CA1140111A

CA1140111A - PROCESS FOR PREPARING A NEW DERIVATIVE OF (20S) 3.alpha.-/(AMINO-ACETYL) AMINO/5.alpha.- PREGNAN-20-O1 AND THE SALTS THEREOF

Info

Publication number: CA1140111A
Application number: CA000358412A
Authority: CA
Inventors: Vesperto Torelli; Jean Vacher; Roger Deraedt
Original assignee: Roussel Uclaf SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1979-08-17
Filing date: 1980-08-15
Publication date: 1983-01-25
Also published as: IE50226B1; FR2463777A1; IT1145382B; DE3031161C2; SE8005309L; PT71700B; BE884794A; JPS5659800A; GB2057448A; ATA420880A; FI802462A; AT373902B; DE3031161A1; HU180376B; DK352380A; ES8103760A1; NL8004600A; FR2463777B1; FI68844B; ZA804473B

Abstract

DE DIVULGATION L'invention concerne un procédé de préparation du (20S)3.alpha.-¢(aminoacétyl)amino! 5a-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou minéraux pharmaceutiquement acceptables qui consiste essentiellement à soumettre la funtumidine à l'action d'un aminoacide: <IMG> , à cliver ensuite le groupement R et, le cas échéant, à salifier le produit ainsi obtenu. Le (20S)3.alpha.-¢(aminoacétyl) amino! 5.alpha.-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou minéraux stimulent en particulier les défenses de l'organisme en potentialisant notamment la production d'immunoglobulines E.The invention relates to a process for the preparation of (20S) 3.alpha.- ¢ (aminoacetyl) amino! 5a-pregnan-20-ol and its addition salts with pharmaceutically acceptable organic or inorganic acids which essentially consists in subjecting funtumidine to the action of an amino acid: <IMG>, in then cleaving the group R and, where appropriate, to salify the product thus obtained. The (20S) 3.alpha.- ¢ (aminoacetyl) amino! 5.alpha.-pregnan-20-ol and its addition salts with organic or mineral acids stimulate in particular the body's defenses by potentiating in particular the production of immunoglobulins E.

Description

.:
~3~4~

La présente invention a pour objet un procédé de pré-paration du (20S) 3~-~(aminoacétyl)amino~ 5a-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides organiques ou mineraux, pharmaceutiquement acceptables. Parmi les sels d'addition avec les acides, on peut citer les sels formés avec les acides chlorhydrique , bromhydrique, iodhydrique, nitrique, sulfuri-que, phosphorique, acétique, formique, benzoique, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxy-lique, aspartique, alcanesulfoniques, tels que l'acide méthane sulfonique et- arylsulfoniques, tels que l'acide benzène sul-fonique.
; Le (20S) 3~-~(aminoacétyl) aminJ' 5~-prégnan-20-ol est un produit qui n'a jamais été décrit jusqu'ici. Le (20S) 3~-~(aminoacétyl)aminoJ 5~-pregnan-20-ol, ainsi que ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables pré-sententd'intéressantes propriétés pharmacologiques comMe le montrent les résultats des testsdonnés ci-après dans la par-tie expérimentale, ils stimulent en particulier les défenses ; de l'organisme en potentialisant notamment la production - 20 d'IgE (immunoglobulines E).
Le (20S) 3~-~(aminoacétyl)amino~ 5~-prégnan-20-ol ainsi que ses sels d'addition avec les acides pharmaceutique-ment acceptable~s peuvent donc être utilisés à titre de médi-.caments pour le traitement des maladies autoimmunes résultant . , .
d'une déficience en certains lymphocytes, qu'il s'agisse de .1 maladies du tissu conjonctif non spécifiques d'un organe ;.- donné comme, par exemple, l'arthrite rhumatoide ou le lupus érythémateux systémique, ou qu'-il s'agisse de maladies spéci-~ fiques d'un organe comme la thyroidite, le pymphygus ou l'anémie `. 30 hémolytiqué.

Les produits obten~s selon l'invention peuvent être ainsi utilises comme traitement adjuvant de l'antibiothérapie et :
~ ~ - .

- ~ ' : ~ ' - ~4~

- de la chimiothérapie anti-cancéreuse.
Les produits obtenus selon l'invention peuvent donc être utilisés pour préparer des compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif, au moins un médicament déEini ci-dessus.
Ces co~positions peuvent être administrées notamment par voie buccale, rectale et parentérale.
Elles peuvent être solides ou liquides et ~e présen-ter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médécine humaine, comme, par exemple, les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparation injectables ; elles sont préparées selon les méthodes usuelles.
Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de caco, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.
La dose administrée est variable selon l'affection traitée, le sujet en cause, la voie d'administration et le produit considéré. Elle peut être, par exemple, aomprise entre l et 100 mg par jour, par voie orale chez l'adulte.
Le procédé de préparation du (20S) 3~-~(aminoacétyl) amino~ 5~-prégnan-20-ol et de ses sels d'addition avec les acides-, pharmaceutiquement acceptables, objet de l'invention, est caractérisé en ce que l'on soumet la funtumidine ou (20S) 3~-amino 5~-prégnan-20-ol, à l'action d'un amino acide de formule II :

-~14~
o dans laquelle R représente un groupement protecteur facile-ment clivable, notamment par hydrogénolyse, pour obtenir un composé de formule III : :

~H

~ \~J\~ .

H~ ~ J III
,~ \ ' ' que l'on soumet à l'action d'un agent de clivage du groupement R, pour obtenir le composé recherché de formule I .

~ f `OH
I

HN~

C

que l'on soumet, si désiré, à l'action d'un acide pour en former le S2 1 correspondant.
.. . :
Comme groupement R, on peut utiliser, par exemple, le groupement carbobenzyloxy ou le groupement carboterbutyl-, oxy.
L'invention a notamment pour objet un procédé caracté-risé en ce que le groupement protecteur R est le radical carbo-benzyloxy.
L'invention a plus particulièrement pour objet un procédé de préparation caractérisé en ce que la réaction - entre le (20S) 3~amino 5a-prégnan-20-ol et l'amino acide de . formale II a lieu en présence d'un agent de condensation.

.

: ,.: . :.
. . .

L'agent de condensation a naturellement pour but d'activer la fonction acide de l'amino acide de formule II:

1l II

Comme agent de condensation, on peut utiliser un carbodiimide de formule :
Rl-N=C=N-R2 dans laquelle Rl et R2 identiques ou différents, représentent un radical alcoyle renfermant de 1 à 8 atomes de carbone, éventuellement porteurs d'un radical dialcoylamino, ou Rl et R2 représentent un radical cycloalcoyle.
Parmi ces derniers on peut citer, par exemple, le dicyclohexylcarbodiimide ou le 1 éthyl 3-(3-diméthylaminopro-pyle) carbodiimide.
On peut aussi utiliser un chloroformiate d'alcoyle comme, par exemple, le chloroformiate de méthyle ou d'éthyle.
On peut aussi utiliser un pyrophosphite d'alcoyle, comme par exemple le pyrophosphite d'éthyle.
L'invention a plus spécialement pour objet un pro- -; 20 cédé caractérisé en ce que l'on utilise comme agent de conden-sation le l-éthyI 3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide.
~ Comme agent de clivage, on ~tilise de préférence l'hydrogène en présence de palladium.
~Ja formation de sels a lieu selon les procédés classiques, par exemple, par addition d'acides.
Le produit de départ utilisé, à savoir le (20S) 3~-amino 5~-prégnan-20-ol, est un produit connu (voir à ce sujet Merck Index 9e éditlon, rubrique 4144).
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter.

; - 4 -' , . .
, . .

- 1~4~
" .
EXEMPLE 1: (20S~ 3~-~'(aminoacétyl) amino~ 5~-Prégnan-20-ol ~chlorhydrate et base) STADE A: (20S1 3~ benzyloxy carbon~lamino-acetyl) aminoZ 5a-~ré~nan-20-ol.
_____ ____ __ _________ On dissout 5,2 g de (20S) 3~-amino 5~-prégnan-20-ol ~et 5,2 g de N-carbobenzyloxy~lycine dans 150 cm3 de chlorofor-, . .
me et 15 cm3 de pyridine. On agite la solution au bain de glace sous azote et ajoute 3,9 g de chlorhydrate de l-éthyl 3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide. Au bout d'une heure on ajoute à nouveau 310 mg de chlorhydrate de l-éthyl 3-(3-di-méthylaminopropyl) carbodiimide, maintient l'agitation pen-dant une demi-heure au bain de glace et dilue ensuite avec une solution saturée de carbonate acide de sodium. On filtre l'insoluble, le lave à part avec une solution de carbonate acide de sodium, à l'eau, à l'acide chlorhydrique normal et `a l'eau, puis le sèche à 50C. On obtient ainsi 5,1 g d'insoluble. La phase chloroformique est séparée du filtrat puis lavée à l'eau, à l'acide chlorhydrique normal, à l'eau, séchée et distillée à sec. On obtient 4,6 g de résidu semi --20 cristallisé . L'insoluble (5,1 g) et l'extrait sec (4,6g) sont joints et empâtes au reflux de 25 cm3 de méthanol~ On glace, - essore, lave au méthanol et sèche à 50~C. On obtient aïnsi 7,05 g du produit recherché fondant à 250-252C, que l'on utilise tel quel dans le stade suivant. L'échantillon analyti-que F = 254C est obtenu par recristallisation dans l'acide acétique.
STADE_B : chlorhydrate de ~20S~ 3~ amlnoacetyl amin_Z 5 -~re~nan-20-ol.

On dissout, à chaud, 7 g du produit obtenu au stade A
dans 150 cm3 d'acide acétique. On agite la solution obtenue sous barbotage d'azote, Iaisse refroidir vers 45 et ajoute 700 mg de palladium sur charbon à 10%. On r~mplace le barbotage :

- ~ - . .
: :

d'azote par un léger barbotage d'hydrogène. Au bout d'une heure, on substitue un courant d'azote au courant d'hydro-gène et poursuit le barbotage pendant 15 minutes. On filtre alors le catalyseur et le rince à l'acide acétique. On évapore à sec le filtrat. On dissout le produit cristallisé
dans 50 cm3 de méthanol. Par addition de 4 cm3 d'une solu-tion 5,5 N d'acide chlorhydrique dans l'éthanol, le produit recherché précipite.
On dilue la suspension avec 50 cm3 d'éthanol absolu, la concentre de moitié et l'abandonne une nuit vers +5C. On essore, lave à l'éthanol et sèche. On obtient 4,43 g du produit recherché.
Le filtrat additionné de 0,5 cm3 d'une solution 5,5N d'acide chlorhydrique dans l'éthanol et concentré à
petit volume fournit un deuxième jet de 0,35 g de produit recherché. On obtient le produit recherché pur fondant à 271C
après recristallisation dans l'éthanol à 80%.

20 = + 195 + 1 (1%, pyridine à 10~ d'eau).
D
; STADE C : ~réparation de la base :
On a utilisé le chlorhydrate brut obtenu au stade B. Le chlorhydrate brut est dissous dans de l'eau chaude.
par addition d'un excès de soude 2N, la base précipite. On l'essore, la lave à l'eau, la sèche et la recristallise dans du méthanol.
On obtient ainsi le produit recherché pur fondant à 269C.

~J = ~25 + 1 tl%, pyridine à 10% d'eau).
D

EXEMPLE 2 : Etude pharmacologiq~e du produit de l'exemple I
sous la forme de son chlorhydrate dénommé cl-après produit A
,: _ - effectuée en comparaison avec le LEVAMISOLE.

Le LEVAMISOLE est un produit bien Fonnu ~Merck ~ .

.

Index 9e édition rubrique 8949~ qui présente des propriétés -immunorégulatrices, vois Cancer, Research 35 927 (1975) ou New England Journal of Medicine 289 (21) 1148 (1973).
A - Potentialisation de la production d'IqE
Des souris femelles, pesant 28 à 30 g, sont illlmuni-. sées par voie sous-cutanée avec de l'ovalbumine mélangée de l'alumine aux jours 0 et 14 et leur sérum est prélévé au jour 21 pour dosage des anticorps IgE formés. Les quantités res-pectives de l'antigène (ovalbumine) et de l'adjuvant (alumine) injectées sont choisies de ~açon à ce que la production d'anticorps soit minimum.
Les produits étudiés sont administrés par voie sous-cutanée 3 heures avant la première immunisation.
Le dosage des IgE est effectué au moyen du test d'anaphylaxie cutanée passive. Ce test consiste à provoquer chez un animal par administration intra-veineuse de l'antigène une réaction antigène-anticorps dans un site cutané où ont été -injectés préalablement des anticorps préparés chez un autre animal avec le même antigène. Cette réaction est visualisée grâce à un colorant injecte en même temps que l'antigène :
il y a apparition au point d'injection des anticorps d'une tache colorée, témoln de l'éclatement des cellules sensibili-sées et de l'augmentation de la perméabillté capillaire en résultant. On recherche la plus grande dilution du sérum qui donne une tache d'un diamètre de 11 à 13 mm chez tous les animaux. La dilution adéquate du sérium est injectée par voie intradermique sous un volume de 0,1 ml à des rats mâles, pe-sant en moyen 250 g, dans la région du dos. Quarante huit heures plus tard, les animaux reçoivent par voie veineuse 0,5 ml d'une solution à 0,5% d'ovalbumine et 1% de bleu Evans dans le soluté isotonique de chlorure de sodium. Trente minutes après cette injection ils sont sacrifiés par exsanguination . .

., lq4~1 ~,1, et le diamètre de la tache bleue est mesuré par la peau retournée.
Les résultats obtenus sont les suivants :
Produit A 0,5 mg/~g par voie sous-cutanée Levamisole 20 mg/kg par voie sous-cutanée Conclusion : sur ce test le produit A est beaucoup plus immu-; nostimulant que le Levamisole.
B - Arthrite chronique à l'adjuvant L'injection d'adjuvant type Freund (Mycobacterium butyricum à 6 mg/ml dans Bayol 55) dans une patte postérieure provoque chez le rat une lésion inflammatoire primaire, puis après un temps de latence de 13 à 15 jours, le déclenchement d'inflammationssecondaires affectant la patte postérieure non injectée ainsi que les pattes antérieures, la queue et les oreilles.
Cette arthrite secondaire peut se comparer à
l'arthrite rhumatolde humaine car l'on admet l'intervention de réactions auto-immunitaires parmi ses facteurs déterminants.
Des ratsmâles, agé de 42 à 50 jours, reçoivent en injection intraplantaire 0,I0 ml d'adjuvant de Freund.

~ 20 Le traitement commence le jour de l'injection de ; l'adjuvant et dure jusqu'au sacriflce des animaux pratiqué le 17ème jour.
Les critères d'appéciation de l'activité des substan-ces sont en général :
- la croissance pondérale des animaux, toujours freinée assez proportionnellement à l'intensité de l'arthrite;
- les augmentations de volume des pattes postérieures - injectées et non~injectées par rapport au volume moyen des ., pattes correspondantes des témoins normaux : -- l'arthrite des pattes antérieures, dont le trop petit volume ne se prête pas à une mesure pléthysmométrique, et donc notée subjectivement de 0 à 3 suivant l'intésité de . . .

' , . ' : .

l'inflammation ;
- L'arthrite des oreilles et de la queue, notée 1 ou 0 selon la présence ou l'absence de nodosités.
Dans la présente expérimentation a été surtout observé l'effet sur les inflammations secondaires, c'est-à-dire, sur l'arthrite de la patte postérieure non injectée, les arthrites des pattes antérieures et les inflammations des oreilles et de la queue.
La dose active qui diminue les inflammations secon-daires d'au moins 50 % a été recherchée.
Les résultats on~ été les suivants :
- Produits A dose active lmg/kg (voie sous-cutanée) Levamisole dose active 50mg/kg (voie buccale) Conclusion : le produit A est donc tres actif sur les phénomè- -nes secondaires de l'arthrite à l'adjuvant alors qu'il faut une dose très élevée subtoxique de Levamisole pour constater un .. . .
effet comparable.

E~ Exemp~ 5~_5~E~ositions pharmaceutiques On a préparé des comprimés répondant à la formule - suivante :

Produit de l'exemple 1 (chlorhydrate) .. ~.~......... 10 mg Excipient (talc, amidon, stéarate de magnésium) q.s.p. ~ 1 comprim~.

. ., , .: - -, ...

, ..... .
.~ ,.. ..

~, :

~ 9 --., , .. : . .:
~ 3 ~ 4 ~

The subject of the present invention is a process for pre-paration of (20S) 3 ~ - ~ (aminoacetyl) amino ~ 5a-pregnan-20-ol and its addition salts with organic or mineral acids, pharmaceutically acceptable. Among the addition salts with the acids, mention may be made of the salts formed with the acids hydrochloric, hydrobromic, hydroiodic, nitric, sulfuric that, phosphoric, acetic, formic, benzoic, maleic, fumaric, succinic, tartaric, citric, oxalic, glyoxy-lique, aspartic, alkanesulfonic, such as methane acid sulfonic and arylsulfonic, such as benzene sul-dark.
; Le (20S) 3 ~ - ~ (aminoacétyl) aminJ '5 ~ -prégnan-20-ol is a product that has never been described so far. The (20S) 3 ~ - ~ (aminoacetyl) aminoJ 5 ~ -pregnan-20-ol, as well as its salts addition with pharmaceutically acceptable acids pre-feel interesting pharmacological properties like show the results of the tests given below in the experimental tie, they stimulate the defenses in particular ; of the organism by potentiating in particular the production - 20 IgE (immunoglobulins E).
Le (20S) 3 ~ - ~ (aminoacétyl) amino ~ 5 ~ -prégnan-20-ol as well as its addition salts with pharmaceutical acids-mentally acceptable ~ s can therefore be used as a medi-.caments for the treatment of autoimmune diseases resulting . ,.
a deficiency in certain lymphocytes, whether .1 non-specific connective tissue diseases of an organ ; .- given as, for example, rheumatoid arthritis or lupus systemic erythematosus, or whether it's specific diseases ~ fiques of an organ such as thyroiditis, pymphygus or anemia `. 30 hemolytic.

The products obtained according to the invention can be thus used as an adjuvant treatment for antibiotic therapy and :
~ ~ -.

- ~ ' : ~ ' - ~ 4 ~

- anti-cancer chemotherapy.
The products obtained according to the invention can therefore be used to prepare pharmaceutical compositions containing as active ingredient at least one drug deEini above.
These co ~ positions can be administered in particular buccally, rectally and parenterally.
They can be solid or liquid and ~ e present-ter in the pharmaceutical forms commonly used in human medicine, such as simple tablets or coated, capsules, granules, suppositories, injectable preparations; they are prepared according to usual methods.
The active ingredient (s) can be incorporated to excipients usually used in these compositions pharmaceuticals, such as talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, butter cocoa, aqueous vehicles or not, original fatty substances animal or vegetable, paraffinic derivatives, glycols, the various wetting, dispersing or emulsifying agents, conservatives.
The dose administered is variable depending on the condition treated, subject, route of administration and product considered. It can be, for example, misunderstood between 1 and 100 mg per day, orally in adults.
The process for the preparation of (20S) 3 ~ - ~ (aminoacetyl) amino ~ 5 ~ -prégnan-20-ol and its addition salts with acids-, pharmaceutically acceptable, object of the invention, is characterized in that funtumidine or (20S) is submitted 3 ~ -amino 5 ~ -pregnan-20-ol, with the action of an amino acid of formula II:

-~ 14 ~
o in which R represents an easy protective group mentally cleavable, in particular by hydrogenolysis, to obtain a compound of formula III::

~ H

~ J.

H ~ ~ D III
, ~ \ '' that we submit to the action of a cleavage agent of the group R, to obtain the desired compound of formula I.

~ f `OH
I

HN ~

VS

which is subjected, if desired, to the action of an acid to form the corresponding S2 1.
... :
As group R, it is possible to use, for example, the carbobenzyloxy group or the carboterbutyl group , oxy.
The invention particularly relates to a characteristic process laughed at in that the protective group R is the carbon radical benzyloxy.
The subject of the invention is more particularly a preparation process characterized in that the reaction - between the (20S) 3 ~ amino 5a-pregnan-20-ol and the amino acid of . formal II takes place in the presence of a condensing agent.

.

:,.:. :.
. . .

The condensing agent naturally aims activate the acid function of the amino acid of formula II:

1l II

As the condensing agent, a carbodiimide of formula:
Rl-N = C = N-R2 in which Rl and R2, which are identical or different, represent an alkyl radical containing from 1 to 8 carbon atoms, possibly carrying a dialkoylamino radical, or Rl and R2 represent a cycloalkyl radical.
Among these we can cite, for example, the dicyclohexylcarbodiimide or 1 ethyl 3- (3-dimethylaminopro-pyle) carbodiimide.
An alkyl chloroformate can also be used such as, for example, methyl or ethyl chloroformate.
One can also use an alkyl pyrophosphite, as by example ethyl pyrophosphite.
The invention more particularly relates to a pro- -; 20 assigned characterized in that one uses as a sation l-ethyl 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide.
~ As a cleavage agent, it is preferably used hydrogen in the presence of palladium.
~ Ja salt formation takes place according to the processes conventional, for example, by adding acids.
The starting material used, namely (20S) 3 ~ -amino 5 ~ -prégnan-20-ol, is a known product (see this subject Merck Index 9th edition, section 4144).
The following examples illustrate the invention without however limit it.

; - 4 -', . .
,. .

- 1 ~ 4 ~
".
EXAMPLE 1: (20S ~ 3 ~ - ~ '(aminoacetyl) amino ~ 5 ~ -Pregnan-20-ol ~ hydrochloride and base) STAGE A: (20S1 3 ~ benzyloxy carbon ~ lamino-acetyl) aminoZ 5a- ~ ré ~ nan-20-ol.
_____ ____ __ _________ 5.2 g of (20S) 3 ~ - amino 5 ~ - pregnan-20-ol are dissolved ~ and 5.2 g of N-carbobenzyloxy ~ lycine in 150 cm3 of chlorofor-,. .
me and 15 cm3 of pyridine. The solution is stirred in the ice under nitrogen and add 3.9 g of ethyl hydrochloride 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide. After an hour 310 mg of 3- (3-di-) hydrochloride are again added methylaminopropyl) carbodiimide, maintains agitation during for half an hour in an ice bath and then diluted with a saturated solution of sodium hydrogen carbonate. We filter insoluble, washed separately with carbonate solution sodium acid, water, normal hydrochloric acid and with water, then dry it at 50C. 5.1 g are thus obtained.
insoluble. The chloroform phase is separated from the filtrate then washed with water, with normal hydrochloric acid, with water, dried and dry distilled. 4.6 g of semi-residue are obtained.
-20 crystallized. The insoluble matter (5.1 g) and the dry extract (4.6 g) are joints and pastes at reflux of 25 cm3 of methanol ~ On ice, - wrung, washed with methanol and dried at 50 ~ C. So we get 7.05 g of the desired product melting at 250-252C, which one use as is in the next step. The analytical sample that F = 254C is obtained by recrystallization from acid acetic.
STADE_B: hydrochloride of ~ 20S ~ 3 ~ amlnoacetyl amin_Z 5 - ~ re ~ nan-20-ol.

7 g of the product obtained in stage A are dissolved, while hot in 150 cm3 of acetic acid. The solution obtained is stirred under nitrogen bubbling, let cool around 45 and add 700 mg of palladium on carbon at 10%. We replace the bubbling :

- ~ -. .
::

of nitrogen by a slight bubbling of hydrogen. After a hour, a stream of nitrogen is substituted for the stream of hydro-gene and continues the bubbling for 15 minutes. We filter then the catalyst and rinses it with acetic acid. We evaporates the filtrate to dryness. The crystallized product is dissolved in 50 cm3 of methanol. By adding 4 cm3 of a solution 5.5 N hydrochloric acid in ethanol, the product sought precipitates.
The suspension is diluted with 50 cm3 of ethanol absolute, concentrates it in half and leaves it overnight + 5C. It is filtered, washed with ethanol and dried. We obtain 4.43 g of the desired product.
The filtrate supplemented with 0.5 cm3 of a solution 5.5N hydrochloric acid in ethanol and concentrated to small volume provides a second spray of 0.35 g of product research. We obtain the desired pure product melting at 271C
after recrystallization from 80% ethanol.

20 = + 195 + 1 (1%, pyridine at 10 ~ water).
D
; STAGE C: ~ base repair :
The crude hydrochloride obtained in the stage was used B. The crude hydrochloride is dissolved in hot water.
by adding an excess of 2N sodium hydroxide, the base precipitates. We wring it out, wash it with water, dry it and recrystallize it in methanol.
The desired pure fondant product is thus obtained at 269C.

~ J = ~ 25 + 1 tl%, pyridine at 10% water).
D

EXAMPLE 2 Pharmacological study of the product of Example I
in the form of its hydrochloride called cl-after product A
,: _ - performed in comparison with LEVAMISOLE.

LEVAMISOLE is a well-known product ~ Merck ~.

.

Index 9th edition section 8949 ~ which has properties - immunoregulatory, see Cancer, Research 35 927 (1975) or New England Journal of Medicine 289 (21) 1148 (1973).
A - Potentialization of IqE production Female mice, weighing 28-30 g, are illi-. subcutaneously with ovalbumin mixed with alumina on days 0 and 14 and their serum is taken on day 21 for assay of the IgE antibodies formed. The remaining quantities antigen (ovalbumin) and adjuvant (alumina) pectives injected are selected from ~ how the production of antibody is minimum.
The products studied are administered by sub-cutaneous 3 hours before the first immunization.
The IgE assay is carried out by means of the test passive skin anaphylaxis. This test involves provoking in an animal by intravenous administration of the antigen an antigen-antibody reaction in a skin site where -previously injected with antibodies prepared in another animal with the same antigen. This reaction is visualized thanks to a dye injects at the same time as the antigen:
there is an appearance at the injection site of the antibodies of a colored spot, evidence of the bursting of sensitive cells and increased capillary permeability in resulting. We are looking for the greatest dilution of the serum which gives a spot with a diameter of 11 to 13 mm in all animals. Adequate dilution of the serum is injected intradermal in a volume of 0.1 ml to male rats, eg average health 250 g, in the back region. Forty-Eight hours later the animals are given venous 0.5 ml 0.5% ovalbumin and 1% Evans blue solution in isotonic sodium chloride solution. Thirty minutes after this injection they are sacrificed by exsanguination . .

., lq4 ~ 1 ~, 1, and the diameter of the blue spot is measured by the upturned skin.
The results obtained are as follows:
Product A 0.5 mg / ~ g subcutaneously Levamisole 20 mg / kg subcutaneously Conclusion: on this test product A is much more immu-; nostimulating as Levamisole.
B - Chronic adjuvant arthritis The injection of adjuvant type Freund (Mycobacterium butyricum 6 mg / ml in Bayol 55) in a hind leg causes a primary inflammatory lesion in the rat and then after a standby time of 13 to 15 days, the trigger secondary inflammation affecting the hind paw not injected as well as the forelegs, tail and ears.
This secondary arthritis can be compared to human rheumatoid arthritis because we admit the intervention autoimmune reactions among its determining factors.
Male rats, 42 to 50 days old, receive as an intraplant injection 0.10 ml of Freund's adjuvant.

~ 20 Treatment begins on the day of injection ; the adjuvant and lasts until the sacriflce of the animals practiced 17th day.
The criteria for assessing the activity of substances these are in general:
- the weight growth of the animals, always slowed down fairly in proportion to the intensity of arthritis;
- increases in volume of the hind legs - injected and not ~ injected relative to the average volume of ., corresponding legs of normal witnesses: -- arthritis of the forelegs, including too much small volume does not lend itself to plethysmometric measurement, and therefore subjectively noted from 0 to 3 depending on the intensity of . . .

'' ,. ':.

inflammation;
- Arthritis of the ears and tail, noted 1 or 0 depending on the presence or absence of lumps.
In the present experiment has been especially observed the effect on secondary inflammation, i.e.
say, on arthritis of the hind leg not injected, arthritis of the forelegs and inflammation of the ears and tail.
The active dose which decreases the secondary inflammations at least 50% was sought.
The results were as follows:
- Products With an active dose of 1 mg / kg (subcutaneous route) Levamisole active dose 50mg / kg (oral route) Conclusion: product A is therefore very active on the phenomena - -Adjuvant arthritis side effects when it takes very high subtoxic dose of Levamisole to find a ... .
comparable effect.

E ~ Free ~ 5 ~ _5 ~ E ~ pharmaceutical requirements Tablets with the formula have been prepared - next :

Product of Example 1 (hydrochloride) .. ~. ~ ......... 10 mg Excipient (talc, starch, magnesium stearate) qsp ~ 1 tablet ~.

. ., , .: - -, ...

, ......
. ~, .. ..

~,:

~ 9 -.,, ..:.

Claims

The embodiments of the invention, about which an exclusive right of property or privilege is claimed, are defined as follows:

1) Process for the preparation of (20S) 3.alpha .- [(amino-acetyl) amino] 5.alpha.-pregnan-20-ol and its addition salts with pharmaceutically acceptable organic or mineral acids bles, characterized in that funtumidine or (20S) 3.alpha.-amino 5.alpha.-pregnan-20-ol, with the action of an amino acid of formula II:

II
in which R represents an easy protective group mentally cleavable, in particular by hydrogenolysis, to obtain a compound of formula III:

III

that we submit to the action of a cleavage agent of the group R, to obtain the desired compound of formula I:

I

which is subjected, if desired, to the action of an acid to form the corresponding salt.

2) Method according to claim 1, characterized in that the protective group R is the carbon radical benzyloxy.

3) Method according to claim 1, characterized in that the reaction between (20S) 3.alpha.-amino 5.alpha.-pregnan-20-ol and the amino acid of formula II takes place in the presence of a condensing agent.

4) Method according to claim 3, characterized in that the condensing agent is a carbodiimide of formula :
R1-N = C = N-R2 in which R1 and R2, which are identical or different, represent an alkyl radical containing from 1 to 8 carbon atoms, possibly carrying a dialkoylamino radical, or R1 and R2 represent a cycloalkyl radical.

5) Method according to claim 4, characterized in that the carbodiimide used is 1-ethyl 3- (3-dimethyl-laminopropyl) carbodiimide.

6) Method according to claim 1, characterized in that the cleavage agent of the group R is hydrogen in the presence of palladium.

7) Method according to claim 1, characterized in that the (20S) 3.alpha.-amino 5.alpha.-pregnan-20-ol is subjected to the action of N-carbobenzyloxyglycine in the presence of chlorhy-1-ethyl 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide drate for obtain the (20S) 3.alpha.- [(benzyloxycarbonylamino-acetyl) amino]
5.alpha.-pregnan-20-ol which is subjected to the action of hydrogen in the presence of palladium, to form the desired compound of formula I which is subjected, if desired, to the action of acid hydrochloric acid to form the corresponding hydrochloride.

8) (20S) 3.alpha .- [(aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregnan-20-ol and its addition salts with mineral or organic acids nics, each time they are obtained by a process according to claim 1 or its obvious chemical equivalents.

9) (20S) 3.alpha. (Aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregnan-20-ol and its addition salts with mineral or organic acids ques, whenever they are obtained by a process according to the claim 2, or its obvious chemical equivalents.

.
10) (20S) 3.alpha .- [(aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregan-20-ol and its addition salts with mineral or organic acids nics, each time they are obtained by a process according to claim 3 or its obvious chemical equivalents.

11) The (20S) 3.alpha .- [(aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregan-20-ol and its addition salts with mineral or organic acids nics, each time they are obtained by a process according to claim 4 and its manifest chemical equivalents.

12) The (20S) 3.alpha .- [(aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregan-20-ol and its addition salts with mineral or organic acids nics, each time they are obtained by a process according to claim 5 or its obvious chemical equivalents.

13) The (20S) 3.alpha .- [(aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregan-20-ol and its addition salts with mineral or organic acids nics, each time they are obtained by a process according to claim 6 or its obvious chemical equivalents.

14) The (20S) 3.alpha .- [(aminoacetyl) amino] 5.alpha.-pregan-20-ol and its corresponding hydrochloride, whenever they are obtained by a process according to claim 7 or its obvious chemical equivalents.