)-OH 23 (1,00 g; 2,73 mmol; léq) dissout dans le dichlorométhane (13 mL), le carbonyldiimidazole (532 mg; 3,28 mmol; 1,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant uné heure. Puis sur ce produit est 10 additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI-+H3N-Ala-OBn 7(589 mg ; 2,73 mmol ; léq) et de DIEA (947pL ; 5,73 mmol ;
2,1 éq) dans le dichlorométhane (13 mL). Ce mélange est agité pendant 12 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution d' acide chlorhydrique 1 N, puis la phase acqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane.
15 Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées. Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/ Acétate d'éthyle 50/50) pour obtenir le composé 24 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 70%.
C28H37N307 M=527,62 g.mol-1 20 Rf : 0,44 (Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50).
RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,4 (m, 12H, C(CH3)3 ,CH3); 1,47-1,53 (m, 2H, CH ); 1,80-1,87 (m, 2H, CH2) ;
3,01-3,33 (m, 1H, CH NH) ; 3,31-3,33 (m, 1H, CH2NH) ; 4,4 (m, 1H, CH(Orn)) ;
4,55-4,62 (m, 1H, CH(Ala)) ; 4,73 (m, 1H, BocNH) ; 5,08 (s, 2H, OCH Ph) ; 5,08-
F
OMe HO O C N H 'y N
2, HO 4 "~~'~~OH O NH3+CI- O
3' H
N
HOH
HO
5 3 2 OH O NH3+CI' 5 Un ballon contenant le produit de départ 15 (497 mg ; 0,488 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (10 mL) et d'HCI 1 N (1,2eq.) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 16 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 87%.
C1$H32CIF2N3010 M=523,5 g.mol"1 RMN 19F (D20, 282MHz) -119.1 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -120.5 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -120.3 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -121.7 (1 F, d, 2JF-F 256.4).
RMN 'H (D20, 300MHz) 1.37-1.48 (m, 5H, CH3,CH2), 1.54-1.65 (m, 2H, CFi2), 1.72-1.91 (m, 2H, CH2), 3.24-3.32 (m, 2H, NCH2), 3.59-3.85 (m), 3.96-4.02 (m), 4.13 (, 1 H, 3J 7.9, H2).
Synthèse du composé 19 (Figure 13) H
N
ZHN OMe O
NHBoc 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-AIa-OH 17 (752 mg ;
3.37 mmol ; 1.0 éq.) dans le dichlorométhane (15 mL), le carbonyldiimadozale CDI (656 g; 4,05 mmol ; 1,2 éq.) est additionné. La réaction est laissée sous agitation pendant une heure. Puis à ce mélange est ajouté une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CI-10 +H3N-Lys(NHBoc)OMe 18 (1g; 3,37 mmol ; 1 éq.), et de diisopropyléthylamine DIEA (1,25 mL; 7,1 mmol ; 2,1 éq.) dans dichlorométhane (15 mL). La réaction est poursuivie pendant 24 heures Une solution d'acide chlorhydrique 1 N(20 mL) est additionnée, puis le mélange est extrait avec du dichlorométhane (3 x 20 mL). Les phases organiques sont 15 lavées avec une solution saturée de NaCI (50 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide pour laisser un solide blanc. Le résidu est purifié sur colonne chromatographique sur gel de silice avec un mélange cyclohexane /
acétate d'éthyle (1 : 1) comme éluant afin d'isoler le produit 19 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 72%.
20 C23H35N307 M=465,5 g.mol-1 Rf = 0.25, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1.38 (d, 3H, 3J 6,8, CH3;), 1.25-1.84 (m, 6H, 3CH2), 1,42 (s, 9H, C(CH3)3), 3.02-3.09 (m, 2H, NCH2), 3.72 (s, 3H, OCH3), 4.29 (tapp., 6,8Hz, 1H, CH), 4.54-4,58 (m, 1 H, CH), 4,77 (Is, 1 H) ; 5.1 (s, 2H, OCH2Ph), 5,56 (s, 1 H, NH), 6.71 (d, 1H, 3J 7.5, NH), 7.33 (m, 5H, HAr).
Synthèse du composé 20 (Figure 14) O OMe O
F
O
Bn0 5 C N NHZ
N
n=4H
4 =
-Bn0 3 2 '"~~//OBn 0 OBn Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 19 (1 éq.) dans 10 le dichlorométhan est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (20 éq.).
Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour obtenir le produit déprotégé avec un rendement quantitatif.
Couplage 15 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (1,26 g;
2,0 mmol ; 1,0 éq.), le peptide précédemment déprotégé (0,95 g; 2,0 mmol ;
1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,29 g; 2,25 mmol ; 1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,28g; 3 mmol ; 1,5 éq.) dans le DMF (35 mL), l'EDCI (0,44 g; 2,0 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté après 15 minutes. La réaction 20 est laissée sous agitation pendant 24 heures puis concentrée. Une solution d'HCI 1 N(20 mL) est ajoutée ainsi que du dichlorométhane, et la phase aqueuse est extraite avec du DCM (3 x 30 mL). Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCI (50 mL), séchées sur MgSO4 et concentrées sous vide.
Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / AcOEt (1 : 1) comme éluant pour donner le produit 20 pur sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 33 %.
C541-161 F2N3012 M=982,07g.mol-1 Rf = 0.30, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (1 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -117.8 (1 F, d, 2JF_F 259.2), -120.3 (1 F, d, 2JF_F 259.2).
RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 1.32 (d, 3H, 3J 7.0, CIi3), 1.35-1.80 (m, 6H, 3CH2), 2,92-3,18 (m,1H, NCH2), 3,25-3,36 (m,IH, NCH2), 3.51 (d, 6,5Hz, 2H, H6), 3.71 (s, 3H, OCH3), 3.88-3,96 (m, 2H, H3, H4), 4.13 (t, 2,3Hz, 1H, H5), 4.15-4,26 (m, 1H, CH), 4.33 (d, 10Hz, 1H, H2); 4.42 (d, 2H, OCH2Ph), 4.45-4.52 (m, 1H, CH), 4.58 (d, 1H, 2J 11.5, OCH2Ph), 4.71 (s, 2H, OCH2Ph), 4.77 (d, 1H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.85 (d, 1H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.95 (d, 1H, 2J 11.5, OCH2Ph), 5.05 (s, 2H, OCH2Ph), 5.32 (d, 1 H, 3J7.6, NH), 5.32 (s, 1 H, OH), 6.67 (d, 1 H, 3J 7.4, NH), 6.93 (Is, 1H, NH), 7.21-7.38 (m, 25H, HA,).
RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 18,4 (ÇH3) ; 21,9 (CH2) ; 28,2 (CH2) ; 31,2 (CH2) ; 38,6 (CH2N) ; 50,6 (ÇH) ;
52,1 (CH) ; 52,6 (OCH3); 67,1 (OCH2Ph); 68,6 (C6) ; 70,9 (C5) ; 73,3 et 73,5 (2OÇH2Ph) ; 74,1 (C4) ; 74,7 (OÇH2Ph) ; 74,8 (C2) ; 75,6 (OCH2Ph) ; 80,7 (C3) ; 96,7 (t, 25,7Hz, Cl); 127,7; 127,8; 127,9; 128,0; 128,1; 128,2; 128,4 (2C); 128,6; 128,7 (Car.) ; 136,3; 137,9; 138,0 ;138,4 ;138,7 (Car. quat.) ;
164 (CF2CONH) ; 172,6 (CONH) ; 172,7 (ÇO2Me).
Synthèse du composé 21 (Figure 15) O OH
_ 5 _ F
Bn0 O C~N NHZ
=4H
4 =
Bn0 3 2 OBn 0 _ OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le composé 20 (575 mg ;
0.586 mmol ; 1 éq.) en solution dans le tétrahydrofurane (8 mL), une solution aqueuse de lithine (2M ; 2 éq.) est ajoutée et le mélange est agité pendant la nuit à température ambiante. Le milieu est acidifié avec une solution d'HCI
1 M(10 mL) puis extrait avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 mL), et les phases organiques sont combinées, lavées avec une solution saturée de NaCI (20 mL) et concentrées directement. L'acide 21 est isolé ainsi comme un solide jaune pâle qui peut être utilisée directement pour la prochaine étape sans purifications supplémentaires avec un rendement brut de 81%.
C53H59F2N3012 M=961 g.mol-, RMN 19F (CDCI3, 282MHz) -118.1 (1 F, d, 2JF_F 258.6), -119.9 (1 F, d, 2JF_F 258.6).
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 1.29 (tapp., 3H, 3J 9,7, CH3), 1.10-1.41 (m, 4H, 2CH2), 1.50-1.72 (m, 2H, CH2), 2,88-2,95 (m, 1 H, NCH2), 3,22-3,32 (m,1 H, NCH2), 3.49 (dapp, 6,0Hz, 2H, H6), 3.89-3,92 (m, 2H, H3, H4), 4.13 (t, 6Hz, 1H, H5), 4.22-4,43 (m, 3H, 2CH, H2); 4.38 (d, 2H, OCH2Ph), 4.54 (d, 1 H, 2J 11.5, OCH2Ph), 4.67 (s, 2H, OCH2Ph), 4.73 (d, 1 H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.81 (d, 1 H, 2J 10.2, OCH2Ph), 4.91 (d, 1H, 2J 11.4, OCH2Ph), 4,97 (s, 2H, OCH2Ph), 5.62 (d, 1 H, 3J7.7, NH), 7,07 (Is, 2H, 2NH), 7.18-7.32 (m, 25H, HAr).
RMN '3C (CDCI3, 75MHz) 19,0 (CH3) ; 22,4 (CH2) ; 28,8 (CH2) ; 30,9 (CH2) ; 39,0 (CH2N) ; 50,9 (ÇH) ;
52,9 (CH) ; 67,6 (OÇH2Ph); 69,0 (C6) ; 71,2 (C5) ; 73,7 et 73,9 (2OÇH2Ph) ;
74,6 (C4) ; 75,1 (OCH2Ph) ; 75,3 (C2) ; 75,9 (OCH2Ph); 81,0 (C3) ; 97,1 (t, 27,4Hz, C1) ; 128,1; 128,3; 128,5; 128,7; 128,8; 129,0; 129,1 (Çar.) ; 136,7;
138,2; 138,4 ;138,7 ;138,9 (Car. quat.) ; 164,9 (CF2CONH) ; 174,1 (ÇONH) ;
175,1 (ÇO2H).
Synthèse du composé 22 (Figure 16) O OH
OH O
__ F
HO O C N NH3*CI' 1 ~
n=H
4 =
H O =
HO 3 z,~~'11~O
O
OH OH
H
HO H NH3*GI' HO HO, 4 n=4 H
3 2 OH O =
5 Un ballon contenant le produit de départ 21 (458 mg ; 0,473 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (15 mL) et d'HCI 1N (1,2eq.) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 16 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 82%.
C17H30CIF2N3010 M=509 g.mol-1 RMN '9F (D20, 282MHz) -116.7 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -117.8 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -118.2 (1 F, d, 2JF_F 256.4), -119.3 (1 F, d, 2JF_F 256.4).
RMN ' H (D20, 300MHz) 1.51 (3H, d, 3J 7.1 Hz, CFI3), 1.,25-1.90 (6H, m, 3CH2), 3.25-3.32 (2H, m, NCH2), 3.59-3.74 (m, 2H6',2H6,H4,H5), 3.81-4,17 (m, H3',CH,H4',H5',H2'), 4.32-4,41 (m, CH,H3,H2), RMN 13C (D20, 75MHz) 18,4 (ÇH3), 24,1 (CH2), 29,5 (CH2) 31.7 (ÇH2), 41,1 (NCH2), 50,8 (ÇH), 54,6 (ÇH), 62,7 (C6') ; 64,2 (C6) ; 68,7 (C5') ; 70,5 (C4') ; 72,2 (C3') ; 72,5 (C5) ;
74,1 (C2') ; 75,6 (C3) ; 77,2 (C2) ; 81,9 (C4) ; 172,8 (CO).
Synthèse du composé 24 (Figure 17) ZHN"'n'N~CO2Bn = H
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Orn(Boc)-OH 23 (1,00 g; 2,73 mmol; léq) dissout dans le dichlorométhane (13 mL), le carbonyldiimidazole (532 mg; 3,28 mmol; 1,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant uné heure. Puis sur ce produit est 10 additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI-+H3N-Ala-OBn 7(589 mg ; 2,73 mmol ; léq) et de DIEA (947pL ; 5,73 mmol ;
2,1 éq) dans le dichlorométhane (13 mL). Ce mélange est agité pendant 12 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution d' acide chlorhydrique 1 N, puis la phase acqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane.
15 Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées. Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/ Acétate d'éthyle 50/50) pour obtenir le composé 24 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 70%.
C28H37N307 M=527,62 g.mol-1 20 Rf : 0,44 (Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50).
RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,4 (m, 12H, C(CH3)3 ,CH3); 1,47-1,53 (m, 2H, CH ); 1,80-1,87 (m, 2H, CH2) ;
3,01-3,33 (m, 1H, CH NH) ; 3,31-3,33 (m, 1H, CH2NH) ; 4,4 (m, 1H, CH(Orn)) ;
4,55-4,62 (m, 1H, CH(Ala)) ; 4,73 (m, 1H, BocNH) ; 5,08 (s, 2H, OCH Ph) ; 5,08-
25 5,11 (m, 1H, OCH2Ph) ; 5,18 (d, 1H, OCH Ph 2JH_H=12,2Hz) ; 5,6 (m, H, ZNH) ; 7,0 (m, 1H, NH) ; 7,29-7,37 (m, 10H, Haz) RMN 13C (CDC13, 75,51VHz) :
17,8 (ÇH3) ; 26,3 (ÇH2) ; 28,5 (C(ÇH3)3) ; 30,5 (ÇHZ) ; 39,2 (ÇH2NH) ; 48,5 (ÇH(Ala)) ; 53,6 (ÇH(Orn)) ; 67,3 et 67,5 (2 OÇH2Ph) ; 79,4 (Ç(CH3)3 ; 128,2;
30 128,3 (2C); 128,5; 128,6; 128,7 (Çar) ; 135,5; 136,4 (Çar.quat) ; 156,4 et 156,8 (ZCO et BocÇO); 171,8 et 172,5 (ÇONH et C02) M(ES+) :[M+H]+=528,87 ;[M+Na]+=551,00 ;[M+K]+=566,73 ;[2M+Na]+=1077,5 et [2M+K]+=1093,13 Synthèse du composé 25 (Figure 18) O
ZHN~NCO Bn = H 2 ~HCF2 NH
BnO ~ 25 6 V~2à
BOBn O
OOBn Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 24 (563 mg 0,80 mmol ;1 éq) dissout dans le dichlorométhane (11 mL), I' acide trifluoroacétique (1,9 mL ;25,7 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis coévaporé 4 à 5 fois au toluène . Le résidu est trituré au tert-butylméthylether et enfin filtré et le peptide déprotégé est obtenu avec un rendement de 72%.
Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (508 mg ; 0,80 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (433 mg ; 0,80 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (8 mL), sont ajoutés I' HOBT (119 mg ; 0,88 mmol ; 1,1 éq) puis la NMM (220 pL; 2,00 mmol; 2,5 éq). Puis après 15 minutes, I' EDCI (169 mg; 0,88 mmol; 1,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures.
Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase acqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromotographié sur colonne de silice pour conduire au composé 25 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 27%.
C59H63F2N3012 M=1044,17 g.mol-1 Rf=0,44 (Eluant Cyclohexane/Acétate d' éthyle 50/50) RMN '9F (CDCI3), 282,5MHz:
-117,7 (d, 2JF-F=260Hz) ; -120,3 (d, 2JF-F=260Hz) RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,33 (d, 3H, CH , 3JH-H=7,3Hz) ; 1,41-1,49 (m, 2H, CH ); 1,73-1,81 (m, 2H, CH
3,0 (m, 1H, CH NH) ; 3,47-3,64 (in, 3H, 2H6 et CH NH) ; 3,93-3,96 (m, 2H, H3 et H) ; 4,18 (t, 1H, H5~ 3JH5-H6=6,5Hz) ; 4,36 (d, 1H, H, 3JH2-H3=9,5 Hz) ; 4,39-4,54 (m, 4H, CH(Orn), CH(Ala) et OCH2Ph) ; 4,59 (d, 1H, OCHPh, 2JH-H=11,4 Hz) ;
4,75 (s, 2H, OGH Ph) ; 4,80 (d, 1H, OCHPh, 2JH_H=10,3 Hz) ; 4,89 (d, 1H, OCH Ph, 2JH-H=10,3 Hz) ; 4,96 (d, 1H, OCH Ph, 2JH-H=11,4 Hz) ; 5,07 (s, 2H, OCH Ph) ; 5,11 (s, 2H, OCHPh) ; 5,2 (s, 1H, OH) ; 5,53 (d, 8,1Hz, 1H, ZNII ;
6,7 (d, 7,2Hz, 1H, NH); 7,1 (m, 1H, NI-I ; 7,27-7,34 (m, 30H, H~) RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
17,6 (ÇH3) ; 24,8 (ÇH2) ; 30,0 (ÇH2) ; 37,9 (ÇH2N) ; 48,3 (ÇH(Ala)) ; 52,3 (ÇH(Orn)) ; 67,0 et 67,3 (2 OCH2Ph) ; 68,4 (Ç6) ; 70,7 (Ç5) ; 73,2 et 73,4 (2 OÇH2Ph) ; 74,0 (Ç4) ; 74,7 (OÇH2Ph) ; 74,7 (C ) ; 75,5 (OÇH2Ph) ; 80,7 (C ) ;
96,7 (t, Çi 1Jc-F=27,6 Hz) ; 127,7; 127,8; 128,1 (2C); 128,2; 128,3; 128,4; 128,5;
128,6 (3C); 128,7 (Çar) ; 135,4; 136,4; 137,7; 137,9; 138,3; 138,6 (Çquat) ; 156,3 (ZNHÇO) ; 164,3 (t, CF2ÇO, ZJC-F=28,2Hz) ; 171,6 et 173,2 (ÇONH et Ç02) M(ES+) :[M+H]+ = 1044,33 et [M+Na]+=1066,47 et [M-H2O]+=1026,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 67,87 %H 6,08 %N 4,02 Expérimentale %C 67,96 %H 6,39 %N 3,46 Synthèse du composé 26 (Figure 19) 6, OH
O C F OH
N N
H
HO y 2 NH3+CI- O
HO 4 ~~~~~~OH 0 3' "
O FZ H OH
C` /N N
HO ~I/
HO HO/sO
NH3'CI' 0 5 3 OH p 6 " H OH
Dans un ballon contenant le composé 25 (104 mg; 0,0996 mmol; léq) dissout dans le THF (10 mL), l'acide chlorhydrique 1N (0,13 mL; 0,129 mmol ; 1,3 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d' hydrogène et agitée pendant 48 heures.
Le milieu est filtré sur millipore puis concentré et le composé 26 est obtenu sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement de 97%.
C16H28CIF2N3010 M=495,86 g.mol-1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,6 (d, JF_F=256Hz) ; -121,0 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,1 (d, JF_F=257Hz).
RMN 1 H(D2O, 300 MHz) 1,43 (d; 6,7Hz; CFI3) ; 1,66-1,78 (m; 2H; CH2); 1,92 (m; 2H; CH2) ; 3,34 (m;
2H; NHCH2); 3,64-3,71 (m; 2H6',2H6); 3,75-3,77 (m; H4 H5) ;3,83-3,86 (m, H3') 3,99-4,03 (m; CH(Orn),H4',H5',H2'); 4,16 (t, 7,5Hz, H3); 4,4-4,43 (m;
CH, H2).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 16,2 (CH3) ; 20,8 (ÇH2) ; 23,8 (CH2) ; 39,0 (CH2N) ; 49,1 (CH(Ala)) ; 53,2 (ÇH(Orn)) ; 61,1 (C6') ; 62,5 (C6) ; 67,0 (C5') ; 69,0 (C4') ; 70,6 (C3') ;
71,0 (C5) ; 72,5 (C2') ; 74,0 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3 et 98,8 (Cl et C1');
113,9 et 117,4 (ÇF2) ; 169,6 et 176,3 (CO).
M(ES+) : : [M+H]+ = 461,2 et [M+Na]+=483,3 et [M-H2O]+=441,3 Synthèse du composé 28 (Figure 20) PhO OCHpPh \\H~
O O
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lys(Boc)-OH 8(1,90 g; 5,00 mmol; léq) dissout dans le dichlorométhane (25 mL), le carbonyldiimidazole (973 mg; 6,00 mmol; 1,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI"
+H3N-Gly-OBn 27 (1,00 mg ; 5,00 mmol ; léq) et de DIEA (1,7 mL; 10,50 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (25 mL). Ce mélange est agité
pendant 12 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N, puis la phase aqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées.
Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d' éthyle 50/50) pour obtenir le composé 28 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 89%.
C28H37N307 M=527,62g.mol-1 Rf : 0,41 (Acétate d' éthyle).
RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,40 (s, 13H, C(CH )3, 2CH ,); 1,67 (m, 1H, CH ); 1,82 (m, 1H, CH:?) ; 3,07 (m, 2H, CH NH(Lys)) ; 4,04 (m, 2H, CH (G1y)) ; 4,21-4,23 (m, 1H, CH(Lys)) ; 4,71 (m, 1H, BocNH) ; 5,08 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,16 (s, 2H, OCH Ph) ; 5,66 (d, 7,3Hz, 1H, ZNI-I ;
6,85 (m, 1H, NH) ; 7,30 (m, 10, Har).
RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
22,4 (ÇH2) ; 28,5 (C(CH3)3) ; 29,7 (LH2) ; 32,0 (ÇH2) ; 39,8 (ÇH2NH(Lys)) ;
41,1 (ÇH2NH(Gly)) ; 54,8 (LH(Lys)) ; 67,2 et 67,3 (OCH2Ph) ; 79,3 (Ç(CH3)3) ;
128,2;
128,3; 128,5; 128,6; 128,7 (3C) (Ç~ ); 135,2; 136,2 (Çquat) ; 156,4 (_CO);
169,67 et 172,3 (ÇONH et C02) M ES+ :[M+H]+ = 528,53 et [M+Na]+=550,53 et [M+K]+=566,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 63,74 %H 7,07 %N 7,96 Expérimentale %C 63,71 %H 7,03 %N 7,85 Synthèse du composé 29 (Figure 21) _ F
BnO O C N OCH2Ph Bn0 4 g ""//iOBn O PhO NH O
joBn 29 0 Déprotection du peptide 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 28 (2,04 g ; 3,87 mmol ; léq) dissout dans le dichlorométhane (32 mL), l' acide trifluoroacétique (5,7 mL ;77,3 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis co-évaporé 4 à 5 fois au toluène pour conduire au peptide déprotégé avec un rendement 10 quantitatif.
Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6(317mg ; 0,50 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (271 mg ; 0,50 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (5 mL), sont ajoutés I' HOBT (74 mg ; 0,55 15 mmol ; 1,1 éq) puis la NMM (137 pL; 1,25 mmol ; 2,5 éq). Puis une fois après 15 minutes, I' EDCI (105 mg; 0,55 mmol; 1,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures. Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase aqueuse est extraite trois fois au 20 dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromotographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour conduire au composé 29 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 47%.
25 C59H63F2N3012 M=1044,17 g.mol-' Rf=0,47 (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) RMN 19F (CDCI3), 282,5MHz :
-116,6 (d, 2JF_F=260Hz) ; -122,1 (d, 2JF_F=261Hz) RiyIN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,30-1,81 (m, 6H, 3CH ); 3,05-3,11 (m, 1H, CH NH(Lys)) ; 3,31-3,38 (m, 1H, CH2NH(Lys)) ; 3,55 (d, 2H, H6, 2J=6,2 Hz) ; 3,86-4,04 (m, 4H, H, H4 et CH2(Gly));
4,16-4,20 (m, 2H, 115 et CH(Lys)) ; 4,33 (d, 1H, H2, 3JH2_H3=10,0Hz) ; 4,44 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=12,0 Hz) ; 4,49 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=12,0 Hz) ; 4,57 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=11,2Hz) ; 4,74 (s, 2H, OCII Ph) ; 4,79 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_ H=10,3Hz) ; 4,87 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=10,3Hz) ; 4,97 (d, 1H, OCHZPh, 2JH_ H=11,2Hz) ; 5,12 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,17(s, 2H, OCHPh) ; 5,53 (d, 1H, NHZ, 3JH_ H=7,4Hz) ; 6,57 (m, 1H, NH(Gly)) ; 6,93 (m, 1H, NH) ; 7,28-7,35 (m, 30H, IIar) RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
21,9 (ÇH2) ; 28,2 (ÇHZ) ; 31,8 (CH2) ; 38,9 (ÇH2NH(Lys)) ; 41,4 (LH2(Gly)) ;
54,4 (ÇH(Lys)) ; 67,2 et 67,4 (2OÇH2Ph) ; 68,3 (Ç6) ; 70,7 (Ç5) ; 73,2 et 73,4 (OÇHZPh) ;
74,1 (Ç4) ; 74,6 (Çz) ; 74,8 et 75,5 (OÇH2Ph) ; 80,6 (C ) ; 96,9 (t, C1, 1Jc_F=27Hz) ;
127,6; 127,8 (2C); 128,0; 128,1; 128,2; 128,3 (3C); 128,4; 128,5; 128,6 (2C);
128,8 (Ç~) ; 135,2; 136,3; 137,9 (2C); 138,4; 138,6 (Çquat) ; 156,2 (ZNHCO) ; 163,9 (t, CF2ÇO, 2JC_F=27Hz) ; 169,9 et 172,0 (NHÇO et Ç02) M ES+ : [M+H]+ = 1045,4 et [M+Na]+=1067,53.
Analyse élémentaire : Théorique %C 67,87 %H 6,08 %N 4,02 Expérimentale %C 67,80 %H 6,03 %N 3,99 Synthèse du composé 30 (Figure 22) 6, OH
HO 4 3' j/OpH 0 NH3+CI' O
O -H
HO H
H~s~ ~ {N
HO
5 3 2 pH 0 NH3*CI' 0 Dans un ballon contenant le composé 29 (104 mg; 0,0996 mmol; léq) dissout dans le THF 3mL, l'acide chlorhydrique 1N (1,3 mL; 0,128 mmol ;
1,3 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d'hydrogène et agitée pendant 48 heures.
Le milieu est filtré sur millipore puis concentré. Le composé 30 est obtenu sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement de 98%.
C16H28CIF2N3010 M=495,86 g.mol-1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,5 (d, JF_F=256Hz) ; -120,9 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF_F=257Hz).
RMN 'H (D20, 300 MHz) 1,41-1,46 (m; 2H; CH2); 1,53-1,60 (m; 2H; CH2) ; 1,85-1,92 (m; 2H; CH2) 3,27 (m; 2H; NHCH2(Lys)); 3,57-3,74 (m; 2H6',2H6;H4; H5) ;3,83 (dd, 2,9Hz et 9,3Hz, H3'); 3,95-4,04 (m; CH2,CH H4',H5',H2 ); 4,14 (t, 8,3Hz, H3); 4,39 (d, 8Hz, H2).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 21,6 (CH2) ; 28,0 (CH2) ; 30,6 (CH2) ; 39,3(ÇH2N(Lys)) ; 41,4 (ÇH2(Gly)) ;
53,4 (ÇH(Lys)) ; 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3 ) ;
70,9 (C6) ; 72,5 (C2') ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3(t, 26Hz) et 98,8 (t, 29Hz) (C1 et C1'); 114,0 et 117,4 (ÇF2) ; 163,9 (t, 28 Hz, CF2CO) ;170,7 et 173,2 (2Ç0).
M(ES+) : : [M+H]+ = 461,2 et [M+Na]+=483,3 et [M-H2O]+=441,3 Synthèse du composé 32 (Figure 23) 0 Co2Bn Pho N
o NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lys(Boc)-OH 8(760 mg; 2,00 mmoi; léq) dissout dans le dichlorométhane (20 mL), le carbonyidiimidazole (389 mg; 2,40 mmol; 1,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI-+HN-Pro-OBn 31 (483 mg ; 2,00 mmol; léq) et de DIEA (690 pL; 4,20 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (20 mL). Ce mélange est agité
pendant 12 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N, puis la phase aqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées. Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour conduire au composé 32 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 29%.
C31 H41 N307 M=567,69 g.mol-1 Rf : 0,51 (Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50).
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) :
1,3 (s, 9H, (CH3)3) ; 1,4-2,2 (m, 10H, 3 CH2 Lys et 2 CH2 Pro); 3,0 (m, 2H, CH2NH(Lys)); 3,5 (m, 1H, CHgN(Pro)); 3,6 (m, 1H, CH2N(Pro)); 4,4 (m, 1H, CH(Lys)); 4,5 (m, 1H, CH(Pro)); 4,9 (d, 6,5Hz, NHBoc), 4,97 (s, 2H, OCH2Ph); 4,9 (m, 1 H, OCH2Ph); 5,09 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=12,3 Hz); 5,8 (d, 7,6Hz, 1H, ZNH); 7,2 (m, 10H, Har) RMN 13C (CDCI3, 75,5MHz) :
21,8 (ÇH2) ; 24,7 (CH2) ; 28,3 (C(ÇH3)3) ; 28,7 (CH2) ; 29,2 (ÇH2) ; 31,8 (ÇH2) ; 39,8 (ÇH2NH(Lys)) ; 46,8 (ÇH2N(Pro)) ; 52,0 (ÇH(Lys)); 58,7 (ÇH(Pro)) ; 66,6 et 66,7 (OÇH2Ph) ; 78,6 (Ç(CH3)3 ; 127,8; 127,9; 128,0;
128,1; 128,3; 128,4 (Car) ; 135,4; 136,3 (Cquat) ; 155,9 et 156,0 (COZ et CO
Boc) ; 170,7 (ÇONH) ; 171,6 (CO2Bn) M(ES+) : [M+H]+=568,33 ; [M+Na]+=590,40 ; [M+K]+=560,27 Synthèse du composé 33 (Figure 24) OH O COZBn Bn0 5 N
4 2/i/j O Ph O NH `--~
Bn0 3 OBn OBn 33 O
Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 32 (318 mg ;
0,56 mmol ;1 éq) dissout dans le dichlorométhane (6 mL), I' acide trifluoroacétique (833 pL; 11,22 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis coévaporé 4 à 5 fois au toluène pour conduire quantitativement au peptide déprotégé.
Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant I' acide 6 (368mg ; 0,58 mmol ; léq) le peptide précédemment déprotégé (339 mg ; 0,58 mmol; léq) dans le diméthylformamide (6 mL), sont ajoutés I' HOBT (87 mg ; 0,64 mmol ; 1,1 éq) puis la NMM (192 pL; 1,75 mmol; 3 éq). Puis après environ 15 minutes, I' EDCI (123 mg; 0,64 mmol; 1,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures. Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N.
La phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour obtenir le composé 33 sous forme de solide blanc avec un rendement de 29%.
C62H67F2N3012 M=1083,83 g.mol-1 Rf=0,60 (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) RMN 19F (CDCl3; 282,51VIHz) :
-116,1 (d, JF-F=259 Hz) ;-122,9 (d, JF_F= 259 Hz) RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,2-1,9 (m, 10H, 3CH (Lys) et 2CH (Pro)) ; 3,1 (m, 1H, CH NH(Lys)) ; 3,3 (m, 1H, CH NH(Lys)) ; 3,5 (m, 4H, H6 et CH N(Pro)) ; 4,0 (m, 2H, H3 et H4) ; 4,2 (t, 1H, H5, 2J=6,4 Hz) ; 4,3 (d, 1 H, H2, 2JH_H=9,1) ; 4,4-4,5 (m, 1 H, CH(Lys)) ;
4,44 (d, 1 H, 5 OCHZPh, 2JH_H=12,1 Hz) ; 4,49 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=11,9 Hz) ; 4,5-4,6 (m, 1H, CH(Pro)) ; 4,55 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=11,3 Hz) ; 4,72 (s, 2H, OCH Ph) ; 4,76 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH-H=10,4 Hz) ; 4,84 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=10,4 Hz) ; 4,93 (d, 1H, OCHZPh, 2JH_H=11,3 Hz) ; 5,05 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=12,3 Hz) ; 5,07 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=9,3 Hz) ; 5,11 (d, 1H, OCHzPh, 2JH-H=9,3 Hz) ; 5,17 (d, 1H, 10 OCH2Ph, 2JH_H=12,4 Hz) ; 5,4 (, 1H, OH) ; 5,6 (d, 8,3Hz, 1H, ZNH) ; 7,1 (m, 1H, CONH) ; 7,3 (m, 30H, Haz) RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
21,6 (LH2) ; 24,9 (LH2) ; 27,9 (LH2) ; 28,9 (LH2) ; 32,1 (ÇHZ); 39,5 (LH2NH(Lys)) ; 47,2 (CH2N(Pro)) ; 52,1 (LH(Lys)) ; 59,0 (ÇH(Pro)) ; 66,9 et 67,2 (2OÇH2Ph) ;
15 68,2 (L6) ; 70,7 (C5) ; 73,2 et 73,5 (2OÇH2Ph); 74,3 (Ç4) ; 74,6 (Ç2) ;
74,9 et 75,4 (2OÇH2Ph) ; 80,5 (L3); 97,0 (t, L1, 1JC_F=27 Hz) ; 127,9; 128,0; 128,3; 128,4;
128,5 ; 128,6; 128,7; 128,8; 128,9 (3C) ;129,0 LQ,) ; 135,5; 136,5 ; 138,0;
138,4 ;138,8 (Car.quat) ; 156,0 (LONHZ)-164,0 (CF2CO); 170,7 et 1'72,2 (LONH
et C02) 20 M(ES+) : [M+H]+ = 1084,6 et [M+Na]+=1106,67 M(ES-) : [M-H]- = 1082,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 68,68 %H 6,23 %N 3,88 Expérimentale %C 68,53 %H 6,76 %N 3,62 Synthèse du composé 34 (Figure 25) 6, O O COZBn H
O C N
HO 5 1i N
z HO 4 3' ,~~~//OH O NH3+CI
oH 34 O CO2Bn HO H ~ N
HO HO/''%
3 Z OH 0 NH3+CP
H
Dans un ballon contenant le composé 33 (155 mg; 0,14 mmoi; léq) dissout dans le THF (5mL), L'acide chlorhydrique IN (175 pL; 0,19 mmol ; 1,2 éq), 5 puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d'hydrogène et agitée pendant 48 heures. Le milieu est filtré sur millipore puis concentré pour obtenir avec un rendement quantitatif le composé 34 sous la forme d'un solide blanc.
C19H32CIF2N3010 M=536,01 g.moi-1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,5 (d, JF_F=256Hz) ; -121,0 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF_F=257Hz).
RMN 'H(D20, 300 MHz) 1,45 (m; 2H; CH2); 1,60 (m; 2H; CH2) ; 1,89-1,92 (m; 2H; CH2) ; 2,01 (m; 3H;
CH2) ; 2,33 (m; 1H; CH2) ; 3,28-3,30 (m; 2H; NHCHZ(Lys)); 3,61-3,74 (m;
2H6',2H6;H4; H5, NHCH2(Pro), NCH'(Lys)) ;3,83 (dd, 2,9Hz et 9,9Hz, H3');
3,94-4,01 (m= H4',H5',H2'); 4,14 (t, 8,2Hz, H3); 4,31 (t, 5,8Hz, CH(Lys));
4,39 (d, 8,2Hz, H2); 4,38-4,51 (m, CH).
NMR13C (D20, 75,5 MHz) 21,3 (CH2) ; 25,0 (CHZ) ; 28,1 (CH2) ; 29,0 (ÇH2); 29,7 (ÇH2) ;
39,3(CH2N(Lys)) ; 48,0 (CH2(Pro)) ; 52,0 (CH(Lys)) ; 53,4 (ÇH'(Lys)) ; 59,9 (ÇH(Pro)) 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3') ; 70,9 (C5) ; 72,5 (C2') ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3 (t, 26Hz) et 98,8 (t, 29Hz) (Cl et C1'); 114 (t, 258Hz, CF2) ; 163,9 ( 2t, 28 Hz, CFZÇO) ;168,8;
170,7 et 173,2 (CO).
Synthèse du composé 35 (Figure 26) 6 Br Bn0 O CF2CO2Et BnO 4 3 ,~~OBn - OBn 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant difluoroester 5(989 mg ;
1,49 mmol : 1 éq.) en solution dans le dichlorométhane anhydre (7,5 mL) à
-30 C, on additionne goutte à goutte le SOBr2 (173 L ; 2,24 mmol ; 1,5 éq.).
Après 30 minutes, on introduit la pyridine (181 L ; 2,24 mmol ; 1,5 éq.). et on laisse sous agitation 30 minutes de plus à-30 C. Une solution d'HCI 2M
10 est ajoutée et la phase est extraite trois fois avec du dichlorométhane.
Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le produit 35 brut est obtenu sous forme de cristaux jaunes avec un rendement pondéral quantitatif sans purification supplémentaire.
15 C38H39BrF2O7 M= 725,61 g.mol-1 Rf : 0,54 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 19F (CDCI3, 282,5MHz) -107,5 (d, 249 Hz, 1 F) ; -111,9 (d, 249 Hz, 1 F) .
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 20 1,2 (t, 7,1 Hz, 3H, CH3); 3,7 (dd, 5,7 et 9,4Hz, 1 H, 1 H6) ; 3,8 (dd, 7,5 et 9,4 Hz, 1 H, 1 H6) ; 4,2 (m , 2H, H3 et H4); 4,2-4,3 (m, 2H, CH2) ; 4,3 (m, 1 H, H5) ; 4,5-5,1 (m, 9H, H2 et 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 20H, Har) RMN 13C (CDCI3,75,5MHz) 12,6 (CH3) ; 62,4 (CH2) ; .66,2 (C6) ; 72,0 (OCH2Ph) ; 72,1 (C4) ; 72,4 25 (OÇH2Ph) ; 73,6 (OCH2Ph) ; 73,7 (OÇH2Ph) ; 74,4 (C2) ; 74,5 (C5) ; 80,5 (C3) ; 102,4 (dd, 24 et 30 Hz, C1) ; 110,6 (tapp. , 264 Hz, ÇF2) ; 126,3;
126,4; 126,5; 126,6; 126,7; 126,8; 127,1 ; 127,2; 127,4 (Çar.) ; 136,5 ;
136,9 ; 137,2 ; 137,3 (Car. quat.) ; 160,1 (tapp., 33Hz, ÇOZEt).
Masse (ESI+) : 748,98 (M+Na) ; 774,88 (M+K).
Synthèse du composé 36 (Figure 27) O CF
Bn0 5 aCO2Et BnO 3 "I,///OBn OBn Dans un ballon contenant l'ester 35 (519mg ; 0,72 mmol ; 1 éq.) en solution dans le toluène anhydre (15 mL) sous atmosphère d'azote, on additionne goutte à goutte le Bu3SnH préalablement distillé (291 L ; 1,08 mmol ; 1,5 éq.). On chauffe reflux pendant 1 heure.
Le produit est concentré puis purifié sur colonne de silice (éluant cyclohexane/acétate d'éthyle 9,3/0,7) pour récupérer le produit 36 attendu sous la forme d'une huile incolore.
C38H40F207 M= 646,7 g.mol-1 RMN 19F (CDC13, 282,5MHz) -116 ,7 (dd, 12 et 259 Hz, 1 F) ;-118,2 (dd,10 et 259 Hz, 1 F) .
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 1,05 (t, 7,2Hz, 3H, CH3); 3,47-3,53 (m, 3H, 2H6, H5) ; 3,57 (dd, 2,6 et 9,4 Hz, 1 H, H3) ; 3,80-3,94 (m , 4H, H1, H4, CH2) ; 4,09 (tapp., 9,5Hz, 1 H, H?) ;
4,31 (d, 11,8Hz, 1 H, OCH2Ph) ; 4,37 (d, 11,8Hz, 1 H, OCH2Ph) ; 4,51 (d, 11,5Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,54 (d, 10,4Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,56 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,65 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,85 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ;
4,86 (d, 10,4Hz, 1 H, OCH2Ph) ;7,20 (m, 20H, Har) RMN13C (CDCI3,75,5MHz) 14,2 (CH3) ; 63,1 (CH2) ; 68,9 (C6) ; 72,8 (OCH2Ph) ; 73,6 (C4) ; 74,0 (OÇH2Ph) ; 74,1 (C2) ; 74,9 (OCH2Ph); 75,3 (OCH2Ph) ; 77,9 (tapp., 23Hz, C1) ; 78,2 (C5) ; 84,7 (C3) ; 113,9 (tapp. , 256Hz, CF2) ; 128,0-128,9 (Car.) ;
138,2 ; 138,3 ; 138,5 ; 139,0 (Car. quat.) ; 163,2 (tapp., 31 Hz, CO2Et).
Masse (ESI+) : 647,33 (M+H) ; 669,4 (M+Na).
Synthèse du composé 37 (Figure 28) Bn0 5 Bn0 3 ,""///OBn OBn Dans un ballon contenant l'ester 36 (0,4 g ; 0,618 mmol, 1 éq.) dans le THF
(5 mL) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (30 mg ; 1,25 mmol, 2,02éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N
puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées Le composé 37 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitatif.
C36H36 F207 M= 618,66g.mol-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,1 (d, JF_F=260Hz) ; -118,6 (d, JF_F=260Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 3,38-3,52 (m, 4H, 2H6, H5) ; 3,57 (dd, 2,6 et 9,4 Hz, 1H, H3) ; 3,79 (d 2,4Hz, 1 H, H4); 3,79-3,88 (m, 1 H, H1); 4,09 (t, 9,6Hz, 1 H, H2) ; 4,32 (d, 11,9Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,41 (d, 11,9Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,47-4,64 (m, 4H, 2OCH2Ph) ; 4,81-4,86 (m, 2H, OCH2Ph) ; 7,20 (m, 20H, Har) Synthèse du composé 38 (Figure 29) O F
BnO C N OCH2Ph ' N
BnO 4 g """/Ogn O PhOyNH O
oBn 38 0 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 37 (383 mg ;
0,619 mmol ; 1,0 éq.), le peptide déprotégé (379 mg ; 0,679 mmol ; 1,1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (92 mg ; 0,681 mmol ; 1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (204 L ; 1,8 mmol ; 2,9 éq.) dans le DMF (5 mL), l'EDCI (130 mg ; 0,678 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté. La réaction est laissée 10 sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M(2*15 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice 15 avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 38 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 53%.
C60H65F2N3011 M=1042,17 g.moi-' RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) 20 -112,5 (dd, J 7,5Hz et 260Hz) ; -119,6 (d, J14,5 et 260Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1,17-1,19 (m, 2H, CH2); 1,29-1,35 (m; 5H; CH3 ; CHZ); 1,44-1,66 (m; 2H;
CH2); 2,90-2,94 (m; 1H; NHCH2); 3,11-3,15 (m; 1H; NHCH2); 3,43-3,54 (m;
4H; H6, H3;H5); 3,87 (d, 2,6Hz, 1H, H4); 3,88-4,02 (m; 2H; CHNH(Lys); H1);
25 4,07 (t, 9,6Hz, H2); 4,36 (s, 2H, OCH2Ph); 4,46-4,52 (m; 3H; OCH2Ph ; CH
(Ala)); 4,61-4,66 (m, 2H, OCH2Ph) ; 4,77-4,87 (m, 2H, OCH2Ph); 5,0 (s; 2H;
OCH2Ph) ; 5,01-5,13 (m, 2H, OCH2Ph ) 5,35 (d; 7,5Hz, 1 H; ZNH); 6,38 (d;
7,1 ; 1 H; NH); 6,53 (Is, 1 H; NH) ; 7,2 (m; 30H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,4 (ÇH3) ; 22,4 (ÇH2) ; 28,8 (CHZ) ; 32,3 (ÇH2) ; 39,2 (CH2N) ; 48,6 (ÇH(Ala)) ; 54,9 (NÇH(Lys)) ; 67,4 et 67,6 (2OCH2Ph); 68,5 (C6) ; 73,1 (OÇH2Ph) ; 73,7 (C4) ; 73,8 (OÇH2Ph) ; 74,3 (C2) ; 75,1 (OCH2Ph);
75,4 (OÇH2Ph) ; 77,1 (tapp, C.1); 77,7 (C5); 84,4 (C3) ; 127,9 -129 (Çar.) ;
135,6; 136,6; 138,1 ;138,5 (2C) ;138,9 (Çar. quat.) ; 156,0 (CONH(Z)) ; 171,6 (ÇONH) ; 172,9 (ÇO2Bn).
Synthèse du composé 39 (Figure 30) O
6, H
F
HO O C N OH
5 l' N
2, H
HO 4 3 ,~~~OH O 39 NH3+CI- O
OH
Un ballon contenant le produit 38 (400 mg ; 0,384 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (5 mL) et d'HCI 1 N(576 L) et d'eau (1,5mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé
sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 39 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement quantitatif.
C17H30CIF2N309 M=493,88 g.mol-' RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -116,7 (ddd, J=257Hz,17,2Hz et 10,7Hz,) ; -119,6 (ddd, J=257Hz et 14Hz).
RMN'H (D20, 300 MHz) 1,32 (d; 7,3Hz; CH3) ; 1,31-1,34 (m, 2H, CH2); 1,43-1,52 (m; 2H; CH2); 1,75-1,83 (m; 2H; CH2) ; 3,14-3,18 (m; 2H; NHCH2); 3,42-3,61 (m; 4H, H6', H5', H3'); 3,72-3,79 (m; 2H H1',H2') ;3,82-3,90 (m, 2H, CH(Lys), H4'); 4,24-4,32 (m; CH(Ala).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 16,3 (CH3) ; 21,5 (ÇH2) ; 27,9 (CH2) ; 30,8 (ÇH2) ; 39,4 (CH2N); 49,1 (ÇH(Lys)) ; 53,2 (NÇH(Ala)) ; 61,3 (C6'); 66,1 (C2') ; 69,0 (C4') ; 74,0 (C5' ou C3 ) ; 77,3 (t, 24Hz, C1); 79,6 (C3' ou C5') ; 164,8 (d, 26Hz, CO); 169,9 et 176,3 (2Ç0).
Synthèse du composé 41 (Figure 31) O
Bn0 _ CF2CO2Et BnO\\,\`` 3 ""//OBn OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le zinc (3.34 g 51 mmol ;
7 éq.) préalablement activé, le THF (60 mL) est ajouté et le mélange est ainsi chauffé à reflux. La lactone 40 (3.94 g; 7.3 mmol ; 1 éq.) est lentement additionné avec le bromodifluoroacétate d'éthyle (2.83 mL; 22 mmol ; 3 éq.) dans le THF (60 mL). La réaction est agitée à reflux pendant 3 heures. Le mélange est refroidi à température ambiante et une solution d'HCI 1 M(120 mL) est ajoutée. On filtre le mélange sur Buchner pour éliminer le zinc en excès. On ajoute à la solution du dichlorométhane (40mL). On sépare les 2 phases et on extrait à nouveau deux fois la phase aqueuse au dichlorométhane. Les phases organiques sont séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu est purifié sur colonne chormatographique sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2) comme éluant afin d'isoler le produit 41 pur sous forme d'une huile incolore avec un rendement de 75%.
Cs8H4oF20s M= 662,72 g.mol-1 Rf = 0.35, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2).
RMN 19F (CDCI3 28, 2MHz) -117.7 (d, 1 F, 2JF_F 256.4), -120.1 (d, 1 F, 2JF_F 256.4).
RMN 'H (CDCI3 300MHz 1.30 (t, 3H, 3J7.1, CH3), 3.63-3.81 (m, 3H, H3, H6), 4.01-4.10 (m, 2H, H4, H5), 4.16 (s, 1H, H2), 4.29 (q, 2H, 3J 7.1, CH2), 4.50-4.81 (m, 4H, 2OCH2Ph), 4.85-4.92 (m, 4H, 2OCH2Ph), 7.21-7.38 (m, 20H, HAr).
RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 14.3 (CH3), 63.7 (ÇH2), 68.6 (C6), 73.0 (C2), 73.8 (OCH2Ph), 75.5 (OÇH2Ph), 75.7 (OÇH2Ph), 76.4 (OCH2Ph), 77.8 (C3), 78.6 (C4), 83.7 (C5), 96.5 (t, 2Jc_F
25.5, C1), 128.0 (2C), 128.1 (2C), 128.1, 128.2, 128.3 (2C), 128.6, 128.7 (2C), 128.8 (2C), 128.8 (2C), 128.9 (2C) (Car.), 137.9, 138.3, 138.7, 138.7 (Car.quat.),163.3 (t, 2Jc_F 30.3, CO).
Synthèse du composé 42 (Figure 32) Bn0 5 BnO\\\\`"4 3 ~""//OBn OBn 42 Dans un ballon contenant l'ester 41 (615 mg ; 0,93 mmol ; 1 eq.) dans le THF
(5 mL) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (2M, 2 éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le composé 42 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement 90%.
C36H36 F208 M= 634,66g.mol"1 Rf = 0,50; éluant : DCM / methanol (9 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,2 (d, 1 F, 2JF_F 259Hz); -119,0 (d, 1 F, 2JF-F259HZ).
RMN 'H(CDCI3, 300 MHz) 3,4-3,5 (m, 2H, H3, 1 H6); 3,5-3,6 (m, 1H, 1 H6); 3,9 (m, 2H, H4, H5); 4,0 (m, 1H, H2); 4,4 (m, 8H; 4OCH2Ph); 6,1 (s, 2H, OH, COOH); 7,0-7,3 (m, 20H, HAr) =
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 68,0 (C6) ; 71,4 (C2) ; 73,0; 74,9; 75,1 ; 75,9; 77,2 (C3) ; 77,9 (C4) ; 82,1 (C5) ; 94,9 (t, 2JcF 27, C1) ; 126,6; 126,7; 126,9; 127,0; 127,0; 127,3;
127,3 ; 127,4 ; 127,5 (Ç ar.); 135,6 ; 136,2 ; 136,4 ; 137,1 (Çar.quat.).
Synthèse du composé 43 (Figure 33) F
O N OCH2Ph BnO C
5 ~ N
y BnO~~\I`` 4 3 ~~"//OBn O PhO NH O
Bn 43 0 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 42 (383 mg ;
0,603 mmol ; 1 éq.), le peptide précédemment déprotégé (370 mg ;
0,664 mmol ; 1,1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,090 g;
0,664 mmol ; 1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,198 mL; 1,8 mmol;
3 éq.) dans le DMF (10 mL), l'EDCI (127 mg ; 0,664 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M (2*20 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 43 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 43%.
C60H65F2N3012 M=1058,17 g.mol-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -116,8 (d, JF_F=260Hz) ; -122,3 (d, JF_F=259Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1,18-1,68 (m; 9H; CH3; 3CH2); 3,00-3,05 (m; 1H; NHCH2); 3,21-3,26 (m; 1H;
NHCH2); 3,54-3,69 (m; 3H; H4, H6); 3,81 (d; 1 H; 9,3Hz, H2) ; 3,94 (t, 9,2Hz, 2H, H5, H3); 4,0 (m; 1 H; CHNH(Lys);); 4,34-4,50 (m; 4H; OCH2Ph ; CH
5 (Ala)); 4,71-5,13 (m; 9H; OCH2Ph) ; 5,2 (s; 1H, OH); 5,40 (d; 7,8 ; 1H; NH);
6,4 (m ; 1 H; NH) ; 6,9 (s; 1 H; NH); 7,2 (m; 30H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,1 (CH3) ; 22,4 (ÇH2) ; 28,4 (CH2); 32, (CH2) ; 39, (ÇH2N) ; 48,7 (ÇH(Ala)) ; 54,8 (NCH Lys) ; 67,4 et 67,7 (2OÇH2Ph); 68,8 (C6) ; 72,0 (C5) ;
10 73,8 (OCH2Ph) ; 75,4 (OCH2Ph); 75,7 (OCH2Ph) ; 76,4 (OÇH2Ph); 77,8 (C4) ; 78,7 (C2) ; 83,5 (C3); 128,2 -129,0 (Çar.) ; 135,6; 136,6;
138,0 ;138,2 ;138,4 138,7 (Car. quat.) ; 156,5 (CO(Z)) ; 171,5 (ÇONH) ;
173,1 (ÇO2Bn).
Synthèse du composé 44 (Figure 34) 6, OH
F
HO O CZ N OH
5 ë ~ N
H
HO~~~~ '4 OH O NH3*CP O
HO HO H \/
I(~I N
H
3 OH 0 NH3+CI' 0 OH
Un ballon contenant le produit 43 (220 mg ; 0,208 mmol) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (3 mL) , d'HCI 1 N(312 L) et d'eau (environ 1,7mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 44 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 97%.
C17H30CIF2N301o M=509,88 g.mol-1 RMN 19F (DZ0, 282,5 MHz) -119,9 (s) ; -119,9 (s) RMN 'H (D20, 300 MHz) 1,33 (m; 5H; CH2 et CH3) ; 1,48 (m; 2H; CH2); 1,80 (m; 2H; CH2) ; 3,17 (m;
2H; NHCH2); 3,29-3,63 (m;2H6, H4 HS,CH, H3; H2); 4,3 (m; CH).
Résultats de préservation de cellules Expérience 1 Introduction:
Les expériences ont été réalisées afin de démontrer l'efficacité du composé
11 contre les expositions aux UV.
Résultats: (Figures 35) Dans les expériences suivantes, les études ont été réalisées à 37 C sur des fibroblastes primaires adultes de la peau. Les cellules ont été exposées à
une irradiation sous UV-C pendant 2 heures en présence des dérivés d'AAGP.
Protocolës ex rim ~~~"~ pe entaux sur les Fibroblastes Températures utilisées 37 C
Type de cellules fibroblastes adultes primaires de la peau Pour ces expériences, un milieu sans sérum avec 0.5mM EDTA a été
utilisé. Les cellules ont été exposées Conditions de culture sous UV-C (254nm) pendant 2 heures à température ambiante, puis placées à 37 C pendant la durée de l'expérience.
- A 0, 6, 18, 48, 72 jours après Temps d'échantillonnage exposition UV pour AAGP-11 Composés AAGP - AAGP-15 Concentration AAGP - 8.6mM
Lors de ces expériences, nous constatons que le composé AAGP-15 présente d'excellentes propriétés protectrice.
Résultats Ex érimentaux Température Résultats Préliminaires Commentaires - Après 3 jours, le composé
Après 72 heures, toutes les AAGP-11 montre un très haut ellules du contrôle sont niveau de protection des mortes alors qu'avec AAGP- cellules face aux UV.
11, on observe encore 92% Après 4 jours, on trouve 37 C e cellules vivantes (Figure encore 60% de cellules 35). vivantes avec AAGP-11, alors que toutes sont presque mortes dans le contrôle (ne figure pas sur le graphe) Expérience 2 Introduction:
Dans l'expérience suivante, le but est de tester l'activité préservatrice des composés AAGP 11 à basses températures.
Résultats: (Figures 36) Les cellules sont ainsi incubées à-3 C en présence du composé AAGP 11.
Protocoles ex érimentaux sur IesFibroblastes Températures utilisées - A -3 C
Type de cellules - fibroblastes adultes primaires de la peau - Pour ces expériences, un milieu sans sérum Conditions de culture avec 0.5mM EDTA a été utilisé.
Les cellules ont été incubées à-3 C.
Temps d'échantillonnage - A 0, 1, 2, 4, et 6 jours Composés AAGP - AAGP-11 Concentration AAGP - 8.6mM
De la même façon lors de cette expérience, on observe une très forte activité
de préservation d'AAGP-11 sur les fibroblastes à basses températures.
Résultats Expérimentaux Température Résultats préliminaires Commentaires Après 6 jours, les cellules du - AAGP-11 montre dans ontrôle sont toutes mortes alors ces résuitats une très forte -3 C ue celles traitées par AAGP-11 activité de préservation présentent environ 100% de des cellules.
survie (Figure 36).
Expérience 3 Des études ont été réalisées sur des cellules HELA, soumises à des UVC, en présence des différents composés synthétisés, à faible concentration.
On obtient de très bons résultats pour le composé 11, mais au vue des figures 37, 38 et 39, d'autres dérivés donnent une amélioration de la survie de ces cellules par rapport au contrôle. C'est le cas des composés : 39, 22, 30 et 34.
Par contre, les composés 26, 12 et 44 donnent, quant à eux, de moins bons résultats que le contrôle.
17,8 (ÇH3) ; 26,3 (ÇH2) ; 28,5 (C(ÇH3)3) ; 30,5 (ÇHZ) ; 39,2 (ÇH2NH) ; 48,5 (ÇH(Ala)) ; 53,6 (ÇH(Orn)) ; 67,3 et 67,5 (2 OÇH2Ph) ; 79,4 (Ç(CH3)3 ; 128,2;
30 128,3 (2C); 128,5; 128,6; 128,7 (Çar) ; 135,5; 136,4 (Çar.quat) ; 156,4 et 156,8 (ZCO et BocÇO); 171,8 et 172,5 (ÇONH et C02) M(ES+) :[M+H]+=528,87 ;[M+Na]+=551,00 ;[M+K]+=566,73 ;[2M+Na]+=1077,5 et [2M+K]+=1093,13 Synthèse du composé 25 (Figure 18) O
ZHN~NCO Bn = H 2 ~HCF2 NH
BnO ~ 25 6 V~2à
BOBn O
OOBn Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 24 (563 mg 0,80 mmol ;1 éq) dissout dans le dichlorométhane (11 mL), I' acide trifluoroacétique (1,9 mL ;25,7 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis coévaporé 4 à 5 fois au toluène . Le résidu est trituré au tert-butylméthylether et enfin filtré et le peptide déprotégé est obtenu avec un rendement de 72%.
Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6 (508 mg ; 0,80 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (433 mg ; 0,80 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (8 mL), sont ajoutés I' HOBT (119 mg ; 0,88 mmol ; 1,1 éq) puis la NMM (220 pL; 2,00 mmol; 2,5 éq). Puis après 15 minutes, I' EDCI (169 mg; 0,88 mmol; 1,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures.
Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase acqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromotographié sur colonne de silice pour conduire au composé 25 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 27%.
C59H63F2N3012 M=1044,17 g.mol-1 Rf=0,44 (Eluant Cyclohexane/Acétate d' éthyle 50/50) RMN '9F (CDCI3), 282,5MHz:
-117,7 (d, 2JF-F=260Hz) ; -120,3 (d, 2JF-F=260Hz) RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,33 (d, 3H, CH , 3JH-H=7,3Hz) ; 1,41-1,49 (m, 2H, CH ); 1,73-1,81 (m, 2H, CH
3,0 (m, 1H, CH NH) ; 3,47-3,64 (in, 3H, 2H6 et CH NH) ; 3,93-3,96 (m, 2H, H3 et H) ; 4,18 (t, 1H, H5~ 3JH5-H6=6,5Hz) ; 4,36 (d, 1H, H, 3JH2-H3=9,5 Hz) ; 4,39-4,54 (m, 4H, CH(Orn), CH(Ala) et OCH2Ph) ; 4,59 (d, 1H, OCHPh, 2JH-H=11,4 Hz) ;
4,75 (s, 2H, OGH Ph) ; 4,80 (d, 1H, OCHPh, 2JH_H=10,3 Hz) ; 4,89 (d, 1H, OCH Ph, 2JH-H=10,3 Hz) ; 4,96 (d, 1H, OCH Ph, 2JH-H=11,4 Hz) ; 5,07 (s, 2H, OCH Ph) ; 5,11 (s, 2H, OCHPh) ; 5,2 (s, 1H, OH) ; 5,53 (d, 8,1Hz, 1H, ZNII ;
6,7 (d, 7,2Hz, 1H, NH); 7,1 (m, 1H, NI-I ; 7,27-7,34 (m, 30H, H~) RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
17,6 (ÇH3) ; 24,8 (ÇH2) ; 30,0 (ÇH2) ; 37,9 (ÇH2N) ; 48,3 (ÇH(Ala)) ; 52,3 (ÇH(Orn)) ; 67,0 et 67,3 (2 OCH2Ph) ; 68,4 (Ç6) ; 70,7 (Ç5) ; 73,2 et 73,4 (2 OÇH2Ph) ; 74,0 (Ç4) ; 74,7 (OÇH2Ph) ; 74,7 (C ) ; 75,5 (OÇH2Ph) ; 80,7 (C ) ;
96,7 (t, Çi 1Jc-F=27,6 Hz) ; 127,7; 127,8; 128,1 (2C); 128,2; 128,3; 128,4; 128,5;
128,6 (3C); 128,7 (Çar) ; 135,4; 136,4; 137,7; 137,9; 138,3; 138,6 (Çquat) ; 156,3 (ZNHÇO) ; 164,3 (t, CF2ÇO, ZJC-F=28,2Hz) ; 171,6 et 173,2 (ÇONH et Ç02) M(ES+) :[M+H]+ = 1044,33 et [M+Na]+=1066,47 et [M-H2O]+=1026,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 67,87 %H 6,08 %N 4,02 Expérimentale %C 67,96 %H 6,39 %N 3,46 Synthèse du composé 26 (Figure 19) 6, OH
O C F OH
N N
H
HO y 2 NH3+CI- O
HO 4 ~~~~~~OH 0 3' "
O FZ H OH
C` /N N
HO ~I/
HO HO/sO
NH3'CI' 0 5 3 OH p 6 " H OH
Dans un ballon contenant le composé 25 (104 mg; 0,0996 mmol; léq) dissout dans le THF (10 mL), l'acide chlorhydrique 1N (0,13 mL; 0,129 mmol ; 1,3 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d' hydrogène et agitée pendant 48 heures.
Le milieu est filtré sur millipore puis concentré et le composé 26 est obtenu sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement de 97%.
C16H28CIF2N3010 M=495,86 g.mol-1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,6 (d, JF_F=256Hz) ; -121,0 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,1 (d, JF_F=257Hz).
RMN 1 H(D2O, 300 MHz) 1,43 (d; 6,7Hz; CFI3) ; 1,66-1,78 (m; 2H; CH2); 1,92 (m; 2H; CH2) ; 3,34 (m;
2H; NHCH2); 3,64-3,71 (m; 2H6',2H6); 3,75-3,77 (m; H4 H5) ;3,83-3,86 (m, H3') 3,99-4,03 (m; CH(Orn),H4',H5',H2'); 4,16 (t, 7,5Hz, H3); 4,4-4,43 (m;
CH, H2).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 16,2 (CH3) ; 20,8 (ÇH2) ; 23,8 (CH2) ; 39,0 (CH2N) ; 49,1 (CH(Ala)) ; 53,2 (ÇH(Orn)) ; 61,1 (C6') ; 62,5 (C6) ; 67,0 (C5') ; 69,0 (C4') ; 70,6 (C3') ;
71,0 (C5) ; 72,5 (C2') ; 74,0 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3 et 98,8 (Cl et C1');
113,9 et 117,4 (ÇF2) ; 169,6 et 176,3 (CO).
M(ES+) : : [M+H]+ = 461,2 et [M+Na]+=483,3 et [M-H2O]+=441,3 Synthèse du composé 28 (Figure 20) PhO OCHpPh \\H~
O O
NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lys(Boc)-OH 8(1,90 g; 5,00 mmol; léq) dissout dans le dichlorométhane (25 mL), le carbonyldiimidazole (973 mg; 6,00 mmol; 1,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI"
+H3N-Gly-OBn 27 (1,00 mg ; 5,00 mmol ; léq) et de DIEA (1,7 mL; 10,50 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (25 mL). Ce mélange est agité
pendant 12 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N, puis la phase aqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées.
Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d' éthyle 50/50) pour obtenir le composé 28 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 89%.
C28H37N307 M=527,62g.mol-1 Rf : 0,41 (Acétate d' éthyle).
RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,40 (s, 13H, C(CH )3, 2CH ,); 1,67 (m, 1H, CH ); 1,82 (m, 1H, CH:?) ; 3,07 (m, 2H, CH NH(Lys)) ; 4,04 (m, 2H, CH (G1y)) ; 4,21-4,23 (m, 1H, CH(Lys)) ; 4,71 (m, 1H, BocNH) ; 5,08 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,16 (s, 2H, OCH Ph) ; 5,66 (d, 7,3Hz, 1H, ZNI-I ;
6,85 (m, 1H, NH) ; 7,30 (m, 10, Har).
RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
22,4 (ÇH2) ; 28,5 (C(CH3)3) ; 29,7 (LH2) ; 32,0 (ÇH2) ; 39,8 (ÇH2NH(Lys)) ;
41,1 (ÇH2NH(Gly)) ; 54,8 (LH(Lys)) ; 67,2 et 67,3 (OCH2Ph) ; 79,3 (Ç(CH3)3) ;
128,2;
128,3; 128,5; 128,6; 128,7 (3C) (Ç~ ); 135,2; 136,2 (Çquat) ; 156,4 (_CO);
169,67 et 172,3 (ÇONH et C02) M ES+ :[M+H]+ = 528,53 et [M+Na]+=550,53 et [M+K]+=566,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 63,74 %H 7,07 %N 7,96 Expérimentale %C 63,71 %H 7,03 %N 7,85 Synthèse du composé 29 (Figure 21) _ F
BnO O C N OCH2Ph Bn0 4 g ""//iOBn O PhO NH O
joBn 29 0 Déprotection du peptide 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 28 (2,04 g ; 3,87 mmol ; léq) dissout dans le dichlorométhane (32 mL), l' acide trifluoroacétique (5,7 mL ;77,3 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis co-évaporé 4 à 5 fois au toluène pour conduire au peptide déprotégé avec un rendement 10 quantitatif.
Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 6(317mg ; 0,50 mmol ; 1éq) le peptide précédemment déprotégé (271 mg ; 0,50 mmol ; 1éq) dans le diméthylformamide (5 mL), sont ajoutés I' HOBT (74 mg ; 0,55 15 mmol ; 1,1 éq) puis la NMM (137 pL; 1,25 mmol ; 2,5 éq). Puis une fois après 15 minutes, I' EDCI (105 mg; 0,55 mmol; 1,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures. Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N. La phase aqueuse est extraite trois fois au 20 dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromotographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour conduire au composé 29 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 47%.
25 C59H63F2N3012 M=1044,17 g.mol-' Rf=0,47 (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) RMN 19F (CDCI3), 282,5MHz :
-116,6 (d, 2JF_F=260Hz) ; -122,1 (d, 2JF_F=261Hz) RiyIN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,30-1,81 (m, 6H, 3CH ); 3,05-3,11 (m, 1H, CH NH(Lys)) ; 3,31-3,38 (m, 1H, CH2NH(Lys)) ; 3,55 (d, 2H, H6, 2J=6,2 Hz) ; 3,86-4,04 (m, 4H, H, H4 et CH2(Gly));
4,16-4,20 (m, 2H, 115 et CH(Lys)) ; 4,33 (d, 1H, H2, 3JH2_H3=10,0Hz) ; 4,44 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=12,0 Hz) ; 4,49 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=12,0 Hz) ; 4,57 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=11,2Hz) ; 4,74 (s, 2H, OCII Ph) ; 4,79 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_ H=10,3Hz) ; 4,87 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=10,3Hz) ; 4,97 (d, 1H, OCHZPh, 2JH_ H=11,2Hz) ; 5,12 (s, 2H, OCH2Ph) ; 5,17(s, 2H, OCHPh) ; 5,53 (d, 1H, NHZ, 3JH_ H=7,4Hz) ; 6,57 (m, 1H, NH(Gly)) ; 6,93 (m, 1H, NH) ; 7,28-7,35 (m, 30H, IIar) RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
21,9 (ÇH2) ; 28,2 (ÇHZ) ; 31,8 (CH2) ; 38,9 (ÇH2NH(Lys)) ; 41,4 (LH2(Gly)) ;
54,4 (ÇH(Lys)) ; 67,2 et 67,4 (2OÇH2Ph) ; 68,3 (Ç6) ; 70,7 (Ç5) ; 73,2 et 73,4 (OÇHZPh) ;
74,1 (Ç4) ; 74,6 (Çz) ; 74,8 et 75,5 (OÇH2Ph) ; 80,6 (C ) ; 96,9 (t, C1, 1Jc_F=27Hz) ;
127,6; 127,8 (2C); 128,0; 128,1; 128,2; 128,3 (3C); 128,4; 128,5; 128,6 (2C);
128,8 (Ç~) ; 135,2; 136,3; 137,9 (2C); 138,4; 138,6 (Çquat) ; 156,2 (ZNHCO) ; 163,9 (t, CF2ÇO, 2JC_F=27Hz) ; 169,9 et 172,0 (NHÇO et Ç02) M ES+ : [M+H]+ = 1045,4 et [M+Na]+=1067,53.
Analyse élémentaire : Théorique %C 67,87 %H 6,08 %N 4,02 Expérimentale %C 67,80 %H 6,03 %N 3,99 Synthèse du composé 30 (Figure 22) 6, OH
HO 4 3' j/OpH 0 NH3+CI' O
O -H
HO H
H~s~ ~ {N
HO
5 3 2 pH 0 NH3*CI' 0 Dans un ballon contenant le composé 29 (104 mg; 0,0996 mmol; léq) dissout dans le THF 3mL, l'acide chlorhydrique 1N (1,3 mL; 0,128 mmol ;
1,3 éq), puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d'hydrogène et agitée pendant 48 heures.
Le milieu est filtré sur millipore puis concentré. Le composé 30 est obtenu sous la forme d'un solide jaune pâle avec un rendement de 98%.
C16H28CIF2N3010 M=495,86 g.mol-1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,5 (d, JF_F=256Hz) ; -120,9 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF_F=257Hz).
RMN 'H (D20, 300 MHz) 1,41-1,46 (m; 2H; CH2); 1,53-1,60 (m; 2H; CH2) ; 1,85-1,92 (m; 2H; CH2) 3,27 (m; 2H; NHCH2(Lys)); 3,57-3,74 (m; 2H6',2H6;H4; H5) ;3,83 (dd, 2,9Hz et 9,3Hz, H3'); 3,95-4,04 (m; CH2,CH H4',H5',H2 ); 4,14 (t, 8,3Hz, H3); 4,39 (d, 8Hz, H2).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 21,6 (CH2) ; 28,0 (CH2) ; 30,6 (CH2) ; 39,3(ÇH2N(Lys)) ; 41,4 (ÇH2(Gly)) ;
53,4 (ÇH(Lys)) ; 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3 ) ;
70,9 (C6) ; 72,5 (C2') ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3(t, 26Hz) et 98,8 (t, 29Hz) (C1 et C1'); 114,0 et 117,4 (ÇF2) ; 163,9 (t, 28 Hz, CF2CO) ;170,7 et 173,2 (2Ç0).
M(ES+) : : [M+H]+ = 461,2 et [M+Na]+=483,3 et [M-H2O]+=441,3 Synthèse du composé 32 (Figure 23) 0 Co2Bn Pho N
o NHBoc Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Z-Lys(Boc)-OH 8(760 mg; 2,00 mmoi; léq) dissout dans le dichlorométhane (20 mL), le carbonyidiimidazole (389 mg; 2,40 mmol; 1,2 éq) est ajouté par petites portions. Le milieu est agité pendant une heure. Puis sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du CI-+HN-Pro-OBn 31 (483 mg ; 2,00 mmol; léq) et de DIEA (690 pL; 4,20 mmol ; 2,1 éq) dans le dichlorométhane (20 mL). Ce mélange est agité
pendant 12 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N, puis la phase aqueuse obtenue est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées, puis concentrées. Le brut est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour conduire au composé 32 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 29%.
C31 H41 N307 M=567,69 g.mol-1 Rf : 0,51 (Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50).
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) :
1,3 (s, 9H, (CH3)3) ; 1,4-2,2 (m, 10H, 3 CH2 Lys et 2 CH2 Pro); 3,0 (m, 2H, CH2NH(Lys)); 3,5 (m, 1H, CHgN(Pro)); 3,6 (m, 1H, CH2N(Pro)); 4,4 (m, 1H, CH(Lys)); 4,5 (m, 1H, CH(Pro)); 4,9 (d, 6,5Hz, NHBoc), 4,97 (s, 2H, OCH2Ph); 4,9 (m, 1 H, OCH2Ph); 5,09 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=12,3 Hz); 5,8 (d, 7,6Hz, 1H, ZNH); 7,2 (m, 10H, Har) RMN 13C (CDCI3, 75,5MHz) :
21,8 (ÇH2) ; 24,7 (CH2) ; 28,3 (C(ÇH3)3) ; 28,7 (CH2) ; 29,2 (ÇH2) ; 31,8 (ÇH2) ; 39,8 (ÇH2NH(Lys)) ; 46,8 (ÇH2N(Pro)) ; 52,0 (ÇH(Lys)); 58,7 (ÇH(Pro)) ; 66,6 et 66,7 (OÇH2Ph) ; 78,6 (Ç(CH3)3 ; 127,8; 127,9; 128,0;
128,1; 128,3; 128,4 (Car) ; 135,4; 136,3 (Cquat) ; 155,9 et 156,0 (COZ et CO
Boc) ; 170,7 (ÇONH) ; 171,6 (CO2Bn) M(ES+) : [M+H]+=568,33 ; [M+Na]+=590,40 ; [M+K]+=560,27 Synthèse du composé 33 (Figure 24) OH O COZBn Bn0 5 N
4 2/i/j O Ph O NH `--~
Bn0 3 OBn OBn 33 O
Déprotection du peptide Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le peptide 32 (318 mg ;
0,56 mmol ;1 éq) dissout dans le dichlorométhane (6 mL), I' acide trifluoroacétique (833 pL; 11,22 mmol; 20 éq) est ajouté. La solution est agitée pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est concentré puis coévaporé 4 à 5 fois au toluène pour conduire quantitativement au peptide déprotégé.
Couplage Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant I' acide 6 (368mg ; 0,58 mmol ; léq) le peptide précédemment déprotégé (339 mg ; 0,58 mmol; léq) dans le diméthylformamide (6 mL), sont ajoutés I' HOBT (87 mg ; 0,64 mmol ; 1,1 éq) puis la NMM (192 pL; 1,75 mmol; 3 éq). Puis après environ 15 minutes, I' EDCI (123 mg; 0,64 mmol; 1,1 éq) est introduite. La solution est agitée pendant 48 heures. Le solvant est évaporé. Le résidu est repris au dichlorométhane puis hydrolysé avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N.
La phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques, une fois rassemblées sont séchées sur MgSO4, filtrées puis concentrées. Le brut ainsi obtenu est chromatographié sur colonne de silice (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) pour obtenir le composé 33 sous forme de solide blanc avec un rendement de 29%.
C62H67F2N3012 M=1083,83 g.mol-1 Rf=0,60 (Eluant Cyclohexane/Acétate d'éthyle 50/50) RMN 19F (CDCl3; 282,51VIHz) :
-116,1 (d, JF-F=259 Hz) ;-122,9 (d, JF_F= 259 Hz) RMN 1H (CDC13, 300 MHz) :
1,2-1,9 (m, 10H, 3CH (Lys) et 2CH (Pro)) ; 3,1 (m, 1H, CH NH(Lys)) ; 3,3 (m, 1H, CH NH(Lys)) ; 3,5 (m, 4H, H6 et CH N(Pro)) ; 4,0 (m, 2H, H3 et H4) ; 4,2 (t, 1H, H5, 2J=6,4 Hz) ; 4,3 (d, 1 H, H2, 2JH_H=9,1) ; 4,4-4,5 (m, 1 H, CH(Lys)) ;
4,44 (d, 1 H, 5 OCHZPh, 2JH_H=12,1 Hz) ; 4,49 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=11,9 Hz) ; 4,5-4,6 (m, 1H, CH(Pro)) ; 4,55 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=11,3 Hz) ; 4,72 (s, 2H, OCH Ph) ; 4,76 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH-H=10,4 Hz) ; 4,84 (d, 1H, OCH Ph, 2JH_H=10,4 Hz) ; 4,93 (d, 1H, OCHZPh, 2JH_H=11,3 Hz) ; 5,05 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=12,3 Hz) ; 5,07 (d, 1H, OCH2Ph, 2JH_H=9,3 Hz) ; 5,11 (d, 1H, OCHzPh, 2JH-H=9,3 Hz) ; 5,17 (d, 1H, 10 OCH2Ph, 2JH_H=12,4 Hz) ; 5,4 (, 1H, OH) ; 5,6 (d, 8,3Hz, 1H, ZNH) ; 7,1 (m, 1H, CONH) ; 7,3 (m, 30H, Haz) RMN 13C (CDC13, 75,5 MHz) :
21,6 (LH2) ; 24,9 (LH2) ; 27,9 (LH2) ; 28,9 (LH2) ; 32,1 (ÇHZ); 39,5 (LH2NH(Lys)) ; 47,2 (CH2N(Pro)) ; 52,1 (LH(Lys)) ; 59,0 (ÇH(Pro)) ; 66,9 et 67,2 (2OÇH2Ph) ;
15 68,2 (L6) ; 70,7 (C5) ; 73,2 et 73,5 (2OÇH2Ph); 74,3 (Ç4) ; 74,6 (Ç2) ;
74,9 et 75,4 (2OÇH2Ph) ; 80,5 (L3); 97,0 (t, L1, 1JC_F=27 Hz) ; 127,9; 128,0; 128,3; 128,4;
128,5 ; 128,6; 128,7; 128,8; 128,9 (3C) ;129,0 LQ,) ; 135,5; 136,5 ; 138,0;
138,4 ;138,8 (Car.quat) ; 156,0 (LONHZ)-164,0 (CF2CO); 170,7 et 1'72,2 (LONH
et C02) 20 M(ES+) : [M+H]+ = 1084,6 et [M+Na]+=1106,67 M(ES-) : [M-H]- = 1082,27 Analyse élémentaire : Théorique %C 68,68 %H 6,23 %N 3,88 Expérimentale %C 68,53 %H 6,76 %N 3,62 Synthèse du composé 34 (Figure 25) 6, O O COZBn H
O C N
HO 5 1i N
z HO 4 3' ,~~~//OH O NH3+CI
oH 34 O CO2Bn HO H ~ N
HO HO/''%
3 Z OH 0 NH3+CP
H
Dans un ballon contenant le composé 33 (155 mg; 0,14 mmoi; léq) dissout dans le THF (5mL), L'acide chlorhydrique IN (175 pL; 0,19 mmol ; 1,2 éq), 5 puis une pointe de spatule de Pd/C sont ajoutés. Le solution est placée sous atmosphère d'hydrogène et agitée pendant 48 heures. Le milieu est filtré sur millipore puis concentré pour obtenir avec un rendement quantitatif le composé 34 sous la forme d'un solide blanc.
C19H32CIF2N3010 M=536,01 g.moi-1 RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -119,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,5 (d, JF_F=256Hz) ; -121,0 (d, JF_F=257Hz) ;
-122,0 (d, JF_F=257Hz).
RMN 'H(D20, 300 MHz) 1,45 (m; 2H; CH2); 1,60 (m; 2H; CH2) ; 1,89-1,92 (m; 2H; CH2) ; 2,01 (m; 3H;
CH2) ; 2,33 (m; 1H; CH2) ; 3,28-3,30 (m; 2H; NHCHZ(Lys)); 3,61-3,74 (m;
2H6',2H6;H4; H5, NHCH2(Pro), NCH'(Lys)) ;3,83 (dd, 2,9Hz et 9,9Hz, H3');
3,94-4,01 (m= H4',H5',H2'); 4,14 (t, 8,2Hz, H3); 4,31 (t, 5,8Hz, CH(Lys));
4,39 (d, 8,2Hz, H2); 4,38-4,51 (m, CH).
NMR13C (D20, 75,5 MHz) 21,3 (CH2) ; 25,0 (CHZ) ; 28,1 (CH2) ; 29,0 (ÇH2); 29,7 (ÇH2) ;
39,3(CH2N(Lys)) ; 48,0 (CH2(Pro)) ; 52,0 (CH(Lys)) ; 53,4 (ÇH'(Lys)) ; 59,9 (ÇH(Pro)) 61,1 (C6') ; 62,6 (C6) ; 67,1 (C5') ; 68,9 (C4') ; 70,6 (C3') ; 70,9 (C5) ; 72,5 (C2') ; 73,9 (C3) ; 75,5 (C2) ; 80,2 (C4) ;96,3 (t, 26Hz) et 98,8 (t, 29Hz) (Cl et C1'); 114 (t, 258Hz, CF2) ; 163,9 ( 2t, 28 Hz, CFZÇO) ;168,8;
170,7 et 173,2 (CO).
Synthèse du composé 35 (Figure 26) 6 Br Bn0 O CF2CO2Et BnO 4 3 ,~~OBn - OBn 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant difluoroester 5(989 mg ;
1,49 mmol : 1 éq.) en solution dans le dichlorométhane anhydre (7,5 mL) à
-30 C, on additionne goutte à goutte le SOBr2 (173 L ; 2,24 mmol ; 1,5 éq.).
Après 30 minutes, on introduit la pyridine (181 L ; 2,24 mmol ; 1,5 éq.). et on laisse sous agitation 30 minutes de plus à-30 C. Une solution d'HCI 2M
10 est ajoutée et la phase est extraite trois fois avec du dichlorométhane.
Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le produit 35 brut est obtenu sous forme de cristaux jaunes avec un rendement pondéral quantitatif sans purification supplémentaire.
15 C38H39BrF2O7 M= 725,61 g.mol-1 Rf : 0,54 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2).
RMN 19F (CDCI3, 282,5MHz) -107,5 (d, 249 Hz, 1 F) ; -111,9 (d, 249 Hz, 1 F) .
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 20 1,2 (t, 7,1 Hz, 3H, CH3); 3,7 (dd, 5,7 et 9,4Hz, 1 H, 1 H6) ; 3,8 (dd, 7,5 et 9,4 Hz, 1 H, 1 H6) ; 4,2 (m , 2H, H3 et H4); 4,2-4,3 (m, 2H, CH2) ; 4,3 (m, 1 H, H5) ; 4,5-5,1 (m, 9H, H2 et 4OCH2Ph) ; 7,2 (m, 20H, Har) RMN 13C (CDCI3,75,5MHz) 12,6 (CH3) ; 62,4 (CH2) ; .66,2 (C6) ; 72,0 (OCH2Ph) ; 72,1 (C4) ; 72,4 25 (OÇH2Ph) ; 73,6 (OCH2Ph) ; 73,7 (OÇH2Ph) ; 74,4 (C2) ; 74,5 (C5) ; 80,5 (C3) ; 102,4 (dd, 24 et 30 Hz, C1) ; 110,6 (tapp. , 264 Hz, ÇF2) ; 126,3;
126,4; 126,5; 126,6; 126,7; 126,8; 127,1 ; 127,2; 127,4 (Çar.) ; 136,5 ;
136,9 ; 137,2 ; 137,3 (Car. quat.) ; 160,1 (tapp., 33Hz, ÇOZEt).
Masse (ESI+) : 748,98 (M+Na) ; 774,88 (M+K).
Synthèse du composé 36 (Figure 27) O CF
Bn0 5 aCO2Et BnO 3 "I,///OBn OBn Dans un ballon contenant l'ester 35 (519mg ; 0,72 mmol ; 1 éq.) en solution dans le toluène anhydre (15 mL) sous atmosphère d'azote, on additionne goutte à goutte le Bu3SnH préalablement distillé (291 L ; 1,08 mmol ; 1,5 éq.). On chauffe reflux pendant 1 heure.
Le produit est concentré puis purifié sur colonne de silice (éluant cyclohexane/acétate d'éthyle 9,3/0,7) pour récupérer le produit 36 attendu sous la forme d'une huile incolore.
C38H40F207 M= 646,7 g.mol-1 RMN 19F (CDC13, 282,5MHz) -116 ,7 (dd, 12 et 259 Hz, 1 F) ;-118,2 (dd,10 et 259 Hz, 1 F) .
RMN 'H (CDCI3, 300MHz) 1,05 (t, 7,2Hz, 3H, CH3); 3,47-3,53 (m, 3H, 2H6, H5) ; 3,57 (dd, 2,6 et 9,4 Hz, 1 H, H3) ; 3,80-3,94 (m , 4H, H1, H4, CH2) ; 4,09 (tapp., 9,5Hz, 1 H, H?) ;
4,31 (d, 11,8Hz, 1 H, OCH2Ph) ; 4,37 (d, 11,8Hz, 1 H, OCH2Ph) ; 4,51 (d, 11,5Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,54 (d, 10,4Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,56 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,65 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,85 (d, 11,7Hz, 1H, OCH2Ph) ;
4,86 (d, 10,4Hz, 1 H, OCH2Ph) ;7,20 (m, 20H, Har) RMN13C (CDCI3,75,5MHz) 14,2 (CH3) ; 63,1 (CH2) ; 68,9 (C6) ; 72,8 (OCH2Ph) ; 73,6 (C4) ; 74,0 (OÇH2Ph) ; 74,1 (C2) ; 74,9 (OCH2Ph); 75,3 (OCH2Ph) ; 77,9 (tapp., 23Hz, C1) ; 78,2 (C5) ; 84,7 (C3) ; 113,9 (tapp. , 256Hz, CF2) ; 128,0-128,9 (Car.) ;
138,2 ; 138,3 ; 138,5 ; 139,0 (Car. quat.) ; 163,2 (tapp., 31 Hz, CO2Et).
Masse (ESI+) : 647,33 (M+H) ; 669,4 (M+Na).
Synthèse du composé 37 (Figure 28) Bn0 5 Bn0 3 ,""///OBn OBn Dans un ballon contenant l'ester 36 (0,4 g ; 0,618 mmol, 1 éq.) dans le THF
(5 mL) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (30 mg ; 1,25 mmol, 2,02éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N
puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées Le composé 37 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitatif.
C36H36 F207 M= 618,66g.mol-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,1 (d, JF_F=260Hz) ; -118,6 (d, JF_F=260Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 3,38-3,52 (m, 4H, 2H6, H5) ; 3,57 (dd, 2,6 et 9,4 Hz, 1H, H3) ; 3,79 (d 2,4Hz, 1 H, H4); 3,79-3,88 (m, 1 H, H1); 4,09 (t, 9,6Hz, 1 H, H2) ; 4,32 (d, 11,9Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,41 (d, 11,9Hz, 1H, OCH2Ph) ; 4,47-4,64 (m, 4H, 2OCH2Ph) ; 4,81-4,86 (m, 2H, OCH2Ph) ; 7,20 (m, 20H, Har) Synthèse du composé 38 (Figure 29) O F
BnO C N OCH2Ph ' N
BnO 4 g """/Ogn O PhOyNH O
oBn 38 0 5 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 37 (383 mg ;
0,619 mmol ; 1,0 éq.), le peptide déprotégé (379 mg ; 0,679 mmol ; 1,1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (92 mg ; 0,681 mmol ; 1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (204 L ; 1,8 mmol ; 2,9 éq.) dans le DMF (5 mL), l'EDCI (130 mg ; 0,678 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté. La réaction est laissée 10 sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M(2*15 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice 15 avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 38 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 53%.
C60H65F2N3011 M=1042,17 g.moi-' RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) 20 -112,5 (dd, J 7,5Hz et 260Hz) ; -119,6 (d, J14,5 et 260Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1,17-1,19 (m, 2H, CH2); 1,29-1,35 (m; 5H; CH3 ; CHZ); 1,44-1,66 (m; 2H;
CH2); 2,90-2,94 (m; 1H; NHCH2); 3,11-3,15 (m; 1H; NHCH2); 3,43-3,54 (m;
4H; H6, H3;H5); 3,87 (d, 2,6Hz, 1H, H4); 3,88-4,02 (m; 2H; CHNH(Lys); H1);
25 4,07 (t, 9,6Hz, H2); 4,36 (s, 2H, OCH2Ph); 4,46-4,52 (m; 3H; OCH2Ph ; CH
(Ala)); 4,61-4,66 (m, 2H, OCH2Ph) ; 4,77-4,87 (m, 2H, OCH2Ph); 5,0 (s; 2H;
OCH2Ph) ; 5,01-5,13 (m, 2H, OCH2Ph ) 5,35 (d; 7,5Hz, 1 H; ZNH); 6,38 (d;
7,1 ; 1 H; NH); 6,53 (Is, 1 H; NH) ; 7,2 (m; 30H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,4 (ÇH3) ; 22,4 (ÇH2) ; 28,8 (CHZ) ; 32,3 (ÇH2) ; 39,2 (CH2N) ; 48,6 (ÇH(Ala)) ; 54,9 (NÇH(Lys)) ; 67,4 et 67,6 (2OCH2Ph); 68,5 (C6) ; 73,1 (OÇH2Ph) ; 73,7 (C4) ; 73,8 (OÇH2Ph) ; 74,3 (C2) ; 75,1 (OCH2Ph);
75,4 (OÇH2Ph) ; 77,1 (tapp, C.1); 77,7 (C5); 84,4 (C3) ; 127,9 -129 (Çar.) ;
135,6; 136,6; 138,1 ;138,5 (2C) ;138,9 (Çar. quat.) ; 156,0 (CONH(Z)) ; 171,6 (ÇONH) ; 172,9 (ÇO2Bn).
Synthèse du composé 39 (Figure 30) O
6, H
F
HO O C N OH
5 l' N
2, H
HO 4 3 ,~~~OH O 39 NH3+CI- O
OH
Un ballon contenant le produit 38 (400 mg ; 0,384 mmol ) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (5 mL) et d'HCI 1 N(576 L) et d'eau (1,5mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé
sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré
pour obtenir le produit 39 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement quantitatif.
C17H30CIF2N309 M=493,88 g.mol-' RMN 19F (D20, 282,5 MHz) -116,7 (ddd, J=257Hz,17,2Hz et 10,7Hz,) ; -119,6 (ddd, J=257Hz et 14Hz).
RMN'H (D20, 300 MHz) 1,32 (d; 7,3Hz; CH3) ; 1,31-1,34 (m, 2H, CH2); 1,43-1,52 (m; 2H; CH2); 1,75-1,83 (m; 2H; CH2) ; 3,14-3,18 (m; 2H; NHCH2); 3,42-3,61 (m; 4H, H6', H5', H3'); 3,72-3,79 (m; 2H H1',H2') ;3,82-3,90 (m, 2H, CH(Lys), H4'); 4,24-4,32 (m; CH(Ala).
NMR 13C (D20, 75,5 MHz) 16,3 (CH3) ; 21,5 (ÇH2) ; 27,9 (CH2) ; 30,8 (ÇH2) ; 39,4 (CH2N); 49,1 (ÇH(Lys)) ; 53,2 (NÇH(Ala)) ; 61,3 (C6'); 66,1 (C2') ; 69,0 (C4') ; 74,0 (C5' ou C3 ) ; 77,3 (t, 24Hz, C1); 79,6 (C3' ou C5') ; 164,8 (d, 26Hz, CO); 169,9 et 176,3 (2Ç0).
Synthèse du composé 41 (Figure 31) O
Bn0 _ CF2CO2Et BnO\\,\`` 3 ""//OBn OBn Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le zinc (3.34 g 51 mmol ;
7 éq.) préalablement activé, le THF (60 mL) est ajouté et le mélange est ainsi chauffé à reflux. La lactone 40 (3.94 g; 7.3 mmol ; 1 éq.) est lentement additionné avec le bromodifluoroacétate d'éthyle (2.83 mL; 22 mmol ; 3 éq.) dans le THF (60 mL). La réaction est agitée à reflux pendant 3 heures. Le mélange est refroidi à température ambiante et une solution d'HCI 1 M(120 mL) est ajoutée. On filtre le mélange sur Buchner pour éliminer le zinc en excès. On ajoute à la solution du dichlorométhane (40mL). On sépare les 2 phases et on extrait à nouveau deux fois la phase aqueuse au dichlorométhane. Les phases organiques sont séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu est purifié sur colonne chormatographique sur gel de silice avec un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2) comme éluant afin d'isoler le produit 41 pur sous forme d'une huile incolore avec un rendement de 75%.
Cs8H4oF20s M= 662,72 g.mol-1 Rf = 0.35, éluant : cyclohexane / acétate d'éthyle (8 : 2).
RMN 19F (CDCI3 28, 2MHz) -117.7 (d, 1 F, 2JF_F 256.4), -120.1 (d, 1 F, 2JF_F 256.4).
RMN 'H (CDCI3 300MHz 1.30 (t, 3H, 3J7.1, CH3), 3.63-3.81 (m, 3H, H3, H6), 4.01-4.10 (m, 2H, H4, H5), 4.16 (s, 1H, H2), 4.29 (q, 2H, 3J 7.1, CH2), 4.50-4.81 (m, 4H, 2OCH2Ph), 4.85-4.92 (m, 4H, 2OCH2Ph), 7.21-7.38 (m, 20H, HAr).
RMN 13C (CDCI3, 75MHz) 14.3 (CH3), 63.7 (ÇH2), 68.6 (C6), 73.0 (C2), 73.8 (OCH2Ph), 75.5 (OÇH2Ph), 75.7 (OÇH2Ph), 76.4 (OCH2Ph), 77.8 (C3), 78.6 (C4), 83.7 (C5), 96.5 (t, 2Jc_F
25.5, C1), 128.0 (2C), 128.1 (2C), 128.1, 128.2, 128.3 (2C), 128.6, 128.7 (2C), 128.8 (2C), 128.8 (2C), 128.9 (2C) (Car.), 137.9, 138.3, 138.7, 138.7 (Car.quat.),163.3 (t, 2Jc_F 30.3, CO).
Synthèse du composé 42 (Figure 32) Bn0 5 BnO\\\\`"4 3 ~""//OBn OBn 42 Dans un ballon contenant l'ester 41 (615 mg ; 0,93 mmol ; 1 eq.) dans le THF
(5 mL) est ajoutée une solution aqueuse de lithine LiOH (2M, 2 éq.) solubilisée dans une quantité minimum d'eau. Le mélange est laissé 12 heures sous agitation puis repris dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est acidifié avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées.
Le composé 42 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement 90%.
C36H36 F208 M= 634,66g.mol"1 Rf = 0,50; éluant : DCM / methanol (9 : 1).
RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,2 (d, 1 F, 2JF_F 259Hz); -119,0 (d, 1 F, 2JF-F259HZ).
RMN 'H(CDCI3, 300 MHz) 3,4-3,5 (m, 2H, H3, 1 H6); 3,5-3,6 (m, 1H, 1 H6); 3,9 (m, 2H, H4, H5); 4,0 (m, 1H, H2); 4,4 (m, 8H; 4OCH2Ph); 6,1 (s, 2H, OH, COOH); 7,0-7,3 (m, 20H, HAr) =
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 68,0 (C6) ; 71,4 (C2) ; 73,0; 74,9; 75,1 ; 75,9; 77,2 (C3) ; 77,9 (C4) ; 82,1 (C5) ; 94,9 (t, 2JcF 27, C1) ; 126,6; 126,7; 126,9; 127,0; 127,0; 127,3;
127,3 ; 127,4 ; 127,5 (Ç ar.); 135,6 ; 136,2 ; 136,4 ; 137,1 (Çar.quat.).
Synthèse du composé 43 (Figure 33) F
O N OCH2Ph BnO C
5 ~ N
y BnO~~\I`` 4 3 ~~"//OBn O PhO NH O
Bn 43 0 Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 42 (383 mg ;
0,603 mmol ; 1 éq.), le peptide précédemment déprotégé (370 mg ;
0,664 mmol ; 1,1 éq.), le 1-hydroxybenzotriazole HOBT (0,090 g;
0,664 mmol ; 1,1 éq.) et la N-méthylmorpholine NMM (0,198 mL; 1,8 mmol;
3 éq.) dans le DMF (10 mL), l'EDCI (127 mg ; 0,664 mmol ; 1,1 éq.) est ajouté. La réaction est laissée sous agitation pendant 24 heures, puis le solvant est évaporé et le milieu est repris dans le dichlorométhane. Le milieu est ensuite extrait deux fois avec HCI 1 M (2*20 mL). La phase organique est collectée, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée.
Le mélange est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 43 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 43%.
C60H65F2N3012 M=1058,17 g.mol-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -116,8 (d, JF_F=260Hz) ; -122,3 (d, JF_F=259Hz).
RMN 'H (CDCI3, 300 MHz) 1,18-1,68 (m; 9H; CH3; 3CH2); 3,00-3,05 (m; 1H; NHCH2); 3,21-3,26 (m; 1H;
NHCH2); 3,54-3,69 (m; 3H; H4, H6); 3,81 (d; 1 H; 9,3Hz, H2) ; 3,94 (t, 9,2Hz, 2H, H5, H3); 4,0 (m; 1 H; CHNH(Lys);); 4,34-4,50 (m; 4H; OCH2Ph ; CH
5 (Ala)); 4,71-5,13 (m; 9H; OCH2Ph) ; 5,2 (s; 1H, OH); 5,40 (d; 7,8 ; 1H; NH);
6,4 (m ; 1 H; NH) ; 6,9 (s; 1 H; NH); 7,2 (m; 30H; Har.).
RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,1 (CH3) ; 22,4 (ÇH2) ; 28,4 (CH2); 32, (CH2) ; 39, (ÇH2N) ; 48,7 (ÇH(Ala)) ; 54,8 (NCH Lys) ; 67,4 et 67,7 (2OÇH2Ph); 68,8 (C6) ; 72,0 (C5) ;
10 73,8 (OCH2Ph) ; 75,4 (OCH2Ph); 75,7 (OCH2Ph) ; 76,4 (OÇH2Ph); 77,8 (C4) ; 78,7 (C2) ; 83,5 (C3); 128,2 -129,0 (Çar.) ; 135,6; 136,6;
138,0 ;138,2 ;138,4 138,7 (Car. quat.) ; 156,5 (CO(Z)) ; 171,5 (ÇONH) ;
173,1 (ÇO2Bn).
Synthèse du composé 44 (Figure 34) 6, OH
F
HO O CZ N OH
5 ë ~ N
H
HO~~~~ '4 OH O NH3*CP O
HO HO H \/
I(~I N
H
3 OH 0 NH3+CI' 0 OH
Un ballon contenant le produit 43 (220 mg ; 0,208 mmol) dans un mélange de tétrahydrofurane THF (3 mL) , d'HCI 1 N(312 L) et d'eau (environ 1,7mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 44 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 97%.
C17H30CIF2N301o M=509,88 g.mol-1 RMN 19F (DZ0, 282,5 MHz) -119,9 (s) ; -119,9 (s) RMN 'H (D20, 300 MHz) 1,33 (m; 5H; CH2 et CH3) ; 1,48 (m; 2H; CH2); 1,80 (m; 2H; CH2) ; 3,17 (m;
2H; NHCH2); 3,29-3,63 (m;2H6, H4 HS,CH, H3; H2); 4,3 (m; CH).
Résultats de préservation de cellules Expérience 1 Introduction:
Les expériences ont été réalisées afin de démontrer l'efficacité du composé
11 contre les expositions aux UV.
Résultats: (Figures 35) Dans les expériences suivantes, les études ont été réalisées à 37 C sur des fibroblastes primaires adultes de la peau. Les cellules ont été exposées à
une irradiation sous UV-C pendant 2 heures en présence des dérivés d'AAGP.
Protocolës ex rim ~~~"~ pe entaux sur les Fibroblastes Températures utilisées 37 C
Type de cellules fibroblastes adultes primaires de la peau Pour ces expériences, un milieu sans sérum avec 0.5mM EDTA a été
utilisé. Les cellules ont été exposées Conditions de culture sous UV-C (254nm) pendant 2 heures à température ambiante, puis placées à 37 C pendant la durée de l'expérience.
- A 0, 6, 18, 48, 72 jours après Temps d'échantillonnage exposition UV pour AAGP-11 Composés AAGP - AAGP-15 Concentration AAGP - 8.6mM
Lors de ces expériences, nous constatons que le composé AAGP-15 présente d'excellentes propriétés protectrice.
Résultats Ex érimentaux Température Résultats Préliminaires Commentaires - Après 3 jours, le composé
Après 72 heures, toutes les AAGP-11 montre un très haut ellules du contrôle sont niveau de protection des mortes alors qu'avec AAGP- cellules face aux UV.
11, on observe encore 92% Après 4 jours, on trouve 37 C e cellules vivantes (Figure encore 60% de cellules 35). vivantes avec AAGP-11, alors que toutes sont presque mortes dans le contrôle (ne figure pas sur le graphe) Expérience 2 Introduction:
Dans l'expérience suivante, le but est de tester l'activité préservatrice des composés AAGP 11 à basses températures.
Résultats: (Figures 36) Les cellules sont ainsi incubées à-3 C en présence du composé AAGP 11.
Protocoles ex érimentaux sur IesFibroblastes Températures utilisées - A -3 C
Type de cellules - fibroblastes adultes primaires de la peau - Pour ces expériences, un milieu sans sérum Conditions de culture avec 0.5mM EDTA a été utilisé.
Les cellules ont été incubées à-3 C.
Temps d'échantillonnage - A 0, 1, 2, 4, et 6 jours Composés AAGP - AAGP-11 Concentration AAGP - 8.6mM
De la même façon lors de cette expérience, on observe une très forte activité
de préservation d'AAGP-11 sur les fibroblastes à basses températures.
Résultats Expérimentaux Température Résultats préliminaires Commentaires Après 6 jours, les cellules du - AAGP-11 montre dans ontrôle sont toutes mortes alors ces résuitats une très forte -3 C ue celles traitées par AAGP-11 activité de préservation présentent environ 100% de des cellules.
survie (Figure 36).
Expérience 3 Des études ont été réalisées sur des cellules HELA, soumises à des UVC, en présence des différents composés synthétisés, à faible concentration.
On obtient de très bons résultats pour le composé 11, mais au vue des figures 37, 38 et 39, d'autres dérivés donnent une amélioration de la survie de ces cellules par rapport au contrôle. C'est le cas des composés : 39, 22, 30 et 34.
Par contre, les composés 26, 12 et 44 donnent, quant à eux, de moins bons résultats que le contrôle.
Claims (15)
1. Composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I:
où n est un nombre entier égal à 3 ou 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert-butyldiphénylsilyle, R',représente OR, NR"R"', N3, ou un phtalimide, R" et R"', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R1 peut également représenter un acide aminé constitué par un alanine ou une glycine ou une proline, mais dans ce cas R2 représente uniquement OR, R2 comprend un acide aminé constitué par un alanine ou une glycine, ou une proline, mais dans ce cas R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand R1 représente un acide aminé, R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
où n est un nombre entier égal à 3 ou 4, R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, acétyle, triméthylsilyle, tert-butyldiméthylsilyle, tert-butyldiphénylsilyle, R',représente OR, NR"R"', N3, ou un phtalimide, R" et R"', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, aryle, benzyle, benzoyle, acétyle, alkyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R1 peut également représenter un acide aminé constitué par un alanine ou une glycine ou une proline, mais dans ce cas R2 représente uniquement OR, R2 comprend un acide aminé constitué par un alanine ou une glycine, ou une proline, mais dans ce cas R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, benzyle, alkylcarbamate, allylcarbamate, benzylcarbamate, acétyle, R2 représente OR quand R1 représente un acide aminé, R3 représente un atome d'hydrogène ou une fonction alcool libre ou protégé, ainsi que ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptables.
2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les groupes alkyles linéaires ou ramifiés sont des groupes possédant de 1 à 10 atomes de carbones.
3. Médicament comprenant en tant que principe actif au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1.
4. Composition comprenant au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1.
5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I seul ou en mélange et en toutes proportions.
6. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme galénique la rendant conforme à un usage cosmétique ou pharmaceutique notamment dermatologique.
7. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme galénique la rendant conforme à être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux.
8. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend un milieu et/ou un support physiologiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
9. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend d'autres principes actifs.
10. Composition adaptée à une application topique sur la peau, les lèvres, le cuir chevelu et/ou les cheveux comprenant un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1.
11. Procédé de traitement cosmétique pour protéger la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu contre le stress oxydant et/ou les UV
consistant à appliquer sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu, une composition comportant au moins un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable et au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 ou un de ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement acceptable.
consistant à appliquer sur la peau, les lèvres et/ou les cheveux, le cuir chevelu, une composition comportant au moins un milieu et/ou un support physiologiquement acceptable et au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 ou un de ses dérivés à l'état de base, de sel d'addition à un acide minéral ou organique, d'hydrate ou de solvat physiologiquement acceptable.
12. Utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I
selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation ou la cryopréservation de matériaux biologiques.
selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation ou la cryopréservation de matériaux biologiques.
13. Utilisation d'un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I
selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation de fibroblastes.
selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables pour la préservation de fibroblastes.
14. Utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 pour la préparation de médicaments destinés à traiter l'inflammation.
15. Utilisation d'au moins un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule I selon la revendication 1 pour la préparation de composés ou compositions utilisables en cosmétologie et/ou en pharmacie notamment en dermatologie.
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