CA2236306C - Composition adhesive a base de polyaldehyde macromoleculaire et procede de reticulation de collagene - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne une composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique notamment pour la liaison de tissus biologiques entre eux ou avec un biomatériau implanté, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, en solution aqueuse tel que de l'amidon oxydé ou un polyaldéhyde ayant des propriétés similaires de stabilité. Cette composition peut comprendre en outre un composant collagénique choisi parmi le collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué majoritairement de chaînes .alpha., solubilisé en milieu aqueux; le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 %. L'invention concerne également un procédé de liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté comprenant la mise en oeuvre de cette composition adhésive. L'invention s'applique à la prévention des adhérences post-opératoires.

Description

WO 98/15299 PCT/FIt97/01787 COMPOSITION ADHESIVE A BASE DE POLYALDEHYDE !~C~LECU-LP.SRE ET PI~CEDE DE RETICULATION DE COII,AC~NE
,. La présente invention se situe dans le domaine des colles biologiques biodégradables et non toxiques destinées à un usage chirurgical ou thérapeuti-que.
D'une manire plus prcise, la prsente invention a trait une composition adhsive bio-compatible, biorsorbable et non toxique, base d'au moins un polyaldhyde macromolculaire.

Elle concerne encore une telle composition adhsive comprenant en utre un composant collagnique.

Elle concerne galement un procd de rticu-lation de collagne solubilis permettant d'obtenir un matriau adhsif destin tre appliqu rapidement sur des tissus et/ou un biomatriau.

La rticulation du collagne peut tre ralise soit par voie chimique, l'aide d'agents tannants tels que le glutaraldhyde ou le formaldhyde ou encore le diisocyanate ou d'autres ractifs, soit par des agents physiques tels que les radiations gamma, bta.

ou ultraviolettes.

Cependant, cette dernire mthode est lourde et parfois difficile mettre en oeuvre et, outre les rticulations, elle provoque aussi des coupures.

En ce qui concerne la voie chimique, le traitement par le glutaraldhyde (ou le formaldhyde), est le traitement le plus souvent utilis pour rticuler le collagne et consiste immerger dans une solution de glutaraldhyde des poudres, des films, des gels ou des solutions plus ou moins concentres en collagne. I1 H 30 prsente un certain nombre d'inconvnients selon les applications. L'introduction de glutaraldhyde dans une structure collagnique aqueuse peut notamment entraner un relargage rapide de glutaraldhyde en excs, par

2 -diffusion à travers le gel formé.
En chirurgie ou thérapie, ceci est à l'ori-gine de réactions toxiques, entraînant des nécroses tissulaires, ou des réactions moins sévères, conduisant à une mauvaise cicatrisation ou à son ralentissement.
C'est le cas de l'adhésif collagénique aujourd'hui disponible sur le marché.
Dans cette colle, nommée GRF, la réticulation de la gélatine est réalisée par le formaldéhyde en présence de résorcinol, ce dernier servant essentielle-ment à réduire la dissolution de la masse adhésive . Cette colle a été utilisée entre les années 60 et les années -80 mais en fait son emploi en chirurgie est maintenant restreint à quelques applications rares où le bénéfice l'emporte sur les risques (dissection aortique) en raison de la possibili~ê de relargage du formaldéhyde et de sa toxicité. Une quantité excessive de formaldéhyde est nécessaire pour obtenir une réticulation rapide du gel collagénique et une banne adhésion aux tissus environ-nants. Cet excès de formaldéhyde est responsable de la mauvaise biocompatibilité de la colle GRF. On ne peut donc généraliser aujourd'hui l'emploi de cette colle à
la cicatrisation des plaies chirurgicales ou chroniques, à la protection ou l'étanchéité de sutures ou encore à
la délivrance de médicaments.
Une amélioration- récente ~r; Pr,r ~ ~ a+-Yo proposée en augmentant la viscosité du milieu gui contient le formaldéhyde, le glutaraldéhyde ou autre dialdéhydé, par addition d'un gelifiant tel que l'agarose (Demande de brevet IZORET G., WO 96/1436$). Cependant, ceci ne supprime pas le risque de diffusion de l'agent réticulant même si la diffusion est ralentie, Par ailleurs, la biocompatibilité du colla-gène réticulê par des agents chimiques toxiques peut être "
améliorée en réduisant au minimum la quantité d'agents

3 réticulants employés. C'est ce qui est réalisé dans des matériaux préformés destinés à être implantés, où le temps de- réaction peut être allongé autant que nécessaire par le. fabricant dti matériau. Dans ce .cas, de faibles quantités d'agent réticulant sont employées et le matériau réticulé est lavé soigneusement en fin de préparation pour éliminer tout excès de réactif.
Le matériau réticulé final utilisé par le chirurgien est dans ce cas un solide ou une suspension de fibres collagéniques, mais ces matériaux sont dépour vus d'adhésivitê aux tissus environnants.
L'obtention d'une colle biologique nécessite souvent le mélange, par le chirurgien lui-même, au contact des tissus biologiques à traiter., de deux solutions différentes permettant une réticulation rapide du collagène, de la gélatine ou de tout autre macro-molécule ou molécule réactive.
On connait par exemple la colle commer cialisée par la Société II~lUNO sous le nom de "TISSUCOL"
(TISSEEL) puis par BEHRINGWERKE sous 1e nom de "BERIPLAST" et par BIOTRANSFUSION sous le nom de "BIOCOL" . I1 s' agit d' une solution concentrée de fibrino-gène (70-140 mg/ml) contenant du facteur XIII et de la fibronectine dont la polymérisation est induite par une solution de thrombine t4 à 400 Unités Internationales) dans un mélange extemporané. Le fibrinogène polymérise ensuite en fibrine pour reformer un coagulum qui assure l'adhésion des tissus mis en contact.
Les difficultés et problèmes majeurs soulevés par ce produit et ses composants sont d'une part, l'absence de caractérisation complète et de reproductibi lité de la quantité de chacun des comtoosants de la solution de fibrinogène (Facteur XIII, fibronectine, aprotinine) ; et d'autre part, la difficulté d'inactiva tion virale d'un tel produit vis-à-vis des virus non * (marques de commerce)

4 enveloppés comme des Agents Transmissibles Non Conventionnels. Ceci a conduit à une limitation de la possibilité d'utiliser de tels produits à grande échelle.
TARDY et Coll., (demande de brevet français FR-A-2715309), ont décrit un adhésif biologique collagéni-que qui peut être prëparé grâce à un kit constitué par w exemple de deux seringues séparées contenant respective-ment une solution de collagène (ou gélatine) oxydë par le périodate de sodium et conservé à pH acide sous forme congelée à une température inférieure à 0°C, de préfé-rence de l'ordre de -20°C, et une solution alcaline aqueuse. Le mélange des contenus respectifs est assuré
par un mélangeur connecté aux deux seringues, après réchauffage du gel de collagène (ou gélatine) oxydé aux environs de 40°C, pour obtenir un adhésif biocompatible dont la réticulation est accomplie en 2 à 3 minutes.
Les propriétés de cet adhésif sont intéres-santes dans certaines applications, mais le problème principal de cette technologie est la nécessité d'une chaîne de froid complexe pour la distribution de ce produit, ce qui en augmente le coût et en gêne .l'emploi dans des locaux non équipés de congélateur.
On a également proposé d'utiliser des dérivés réactifs du polyéthylène glycol pour former des colles biologiques à base d'albumine ou de collagène (Brevet BARROWS et Col. - n° WO 96 031 59 A1 ; SIERRA D. - Tissue Sealants Meeting La Jolla, 1996 ) . Cependant, ces réactifs sont peu stables dans l'eau et peuvent nécessiter des modes de conservation particuliers. Leur pH optimum d'activité est alcalin, non physiologique. D'autre part,.
le temps de résorption de ces produits est très long,.
supérieur à 3 à 4 semaines, ce qui, dans certaines applications, est un inconvénient majeur.
La nécessité incontournable d'obtenir rapide-ment et quelquefois presque instantanément, 1a solidifi--cation d'une solution fluide pour obtenir une adhésion forte, peut rendre nécessaire l'emploi d'un excès de réactifs chimiques ~de réticulation qui provoque la toxicit et la mdiocre biocompatibilit tissulaire.

5 Des colles tissulaires base de glatine commerciale et de glutaraldhyde ou d'amidon oxyd ont aussi t rcemment proposes dans le document WO

97/29715 (Fusion Medical Technologies, Inc.).

Ces colles forment des gels trs visqueux qui I0 doivent tre chauffs temprature leve, de l'ordre de 50-80C, pour leur application la seringue.

Outre le risque de toxicit potentiel selon l'aldhyde utilis, ces colles peuvent endommager les tissus traits notamment du fait de leur temprature d'application.

L'invention a pour objectif de fournir une composition adhsive ne prsentant pas les inconvnients majeurs voqus prcdemment.

Elle a ainsi pour objectif de fournir une composition adhsive biocompatible, biorsorbable et non toxique, adapte un usage chirurgical et/ou thrapeu-tique, qui soit stable dans le temps et pouvant tre conserve dans des conditions relativement simples tout en tant d'utilisation aise, notamment injectable l'aide d'aiguilles ou de cathters.

Elle a encore pour objectif de fournir une composition adhsive prsentant des proprits d'adhsion et de rsistance mcanique amliores.

Un autre objectif de l'invention est en particulier de fournir une composition adhsive avec laquelle la rticulation du collagne ou de la glatine - s' effectue trs rapidement et dont la vitesse puisse tre facilement module.

Un autre objectif est encore de fournir une composition adhsive ne prsentant pas de risque de

6 toxicité en particulier par diffusion de l'agent réticu-lant .
Un objectif de l'invention est aussi de fournir une composition adhésive pour la liaison de tissus biologiques, y compris des tissus vivants, entre eux ou avec un biomatériau implanté qui peut être l'adhésif lui-même (utilisé seul).
L'invention a par ailleurs pour objectif de fournir un procédë de réticulation du collagène iou gélatine) permettant l'obtention notamment d'une telle composition adhésive, qui soit facile à mettre en oeuvre et sans danger pour l'organisme receveur.
L' inventibn a encore pour objectif de fournir des kits comprenant une composition adhésive telle que précitée, à usage chirurgical et/ou thérapeutique, d'utilisation simple et pratique.
A cette fin, l'invention a pour objet une composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, en solution aqueuse, au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse, et en ce que ladite solution aqueuse de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable~d'origine naturelle présente naturellement un pH acide.
On pense que la stabilité de telles solutions aqueuses est obtenue, de façon naturelle, par le fait que la solution devient spontanément acide.
L'invention a donc, notamment, pour objet de telles compositions comprenant un polyaldéhyde, en solution aqueuse au pH acide naturellement obtenu ou sous forme lyophilisée acide.
L'invention a aussi pour objet une composi-tion adhésive, caractérisée en ce qu'elle comprend .
d'une part, un compbsant collagénique solubilisé en WO 98/15299 PCTlFIt97/01787

7 milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes oG, - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 ~, et d'autre part, au moins un polyaidéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, en solution aqueuse tel que défini ci-dessus.
L'invention fournit également un procédé de préparation d'une colle biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique,-destinée à être appliquée sur des tissus et/ou un biomatériau, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape consistant à mélanger à un composant collagénique . solubilisé en milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
essentiellement de chaînes oc, - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 ~, préalablement à sa réticulation, au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse au pH tel que défini ci dessus.
L'invention a encore pour objet l'utilisation de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse tel que défini ci-dessus, pour l'obtention d'une composition adhésive biocom-patible, biorésorbable et non toxique, à usage chirugical et/ou thérapeutique notamment pour la liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté
présentant des fonctions réactives aminées vis-à-vis dudit polyaldéhyde.
L'invention a encore pour objet l'utilisation

8 d'un tel polyaldéhyde en combinaison avec un composant collagénique tel que précédemment défini, en solution aqueuse.
Enfin l'invention a pour objet des kits pour S composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, destinés à un usage chirurgical et/ou thérapeu-tique, caraçtérisés en ce qu'ils comprennent .
- une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini ci-dessus.
L' invention a aussi pour objet des kits pour composition adhésive comprenant .
- une solution aqueuse d'un composant collagénique choisi parmi . le colla ène a ant J Y perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes oc, . le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 - une solution aqueuse contenant au moins un polyaldëhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini ci-dessus, - des moyens de mélange pour mélanger extemporanément lesdites solutions.
L' invention a encore pour objet un procëdé de liaison d'un biomatériau à des tissus biologiques, caractérisé en ce que l'on applique, à une température comprise entre 20 et 45°C sur lesdits tissus et/ou sur ledit biomatériau, une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini ci-dessus, ledit biomatériau présentant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à-vis dudit polyaldéhyde.
L'invention a aussi pour objet un procédé de ' liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomaté-

9 l'CT/FR97/01787 riau implanté, caractérisé en ce que .
- on mélange à pH neutre, physiologique, une solution aqueuse d'un composant collagénique choisi parmi:
. le collagène ayant perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes oc;
. le collagêne natif selon une concentration inférieure à 5 ~;
et une solution aqueuse contenant au moins un polyaldé-hyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini précédemment;
- on applique rapidement le gel obtenu sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présen tant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à
vis desdits polyaldéhydes macromoléculaires, à une température comprise entre 20 et 45°C; et - on laisse polymériser ledit mélange.
Les inventeurs ont découvert, de manière tout à fait inattendue,, les propriétés potentiellement adhésives de tels polyaldéhydes macromoléculaires biodé
gradables d'origine naturelle sur les tissus vivants et l'aptitude des adhésifs qui en découlent, à être extrême ment bien tolérés par l'organisme receveur tout en conservant leurs propriétés adhésives pendant leur séjour dans l'organisme.
Ils ont ainsi découvert que l'on pouvait coller des tissus biologiques, y compris des tissus vivants, entre eux ou avec un biomatériau implanté, celui-ci présentant.des fonctions réactives vis-à-vis des polyaldéhydes macromoléculaires, notamment des fonctions aminées.
Les inventeurs ont découvert de manière . surprenante que l' on pouvait obtenir une colle biologique en apportant l'excès de réactifs chimiques nécessaire à

la réticulation de certains collagènes ou gélatines sous forme d'un tel polyaldéhyde macromoléculaire biodëgrada-ble et que cette colle est efficacement applicable sur , les tissus vivants à une température proche de la 5 température physiologique, n'entraînant pas de lésion tissulaire, et présente des propriétés améliorées notam-ment au niveau de la qualité d'adhésion et de la résis-tance mécanique.
Selon l'invention, par "polyaldéhyde

10 macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle", on entend tout composé présentant plusieurs fonctions aldéhydiques, dérivé d'un polymère naturel biodégradable.
Le terme "biodëgradable" désigne un polyaldéhyde macromoléculaire susceptible de disparaître par dégradation progressive (métabolisation).
Le polyaldéhyde macromoléculaire peut être aisément préparé par oxydation de polysaccharides ou de mucopolysaccharides avec notamment l'acide périodique ou ses sels, selon un procédé connu en soi depuis très longtemps. De telles préparations de polysaccharide oxydé
ont déjà été autrefois proposées pour réticuler et stabiliser des matériaux collagéniques solides dans des documents anciens (brevet US-A-3 093 439 Johnson &
Johnson et GB-A-1 109 509 Unilever), ou de la gélatine solubilisée en milieu tamponné
Or, les inventeurs ont découvert qu'en utilisant un tel agent réticulant, on n'observait pas le phénomène de diffusion de celui-ci, phénomène très problématique dans les colles biologiques connues, notamment la colle GRF, en particulier du point de vue de la toxicité et de la biocompatibilité tissulaire.
Ils ont découvert en particulier que le -polyaldéhyde macromolëculaire, en apportant la quantité
nécessaire d'aldéhyde dans la solution de collagène ou ' de gélatine, va se trouver emprisonné à l'intérieur du

11 gel adhésif qu'il aura permis de former.
Le polyaldéhyde macromoléculaire mis en oeuvre selon l'invention consiste avantageusement en un polysaccharide ou mucopolysaccharide oxydé.
Le polysaccharide possède avantageusement un poids moléculaire compris entre 10 000 et 2 millions Daltons.
Parmi les polysaccharides ou mucopoly-saccharides convenant à la réalisation de l'invention, on peut citer l'amidon, le dextrane, l'agarose, la cellulose, la chitine, le chitosan, l'acide alginique, les glycosaminoglycanes, l'acide hyaluronique et le chondroitine sulfate ou leurs dérivés.
Selon l'invention, l'amidon et le dextrane sont préférés, l'amidon étant tout particulièrement préféré.
Les polyaldéhydes peuvent être utilisés seuls ou en mélanges.
w Le terme "polyaldéhyde" utilisé selon l'invention désigne indifféremment un polyaldéhyde seul ou un mélange de plusieurs polyaldéhydes.
Conformément à l'invention, le polyaldéhyde peut résulter de l'oxydation d'un composé précité par l'acide périodique ou l'un de ses sels, de préférénce le périodate de sodium, selon des procédé connus en soi.
Pour ce faire, on ajoute à la solution de polysaccharide ou mucopolyssacharide une solution d'acide périodique ou d'un de ses sels jusqu'à l'obtention d'une concentration comprise entre 0,01 et 1 M, de préférence 0, 25 à 0, 5 M.
L'étape d'oxydation peut être opérée sur des solutions, des gels ou des suspensions de poly-saccharide(s).
La préparation de poiysaccharide oxydé peut ensuite être soumise à des dialyses, diafiltrations,

12 filtrations, ultrafiltrations dans le but d'éliminer les produits de Ia réaction d'oxydation et des réactifs, ainsi que des dérivés iodés formés pendant la réaction, ou en excès.
~5 On peut également prévoir une lyophilisation, la redissolution du lyophilisat pouvant se faire en eau ou avec Ie tampon physiologique nécessaire.
La composition adhésive selon l'invention comprend au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle tel que défini ci . dessus.
I1 peut s'agir d'une solution aqueuse comprenant de préférence de 0,5 à 5 ~ en poids de polyal-déhyde(s?.
On a constaté que la solution aqueuse de polyaldéhyde devient spontanément acide, ce qui favorise sa stabilitë. En présence de tampons modifiant ce pH, on observe une perte de réactivité progressive dans le temps. On conserve donc avantageusement le polyaldéhyde au pH acide qu'il acquiert naturellement en solution aqueuse, jusqu'au moment de l'emploi ou encore, sous forme lyophilisée.
La solution est stable à l'abri de l'air et est conservée de préférence entre +1°C et +25°C.
Cette composition adhésive est avantageuse-ment utilisée, après neutralisation par un tampon approprié avant l'emploi, pour la liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté.
Dans ces conditions, la solution de polyaldé
hyde neutralisée est stable pendant au moins une journée à température ambiante.
La température d'application de la solution de polyaldéhyde est comprise entre 20 et 45°C.
Dans le cas d'un biomatériau implanté, celui- ' ci présente des fonctions réactives vis-à-vis du ou des WO 98/15299 PCTlFR97/01787

13 polyaldéhydes contenus dans la composition qui sont formées en particulier par des fonctions aminées.
Le matériau peut comprendre du collagène ou de la gélatine comme dêcrit ci-après.
On prévoit avantageusement un temps de contact entre le biomatériau et la composition adhésive, de l'ordre de 10 secondes à 3 minutes préalablement à
l'application "in situ" dudit matériau.
Le collage se produit progressivement en général entre 10 secondes et 3 minutes à pH physiologi-que, à une température de l'ordre de 37-40°C.
On peut contrôler ce temps de collage et le temps de dégradation in vivo de l'adhésif formé en fonction de la concentration de la solution de polyaldé-hyde macromoléculaire ainsi que selon le taux d'oxydation du polysaccharide comme indiqué ci-après.
Selon un second mode de réalisation de l'invention, la composition adhésive comprend une solution contenant au moins un polyaldéhyde macromolécu-laire biodégradable d'.origine naturelle, telle que définie précédemment ainsi qu'une solution d'un composant collagénique.
Selon l'invention, le terme "composant colla gènique" désigne du collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale par une opération de chauffage ou toute autre méthode, ou encore du colla-gène natif.
Dans le cas d'un chauffage pour dénaturer la structure hélicoïdale du collagène, le chauffage doit être modéré et effectué dans des conditions douces, de manière à éviter la dégradation par coupure hydrolytique, de la gélatine ainsi formée.
Le collagène est non hydrolysé et constitué
en majorité de chaînes oc.
Par chaînes oc dans le sens de l' invention, on WO 98/15299 PCT/FR97/Oi787

14 entend des chaînes cc entières ou des fragments différents des chaînes oc entières par la perte d'un petit nombre d'acides aminés.
Le poids moléculaire des chaînes oc entières est généralement d'environ I00 kDa, c'est-à-dire de 95 à 130 kDa selon les cas.
Le terme "non hydrolysé" tel qu'utilisé selon l'invention signifie que moins de 10 ~ des chaînes collagéniques ont un poids moléculaire inférieur à
environ 100 kDa.
Par "collagène natif" , on entend du collagène qui a conservé sa structure hélicoïdale d'origine mais qui peut avoir été modifié chimiquement ou encore~traité
pour éliminer les télopeptides, comme indiqué ci-après.
Le collagène utilisé selon l'invention peut être d'origine humaine ou animale, de type I, III ou IV
ou issu de leur mélange.
Le collagène de départ peut également être modifié chimiquement par méthylation, par succinylation ou tout autre méthode connue.
Le collagène est de préfërence exempt de télopeptides, éliminés notamment par traitement à la pepsine de manière à le rendre filtrable sur des filtres de porosité adaptée à la stérilisation (élimination des microbes).
Les gélatines du commerce ne sont pas utilisables aux fins de l'invention. Des colles compre-nant de telles gélatines donnent des gels qui ne devien-nent-fluicles et utilisables, notamment en seringues, qu'à
des températures élevées supérieures à 45-50°C, tempéra-tures pouvant engendrer des réactions de brûlure et de nécrose des tissus (cerveau, nerf, intestin, cornée) alors que l'objectif est au contraire de les protéger.
Conformément à l'invention, le collagène est mis en oeuvre sous forme de solution aqueuse.

Pour cela, le collagène est solubilisé dans de l'eau dans des conditions stériles, en chauffant avantageusement à une température appropriée comprise entre 40 et 70°C.
S Les conditions de solubilisation seront adaptées en fonction du collagène utilisé.
La préparation de gélatine ainsi obtenue peut être soumise ensuite à une filtration dans des conditions stériles, en maintenant la température entre 40 et 70°C.
10 La solution collagénique est avantageusement à pH physiologique, en présence ou non d'un tampon, notamment un tampon phosphate.
Selon l'invention, la solution de gélatine peut être une solution de 10 à 20 %, 15 % à 18 % de

15 préférence.
Selon une variante de l'invention, notamment pour des préparations de gélatine à concentration élevée voisine de 20 %, difficilement filtrables, la solution peut être préparée dans des conditions stériles et utilisée pour obtenir directement une composition adhésive selon l'invention.
Selon cette variante, pour ces concentrations élevées, la préparation peut être obtenue par lyophili-sation d'une solution diluée stérile puis redissolution de la poudre stérile par de l'eau stérile dans une enceinte stérile, ce qui permet de réaliser l'opération sans risque de contamination.
D'une manière générale, le collagène est chauffé au-dessus de 37°C et perd ainsi la majeure partie de sa structure hélicoïdale en triple hélice. On peut assimiler la préparation finale à de la gélatine mais dont le poids moléculaire des chaînes élémentaires est supérieur ou égal à 100 000 Daltons, avec moins de 10 %
des chaînes de poids moléculaire inférieur. Cette gélatine est ainsi non hydrolysée et se distingue des

16 gélatines couramment disponibles dans le commerce.
Selon l'invention, lorsqu'on utilise le terme "gélatine", on se réfère à une telle préparation.
Si l' on souhaite garder la structure hélicoï-Jale du collagène, notamment pour augmenter le temps de dégradation in vivo, la solution n'est pas chauffée. On préfère alors préparer des solutions moins concentrées, inférieures à 5 ~, de préférence entre 0,2 et 5 environ, notamment entre I et 3 ~ en partant de collagène natif éventuellement pepsiné.
Le procédé de réticulation selon l'invention comprend le fait de mélanger les deux solutions préci-tées. On réalise avantageusement un mélange homogène.
Le polyaldéhyde est mélangé au collagène ou gélatine selon des proportions de 0,5 à 10 ~ en poids, de préférence de 3 à ZO ~ en poids.
Le mélange des solutions précitées est opéré
de préférence à pH neutre, physiologique, et à une température comprise entre 20 et 45°C, de préférence de 2 0 l ' ordre de 3 7 à 42 °C environ . , Dans le. cas de collagène natif utilisé selon une concentration inférieure à 5 ~, on préfère mettre en oeuvre la solution collagénique à température ambiante, par exemple voisine de 20°C à 30°C.
La composition adhésive et le procédé de réticulation selon l' invention peuvent être mis en oeuvre notamment pour arrêter le saignement de plaies tissulai-res, pour lier des tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté, pour la cicatrisation des plaies chirurgicales ou chroniques, pour la protection ou l'étanchéité des sutures, pour l'inhibition de la forma-tion d'adhérences post-opératoires ou encore la déli-vrance de mëdicaments selon un système de libération prolongée, ainsi qu'en chirurgie réfractive de l'oeil, en paticulier l'épikératoplastie.

WO 98/15299 ~ PCT/FR97/01787

17 Selon les applications, le biomatériau implanté consiste en l'adhésif lui-même qui est alors utilisé seul.
r L'invention trouve une application particu-fièrement avantageuse dans la prévention de la formation d'adhérences post-opératoires.
Elle permet également le collage de lentil les, en particulier de lentilles en collagène, sur 1a cornée dans le domaine de la chirurgie réfractive de l'oeil.
L'invention fournit ainsi un procédé de liaison d'un biomatériau à des tissus biologiques, comprenant le fait d' appliquer à une température comprise entre 20° et 45°C, un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle tel que défini précé
demment, sous forme d'une solution aqueuse au pH acide naturellement obtenu ou neutralisé avant l'emploi, sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présen tant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à
vis dudit polyaldéhyde.
Selon un autre aspect, l' invention fournit un procédé de liaison de tissus biologiques entre eux ou à
un biomatériau implanté, comprenant le fait de mélanger à pH neutre, physiologique, une solution aqueuse de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, telle que décrit précédemment, avec une solution aqueuse de composant collagénique tel que défini précédemment.
On applique ensuite rapidement, c'est-à-dire de préférence en moins d'une minute, le gel ainsi obtenu sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présentant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à-vis du polyaldéhyde macromoléculaire, à une température comprise entre 20° et 45°C, de préférence 37°
à 42°C, puis on laisse polymériser l'ensemble.

18 Lorsque le _composant collagénique est du collagène natif, il n'est pas nécessaire de chauffer la composition adhésive qui peut alors être appliquée à
température ambiante.
Les solutions du composant collagénique et de polyaldéhyde peuvent résulter de la redissolution en milieu aqueux tamponné ou non, desdits composants conservés respectivement sous forme lyophilisée.
Par le mélange de la solution de composant collagénique et de la solution de polyaldéhyde macro moléculaire, le~gel homogène et visqueux obtenu se prend en masse progressivement et durcit rapidement en adhérant fortement par exemple aux tissus biologiques sur lesquels il est appliqué.
25 Selon l' invention, on peut contrôler le temps de réticulation et l'augmenter au-delà de 30 secondes en diminuant la concentration de la solution de polyaldéhyde notamment en-dessous de 3 ~ pour une même proportion de -- collagène.
Par exemple, des concentrations de polyaldé-hyde macromoléculaire comprises entre 3 et 0,5 ~ permet-tent de moduler le temps de polymérisation d' une solution de gélatine à 15 ~, respectivement de 15 secondes à 5 minutes.
La polymérisation se produit progressivement en général à pH physiologique à une température de l' ordre de 37 à 40°C .
Selon une variante de l'invention, on peut également ajuster le temps de résorption in vivo de l'adhésif formé en modifiant le taux d'oxydation du polysaccharide mis en oeuvre pour l'obtention du poly-aldéhyde macromoléculaire utilisé. Celui-ci peut ainsi être ajusté entre 1 à 2 jours et 30 à 60 jours.
A cette fin, on peut avantageusement faire varier les concentrations finales en périodate de sodium WO 98!15299 PCTIFR97IOI787

19 entre 0,05 M et 0,1 M.
D'une manière générale plus la concentration en polyaldéhyde est augmentée plus le temps de résorption augmente êgalement.
L'invention fournit également des kits destinës à un usage chirurgical ou thérapeutique notam-ment pour les applications citées précédemment.
Selon une première forme de réalisation, le kit comprend une solution contenant au moins un poly aldéhyde macromoléculaire biorésorbable placée dans une seringue.
On emploie de préférence une solution aqueuse acide contenant 0,5 à 5 ~ en poids de polyaldéhyde(s).
Selon une autre forme de réalisation de - 15 l'invention, le kit peut se présenter avantageusement sous la forme de deux seringues dont chacune comprend respectivement la solution de composant collagénique et la solution de polyaldéhyde macromolêculaire. La solution de collagène est, dans sa propre seringue, à un pH
._ 20 physiologique, avec ou sans tampon (notamment un tampon phosphate).
Les seringues sont fixées à un dispositif de maintien équipë de moyens de mélange conçus pour pouvoir mélanger extemporanément leur contenu de manière homogè-25 ne, après les avoir réchauffées à la température appro-priée comprise entre 37 et 45°C, selon la fluidité
souhaitée.
Le kit peut comprendre une.solution de 10 à
~ de côllagène non hydrolysé, constitué majoritaire-ment de chaînes a, et une solution de polyaldéhyde de 0,5 à 5 ~.
Selon un mode de réalisation préférentiel, on prévoit un kit comprenant d'une part du collagène en solution à 18 ~ et, d'autre part, de l'amidon oxydé à 3 ~, dans un rapport de 1/24.

WO 98/15299 ~ PCT/F'R97l01787 Si l'on utilise du collagène natif, le kit comprend une solution aqueuse à 5 ~ ou moins, de préfé-rence selon une concentration de 0,2 à 5 ~, plus préfé- , rentiellement Z à 3~.
5 La composition adhésive selon l'invention, et notamment le kit décrit ci-dessus, présente l' avantage de pouvoir être stockée entre + 1 et + 2S°C, de préfé-rence entre +2 et +8° C.
D'autre part, selon l'invention le temps de 10 réticulation peut être raccourci en dessous de 3 minutes et contrôlé selon les exigences requises.
Parallèlement, la force de collage développée par le produit selon l'invention est supérieure à celle obtenue avec les colles connues, et notamment les colles 15 de fibrine, tout en conservant une excellente biocompati-bilité.
En outre, l'invention offre avantageusement la sécurité d'emploi liée aux méthodes de préparation du collagène efficaces pour l'élimination des virus et

20 prions (Agents Transmissibles Non Conventionnels) notamment par l'emploi d'un traitement acalin. Ceci écarte un des problèmes majeurs soulevés par les colles de fibrine.
De plus, par rapport à ces colles de fibrine, la viscosité de la composition adhésive selon l'invention est supérieure tout en restant en-dessous de 1000 centipoises, et facilite ainsi son adhésion immédiate.
L'invention va être décrite plus en détails à l'aide des exemples donnés ci-après à titre indicatif et non limitatif.
Exemple 1 . Réalisation d'une solution de ol aldéh de macromoléculaire.
On ajoute à une solution d'Amidon soluble purifié ou de Dextran présentant ou non des charges positives (groupements aminés) ou négatives (groupements

21 carboxyliques ou sulfoniques) ou tout autre groupement fonctionnel, dont le poids moléculaire peut varier de 000 à 2 millions Daltons, à une concentration de 5 en eau, une solution d'acide périodique ou de périodate 5 de sodium jusqu'à l'obtention d'une concentration comprise entre 0,01 et 1M, de préférence 0,25 M.
Après 2 heures de contact à la température du laboratoire, la solution est dialysée (ou diafiltrée à
l'aide d'un ultrafiltre) avec une membrane de seuil de 10 coupure 5 000 Daltons, contre de l'eau distillée. La dialyse est poursuivie jusqu'à l'élimination totale des produits dialysables de la réaction d'oxydation et des rêactifs, ainsi que des dérivés iodés formés pendant la réaction, ou en excès.
On a constaté que la solution de polyaldéhyde obtenue devient spontanément acide, ce qui favorise sa stabilité, et on préfère donc ne pas ajouter de tampon neutre.
La solution finale concentrée de polymère polyaldéhydique dérivé du polysaccharide. initial est ensuite saturée en azote par bullage et condi~tionnée~
stérilement par filtration sur membrane de porosité
0,2 Le produit est stable pendant au moins un an entre +4°C et 25°C, à l'abri de l'air.
Pour ia réalisation d'un kit selon l'inven-tion, on conditionne la solution prëparée en seringues.
Exemple 2 . Réalisation d'une solution de collaaène.
On prépare une solution acide de collagène à
15 ~ par dissolution d'une poudre de collagène acide dans l'eau, à une température comprise entre 40°C et 70°C
pendant 30 minutes.
La solution est neutralisée à pH 7,5 par addition de soude normale dès que la fluidité le permet.
Dans le cas du collagène bovin de type I, il

22 peut être acidosoluble textrait de dermes et de tendons à pH acide), ou solubilisé par digestion à la pepsine, ce qui le rend plus facile à filtrer par la suite.
Dans le cas des collagènes humains d'origine placentaire, ils peuvent être préparés par extraction à -la pepsine selon le procédé décrit dans la demande EP-A-0 214 035.
Bien entendu, d'autres sources de collagène peuvent être utilisées parmi celles connues par l'homme du métier.
Puis ia solution de collagène ainsi chauffée, fluidifiëe et neutralisée, est filtrée stérilement sur membrane de porosité 0,2 ~,~, à la suite de préfiltrations sur filtres de porosité progressivement décroissante, à
une température appropriée entre 40°C et 70°C.
Si. la filtration à une concentration en collagêne de 20 ~ (ou plus) ne peut être réalisée, on dilue la solution collagénique préalablement à sa filtration.
Selon une variante, on lyophilise la solution diluée stérile puis on redissout la poudre stérile par de l'eau stérile dans une enceinte stérile à la concen-tration désirée.
Le produit est stable pendant au moins un an â température ambiante.
Pour la réalisation d'un kit selon l'inven-tion, la solution de collagène ainsi obtenue peut être aisément répartie en seringues à température de 40°C.
Exemple 3 . Réalisation d'un mélange adhésif.
On prépare une seringue de 0,5 ml de poly-aldéhyde macromoléculaire à 5 ~ selon l'exemple 1, et une seringue de 2 ml de collagène à 15 ~, selon l'exemple 2.
Chacune des seringues est fixée à un dispositif de maintien équipé d'un mélangeur conçu pour pouvoir mélanger leur contenu respectif de manière homogène après WO 98/15299 PCTlFR97101787

23 les avoir réchauffées à une température de 40°C à 42°C, voire 45°C si une plus grande fluidité est souhaitée.
Le gel homogène et visqueux obtenu en sortie se prend en masse à cette même température, progressive ment à partir de 15 à 30 secondes à pH physiologique et durcit rapidement en adhérant fortement aux tissus biologiques sur lesquels il est appliqué.
Si le mélange est appliqué sur une surface tissulaire ou sur une plaie dônt la température est inférieure à 37°C, la polymérisation induite par la rëaction chimique entre les fonctions aldéhydes et les fonctions amines du collagène, est complétée par une solidification résultant de la gélification du collagène en dessous de 37°C.
Le temps de polymérisation peut être augmenté
au delà de 15 secondes par dilution du polyaldéhyde macromoléculaire en dessous de 5 $ ou en utilisant une quantité par seringue inférieure à 0,5 ml pour 2 ml de w collagène.
Des concentrations de polyaldéhyde macro-moléculaire comprises entre 5 et 0,5 ~ permettent de moduler le temps de polymérisation, respectivement de 15 secondes à 5 minutes.
I1 est possible aussi d'utiliser une solution à 5 ~ de polysaccharide moins oxydé, préparé par exemple avec une concentration finale de périodate de sodium comprise entre 0,05 M et 0,1 M, en variante de l'exemple 1.
TEST D'ADHESIVITE
On mesure la force développée par l'adhésif - tissulaire ainsi préparé, en appliquant le mélange décrit ci-dessus entre deux Lambeaux de peau de parc de 6,25 cmz, eux-mêmes reliés séparément par collage avec une colle acrylique du côté épidermique sur deux .plateaux WO 98!15299 PCTIFR97/01787

24 d'un dynamomètre.
Après avoir appliqué le produit mélangé et fluide à 40°C sur chacun des deux lambeaux sur la face dermique, les deux plateaux sont aussitôt rapprochés pour comprimer le tout avec une force de 4 Newtons pendant 1 minute puis on incube à 37°C pendant 30 minutes.
Lorsque les plateaux sont séparés progressi-vement, on mesure la résistance à la rupture des deux lambeaux.
La force mesurée est de 7,26 Newtons. Le travail fourni pour lutter contre la résistance à
l'étirement est de 10,96 millijoules.
Dans les mêmes conditions, la colle de fibrine "TISSUCOL" donne une force de 6,30 Newtons et de 11,25 millijoules.
Exemple 4 .
Les force ou travail de l'exemple 3 peuvent être augmentés du double ou du triple en augmentant la concentration du collagène ou du polyaldéhyde macro-moléculaire, comme illustrë ci-après .
On prépare une seringue de 0,5 ml d'une solution de polyaldéhyde macromoléculaire à 5 ~ selon l'exemple 1, et une seringue de 2 mi de collagène à 20 ~, selon une variante de l'exemple 2.
On procède comme â l'exemple 3.
Dans le test d'adhésivité, la force mesurée est de 12,15 Newtons, et le travail fourni pour lutter contre la résistance à l'étirement est de 27,72 milli joules.
Exemple 5 : Collacte d'une lentille en collagène avec une solution de ol aldéh de macromoléculaire sur une cornée de latin et sur une cornée de t~rimate non humain. ' Pour réaliser le collage d'une lentille en

25 -collagène, on maintient les paupières ouvertes avec un blépharostat, on désépithélialise la cornée sur une zone plus large que le diamètre de la lentille, puis on lave soigneusement la zone désépithélialisée pour éliminer les débris cellulaires.
On dépose la solution de polyaldéhyde à 2 , 5 ou 5 ~ préparée selon la procédure de l'exemple 1, dans la face concave de la lentille jusqu'à remplir complète-ment la concavité de celle-ci avec la solution de polyaldéhyde.
Après 30 secondes à 2 minutes de contact, on sèche la surface cornéenne, on élimine l'excédent de solution de polyaldéhyde par aspiration, puis on place la face concave de la lentille sur la cornée, en prenant soin de centrer la lentille par rapport à l'axe optique.
Le bord de la lentille est correctement plaqué contre la cornée à l'aide d'une spatule.
-- Après 5 minutes de contact, il est possible de mobiliser le globe oculaire par l'intermédiaire d'une spatule posée sur la ler-Mille .
Dans ces conditions, l'utilisation de polyaldéhyde macromoléculaire à une concentration comprise entre 2,5 et 5 ~, n'induit pas de réaction inflammatoire clinique sur les structures antérieures du globe oculaire . cornée, conjonctive, iris, paupières, ni chez le lapin albinos (New Zealand) ni chez le primate non humain (Macaccus cynomolgus).
Cette absence de réactions toxiques ou d'irritation locales souligne l'avantage de la composi tion adhésive selon l'invention par rapport à l'utilisa tion des agents réticulants traditionnels de l'art antérieur, pour la réalisation d'adhésifs tissulaires.
Exemple 5 . Prévention de la formation d' adhérences t~ost-ot~ératoires.

26 Le modèle expérimental utilisé pour démontrer les propriétés de l'adhésif selon l'invention dans la prévention d'adhérences postopératoires a été publié par Elisabeth HARRIS et l'équipe de George RODEHEAVER
(Surgery, 117, 6, 663-669, 1995). _ Le protocole décrit dans cette publication a été mis en oeuvre sur des groupes de 10 rats.
Les essais consistent à créer une abrasion et une déshydratation sur des surfaces de 2 cm~ de paroi pêritonéale et de caecum, au contact l'une de l'autre.
Le groupe de rats'témoins ne reçoit aucun produit de protection des plaies ainsi crées ; il est comparé au groupe de rats qui reçoit de 1 ml à 2 ml de l'adhésif tissulaire de l'invention selon l'exemple 3, - 15 en utilisant un kit comprenant deux seringues comme décrit dans cet exemple, l'adhésif êtant appliqué sur chacune des deux plaies en regard l'une de l'autre.
Après 7 jours d'attente, conformément au . protocole publié, les résultats sont nets .
Aucune adhérence n'est observée entre les deux surfaces lésées dans le groupe de rats traités par l'adhésif tissulaire selon l'invention.
Le groupe de rats témoins, non traité par l'adhésif tissulaire de l'invention, montre des adhéren ces pour chacun des 10 rats, dont les.caractéristiques sont identiques aux résultats publiés dans Surgery 117, 6, 663-669, 1995 mentionné ci-dessus.
I1 ressort de cette même publication ttable II, page 667), que la colle de fibrine (Fibrin sealant), n'est pas efficace pour inhiber complètement la formation d'adhérences post-opératoires.
Les propriétés anti-adhérences démontrées pour l'adhésif tissulaire de cette invention sont particulièrement surprenantes quand on les compare à ' celles des colles de fibrine qui n'ont pas ces proprié-

27 tés.
Selon l'invention, on peut appliquer la composition adhésive formant barrière anti-adhérences en un endroit précis, y compris par injection à travers un cathéter, sans risque de voir bouger cette barrière, ce qui renforce la sécurité et l'efficacité pour le patient traité.
Exemple 7 :Influence de la concentration en t~olyaldéhyde 20 macromoléculaire sur le temt~s de réactivité de la comt~osition adhésive selon l'invention On prépare une composition adhésive à base d'une part, de collagène à 16,5 ~ et, d'autre part, d' amidon oxydé sous forme liquide pH 3 , 3 , à 3 , 3 ~ ( concen-tration moyenne déterminée par mesure de l'indice de réfraction (3,1 ~) et par contrôle des matières sèches (3, 5 ~) ) .
Dans cette étude, on procède à des dilutions de l' amidon oxydé, dans l' eau, à 1 ~, 0, 75 ~ et 0 , 5 respectivement.
Par ailleurs, on part de solutions de collagène à des pH différents, en présence de tampon phosphate.
Les résultats obtenus sont indi gués dans le tableau 1 ci-dessous .

28 pH colla- concentration concentration temps de gne en phosphate de l'amidon polymrisa-s (M) oxyd tion du (concentration mlange finale) 1 ~ (0,2 ~) 45 sec.

7,44 0,05 0,75 ~ (0,15 1 min. et 5 ~k) sec.

0,5 ~ (0,1 ~) 3 min.

1 ~ (0,2 ~) 2 min.

7,08 0,02 0,75 ~ (0,15 2 min. et 30 ~) sec.

0, 5 ~k (0, 1 5 min.
~) 1 ~ (0,2 ~) 1 min. et 15 7,33 0,02 sec.

0,75 ~ (0,15 2 min.
~) 0,5 ~ (0,1 ~) 4 min.

Ces résultats montrent que le mélange adhésif I5 durcit d'autant plus rapidement que la concentration en amidon oxydé et le pH du mélange sont élevés.
Les concentrations en amidon oxydé de 1 ~ et 0,75 ~ conduisent à des résultats proches, à 30 secondes près. Par contre, on note une différence sensible entre les.concentrations 0,75 ~ et 0,5 L'ensemble des gels présentent une bonne cohésion et ils ont un aspect élastique d'autant plus prononcé que la concentration en amidon oxydé est faible, ' cette différence étant durable dans le temps.
Le gel avec l'amidon oxydé à 0,5 $ présente une grande élasticité.

29 La concentration standard d'amidon oxydé à 3~
conduit, quant à elle, à un gel très résistant et d'élasticité plus faible. Le gel augmente son élasticité
avec des concentrations en amidon oxydé de l'ordre de 1 ~ ou moins. Cette propriété peut être intéressante dans de nombreuses applications.
Exemple 8 . Influence de la concentration en tamr3on et du pH du collacrène sur le temps de réactivité de la composition adhésive selon l'invention On prépare une composïtion adhésive à base, d'une part, de collagène à 17 ~ environ et, d'autre part, d'amidon oxydé forme liquide pH 3,3, à 3,3~ comme à
l'exemple 7.
On ajoute un tampon phosphate au collagène selon des concentrations variant de O,OlM à O,1M et l'on prévoit un témoin collagène sans phosphate, ajusté aux mêmes pH.
On étudie parallèlement l'influence du pH du collagène en préparant des solutions à pH variant de 6,9 à 7,45.
Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau 2 ci-dessous.

Concen- COZICen-Temps pH aprs tration tration de mlange poiymri-en pH collagne phosphtesation avec 1.0 colla- M du l~amidon gne mlange oxyd ($) 17 7,12 0 45 sec. 6,75 17,3 7.44 0.05 18 sec. 7.15 17 7,45 0,1 15 sec. 7,30 1 5 ls,s 7,05 0 1 min. 6,60 et 20 sec.

16,8 7,25 0 1 min. 6,69 et 05 sec.

16.9 7,06 0.05 33 sec. 6,94 16,9 7,36 0.05 17 sec. 7,11 16,6 6.95 0,01 1 min. 6,72 2 0 16,7 7,08 0,02 40 sec. 6,92 17 7.33 0.02 28 sec. 7,02 On constate que ia réactivité du mélange augmente avec le pH du collagène et son pouvoir tampon.
Ex~mple 9 . Réalisation d'un mélan e adhésif à artir de collacrène natif On utilise du collagêne solubilisé par digestion à 1a pepsine et purifié, en solution aqueuse contenant 9 g/1 dé chlorure de sodium ajusté à pH 7, selon une concentration de 2 $.
Le collagène non modifié chimiquement ou modifié par succinylation ou méthylation peut être utilisé indiffëremment dans cet exemple. Dans tous les cas, il a conservé sa structure hélicoïdale.

WO 98/15299 PCT/FR97/017$7 Le produit est réparti stérilement dans une seringue de 2 ml stockée à +4°C.
Une solution d'amidon oxydé à 1 ~ est préparée en dissolvant la poudre acide d'amidon oxydé
lyophilisée par un tampon phosphate 0,2M pH 7,50. Une seringue de 0,5 ml est préparée.
Les deux seringues de collagène et d'amidon sont réunies dans un kit semblable à l'exemple 3, réchauffé à température ambiante (voisine de 20°C).
Pour évaluer la force d'adhésion du mélange obtenu à partir de ce kit, on réalise le test d'adhési-vité selon l'exemple 3 avec des lambeaux de peâu de porc de 6,25 cm~.
Les résultats obtenus sont les suivants .
- 15 La force mesurée est de 4,5 Newtons. Le travail fourni pour résister à l'étirement est de 3,15 millijoules.

Claims (51)

REVENDICATIONS

1. Composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, en solution aqueuse, et en ce que ladite solution aqueuse de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle présente naturellement un pH acide.

2. Composition adhésive biocompatible selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un composant collagénique, solubilisé en milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué majoritairement de chaîne .alpha., et - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5% en poids.

3. Composition adhésive selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le polyaldéhyde consiste en un polysaccharide ou mucopolysaccharide oxydé.

4. Composition adhésive selon la revendication 3, caractérisée en ce que le polysaccharide ou mucopolysaccharide est choisi parmi le groupe comprenant l'amidon, le dextrane, l'agarose, la cellulose, la chitine, le chitosan, l'acide alginique, les glycosaminoglycanes, l'acide hyaluronique et le chondroïtine sulfate ou leurs dérivés.

5. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 3 et 4, caractérisée en ce que le polysaccharide est choisi parmi l'amidon et le dextrane.

6. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le polyaldéhyde consiste en un polysaccharide ou mucopolysaccharide oxydé par l'acide périodique ou l'un de ses sels.

7. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le polysaccharide présente un poids moléculaire compris entre environ 10 000 et 2 millions Daltons.

8. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend une solution aqueuse de polyaldéhyde (s) selon une concentration de 0,5 à 5% en poids.

9. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la solution aqueuse est obtenue par dissolution dans l'eau ou avec un tampon physiologique, d'un polyaldéhyde sous forme lyophilisée acide.

10. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 2 à 9, caractérisée en ce qu'elle comprend une solution de collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, selon une concentration de 10 à 20% en poids.

11. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 2 à 9, caractérisée en ce qu'elle comprend une solution aqueuse de collagène natif selon une concentration de 0,2 à 5% en poids.

12. Composition adhésive selon la revendication 10 ou 11, carac-térisée en ce que, pour le mélange, la proportion du polyaldéhyde par rapport au collagène est de 0,5 à 10% en poids.

13. Composition adhésive selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'elle est résorbable dans l'organisme entre 1 à

jours.

14. Procédé de préparation d'une colle biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique, destinée à être appliquée sur des tissus etlou un biomatériau, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape consistant à mélanger à un composant collagénique, solubilisé en milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué essentiellement de chaînes .alpha., et - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5% en poids, préalablement à sa réticulation, au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse, ladite solution présentant naturellement un pH acide.

15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que la solution de composant collagénique est telle que définie selon l'une quelconque des revendications 2, 10 et 11, et la solution de polyaldéhyde macromoléculaire est telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 et 12.

16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 14 et 15, caractérisé en ce que l'on réalise le mélange à une température comprise entre 20 et 45°C.

17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'on réalise le mélange à une température comprise entre 37 et 42°C.

18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, caractérisé en ce que l'on réalise le mélange à un pH neutre ou physiologique.

19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 14 à 18, caractérisé en ce que la réticulation est réalisée en moins de 5 minutes.

20. Utilisation d'un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse, ladite solution présentant naturellement un pH acide, pour l'obtention d'une composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique.

21. Utilisation selon la revendication 20, en combinaison avec un composant collagénique, solubilisé en milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué majoritairement de chaînes a, et - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5% en poids.

22. Utilisation selon d'une quelconque des revendications 20 et 21, pour l'obtention d'une composition adhésive telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 13.

23. Kit comprenant une composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, destiné à un usage chirurgical et/ou thérapeutique, caractérisé en ce qu'il comprend une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, ladite solution présentant naturellement un pH acide, et au moins un moyen contenant ladite solution et/ou permettant de l'appliquer.

24. Kit selon la revendication 23, caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'une seringue.

25. Kit selon la revendication 23 ou 24, caractérisé en ce qu'il comprend une solution aqueuse de polyaldéhyde (s) selon une concentration comprise entre 4,5 et 5% en poids.

26. Kit selon la revendication 23 ou 25, caractérisé en ce qu'il comprend en outre:
- une solution aqueuse d'un composant collagénique choisi parmi .cndot. le collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué majoritairement de chaînes .alpha., et .cndot. le collagène natif selon une concentration inférieure à 5% en poids, et - des moyens de mélange pour mélanger extemporanément lesdites solutions.

27. Kit selon la revendication 26, caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme de deux seringues équipées de moyens de mélange dont l'une des seringues contient la solution de composant collagénique et l'autre contient la solution de polyaldéhyde macromoléculaire.

28. Kit selon l'une quelconque des revendications 23 à 27, caractérisé
en ce qu'il comprend une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle au pH acide naturellement obtenu.

29. Kit selon l'une quelconque des revendications 23 à 28, caractérisé
en ce que la solution de polyaldéhyde est obtenue par dissolution dans l'eau ou avec un tampon physiologique, d'un polyaldéhyde sous forme lyophilisée acide.

30. Kit selon l'une quelconque des revendications 23 à 29, caractérisé
en ce qu'il comprend une solution de collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes .alpha., de 10 à 20% en poids.

31. Kit selon l'une des revendications 26 à 30, caractérisé en ce qu'il comprend d'une part du collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué majoritairement de chaînes .alpha., en solution aqueuse à 18% en poids et, d'autre part, de l'amidon oxydé en solution aqueuse à 3% en poids, selon un rapport massique 1/24.

32. Kit selon l'une quelconque des revendications 26 à 29, caractérisé
en ce qu'il comprend une solution aqueuse de collagène natif selon une concentration de 0,2 à 5% en poids.

33. Kit selon l'une quelconque des revendications 26 à 32, caractérisé
en ce que la ou les solutions sont maintenues à une température comprise entre +1 ° et 25°C.

34. Utilisation d'une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, ladite solution présentant naturellement un pH acide, pour préparer une composition pour lier un biomatériau à des tissus biologiques, par application de ladite composition sur lesdits tissus et/ou sur ledit biomatériau, ladite composition ayant une température comprise entre 20° et 45°C, ledit biomatériau présentant des fonctions réactives vis-à-vis dudit polyaldéhyde.

35. Utilisation selon la revendication 34, pour la liaison d'une lentille en collagène.

36. Utilisation d'une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, ladite solution présentant naturellement un pH acide pour la préparation d'une composition pour lier des tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté, par - ~mélange à pH neutre ou physiologique:
d'une solution aqueuse d'un composant collagénique choisi parmi .cndot. du collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué majoritairement de chaînes .alpha., et .cndot. du collagène natif selon une concentration inférieure à 5% en poids et de ladite solution de polyaldéhyde, et par - ~application du gel obtenu sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présentant des fonctions réactives vis-à-vis desdits polyaldéhyde macromoléculaires, ladite application s'effectuant à une température comprise entre 20° et 45°C et - ~polymérisation dudit mélange.

37. ~Utilisation selon la revendication 36, caractérisée en ce qu'on utilise une solution aqueuse de polyaldéhyde au pH acide naturellement obtenu.

38. ~Utilisation selon la revendication 36, caractérisée en ce qu'on utilise une solution aqueuse de polyaldéhyde au pH préalablement neutralisé.

39. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 36 à 38, caractérisée en ce que, dans le cas de collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes .alpha., on procède à une application où ladite composition a une température comprise entre 37° et 42°C.

39~

40. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 36 à 38, caractérisée en ce que, dans le cas de collagène natif, on procède à une application à la température ambiante.

41. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 34 à 39, caractérisée en ce que l'on met en oeuvre une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10.

42. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 34 à 38 et 40, caractérisée en ce que l'on met en oeuvre une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 et 11.

43. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 34 à 39, caractérisé en ce qu'elle est mis en oeuvre à l'aide d'un kit selon l'une des revendications 23 à 31.

44. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 34 à 38 et 40, caractérisée en ce qu'elle est mise en oeuvre à l'aide d'un kit selon l'une des revendications 23 à 29 et 32.

45. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 34 à 44, pour la prévention des adhérences post-opératoires.

46. ~Utilisation d'une composition définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 pour la liaison de tissus biologipues entre eux ou à un matériau implanté.

47. ~Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que ledit polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle est l'amidon oxydé.

48. ~Procédé selon l'une quelconque des revendications 14 à 19, caractérisé en ce que ledit polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle est l'amidon oxydé.

49. ~Kit selon l'une quelconque des revendications 23 à 33, caractérisé
en ce que ledit polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle est l'amidon oxydé.

50. ~Utilisation selon l'une quelconque des revendications 34 à 46, caractérisé en ce que ledit polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle est l'amidon oxydé.

51. ~Utilisation selon la revendication 20 telle que ladite composition convient à la liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté présentant des fonctions aminées réactives vis-à-vis dudit polyaldéhyde.