CA2236306C

CA2236306C - Adhesive composition with macromolecular polyaldehyde base and method for cross-linking collagen

Info

Publication number: CA2236306C
Application number: CA002236306A
Authority: CA
Inventors: Michel Tardy; Herve Volckmann; Jerome Tiollier; Philippe Gravagna; Jean-Louis Tayot
Original assignee: Imedex Biomateriaux
Current assignee: Imedex Biomateriaux
Priority date: 1996-10-07
Filing date: 1997-10-07
Publication date: 2006-08-08
Anticipated expiration: 2017-10-07
Also published as: CA2236306A1

Abstract

The invention concerns a biologically compatible, biologically non-absorbable and non-toxic adhesive composition, for surgical and/or therapeutic use in particular for bonding together biological tissues or with an implanted biological material, characterised in that it contains at least one biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin, in an aqueous solution such as oxidised starch or a polyaldehyde with similar properties of stability. This composition can further contain one collagenic constituent selected among: collagen having partially lost its helical structure, non-hydrolysed, consisting mostly of alpha chains, rendered soluble in an aqueous medium; native collagen in a concentration less than 5 %. The invention also concerns a method for bonding biological tissues together or to an implanted biological material using this adhesive composition. The invention is useful for preventing post-operative adhesions.

Description

WO 98/15299 PCT/FIt97/01787 COMPOSITION ADHESIVE A BASE DE POLYALDEHYDE !~C~LECU-LP.SRE ET PI~CEDE DE RETICULATION DE COII,AC~NE
,. La présente invention se situe dans le domaine des colles biologiques biodégradables et non toxiques destinées à un usage chirurgical ou thérapeuti-que.
D'une manire plus prcise, la prsente invention a trait une composition adhsive bio-compatible, biorsorbable et non toxique, base d'au moins un polyaldhyde macromolculaire.

Elle concerne encore une telle composition adhsive comprenant en utre un composant collagnique.

Elle concerne galement un procd de rticu-lation de collagne solubilis permettant d'obtenir un matriau adhsif destin tre appliqu rapidement sur des tissus et/ou un biomatriau.

La rticulation du collagne peut tre ralise soit par voie chimique, l'aide d'agents tannants tels que le glutaraldhyde ou le formaldhyde ou encore le diisocyanate ou d'autres ractifs, soit par des agents physiques tels que les radiations gamma, bta.

ou ultraviolettes.

Cependant, cette dernire mthode est lourde et parfois difficile mettre en oeuvre et, outre les rticulations, elle provoque aussi des coupures.

En ce qui concerne la voie chimique, le traitement par le glutaraldhyde (ou le formaldhyde), est le traitement le plus souvent utilis pour rticuler le collagne et consiste immerger dans une solution de glutaraldhyde des poudres, des films, des gels ou des solutions plus ou moins concentres en collagne. I1 H 30 prsente un certain nombre d'inconvnients selon les applications. L'introduction de glutaraldhyde dans une structure collagnique aqueuse peut notamment entraner un relargage rapide de glutaraldhyde en excs, par WO 98/15299 PCT / FIt97 / 01787 ADHESIVE COMPOSITION BASED ON POLYALDEHYDE! ~ C ~ LECU-LP.SER AND PIECE OF RETICULATION OF COII, AC ~ NE
,. The present invention lies in the organic biodegradable and non-biodegradable glues toxic agents for surgical or therapeutic use than.
In a more precise way, the present invention relates to a bio-adhesive composition compatible, biorsorbable and nontoxic, based on less a macromolecular polyaldhyde.

It still concerns such a composition adhsive further comprising a collagen component.

It also concerns a process of solubilis collagen allowing to obtain a Adhesive material to be applied quickly on tissue and / or biomatriau.

The cure of the collagen can be made by chemical means, the help of agents tannants such as glutaraldehyde or formaldehyde or else diisocyanate or other ractives, either by physical agents such as gamma, beta radiation.

or ultraviolet.

However, this last method is cumbersome and sometimes difficult to implement and, in addition to cures, it also causes cuts.

With regard to the chemical route, the treatment with glutaraldehyde (or formaldehyde), is the treatment most often used to heal the collagen and consists immerse in a solution of powder, films, gels or more or less concentrated solutions in collagen. I1 H 30 has a number of disadvantages depending on the applications. The introduction of glutaraldehyde into a aqueous collagen structure can notably drive rapid release of excess glutaraldehyde, by

2 -diffusion à travers le gel formé.
En chirurgie ou thérapie, ceci est à l'ori-gine de réactions toxiques, entraînant des nécroses tissulaires, ou des réactions moins sévères, conduisant à une mauvaise cicatrisation ou à son ralentissement.
C'est le cas de l'adhésif collagénique aujourd'hui disponible sur le marché.
Dans cette colle, nommée GRF, la réticulation de la gélatine est réalisée par le formaldéhyde en présence de résorcinol, ce dernier servant essentielle-ment à réduire la dissolution de la masse adhésive . Cette colle a été utilisée entre les années 60 et les années -80 mais en fait son emploi en chirurgie est maintenant restreint à quelques applications rares où le bénéfice l'emporte sur les risques (dissection aortique) en raison de la possibili~ê de relargage du formaldéhyde et de sa toxicité. Une quantité excessive de formaldéhyde est nécessaire pour obtenir une réticulation rapide du gel collagénique et une banne adhésion aux tissus environ-nants. Cet excès de formaldéhyde est responsable de la mauvaise biocompatibilité de la colle GRF. On ne peut donc généraliser aujourd'hui l'emploi de cette colle à
la cicatrisation des plaies chirurgicales ou chroniques, à la protection ou l'étanchéité de sutures ou encore à
la délivrance de médicaments.
Une amélioration- récente ~r; Pr,r ~ ~ a+-Yo proposée en augmentant la viscosité du milieu gui contient le formaldéhyde, le glutaraldéhyde ou autre dialdéhydé, par addition d'un gelifiant tel que l'agarose (Demande de brevet IZORET G., WO 96/1436$). Cependant, ceci ne supprime pas le risque de diffusion de l'agent réticulant même si la diffusion est ralentie, Par ailleurs, la biocompatibilité du colla-gène réticulê par des agents chimiques toxiques peut être "
améliorée en réduisant au minimum la quantité d'agents 2 -diffusion through the gel formed.
In surgery or therapy, this is the first toxic reactions leading to necrosis tissue, or less severe reactions, leading to poor healing or slowing down.
This is the case of collagenic adhesive today available on the market.
In this glue, called GRF, the crosslinking gelatin is made by formaldehyde in the presence of resorcinol, the latter serving to reduce the dissolution of the adhesive mass. This glue was used between the 60s and the years -80 but in fact his job in surgery is now restricted to a few rare applications where the benefit outweighs the risks (aortic dissection) due to the possibility of release of formaldehyde and its toxicity. An excessive amount of formaldehyde is necessary to obtain a rapid gel crosslinking collagen and a banne tissue adhesion environ-nants. This excess of formaldehyde is responsible for the poor biocompatibility of the GRF glue. We can not so generalize today the use of this glue to cicatrization of surgical or chronic wounds, to the protection or sealing of sutures or to the delivery of drugs.
A recent improvement ~ r; Pr, r ~ ~ a + -Yo proposed by increasing the viscosity of the mistletoe medium contains formaldehyde, glutaraldehyde or other dialdehyde, by adding a gel such as agarose (IZORET G. Patent Application, WO 96/1436). However, this does not eliminate the risk of agent delivery crosslinking even if the diffusion is slowed down, In addition, the biocompatibility of gene crosslinked by toxic chemicals may be "
improved by minimizing the amount of agents

3 réticulants employés. C'est ce qui est réalisé dans des matériaux préformés destinés à être implantés, où le temps de- réaction peut être allongé autant que nécessaire par le. fabricant dti matériau. Dans ce .cas, de faibles quantités d'agent réticulant sont employées et le matériau réticulé est lavé soigneusement en fin de préparation pour éliminer tout excès de réactif.
Le matériau réticulé final utilisé par le chirurgien est dans ce cas un solide ou une suspension de fibres collagéniques, mais ces matériaux sont dépour vus d'adhésivitê aux tissus environnants.
L'obtention d'une colle biologique nécessite souvent le mélange, par le chirurgien lui-même, au contact des tissus biologiques à traiter., de deux solutions différentes permettant une réticulation rapide du collagène, de la gélatine ou de tout autre macro-molécule ou molécule réactive.
On connait par exemple la colle commer cialisée par la Société II~lUNO sous le nom de "TISSUCOL"
(TISSEEL) puis par BEHRINGWERKE sous 1e nom de "BERIPLAST" et par BIOTRANSFUSION sous le nom de "BIOCOL" . I1 s' agit d' une solution concentrée de fibrino-gène (70-140 mg/ml) contenant du facteur XIII et de la fibronectine dont la polymérisation est induite par une solution de thrombine t4 à 400 Unités Internationales) dans un mélange extemporané. Le fibrinogène polymérise ensuite en fibrine pour reformer un coagulum qui assure l'adhésion des tissus mis en contact.
Les difficultés et problèmes majeurs soulevés par ce produit et ses composants sont d'une part, l'absence de caractérisation complète et de reproductibi lité de la quantité de chacun des comtoosants de la solution de fibrinogène (Facteur XIII, fibronectine, aprotinine) ; et d'autre part, la difficulté d'inactiva tion virale d'un tel produit vis-à-vis des virus non * (marques de commerce) 3 crosslinking agents. This is what is achieved in preformed materials intended to be implanted, where the reaction time can be lengthened as much as necessary speak. manufacturer of this material. In this .cas, weak quantities of crosslinking agent are used and the crosslinked material is carefully washed at the end of preparation to remove any excess reagent.
The final crosslinked material used by the surgeon is in this case a solid or a suspension of collagen fibers, but these materials are lacking seen from adhesiveness to surrounding tissues.
Obtaining a biological glue requires often the mixture, by the surgeon himself, at contact of biological tissues to be treated., two different solutions allowing rapid crosslinking collagen, gelatin or any other macro-molecule or reactive molecule.
We know for example the commercial glue produced by the II ~ lUNO Company under the name of "TISSUCOL"
(TISSEEL) then BEHRINGWERKE under the name of "BERIPLAST" and by BIOTRANSFUSION under the name of "BIOCOL". It is a concentrated solution of fibrino-gene (70-140 mg / ml) containing factor XIII and fibronectin whose polymerization is induced by a thrombin solution t4 at 400 International Units) in an extemporaneous mixture. Fibrinogen polymerizes then fibrin to reform a coagulum that ensures the adhesion of the tissues put in contact.
The difficulties and major problems raised by this product and its components are on the one hand, the lack of complete characterization and reproductibi the quantity of each of the comtoosants of the fibrinogen solution (Factor XIII, fibronectin, aprotinin); and on the other hand, the difficulty of inactiva virus of such a product vis-à-vis non-human * (trademarks)

4 enveloppés comme des Agents Transmissibles Non Conventionnels. Ceci a conduit à une limitation de la possibilité d'utiliser de tels produits à grande échelle.
TARDY et Coll., (demande de brevet français FR-A-2715309), ont décrit un adhésif biologique collagéni-que qui peut être prëparé grâce à un kit constitué par w exemple de deux seringues séparées contenant respective-ment une solution de collagène (ou gélatine) oxydë par le périodate de sodium et conservé à pH acide sous forme congelée à une température inférieure à 0°C, de préfé-rence de l'ordre de -20°C, et une solution alcaline aqueuse. Le mélange des contenus respectifs est assuré
par un mélangeur connecté aux deux seringues, après réchauffage du gel de collagène (ou gélatine) oxydé aux environs de 40°C, pour obtenir un adhésif biocompatible dont la réticulation est accomplie en 2 à 3 minutes.
Les propriétés de cet adhésif sont intéres-santes dans certaines applications, mais le problème principal de cette technologie est la nécessité d'une chaîne de froid complexe pour la distribution de ce produit, ce qui en augmente le coût et en gêne .l'emploi dans des locaux non équipés de congélateur.
On a également proposé d'utiliser des dérivés réactifs du polyéthylène glycol pour former des colles biologiques à base d'albumine ou de collagène (Brevet BARROWS et Col. - n° WO 96 031 59 A1 ; SIERRA D. - Tissue Sealants Meeting La Jolla, 1996 ) . Cependant, ces réactifs sont peu stables dans l'eau et peuvent nécessiter des modes de conservation particuliers. Leur pH optimum d'activité est alcalin, non physiologique. D'autre part,.
le temps de résorption de ces produits est très long,.
supérieur à 3 à 4 semaines, ce qui, dans certaines applications, est un inconvénient majeur.
La nécessité incontournable d'obtenir rapide-ment et quelquefois presque instantanément, 1a solidifi--cation d'une solution fluide pour obtenir une adhésion forte, peut rendre nécessaire l'emploi d'un excès de réactifs chimiques ~de réticulation qui provoque la toxicit et la mdiocre biocompatibilit tissulaire. 4 wrapped as Non-Communicable Agents Conventional. This led to a limitation of the possibility of using such products on a large scale.
TARDY et al., (French patent application FR-A-2715309) have described a collagenic biological adhesive that can be prepared thanks to a kit made by example of two separate syringes containing respectively a solution of collagen (or gelatin) oxidized by sodium periodate and stored at acidic pH in the form of frozen at a temperature below 0 ° C, preferably the order of -20 ° C, and an alkaline solution aqueous. The mixture of the respective contents is ensured by a mixer connected to the two syringes, after heating of the collagen gel (or gelatin) oxidized to around 40 ° C, to obtain a biocompatible adhesive whose crosslinking is accomplished in 2 to 3 minutes.
The properties of this adhesive are interesting in some applications, but the problem The main reason for this technology is the need for complex cold chain for the distribution of this product, which increases the cost and inconvenience.
in premises not equipped with freezer.
It has also been proposed to use derivatives polyethylene glycol reagents to form glues albumin or collagen-based biologics (Patent BARROWS et al. - No. WO 96 031 59 A1; SIERRA D. - Tissue Sealants Meeting La Jolla, 1996). However, these reagents are unstable in water and may require special modes of conservation. Their optimum pH
activity is alkaline, not physiological. On the other hand,.
the resorption time of these products is very long ,.
more than 3 to 4 weeks, which in some applications, is a major drawback.
The unavoidable need to obtain rapid sometimes almost instantly, the solidification cation of a fluid solution to obtain adhesion strong, may necessitate the use of an excess of chemical reagents ~ crosslinking that causes the toxicity and poor tissue biocompatibility.

5 Des colles tissulaires base de glatine commerciale et de glutaraldhyde ou d'amidon oxyd ont aussi t rcemment proposes dans le document WO

97/29715 (Fusion Medical Technologies, Inc.).

Ces colles forment des gels trs visqueux qui I0 doivent tre chauffs temprature leve, de l'ordre de 50-80C, pour leur application la seringue.

Outre le risque de toxicit potentiel selon l'aldhyde utilis, ces colles peuvent endommager les tissus traits notamment du fait de leur temprature d'application.

L'invention a pour objectif de fournir une composition adhsive ne prsentant pas les inconvnients majeurs voqus prcdemment.

Elle a ainsi pour objectif de fournir une composition adhsive biocompatible, biorsorbable et non toxique, adapte un usage chirurgical et/ou thrapeu-tique, qui soit stable dans le temps et pouvant tre conserve dans des conditions relativement simples tout en tant d'utilisation aise, notamment injectable l'aide d'aiguilles ou de cathters.

Elle a encore pour objectif de fournir une composition adhsive prsentant des proprits d'adhsion et de rsistance mcanique amliores.

Un autre objectif de l'invention est en particulier de fournir une composition adhsive avec laquelle la rticulation du collagne ou de la glatine - s' effectue trs rapidement et dont la vitesse puisse tre facilement module.

Un autre objectif est encore de fournir une composition adhsive ne prsentant pas de risque de Glucose-based tissue glues commercial and glutaraldhyde or oxidized starch have also recently proposed in WO

97/29715 (Fusion Medical Technologies, Inc.).

These glues form very viscous gels which I0 must be heated at high temperature, from 50-80C, for their application the syringe.

In addition to the risk of potential toxicity according to the aldhyde used, these glues can damage the particular tissues due to their temperature application.

The object of the invention is to provide a Adhesive composition not presenting the disadvantages major voices previously.

It is therefore intended to provide a Adhesive composition biocompatible, biorsorbable and not toxic, adapts surgical and / or therapeutic use tick, which is stable over time and can be keeps in relatively simple conditions all as a comfortable use, especially injectable using needles or catheters.

It is still intended to provide a Adhesive composition exhibiting adherence properties and improved mechanical strength.

Another objective of the invention is particular to provide an adhesive composition with which is the cure of collagen or glatin - is carried out very quickly and whose speed can be easily module.

Another goal is still to provide a Adhesive composition does not present a risk of

6 toxicité en particulier par diffusion de l'agent réticu-lant .
Un objectif de l'invention est aussi de fournir une composition adhésive pour la liaison de tissus biologiques, y compris des tissus vivants, entre eux ou avec un biomatériau implanté qui peut être l'adhésif lui-même (utilisé seul).
L'invention a par ailleurs pour objectif de fournir un procédë de réticulation du collagène iou gélatine) permettant l'obtention notamment d'une telle composition adhésive, qui soit facile à mettre en oeuvre et sans danger pour l'organisme receveur.
L' inventibn a encore pour objectif de fournir des kits comprenant une composition adhésive telle que précitée, à usage chirurgical et/ou thérapeutique, d'utilisation simple et pratique.
A cette fin, l'invention a pour objet une composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, en solution aqueuse, au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse, et en ce que ladite solution aqueuse de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable~d'origine naturelle présente naturellement un pH acide.
On pense que la stabilité de telles solutions aqueuses est obtenue, de façon naturelle, par le fait que la solution devient spontanément acide.
L'invention a donc, notamment, pour objet de telles compositions comprenant un polyaldéhyde, en solution aqueuse au pH acide naturellement obtenu ou sous forme lyophilisée acide.
L'invention a aussi pour objet une composi-tion adhésive, caractérisée en ce qu'elle comprend .
d'une part, un compbsant collagénique solubilisé en WO 98/15299 PCTlFIt97/01787 6 toxicity, in particular by diffusion of the lant.
An object of the invention is also to provide an adhesive composition for the binding of biological tissues, including living tissue, between them or with an implanted biomaterial that can be the adhesive itself (used alone).
The invention also aims to provide a process for crosslinking collagen or gelatin) which makes it possible to obtain, in particular, such adhesive composition, which is easy to implement and safe for the recipient organism.
The invention still aims to provide kits comprising an adhesive composition as aforementioned, for surgical and / or therapeutic use, simple and practical use.
To this end, the subject of the invention is an adhesive composition biocompatible, bioabsorbable and nontoxic, for surgical use and / or characterized in that it comprises, in aqueous solution, less a biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin aqueous solution, and in that said aqueous solution of polyaldehyde macromolecular biodegradable ~ naturally occurring naturally presents a acidic pH.
It is thought that the stability of such solutions water is obtained, naturally, by the fact that the solution becomes spontaneously acidic.
The invention therefore, in particular, aims to such compositions comprising a polyaldehyde, in aqueous solution at the acidic pH naturally obtained or lyophilized acid form.
The invention also relates to a composition adhesive composition, characterized in that it comprises.
on the one hand, a collagenic component solubilized in WO 98/15299 PCTlFIt97 / 01787

7 milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes oG, - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 ~, et d'autre part, au moins un polyaidéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, en solution aqueuse tel que défini ci-dessus.
L'invention fournit également un procédé de préparation d'une colle biocompatible, biorésorbable et non toxique, à usage chirurgical et/ou thérapeutique,-destinée à être appliquée sur des tissus et/ou un biomatériau, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape consistant à mélanger à un composant collagénique . solubilisé en milieu aqueux, choisi parmi - le collagène ayant perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
essentiellement de chaînes oc, - le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 ~, préalablement à sa réticulation, au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse au pH tel que défini ci dessus.
L'invention a encore pour objet l'utilisation de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle en solution aqueuse tel que défini ci-dessus, pour l'obtention d'une composition adhésive biocom-patible, biorésorbable et non toxique, à usage chirugical et/ou thérapeutique notamment pour la liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté
présentant des fonctions réactives aminées vis-à-vis dudit polyaldéhyde.
L'invention a encore pour objet l'utilisation 7 aqueous medium, selected from collagen having lost at least partially its helicoidal, unhydrolyzed structure Mostly oG channels, - native collagen in a concentration less than 5 ~, and on the other hand, at least one macromolecular polyaldehyde biodegradable of natural origin, in aqueous solution as defined above.
The invention also provides a method of preparation of a biocompatible glue, bioabsorbable and non-toxic, for surgical and / or therapeutic use, intended to be applied to tissues and / or biomaterial, characterized in that it comprises the step of mixing with a collagen component . solubilized in an aqueous medium, selected from collagen having lost at least partially its helicoidal, unhydrolyzed structure essentially of strings oc, - native collagen in a concentration less than 5 ~, prior to its crosslinking, at least one biodegradable macromolecular polyaldehyde of origin natural in aqueous solution at pH as defined above.
The subject of the invention is also the use of biodegradable macromolecular polyaldehyde of origin natural in aqueous solution as defined above, for obtaining a biocompositive adhesive composition bioabsorbable and non-toxic, for surgical use and / or therapeutic especially for tissue binding between them or to an implanted biomaterial having reactive functions aminated vis-à-vis said polyaldehyde.
The subject of the invention is also the use

8 d'un tel polyaldéhyde en combinaison avec un composant collagénique tel que précédemment défini, en solution aqueuse.
Enfin l'invention a pour objet des kits pour S composition adhésive biocompatible, biorésorbable et non toxique, destinés à un usage chirurgical et/ou thérapeu-tique, caraçtérisés en ce qu'ils comprennent .
- une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini ci-dessus.
L' invention a aussi pour objet des kits pour composition adhésive comprenant .
- une solution aqueuse d'un composant collagénique choisi parmi . le colla ène a ant J Y perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes oc, . le collagène natif selon une concentration inférieure à 5 - une solution aqueuse contenant au moins un polyaldëhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini ci-dessus, - des moyens de mélange pour mélanger extemporanément lesdites solutions.
L' invention a encore pour objet un procëdé de liaison d'un biomatériau à des tissus biologiques, caractérisé en ce que l'on applique, à une température comprise entre 20 et 45°C sur lesdits tissus et/ou sur ledit biomatériau, une solution aqueuse contenant au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini ci-dessus, ledit biomatériau présentant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à-vis dudit polyaldéhyde.
L'invention a aussi pour objet un procédé de ' liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomaté-WO 98/15298 of such a polyaldehyde in combination with a component collagenic as previously defined, in solution aqueous.
Finally, the subject of the invention is kits for S biocompatible adhesive composition, bioresorbable and not toxic, intended for surgical use and / or therapeutic tick, caracterized in that they understand.
an aqueous solution containing at least one biodegradable macromolecular polyaldehyde of origin natural, as defined above.
The invention also relates to kits for adhesive composition comprising an aqueous solution of a component collagenic chosen from . collagen JY lost at least partially-its helicoidal, unhydrolyzed structure Mostly oc channels, . native collagen in a concentration less than 5 an aqueous solution containing at least one original biodegradable macromolecular polyaldehyde natural, as defined above, mixing means for mixing extemporaneously said solutions.
The subject of the invention is also a method of binding of a biomaterial to biological tissues, characterized in that one applies, at a temperature between 20 and 45 ° C on said tissues and / or on said biomaterial, an aqueous solution containing at least less a biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin, as defined above, biomaterial having functions, in particular amino, reactive with said polyaldehyde.
The invention also relates to a method of binding of biological tissues to one another or to a biomaterial WO 98/1529

9 l'CT/FR97/01787 riau implanté, caractérisé en ce que .
- on mélange à pH neutre, physiologique, une solution aqueuse d'un composant collagénique choisi parmi:
. le collagène ayant perdu au moins partiel-lement sa structure hélicoïdale, non hydrolysé, constitué
majoritairement de chaînes oc;
. le collagêne natif selon une concentration inférieure à 5 ~;
et une solution aqueuse contenant au moins un polyaldé-hyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, tel que défini précédemment;
- on applique rapidement le gel obtenu sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présen tant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à
vis desdits polyaldéhydes macromoléculaires, à une température comprise entre 20 et 45°C; et - on laisse polymériser ledit mélange.
Les inventeurs ont découvert, de manière tout à fait inattendue,, les propriétés potentiellement adhésives de tels polyaldéhydes macromoléculaires biodé
gradables d'origine naturelle sur les tissus vivants et l'aptitude des adhésifs qui en découlent, à être extrême ment bien tolérés par l'organisme receveur tout en conservant leurs propriétés adhésives pendant leur séjour dans l'organisme.
Ils ont ainsi découvert que l'on pouvait coller des tissus biologiques, y compris des tissus vivants, entre eux ou avec un biomatériau implanté, celui-ci présentant.des fonctions réactives vis-à-vis des polyaldéhydes macromoléculaires, notamment des fonctions aminées.
Les inventeurs ont découvert de manière . surprenante que l' on pouvait obtenir une colle biologique en apportant l'excès de réactifs chimiques nécessaire à

la réticulation de certains collagènes ou gélatines sous forme d'un tel polyaldéhyde macromoléculaire biodëgrada-ble et que cette colle est efficacement applicable sur , les tissus vivants à une température proche de la 5 température physiologique, n'entraînant pas de lésion tissulaire, et présente des propriétés améliorées notam-ment au niveau de la qualité d'adhésion et de la résis-tance mécanique.
Selon l'invention, par "polyaldéhyde 9 CT / FR97 / 01787 implanted material, characterized in that.
- is mixed at neutral pH, physiological, a aqueous solution of a selected collagenic component among:
. collagen having lost at least partially its helicoidal, unhydrolyzed structure mostly oc channels;
. the native collagen according to a concentration less than 5 ~;
and an aqueous solution containing at least one biodegradable macromolecular hyde of natural origin, as defined previously;
- the gel obtained is rapidly applied to said tissues and / or said biomaterial, this latter functions, especially amines, reactive vis-à-vis of said macromolecular polyaldehydes, at a temperature between 20 and 45 ° C; and said mixture is allowed to polymerize.
The inventors have discovered, in a very unexpectedly, the properties potentially adhesives of such biodegradable macromolecular polyaldehydes dimmable of natural origin on living tissues and the ability of the adhesives that result, to be extreme well tolerated by the recipient organism while retaining their adhesive properties during their stay in the body.
They discovered that we could stick biological tissue, including tissue living with each other or with an implanted biomaterial, the latter having reactive functions with respect to macromolecular polyaldehydes, in particular Amino.
The inventors have discovered . surprising that we could get a biological glue bringing the excess of chemical reagents necessary to the crosslinking of certain collagens or gelatins under form of such a biodegradable macromolecular polyaldehyde ble and that this glue is effectively applicable on, living tissues at a temperature close to the Physiological temperature, not causing injury tissue, and has improved properties, in particular quality of membership and resistance to mechanical strength.
According to the invention, by "polyaldehyde

10 macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle", on entend tout composé présentant plusieurs fonctions aldéhydiques, dérivé d'un polymère naturel biodégradable.
Le terme "biodëgradable" désigne un polyaldéhyde macromoléculaire susceptible de disparaître par dégradation progressive (métabolisation).
Le polyaldéhyde macromoléculaire peut être aisément préparé par oxydation de polysaccharides ou de mucopolysaccharides avec notamment l'acide périodique ou ses sels, selon un procédé connu en soi depuis très longtemps. De telles préparations de polysaccharide oxydé
ont déjà été autrefois proposées pour réticuler et stabiliser des matériaux collagéniques solides dans des documents anciens (brevet US-A-3 093 439 Johnson &
Johnson et GB-A-1 109 509 Unilever), ou de la gélatine solubilisée en milieu tamponné
Or, les inventeurs ont découvert qu'en utilisant un tel agent réticulant, on n'observait pas le phénomène de diffusion de celui-ci, phénomène très problématique dans les colles biologiques connues, notamment la colle GRF, en particulier du point de vue de la toxicité et de la biocompatibilité tissulaire.
Ils ont découvert en particulier que le -polyaldéhyde macromolëculaire, en apportant la quantité
nécessaire d'aldéhyde dans la solution de collagène ou ' de gélatine, va se trouver emprisonné à l'intérieur du 10 macromolecular biodegradable of natural origin ", one means any compound with multiple functions aldehydes, derived from a biodegradable natural polymer.
The term "biodegradable" refers to a macromolecular polyaldehyde likely to disappear by progressive degradation (metabolization).
Macromolecular polyaldehyde can be easily prepared by oxidation of polysaccharides or mucopolysaccharides with in particular periodic acid or its salts, according to a process known per se since very long time. Such oxidized polysaccharide preparations have previously been proposed to crosslink and stabilize solid collagenic materials in ancient documents (US-A-3,093,439 Johnson &
Johnson and GB-A-1,109,509 Unilever), or gelatin solubilized in buffered medium However, the inventors have discovered that using such a crosslinking agent, it was not observed that phenomenon of diffusion of this one, very phenomenon problematic in known biological glues, especially the GRF glue, especially from the point of view toxicity and tissue biocompatibility.
They discovered in particular that the -macromolecular polyaldehyde, bringing the quantity necessary aldehyde in the collagen solution or ' of gelatin, will be trapped inside the

11 gel adhésif qu'il aura permis de former.
Le polyaldéhyde macromoléculaire mis en oeuvre selon l'invention consiste avantageusement en un polysaccharide ou mucopolysaccharide oxydé.
Le polysaccharide possède avantageusement un poids moléculaire compris entre 10 000 et 2 millions Daltons.
Parmi les polysaccharides ou mucopoly-saccharides convenant à la réalisation de l'invention, on peut citer l'amidon, le dextrane, l'agarose, la cellulose, la chitine, le chitosan, l'acide alginique, les glycosaminoglycanes, l'acide hyaluronique et le chondroitine sulfate ou leurs dérivés.
Selon l'invention, l'amidon et le dextrane sont préférés, l'amidon étant tout particulièrement préféré.
Les polyaldéhydes peuvent être utilisés seuls ou en mélanges.
w Le terme "polyaldéhyde" utilisé selon l'invention désigne indifféremment un polyaldéhyde seul ou un mélange de plusieurs polyaldéhydes.
Conformément à l'invention, le polyaldéhyde peut résulter de l'oxydation d'un composé précité par l'acide périodique ou l'un de ses sels, de préférénce le périodate de sodium, selon des procédé connus en soi.
Pour ce faire, on ajoute à la solution de polysaccharide ou mucopolyssacharide une solution d'acide périodique ou d'un de ses sels jusqu'à l'obtention d'une concentration comprise entre 0,01 et 1 M, de préférence 0, 25 à 0, 5 M.
L'étape d'oxydation peut être opérée sur des solutions, des gels ou des suspensions de poly-saccharide(s).
La préparation de poiysaccharide oxydé peut ensuite être soumise à des dialyses, diafiltrations, 11 adhesive gel that he has allowed to form.
Macromolecular polyaldehyde according to the invention advantageously consists of a polysaccharide or oxidized mucopolysaccharide.
The polysaccharide advantageously has a molecular weight between 10,000 and 2 million Daltons.
Among the polysaccharides or mucopoly-saccharides suitable for carrying out the invention, starch, dextran, agarose, cellulose, chitin, chitosan, alginic acid, glycosaminoglycans, hyaluronic acid and chondroitin sulphate or their derivatives.
According to the invention, starch and dextran are preferred, the starch being particularly prefer.
Polyaldehydes can be used alone or in mixtures.
w The term "polyaldehyde" used according to the invention indifferently denotes a polyaldehyde alone or a mixture of several polyaldehydes.
According to the invention, polyaldehyde may result from the oxidation of a compound mentioned above by periodic acid or one of its salts, preferably sodium periodate, according to methods known per se.
To do this, we add to the solution of polysaccharide or mucopolysaccharide an acid solution periodical or a salt thereof until obtaining a concentration between 0.01 and 1 M, preferably 0, 25 to 0, 5 M.
The oxidation step can be performed on solutions, gels or suspensions of poly-saccharide (s).
The preparation of oxidized polysaccharide can then be subjected to dialysis, diafiltration,

12 filtrations, ultrafiltrations dans le but d'éliminer les produits de Ia réaction d'oxydation et des réactifs, ainsi que des dérivés iodés formés pendant la réaction, ou en excès.
~5 On peut également prévoir une lyophilisation, la redissolution du lyophilisat pouvant se faire en eau ou avec Ie tampon physiologique nécessaire.
La composition adhésive selon l'invention comprend au moins un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle tel que défini ci . dessus.
I1 peut s'agir d'une solution aqueuse comprenant de préférence de 0,5 à 5 ~ en poids de polyal-déhyde(s?.
On a constaté que la solution aqueuse de polyaldéhyde devient spontanément acide, ce qui favorise sa stabilitë. En présence de tampons modifiant ce pH, on observe une perte de réactivité progressive dans le temps. On conserve donc avantageusement le polyaldéhyde au pH acide qu'il acquiert naturellement en solution aqueuse, jusqu'au moment de l'emploi ou encore, sous forme lyophilisée.
La solution est stable à l'abri de l'air et est conservée de préférence entre +1°C et +25°C.
Cette composition adhésive est avantageuse-ment utilisée, après neutralisation par un tampon approprié avant l'emploi, pour la liaison de tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté.
Dans ces conditions, la solution de polyaldé
hyde neutralisée est stable pendant au moins une journée à température ambiante.
La température d'application de la solution de polyaldéhyde est comprise entre 20 et 45°C.
Dans le cas d'un biomatériau implanté, celui- ' ci présente des fonctions réactives vis-à-vis du ou des WO 98/15299 PCTlFR97/01787 12 filtrations, ultrafiltrations with the aim of eliminating products of the oxidation reaction and reagents, as well as iodinated derivatives formed during the reaction, or in excess.
~ 5 can also provide freeze-drying, the redissolution of the lyophilisate can be done in water or with the necessary physiological buffer.
The adhesive composition according to the invention comprises at least one macromolecular polyaldehyde biodegradable of natural origin as defined herein . above.
It can be an aqueous solution preferably comprising from 0.5 to 5% by weight of polyal-dehyde (s ?.
It has been found that the aqueous solution of Polyaldehyde becomes spontaneously acidic, which promotes its stability. In the presence of buffers that modify this pH, observes a progressive loss of reactivity in the time. Polyaldehyde is therefore advantageously preserved at the acidic pH that it acquires naturally in solution until the moment of use or under freeze-dried form.
The solution is stable away from the air and is preferably stored between + 1 ° C and + 25 ° C.
This adhesive composition is advantageous used, after neutralization with a buffer appropriate before use, for tissue binding between them or to an implanted biomaterial.
Under these conditions, the solution of polyalde neutralized hyde is stable for at least a day at room temperature.
The application temperature of the solution polyaldehyde is between 20 and 45 ° C.
In the case of an implanted biomaterial, that ci presents reactive functions vis-à-vis the WO 98/15299 PCTlFR97 / 01787

13 polyaldéhydes contenus dans la composition qui sont formées en particulier par des fonctions aminées.
Le matériau peut comprendre du collagène ou de la gélatine comme dêcrit ci-après.
On prévoit avantageusement un temps de contact entre le biomatériau et la composition adhésive, de l'ordre de 10 secondes à 3 minutes préalablement à
l'application "in situ" dudit matériau.
Le collage se produit progressivement en général entre 10 secondes et 3 minutes à pH physiologi-que, à une température de l'ordre de 37-40°C.
On peut contrôler ce temps de collage et le temps de dégradation in vivo de l'adhésif formé en fonction de la concentration de la solution de polyaldé-hyde macromoléculaire ainsi que selon le taux d'oxydation du polysaccharide comme indiqué ci-après.
Selon un second mode de réalisation de l'invention, la composition adhésive comprend une solution contenant au moins un polyaldéhyde macromolécu-laire biodégradable d'.origine naturelle, telle que définie précédemment ainsi qu'une solution d'un composant collagénique.
Selon l'invention, le terme "composant colla gènique" désigne du collagène ayant perdu au moins partiellement sa structure hélicoïdale par une opération de chauffage ou toute autre méthode, ou encore du colla-gène natif.
Dans le cas d'un chauffage pour dénaturer la structure hélicoïdale du collagène, le chauffage doit être modéré et effectué dans des conditions douces, de manière à éviter la dégradation par coupure hydrolytique, de la gélatine ainsi formée.
Le collagène est non hydrolysé et constitué
en majorité de chaînes oc.
Par chaînes oc dans le sens de l' invention, on WO 98/15299 PCT/FR97/Oi787 13 polyaldehydes contained in the composition that are formed in particular by amine functions.
The material may include collagen or gelatin as described below.
Advantageously, a time of contact between the biomaterial and the adhesive composition, of the order of 10 seconds to 3 minutes prior to the "in situ" application of said material.
Collage occurs gradually in between 10 seconds and 3 minutes at physiological pH
that at a temperature of the order of 37-40 ° C.
We can control this gluing time and the in vivo degradation time of the adhesive formed in a function of the concentration of the polyaldehyde solution macromolecular hyde and the rate of oxidation polysaccharide as indicated below.
According to a second embodiment of the invention, the adhesive composition comprises a solution containing at least one macromolecular polyaldehyde a biodegradable source of natural origin, such as previously defined as well as a solution of a component collagen.
According to the invention, the term "component "refers to collagen that has lost at least partially its helical structure by an operation of heating or any other method, or of collabo-native gene.
In the case of heating to denature the helical structure of collagen, the heating must be moderate and carried out under mild conditions, to avoid degradation by hydrolytic cleavage, gelatin thus formed.
Collagen is unhydrolyzed and constituted mostly chains oc.
By chains in the sense of the invention,

14 entend des chaînes cc entières ou des fragments différents des chaînes oc entières par la perte d'un petit nombre d'acides aminés.
Le poids moléculaire des chaînes oc entières est généralement d'environ I00 kDa, c'est-à-dire de 95 à 130 kDa selon les cas.
Le terme "non hydrolysé" tel qu'utilisé selon l'invention signifie que moins de 10 ~ des chaînes collagéniques ont un poids moléculaire inférieur à
environ 100 kDa.
Par "collagène natif" , on entend du collagène qui a conservé sa structure hélicoïdale d'origine mais qui peut avoir été modifié chimiquement ou encore~traité
pour éliminer les télopeptides, comme indiqué ci-après.
Le collagène utilisé selon l'invention peut être d'origine humaine ou animale, de type I, III ou IV
ou issu de leur mélange.
Le collagène de départ peut également être modifié chimiquement par méthylation, par succinylation ou tout autre méthode connue.
Le collagène est de préfërence exempt de télopeptides, éliminés notamment par traitement à la pepsine de manière à le rendre filtrable sur des filtres de porosité adaptée à la stérilisation (élimination des microbes).
Les gélatines du commerce ne sont pas utilisables aux fins de l'invention. Des colles compre-nant de telles gélatines donnent des gels qui ne devien-nent-fluicles et utilisables, notamment en seringues, qu'à
des températures élevées supérieures à 45-50°C, tempéra-tures pouvant engendrer des réactions de brûlure et de nécrose des tissus (cerveau, nerf, intestin, cornée) alors que l'objectif est au contraire de les protéger.
Conformément à l'invention, le collagène est mis en oeuvre sous forme de solution aqueuse.

Pour cela, le collagène est solubilisé dans de l'eau dans des conditions stériles, en chauffant avantageusement à une température appropriée comprise entre 40 et 70°C.
S Les conditions de solubilisation seront adaptées en fonction du collagène utilisé.
La préparation de gélatine ainsi obtenue peut être soumise ensuite à une filtration dans des conditions stériles, en maintenant la température entre 40 et 70°C.
10 La solution collagénique est avantageusement à pH physiologique, en présence ou non d'un tampon, notamment un tampon phosphate.
Selon l'invention, la solution de gélatine peut être une solution de 10 à 20 %, 15 % à 18 % de 14 means whole cc strings or different fragments whole oc chains by the loss of a few of amino acids.
The molecular weight of whole oc chains is usually about 100 kDa, that is 95 at 130 kDa depending on the case.
The term "unhydrolyzed" as used according to the invention means that less than 10 ~ chains collagen have a lower molecular weight than about 100 kDa.
By "native collagen" is meant collagen which has retained its original helical structure but which may have been chemically modified or ~ treated to eliminate telopeptides, as indicated below.
The collagen used according to the invention can be of human or animal origin, type I, III or IV
or from their mixture.
The starting collagen can also be chemically modified by methylation, by succinylation or any other known method.
Collagen is preferably free of telopeptides, eliminated in particular by treatment with the pepsin so as to make it filterable on filters of porosity adapted to sterilization (elimination of microbes).
Commercial gelatins are not usable for the purposes of the invention. Glues such gelatines give gels which do not become fluids and which can be used, particularly in syringes, high temperatures above 45-50 ° C, tures that can lead to burning and tissue necrosis (brain, nerve, intestine, cornea) while the goal is to protect them.
According to the invention, collagen is implemented in the form of an aqueous solution.

For this, collagen is solubilized in water under sterile conditions, heating advantageously at a suitable temperature included between 40 and 70 ° C.
S The solubilization conditions will be adapted according to the collagen used.
The gelatin preparation thus obtained can be subjected to filtration under conditions sterile, maintaining the temperature between 40 and 70 ° C.
The collagen solution is advantageously at physiological pH, in the presence or absence of a buffer, in particular a phosphate buffer.
According to the invention, the gelatin solution can be a solution of 10 to 20%, 15% to 18% of

15 préférence.
Selon une variante de l'invention, notamment pour des préparations de gélatine à concentration élevée voisine de 20 %, difficilement filtrables, la solution peut être préparée dans des conditions stériles et utilisée pour obtenir directement une composition adhésive selon l'invention.
Selon cette variante, pour ces concentrations élevées, la préparation peut être obtenue par lyophili-sation d'une solution diluée stérile puis redissolution de la poudre stérile par de l'eau stérile dans une enceinte stérile, ce qui permet de réaliser l'opération sans risque de contamination.
D'une manière générale, le collagène est chauffé au-dessus de 37°C et perd ainsi la majeure partie de sa structure hélicoïdale en triple hélice. On peut assimiler la préparation finale à de la gélatine mais dont le poids moléculaire des chaînes élémentaires est supérieur ou égal à 100 000 Daltons, avec moins de 10 %
des chaînes de poids moléculaire inférieur. Cette gélatine est ainsi non hydrolysée et se distingue des Preferably.
According to a variant of the invention, in particular for high concentration gelatin preparations close to 20%, difficult to filter, the solution can be prepared under sterile conditions and used to directly obtain a composition adhesive according to the invention.
According to this variant, for these concentrations the preparation can be obtained by freeze-drying dilution of a sterile dilute solution and redissolve sterile powder with sterile water in a sterile enclosure, which allows the operation to be performed without risk of contamination.
In general, collagen is heated above 37 ° C and thus loses most of of its helicoidal structure in triple helix. We can assimilate the final preparation to gelatin but whose molecular weight of elementary chains is greater than or equal to 100,000 Daltons, with less than 10%
lower molecular weight chains. This Gelatin is thus unhydrolyzed and is distinguished from

16 gélatines couramment disponibles dans le commerce.
Selon l'invention, lorsqu'on utilise le terme "gélatine", on se réfère à une telle préparation.
Si l' on souhaite garder la structure hélicoï-Jale du collagène, notamment pour augmenter le temps de dégradation in vivo, la solution n'est pas chauffée. On préfère alors préparer des solutions moins concentrées, inférieures à 5 ~, de préférence entre 0,2 et 5 environ, notamment entre I et 3 ~ en partant de collagène natif éventuellement pepsiné.
Le procédé de réticulation selon l'invention comprend le fait de mélanger les deux solutions préci-tées. On réalise avantageusement un mélange homogène.
Le polyaldéhyde est mélangé au collagène ou gélatine selon des proportions de 0,5 à 10 ~ en poids, de préférence de 3 à ZO ~ en poids.
Le mélange des solutions précitées est opéré
de préférence à pH neutre, physiologique, et à une température comprise entre 20 et 45°C, de préférence de 2 0 l ' ordre de 3 7 à 42 °C environ . , Dans le. cas de collagène natif utilisé selon une concentration inférieure à 5 ~, on préfère mettre en oeuvre la solution collagénique à température ambiante, par exemple voisine de 20°C à 30°C.
La composition adhésive et le procédé de réticulation selon l' invention peuvent être mis en oeuvre notamment pour arrêter le saignement de plaies tissulai-res, pour lier des tissus biologiques entre eux ou à un biomatériau implanté, pour la cicatrisation des plaies chirurgicales ou chroniques, pour la protection ou l'étanchéité des sutures, pour l'inhibition de la forma-tion d'adhérences post-opératoires ou encore la déli-vrance de mëdicaments selon un système de libération prolongée, ainsi qu'en chirurgie réfractive de l'oeil, en paticulier l'épikératoplastie.

WO 98/15299 ~ PCT/FR97/01787 16 gelatins commonly available commercially.
According to the invention, when the term is used "gelatin" refers to such a preparation.
If one wishes to keep the helical structure Jale collagen, especially to increase the time of degradation in vivo, the solution is not heated. We prefers to prepare less concentrated solutions, less than 5 ~, preferably between 0.2 and 5 about, especially between I and 3 ~ starting from collagen native possibly pepsinous.
The crosslinking process according to the invention includes mixing the two specific solutions Tees. Advantageously, a homogeneous mixture is produced.
Polyaldehyde is mixed with collagen or gelatin in proportions of 0.5 to 10% by weight, preferably from 3 to 20% by weight.
The mixture of the aforementioned solutions is operated preferably at neutral pH, physiological, and at a temperature between 20 and 45 ° C, preferably About 37 to about 42 ° C. , In the. case of native collagen used according to a concentration of less than 5 ~, it is preferred to work the collagen solution at room temperature, for example about 20 ° C to 30 ° C.
The adhesive composition and the method of crosslinking according to the invention can be implemented in particular to stop the bleeding of tissue wounds.
to bind biological tissues to each other or to a implanted biomaterial, for healing wounds surgical or chronic, for the protection or sealing of sutures, for the inhibition of post-operative adhesions or the deli-delivery of drugs according to a system of release prolonged, as well as refractive surgery of the eye, in particular the epikeratoplasty.

WO 98/15299 ~ PCT / FR97 / 01787

17 Selon les applications, le biomatériau implanté consiste en l'adhésif lui-même qui est alors utilisé seul.
r L'invention trouve une application particu-fièrement avantageuse dans la prévention de la formation d'adhérences post-opératoires.
Elle permet également le collage de lentil les, en particulier de lentilles en collagène, sur 1a cornée dans le domaine de la chirurgie réfractive de l'oeil.
L'invention fournit ainsi un procédé de liaison d'un biomatériau à des tissus biologiques, comprenant le fait d' appliquer à une température comprise entre 20° et 45°C, un polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle tel que défini précé
demment, sous forme d'une solution aqueuse au pH acide naturellement obtenu ou neutralisé avant l'emploi, sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présen tant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à
vis dudit polyaldéhyde.
Selon un autre aspect, l' invention fournit un procédé de liaison de tissus biologiques entre eux ou à
un biomatériau implanté, comprenant le fait de mélanger à pH neutre, physiologique, une solution aqueuse de polyaldéhyde macromoléculaire biodégradable d'origine naturelle, telle que décrit précédemment, avec une solution aqueuse de composant collagénique tel que défini précédemment.
On applique ensuite rapidement, c'est-à-dire de préférence en moins d'une minute, le gel ainsi obtenu sur lesdits tissus et/ou ledit biomatériau, celui-ci présentant des fonctions, notamment aminées, réactives vis-à-vis du polyaldéhyde macromoléculaire, à une température comprise entre 20° et 45°C, de préférence 37°
à 42°C, puis on laisse polymériser l'ensemble. 17 Depending on the application, the biomaterial implanted consists of the adhesive itself which is then used alone.
r The invention finds particular application proudly advantageous in the prevention of training postoperative adhesions.
It also allows lentil sticking the, especially collagen lenses, on 1a cornea in the field of refractive surgery of the eye.
The invention thus provides a method of binding of a biomaterial to biological tissues, including applying at a temperature between 20 ° and 45 ° C, a macromolecular polyaldehyde biodegradable of natural origin as defined above in the form of an aqueous solution at acidic pH
naturally obtained or neutralized before use, on said tissues and / or said biomaterial, this latter functions, especially amines, reactive vis-à-vis screw of said polyaldehyde.
In another aspect, the invention provides a process of binding biological tissues to each other or to an implanted biomaterial, including mixing at neutral pH, physiological, an aqueous solution of biodegradable macromolecular polyaldehyde of origin as described above, with a aqueous solution of collagenic component as defined previously.
Then apply quickly, that is to say preferably in less than one minute, the gel thus obtained on said tissues and / or said biomaterial, this presenting functions, in particular amino, reactive vis-à-vis the macromolecular polyaldehyde, at a temperature between 20 ° and 45 ° C, preferably 37 °
at 42 ° C, then allowed to polymerize all.

18 Lorsque le _composant collagénique est du collagène natif, il n'est pas nécessaire de chauffer la composition adhésive qui peut alors être appliquée à
température ambiante.
Les solutions du composant collagénique et de polyaldéhyde peuvent résulter de la redissolution en milieu aqueux tamponné ou non, desdits composants conservés respectivement sous forme lyophilisée.
Par le mélange de la solution de composant collagénique et de la solution de polyaldéhyde macro moléculaire, le~gel homogène et visqueux obtenu se prend en masse progressivement et durcit rapidement en adhérant fortement par exemple aux tissus biologiques sur lesquels il est appliqué.
25 Selon l' invention, on peut contrôler le temps de réticulation et l'augmenter au-delà de 30 secondes en diminuant la concentration de la solution de polyaldéhyde notamment en-dessous de 3 ~ pour une même proportion de -- collagène.
Par exemple, des concentrations de polyaldé-hyde macromoléculaire comprises entre 3 et 0,5 ~ permet-tent de moduler le temps de polymérisation d' une solution de gélatine à 15 ~, respectivement de 15 secondes à 5 minutes.
La polymérisation se produit progressivement en général à pH physiologique à une température de l' ordre de 37 à 40°C .
Selon une variante de l'invention, on peut également ajuster le temps de résorption in vivo de l'adhésif formé en modifiant le taux d'oxydation du polysaccharide mis en oeuvre pour l'obtention du poly-aldéhyde macromoléculaire utilisé. Celui-ci peut ainsi être ajusté entre 1 à 2 jours et 30 à 60 jours.
A cette fin, on peut avantageusement faire varier les concentrations finales en périodate de sodium WO 98!15299 PCTIFR97IOI787 18 When the collagenic component is native collagen, it is not necessary to heat the adhesive composition that can then be applied to ambient temperature.
The solutions of the collagenic component and polyaldehyde can result from redissolution in aqueous medium buffered or not, said components preserved respectively in freeze-dried form.
By mixing the component solution collagen and macro polyaldehyde solution molecular, the homogeneous and viscous gel obtained is taken massively and hardens quickly by adhering strongly for example to biological tissues on which it is applied.
According to the invention, the time can be controlled crosslinking and increase it beyond 30 seconds in decreasing the concentration of the polyaldehyde solution especially below 3 ~ for the same proportion of - collagen.
For example, polyalcohol concentrations macromolecular hyde between 3 and 0.5 ~ allows attempt to modulate the polymerization time of a solution gelatin at 15 ~, respectively from 15 seconds to 5 minutes.
Polymerization occurs gradually in general at physiological pH at a temperature of the order of 37 to 40 ° C.
According to a variant of the invention, it is possible also adjust the in vivo resorption time of the adhesive formed by modifying the oxidation rate of the polysaccharide used to obtain the poly-macromolecular aldehyde used. It can thus be adjusted between 1 to 2 days and 30 to 60 days.
For this purpose, we can advantageously vary the final concentrations in sodium periodate WO 98! 15299 PCTIFR97IOI787

19 entre 0,05 M et 0,1 M.
D'une manière générale plus la concentration en polyaldéhyde est augmentée plus le temps de résorption augmente êgalement.
L'invention fournit également des kits destinës à un usage chirurgical ou thérapeutique notam-ment pour les applications citées précédemment.
Selon une première forme de réalisation, le kit comprend une solution contenant au moins un poly aldéhyde macromoléculaire biorésorbable placée dans une seringue.
On emploie de préférence une solution aqueuse acide contenant 0,5 à 5 ~ en poids de polyaldéhyde(s).
Selon une autre forme de réalisation de - 15 l'invention, le kit peut se présenter avantageusement sous la forme de deux seringues dont chacune comprend respectivement la solution de composant collagénique et la solution de polyaldéhyde macromolêculaire. La solution de collagène est, dans sa propre seringue, à un pH
._ 20 physiologique, avec ou sans tampon (notamment un tampon phosphate).
Les seringues sont fixées à un dispositif de maintien équipë de moyens de mélange conçus pour pouvoir mélanger extemporanément leur contenu de manière homogè-25 ne, après les avoir réchauffées à la température appro-priée comprise entre 37 et 45°C, selon la fluidité
souhaitée.
Le kit peut comprendre une.solution de 10 à
~ de côllagène non hydrolysé, constitué majoritaire-ment de chaînes a, et une solution de polyaldéhyde de 0,5 à 5 ~.
Selon un mode de réalisation préférentiel, on prévoit un kit comprenant d'une part du collagène en solution à 18 ~ et, d'autre part, de l'amidon oxydé à 3 ~, dans un rapport de 1/24.

WO 98/15299 ~ PCT/F'R97l01787 Si l'on utilise du collagène natif, le kit comprend une solution aqueuse à 5 ~ ou moins, de préfé-rence selon une concentration de 0,2 à 5 ~, plus préfé- , rentiellement Z à 3~.
5 La composition adhésive selon l'invention, et notamment le kit décrit ci-dessus, présente l' avantage de pouvoir être stockée entre + 1 et + 2S°C, de préfé-rence entre +2 et +8° C.
D'autre part, selon l'invention le temps de 10 réticulation peut être raccourci en dessous de 3 minutes et contrôlé selon les exigences requises.
Parallèlement, la force de collage développée par le produit selon l'invention est supérieure à celle obtenue avec les colles connues, et notamment les colles 15 de fibrine, tout en conservant une excellente biocompati-bilité.
En outre, l'invention offre avantageusement la sécurité d'emploi liée aux méthodes de préparation du collagène efficaces pour l'élimination des virus et 19 between 0.05 M and 0.1 M.
In general, more concentration polyaldehyde is increased plus the resorption time also increases.
The invention also provides kits intended for surgical or therapeutic use, in particular for the applications mentioned above.
According to a first embodiment, the kit includes a solution containing at least one poly macromolecular aldehyde bioresorbable placed in a syringe.
An aqueous solution is preferably employed acid containing 0.5 to 5 ~ by weight of polyaldehyde (s).
According to another embodiment of In the invention, the kit can be advantageously in the form of two syringes each of which includes respectively the collagenic component solution and the macromolecular polyaldehyde solution. The solution collagen is, in his own syringe, at a pH
Physiological, with or without buffer (especially a buffer phosphate).
The syringes are attached to a device maintenance means of mixing means designed to be able to freshly mix their contents evenly 25 after heating them to the proper temperature between 37 and 45 ° C, depending on the fluidity desired.
The kit may include a solution of 10 to ~ unglycolated colagene, consisting mainly of of a chain, and a polyaldehyde solution of 0.5 to 5 ~.
According to a preferred embodiment, provides a kit comprising collagen on the one hand 18 ~ solution and, on the other hand, oxidized 3-starch ~, in a ratio of 1/24.

WO 98/15299 ~ PCT / F'R97101787 If native collagen is used, the kit comprises an aqueous solution at 5 ~ or less, preferably at a concentration of 0.2 to 5 ~, more preferred, Rentially Z to 3 ~.
The adhesive composition according to the invention, and including the kit described above, has the advantage to be stored between + 1 and + 2S ° C, preferably between +2 and + 8 ° C.
On the other hand, according to the invention the time of Crosslinking can be shortened below 3 minutes and controlled according to the required requirements.
At the same time, the bonding force developed by the product according to the invention is greater than that obtained with known adhesives, and especially glues Of fibrin, while maintaining excellent biocompatibility bility.
In addition, the invention offers advantageously job security related to the methods of preparing the effective collagen for the elimination of viruses and

20 prions (Agents Transmissibles Non Conventionnels) notamment par l'emploi d'un traitement acalin. Ceci écarte un des problèmes majeurs soulevés par les colles de fibrine.
De plus, par rapport à ces colles de fibrine, la viscosité de la composition adhésive selon l'invention est supérieure tout en restant en-dessous de 1000 centipoises, et facilite ainsi son adhésion immédiate.
L'invention va être décrite plus en détails à l'aide des exemples donnés ci-après à titre indicatif et non limitatif.
Exemple 1 . Réalisation d'une solution de ol aldéh de macromoléculaire.
On ajoute à une solution d'Amidon soluble purifié ou de Dextran présentant ou non des charges positives (groupements aminés) ou négatives (groupements 20 prions (Unconventional Transmissible Agents) especially by the use of acalin treatment. This dismisses one of the major problems raised by glues of fibrin.
In addition, compared to these fibrin glues, the viscosity of the adhesive composition according to the invention is superior while staying under 1000 centipoises, and thus facilitates its immediate adhesion.
The invention will be described in more detail using the examples given below for information only and not limiting.
Example 1 Realization of an ol aldeh solution macromolecular.
It is added to a solution of soluble starch purified or Dextran with or without charges positive (amino groups) or negative (groupings

21 carboxyliques ou sulfoniques) ou tout autre groupement fonctionnel, dont le poids moléculaire peut varier de 000 à 2 millions Daltons, à une concentration de 5 en eau, une solution d'acide périodique ou de périodate 5 de sodium jusqu'à l'obtention d'une concentration comprise entre 0,01 et 1M, de préférence 0,25 M.
Après 2 heures de contact à la température du laboratoire, la solution est dialysée (ou diafiltrée à
l'aide d'un ultrafiltre) avec une membrane de seuil de 10 coupure 5 000 Daltons, contre de l'eau distillée. La dialyse est poursuivie jusqu'à l'élimination totale des produits dialysables de la réaction d'oxydation et des rêactifs, ainsi que des dérivés iodés formés pendant la réaction, ou en excès.
On a constaté que la solution de polyaldéhyde obtenue devient spontanément acide, ce qui favorise sa stabilité, et on préfère donc ne pas ajouter de tampon neutre.
La solution finale concentrée de polymère polyaldéhydique dérivé du polysaccharide. initial est ensuite saturée en azote par bullage et condi~tionnée~
stérilement par filtration sur membrane de porosité
0,2 Le produit est stable pendant au moins un an entre +4°C et 25°C, à l'abri de l'air.
Pour ia réalisation d'un kit selon l'inven-tion, on conditionne la solution prëparée en seringues.
Exemple 2 . Réalisation d'une solution de collaaène.
On prépare une solution acide de collagène à
15 ~ par dissolution d'une poudre de collagène acide dans l'eau, à une température comprise entre 40°C et 70°C
pendant 30 minutes.
La solution est neutralisée à pH 7,5 par addition de soude normale dès que la fluidité le permet.
Dans le cas du collagène bovin de type I, il 21 carboxylic or sulphonic compounds) or any other group functional, whose molecular weight may vary from 000 to 2 million Dalton at a concentration of 5 in water, a solution of periodic acid or periodate 5 of sodium until a concentration between 0.01 and 1M, preferably 0.25M.
After 2 hours of contact at the temperature of laboratory, the solution is dialyzed (or diafiltered using an ultrafilter) with a threshold membrane of Cut 5000 Dalton, against distilled water. The dialysis is continued until the complete elimination of dialysable products of the oxidation reaction and as well as iodine derivatives formed during the reaction, or in excess.
It has been found that the polyaldehyde solution obtained becomes spontaneously acidic, which favors its stability, so it is preferred not to add buffer neutral.
The final concentrated polymer solution polyaldehyde derived from the polysaccharide. initial is then saturated with nitrogen by bubbling and condi ~ tioned ~
sterile by porosity membrane filtration 0.2 The product is stable for at least one year between + 4 ° C and 25 ° C, protected from the air.
For the production of a kit according to the invention tion, the prepared solution is packaged in syringes.
Example 2 Realization of a solution of collaaene.
An acidic solution of collagen is prepared 15 ~ by dissolving an acidic collagen powder in water, at a temperature between 40 ° C and 70 ° C
during 30 minutes.
The solution is neutralized to pH 7.5 by addition of normal soda as soon as the fluidity allows it.
In the case of bovine collagen type I,

22 peut être acidosoluble textrait de dermes et de tendons à pH acide), ou solubilisé par digestion à la pepsine, ce qui le rend plus facile à filtrer par la suite.
Dans le cas des collagènes humains d'origine placentaire, ils peuvent être préparés par extraction à -la pepsine selon le procédé décrit dans la demande EP-A-0 214 035.
Bien entendu, d'autres sources de collagène peuvent être utilisées parmi celles connues par l'homme du métier.
Puis ia solution de collagène ainsi chauffée, fluidifiëe et neutralisée, est filtrée stérilement sur membrane de porosité 0,2 ~,~, à la suite de préfiltrations sur filtres de porosité progressivement décroissante, à
une température appropriée entre 40°C et 70°C.
Si. la filtration à une concentration en collagêne de 20 ~ (ou plus) ne peut être réalisée, on dilue la solution collagénique préalablement à sa filtration.
Selon une variante, on lyophilise la solution diluée stérile puis on redissout la poudre stérile par de l'eau stérile dans une enceinte stérile à la concen-tration désirée.
Le produit est stable pendant au moins un an â température ambiante.
Pour la réalisation d'un kit selon l'inven-tion, la solution de collagène ainsi obtenue peut être aisément répartie en seringues à température de 40°C.
Exemple 3 . Réalisation d'un mélange adhésif.
On prépare une seringue de 0,5 ml de poly-aldéhyde macromoléculaire à 5 ~ selon l'exemple 1, et une seringue de 2 ml de collagène à 15 ~, selon l'exemple 2.
Chacune des seringues est fixée à un dispositif de maintien équipé d'un mélangeur conçu pour pouvoir mélanger leur contenu respectif de manière homogène après WO 98/15299 PCTlFR97101787 22 can be acid soluble textured dermis and tendon at acid pH), or solubilized by digestion with pepsin, which makes it easier to filter afterwards.
In the case of human collagen origin placental they can be prepared by extraction at -pepsin according to the process described in application EP-A-0 214 035.
Of course, other sources of collagen can be used among those known to man of career.
Then the collagen solution thus heated, fluidified and neutralized, is sterile filtered through membrane of porosity 0,2 ~, ~, as a result of prefiltrations on porosity filters gradually decreasing, to a suitable temperature between 40 ° C and 70 ° C.
If the filtration at a concentration of collagen of 20 ~ (or more) can not be achieved, we dilutes the collagen solution prior to its filtration.
According to one variant, the solution is freeze-dried.
diluted sterile then the sterile powder is redissolved sterile water in a sterile enclosure at the concentration desired treatment.
The product is stable for at least one year at room temperature.
For the realization of a kit according to the invention the collagen solution thus obtained can be easily distributed in syringes at a temperature of 40 ° C.
Example 3 Realization of an adhesive mixture.
A syringe of 0.5 ml of poly-macromolecular aldehyde at 5 ~ according to Example 1, and a syringe of 2 ml of collagen at 15 ~, according to Example 2.
Each syringe is attached to a device holding equipped with a mixer designed to be able to mix their respective contents evenly after WO 98/15299 PCTlFR97101787

23 les avoir réchauffées à une température de 40°C à 42°C, voire 45°C si une plus grande fluidité est souhaitée.
Le gel homogène et visqueux obtenu en sortie se prend en masse à cette même température, progressive ment à partir de 15 à 30 secondes à pH physiologique et durcit rapidement en adhérant fortement aux tissus biologiques sur lesquels il est appliqué.
Si le mélange est appliqué sur une surface tissulaire ou sur une plaie dônt la température est inférieure à 37°C, la polymérisation induite par la rëaction chimique entre les fonctions aldéhydes et les fonctions amines du collagène, est complétée par une solidification résultant de la gélification du collagène en dessous de 37°C.
Le temps de polymérisation peut être augmenté
au delà de 15 secondes par dilution du polyaldéhyde macromoléculaire en dessous de 5 $ ou en utilisant une quantité par seringue inférieure à 0,5 ml pour 2 ml de w collagène.
Des concentrations de polyaldéhyde macro-moléculaire comprises entre 5 et 0,5 ~ permettent de moduler le temps de polymérisation, respectivement de 15 secondes à 5 minutes.
I1 est possible aussi d'utiliser une solution à 5 ~ de polysaccharide moins oxydé, préparé par exemple avec une concentration finale de périodate de sodium comprise entre 0,05 M et 0,1 M, en variante de l'exemple 1.
TEST D'ADHESIVITE
On mesure la force développée par l'adhésif - tissulaire ainsi préparé, en appliquant le mélange décrit ci-dessus entre deux Lambeaux de peau de parc de 6,25 cmz, eux-mêmes reliés séparément par collage avec une colle acrylique du côté épidermique sur deux .plateaux WO 98!15299 PCTIFR97/01787 23 have them heated to a temperature of 40 ° C to 42 ° C, or 45 ° C if greater fluidity is desired.
The homogeneous and viscous gel obtained at the outlet is taken in mass at this same temperature, progressive from 15 to 30 seconds at physiological pH and hardens quickly by adhering strongly to tissue biological substances on which it is applied.
If the mixture is applied on a surface tissue or on a wound where the temperature is less than 37 ° C, the polymerisation induced by the chemical reaction between aldehyde functions and amine functions of collagen, is completed by a solidification resulting from the gelation of collagen below 37 ° C.
The polymerization time can be increased beyond 15 seconds by dilution of polyaldehyde macromolecular value below $ 5 or by using a quantity per syringe less than 0.5 ml per 2 ml of w collagen.
Concentrations of polyaldehyde macro-between 5 and 0.5 ~ make it possible to modulate the polymerization time, respectively 15 seconds to 5 minutes.
It is also possible to use a solution 5 ~ less oxidized polysaccharide, prepared for example with a final concentration of sodium periodate between 0.05 M and 0.1 M, as a variant of the example 1.
TEST OF ADHESIVITY
The force developed by the adhesive is measured - Tissue thus prepared, by applying the mixture described above between two flaps of park skin of 6.25 cmz, themselves separately bound by gluing with an acrylic glue on the epidermal side on two plates.

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24 d'un dynamomètre.
Après avoir appliqué le produit mélangé et fluide à 40°C sur chacun des deux lambeaux sur la face dermique, les deux plateaux sont aussitôt rapprochés pour comprimer le tout avec une force de 4 Newtons pendant 1 minute puis on incube à 37°C pendant 30 minutes.
Lorsque les plateaux sont séparés progressi-vement, on mesure la résistance à la rupture des deux lambeaux.
La force mesurée est de 7,26 Newtons. Le travail fourni pour lutter contre la résistance à
l'étirement est de 10,96 millijoules.
Dans les mêmes conditions, la colle de fibrine "TISSUCOL" donne une force de 6,30 Newtons et de 11,25 millijoules.
Exemple 4 .
Les force ou travail de l'exemple 3 peuvent être augmentés du double ou du triple en augmentant la concentration du collagène ou du polyaldéhyde macro-moléculaire, comme illustrë ci-après .
On prépare une seringue de 0,5 ml d'une solution de polyaldéhyde macromoléculaire à 5 ~ selon l'exemple 1, et une seringue de 2 mi de collagène à 20 ~, selon une variante de l'exemple 2.
On procède comme â l'exemple 3.
Dans le test d'adhésivité, la force mesurée est de 12,15 Newtons, et le travail fourni pour lutter contre la résistance à l'étirement est de 27,72 milli joules.
Exemple 5 : Collacte d'une lentille en collagène avec une solution de ol aldéh de macromoléculaire sur une cornée de latin et sur une cornée de t~rimate non humain. ' Pour réaliser le collage d'une lentille en 24 a dynamometer.
After applying the mixed product and fluid at 40 ° C on each of the two flaps on the face dermal, the two trays are immediately compress it all with a force of 4 Newtons for 1 minute and then incubated at 37 ° C for 30 minutes.
When the trays are separated progressively the strength of the two shreds.
The measured force is 7.26 Newtons. The work provided to combat resistance to the stretch is 10.96 millijoules.
Under the same conditions, the glue of fibrin "TISSUCOL" gives a force of 6.30 Newtons and 11.25 millijoules.
Example 4 The strength or work of Example 3 can be increased double or triple by increasing the concentration of macrophagal collagen or polyaldehyde molecular, as illustrated below.
A syringe of 0.5 ml of a macromolecular polyaldehyde solution at 5 ~ according Example 1, and a syringe of 2 mi of collagen at 20 ~, according to a variant of Example 2.
The procedure is as in Example 3.
In the stickiness test, the measured force is 12.15 Newtons, and the work done to fight against the resistance to stretching is 27.72 milli joules.
Example 5 Collagen of a collagen lens with a macromolecular ol aldeh solution on a cornea Latin and on a cornea of non-human t ~ rimate. ' To achieve the bonding of a lens in

25 -collagène, on maintient les paupières ouvertes avec un blépharostat, on désépithélialise la cornée sur une zone plus large que le diamètre de la lentille, puis on lave soigneusement la zone désépithélialisée pour éliminer les débris cellulaires.
On dépose la solution de polyaldéhyde à 2 , 5 ou 5 ~ préparée selon la procédure de l'exemple 1, dans la face concave de la lentille jusqu'à remplir complète-ment la concavité de celle-ci avec la solution de polyaldéhyde.
Après 30 secondes à 2 minutes de contact, on sèche la surface cornéenne, on élimine l'excédent de solution de polyaldéhyde par aspiration, puis on place la face concave de la lentille sur la cornée, en prenant soin de centrer la lentille par rapport à l'axe optique.
Le bord de la lentille est correctement plaqué contre la cornée à l'aide d'une spatule.
-- Après 5 minutes de contact, il est possible de mobiliser le globe oculaire par l'intermédiaire d'une spatule posée sur la ler-Mille .
Dans ces conditions, l'utilisation de polyaldéhyde macromoléculaire à une concentration comprise entre 2,5 et 5 ~, n'induit pas de réaction inflammatoire clinique sur les structures antérieures du globe oculaire . cornée, conjonctive, iris, paupières, ni chez le lapin albinos (New Zealand) ni chez le primate non humain (Macaccus cynomolgus).
Cette absence de réactions toxiques ou d'irritation locales souligne l'avantage de la composi tion adhésive selon l'invention par rapport à l'utilisa tion des agents réticulants traditionnels de l'art antérieur, pour la réalisation d'adhésifs tissulaires.
Exemple 5 . Prévention de la formation d' adhérences t~ost-ot~ératoires. 25 -collagen, hold the eyelids open with a blepharostat, the neephithelializes the cornea on an area wider than the diameter of the lens, then we wash carefully the de-epithelialized zone to eliminate cellular debris.
The polyaldehyde solution is deposited at 2.5 or 5 ~ prepared according to the procedure of Example 1, in the concave face of the lens until complete the concavity of the latter with the solution of polyaldehyde.
After 30 seconds to 2 minutes of contact, we dry the corneal surface, eliminating the excess of polyaldehyde solution by suction and then place the concave face of the lens on the cornea, taking care to center the lens with respect to the optical axis.
The edge of the lens is correctly pressed against the cornea with a spatula.
- After 5 minutes of contact, it is possible to mobilize the eyeball through a spatula resting on the l-Mille.
In these circumstances, the use of macromolecular polyaldehyde at a concentration between 2.5 and 5 ~ does not induce reaction clinical inflammation on the anterior structures of the eye-ball . cornea, conjunctiva, iris, eyelids, neither albino rabbit (New Zealand) nor primate non-human (Macaccus cynomolgus).
This absence of toxic reactions or local irritation highlights the benefit of composi adhesive composition according to the invention with respect to traditional crosslinking agents of the art prior art, for the production of tissue adhesives.
Example 5 Preventing the formation of adhesions ot ~ ératoires.

26 Le modèle expérimental utilisé pour démontrer les propriétés de l'adhésif selon l'invention dans la prévention d'adhérences postopératoires a été publié par Elisabeth HARRIS et l'équipe de George RODEHEAVER
(Surgery, 117, 6, 663-669, 1995). _ Le protocole décrit dans cette publication a été mis en oeuvre sur des groupes de 10 rats.
Les essais consistent à créer une abrasion et une déshydratation sur des surfaces de 2 cm~ de paroi pêritonéale et de caecum, au contact l'une de l'autre.
Le groupe de rats'témoins ne reçoit aucun produit de protection des plaies ainsi crées ; il est comparé au groupe de rats qui reçoit de 1 ml à 2 ml de l'adhésif tissulaire de l'invention selon l'exemple 3, - 15 en utilisant un kit comprenant deux seringues comme décrit dans cet exemple, l'adhésif êtant appliqué sur chacune des deux plaies en regard l'une de l'autre.
Après 7 jours d'attente, conformément au . protocole publié, les résultats sont nets .
Aucune adhérence n'est observée entre les deux surfaces lésées dans le groupe de rats traités par l'adhésif tissulaire selon l'invention.
Le groupe de rats témoins, non traité par l'adhésif tissulaire de l'invention, montre des adhéren ces pour chacun des 10 rats, dont les.caractéristiques sont identiques aux résultats publiés dans Surgery 117, 6, 663-669, 1995 mentionné ci-dessus.
I1 ressort de cette même publication ttable II, page 667), que la colle de fibrine (Fibrin sealant), n'est pas efficace pour inhiber complètement la formation d'adhérences post-opératoires.
Les propriétés anti-adhérences démontrées pour l'adhésif tissulaire de cette invention sont particulièrement surprenantes quand on les compare à ' celles des colles de fibrine qui n'ont pas ces proprié-26 The experimental model used to demonstrate the properties of the adhesive according to the invention in the prevention of postoperative adhesions has been published by Elisabeth HARRIS and the team of George RODEHEAVER
(Surgery, 117, 6, 663-669, 1995). _ The protocol described in this publication was carried out on groups of 10 rats.
The tests consist in creating an abrasion and dehydration on surfaces of 2 cm ~ of wall pelitoneeal and cecum, in contact with each other.
The group of rats'counters does not receive any wound protection product thus created; he is compared to the group of rats that receives from 1 ml to 2 ml of the tissue adhesive of the invention according to Example 3, - 15 using a kit comprising two syringes as described in this example, the adhesive being applied to each of the two wounds facing one another.
After 7 days of waiting, in accordance with . published protocol, the results are net.
No adhesion is observed between two injured surfaces in the group of rats treated with the tissue adhesive according to the invention.
The group of control rats, untreated by the tissue adhesive of the invention shows adhesion these for each of the 10 rats, whose characteristics.
are identical to the results published in Surgery 117, 6, 663-669, 1995 mentioned above.
It emerges from this same publication II, page 667), that the fibrin glue (Fibrin sealant), is not effective at completely inhibiting training postoperative adhesions.
The anti-adhesion properties demonstrated for the tissue adhesive of this invention are particularly surprising when compared to ' fibrin glues that do not have these properties.

27 tés.
Selon l'invention, on peut appliquer la composition adhésive formant barrière anti-adhérences en un endroit précis, y compris par injection à travers un cathéter, sans risque de voir bouger cette barrière, ce qui renforce la sécurité et l'efficacité pour le patient traité.
Exemple 7 :Influence de la concentration en t~olyaldéhyde 20 macromoléculaire sur le temt~s de réactivité de la comt~osition adhésive selon l'invention On prépare une composition adhésive à base d'une part, de collagène à 16,5 ~ et, d'autre part, d' amidon oxydé sous forme liquide pH 3 , 3 , à 3 , 3 ~ ( concen-tration moyenne déterminée par mesure de l'indice de réfraction (3,1 ~) et par contrôle des matières sèches (3, 5 ~) ) .
Dans cette étude, on procède à des dilutions de l' amidon oxydé, dans l' eau, à 1 ~, 0, 75 ~ et 0 , 5 respectivement.
Par ailleurs, on part de solutions de collagène à des pH différents, en présence de tampon phosphate.
Les résultats obtenus sont indi gués dans le tableau 1 ci-dessous . 27 your.
According to the invention, the adhesive composition forming an anti-adhesion barrier a specific location, including by injection through a catheter, without the risk of moving this barrier, this that enhances safety and efficiency for the patient treaty.
Example 7 Influence of the concentration of t-olyaldehyde 20 macromolecular on the temt ~ s of responsiveness of the adhesive composition according to the invention An adhesive composition based on on the one hand, collagen at 16.5 ~ and, on the other hand, oxidized starch in liquid form pH 3, 3, at 3, 3 ~ (concentration average rate determined by measuring the index of refraction (3.1 ~) and by control of dry matter (3, 5 ~)).
In this study, we proceed to dilutions oxidized starch in water at 1 ~, 0, 75 ~ and 0, 5 respectively.
In addition, we start from solutions of collagen at different pH, in the presence of buffer phosphate.
The results obtained are indi in the Table 1 below.

28 pH colla- concentration concentration temps de gne en phosphate de l'amidon polymrisa-s (M) oxyd tion du (concentration mlange finale) 1 ~ (0,2 ~) 45 sec.

7,44 0,05 0,75 ~ (0,15 1 min. et 5 ~k) sec.

0,5 ~ (0,1 ~) 3 min.

1 ~ (0,2 ~) 2 min.

7,08 0,02 0,75 ~ (0,15 2 min. et 30 ~) sec.

0, 5 ~k (0, 1 5 min.
~) 1 ~ (0,2 ~) 1 min. et 15 7,33 0,02 sec.

0,75 ~ (0,15 2 min.
~) 0,5 ~ (0,1 ~) 4 min.

Ces résultats montrent que le mélange adhésif I5 durcit d'autant plus rapidement que la concentration en amidon oxydé et le pH du mélange sont élevés.
Les concentrations en amidon oxydé de 1 ~ et 0,75 ~ conduisent à des résultats proches, à 30 secondes près. Par contre, on note une différence sensible entre les.concentrations 0,75 ~ et 0,5 L'ensemble des gels présentent une bonne cohésion et ils ont un aspect élastique d'autant plus prononcé que la concentration en amidon oxydé est faible, ' cette différence étant durable dans le temps.
Le gel avec l'amidon oxydé à 0,5 $ présente une grande élasticité. 28 pH concentration concentration concentration time phosphate of polymeric starch s (M) oxidation of (mixed concentration final) 1 ~ (0.2 ~) 45 sec.

7.44 0.05 0.75 ~ (0.15 1 min and 5 ~ K) dry.

0.5 ~ (0.1 ~) 3 min.

1 ~ (0.2 ~) 2 min.

7.08 0.02 0.75 ~ (0.15 2 min and 30 ~) dry.

0, 5 ~ k (0.15 min.
~) 1 ~ (0.2 ~) 1 min. and 15 7.33 0.02 sec.

0.75 ~ (0.15 2 min.
~) 0.5 ~ (0.1 ~) 4 min.

These results show that the adhesive mix I5 hardens more rapidly than the concentration in Oxidized starch and the pH of the mixture are high.
The oxidized starch concentrations of 1 ~ and 0.75 ~ lead to close results, at 30 seconds near. However, there is a significant difference between the.concentrations 0.75 ~ and 0.5 All the gels present a good cohesion and they have an elastic aspect all the more pronounced that the oxidized starch concentration is low, this difference being sustainable over time.
The gel with oxidized starch at $ 0.5 has great elasticity.

29 La concentration standard d'amidon oxydé à 3~
conduit, quant à elle, à un gel très résistant et d'élasticité plus faible. Le gel augmente son élasticité
avec des concentrations en amidon oxydé de l'ordre de 1 ~ ou moins. Cette propriété peut être intéressante dans de nombreuses applications.
Exemple 8 . Influence de la concentration en tamr3on et du pH du collacrène sur le temps de réactivité de la composition adhésive selon l'invention On prépare une composïtion adhésive à base, d'une part, de collagène à 17 ~ environ et, d'autre part, d'amidon oxydé forme liquide pH 3,3, à 3,3~ comme à
l'exemple 7.
On ajoute un tampon phosphate au collagène selon des concentrations variant de O,OlM à O,1M et l'on prévoit un témoin collagène sans phosphate, ajusté aux mêmes pH.
On étudie parallèlement l'influence du pH du collagène en préparant des solutions à pH variant de 6,9 à 7,45.
Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau 2 ci-dessous.

Concen- COZICen-Temps pH aprs tration tration de mlange poiymri-en pH collagne phosphtesation avec 1.0 colla- M du l~amidon gne mlange oxyd ($) 17 7,12 0 45 sec. 6,75 17,3 7.44 0.05 18 sec. 7.15 17 7,45 0,1 15 sec. 7,30 1 5 ls,s 7,05 0 1 min. 6,60 et 20 sec.

16,8 7,25 0 1 min. 6,69 et 05 sec.

16.9 7,06 0.05 33 sec. 6,94 16,9 7,36 0.05 17 sec. 7,11 16,6 6.95 0,01 1 min. 6,72 2 0 16,7 7,08 0,02 40 sec. 6,92 17 7.33 0.02 28 sec. 7,02 On constate que ia réactivité du mélange augmente avec le pH du collagène et son pouvoir tampon.
Ex~mple 9 . Réalisation d'un mélan e adhésif à artir de collacrène natif On utilise du collagêne solubilisé par digestion à 1a pepsine et purifié, en solution aqueuse contenant 9 g/1 dé chlorure de sodium ajusté à pH 7, selon une concentration de 2 $.
Le collagène non modifié chimiquement ou modifié par succinylation ou méthylation peut être utilisé indiffëremment dans cet exemple. Dans tous les cas, il a conservé sa structure hélicoïdale.

WO 98/15299 PCT/FR97/017$7 Le produit est réparti stérilement dans une seringue de 2 ml stockée à +4°C.
Une solution d'amidon oxydé à 1 ~ est préparée en dissolvant la poudre acide d'amidon oxydé
lyophilisée par un tampon phosphate 0,2M pH 7,50. Une seringue de 0,5 ml est préparée.
Les deux seringues de collagène et d'amidon sont réunies dans un kit semblable à l'exemple 3, réchauffé à température ambiante (voisine de 20°C).
Pour évaluer la force d'adhésion du mélange obtenu à partir de ce kit, on réalise le test d'adhési-vité selon l'exemple 3 avec des lambeaux de peâu de porc de 6,25 cm~.
Les résultats obtenus sont les suivants .
- 15 La force mesurée est de 4,5 Newtons. Le travail fourni pour résister à l'étirement est de 3,15 millijoules. 29 The standard concentration of oxidized starch at 3 ~
leads, in turn, to a very resistant gel and lower elasticity. The gel increases its elasticity with oxidized starch concentrations of the order of 1 ~ or less. This property can be interesting in many applications.
Example 8. Influence of tamr3on concentration and of the pH of collacrene on the reactivity time of the adhesive composition according to the invention An adhesive composition based on on the one hand, collagen about 17 ~ and on the other hand of oxidized starch liquid form pH 3.3, at 3.3 ~ as at Example 7.
A phosphate buffer is added to the collagen in concentrations ranging from 0.01M to 0.1M and provides a collagen free phosphate control, adjusted to same pH.
At the same time, the influence of the pH of the collagen by preparing solutions with a pH of 6.9 at 7.45.
The results obtained are indicated in the Table 2 below.

Concen- COZICen-Time pH after trafficking of mixture poiymri-in pH collagen phosphation with 1.0 collagen of starch mix oxidised ($) 17 7.12 0 45 sec. 6.75 17.3 7.44 0.05 18 sec. 7.15 17 7.45 0.1 sec. 7.30 Ls, s, 7.05 ± 1 min. 6.60 and 20 sec.

16.8 7.25 0 1 min. 6.69 and 05 sec.

16.9 7.06 0.05 33 sec. 6.94 16.9 7.36 0.05 17 sec. 7.11 16.6 6.95 0.01 1 min. 6.72 16.7 7.08 0.02 40 sec. 6.92 17 7.33 0.02 28 sec. 7.02 It is found that the reactivity of the mixture increases with the pH of the collagen and its buffering capacity.
Example 9. Realization of a melan e adhesive to native collacrene Solubilized collagen is used by digestion with pepsin and purified, in aqueous solution containing 9 g / l of sodium chloride adjusted to pH 7, at a concentration of $ 2.
Collagen not chemically modified or modified by succinylation or methylation can be used indifferently in this example. In all the case, it has retained its helical structure.

WO 98/15299 PCT / FR97 / 017 $ 7 The product is sterilely distributed in a 2 ml syringe stored at + 4 ° C.
A solution of oxidized starch at 1 ~ is prepared by dissolving the acid powder of oxidized starch lyophilized with a 0.2M phosphate buffer pH 7.50. A
0.5 ml syringe is prepared.
Both syringes of collagen and starch are combined in a kit similar to Example 3, warmed to room temperature (close to 20 ° C).
To evaluate the adhesion strength of the mixture obtained from this kit, the adhesion test is carried out Example 3 with shreds of pork 6.25 cm ~.
The results obtained are as follows.
The measured force is 4.5 Newtons. The work provided to resist stretching is 3.15 millijoules.

Claims

1. Biocompatible, bioabsorbable and non-absorbable adhesive composition toxic, for surgical and/or therapeutic use, characterized in that it comprises at least one native biodegradable macromolecular polyaldehyde natural, in aqueous solution, and in that said aqueous solution of biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin present naturally an acidic pH.

2. Biocompatible adhesive composition according to claim 1, characterized in that it further comprises a collagen component, dissolved in an aqueous medium, chosen from - collagen having at least partially lost its structure helical, non-hydrolyzed, consisting mainly of .alpha. chain, and - native collagen in a concentration of less than 5% in weight.

3. Adhesive composition according to claim 1 or 2, characterized in that the polyaldehyde consists of a polysaccharide or oxidized mucopolysaccharide.

4. Adhesive composition according to claim 3, characterized in that that the polysaccharide or mucopolysaccharide is chosen from the group including starch, dextran, agarose, cellulose, chitin, chitosan, alginic acid, glycosaminoglycans, hyaluronic acid and chondroitin sulphate or their derivatives.

5. Adhesive composition according to any one of the claims 3 and 4, characterized in that the polysaccharide is chosen from starch and the dextran.

6. Adhesive composition according to any one of the claims 1 to 5, characterized in that the polyaldehyde consists of a polysaccharide or mucopolysaccharide oxidized by periodic acid or one of its salts.

7. Adhesive composition according to any one of the claims 3 to 6, characterized in that the polysaccharide has a molecular weight between about 10,000 and 2 million Daltons.

8. Adhesive composition according to any one of the claims 1 to 7, characterized in that it comprises an aqueous solution of polyaldehyde (s) in a concentration of 0.5 to 5% by weight.

9. Adhesive composition according to any one of the claims 1 to 8, characterized in that the aqueous solution is obtained by dissolving in water or with a physiological buffer, of a polyaldehyde in the form acid freeze-dried.

10. Adhesive composition according to any one of the claims 2 to 9, characterized in that it comprises a collagen solution having lost at least partially its helical structure, not hydrolyzed, according to a concentration of 10 to 20% by weight.

11. Adhesive composition according to any one of the claims 2 to 9, characterized in that it comprises an aqueous solution of collagen native in a concentration of 0.2 to 5% by weight.

12. Adhesive composition according to claim 10 or 11, characterized terized in that, for the mixture, the proportion of the polyaldehyde relative to to collagen is 0.5 to 10% by weight.

13. Adhesive composition according to any one of the claims 1 to 12, characterized in that it is resorbable in the body between 1 to days.

14. Process for the preparation of a biocompatible, bioabsorbable and non-toxic, for surgical and/or therapeutic use, intended to be applied on tissues and/or a biomaterial, characterized in that it comprises the step consisting in mixing with a collagen component, solubilized in medium aqueous, selected from - collagen having at least partially lost its structure helical, non-hydrolyzed, consisting essentially of .alpha. chains, and - native collagen in a concentration of less than 5% in weight, prior to its crosslinking, at least one macromolecular polyaldehyde biodegradable of natural origin in aqueous solution, said solution presenting naturally an acidic pH.

15. Method according to claim 14, characterized in that the collagen component solution is as defined in any any of claims 2, 10 and 11, and the polyaldehyde solution macromolecular is as defined in any one of claims 1 to 9 and 12.

16. Method according to any one of claims 14 and 15, characterized in that the mixing is carried out at a temperature between 20 and 45°C.

17. Method according to claim 16, characterized in that one performs the mixture at a temperature between 37 and 42°C.

18. Method according to any one of claims 14 to 17, characterized in that the mixture is carried out at a neutral or physiological pH.

19. Method according to any one of claims 14 to 18, characterized in that the crosslinking is carried out in less than 5 minutes.

20. Use of a biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin in aqueous solution, said solution having naturally an acid pH, to obtain a biocompatible adhesive composition, bioresorbable and non-toxic, for surgical and/or therapeutic use.

21. Use according to claim 20, in combination with a collagenic component, solubilized in an aqueous medium, chosen from - collagen having at least partially lost its structure helical, non-hydrolyzed, consisting mainly of a chains, and - native collagen in a concentration of less than 5% in weight.

22. Use according to any one of claims 20 and 21, for obtaining an adhesive composition as defined according to one any of claims 1 to 13.

23. Kit comprising a biocompatible adhesive composition, bioabsorbable and non-toxic, intended for surgical and/or therapeutic, characterized in that it comprises an aqueous solution containing at least one biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin, said solution naturally having an acid pH, and at least one means containing said solution and/or enabling it to be applied.

24. Kit according to claim 23, characterized in that it is in the form of a syringe.

25. Kit according to claim 23 or 24, characterized in that it comprises an aqueous solution of polyaldehyde(s) in a concentration between 4.5 and 5% by weight.

26. Kit according to claim 23 or 25, characterized in that it further includes:
- an aqueous solution of a collagen component chosen from .cndot. the collagen having at least partially lost its structure helical, non-hydrolyzed, consisting mainly of .alpha. chains, and .cndot. native collagen in a concentration of less than 5% in weight, and - mixing means for extemporaneously mixing said solutions.

27. Kit according to claim 26, characterized in that it is in the form of two syringes equipped with mixing means, one of which of the syringes contains the collagen component solution and the other contains macromolecular polyaldehyde solution.

28. Kit according to any one of claims 23 to 27, characterized in that it comprises an aqueous solution containing at least one polyaldehyde biodegradable macromolecular molecule of natural origin with a naturally acidic pH
obtained.

29. Kit according to any one of claims 23 to 28, characterized in that the polyaldehyde solution is obtained by dissolution in water Where with a physiological buffer, of a polyaldehyde in acidic freeze-dried form.

30. Kit according to any one of claims 23 to 29, characterized in that it comprises a solution of collagen having lost at least partially its helical structure, non-hydrolyzed, consisting mostly of .alpha. chains, from 10 to 20% by weight.

31. Kit according to one of claims 26 to 30, characterized in that it comprises on the one hand collagen having lost at least partially its helical structure, non-hydrolysed, mainly made up of chains .alpha., in aqueous solution at 18% by weight and, on the other hand, oxidized starch in solution aqueous at 3% by weight, according to a mass ratio 1/24.

32. Kit according to any one of claims 26 to 29, characterized in that it comprises an aqueous solution of native collagen according to a concentration of 0.2 to 5% by weight.

33. Kit according to any one of claims 26 to 32, characterized in that the solution or solutions are maintained at a temperature between +1° and 25°C.

34. Use of an aqueous solution containing at least one biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin, said solution naturally having an acidic pH, to prepare a composition for binding a biomaterial to biological tissues by applying said composition on said tissues and/or on said biomaterial, said composition having a temperature between 20° and 45°C, said biomaterial presenting reactive functions with respect to said polyaldehyde.

35. Use according to claim 34, for bonding a lens in collagen.

36. Use of an aqueous solution containing at least one biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin, said solution naturally having an acid pH for the preparation of a composition to bind biological tissues together or to an implanted biomaterial, for - ~ mixture at neutral or physiological pH:
of an aqueous solution of a collagen component chosen from .cndot. collagen having at least partially lost its structure helical, non-hydrolyzed, consisting mainly of .alpha. chains, and .cndot. native collagen in a concentration of less than 5% by weight and said polyaldehyde solution, and by - ~ application of the gel obtained on said tissues and / or said biomaterial, the latter having reactive functions with respect to said polyaldehyde macromolecular, said application being carried out at a temperature between between 20° and 45°C and - ~ Polymerization of said mixture.

37. ~ Use according to claim 36, characterized in that uses an aqueous solution of polyaldehyde with a naturally obtained acid pH.

38. ~ Use according to claim 36, characterized in that one uses an aqueous solution of polyaldehyde with a previously neutralized pH.

39. ~ Use according to any one of claims 36 to 38, characterized in that, in the case of collagen having lost at least partially its helical structure, non-hydrolyzed, consisting mostly of .alpha. chains, an application is carried out where said composition has a temperature between 37° and 42°C.

39~

40. ~ Use according to any one of claims 36 to 38, characterized in that, in the case of native collagen, a application at room temperature.

41. ~ Use according to any one of claims 34 to 39, characterized in that a composition according to one of any of claims 1 to 10.

42. ~ Use according to any one of claims 34 to 38 and 40, characterized in that a composition according to one of any of claims 1 to 9 and 11.

43. ~ Use according to any one of claims 34 to 39, characterized in that it is implemented using a kit according to one of claims 23 to 31.

44. ~ Use according to any one of claims 34 to 38 and 40, characterized in that it is implemented using a kit according to one of claims 23 to 29 and 32.

45. ~ Use according to any one of claims 34 to 44, for prevention of postoperative adhesions.

46. ~Use of a composition defined according to any of the claims 1 to 13 for bonding biological tissues to each other or to a implanted material.

47. ~ Composition according to any one of claims 1 to 13, characterized in that said biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin is oxidized starch.

48. ~ Process according to any one of claims 14 to 19, characterized in that said biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin is oxidized starch.

49. ~ Kit according to any one of claims 23 to 33, characterized in that said original biodegradable macromolecular polyaldehyde natural is oxidized starch.

50. ~ Use according to any one of claims 34 to 46, characterized in that said biodegradable macromolecular polyaldehyde of natural origin is oxidized starch.

51. ~ Use according to claim 20 such as said composition suitable for bonding biological tissues to each other or biomaterial implanted having amino functions reactive with respect to said polyaldehyde.