BRPI0922304B1 - Combinações farmacêuticas contendo vincristina e anticorpos que reconhecem especificamente cd38, bem como seus usos - Google Patents

Abstract

COMBINAÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO ANTICORPOS QUE RECONHECEM, ESPECIFICAMENTE, CD38 E VINCRISTINA, E USOS DOS REFERIDOS ANTICORPOS. A presente invenção refere-se à composição farmacêutica compreendendo um anticorpo que especificamente reconhece CD38 e vincristina.

Description

[0001] A presente invenção refere-se às combinações de anticorpos monoclonais direcionadas contra CD38 e vincristina que são terapeuticamente úteis no tratamento de doenças neoplásicas.

[0002] CD38 é uma glicoproteína da transmembrana II tipo de 45 kD com um domínio extracelular C-terminal longo e um domínio citoplásmico N-terminal curto. A proteína CD38 é uma ectoenzima bifuncional que pode catalisar a conversão de NAD+ em ADP-ribose cíclica (cADPR) e também hidrolisar a cADPR em ADP-ribose. A CD38 é suprarregulada e tem sido implicada em muitas malignidades hematopoiéticas.

[0003] Os anticorpos monoclonais 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 e 38SB39 que especificamente reconhecem a CD38, são descritos no pedido PCT WO 2008/047242. Ditos anticorpos anti- CD38 são capazes de matar as células CD38+ por três diferentes mecanismos de citotoxicidade, indução de apoptose, citotoxicidade mediada pela célula dependente do anticorpo (ADCC), e citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Além disso, estes anticorpos são capazes de diretamente induzir a apoptose das células CD38+, mesmo sem a presença de células do estroma ou citocinas derivadas do estroma. A vincristina é um alcaloide usado na quimioterapia. Existe ainda uma necessidade de novos e eficazes medicamentos que possam ser usados na terapia de câncer.

[0004] Foi agora observado, e por esta invenção, que a eficácia dos anticorpos humanizados anti-CD38 pode ser consideravelmente melhorado quando for administrado em combinação com pelo menos uma substância que é terapeuticamente útil nos tratamentos anticânceres e possui um mecanismo idêntico ou diferente daquele dos anticorpos anti-CD38 humanizados e que é limitado na presente invenção à vincristina.

[0005] O termo "anticorpo" é aqui utilizado no sentido mais amplo e abrange especificamente os anticorpos monoclonais (incluindo os anticorpos monoclonais de comprimento total) de qualquer isótipo tal como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos, anticorpos quiméricos e fragmentos de anticorpos. Um anticorpo IgG típico compreende duas cadeias pesadas idênticas e duas cadeias leves idênticas, que são unidas por ligações de dissulfeto. Cada cadeia longa e leve contém uma região constante e uma região variável. Cada região variável contém três segmentos chamados de "regiões de determinação da complementaridade" ("CDRs") ou "regiões hipervariáveis", que são os principalmente responsáveis pela ligação de um epítopo de um antígeno. Elas são geralmente referidas como CDR1, CDR2 e CDR3, numeradas sequencialmente a partir do N-terminal. As partes mais altamente conservadas da região variável fora das CDRs são chamadas as "regiões de estrutura".

[0006] Como aqui utilizado, "VH" ou "VH" refere-se à região variável de uma cadeia longa de imunoglobulina de um anticorpo, incluindo a cadeia longa de um fragmento Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab’ ou F(ab’)2. A referência a "VL" ou "VL" refere-se à região variável da cadeia curta de imunoglobulina de um anticorpo, incluindo a cadeia curta de um fragmento Fv, scFv, dsFv, FAB, Fab’ ou F(ab’)2.

[0007] O anticorpo 38SB13 compreende pelo menos uma cadeia longa tendo uma sequência de aminoácidos que consiste na SEQ ID NO: 50 e pelo menos uma cadeia curta tendo uma sequência de aminoácidos que consiste na SEQ ID NO: 38, dita cadeia longa compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 1, 2 e 3, e dita cadeia curta compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido que consiste em SEQ ID NOS: 4, 5 e 6.

[0008] O anticorpo 38SB18 compreende pelo menos uma cadeia longa tendo uma sequência de aminoácido que consiste em SEQ ID NO: 52 e pelo menos uma cadeia curta tendo uma sequência de aminoácido que consiste em SEQ ID NO: 40, dita cadeia longa compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 7, 8 e 9, e dita cadeia curta compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido que consiste em SEQ ID NOS: 10, 11 e 12.

[0009] O anticorpo 38SB19 compreende pelo menos uma cadeia longa tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 54 e pelo menos uma cadeia curta tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 42, dita cadeia longa compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 13, 14 e 15, e dita cadeia curta compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 16, 17 e 18.

[00010] O anticorpo 38SB30 compreende pelo menos uma cadeia longa tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 56 e pelo menos uma cadeia curta tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 44, dita cadeia longa compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 19, 20 e 21, e dita cadeia curta compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 22, 23 e 24.

[00011] O anticorpo 38SB31 compreende pelo menos uma cadeia longa tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 58 e pelo menos uma cadeia curta tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 46, dita cadeia longa compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 25, 26 e 27, e dita cadeia curta compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 28, 29 e 30.

[00012] O anticorpo 38SB39 compreende pelo menos uma cadeia longa tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 60 e pelo menos uma cadeia curta tendo uma sequência de aminoácido que consiste na SEQ ID NO: 48, dita cadeia longa compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 31, 32 e 33, e dita cadeia curta compreendendo três CDRs sequenciais tendo sequências de aminoácido consistindo em SEQ ID NOS: 34, 35 e 36.

[00013] As linhagens celulares de hibridoma que produzem os anticorpos anti-CD38 de murino 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 e 38SB39 foram depositadas na American Type Culture Collection (10801 University Bid, Manassas, VA, 20110-2209, USA), em 21 de junho de 2006, sob os números de depósito PTA-7667, PTA- 7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA-7668 e PTA-7671, respectivamente (conforme descrito na WO 2008/047242).

[00014] O termo "anticorpo humanizado", como aqui utilizado, refere-se a um anticorpo quimérico que contém sequência mínima derivada da imunoglobulina não humana. O objetivo da humanização é uma redução da imunogenicidade de um anticorpo xenogênico, tal como um anticorpo de murino, para introdução em um ser humano, enquanto mantém a afinidade e especificidade de ligação ao antígeno total do anticorpo. Os anticorpos humanizados, ou anticorpos adaptados para a não rejeição por outros mamíferos, podem ser produzidos usando várias tecnologias tais como o recapeamento e enxerto de CDR. Conforme aqui utilizada, a tecnologia de recapeamento utiliza uma combinação de modelagem molecular, análise estatística e mutagênese para alterar as superfícies não CDR das regiões variáveis de anticorpo para assemelhar-se com as superfícies de anticorpos conhecidos do hospedeiro-alvo. A tecnologia de enxerto de CDR envolve a substituição das regiões de determinação da complementaridade de, por exemplo, um anticorpo de camundongo, em um domínio de estrutura humana, por exemplo, vide a WO 92/22653. Os anticorpos quiméricos humanizados preferivelmente possuem regiões constantes e regiões variáveis diferentes das regiões de determinação da complementaridade (CDRs) derivadas substancialmente ou exclusivamente das regiões de anticorpo humano correspondentes e as CDRs derivadas substancialmente ou exclusivamente de um mamífero diferente de um ser humano.

[00015] Estratégias e métodos para o recapeamento de anticorpos, e outros métodos para reduzir a imunogenicidade de anticorpos dentro de um hospedeiro diferente, são na Patente US 5.639.641, que é por meio desta incorporada em sua totalidade por referência. Os anticorpos podem ser humanizados utilizando uma variedade de outras técnicas, incluindo enxerto de CDR (EP 0 239 400; WO 91/09967; Patentes US nos 5.530.101 e 5.585.089), chapeamento ou recapeamento (EP 0 592 106; EP 0 519 596; Padlan E. A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498; Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering, 7(6): 805-814; Roguska M.A. et al., 1994, PNAS, 91 : 969-973), rearranjo de cadeia (Patente US no 5.565.332), e identificação de resíduos flexível (PCT/US2008/074381). Os anticorpos humanos podem ser produzidos por uma variedade de métodos conhecidos na técnica incluindo os métodos de apresentação fago. Vide também as Patentes US nos 4.444.887, 4.716.111, 5.545.806 e 5.814.318; e publicações de pedido de patente internacional números WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 e WO 91/10741 (ditas referências incorporadas por referência em suas totalidades).

[00016] Os anticorpos anti-CD38 da combinação farmacêutica da presente invenção são anticorpos humanizados que reconhecem CD38 e matam as células CD38+ por apoptose, ADCC e CDC. Em uma outra modalidade, os anticorpos humanizados da invenção são capazes de matar ditas células CD38+ por apoptose mesmo na ausência de células do estroma ou citocinas derivadas do estroma.

[00017] Uma modalidade preferida de um tal anticorpo humanizado é um anticorpo humanizado 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ou 38SB39, ou um fragmento de ligação ao epítopo dos mesmos.

[00018] As CDRs dos anticorpos 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 e 38SB39 são identificadas pela modelagem e suas estruturas moleculares têm sido previstas. Assim, em uma modalidade, esta invenção fornece anticorpos humanizados ou fragmento de ligação ao epítopo destes compreendendo uma ou mais CDRs tendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NOS: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 e 81. Em uma modalidade preferida, uma versão humanizada de 38SB13 é fornecida, que compreende pelo menos uma cadeia longa e pelo menos uma cadeia curta, em que dita cadeia longa compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 1, 2 e 3, e em que dita cadeia curta compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 4, 5 e 6. Em outra modalidade preferida, uma versão humanizada de 38SB18 é fornecida, que compreende pelo menos uma cadeia longa e pelo menos uma cadeia curta, em que dita cadeia longa compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 7, 8 e 9, e em que dita cadeia curta compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 10, 11 e 12. Em outra modalidade preferida, uma versão humanizada de 38SB19 é fornecida, que compreende pelo menos uma cadeia longa e pelo menos uma cadeia curta, em que dita cadeia longa compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 13, 81, 14 e 15, e em que dita cadeia curta compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 16, 17 e 18. Em outra modalidade preferida, uma versão humanizada de 38SB30 é fornecida, que compreende pelo menos uma cadeia longa e pelo menos uma cadeia curta, em que dita cadeia longa compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 19, 20 e 21, e em que dita cadeia curta compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 22, 23 e 24. Em outra modalidade preferida, uma versão humanizada de 38SB31 é fornecida, que compreende pelo menos uma cadeia longa e pelo menos uma cadeia curta, em que dita cadeia longa compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 25, 26 e 27, e em que dita cadeia curta compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 28, 29 e 30. Em outra modalidade preferida, uma versão humanizada de 38SB39 é fornecida, que compreende pelo menos uma cadeia longa e pelo menos uma cadeia curta, em que dita cadeia longa compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 31, 32 e 33, e em que dita cadeia curta compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácido representadas por SEQ ID NOS: 34, 35 e 36.

[00019] Em uma modalidade, esta invenção fornece anticorpos humanizados ou seus fragmentos que compreendem um VH tendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo de SEQ ID NOS: 66 e 72. Em uma modalidade preferida, um anticorpo humanizado 38SB19 é fornecido que compreende um VH tendo uma sequência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 66. Em outra modalidade preferida, um anticorpo humanizado 38SB31 é fornecido que compreende um VH tendo uma sequência de aminoácido representada por SEQ ID NO: 72.

[00020] Em outra modalidade, esta invenção fornece anticorpos humanizados ou seus fragmentos que compreendem um VL tendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo de SEQ ID NOS: 62, 64, 68 e 70. Em uma modalidade preferida, um anticorpo humanizado 38SB19 é fornecido que compreende um VL tendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo de SEQ ID NOS: 62 e 64. Em outra modalidade preferida, um anticorpo humanizado 38SB31 é fornecido que compreende um VL tendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo de SEQ ID NOS: 68 e 70.

[00021] Cada uma das versões humanizadas dos anticorpos 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 e 38SB39 foi mostrada ser particularmente vantajosa como um agente anticâncer. A preparação, propriedades físicas e propriedades farmacológicas benéficas destes são descritas na WO 2008/047242, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Geralmente, as doses utilizadas para o tratamento de seres humanos, que dependem de fatores distintivos do indivíduo a ser tratado, estão entre 1 e 150 mg/kg administradas por via oral ou entre 1 e 150 mg/kg administradas por via intravenosa.

[00022] A vincristina (marca registrada, Oncovin®), também conhecida como leurocristina, é uma vinca alcaloide utilizada para tratar câncer, incluindo leucemia, linfoma, câncer da mama e pulmão. A vincristina é um inibidor da mitose, que se liga aos dímeros de tubulina e inibe a montagem de estruturas de microtúbulos (por exemplo, o fuso mitótico). A inibição da montagem do fuso mitótico leva a um bloqueio do ciclo celular na metáfase. A vincristina é geralmente administrada por via intravenosa.

[00023] Um aspecto da invenção é uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-CD38 em combinação com pelo menos a vincristina. Visto que a atividade dos produtos depende da dose utilizada, é assim possível utilizar baixas doses e aumentar a atividade enquanto reduz os fenômenos de toxicidade. A eficácia melhorada de uma combinação de acordo com a invenção pode ser demonstrada pela determinação da sinergia terapêutica. Uma combinação manifesta a sinergia terapêutica se for terapeuticamente superior ao melhor agente do estudo utilizado isoladamente em sua dose máxima tolerada ou na sua dose mais elevada testada quando a toxicidade não pode ser alcançada na espécie animal.

[00024] Esta eficácia pode ser quantificada, por exemplo, pela morte celular log10, que é determinada de acordo com a seguinte fórmula: morte celular log10 = T-C (dias)/3,32 x Td em que T - C representa o atraso de crescimento do tumor, que é o tempo médio em dias para os tumores do grupo tratado (T) e os tumores do grupo de controle (C) terem alcançado um valor predeterminado (1 g, por exemplo) e Td representa o tempo em dias necessário para o volume do tumor dobrar nos animais de controle [T. H. Corbett et al., Cancer, 40: 2660-2680 (1977); F. M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17: 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)]. Um produto é considerado ser ativo se a morte celular log10 for maior ou igual a 0,7. Um produto é considerado ser muito ativo se a morte celular log10 for maior ou igual a 2,8.

[00025] A combinação manifestará a sinergia terapêutica quando a morte celular log10 for maior do que o valor da morte celular log10 do melhor constituinte administrado isoladamente em sua dose máxima tolerada ou na sua maior dose testada.

[00026] A eficácia das combinações sobre os tumores sólidos pode ser determinada experimentalmente da seguinte maneira:

[00027] Os animais submetidos ao experimento, geralmente camundongos, são por via subcutânea enxertados bilateralmente com 30 a 60 mg de um fragmento de tumor no dia 0. Os animais que carregam os tumores são escolhidos a esmo com base no tamanho de seu tumor antes de serem submetidos aos vários tratamentos e controles. A quimioterapia começa quando os tumores atingirem um tamanho predeterminado após a enxertia, dependendo do tipo de tumor, e os animais são observados diariamente. Os grupos de animais diferentes são pesados diariamente durante o tratamento até que a perda de peso máxima é atingida e a subsequente recuperação de peso total tenha ocorrido. Os grupos são depois pesados uma ou duas vezes por semana até o final da experiência.

[00028] Os tumores são medidos de 1 a 5 vezes por semana, dependendo do tempo de duplicação do tumor, até que o tumor alcance aproximadamente 2 g, ou até que o animal morra (se isto ocorre antes que o tumor alcance 2 g). Os animais são submetidos à necropsia após a eutanásia ou a morte.

[00029] A atividade antitumoral é determinada de acordo com os diferentes parâmetros registrados.

[00030] Os resultados obtidos com as combinações de hu38SB19 e vincristina utilizados em suas doses ideais são indicados abaixo como exemplos.

[00031] A presente invenção também se refere, portanto, às composições farmacêuticas contendo as combinações de acordo com a invenção.

[00032] Os constituintes dos quais a combinação é composta podem ser administrados simultânea, semissimultânea, separadamente ou espaçados ao longo de um período de tempo de modo a obter a máxima eficácia da combinação; sendo possível para cada administração variar na sua duração de uma administração rápida para uma perfusão contínua.

[00033] Como um resultado, para os propósitos da presente invenção, as combinações não são exclusivamente limitadas àquelas que são obtidas pela associação física dos constituintes, mas também àquelas que permitem uma administração separada, que pode ser simultânea ou espaçada ao longo de um período de tempo.

[00034] As composições de acordo com a invenção são preferivelmente composições que podem ser administradas por via parenteral. No entanto, estas composições podem ser administradas por via oral, subcutânea ou intraperitoneal no caso de terapias regionais localizadas.

[00035] As composições para a administração parental geralmente são farmaceuticamente aceitáveis, soluções ou suspensões estéreis que podem opcionalmente ser preparadas conforme exigido no momento da utilização. Para a preparação de soluções ou suspensões nãoaquosas, óleos vegetais naturais tais como azeite, óleo de gergelim ou de petróleo líquido ou ésteres orgânicos injetáveis tais como oleato de etila podem ser usados. As soluções aquosas estéreis podem consistir em uma solução do produto em água. As soluções aquosas são adequadas para a administração intravenosa contanto que o pH seja apropriadamente ajustado e a solução seja preparada isotônica, por exemplo, com uma quantidade suficiente de cloreto de sódio ou glicose. A esterilização pode ser realizada por aquecimento ou por qualquer outro meio que não afete negativamente a composição. As combinações também podem assumir a forma de lipossomos ou a forma de uma associação com veículo como ciclodextrinas ou polietileno glicóis.

[00036] As composições para a administração oral, subcutânea ou intraperitoneal são preferencialmente suspensões ou soluções aquosas.

[00037] Nas combinações de acordo com a invenção, a aplicação dos constituintes dos quais pode ser simultânea, separada ou espaçada ao longo de um período de tempo, é especialmente vantajosa para a quantidade de anticorpo anti-CD38 humanizado para representar de 10 a 90 % em peso da combinação, sendo possível para este teor variar de acordo com a natureza da substância associada, a eficácia procurada e a natureza do câncer a ser tratado.

[00038] As combinações de acordo com a invenção são especialmente úteis no tratamento de vários tipos de cânceres, incluindo (mas não limitado a eles) os seguintes: carcinomas e adenocarcinomas, incluindo aqueles da bexiga, mama, cólon, cabeça e pescoço, próstata, rim, fígado, pulmão, ovário, pâncreas, estômago, colo do útero, tireoide e pele, incluindo o carcinoma de células escamosas; tumores hematopoiéticas de linhagem linfoide, incluindo o mieloma múltiplo, leucemia, leucemia linfocítica (ou linfoide) aguda e crônica, leucemia linfoblástica aguda e crônica, linfoma de células B, linfoma de célula T, linfoma não Hodgkin (por exemplo, linfoma de Burkitt); tumores hematopoiéticos de linhagem mieloide, incluindo leucemias mieloides agudas e crônicas (mieloide ou mielocítica), e leucemia promielocítica; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, osteossarcoma e rabdomiossarcoma, tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma, e schwannomas; e outros tumores, incluindo melanoma, teratocarcinoma, xeroderma pigmentosa, queratoacantoma, e seminoma, e outros cânceres ainda a serem determinados em que CD38 é expresso. Elas são principalmente úteis para o tratamento de leucemia, linfoma e cânceres resistentes aos agentes anticânceres comumente utilizados como os anticorpos anti- CD38 da invenção que possuem um único mecanismo de ação.

[00039] Assim, a invenção também abrange o uso das combinações acima para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

Exemplo:

[00040] Neste exemplo, a eficácia de uma combinação de anticorpo anti-CD38/vincristina da invenção para a inibição do crescimento do tumor foi demonstrada in vivo.

[00041] O modelo de tumor selecionado foi uma linhagem celular de leucemia linfoblástica aguda da célula T humana transplantável (TALL), DND-41, implantada em camundongos SCID.

[00042] Hu38SB19 foi formulada em salina tampão de fosfato sem Ca2+ e Mg2+, pH 7,4. Hu38SB19 foi administrada por via intravenosa nos dias 18, 21, 24, 27, após o implante do tumor.

[00043] A vincristina foi formulada em 5% de glicose em água. A vincristina foi administrada por via intravenosa simultaneamente à hu38SB19 nos dias 18, 21, 24, 27 após o implante do tumor.

[00044] Os resultados do experimento são apresentados na Tabela 1.

[00045] Tempo de duplicação do tumor = 3,4 dias.

[00046] Os seguintes pontos finais foram utilizados: • A toxicidade foi declarada em dosagens que induzem > 20 % de perda de peso corporal ou > 10 % de extinção de medicamento, • A eficácia antitumoral foi determinada através do cálculo de morte celular log10 = (T-C) / [3,32 x (tempo de duplicação do tumor em dias)] (T significa o tempo médio dos camundongos tratados para alcançar 750 mg e C o tempo médio (26,9 dias) dos camundongos de controle para alcançar o mesmo tamanho; os sobreviventes livres de tumor são excluídos destes cálculos e são classificados separadamente). Nenhuma atividade antitumoral foi declarada para a morte celular log < 0,7, e o tratamento foi declarado altamente ativo para a morte celular log > 2,8 • Sobreviventes livres de tumor (TFS): correspondem à regressão completa abaixo do limite de palpação (63 mg) para a toda duração do estudo (> 100 dias após o último tratamento). • Sinergismo Terapêutico: uma combinação possui sinergia terapêutica se for mais ativo do que o melhor agente único do estudo (em pelo menos morte celular 1 log).

[00047] A toxicidade para a vincristina isoladamente foi observada em uma dose de 1,3 mg/kg/injeção, com 25,2 % de perda de peso corporal no ponto mais baixo no dia 27, isto é, acima do limiar de 20 %. A dose não tóxica mais elevada (HNTD) para a vincristina foi de 0,8 mg/kg/inj (dose injetada total = 3,2 mg/kg). A dose de 0,8 mg/kg/inj também foi observada ser altamente ativa com uma morte celular log de 4,4. A dose mais baixa 0,3 mg/kg/inj permaneceu ativa com a morte celular 1,4 log.

[00048] Quanto à hu38SB19, o produto foi bem- tolerado em uma dose de 40 mg/kg/inj. Nenhuma toxicidade foi observada, o que pode ser explicado pela falta de reatividade cruzada do anticorpo com CD38 de murino. A morte celular log foi 0,5, indicando que a hu38DB19 não foi ativa sob estas condições.

[00049] A combinação de vincristina 1,3 mg/kg/inj e hu38SB19 a 40 mg/kg/inj foi tóxica, com 24,6 % de perda de peso corporal no ponto mais baixo no dia 27, isto é, muito similar ao que foi observado com a vincristina isoladamente na mesma dose. A dose de 0,8 mg/kg/inj de vincristina com 40 mg/kg/inj de hu38SB19 foi considerada ser a HNTD. Notavelmente, esta dose apresentou 5/6 TFS no final do estudo (dia 160). Da mesma forma, na dose mais baixa de 0,5 mg/kg/inj de vincristina com 40 mg/kg/inj de hu38SB19, 5/6 TFS foram recuperados no dia 160 pós- implantação do tumor. Em ambas as doses equitóxicas de vincristina isoladamente nenhum TFS foi registrado. Conclui-se que esta combinação apresenta um sinergismo terapêutico. Tabela I: Combinação de hu38SB19 e vincristina contra a leucemia linfoblástica aguda da célula T avançada DND-41 implantada em camundongos SCID.

[00050] Tempo de duplicação do tumor = 3,4 dias. Tamanho médio do tumor no início da terapia = 124 a 136 mg. Tempo para o tumor de controle médio atingir 750 mg = 26,9 dias. BWC = mudança de peso corporal, T-C = atraso de crescimento tumoral, HNTD = dose não tóxica mais elevada, HDT = dose mais elevada testada, TFS = sobreviventes livres do tumor, IV = intravenosa. Formulações: hu38SB19 = salina tamponada de fosfato sem Ca2+ e Mg2+, pH 7,4, vincristina = glicose 5 % em água.

Claims (10)

1. Combinação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo que reconhece especificamente CD38 e vincristina, em que o referido anticorpo compreende pelo menos uma cadeia pesada e pelo menos uma cadeia leve, em que o referido anticorpo é uma versão humanizada do anticorpo 38SB19 de murino, em que a cadeia pesada do referido anticorpo 38SB19 de murino compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 13, 14 e 15, e em que a cadeia leve do referido anticorpo 38SB19 de murino compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 16, 17 e 18; em que a referida cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 66, em que a referida cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo de SEQ ID NOS: 62 e 64, e em que o anticorpo e os constituintes da vincristina da combinação são fisicamente separados.

2. Combinação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido anticorpo consiste em: uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 66, e uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62.

3. Uso de um anticorpo que reconhece especificamente CD38, em que o referido anticorpo compreende pelo menos uma cadeia pesada e pelo menos uma cadeia leve, em que o referido anticorpo é uma versão humanizada do anticorpo 38SB19 de murino, em que a cadeia pesada do referido anticorpo 38SB19 de murino compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 13, 14 e 15, e em que a cadeia leve do referido anticorpo 38SB19 de murino compreende três regiões de determinação da complementaridade sequenciais tendo sequências de aminoácidos representadas por SEQ ID NOS: 16, 17 e 18; em que a referida cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 66, e em que a referida cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo de SEQ ID NOS: 62 e 64, sendo o referido uso, caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma combinação farmacêutica, como definida na reivindicação 1.

4. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo consiste em: uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 66, e uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62.

5. Uso de uma combinação, como definida na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento do câncer, em que o câncer expressa CD38.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em mieloma múltiplo, leucemia, leucemia linfocítica aguda e crônica, leucemia linfoblástica aguda e crônica, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma não Hodgkin , leucemia mielóide aguda e crônica e leucemia promielocítica.

7. Uso de um anticorpo que reconhece especificamente CD38 em combinação com vincristina, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de câncer, em que o câncer expressa CD38, e em que o referido anticorpo compreende pelo menos uma cadeia pesada e pelo menos uma cadeia leve, em que a referida cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 66, e em que a referida cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo de SEQ ID NOS: 62 e 64.

8. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo consiste em: uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 66, e uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em mieloma múltiplo, leucemia, leucemia linfocítica aguda e crônica, leucemia linfoblástica aguda e crônica, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma não-Hodgkin, leucemia mielóide aguda e crônica e leucemia promielocítica.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo que reconhece especificamente CD38 e vincristina é adequado para uso simultâneo ou separado no tratamento do câncer.